CN1878568A

CN1878568A - Cdim结合抗体的增强的b细胞细胞毒性

Info

Publication number: CN1878568A
Application number: CNA200480032401XA
Authority: CN
Inventors: 拜特·M·奈利马; 拜伯·M·玛西娅; 滕·N·H·纳尔逊; 山德士·E·马丁
Original assignee: Palingen Inc
Current assignee: IGM Biosciences Inc
Priority date: 2003-11-05
Filing date: 2004-11-05
Publication date: 2006-12-13
Also published as: JP2007513072A; WO2005044998A3; BRPI0416243A; EP1682179A4; MXPA06005104A; WO2005044998A2; IL175318A0; US20050112130A1; AU2004288231A1; SG148161A1; CA2542886A1; EP1682179A2; ZA200603563B

Abstract

本发明公开了治疗患有淋巴癌、自身免疫性疾病或B细胞过度增殖疾病的人类患者的药物和方法，该治疗包括给予(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)细胞毒素剂，包括化学治疗剂、放射性同位素、细胞毒性抗体、免疫交联物、配位子结合物、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、毒素或其混合物，包括破坏B细胞细胞骨架的药物，尤其是长春花碱或秋水仙碱。

Description

CDIM结合抗体的增强的B细胞细胞毒性

技术领域

本发明涉及治疗癌症和过度增生性疾病等的组合物和方法。

技术背景

急性淋巴细胞白血病(ALL)是最常见的儿童期恶性肿瘤。大约80％的儿童期ALL是B-细胞系ALL。尽管采用目前的治疗，接近80％的患ALL的儿童可以治愈，对于剩余的患者人群而言，对于新的不同的治疗策略的需求，仍然是一项治疗学上的挑战。对于白血病骨髓移植(BMT)移植后骨髓复发的儿童患者，治愈的可能性很小。同样，由于缺少供体而没有接受BMT治疗的儿童和至少两次复发的儿童，用传统的化学治疗不太可能治愈。在这些情况下，由于白血病本身的难治性，以及经过大量的预先治疗后患者潜在的体质虚弱，采用再诱导化学治疗难以达到完全缓解。因此，发现新的可以单独或与化学治疗结合，来有效治疗ALL的药物，仍然是现代白血病治疗的目标。证实对白血病胚细胞有特异性但不具有与化疗药物相似毒性的药物将特别有利于制定新的抗白血病治疗策略。另外，期望发现能够增强现有的治疗其它B细胞癌，包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞系淋巴瘤和B细胞介导的自身免疫性疾病的化学治疗或生物制剂疗效的药物和方法。

所有通常所指的MAb 216，参见专利号为5,593,676和5,417,972的美国申请，及EP 0 712 307B1，描述了使用结合CDIM抗原表位的抗体杀伤B细胞。采用该抗体可以杀伤大量B细胞，并期望增强治疗以B细胞过度增殖为特征的疾病，如淋巴癌的疗效。

发明内容

相应的，本发明的主要目的是，通过提供抵抗淋巴癌和其它以B细胞过度增殖为特征的疾病的新方法和药物制剂，来实现上述的本领域中的需要。

相应的，在一个实施方案中，提供了一种治疗限制于B细胞系的表达CDIM抗原的人或其它哺乳动物的方法，其中的哺乳动物罹患以B细胞过度增殖为特征的病症。该方法包括用(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)细胞毒素剂来接触所述的B细胞。在一个优选方案，以B细胞过度增殖为特征的病症是淋巴癌、病毒感染、免疫缺陷或自身免疫性疾病。典型的病毒感染包括人免疫缺陷病毒或单核细胞增多症。典型的免疫缺陷包括移植后淋巴增生症或免疫缺陷综合症，可参见接受抗癌治疗或其它免疫抑制治疗的患者。典型的自身免疫性疾病包括全身红斑狼疮(systemic lupuserythematosis)、类风湿性关节炎、自身免疫性淋巴增生症、多发性硬化症、银屑病和重症肌无力，但也可包括桥本氏甲状腺炎、狼疮性肾炎、皮肌炎、干燥综合征、小舞蹈病、狼疮性肾炎、风湿热、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨诺赫-舍恩莱紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森综合征、克隆氏病、阿尔茨海默氏病、伯克氏肉样瘤、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾小球肾炎、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、肺出血-肾炎综合征、血栓闭塞性脉管炎(thromboangitis ubiterans)、原发性胆汁性肝硬变、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多发性肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常性天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩性侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球性肾炎、纤维化肺泡炎、III类自身免疫病如免疫介导的血小板减少症、如急性特发性血小板减少性紫癜和慢性特发性血小板减少性紫癜等。

细胞毒素剂可以是化学治疗剂、放射性同位素、细胞毒性抗体、免疫交联物、配位体结合物、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、毒素或其混合物。化学治疗剂可以是破坏B细胞骨架剂。在另一个实施方案，化学治疗剂可以是门冬酰胺酶、鬼臼乙叉甙、喜树碱、抗生素、铂配位络合物、烷化剂、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物或拓扑异构酶抑制剂、或其混合物。

优选的，破坏B细胞骨架剂是干预微管聚合或解聚作用的药物，如紫杉烷、长春花生物碱和秋水仙碱，或其混合物。长春花碱包括，例如：长春碱、长春新碱、长春花碱酰胺或长春瑞滨，或其混合物。紫杉烷类包括紫杉醇、紫杉萜、和其混合物。在另一个实施方案中，破坏B细胞骨架剂是一种抗-肌动蛋白剂，如jasplakinolide和细胞松弛素。

拓扑异构酶抑制剂包括鬼臼乙叉甙，如依托泊苷或替尼泊苷。嘧啶类似物包括，卡培他滨、5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶脱氧核苷、5-氟脱氧尿苷一磷酸盐、阿糖胞苷、5-氮杂胞嘧啶核苷、2′，2′-二氟脱氧胞苷酸二氟脱氧胞苷酸，不限于此。嘌呤类似物包括，例如巯嘌呤、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、erythrohydroxynonyladenine(赤羟壬基腺嘌呤)、克拉屈滨、阿糖腺苷、磷酸氟达拉滨。叶酸类似物包括氨甲喋呤、雷替曲塞、洛美曲素、泼默抚来斯特(permefrexed)、依达曲沙、培美曲塞。喜树碱包括irinotocan、托泊替康、camptothecan。抗生素包括更生霉素、柔红霉素、阿霉素、依达比星、表柔比星、valrubucin、米托蒽醌、争光霉素和丝裂霉素，包括但不限于此。烷化剂包括，例如，双氯乙基甲胺、环磷酰胺、异磷酰胺、美法仑、达卡巴嗪、替莫唑胺、塞替派、六甲基嘧胺、链佐星、卡莫司汀、白消安、六甲蜜安和苯丁酸氮芥。

给予具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体的同时、之前或之后，可给予细胞毒素剂。例如，在用常规的化学或免疫疗法之前，给予淋巴癌患者细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，来提供一种减低患者肿瘤负荷的方法。例如，当患者抗拒再诱导治疗时，给予具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，使得患者能够进行后来的再诱导治疗。该方法可以进一步包括用细胞毒素剂治疗患者。

在另一个实施方案中，提供了一种在经骨髓清除治疗的患者中，在骨髓移植之前，对恶性B细胞淋巴癌患者净化骨髓的方法。该方法包括用细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体体外处理骨髓。

细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体诱导细胞膜损伤，导致B细胞对化学治疗剂和其它细胞毒素剂通透性增加，细胞膜损伤可以推进对B细胞胞质溶胶的接近，可提高疗效。相应的，通过在常规化学治疗之前、过程中或之后，给予细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，提供了增大化学治疗剂细胞毒性，从而增强化学治疗效果的方法。进一步的，这种于化学治疗效果的增强，允许用较低浓度的化学治疗剂治疗患者，从而提供了一种具有潜在较少副作用和有害事件的有效疗法。

类似的，通过常规免疫治疗之前、过程中或之后，给予细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，提供了增大免疫治疗中使用的抗B细胞抗体的细胞毒性的方法。另外，常规抗B细胞免疫治疗在高肿瘤负荷或免疫缺陷的情况下可能缺乏有效性，如在补体储存衰竭时，致使抗B细胞免疫治疗无效。与具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体的联用，克服了常规抗B细胞免疫治疗的这种有效性缺乏，如，在补体缺乏时。由于具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体诱导细胞损伤，提高抗体和细胞毒素剂的效果，在给予该抗体之前或过程中给予细胞毒素剂是最有利的。

具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可以是自然抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、单链Fv抗体、抗体片段(如，Fab)、pegylated抗体、四价抗体、双特异抗体或微型抗体等，只要该抗体能够提供细胞膜透化作用和/或细胞毒性。具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可以制备为含有异种多肽的融合蛋白，来形成含有细胞毒素剂的免疫交联物，或者它可以共价或非共价修饰，来包含诸如放射性同位素或毒素的细胞毒素剂。优选的，当具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体连接到、被示踪或融合到细胞毒素剂时，抗体被整体利用，来利用抗体产生的细胞损伤性细胞毒和细胞毒素剂产生的附加的细胞毒性。

详细地说，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体是VH4-34编码的抗体。这个抗体家族的优选成员包括mAb 216、RT-2B、FS 12、A6(H4C5)、Cal-4G、S20A2、FS 3、Gee、HT、Z2D2、Y2K。优选的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体包括带阳性净电荷的CDR序列。

在某些实施方案中，细胞毒素剂是放射性同位素，例如，¹³¹I、¹²⁵I、¹²³I、⁹⁰Y、¹¹¹In、¹⁰⁵Rh、¹⁵³Sm、¹⁶⁶Ho、¹⁷⁷Lu和¹⁸⁸Re、¹⁸⁶Re、³²P、⁵⁷Co、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁷⁷Ga、⁸¹Rb、⁸¹Kr、⁸⁷Sr、¹¹³In、¹²⁷Cs、¹²⁹Cs、¹³²I、¹⁹⁷Hg、²¹³Pb、²¹⁶Bi、¹¹⁷Lu、²¹²Pb、²¹²Bi、⁴⁷Sc、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Pd、¹⁹⁹Au、²²⁵Ac、²¹¹At和²¹³Bi。在这些放射性同位素中，最优选¹³¹I、¹²⁵I、⁹⁰Y、¹¹¹In和¹⁸⁶Re。放射性同位素可以包含部分免疫交联物或配位子结合物。在另外的某些实施方案中，放射性同位素共价连接于具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，或者是连接到具有与B细胞表面受体特异结合的细胞毒性抗体。

在特定的实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体与具有与B细胞表明分子特异结合的附加细胞毒性抗体联合使用。细胞毒性抗体可以具有与任何B细胞表面分子的特异结合。细胞表面分子包括受体、免疫球蛋白、细胞因子、糖蛋白等。例如，细胞毒性抗体可以显示出与CD11a、CD19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD34、CD37、CD38、CD40、CD45、CD52、CD80、CD86、IL-4R、IL-6R、IL-8R、IL-13、IL-13R、α-4/β-1整合素(VLA4)、BLYS受体、细胞表面个体基因型Ig、肿瘤坏死因子(TNF)或其混合的特异结合，不限于此。例如，具有与CD11a特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依法利珠单抗(RAPTIVA)。具有与CD20特异结合的细胞毒性抗体可以是美罗华(RITUXAN)。具有与CD22特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依帕珠单抗。具有与CD25特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，达珠单抗(ZENAPAX)或巴利普单抗(SIMULECT)。对CD52的抗体包括，例如，CAMPATH。对α-4/β-1整合素(VLA4)的抗体包括，如，那他珠单抗。对TNF的抗体包括，例如，英夫利普单抗(REMICADE)。

因而，在优选的实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可以与RITUXAN、ZENAPAX、REMICADE、RAPTIVA用于联合的免疫治疗方案，例如，或者是与它们的组合进行联合。如，细胞毒性抗体也可用作含有放射性同位素或毒素的免疫交联物。进一步的，在另外的实施方案中，可以应用包括具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体、附加的具有与B细胞表面分子特异结合的细胞毒性抗体，和一种或多种化学治疗剂。例如，mAb216可以与抗CD20抗体联合使用，如美罗华、tosutimab、或替伊莫单抗，或与抗CD52抗体联合使用，如CAMPATH，或与抗CD22抗体联合使用，如依帕珠单抗等。联合治疗可以进一步包括化学治疗，如在化学治疗和免疫治疗联合方案中的破坏细胞骨架剂，如长春新碱。

在另外的实施方案中，细胞毒素剂可以是配位子结合物，它包括任何结合到B细胞表面受体的B细胞受体配位子。这样的配位子包括但不限于，IL-2、IL-4、IL-6、IL-13、IL-15、BLYS或TNF等。配位子结合物，像免疫交联物，包括融合蛋白或共价或非共价键毒素、放射性同位素，或其它毒素剂。从而，在该实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可以与上文提到的配位子结合物联合使用，它或者基于其生物效应对B细胞有细胞毒性，或者由于之后融合或联合的细胞毒素剂。

因而在另外的实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可以用于与配位子结合物的联合方案，如白喉毒素结合的IL-13。配位子结合物也可包含放射性同位素或其它毒素，如使其具有细胞毒性。

在另外的实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体与细胞毒素剂联合用于治疗自身免疫性疾病。细胞毒素剂可以是免疫抑制剂，如糖皮质激素、神经钙蛋白抑制剂、抗增殖/抗代谢剂、或生物制剂如提供免疫抑制剂作用的抗体，或其混合物。与免疫抑制剂的联合，用于治疗B细胞介导的自身免疫性疾病，或在一些情况下，用于治疗癌症。在特定的实施方案中，神经钙蛋白抑制剂是环孢霉素A或他克莫司。在其它实施方案中，抗增殖/抗代谢剂是硫唑嘌呤、chlorambucol、环磷酰胺、来氟米特、霉酚酸酯、甲氨喋呤、雷怕霉素、沙利度胺或其混合物。糖皮质激素包括，如，强的松龙、泼尼松或地塞米松。

在某些实施方案中，免疫抑制剂是一种细胞生长调节剂和/或抑制剂，包括低分子治疗剂、基因治疗剂或基因表达修饰剂。低分子治疗剂包括，如，激酶抑制剂和蛋白酶体抑制剂。在一个优选实施方案中，激酶抑制剂是bcr/abl酪氨酸激酶抑制剂，如GLEEVEC。在另一优选实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼酯(boronic ester)如VELCADE。

在特定实施方案中，细胞毒素剂是毒素，包括但不限于假单胞菌外毒素A、蓖麻毒素、白喉毒素、木鳖子苷、美洲商陆抗病毒蛋白、葡萄球菌肠毒素A、白树毒素、maytansinoids、daunarubicin等。优选的，毒素连接到抗体或配位子使细胞特异靶向。

在一个优选实施方案中，以B细胞过度增殖为特征的病症是淋巴癌，特别是任何急性B细胞源白血病。淋巴癌包括急性白血病，如急性淋巴细胞白血病(ALL)、B祖ALL、成人ALL、慢性白血病和淋巴瘤。淋巴瘤包括攻击性、惰性和套细胞类型。具体的淋巴癌的例子包括但不限于急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、Burkitt′s淋巴瘤、B祖ALL、成人ALL或慢性淋巴细胞白血病(CLL)等。

在具体实施方案中，接触过度增殖的B细胞可以在体内、试管内或体外进行。优选的，通过注射给予所述的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体接触B细胞。细胞毒素剂可以通过任何合适的方式，如本领域公知的合适的细胞毒素剂及其制剂的方式，体内接触B细胞。

在发明的另一个方案中，提供了治疗淋巴癌人类患者的方法，包括给予(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)化学治疗剂。在优选的实施方案中，化学治疗剂是紫杉烷、秋水仙碱、长春花生物碱、门冬酰胺酶、抗肌动蛋白、鬼臼乙叉甙、喜树碱、抗生素、铂配位络合物、烷化剂、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物或拓扑异构酶抑制剂，或其混合物。在具体实施方案中，长春花生物碱是长春碱、长春新碱、长春花碱酰胺或长春瑞滨。嘧啶类似物包括卡培他滨，5-氟脲嘧啶，5-氟尿嘧啶脱氧核苷，5-氟尿嘧啶脱氧核苷一磷酸盐、阿糖胞苷、5-氮杂胞嘧啶核苷或2′，2′-二氟脱氧胞苷酸。嘌呤类似物可以是巯嘌呤、咪唑巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、erythrohydroxynonyladenine(赤羟壬基腺嘌呤)、克拉屈滨、阿糖腺苷或磷酸氟达拉滨。叶酸类似物可以是甲氨喋呤、雷替曲塞、洛美曲索、permefrexed或依达曲沙、培美曲塞。鬼臼乙叉甙可以是依托泊苷或替尼泊苷。喜树碱包括irinotocan、托泊替康、camptothecan。化疗抗生素包括更生霉素、柔红霉素、阿霉素、伊达比星、表柔比星、valrubucin、米托蒽醌、争光霉素或丝裂霉素。铂配位络合物包括顺铂、卡铂或奥沙利铂。烷化剂包括双氯乙基甲胺、环磷酰胺、异磷酰胺、美法仑、达卡巴嗪、替莫唑胺、塞替派、六甲基嘧胺、链佐星、卡莫司汀、白消安、六甲蜜安或苯丁酸氮芥。等价物、修饰物和衍生物等均包括于用于本发明的方法和组合物的化学治疗剂中。化学治疗剂可以在具有与CDIM抗原表位特异结合的抗体之前、之后或同时给予。

在优选的实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体包括带阳性净电荷的CDR序列。在详细的实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体是VH4-34编码抗体，包括但不限于，mAb 216、RT-2B、FS 12、A6(H4C5)、Cal-4G、S20A2、FS 3、Gee、HT、Z2D2、Y2K。详细的优选抗体是mAb 216。

本发明的另一方面，提供了治疗人淋巴癌患者的方法，包括给予(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)具有与B细胞表面受体特异结合的细胞毒性抗体。在详细的实施方案中，细胞毒性抗体可具有与任何B细胞表面分子(除外CDIM抗原表位)的特异结合。如，细胞毒性抗体可显示与CD11a、CD19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD34、CD37、CD38、CD40、CD45、CD52、CD80、CD 86、IL-4R、IL-6R、IL-8R、IL-13、IL-13R、α-4/β-1整合素(VLA4)、BLYS受体、细胞表面个体基因型Ig、肿瘤坏死因子(TNF)或其混合的特异结合，不限于此。例如，具有与CD11a特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依法利珠单抗(RAPTIVA)。具有与CD20特异结合的细胞毒性抗体可以是美罗华(RITUXAN)。具有与CD22特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依帕珠单抗。具有与CD25特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，达珠单抗(ZENAPAX)或巴利普单抗(SIMULECT)。对CD52的抗体包括，例如，CAMPATH。对α-4/β-1整合素(VLA4)的抗体包括，如，那他珠单抗。对TNF的抗体包括，例如，英夫利普单抗(REMICADE)。这样，在优选实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可以与例如RITUXAN、ZENAPAX、REMICADE、RAPTIVA联合用于免疫治疗方案，或者是与它们的组合。细胞毒性抗体也用作例如含有放射性同位素或毒素的免疫交联物。

具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体包括带阳性净电荷的CDR序列。在详细实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体是VH4-34编码抗体。优选的VH4-34抗体包括mAb 216、RT-2B、FS 12、A6(H4C5)、Cal-4G、S20A2、FS 3、Gee、HT、Z2D2，Y2K。

在附加实施方案中，治疗人淋巴癌患者的方法包括给予细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和具有与B细胞表面受体特异结合的细胞毒性抗体，进一步包括给予化学治疗剂、放射性同位素、免疫交联物、配位子结合物、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂，或其混合。具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可用放射性同位素标示。另外，具有与B细胞表面受体特异结合的细胞毒性抗体可用放射性同位素标示。优选的放射性同位素包括¹³¹I、¹²⁵I、⁹⁰Y、¹¹¹In和¹⁸⁶Re″11。每一种抗体均可用作免疫交联物。在优选实施方案中，免疫交联物包括假单胞菌外毒素A、蓖麻毒素、白喉毒素、木鳖子苷、美洲商陆抗病毒蛋白、葡萄球菌肠毒素A、白树毒素、maytansinoids、daunarubicin等。

配位子结合物可包括IL-2、IL-4、IL-6、IL-13、IL-15、BLYS或TNF等，可进一步包括放射性同位素或毒素。免疫抑制剂包括糖皮质激素、神经钙蛋白抑制剂、抗增殖/抗代谢剂或抗体，但不限于此。详细的神经钙蛋白抑制剂包括环孢霉素A或他克莫司等。详细的抗增殖/抗代谢剂包括硫唑嘌呤、chlorambucol、环磷酰胺、来氟米特、霉酚酸酯、甲氨喋呤、雷怕霉素、沙利度胺或其混合。也可利用糖皮质激素，如强的松龙、泼尼松或地塞米松。细胞生长调节剂和/或抑制剂包括低分子治疗剂(如激酶抑制剂或蛋白酶体抑制剂)，基因治疗剂或基因表达修饰剂。

在发明的另一个方案中，提供了扩大与CDIM抗原表位结合的抗体的B细胞细胞毒性的方法，包括用结合了CDIM抗原表位的抗体和破坏B细胞骨架的抗体接触B细胞。优选的，破坏B细胞骨架剂是干预微管聚合或解聚药物，如紫杉烷、长春花生物碱或秋水仙碱、长春花碱包括长春碱、长春新碱、长春花碱酰胺或长春瑞滨、紫杉烷包括但不限于紫杉醇或紫杉萜。破坏B细胞骨架剂也可为抗肌动蛋白，如一种作用于聚合肌动蛋白或解聚肌动蛋白肌丝的药物。在优选的实施方案中，扩大B细胞细胞毒性的方法用于治疗淋巴癌、B细胞过度增生疾病或自身免疫性疾病。淋巴癌包括任何急性B细胞源白血病，如急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、Burkitt′s淋巴瘤、B祖ALL、成人ALL或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。在优选实施方案中，注射含有细胞毒数量的结合CDIM抗原表位的任何抗体的药物制剂，来接触B细胞。

仍是在另一个方案中，提供了治疗哺乳动物自身免疫性疾病的方法，包括给予(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)化学治疗剂、具有与B细胞表面受体特异结合的抗体、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、或其混合物。优选的，免疫抑制剂是糖皮质激素、神经钙蛋白抑制剂或抗增殖/抗代谢剂。优选的，神经钙蛋白抑制剂是环孢霉素A或他克莫司。抗增殖/抗代谢剂可以是硫唑嘌呤、chlorambucol、环磷酰胺、来氟米特、霉酚酸酯、甲氨喋呤、雷怕霉素、沙利度胺或其混合。糖皮质激素可选自强的松龙、泼尼松或地塞米松。细胞生长调节剂和/或抑制剂可以是低分子治疗剂或基因治疗剂或基因表达修饰剂。

优选的，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体包括一个带阳性净电荷的CDR序列。在详细的实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体是VH4-34编码抗体，如mAb 216、RT-2B、FS 12、A6(H4C5)、Cal-4G、S20A2、FS 3、Gee、HT、Z2D2、Y2K。该方法用于治疗自身免疫性疾病，如全身红斑狼疮(systemic lupuserythematosis)、类风湿性关节炎、自身免疫性淋巴增生症、多发性硬化症、银屑病、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、狼疮性肾炎、皮肌炎、干燥综合征、小舞蹈病、阿尔茨海默氏病、狼疮性肾炎、风湿热、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨诺赫-舍恩莱紫癜、后-链状球菌肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森综合征、克隆氏病、伯克氏肉样瘤、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾小球肾炎、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、肺出血-肾炎综合征、血栓闭塞性脉管炎(thromboangitis ubiterans)、原发性胆汁性肝硬变、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多发性肌炎/皮肌炎、多软骨炎、pamphigusvulgaris、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩性侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球性肾炎、纤维化肺泡炎、III类自身免疫病如免疫介导的血小板减少症、如急性特发性血小板减少性紫癜和慢性特发性血小板减少性紫癜等。

在发明的另一个方案中，提供了杀伤抵抗化学治疗剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、或细胞毒素抗体的恶性B细胞的方法，包括用具有与B细胞的CDIM抗原表位特异结合的抗体接触所述的恶性B细胞。在详细的实施方案中，方法进一步包括用化学治疗剂接触所述的恶性B细胞。在特定实施方案中，与没有化学治疗剂相比，抗体以较低浓度起效，和/或与没有抗体相比，化学治疗剂以较低浓度起效。

在发明的另一方案中，提供了杀伤抵抗具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合抗体的恶性B细胞的方法，包括用化学治疗剂和/或具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合抗体处理所述B细胞。在这一实施方案中，与没有该抗体相比，化学治疗剂以较低浓度起效。

在发明的另一方案中，提供了透化B细胞的方法，包括用具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体接触接触B细胞。具有与B细胞的CDIM抗原表位特异结合的抗体包含带阳性净电荷的CDR序列。在优选实施方案中，具有与B细胞的CDIM抗原表位特异结合的抗体是VH-34编码抗体，如mAb 216、RT-2B、FS 12、A6(H4C5)、Cal-4G、S20A2、FS 3、Gee、HT、Z2D2、Y2K。

在发明的另一个方案中，提供了治疗以B细胞过度增生为特征的疾病或病症的方法，包括用足以透化B细胞的数量的、具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体接触B细胞。该方法进一步包括用细胞毒素剂接触所述B细胞。在详细实施方案中，用细胞毒素剂接触B细胞的步骤的实施，在用具有与CDIM抗原表位特异结合的抗体接触B细胞的步骤之前、之中或之后。B细胞透化通过各种方式增强细胞毒素剂的效力，在这一实施方案中，通过增加细胞毒素剂对B细胞胞质溶胶的接近来增强细胞毒素剂的效力。在优选的实施方案中，细胞毒素剂是化学治疗剂、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、毒素或其混合。在附加的优选实施方案中，通过将具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体经胃肠外注射入患者人体内来实施接触B细胞的步骤。

在详细方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体按约2.5-3000mg/m²的剂量给予，更优选的，给予抗体的剂量约为25-1000mg/m²，或详细的，约75、150、300或600mg/m²。在附加方案中，抗体按约0.25mg/kg-100mg/kg的剂量给予，更优选的给予抗体的剂量为约1.25、2.5、5、10或20mg/kg。典型的，抗CDIM抗体以1周为基础给药，在一些实施方案中，比每周1次更为频繁，多达每天1次。附加的细胞毒性抗体可以10-375mg/m²每周的量给予4周，或0.4-20mg/kg每周给予2-10周。

在发明的附加方案中，提供了注射剂的药物制剂，包含细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体。在详细实施方案中，药物制剂进一步包括化学治疗剂。

在发明的另一个方案中，提供了用于治疗以B细胞过度增殖为特征的患者的试剂盒，包括：(a)药学上的组合物包括足以透化患者B细胞的数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(b)药学上的组合物包括治疗有效量的细胞毒素剂，能有效治疗特征为B细胞过度增殖的病症。可任选药学上可接受的注射溶剂来制造该组合物。所述抗体组合物优选胃肠外给药，细胞毒素剂可以任何适合的方式给药。抗体组合物和细胞毒素剂组合物的给药说明书也可提供予试剂盒。

在一个附加方案中，发明包括具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体在制备用于治疗细胞淋巴癌、自身免疫性疾病和B细胞过度增殖病症药物中的用途。

此外，本发明的目的、优点和新颖的特性，部分通过接下来的说明书，部分通过随后的对于本领域技术人员是显而易见的试验，还可以通过实践本发明得到了解。

附图说明

图1说明VH 4-34编码抗体结合初级B细胞淋巴瘤和白血病。

图2说明VH 4-34编码单克隆抗体结合并杀伤人B细胞系。

图3说明mAb 216对滤泡淋巴瘤细胞毒性的多样性。

图4说明mAb 216和长春新碱协同杀伤B细胞。

图5A说明用mAb 216处理时，Lamp-1出现在B细胞表面的时程，与细胞活力丧失的时程相比较。

图5B说明受损细胞释放ATP的时程，与有活性细胞相比较。

图6A说明在有和没有钙的介质中的两种VH4-34抗体处理的细胞的活性。

图6B说明用细胞毒素剂处理的细胞的或性。

图7说明两种不同细胞浓度下，C2B8、mAb 216和联合该两种抗体杀伤细胞的效力。

发明详述

定义和概述

在详细描述本发明之前，需要了解的是，除非专门指出，本发明不限定于具体的缓冲剂、辅料、化学治疗剂等，它们可以变化。还应当理解，此处使用的术语仅为了描述发明，并不能限制本发明的范围。

必须注意，在此处和权利要求中，单数形式″a、″″and″和″the″包括所指的复数，除非上下文清楚的指出另外含义。这样，例如，参照″a化学治疗剂″包括两种或多种化学治疗剂；参照″a药学的辅料″包括两种或多种药学的辅料等。

出现数值范围时，需要理解的是，在范围的上限和下限之间，达到下限值单位的十分之一的每一插入值，除非文中清楚地指出另外含义，和任何其它已公开或已该公开范围内的插入值，包括于本发明。这些较小范围的上限和下限独立的包括于该较小范围中，视在所述范围内任何特定排除的限值而定，也包含于本发明中。所述范围包括一个或两个限值时，排除了一个或两个该限值的范围也包括于本发明。

此处使用的术语“抗CDIM抗体”和“CDIM结合抗体”指具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体。此处这些术语可互换使用。

此处使用的“阻止生长”或“生长抑制剂”的药物指抑制细胞生长或增殖的化合物或组合物。特别是表达B细胞抗原的赘生细胞型，如所需的CD20抗原。生长抑制剂能显著降低S相的赘生细胞百分率。

术语“癌”和“癌性”是指或描述哺乳动物以无调节的细胞生长为特征的生理状况。

CD20”抗原是发现于外周血或淋巴器官90％以上B细胞表面的35kDa、非糖基化磷蛋白。CD20在前B细胞发育的早期表达，并保留至血浆细胞分化。CD20参见普通B细胞和恶性B细胞。文献中CD20的其它名字包括″B淋巴细胞限制性抗原″和″Bp35″。如，CD20抗原参见Clark等的PNAS(USA)82：1766(1985)。

术语″细胞损伤″指残存的细胞膜破裂事件，标记为摄取到胞质溶胶的正常膜非渗透示踪剂。细胞损伤破裂典型的在大约1和1000μm²内，这远大于伴随补体介导的细胞毒性或穿孔蛋白或毒素形成的大孔或短杆菌肽或金黄色葡萄球菌α毒素的膜破裂。通过探察细胞修复机制，证明细胞损伤是损伤的结果，即细胞表面Lamp-1的表达是溶酶体融合修复损伤的结果。

术语″化学治疗剂″指用于治疗癌或其它以B细胞过度增殖为特征的病症的化学化合物。

此处所用的术语″细胞毒素剂″和″细胞毒素″指抑制或阻止细胞生长、或妨碍细胞功能，并且/或者导致细胞死亡的物质。该术语包括一种或多种放射性同位素、化学治疗剂、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂，它可以是低分子治疗剂、细胞毒性抗体和毒素，如细菌、真菌、植物或动物源性的酶活性毒素或其片段。该术语也包括免疫交联物，包含用毒素或放射性同位素标示的与靶细胞特异结合的抗体，和其它配位子结合物，如放射示踪的配位子和毒素标示的配位子。另外，可以联合使用一种或多种细胞毒素剂。

″病症″是任何能受益于此处所描述的联合治疗的情况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易于罹患所讨论的病症的病理情况。此处治疗的病症包括但不限于癌、血液恶性肿瘤、白血病和淋巴恶性肿瘤和自身免疫性疾病，如炎性和免疫病症。

术语″过度增殖″和″过度增殖的″指细胞类型的异常增殖，它可以是癌性或良性。过度增殖包括介导自身免疫性疾病的B细胞分泌型自身抗体的多克隆表达。

术语″免疫交联物″指细胞毒素剂的抗体结合物，它可以共价或非共价连接。

术语″静脉输注″指经一段时间向患病的动物或人体内注射药物，通常为大于15分钟，更通常为大约30-90分钟之间。

术语″静脉快速注射″或″静脉推注″指静脉给予动物或人药物，机体以大约15分钟或较短的，通常为5分钟或较短的时间接受药物。

为治疗目的的术语″哺乳动物″指任何哺乳动物种类，包括人、家养和野生动物，动物园、运动场或宠物动物，只要出生后CDIM抗原表达主要限定于B细胞系的细胞。

人化抗CD20抗体指，如“RITUXAN^牌”的抗CD20抗体，是一种遗传工程的嵌合体鼠/人单克隆抗体，指向抗CD20抗原。在利号为、1998年4月7日颁发的美国专利中，美罗华称为″C2B8″。RITUXAN^W牌C2B8抗体用于治疗复发或难治性低级或滤泡的、阳性、CD20Y阳性、B细胞非霍奇金淋巴瘤患者。

术语特异性结合指具有至少10⁶M^-1高亲和力的性质，通常介于大约10⁶M^-1-10⁸M^-1之间。

术语″皮下给药″指在患病动物或人的皮下给药，最好在皮肤和皮下组织之间的囊内，由药物容器中经一段时间相对缓慢、持续传递。囊可通过揪起皮肤或将皮肤从皮下组织上拉起来形成。

术语″皮下快速注射″指在动物或人的皮下给予药物，给予快速注射药物优选短于约15分钟，更优选短于约5分钟，最优选短于60秒。最好在皮肤和皮下组织间隙给药。

术语″皮下输注”指在患病动物或人的皮下注射药物，最好在皮肤和皮下组织之间，由药物容器中经一段时间相对缓慢、持续传递，时间包括但不限于，30或少于30分钟、90或少于90分钟。任选的，输注可以通过植入患病动物或人皮肤的药物传递泵皮下植入，其中该泵以预定时间传递预定药量，如30分钟、90分钟或跨越治疗方案长度的时间段。

所用的术语″治疗有效量″指具有阻止生长或导致所述细胞死亡作用的活性剂用量。在这一实施方案中，治疗有效量具有透化细胞、抑制增殖信号、抑制细胞代谢、加速细胞凋亡或诱导细胞死亡的特性。在详细的方案中，治疗有效量是指能显示出有效性的目标血清浓度，如，减缓疾病进程。根据治疗的情况，可用常规方法测定效力。例如，淋巴癌，效力可通过评价时间-疾病发展(time to disease progression)(TTP)或检测应答率(RR)来测定。

本发明文中所用的术语″处理″和“治疗”等，其含义包括治疗和预防、或抑制疾病或病症的手段，能导致期望或有益的临床效果，包括但不限于，缓解一种或多种症状，退化、减慢或停止疾病或病症进程。因此，例如，术语处理包括先于或在疾病或病症的症状初起的随后，给予药物，从而阻止或去除疾病或病症的所有表现。如另一个例子，术语包括在出现临床表现后给予药物，控制疾病症状。进一步的，在初起后和临床症状发展后，给予药物，给药影响疾病或病症的临床参数，如，组织损伤程度或转移的数量或程度，不论治疗是否导致了疾病的改善，组成了本发明文中的“处理”。

VH4-34基因(可变重链区)是53种经鉴定的人功能抗体种系基因¹之一。VH4-34基因参见所有单倍体和已报告的从不相关个体中分离出的DNA种系的无序列变种²³。VH4-34基因编码的抗体显示出特有性质。所有直接抗红细胞(RBCs)“I”或“i”抗原的mAbs由VH4-34基因⁴⁵⁶编码，通常为IgM类，由于它们在4℃凝集RBCs，传统的被描述为冷凝集素(CAs)。被CAs识别的配位子是线性或分支的配糖体，出现于RBCs的蛋白和/或脂质上。新生的和脐血RBC有线性i抗原。分支I链形成于出生后⁷⁸。在人B细胞上识别的“I”抗原是线性乳胺(lactosamine)决定子，对酶内-β-牛乳糖敏感。对独立衍生的VH4-34抗B细胞/抗-imAbs的序列分析表明，它们是种系构型但表达独立的D、J、H和轻链²⁰。

活体内，VH4-34基因编码抗体的表达有严格调节。尽管4-8％的人B细胞表达VH4-34编码抗体，VH4-34编码抗体的正常成人血清水平可以忽略⁹¹⁰。VH4-34编码抗体计数增加仅见于选择性病理情况，包括EBV(单核细胞增多症)和HIV感染和某些自身免疫性疾病^{11 12 13 14 15 16}。

本发明深入研究了VH4-34编码抗体和它们在自身免疫性病症中的作用。先前的研究证明这一抗B细胞VH4-34抗体对B细胞有细胞毒性，并导致B细胞增殖减少Bhat，N.等(1997)Clin.Exp.Immunol.108：151；Bhat，N.，等，(2001)Crit.Rev.Oncol.Hematol.39：59。细胞毒性显示独立于补体，高度依赖温度，造成严重的细胞死亡和形成细胞膜缺陷，如在4℃治疗时细胞表面出现的疱和孔。细胞膜缺陷明显大于其它由公知的孔道形成蛋白形成的孔，如C9补体成分(-100A)和穿孔素(-160A)。提示细胞毒性可能由新的机制介导。

本发明取得了令人惊讶和意想不到的发现，VH4-34基因编码抗体能诱导B细胞细胞膜损伤。尽管膜损伤是有核哺乳动物细胞通常面临的威胁，但抗体能够直接造成膜损伤是新颖的。另外，本发明发现尽管抗体造成某些情况下的细胞的孔和膜缺陷，当用不致死量治疗时，一些B细胞仅是受伤，并且在一些病例中能修复创伤。

进一步的，本发明证明，抗体诱导细胞膜损伤的修复与任何其它膜损伤的修复相似。不依赖细胞毒性抗体，用补体处理的细胞，试图利用溶酶体的融合作用，用细胞膜修补膜损伤，来修复抗体诱导的细胞膜损伤，形成了细胞表面上出现的溶酶体膜蛋白。还证明，细胞不能修复损伤时，最终导致死亡。

另外，本发明发现受伤细胞被透化，至少暂时被透化，因而对附加细胞毒素剂变得敏感，提供了具有增强效力的治疗人和动物疾病和病症的新的治疗选项。细胞膜损伤造成B细胞透化，允许细胞毒素剂如化学治疗剂进入，从而增加了化学治疗剂的效力，甚至是在抵抗或对这些药物不渗透的细胞，或在对它们进行主动转运的细胞中。

由于通过CDIM结合抗体的细胞死亡和损伤机制不同于利用常规细胞毒性抗体(补体或细胞介导的杀伤)的细胞毒性机制，通过细胞毒性抗体结合附加B细胞抗原，特别是在免疫缺陷如补体缺失或缺乏的情况下，联合CDIM结合抗体和常规免疫治疗能提供增强的杀伤效力。

在优选实施方案中，根据本发明的一个方案，抗体是VH4-34编码单克隆抗体，结合人B细胞的CDIM抗原表位^17 18 19，如图1-2所示。这些抗体对获自再发滤泡淋巴瘤患者的B细胞有细胞毒性，如图3所示。另外，该抗体对B细胞系有细胞毒性，如图4所示。在一个优选实施方案中，这些mAbs由人淋巴细胞和异骨髓(heteromyeloma)细胞系融合产生，它产生杂交瘤分泌型人抗体。如，mAb 216是一种VH4-34基因编码的人IgM，是本文所述的CDIM结合VH4-34抗体的优选实施方案。MAb 216进一步参见于申请号为5,593,676和5,417,972美国专利和Bhat，等的EP 712307 B1。

结合CDIM抗原表位的附加VH4-34编码抗体包括RT-2B、FS 12、A6(H4C5)、Cal-4G、S20A2、FS 3、Gee、HT、Z2D2、Y2K。某些这种抗体，其特征为CDR3序列富有碱性氨基酸残基，当CDR3的净电荷为+2时，有特别有力的结合。相应的，任何拥有阳性CDR净电荷的抗体，特别是CDR3，并且显示与CDIM抗原表位结合，包含于本发明的范围之中，如权利要求书所要求保护的。

本发明取得了令人惊讶的发现，这些抗CDIM抗体的B细胞毒性可以显著甚至是协同性的增强，通过加入细胞毒素剂，包括化学治疗剂、放射性同位素、细胞毒性抗体、免疫交联物、配位子结合物、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、毒素或其混合物。

相应的，在一个实施方案中，提供了治疗以B细胞过度增殖为特征的哺乳动物的方法，包括用(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)细胞毒素剂接触所述B细胞。B细胞过度增殖发生于癌症、病毒病、免疫缺陷或自身免疫性疾病患者。

仍是发明的另一个方案中，提供了治疗特征为B细胞过度增殖的疾病或病症的方法，包括用足以透化所述B细胞量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体接触B细胞。该方法可进一步包括用细胞毒素剂接触所述B细胞。

淋巴癌的治疗

具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可用于治疗发生于淋巴癌的B细胞过度增殖，特别是任何B细胞源的急性白血病。淋巴癌包括白血病，如急性淋巴细胞白血病(ALL)、B祖ALL、成人ALL、慢性白血病和淋巴瘤。淋巴瘤包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)和攻击性、惰性和套细胞细胞类型。淋巴癌可包括外周和中枢神经系统淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、粘膜淋巴瘤，不限于此。特定的淋巴癌例子包括，急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、Burkitt′s淋巴瘤、B祖ALL、成人ALL或慢性淋巴细胞白血病(CLL)等，不限于此。

治疗ALL的典型治疗记录参见实施例11。附加的化学治疗方案可与抗CDIM抗体联用，来治疗ALL或其它B细胞源的淋巴癌，不限于此，这些附加的化学治疗方案包括于本发明的范围之中。

病毒疾病引起的B细胞过度增殖的治疗

具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可由于治疗发生于特定的病毒感染，如人免疫缺陷病毒或单核细胞增多症。

免疫缺陷引起的B细胞过度增殖的治疗

具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可用于治疗发生于癌症治疗引发的或用免疫抑制疗法治疗自身免疫病症引发的或某种免疫缺陷的B细胞过度增殖。例如，发生于移植后淋巴细胞增生症和接受抗癌治疗或其它免疫抑制治疗的免疫缺陷综合征的B细胞过度增殖。

B细胞介导的自身免疫性疾病的治疗

具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可用于治疗自身免疫性疾病，单独应用或与细胞毒素剂联用。细胞毒素剂可以是免疫抑制剂，如糖皮质激素、神经钙蛋白抑制剂、抗增殖/抗代谢剂或生物制剂如提供免疫抑制剂效果的抗体，或其混合。与免疫抑制剂连用用于治疗B细胞介导的自身免疫性疾病，或在某些情况下，用于治疗癌症。在详细实施方案中，神经钙蛋白抑制剂为环孢霉素A或他克莫司。在其它实施方案中，抗增殖/抗代谢剂是硫唑嘌呤、chlorambucol、环磷酰胺，来氟米特，霉酚酸酯，甲氨喋呤，雷怕霉素，沙利度胺或其混合。糖皮质激素包括，例如，强的松龙、泼尼松或地塞米松。

在某些实施方案中，免疫抑制剂是细胞生长调节剂和/或抑制剂，可包括低分子治疗剂、基因治疗剂或基因表达修饰剂。低分子治疗剂包括，例如，激酶抑制剂和蛋白酶体抑制剂。在优选实施方案中，激酶抑制剂是bcr/abl酪氨酸激酶抑制剂，如GLEEVEC。在另外的优选实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼酯(boronic ester)如VELCADE。

在详细的实施方案中，细胞毒素剂是毒素，包括但不限于假单胞菌外毒素A、蓖麻毒素、白喉毒素、木鳖子苷、美洲商陆抗病毒蛋白、葡萄球菌肠毒素A、白树毒素、maytansinoids、daunarubicin等。优选的，毒素结合到抗体抗体或配位子来对细胞特异靶向。

典型的自身免疫性疾病包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎，自身免疫systemic lupus erythematosis、类风湿性关节炎、自身免疫性淋巴增生症、多发性硬化症、银屑病和重症肌无力，但也可以包括桥本氏甲状腺炎、狼疮性肾炎、皮肌炎、干燥综合征、小舞蹈病、狼疮性肾炎、风湿热、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨诺赫-舍恩莱紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森综合征、克隆氏病、阿尔茨海默氏病、伯克氏肉样瘤、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾小球肾炎、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、肺出血-肾炎综合征、血栓闭塞性脉管炎(thromboangitis ubiterans)、原发性胆汁性肝硬变、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多发性肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常性天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩性侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球性肾炎、纤维化肺泡炎、III类自身免疫病如免疫介导的血小板减少症、如急性特发性血小板减少性紫癜和慢性特发性血小板减少性紫癜等。

降低肿瘤负荷和允许再诱导治疗的方法

通过在常规的化学免疫治疗前，给予患者细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，提供了降低淋巴癌患者肿瘤负荷的方法。

另外，当患者抗拒常规化学治疗或免疫治疗，需要再诱导再诱导时，可以通过给予具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，如mAb216，使患者为再诱导治疗做准备。该治疗减少了患者的活的肿瘤细胞数量，允许患者继续随后的再诱导治疗。

试管内和离体使用

在另一个实施方案中，此处的方法包括一种骨髓清除治疗后，在骨髓移植之前对恶性B细胞淋巴癌患者骨髓净化的方法。该方法包括用细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体体外处理患者骨髓。该方法可进一步包括用细胞毒素剂如化学治疗剂或细胞毒性抗体体外处理骨髓细胞。

在试管内预先筛分易感抗CDIM抗体的患者细胞

在一个实施方案中，可检验患者的血样，测定抗体与CDIM抗原表位的特异结合和和抗体介导的细胞毒性，最好采用VH4-34抗体如mAb216。对于显示少于100％细胞杀伤的患者，与附加细胞毒素剂联用可检验作为患者的最佳治疗。

治疗方法的优点

通过在常规免疫治疗之前、同时或之后给予细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，提供了扩大化学治疗中使用的细胞毒素剂和免疫治疗中使用的抗B细胞抗体的细胞毒性的方法。常规抗B细胞免疫治疗在高肿瘤负荷或免疫缺陷情况下可能缺乏效力。例如，在补体储存衰竭时，致使抗B细胞免疫治疗无效。与具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体的联用克服了常规抗B细胞免疫治疗的这种有效性缺乏，由于抗CDIM抗体采用不同的毒性机理起效，诱导细胞损伤。由于常规免疫治疗，细胞损伤恶化任何补体介导的膜泄漏。与附加细胞毒素剂联用，通过增加对B细胞胞质胶溶的化学治疗药物或其它细胞毒素药物的胞质胶溶通路，抗CDIM抗体能显著增大治疗方案的细胞毒性。

另外，许多癌症或自身免疫性疾病患者很脆弱，不能经受强力的治疗。新的抗CDIM抗体作用机制，特别是与化学治疗剂联用时，可对体弱病人进行治疗，例如，通过增加治疗方案的效力和通过允许患者用较低剂量仍有效的化学治疗剂治疗。

抗体

用于本发明的抗体包括抗CDIM抗体和附加的具有与B细胞上的细胞表面分子特异结合的细胞毒性抗体。抗CDIM抗体和附加的细胞毒性抗体可用于联合治疗方案。

细胞毒性抗体可具有与B细胞任何细胞表面分子的特异结合。细胞表面分子包括受体、免疫球蛋白、细胞因子、糖蛋白等。例如，细胞毒性抗体可显示与CD11a、CD19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD34、CD37、CD38、CD40、CD45、CD52、CD80、CD86、IL-4R、IL-6R、IL-8R、IL-13、IL-13R、α-4/β-1整合素(VLA4)、BLYS受体、细胞表面个体基因型Ig、肿瘤坏死因子(TNF)或其混合的特异结合，不限于此。例如，具有与CD11a特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依法利珠单抗(RAPTIVA)。具有与CD20特异结合的细胞毒性抗体可以是美罗华(RITUXAN)。具有与CD22特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依帕珠单抗。具有与CD25特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，达珠单抗(ZENAPAX)或巴利普单抗(SIMULECT)。对CD52的抗体包括，例如，CAMPATH。对α-4/β-1整合素(VLA4)的抗体包括，如，那他珠单抗。对TNF的抗体包括，例如，英夫利普单抗(REMICADE)。

从而在优选实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可与RITUXAN、ZENAPAX、REMICADE或RAPTIVA用于联合免疫治疗方案，例如，或其联合。如细胞毒性抗体也可用作含有放射性同位素的免疫交联物。进一步的，在另外的实施方案中，可以应用包括具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体、附加的具有与B细胞表面分子特异结合的细胞毒性抗体，和一种或多种化学治疗剂。例如，mAb216可以与抗-CD20抗体联合使用，如美罗华、tosutimab、或替伊莫单抗，与抗CD22抗体联合使用，如依帕珠单抗，或与抗CD52抗体联合使用，如CAMPATH。该联合治疗可以进一步包括化学治疗，如在联合的化学治疗和免疫治疗方案中的一种可以破坏细胞骨架剂，如长春新碱。

术语″抗体″以最大含义使用，其具体涵盖了完整的自然抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、至少由两种完整抗体形成的多特异性抗体(如二特异性抗体)、合成抗体如四价抗体和抗体片段，只要显示出期望的生物活性。人抗体包括非人类物种制得的抗体。术语抗体也包括抗体与细胞毒性剂或细胞调节剂的融合或化学偶合。

″抗体片段″包括完整抗体的一段，最好是该完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双链抗体；线性抗体(Zapata等，Protein Eng.8(10)：1057-1062[1995])；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。

此处所用的术语″单克隆抗体″指获自抗体基本同种群抗体，即，组成种群的单个抗体是相同的，除外可能出现在少量中的自然突变。单克隆抗体有高度特异性，直接抗单个抗原的位点。进一步的，与一般的(多克隆)典型的包括不同抗体直接抗不同决定子(抗原表位)抗体制品相比，每个单克隆抗体直接抗抗原上的一个单独决定子。在其特异性之外，单克隆抗体的优点在于它们由杂交瘤培养合成，未被其它免疫球蛋白污染。修饰剂″单克隆″指抗体获自基本同种群抗体的特性，不能解释为由任何具体方法得到的要求的抗体产物。例如，用于与本发明相一致的单克隆抗体可由杂交瘤方法制得，首次描述见于Kohler等，Nature，256：495(1975)，或由重组DNA方法制得(参见，如专利号为4,816,567的美国专利)。″单克隆抗体″也可从噬菌体抗体基因库分离得到，采用的技术参见Clackson等，Nature，352：624-628(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991)。

此处单克隆抗体具体包括″嵌合体″抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一段与抗体中的相应序列相同或同源，该抗体获自特定物种或属于特定抗体类或亚类，而该链(多条链)的剩余部分与抗体中相应序列相同或同源，该抗体获自另一物种或属于另一抗体类或亚类，还包括这些抗体的片段，只要它们显示出期望的生物活性(专利号为4,816,567的美国专利；Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：6851-6855[1984])。

非人类(如，鼠类的)抗体的“人化的”形式是嵌合体免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2或其它抗体的抗原结合序列)，含有获自非人类免疫球蛋白的最少序列。大部分的，人化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的补体决定区(CDR)的残基被非人类物种(供体抗体)，如具有期望的特异性亲和力和容量的小鼠、大鼠或兔，的CDR的残基取代。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人类残基取代。进一步的，人化抗体可包括在受体抗体、输入的CDR和框架序列都没有发现的残基。进行这些修饰，来进一步精练和最大化抗体性能。一般而言，人化抗体将基本包括所有的至少一个，通常为两个可变域，其中，所有的和基本所有的CDR与非人类免疫球蛋白中的CDR相应，并且所有的和基本所有的FRs是人免疫球蛋白序列的FRs。人化抗体最好还包含至少一段免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人免疫球蛋白。详细资料参见Jones等，(1986)Nature321：522-525；Reichmann等，(1988)Nature 332：323-329；和Presta，(1992)Curr.Op.Struct.Biol.，2：593-596。人化抗体包括PRIMATIZED^TM抗体，该抗体的抗原结合区获自一种用相关抗原免疫的猕猴产生的抗体。

″单链Fv″或″单链抗体可变区基因片段″抗体片段包括抗体的VH和VL区，其中这些区域存在于单独多肽链。优选的，Fv多肽进一步包括一个VH和VL区之间的多肽联结子，它使得sFv形成期望的用于抗原结合的结构。单抗体可变区基因片段的综述参见Pluckthun in ThePharmacology of Maonoclonal Antibodies vol.113，Rosenburg和Moore eds.，Springer-Verlag，New York，pp.269-315(1994)。

术语″双链抗体″指有两个抗原结合位点的小抗体，其中片段在相同的多肽链(VH-VL)组成了连接轻链可变区(VL)的重链可变区。通过使用很短的联结子，不允许同一条链的两个区域配对，迫使该区域与另一条链的补体区配对，并产生两个抗原结合位点。双链抗体的详细描述，参见，如，EP 404,097；WO93/11161；和Hollinger等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448。

″分离″抗体是从它天然环境成分中识别和分离和/或恢复的抗体。它天然环境成分的污染成分是能干预抗体的诊断和治疗用途的物质，可以包括酶、激素和其它蛋白或非蛋白溶剂。在优选实施方案中，抗体被提纯为(1)经罗氏蛋白质定量法确定的大于95％重量的抗体，最优选为大于99％重量，(2)通过使用旋杯(spinning cup)顺序分析仪，达到足以获得至少15个氨基末端残基或内部氨基酸序列，或(3)用考马斯蓝或优选银染色在还原或非还原条件下，通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳达到基因同源。分离抗体包括原位具有重组细胞的抗体，因为至少一个该抗体的固有环境的成分不存在。然而，通常分离抗体的制备至少经过一个提纯步骤。

免疫交联物

免疫交联物可以用本领域所知的多种方法制备，如对该抗体的化学诱导，产生易变或不易变的活性交联基。易变活性基团提供给抗体释放细胞毒素剂或生长调节剂。不易变交联也有用处。期望的药物与Ig分子的连接可通过现有技术中各种方法实现，包括常规偶联技术(如，用脱水剂如二环己基碳二亚胺(DCCI)、ECDI等偶联)，通过还原氨基化，使用能够通过巯基、氨基或羧基(获自Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill.)的联结子。

另一种方法，抗体结合物或免疫交联物的制备，可首先用交联试剂，如N-二硫代琥珀酰亚胺2，5-吡咯烷二酮基吡啶(SPDP)，向抗体引入二硫代吡啶基(Carlsson等(1978)Biochem.J.173：723-737；专利号为5,208,020的美国专利)。第二步，将具有巯基的细胞毒素加入修饰过的抗体，造成修饰的抗体中硫代吡啶基置换，产生二硫化物连接的毒素-抗体结合物。Maytansinoid-抗体结合物的制备方法参见专利号为5,208,020的美国专利。

一些情况下，期望抗体和细胞毒素剂的融合蛋白。融合蛋白可通过分子生物学方法制备(如，用表达型载体组成核苷酸序列编码重组Ig，手术连接到核苷酸序列编码的期望的细胞毒素剂，来产生融合蛋白)。

放射性同位素

同位素用于制备有治疗作用的免疫或配位子结合物，它典型的产生治疗有效径长的αγ或β粒子。这样的放射性核素杀死与它们非常接近的细胞，例如结合了结合物的赘生细胞。定向传送的优点在于放射性示踪的抗体或配位子对于与靶细胞不是非常接近的细胞一般很少或没有影响。

就放射性同位素用于细胞毒素剂而言，修饰的抗体或配位子可以直接标示(如通过碘化作用)或用螯合剂标示。在另一种方法中，抗体或配位子用至少一种放射性核素标示。特别优选包含1-二乙烯三胺五乙酸(″MX-DTPA″)和环己基二亚乙基三胺五乙酸(″CHX-DTPA″)衍化物的鳌合剂。其它鳌合剂包括P-DOTA和EDTA衍化物。特别优选用于间接标示¹¹¹In和⁹¹¹Y的放射性核素。

放射性同位素可连接到抗体或配位子的特异位点，如仅存在于该抗体Fc段的末端连接的糖残基。锝-99m标示的抗体或配位子可通过配位子交换过程或Batch标记过程制备。例如，抗体的标示可以通过用亚锡离子溶液还原高锝(TcO₄)，将经还原的锝络合到葡聚糖凝胶柱上，并将抗体加入该凝胶拄。Batch标示技术包括，例如，孵育高锝、还原剂如SnCl₂、缓冲液如钠钾酞酸盐溶液和抗体。优选的放射性核素是现有技术所公知的。可效仿的用于标示的放射性核素是经由酪氨酸残基共价连接的¹³¹I。根据本发明，放射示踪的抗体的制备可用放射性钠或碘化钾和化学氧化剂，如次氯酸钠、氯亚明等，或酶氧化剂，如乳酸过氧化物酶、葡萄糖氧化酶核葡萄糖。

关于鳌合剂和鳌合剂结合物的专利，是现有技术中已知的。例如，Ganasow的专利号为4,831,175的美国专利，是关于内容相同的多取代二乙烯三胺五乙酸鳌合物和蛋白轭合物及其制备。Gansow的专利号为5,099,069、5,246,692、5,286,850、5,434,287和5,124,471的美国专利，也是关于多取代的DTPA鳌合物。这些专利全部引入此处作为参考。其它的适合的金属鳌合剂有乙二胺四醋酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DPTA)、1，4，8，11-四氮十四烷、1，4，8，11四氮十四烷-1，4，8，11-四乙酸、1-噁-4，7，12，15-四氮十七烷、4，7，12，15-四乙酸等。最优选环己基-DTPA或CHX-DTPA。仍是其它的适合的鳌合剂，包括未列出的，可以由本领域技术人员容易的使用的，也明确包括于本发明的范围之内。附加的鳌合剂包括特殊的双功能鳌合剂，参见于专利号为6,682,734、6,399,061和5,843,439的专利，最优选用于对三价金属提供高度亲和力，显示出增加的肿瘤-非肿瘤比例，降低骨吸收，和增大放射性核素在体内靶位点，即B细胞淋巴瘤肿瘤位点的滞留。然而，其它双功能鳌合剂，可以拥有或没有现有技术中已知的这些特点，它们也有利于肿瘤治疗。

为诊断和治疗目的，修饰的抗体也可结合于放射性示踪物。用于肿瘤成像诊断的放射示踪治疗性轭合物的使用，可先于给予患者抗体和细胞毒素剂。例如，结合了人CD20抗原的单克隆抗体，已知为C2B8，可用¹¹¹In放射示踪，采用双功能鳌合剂，如，MX-DTPA(二乙烯三胺五乙酸)，它包括1-异硫氰酸根苯甲基-3-甲基-DTPA和1-甲基-3-异硫氰酸根苯甲基-DTPA的1∶1的混合物。¹¹¹In是优选的诊断性放射性同位素，由于在大约1-10mCi之间可以安全施用，未监测到毒性作用，并且其成像数据指示出随后的90Y标示的抗体分布。成像观察通常采用5mCi¹¹¹In标示抗体的剂量，最佳成像可在给予标示的抗体或配位子后的多种时间确定，通常为给予后3到6天。如，参见Murray，J.(1985)Nuc.Med.26：3328和Carraguillo等，(1985)J.Nuc.Med.26：67。

多种放射性同位素可以利用，本领域技术人员能够容易的确定不同情况下最适合的放射性同位素。例如，¹³¹I最常用于靶向免疫治疗。然而，¹³¹I的临床应用受到限制，由于半衰期短(8天)、血液和肿瘤或位点中的碘化抗体的脱卤作用特性、以及它的高γ射线不能提供期望的取决于肿瘤大小的足量局部肿瘤沉积剂量。使用了附加鳌合剂时，另外提供了将金属鳌合基加到蛋白并利用其它放射性核素如附加的¹¹¹In和⁹⁰Y的机会。⁹⁰Y具有几种利用于放射免疫治疗的优点。例如，⁹⁰Y的64小时的较长的使用半衰期足够抗体聚集于肿瘤细胞，并且，不同于¹³¹I，⁹⁰Y是高能纯β发射体，在其衰退中不伴有γ射线，在组织中具有100-1000个细胞直径的范围。进一步的，最低量的穿透辐射允许给门诊病人施用⁹⁰Y-标记的抗体。另外，标记的抗体的细胞内陷作用不为细胞杀伤所需，而且电离放射对缺乏靶抗原的临近肿瘤细胞有致命作用。

⁹⁰Y标记的抗体的单次有效治疗剂量(即，治疗有效量)范围为大约5-75mCi之间，更优选大约10-40mCi。¹³¹I标记的抗体的非骨髓清除单次有效治疗剂量为大约5-70mCi之间，更优选大约5-40mCi之间。¹³¹I标记的抗体的单次清除治疗有效剂量(即，需要自体骨髓移植的)为大约30-600mCi，更优选大约50或低于500mCi。当相对于异种蛋白，如鼠抗体，抗体或配位子具有较长循环半衰期时，¹³¹I标记的抗体的非骨髓清除单次有效治疗剂量为大约5-40mCi，更优选低于大约30mCi。放射性同位素标记物的成像剂量，如¹¹¹In标记物，通常少于大约5mCi。

¹³¹I和⁹⁰Y已广泛用于临床，现有技术中其它已知的放射性同位素也能用于同样目的。有其它放射性同位素用于成像。例如，其它的能够使用的放射性同位素包括，但不限于，¹³¹I、¹²⁵I、¹²³I、⁹⁰Y、¹¹¹In、¹⁰⁵Rh、¹⁵³Sm、¹⁶⁶Ho、¹⁷⁷Lu、¹⁸⁸Re、⁸⁶R、³²P、⁵⁷Co、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁷⁷Ga、⁸¹Rb、⁸¹Kr、⁸⁷Sr、¹¹³In、¹²⁷Cs、¹²⁹Cs、¹³²I、¹⁹⁷Hg、²¹³Pb、²¹⁶Bi、¹¹⁷Lu、²¹²Pb、²¹²Bi、⁴⁷Sc、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Pd、¹⁹⁹Au、²²⁵Ac、²¹¹At和²¹³Bi。就此方面，α、γ和β发射体均作为本发明的方案。进而，应认为，本领域技术人员能够容易的确定适用于所选择的疗程的放射性核素，不需要进行过度试验。到这里，另外的已经用于临床诊断的放射性核素包括¹²⁵I、¹²³I、Tc、K、Fc、Ga、Ga和¹¹³In。抗体也已经用多种放射性核素标记，用于靶向免疫治疗，如，参见于Peitersz等(1987)Immunol.Cell Biol.65：111-125。这些放射性同位素包括¹⁸⁸Re、¹⁸⁶Re、和¹⁹⁹Au和⁶⁷Cu。专利号为5,460,785的美国专利提供了关于这些放射性同位素的信息，引入此处作为参考。

化学治疗剂：

可用于本发明制剂和方法的化学治疗剂包括紫杉烷、秋水仙碱、长春花碱、鬼臼乙叉甙、喜树碱、抗生素、铂配位络合物、烷化剂、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物或拓扑异构酶抑制剂。优选的拓扑异构酶抑制剂是鬼臼乙叉甙。优选的嘧啶类似物包括卡培他滨、5-氟脲嘧啶、5-氟尿嘧啶脱氧核苷、5-氟尿嘧啶脱氧核苷一磷酸盐、阿糖胞苷、5-氮杂胞嘧啶核苷或2′，2′-二氟脱氧胞苷酸。优选的嘌呤类似物包括巯嘌呤、咪唑巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、赤羟壬基腺嘌呤、克拉屈滨、阿糖腺苷和磷酸氟达拉滨。叶酸类似物包括甲氨喋呤、雷替曲塞、洛美曲索、permefrexed、依达曲沙和培美曲塞。优选的鬼臼乙叉甙是依托泊苷或替尼泊苷。优选的喜树碱是irinotocan、托泊替康或camptothecan。优选的，抗生素是更生霉素、柔红霉素(道诺霉素枸橼酸柔红霉素脂质体)、阿霉素、伊达比星、表柔比星、valrubucin、米托蒽醌、争光霉素或丝裂霉素。优选的铂配位络合物是顺铂、卡铂或奥沙利铂。优选的，烷化剂是双氯乙基甲胺、环磷酰胺、异磷酰胺、美法仑、达卡巴嗪、替莫唑胺、塞替派、六甲基嘧胺、链佐星、卡莫司汀、白消安、六甲蜜安或苯丁酸氮芥。

附加的化学治疗剂例子可包括烷化剂，如塞替派和环磷酰胺(CYTOXAN^TM)；

烷基磺酸盐如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；

氮丙啶如苯并多巴、卡波醌、美妥多巴和尿多巴；

氮并啶和methylamelamines包括六甲蜜安、曲他胺、乙基trietylenephosphoramide、噻替派和trimethylolomelamine；

己酸配质(特别是bullatacin和bullatacinone)；

喜树碱(包括合成的类似物托泊替康)；

苔藓抑素；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成的类似物)；

cryptophycins(特别是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；

多拉司他汀；duocarmycin(包括该合成类似物，KW-2189和CBI-TMI)；

eleutherobin；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；

氮芥如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide雌氮芥、异磷酰胺、双氯乙基甲胺、双氯乙基甲胺氧化氢氧化物、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；

nitrosureas如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；

抗生素如theenediyne抗生素(如刺孢霉素，特别是calicheamicin gammalI和calicheamicin phill，参见，如Agnew(1994)Chem.Intl.Ed.Engl.，33：183-186；蒽环类抗生素，包括dynemicinA；二膦酸盐，如氯膦酸盐；esperamicin；和新制癌菌素生色团和相关的色蛋白enediyne抗生素chromomophores)、aclacinomysins放线菌素、authramycin、偶氮丝氨酸、争光霉素、放线菌素C、carabicin、去甲柔红霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧化-L-原亮氨酸、阿霉素(多柔比星)(包括吗啉代-阿霉素、cyanomorpholino-阿霉素、2-吡咯啉-阿霉素和脱氧阿霉素)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、potfiromycin、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；

抗代谢药如甲氨喋呤5-氟尿嘧啶(5-FU)；

叶酸类似物如二甲叶酸、甲氨喋呤、蝶罗呤、三甲曲沙；

叶酸补充剂如亚叶酸；

嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤；

嘧啶类似物如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿嘧啶脱氧核苷；

雄激素如卡普睾酮、屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内脂；

抗肾上腺如氨鲁米特、曲洛司坦；

醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；elfornithine；依利醋铵；大环内酯类抗肿瘤药；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登醇类如美登素和柄型菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；乙肼；丙卡巴肼；PSK；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细格孢氮杂酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯乙胺；单端孢霉烯族毒素类(特别是T-2毒素，疣孢菌素A，杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春花碱酰胺；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；胞嘧啶，阿糖胞苷(″Ara-C″)；

环磷酰胺；塞替派；紫杉烷例如紫杉醇(TAXON^，Bristol-MyersSquibb Oncology，Princeton，N.J.)和泰索帝(TAXOTERE^，Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(Gemzar^)；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；

铂类似物如顺铂和卡铂；

长春碱，长春新碱；长春瑞滨(Navelbine^TM)；

依托泊苷(VP-16)；异磷酰胺；米托蒽醌；；诺消灵；替尼泊苷；依达曲沙；柔红霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；

拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；

类视黄醇如维甲酸；卡培他滨；和药学上可接受的盐、酸或任何上述衍生物。

附加的优选化学治疗剂包括用于联合治疗的那些，如CHOP等。在详细的实施方案中，这些联合治疗可与抗CDIM结合抗体联用，或与附加的细胞毒性抗体联用，特别是抗CD22、抗CD52和抗CD20抗体。

特别优选能在B细胞的细胞周期阻止B细胞的药物，如干预微管聚合或解聚的药物。可以效仿的药物包括秋水仙碱、长春花碱、如长春新碱、长春碱、长春花碱酰胺或长春瑞滨，和紫杉烷，如紫杉酚、紫杉醇和紫杉萜。附加优选药物是抗肌动蛋白剂。在一个优选实施方案中，抗肌动蛋白剂是jasplakinolide或细胞松弛素，能用于更优选的离体方法，如净化恶性细胞骨髓的方法。也可使用任何上述药物的混和物，如CHOP、CAMP、DHAP、EPIC等，参见申请号为2004/0136951的美国专利。

毒素

毒素可作为免疫交联物、配位子结合物或与抗体共同给予。毒素包括，假单胞菌外毒素A、蓖麻毒素、白喉毒素、木鳖子苷、美洲商陆抗病毒蛋白、葡萄球菌肠毒素A、白树毒素、maytansinoids(如，参见于专利号为6,441,163的美国专利)等，不限于此。

细胞生长调节剂和/或抑制剂

细胞生长调节剂和/或抑制剂包括低分子治疗剂如激素或抗激素剂、激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、基因治疗剂或基因表达修饰剂。

抗激素剂对治疗涉及激素增加、特别是女性的雌激素作用的自身免疫性疾病特别有效。抗激素剂调节或抑制肿瘤的激素样作用，如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，包括，例如，他莫昔芬(包括他莫普芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟泰米芬、曲沃普芬、keoxifene、LY1 17018、奥那斯酮和托瑞米芬(Fareston^TM)；阻断酶芳香酶的芳香酶抑制剂，它调节肾上腺雌激素的产生，例如，4(5)-咪唑、氨鲁米特、甲地孕酮醋酸盐(Megace^TM)、依西美坦、福美坦、法倔唑、伏氯唑(Rivisor^TM)、来曲唑(Femara^TM)和阿那曲唑(Arimidex^TM)；抗雄激素，如氟他胺、尼鲁米特、卡比鲁胺、醋酸亮丙瑞林和戈舍瑞林；药学上可接受的盐、酸或以上所述的衍化物。雄激素特别用于治疗自身免疫性疾病，其代表为双氢表雄甾酮(DHEA)。选择性雄激素受体调节剂(SARMs)包括，例如，Hutchinson的专利号为6,645,974的美国专利所描述的化合物，如雄甾烷和雄甾烯氨甲酰。

激酶抑制剂广为所知，特别优选的激酶抑制剂包括bcr/abl酪氨酸激酶抑制剂，如imatinib(Gleevec)和它的相关化合物，Zimmermann的参见专利号为5,521,184的美国专利。附加的酪氨酸激酶抑制剂可包括阻断Lyn激酶的激活和转录中的信号合成的药物，包括，如，阻断Lyn激酶激活的siRNAs。附加激酶抑制剂还包括化合物如AGL 2592，参见Ben-Bassat，H.等，(2002)J.Pharmacol.Exp.Ther.303：163显示了凋亡诱导非霍奇金淋巴瘤；除莠霉素A，参见Mahon，TM和O′Neill，LA(1995)J.Biol.Chem.270：28557，显示阻断DNA结合和NF-κB-驱使的基因表达；苄达明酮化合物，如，参见Tang的专利号为6,680,335的美国专利；吡唑啉酮嘧啶(pyrazolopyrimidine)衍化物，如，参见Hirst的专利号为6,660,744的美国专利，等。蛋白酶体抑制剂包括硼酯(boronicester)，参见Adams的专利号为6,083,903的美国专利。优选的蛋白酶体抑制剂是bortezomib(Velcade)。

基因治疗剂和基因表达修饰剂包括反义核苷酸序列、干扰核苷酸序列等。基因治疗剂和基因表达修饰剂可用作免疫交联物或单独给予的细胞毒素剂。特定用途的基因治疗剂和基因表达修饰剂包括，编码凋亡前通道涉及的蛋白的药物，阻断凋亡前通道抑制剂的药物，或阻断增殖信号的药物，它们均能对非控制的生长和过度增殖起效。例如，基因表达修饰剂可包括反义或siRNA，作用于抑制NF-kB通道，从而抑制异常激活该通道时出现的异常增殖。

反义DNA寡核苷酸通常由补充目标序列的序列组成，通常为信史RNA(mRNA)或mRNA前体。mRNA包含功能或感觉、方向的基因信息，与反义寡核苷酸的结合灭活所指向的mRNA，并阻止它转运入蛋白内。这样的反义分子的确定基于生化试验，可设计试验表明，蛋白由特异性RNA编译，一旦确定该RNA的序列，反义分子通过补充的Watson-Crick碱基对与其结合。这样的反义分子通常包含10-30个碱基对，优选10-25个，最优选为15-20个。该反义寡核苷酸可经修饰，来提高对核酸酶水解的抵抗力，这样的类似物包括磷硫酰、甲基膦酸酯、phosphoroselenoate、磷酸二酯和p-乙氧基寡核苷酸，参见WO97/07784。

基因治疗剂也可以是核酶、DNA酶、催化性RNA或小干扰RNA(siRNA)。RNA干预利用少于大约30个碱基对的短RNAs，通过补充的碱基对作用，参见上文。SiRNAs可以是直线或环状。

如上文所述，阻止Lyn激酶激活和转录所涉及的信号合成的药物和修饰剂，是最佳的。在优选实施方案中，阻断Lyn激酶激活的siRNA，如Ptasznik，A等，(2004)Nat.Med.10：1187报告的siRNA，可与抗CDIM结合抗体一起给予，作为一种免疫交联物或作为单独给予的细胞毒素剂。

药物制剂

抗体和细胞毒素剂可用任何方法和现有技术中已知的药学上接受的辅料制备。具体而言，抗体可以盐的形式提供，具有任选的辅料和稳定剂。化学治疗剂的制备方法和辅料可以广泛变化，本信息的获自，例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences(Arthur Osol，Editor)。

细胞毒性抗体：

本发明所用的细胞毒性抗体包括具有与B细胞任何细胞表面分子特异结合的抗体。细胞表面分子包括受体、免疫球蛋白、细胞因子、糖蛋白等、例如，细胞毒性抗体能显示出与CD11a、CD19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD34、CD37、CD38、CD40、CD45、CD52、CD80、CD 86、IL-4R、IL-6R、IL-8R、IL-13、IL-13R、α-4/β-1整合素(VLA4)、BLYS受体、细胞表面个体基因型Ig、肿瘤坏死因子(TNF)或其混合的特异结合，不限于此。例如，具有与CD11a特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依法利珠单抗(RAPTIVA)。具有与CD20特异结合的细胞毒性抗体可以是美罗华(RITUXAN)。具有与CD22特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，依帕珠单抗。具有与CD25特异结合的细胞毒性抗体可以是，例如，达珠单抗(ZENAPAX)或巴利普单抗(SIMULECT)。对CD52的抗体包括，例如，CAMPATH。对α-4/β-1整合素(VLA4)的抗体包括，如，那他珠单抗。对TNF的抗体包括，例如，英夫利普单抗(REMICADE)。

细胞毒性抗体可用作联合免疫治疗方案的一部分，治疗自身免疫性疾病、淋巴癌和与病毒病和免疫缺陷相关的其它B细胞过度增生疾病。从而，在优选实施方案中，具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体可与RITUXAN、ZENAPAX、REMICADE或RAPTIVA或其联合，用于联合免疫治疗方案。

细胞毒性抗体也可用作免疫交联物，例如，包括放射性同位素或毒素。进一步的，附加实施方案中，可以使用包括具有与B细胞上的CDIM抗原表面特异结合的抗体、具有与B细胞的细胞表面分子特异结合的附加细胞毒性抗体和一种或多种化学治疗剂的联合治疗。例如，mAb216可与抗CD20抗体用于联合治疗，如美罗华、tosutimab或替伊莫单抗，与抗CD22抗体联合使用，如依帕珠单抗，或与抗CD52抗体联合使用，如CAMPATH。该联合治疗可以进一步包括化学治疗，如在联合的化学治疗和免疫治疗方案中的能破坏细胞骨架的药物，如长春新碱。

直接抗不同的细胞表面抗原的CDIM结合抗体，如VH4-34抗体，与细胞毒性抗体的联合是有效的，如实施例10所述，并为附图7显示，至少提供了叠加的效果，并且在一些情况下可以是协同作用。进一步的，如附图4所示，mAb 216对于杀伤来自复发或难治性B细胞淋巴瘤患者的许多细胞高度有效。

mAb 216或其它直接抗CDIM抗原表位的VH4-34抗体的联合，有望攻克Rituxan抵抗细胞的发生，并增加Rituxan和mAb 216的疗效。

特定的B细胞抗原包括B淋巴细胞刺激物(BLyS)，是肿瘤坏死因子(″TNF″)超家族的成员，能诱导体内和体外B细胞增殖和分化(Moore等，Science 285：260-263(1999))。发现自身免疫性疾病患者的BlyS蛋白的水平升高，自身免疫性疾病包括系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎和干燥综合征(Zhang等，The Journal of Immunology，(2001)166：6-10；Cheema等，Arthritis和Rheumatism(2001)44：1313-1319；和Groom等，Journal of Clinical Investigation(2002)109：59-68)。给予BlyS受体的溶液形式TACI，已显示出缓解NZBWF1和MRL-1pr/1pr鼠的自身免疫表型(Gross等，Nature，(2000)404：995-999)。从而，抗体和相关的结合到BlyS的分子可以发掘治疗B细胞相关疾病和病症，包括自身免疫病症和淋巴癌，的用途。

细胞表面个体基因型Ig是见于B细胞源性淋巴癌的患者特异性标记。这些细胞表面受体也提供细胞毒性抗体治疗中有用的目靶，也用于此处记载的方法。针对这些患者特异细胞表面Igs的抗个体基因性抗体的制备，参见Denney的专利号为5,972,334的美国专利。

给药方式

本发明中的抗体可通过各种不同方式给予患病的人或动物，通常为胃肠外给药。可以利用任何其它能以功能形式有效给予抗体和细胞毒素剂的给药方法，例如口服、局部或经植入型药盒。局部给药包括被动或主动方式，如使用补丁、载体或离子电渗疗法；转化黏液质的，如，舌下、颊下、直肠、阴道、鼻或经尿道、局部传送入肺、支气管、和鼻道，如粉末活性剂经喷雾吸入。口服给药包括普通的胃或十二指肠。注射剂包括注射入体腔或脉管，如，腹膜内、静脉内、淋巴管内、瘤内、肌内、间隙内、动脉内、皮下、损害内、眼内、滑膜内或关节内、胸骨内、脑血管内(如，大脑内、心室内、膜内)、肝内、损害内部和颅内注射或输注技术。优选的，组合物为口服或静脉内给药。

需要理解的是，尽管本发明结合了其优选的具体实施方案来进行描述，上述的描述和以下实施例用于说明发明，但不限制发明的范围。除非有相反的指明，本发明的实施将采用现有技术中常规的制备药物制剂的技术。其它属于本发明范围的改进和修饰对于本领域技术人员而言是显而易见的。这些技术在文献中全部说明了。

上文和下文中的所有专利、专利申请书和此处提到的出版物，引入此处，作为参考。

在以下的实施例中，已努力确保所用数据的准确性(如，数量、温度)但一些试验误差和偏差应当可以得到补救。除非有相反的指明，温度为摄氏度，压力为大气压或接近大气压。

缩写：

ALL 急性淋巴性白血病

NHL 非霍奇金淋巴瘤

CLL 慢性淋巴细胞白血病

VCR 长春新碱

IV 静脉注射

IP 腹膜内

Ig 免疫球蛋白

实施例1

mAb 216结合肿瘤细胞库中的CD19+骨髓细胞

从Children′s Oncology Group肿瘤细胞库获得了27份具有充分特征的骨髓样本。解冻(Thawed)细胞用生物素酰化的mAb 216和荧光标记的抗生蛋白链菌素染色。MAb 216结合到全部15份CD19+B祖ALL样本，具有717(范围为225-1020)的波段荧光平均值(MCF)。12份T细胞ALL样本经检验，显示的MCF为62(范围为28-149)；上述中3份T-ALL具有mAb 216结合。结果见附图1，相关结合程度标示为“+”、“++”和“+++”，无结合标示为“-”。如附图1所指示的，mAb 216与所有类型的B细胞淋巴瘤和白血病结合，但没有表现与T细胞淋巴瘤的明显结合。

实施例2

mAB 216杀伤来源于骨髓的前-B ALL细胞

获自为诊断白血病而进行骨髓穿刺病人的12份新鲜骨髓(BM)样本，在体外分析了其24小时与mAb 216的结合和细胞毒性。全部样本进行了CD19、CD10、CD34、CD20、CD3、CD2表达的免疫表型和与生物素标记的mAb 216的结合。用20ug/ml mAb 216或对照IgM洗涤并孵育BW过夜，测定细胞毒性。孵育的细胞用FITC抗CD 19和碘化丙啶(PI)染色。细胞死亡通过CD19+细胞百分率的变化和经流式细胞计量测定的CD 19-表达细胞的PI摄取来测定。

以下为测定的前B ALL患者BM的细胞毒性，mAb216孵育后被杀伤细胞的百分比与IgM对照相比：60-90％(n＝4)，30-50％(n＝4)，和7-20％(n＝2)。增加的细胞毒性与被MCF结合的mAb 216程度相关，并可能与用于mAb216的配位子的细胞周期依赖性差异表达有关。来自T-ALL(n＝1)和AML(n＝1)患者的BM样本未被mAb 216杀伤。

实施例3

抗体杀伤B细胞非白血性白动物模型的B细胞

用CB 17 SCID和NOD/LtSz-SCID免疫缺陷小鼠的B细胞白血病的人前B细胞Nalm-6模型进行的试验，用mAb 216²²治疗后，显示存活率增加，治愈率为20％。Nalm-6是ALL衍生的细胞系，不表达成熟B细胞抗原CD20，提供了用SCID鼠的能再现的人肿瘤静脉模型²³。用纯化的mAb 216(400μgs/200μl)于移植后1、7、14和21天静脉注射(IV)，治疗小鼠。比较小鼠与人的体表面积，小鼠接受每剂量相当于人90-100mg/m²的用量。观察小鼠的肿瘤生长100天。

向四组(只)Balb/c系小鼠静脉注射纯化的mAb 216(相当于人大约220-250mg/m²的用量)和对照的多克隆人IgM。24小时后采血。包括肌氨酸酐、胆红素、碱性磷酸酶、SGOT(AST)和SGPT(ALT)的化验单显示肝酶轻度升高，但胆红素正常。在14天，除碱性磷酸酶，对照和试验小鼠的所有数值回复正常。经8周，小鼠生存并康复。静脉给予Balb/c小鼠500μgs mAb 216，注射后24和48小时处死。对脾、肾、肝和心脏的组织学观察，未显示病理变化。在0、3和10天，给CB17-SCID/SCID小鼠注射mAb 216(200ugs/注射、IP或IV)。不论mAb的注射方式(IV或IP)，末次注射6周后，呈现良好的健康状况。

实施例4

mAb 216损伤B细胞膜并引起溶酶体重新密封(resealing)反应

对细胞膜损伤的固有反应是由附加的内部溶酶体膜在损伤处快速重新密封。Lamp-1是正常不出现于细胞膜上的丰富的溶酶体膜糖蛋白(Granger，B.L.，等(1990)J.Biol.Chem.265：12036；McNeil，P.L.(2002)J.细胞Sci.115：873)。当溶酶体被诱导与细胞膜融合时，Lamp-1的内-溶酶体氨基末端区域开始暴露于细胞表面。这一融合事件可以通过用定向Lamp-1的腔抗原表位的mAbs的活细胞表面染色来监测(Reddy，A.，等(2001)细胞106：157；Rodriguez，A.，等(1997)J.Cell.Biol.137.93；Martinez，I.，等(2000)J.Cell.Biol.148：1141)。从而，Lamp-1在细胞表面的出现是膜破裂后细胞膜重新密封的指标。(McNeil，P.L.，和R.A.Steinhardt(2003)Ann.Rev.CellDev.Biol.19：697)。

为试验VH4-34编码mAb 216是否损伤细胞并且继而引起快速修复和重新密封反应，测定了用mAb 216治疗的人B细胞系的细胞表面溶酶体特异蛋白Lamp-1的快速出现。

细胞和试剂

人前B细胞系Nalm-6(Hurwitz，R.，等(1979)Int.J.Cancer 23.174)，Reh(Rosenfield，C.，A.等(1977)Nature 267：841)和成熟Bcell lineOCI-Ly8Tweeddale，M.E.，等(1987)Blood69：1307)用热灭活的10％FCS在培养基中保持在对数相。B细胞系获自ATCC。VH4-34编码mAbs，mAb 216(Bhat，N.M.，等(1993)J.Immunol.151：5011)、Z2D2(Bhat，N.M.，等(2000)Scand.J.Immunol.51：134)、Y2K，和同种配对的获自VH3家族的对照mAb，MS2B6(Glasky，M.S.，等(1992)Hum.Antibod.Hybridomas 3：114)，由实验室产生，用水经2X沉淀由血清游离杂交瘤提纯。当Centriprep浓缩器(Amnicon，Dancers，MA)有需要时，浓缩单抗(Mabs)。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，IgM mAbs的纯化度为90-95％。纯化的IgMs浓缩的确定通过以人IgM为标准的夹层ELISA来确定(catalog &num；31146，PierceBiochemicals，Rockford，IL)。除了MS2B6，穿孔IgM也用作同种型对照。所有mAbs经无菌过滤，并游离于叠氮化钠。

用PI染色和前向散射的细胞活力测定

用细胞排除碘化丙啶(PI，Sigma，St.Louis，MO)的能力测定细胞膜的完整性。用Stanford′s FACS实验室的连接了VersatermPro和FlowJo软件的FACScan(Becton-Dickinson，San Jose CA)流式细胞计量仪定量PI的混合水平。用前向散射信号测得的大小正常的PI阴性细胞，被认为活细胞。

简要的说，细胞在每个试验中被具体处理，并用3％FCS和10μgs/ml的PI的PBS液重悬浮。在用钙游介质测定毒性的试验中，用加入10ugs/ml PI的有和没有钙的适当介质重悬浮细胞。由于先前有研究表明，mAb 216-介导的毒性在较低温度下显著(Bhat，N.M.，等(1996)Clin.Exp.Imrnunol.105：183)，应注意使所有介质和细胞保持在37℃，室温下离心。

ATP消耗和释放的测定

根据生物发光检验试剂盒的生产说明，测定细胞内和释放的ATP(Catalog&num；A-22066，Molecular Probes)。范围为1nM-1uM的标准ATP稀释作为试验的阳性对照。在每个试验特定的不同的介质中，细胞暴露于多种浓度的mAb216。将10ul反应上清液加入到90ul含有DTT、荧光素和荧光素酶的标准反应液中。出现了作为协同底物的ATP，通过连接了MicroWin 2000，4.2版软件(Mikrotek Laborsysteme，Gmbh)的发光计(Lumimark Microplate Reader，Bio-Rad)，发光被立即测定。该测定可以检测到毫微微克分子(femtomolar)数量的ATP。为检测细胞内ATP含量，用1％NP-40在RT溶化细胞10分钟，检验10ul溶解产物，方法参见上文。

Lamo-1表达的研究

用落射式荧光、流式细胞计量仪和共聚焦显微镜研究了表面Lamp-1的表达。人Lamp-1(CD107a，H4A3克隆)腔抗原表位和Lamp-1同种对照的抗体，由BD-PharMingen IgGlk小鼠获得。用次级FITC-结合的Goat F(ab)₂抗鼠IgG(Pierce Biochemicals)检测两种抗体。37℃下，在每个试验的特定时间，将细胞(5×105)暴露于各种浓度的mAb 216或对照的人IgM(mAb MS2B6或穿孔IgM)。然后用2％预加温的RT多聚甲醛固定细胞20分钟，用预加温的介质洗涤两次，用抗Lamp-1或同种对照染色15分钟。然后用染色介质(3％FCS和0.2％叠氮化钠PBS)洗涤细胞两次，再用抗Lamp-1的次级抗体孵育另外15分钟。洗涤两次后，在染色介质中重悬浮细胞，并用流式细胞计量仪、荧光免疫检验和共聚焦显微镜分析。

在斯坦福细胞科学成像实验室的多探针(MultiProbe)2010激光共聚焦显微镜(Molecular Dynamics，Sunnyvale，CA)上进行共聚焦成像。MultiProbe使用激发光线为488，568和647的氩/氪混和气体激光器，设置在Nikon Diaphot 200倒置显微镜上。以488nm的激发波长，发光通过510LP分光器，用510长的通过过滤器收集。使用Nikon 60X(NA1.4)平面镜。在配备有AxioCam HRc摄像机(Carl Zeiss)的Axioplan 2显微镜(Carl Zeiss，Inc.，GmbH)和连接了Axiovision3.1软件(Carl Zeiss)的Opti-Quip电源(型号1200，Highland Mills，New York)上，进行落射式荧光成像。在FACScan上进行流式细胞计量。

结果和结论

在不同的试验中，未治疗细胞的Lamp-1表达由低至5％变化至50％。变异的发生归因于B细胞系的标准实验室处理。在lamp-1表达基线水平为50％的试验中，同种对照治疗细胞具有50％的阳性率，Ab 216治疗的细胞为100％Lamp-1阳性。细胞系的Lamp-l染色重复5次，确保再现性。讨论Lamp-1基线表达为5％的试验的结果。

将Nalm-6细胞暴露于mAb 216 1分钟，显示出Lamp-1染色的急剧增加，而暴露于同种对照的细胞和未治疗的细胞没有增加它们的Lamp-1表达。Lamp-1暴露也在其它B细胞系观察到，OCI-Ly8(成熟-B)、Reh用FACS和落射式荧光(未显示数据)。用PI摄取，同时测定细胞膜的完整性。经暴露于216 1分钟后，细胞保持PI阴性。

经mAb暴露后，在不同时间点，也测定Lamp-1染色和PI摄取。抗体暴露后30秒，观察到具有明亮染色的Lamp-1暴露迅速发生，在随后的5分钟内逐渐降低(附图5A)。在这一时间期限，细胞保持PI-阴性。暴露于mAb2165分钟后，显现PI摄取，到20分钟时，由于PI摄取的出现，10-25％的细胞开始膜渗透。

通过ATP释放测定的膜破裂也显示出相似的时间过程。如附图5B所示，在2分钟时，当Lamp-l在细胞膜上被检测到时，上清液中未检测到ATP。但在15分钟和1小时时ATP释放增加，提示不能重新密封的膜损伤发生。在mAb 216治疗后2小时和24小时，测定的ATP下降，可能是细胞溶解和坏死降解释放的ATP的结果。当测定了细胞片的ATP含量时，生物发光分析成为测定细胞增殖和细胞毒性的方法。mAb 216的细胞毒性作用出现在暴露1小时之内。

这些结果显示，mAb 216介导的膜损伤修复的机制与机械和物理伤害造后细胞活力修复的制剂相同，指示mAb 216治疗造成的细胞损伤事件与任何其它大的膜破裂相似。迄今为止，未观察到抗体导致的细胞损伤。由于内膜快速加入到类脂双层膜，mAb 216所致的膜损伤在开始被重新密封，但随着暴露于mAb 216时间的增加，重新密封的尝试失败，膜开始渗透PI和ATP。除了mAb216，其它抗B细胞VH4-34编码IgMmAbs介导类似膜损伤，并引起类似的溶酶体重新密封反应。

实施例5

mAb 216诱导的膜损伤的修复依赖于功能性肌动蛋白

如McNeil，P.((2002)J.细胞Sci.115：873)以及其它中所讨论，膜损伤的修复涉及肌动蛋白依赖性程序。为检验mAb 216诱导的膜损伤是否利用了肌动蛋白依赖性修复机制，用影响肌动蛋白聚合剂处理细胞，评定对mAb 216诱导的膜损伤修复的作用。用细胞松弛素或jasplakinolide处理细胞，这两种药物具有与肌动蛋白聚合相反的作用。细胞松弛素将肌动蛋白解聚为单体，而jasplakinolide，获自海产海绵的环肽，将肌动蛋白固定为丝状体形式。两种处理均妨碍了基于肌动蛋白的细胞骨架活动。

方法：

细胞松弛素获自Sigma，而jasplakinolide获自MolecualProbes(Eugene，OR)。半胱天冬酶抑制剂、Ac-IETD-CHO和Ac-DEVD-CHO获自PharMingen(San Diego，CA)。在用mBb216处理之前，在37℃用jasplakinolide(3ugs/ml)、细胞松弛素(5ugs/ml)或半胱天冬酶抑制剂(10uM)处理Nalm-6细胞(1×106细胞/ml)2小时。并行设置等量的DMSO对照样本。然后将细胞暴露于25ug mAb 216或对照抗体(Ab)中，用流式细胞计量仪分析。

结果：

用细胞松弛素或jasplakinolide和mAb 216处理的细胞，显示活性下降(活细胞百分数)，以及由此产生的对mAb 216敏感性增加，证明了协同作用并指示修复过程需要功能性肌动蛋白。用细胞松弛素或jasplakinolide和对照抗体处理的细胞未显示活性下降。来自具有代表性的一个试验的数据见附图6B。其余3个试验获得了相似的结果。

用半胱天冬酶抑制剂Ac-IETD-CHO和Ac-DEVD-CHO孵育细胞，未改变细胞活性，表明细胞死亡的机制不归因于凋亡。

这些结果进一步支持了抗体诱导暴露于这些抗体中所致的细胞膜损伤的机制。

实施例6

mAb 216诱导的细胞膜损伤的修复依赖于钙

由于已知溶酶体的胞吐作用是钙依赖现象(Miyake，K.，和P.L.McNeil(1995)J.CellBiol.131：1737；Bi，G.Q.，等(1995)J.CellBiol.131：1747，试验了在没有钙和正常钙情况下mAb 216诱导的膜损伤修复。用两种VH4-34编码mAbs、mAb 216以50、25和12.5ng/ml浓度，和50ng/ml浓度的Y2K处理Nalm-6细胞，检验了在有和没有钙的介质中的细胞活性。如附图6A所示，在钙缺失中，细胞活性显著下降，表明钙是细胞损伤修复所必需的。用对照抗体处理或未经抗体处理的细胞，在存在或缺失钙中，未显示任何细胞活性变化。其它B细胞系，OCI-Ly8和Reh在缺失钙的情况下，也显示出类似的细胞毒性增加。

实施例7

mAb 216诱导的膜损伤修复依赖于功能性高尔基体

已知用布雷菲德菌素A(BFA)处理导致高尔基相关的外壳蛋白释放、高尔基膜在内质网的重新分布和堵塞高尔基体的分泌(Klausner，R.D.，(1992)J.细胞Biol.116：1071)。用BFA处理的细胞不产生新形成的溶酶体，这样提供了检验损伤修复对它们的需要的条件。从而，通过用BFA处理细胞，检验新形成的溶酶体在mAb 216诱导的膜损伤修复中的帮助能力。

方法：

布雷菲德菌素A获自Sigma。mAb 216处理前，37℃下用BFA(25ug/ml)处理Nalm-6细胞(1×106细胞/ml)2小时。并行设置等量的DMSO对照样本。然后将细胞暴露于25ug mAb 216或对照抗体(Ab)中，用流式细胞计量仪分析。

结果：

如附图6B所示，经联合BFA和mAb 216，细胞活性(活细胞百分数)下降，证明对细胞活性具有协同作用。BFA对用对照抗体处理的细胞的活性无影响。这一结果证明BFA阻止膜修复，提示新产生的溶酶体是mAb216损伤的B细胞系膜修复和后继存活基完整性所必需的。这一结果进一步确认，mAb 216产生膜损伤，细胞试图用溶酶体与细胞膜融合修补损伤。BFA抑制了附加溶酶体产生时，修复程序可能不足以维持细胞活性。

实施例8

长春新碱协同B细胞杀伤

直接抗B细胞系的细胞毒性测定中，当mAb 216与化学治疗剂联合时，特别是长春新碱，显示出增强的细胞杀伤。获自不同基因型和表现型ALL胚的三种细胞系，Nalm 6、REH和SUPB 15，单独用mAb 216或与长春新碱(VCR)联合，在37℃下孵育48小时。

如附图4和其下的表1所示，这些结果显示，单独用长春新碱处理，低浓度长春新碱(0.2ng/ml)时，未发生细胞死亡。然而，当长春新碱与mAb 216联用时，杀伤的B细胞百分比增至两倍多，证明了协同交互作用。单独及与化学治疗联合中mAb 216对B-始祖淋巴母细胞的细胞毒性，使该抗体成为进一步的儿童ALL免疫治疗研究中的一种有希望的试剂。

实施例9

化学治疗剂增强mAB 216对B细胞系的细胞毒性

检验了mAb216与单一化学治疗剂联用时的体外细胞毒性。获自不同基因型和表现型ALL胚的三种细胞系，Nalm 6、REH和SUPB 15，单用mAb 216或联用长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)或L-门冬酰胺酶(ASPR)进行孵育。所有这些化学治疗剂与mAb 216联用时，导致更大程度的细胞毒性，与单用一种化学治疗剂或mAb 216相比。然而，长春新碱与mAb 216的联合最为有效，与单用长春新碱或mAb216所导致的杀伤细胞数量相比，形成了协同的细胞毒性强度。这些结果显示的在化学治疗剂存在下mAb216细胞毒性的增强，至少部分是由于mAb 216处理造成的B细胞透化，允许不能渗透的化学治疗剂进入细胞内部。

结果见表1。

表1.体外mAb216联合化学治疗剂细胞毒性

细胞系/培育时间	治疗	成活细胞×10⁵	成活细胞改变％
细胞系/培育时间	治疗	成活细胞×10⁵	成活细胞改变％	Nalm 6 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 0.2ng/mlmAb 216+VCR	1310136	23053
Nalm 6 48h	对照mAb 216 5μg/mlDNR 5ng/mlmAb 216+DNR	8.25.64.31.5	314781	Nalm 6 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 0.2ng/mlmAb 216+VCR	1310136	23053
Nalm 6 48h	对照mAb 216 5μg/mlDNR 5ng/mlmAb 216+DNR	8.25.64.31.5	314781	Nalm 6 48h	对照	11

	mAb 216 5μg/mlVCR 2ng/mlDNR 5ng/mlmAb 216+VCRmAb 216+DNR	7.154.50.284.3	3554599761
	mAb 216 5μg/mlVCR 2ng/mlDNR 5ng/mlmAb 216+VCRmAb 216+DNR	7.154.50.284.3	3554599761	Nalm 6 48h	对照mAb 216 5μg/mlASPR 0.8U/mlmAb 216+ASPR	125.19.23.2	572373
REH 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 0.2ng/mlmAb 216+VCR	8.64.64.20.45	468694	Nalm 6 48h	对照mAb 216 5μg/mlASPR 0.8U/mlmAb 216+ASPR	125.19.23.2	572373
REH 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 0.2ng/mlmAb 216+VCR	8.64.64.20.45	468694	REH 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 2ng/mlDNR 5ng/mlmAb 216+VCRmAb 216+DNR	13117.74.50.94.1	1540659368
REH 48h	对照mAb 216 5μg/mlASPR 0.8U/mlmAb 216+ASPR	9.63.46.22.4	653575	REH 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 2ng/mlDNR 5ng/mlmAb 216+VCRmAb 216+DNR	13117.74.50.94.1	1540659368
REH 48h	对照mAb 216 5μg/mlASPR 0.8U/mlmAb 216+ASPR	9.63.46.22.4	653575	SUP B15 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 2ng/mlDNR 4ng/mlmAb 216+VCRmAb 216+DNR	5.13.62.80.441.50.38	2945915092
SUP B15 48h	对照mAb 216 5μg/mlASPR 0.8U/mlmAb 216+ASPR	5.74.332.3	244760	SUP B15 48h	对照mAb 216 5μg/mlVCR 2ng/mlDNR 4ng/mlmAb 216+VCRmAb 216+DNR	5.13.62.80.441.50.38	2945915092

VCR；长春新碱，DNR；柔红霉素，ASPR；asparginase

实施例10

mAb 216和C2B8(抗-CD20抗体)综合疗法

为研究mAb216和抗CD20抗体是否能提供有效的体内联合，如在患者体内治疗时会遇到的，在补体的存在下，试验了结合的抗体治疗B细胞的效果。

在兔补体存在下，用mAb 216或C2B8(Rituxan)处理淋巴瘤细胞系OCI-Ly8。用MTT测定法检测细胞毒性，是一种线粒体酶功能测定，测定了3(4，5)-二甲基噻唑-2，5-苯并四唑盐溴化物的色度法变化，来确定杀伤的细胞百分比。细胞以1×10⁵每ml或3×10⁵每ml的密度装入培养基。每种抗体分别以215ng/ml或430ng/ml进行检验，综合治疗中每种抗体为215ng/ml，综合浓度为430ng/ml。附图7显示的结果表明联合抗体治疗表现出增强的杀伤B细胞效力，特别是在高细胞浓度时，抗体和/或补体浓度可以限制效力。较低的平板接种浓度，联合抗体治疗呈现大约34％的杀伤，而每种抗体分别以215ng/ml检验时的累加效应为大约29％杀伤，这样证明效果至少为叠加，而且可能为协同。在较高的平板接种浓度，联合抗体治疗呈现大约30％的杀伤，而每种抗体分别以215ng/ml检验时的累加效应为大约23％杀伤，从而再次证明效果至少为叠加，而且可能为协同。显示的数据是3个试验中有代表性的。

实施例11

检验mAb 216对ALL患者的效力的临床试验治疗诊断记录

在复发或难治性B前体ALL儿重中进行的I期人mAb216剂量递增研究。将给予两疗程的mAb输注，在第0天和第7天给予相同剂量的抗体。

第0天：mAb 216剂量#1

第7天；mAb 216剂量#2

抗体的给予：第0天和第7天

室温下将mAb 216稀释至终末容积1mg/ml生理盐水。MAb溶液不能与任何其它溶液或药物混和或稀释。首次mAb216输注时，初始剂量率应当为第一个半小时25mg/小时。如果没有毒性或输注相关事件发生，剂量率可以增加(以每30分钟25mg/小时)至最大量200mg/小时。如果有任何毒性或输注相关性事件发生，抗体输注应当暂时减慢或中止，并且适当处理病人。症状改善时，输注可以先前的1/2剂量率重新开始，逐渐增加到最大率200mg/小时。

疾病评价和药物代谢动力学

在进行第二抗体输注前，治疗的早期反应应当在第7天进行。对于第一剂量抗体显示出良性反应的患者将继续进行接受与第0天同样形式的第二剂量。在第7天有差的反应的患者将接受联合了长春新碱的第二剂量抗体。到第5天时，患者明显有差的治疗反应，即，外周胚细胞计数明显升高，患者可以早在第5天进行mAb216联合长春新碱的第二剂量

抗体治疗的终末反应应在第35天进行。

将只用抗体输注剂量#1进行药物代谢动力学抽样。

mAb216剂量增加表

剂量水平	剂量(mg/kg)
剂量水平	剂量(mg/kg)	剂量水平1剂量水平2剂量水平3剂量水平4剂量水平5	1.252.55.010.020.0

mAb 216剂量应当以mg每kg体重计算，如上文指出的。药量增加计划用3组病人，还有另外两名用于出现首次剂量限制性毒性(DLT)时加入的病人，如下；

三名患者以剂量水平1治疗(1.25mg/kg)

如果首次的三名患者未经受DLT，随后的三名患者的剂量将增至下一水平。

如果给定的一批病人的三名中，有一名经历了DLT，最多增加另外两名病人以该水平治疗。

如果这两名附加病人均未经历DLT，随后一批病人的剂量将增加。

如果两名附加病人中有一个或更多经历了DLT，进入该剂量水平的患者和进一步的剂量增加应当停止，MTD将已经被超过。至少两名附加病人将以下一个低剂量水平治疗。

如果任何一批(3-5名病人)中有两名或更多病人经历了DLT，MTD将已经被超过。至少两名附加病人将以下一个低剂量水平治疗。

五名病人中最多一名经历DLT的最高剂量，被认为是MTD。

本研究中不允许患者自身增加剂量。

剂量限制性毒性的定义

不利事件(毒性)将根据NCI CTC v.2.0分级。DLT将定义为任何至少(可能、很可能或绝对)可归因于试验药mAb216的血液学或非血液学毒性的发生。

化学治疗

第7天评价：在第7天临床反应评价表现为差反应的事件中，定义为骨髓检查中＞25％白血病胚细胞剩余(见5.0部分)或外周血胚细胞计数上升，在给予抗体的初始剂量#2之前，在第7天给予长春新碱。此后，根据下表，长春新碱将每周给予，共4次剂量：

长春新碱1.5mg/m²/剂量静脉推注每周×4剂量(第7，14，21，28天)。

如果病人在第35天达到完全缓解，已在第7天接受mAb 216+VCR，随后附加的3周VCR剂量，未来用mAb 216+VCR以月为基础的治疗将有可能，在此期间mAb 216有效。MAb的剂量将与第1天和第7天给予的诊治记录相同。

第14、21和28天评价：在第14、21或28天的临床反应评价显示残留病变的事件中，定义为骨髓检查＞5％白细胞胚细胞剩余，患者可以开始再诱导化学治疗。

对于接受再诱导化学治疗治疗第14、21或28天残留病变的病人，不再要求进行研究目的的每周的BMA评价。建议接受再诱导化学治疗的患者开始化学治疗后大约4周进行BMA/LP，评价改善状况。

再诱导化学治疗：

再诱导化学治疗仅用于在第14、21或28天检查出残留病变的病人。标准的4-药，28天再诱导方案包括：

泼尼松40mg/m²/天每天3次×28天；

长春新碱1.5mg/m²/剂静脉推注每周1次×4(第1、8、15、22天)；

E.coli L-门冬酰胺酶6,000IU/m²/剂肌肉注射×6剂

(第2、5、8、12、15、19天)；

道诺霉素30mg/m²/剂IV每周1次×3剂

(第8、15、21天)；

膜内甲氨喋呤(年龄适合的剂量)。

治疗日以第1天开始，作为再诱导化学治疗的第一天。

第1和15天(有附加剂量的第8和22天，如果CNS 2，即＜5WBC/μl并且细胞离心图片有胚细胞在第5天LP)。

CNS预防剂量：

年龄 MTX 剂量

1-1.99岁 8mg 8cc

2-2.99岁 10mg 10cc

3-3.99岁 12mg 12cc

＞9岁 15mg 15cc

以上诊疗记录允许研究者达到以下目标：

估计VH4-34编码单克隆抗体，mAb 216，的最大耐受剂量(MTD)，以两种剂量按单独的一周给予患复发或难治性急性淋巴细胞性白血病(ALL)儿量；

确定本方案中的mAb216以单独药物或与长春新碱联用时的剂量限制性毒性(DLT)；

描绘mAb216在复发或难治性ALL儿童中的药物代谢动力学行为；

在I期研究范围内，初步定义mAb216的抗肿瘤活性；并且[0257]评定mAb 216在复发或难治性ALL患者中的生物活性。

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Claims

1.一种治疗患有特征为B细胞过度增殖的疾病的人类患者的方法，包括用：(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)细胞毒素剂，接触所述的B细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中特征为：B细胞过度增殖的疾病是淋巴癌、病毒感染、免疫缺陷或自身免疫性疾病。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述的病毒感染是人免疫缺陷病毒或单核细胞增多症。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述的免疫缺陷是移植后淋巴增生症或免疫缺陷综合症。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述的自身免疫性疾病是全身红斑狼疮(systemic lupus erythematosis)、类风湿性关节炎、自身免疫性淋巴增生症、多发性硬化症、银屑病、重症肌无力、桥本氏甲状腺炎、阿尔茨海默氏病、狼疮性肾炎、III类(Class III)自身免疫病如免疫介导的血小板减少症、如急性特发性血小板减少性紫癜和慢性特发性血小板减少性紫癜、皮肌炎、干燥综合征、多发性硬化症、小舞蹈病、重症肌无力、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、风湿热、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨诺赫-舍恩莱紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森综合征、克隆氏病、伯克氏肉样瘤、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾小球肾炎、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、肺出血-肾炎综合征、血栓闭塞性脉管炎(thromboangitis ubiterans)、原发性胆汁性肝硬变、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多发性肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常性天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩性侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球性肾炎和纤维化肺泡炎。

6.根据权利要求1所述的方法，其中的细胞毒素剂是化学治疗剂、放射性同位素、细胞毒性抗体、免疫交联物、配位子结合物、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、毒素或其混合物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中的化学治疗剂是破坏B细胞细胞骨架的药物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中的破坏B细胞细胞骨架的药物是干预微管聚合或解聚的药物。

9.根据权利要求8所述的方法，其中的干预微管聚合或解聚药物是紫杉烷、长春花生物碱，或秋水仙碱，或其混和物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中的长春花生物碱是长春碱、长春新碱、长春花碱酰胺，或长春瑞滨，或其混和物。

11.根据权利要求9所述的方法，其中的紫杉烷是紫杉醇，或紫杉萜，或其混和物。

12.根据权利要求8所述的方法，其中的破坏B细胞细胞骨架的药物是抗肌动蛋白药物。

13.根据权利要求6所述的方法，其中的化学治疗剂是门冬酰胺酶、鬼臼乙叉甙、喜树碱、抗生素、铂配位络合物、烷化剂、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物或拓扑异构酶抑制剂，或其混合物。

14.根据权利要求13所述的方法，其中的拓扑异构酶抑制剂是鬼臼乙叉甙。

15.根据权利要求13所述的方法，其中的鬼臼乙叉甙是依托泊苷或替尼泊苷。

16.根据权利要求13所述的方法，其中的嘧啶类似物是卡培他滨、5-氟脲嘧啶、5-氟尿嘧啶脱氧核苷，5-氟尿嘧啶脱氧核苷一磷酸盐、阿糖胞苷、5-氮杂胞嘧啶核苷、2′，2′-二氟脱氧胞苷酸。

17.根据权利要求13所述的方法，其中的嘌呤类似物是巯嘌呤、咪唑巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、赤羟壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、克拉屈滨、阿糖腺苷、磷酸氟达拉滨。

18.根据权利要求13所述的方法，其中的叶酸类似物甲氨喋呤、雷替曲塞、洛美曲索、permefrexed、依达曲沙、培美曲塞。

19.根据权利要求13所述的方法，其中的喜树碱是irinotocan、托泊替康、camptothecan。

20.根据权利要求13所述的方法，其中的抗生素是更生霉素、柔红霉素、阿霉素、伊达比星、表柔比星、valrubucin、mitoxanthrone、争光霉素，或丝裂霉素。

21.根据权利要求13所述的方法，其中的铂配位络合物是顺铂、卡铂，或奥沙利铂。

22.根据权利要求13所述的方法，其中的烷化剂是双氯乙基甲胺、环磷酰胺、异磷酰胺、美法仑、达卡巴嗪、替莫唑胺、塞替派、六甲基嘧胺、链佐星、卡莫司汀、白消安、六甲蜜安或苯丁酸氮芥。

23.根据权利要求1所述的方法，其中的细胞毒素剂在给予具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体的同时、之前或之后给予。

24.根据权利要求1所述的方法，其中的细胞毒素剂以共价或非共价连接于具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体。

25.根据权利要求1所述的方法，其中的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体是VH4-34编码抗体。

26.根据权利要求25所述的方法，其中的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体是mAb216、RT-2B、FS12、A6(H4C5)、Cal-4G、S20A2、FS3、Gee、HT、Z2D2、Y2K。

27.根据权利要求26所述的方法，其中的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体是mAB216。

28.根据权利要求1所述的方法，其中的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体包括带阳性净电荷的CDR序列。

29.根据权利要求6所述的方法，其中的细胞毒素剂是放射性同位素。

30.根据权利要求29所述的方法，其中的放射性同位素是¹³¹I、¹²⁵I、¹²³I、⁹⁰Y、¹¹¹In、¹⁰⁵Rh、¹⁵³Sm、⁶⁷Cu、⁶⁷Ga、¹⁶⁶Ho，¹¹⁷Lu、¹⁸⁸Re或¹⁸⁶Re 。

31.根据权利要求6所述的方法，其中的细胞毒性抗体具有与B细胞细胞表面受体的特异结合。

32.根据权利要求31所述的方法，其中的细胞毒性抗体具有与CD11a、CD19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD34、CD37、CD38、CD40、CD45、CD52、CD80、CD 86、IL-4R、IL-6R、IL-8R、IL-13、IL-13R、α-4/β-1整合素(VLA4)、BLYS受体、细胞表面个体基因型lg、肿瘤坏死因子(TNF)，或其混合物的特异结合。

33.根据权利要求31所述的方法，其中的细胞毒性抗体是依法利珠单抗(RAPTI VA)、美罗华(RITUXAN)、达珠单抗(ZENAPAX)、依帕珠单抗、巴利普单抗(SIMULECT)、抗CD52(CAMPATH)、那他珠单抗，或英夫利普单抗(REMICADE)。

34.根据权利要求31所述的方法，其中的细胞毒性抗体是免疫交联物。

35.根据权利要求6所述的方法，其中的细胞毒素剂是配位子结合物。

36.根据权利要求35所述的方法，其中的配位子结合物包括IL-2、IL-4、IL-6、IL-13、IL-15、BLYS，或TNF。

37.根据权利要求6所述的方法，其中的免疫抑制剂是糖皮质激素、神经钙蛋白抑制剂、抗增殖/抗代谢剂，或免疫抑制的抗体。

38.根据权利要求37所述的方法，其中的神经钙蛋白抑制剂是环孢霉素A或他克莫司。

39.根据权利要求37所述的方法，其中的抗增殖/抗代谢剂是硫唑嘌呤、chlorambucol、环磷酰胺、来氟米特、霉酚酸酯、甲氨喋呤、雷怕霉素、沙利度胺，或其混合物。

40.根据权利要求37所述的方法，其中的糖皮质激素选自强的松龙、泼尼松，或地塞米松。

41.根据权利要求37所述的方法，其中的细胞生长调节剂和/或抑制剂是低分子治疗剂、基因治疗剂或基因表达修饰剂。

42.根据权利要求41所述的方法，其中的低分子治疗剂是激酶抑制剂，或蛋白酶体抑制剂。

43.根据权利要求42所述的方法，其中的激酶抑制剂是bcr/abl酪氨酸激酶抑制剂，或酪氨酸激酶抑制剂。

44.根据权利要求42所述的方法，其中的蛋白酶体抑制剂是硼酯(boronic ester)。

45.根据权利要求41所述的方法，其中的基因治疗剂是质粒、裸露DNA，或核酸-肽结合物。

46.根据权利要求41所述的方法，其中的基因表达修饰剂是反义核苷酸，或干扰核苷酸(例如RNAi)。

47.根据权利要求6所述的方法，其中的毒素是假单胞菌外毒素A、蓖麻毒素、白喉毒素、木鳖子苷、美洲商陆抗病毒蛋白、葡萄球菌肠毒素A、白树毒素，或maytansinoid。

48根据权利要求2所述的方法，其中的淋巴癌是任何B细胞起源的急性或慢性白血病或淋巴瘤。

49.根据权利要求2所述的方法，其中的淋巴癌是急性淋巴细胞白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、Burkitt′s淋巴瘤、B始祖ALL、成人ALL，或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。

50.根据权利要求1所述的方法，其中所述的接触在体内、试管内或体外实施。

51.根据权利要求50所述的方法，其中所述的体内接触的实施，是通过给患者注射，给予所述的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体。

52.一种治疗特征为淋巴癌的病人的方法，包括给予(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)化学治疗剂。

53.一种治疗特征为淋巴癌的病人的方法，包括给予(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)具有与B细胞的细胞表面受体特异结合的细胞毒性抗体。

54.一种扩大结合CDIM抗原表位抗体的B细胞细胞毒性的方法，包括用结合CDIM抗原表位的抗体和破坏B细胞细胞骨架的药物接触B细胞。

55.根据权利要求54所述的方法，其中的破坏B细胞细胞骨架的药物是干预微管聚合或解聚的药物。

56.根据权利要求55所述的方法，其中的其中干预微管聚合或解聚的药物是紫杉烷，长春花生物碱或秋水仙碱。

57.根据权利要求56所述的方法，其中的长春花生物碱是长春碱、长春新碱、长春花碱酰胺，或长春瑞滨。

58.根据权利要求56所述的方法，其中的紫杉烷是紫杉醇或紫杉萜。

59.根据权利要求54所述的方法，其中的扩大B细胞细胞毒性的方法用于治疗淋巴癌、B细胞过度增生疾病，或自身免疫性疾病。

60.一种治疗哺乳动物自身免疫性疾病的方法，包括给予(1)细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，和(2)化学治疗剂、具有与B细胞的细胞表面受体特异结合的抗体、免疫抑制剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂，或其混合物。

61.一种杀伤抵抗化学治疗剂、细胞生长调节剂和/或抑制剂、或细胞毒性抗体的恶性B细胞的方法，包括用具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体接触所述的B细胞。

62.根据权利要求61所述的方法，进一步包括用附加的化学治疗剂接触所述的恶性B细胞。

63.一种杀伤抵抗具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体的恶性B细胞的方法，包括用化学治疗剂和具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体处理所述的B细胞。

64.一种治疗特征为B细胞过度增殖的疾病或病症的方法，包括用足以透化B细胞数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体接触该B细胞。

65.一种降低抵抗再诱导治疗患者肿瘤负荷的方法，包括给予细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，其中所述的治疗使患者能承受后继的再诱导治疗。

66.一种扩大抗B细胞抗体的细胞毒性的方法，包括给予细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体。

67.一种用于注射的药物制剂，包括细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体。

68.根据权利要求67所述的药物制剂，还包括化学治疗剂。

69.一种治疗特征为B细胞过度增殖患者的试剂盒，包括：

(a)足以透化患者B细胞数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体，

(b)有效治疗特征为B细胞过度增殖病症的治疗有效量的细胞毒素剂。

70.经骨髓清除治疗后的患者，在恶性B细胞淋巴癌患者骨髓移植前先净化骨髓的治疗方法，包括用细胞毒数量的具有与B细胞上的CDIM抗原表位特异结合的抗体体外处理骨髓。

71.根据权利要求70所述的方法，还包括用细胞毒素剂处理骨髓。

72.一种治疗特征为B细胞过度增殖疾病的方法，包括用(1)细胞毒数量的抗CDIM抗体mAb216或Y2K，和(2)抗CD20抗体接触B细胞。

73.根据权利要求72所述的方法，其中的抗CD20抗体是美罗华、tosutimab或替伊莫单抗。

74.根据权利要求72所述的方法，还包括用长春新碱或长春碱接触患者的B细胞。

75.一种治疗特征为B细胞过度增殖疾病的方法，包括用(1)细胞毒数量的抗CDIM抗体mAb216或Y2K，和(2)抗CD52抗体接触所述B细胞。

76.根据权利要求75所述的方法，其中的抗CD52抗体是CAMPATH。

77.根据权利要求75所述的方法，还包括用长春新碱或长春碱接触患者的B细胞。

78.一种治疗特征为B细胞过度增殖的疾病的方法，包括用(1)细胞毒数量的抗CDIM抗体mAb216或Y2K，和(2)抗CD22抗体接触所述B细胞。

79.根据权利要求78所述的方法，其中的抗CD22抗体是依帕珠单抗。

80.根据权利要求78所述的方法，还包括用长春新碱或长春碱接触患者B细胞。