CN1878560B - 局部使用的含有Stryphnodendron提取物的组合物,其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于局部的含Stryphnodendron属植物提取物的组合物，其制备方法及应用。该组合物含有1-6％的总酚，可用于治疗皮肤创伤。

Description

局部使用的含有Stryphnodendron提取物的组合物，其制备方法及应用

技术领域

本发明属于制药学领域，具体包括治疗导致阻塞或减少血液供应的溃疡，更具体说治疗压迫性溃疡和血管曲张性溃疡(静脉或动脉)的植物性治疗药物配方及其制备方法和应用，所述植物性药物的特征是含部分Stryphnodendron属植物及其粗提物。

制备工艺基础

如通常所知，数千年来治疗创伤的目的是促进天然伤疤的愈合。已知某些创伤会自发愈合成伤疤，而其它创伤则抗拒这种变化，其中一些因长期卧床所致的病例将导致病人患上糖尿病、癌症、血管曲张性溃疡和压迫性溃疡，最常见的有结痂。

按照Modoliht和Bevilacqua(1985)所述，伤疤愈合是一种从炎症反应开始的生理过程，特征是血流和毛细血管通透性增加，白细胞向受伤区域迁移。毛细血管通透性升高使血浆及其组分渗出形成炎症性残留物。

起初伤口充满血凝块、不溶性带白色的蛋白质和残留物，它们形成痂并几乎立即将伤口与外部分隔开(COTRAN，1989)。中性白细胞和巨噬细胞是生物体抵制细菌入侵反应中首先迁移入伤口区域中的细胞(RUNNELS等，1976)。当这些细胞破坏自身并杀伤细菌时，其剩余部分就与死亡的殘留组织一起形成脓液(GUYTON，1991)。

当肉芽组织自身收缩时，将使皮肤伤口的边沿向伤口中心部分缩进，从而使该区域重新形成皮肤并减小伤口。若肉芽过多则会延迟伤疤的愈合。伤口成痂有利于伤疤愈合而痂下伤疤愈合则会阻碍这一进程。采用数种物质如鞣酸可形成痂。当伤口成痂时若其中仍有残留物，细菌就能在伤口和肉芽组织之间繁殖。

如通常所知，压迫性溃疡或痂是一种凹陷性病变，可达到不同的深度(称为级别)，如皮肤甚至肌肉和骨头(bane)，所述痂是因对肌肉及其邻近区域的长期压迫而造成的血液循环阻塞所致。血循环被阻塞是由于病人缺少正常运动和感觉缺陷，这是发生区域性坏死状况的基本原因，此种坏死进一步发展成伤口。

痂可发生在机体的数个部位，最常见的情况是病人突出的骨头压迫软组织于硬表面使之出现病损。例如，长期卧床病人通过其腿的重量压迫其脚后跟小面积的皮肤，此压力足以阻断髂骨与皮肤表面之间的血管，在后跟上形成结痂溃疡。当病人因长期仰卧而不能活动时骶骨则会因承受压力而产生痂，这是最常见的结痂部位。其它部位如锁骨、肘部、肋骨和枕骨也是易发痂的部位。

因此，结痂起始于对机体的特定部位的长期压迫，直到周围皮肤损伤产生伤口。

而血管曲张溃疡(静脉或动脉)是皮肤中静脉血积压的结果(这取决于血液的粘稠度、皮下脂肪垫和褐斑的减少程度)。在动脉高血压、糖尿病和动脉血栓病例中，皮肤动脉或深部组织发生阻塞而引发创伤。它们与感染性溃疡一样令人痛苦，呈现炎症特征并分泌脓液。

(压迫性或血管曲张性)溃疡通常根据“临床医师快速参考指南(QuickReference Guide for Clinicians)”按组织损伤程度分成以下几级：

I级：皮肤呈现充血(发红)；

II级：伤口深透皮肤(表皮和/或“真皮”)引起皮下组织损伤或坏死。病损的临床表现为浅表溃疡，伴有或没有毗邻组织损伤；

III级：皮肤和组织的损伤程度延伸到皮下组织；

IV级：病损深入关节肌肉和骨组织。

含残留物的受损组织是纤维性组织，大部分由非组织化的胶原纤维组成。此类组织血管和神经极少，不具伸展性。由于缺少神经和弹性，易于产生一系列损伤。损伤的组织由于局部血管少而难于愈合成伤疤。

可采用许多类型的治疗方法来治疗压迫性溃疡，包括预防措施和几种类型的治疗：a)采用特制的病床，水床垫等进行局部治疗或护理；b)病人的治疗包括无菌疗法、营养补充、护理和防止局部感染等；c)对受影响部位采用电刺激、超声波、激光治疗和其它方法进行物理性治疗。

在一般情况下，受伤自发导致伤疤愈合，包括炎症反应、新血管生成、胶原的合成和沉积。虽然组织修复和再生不受到干扰，但由于胶原的合成加速，可能发生第二期伤疤愈合。因此，伤口的伤疤愈合涉及一系列复杂的生化和细胞活动，这些活动最终促进了病损的收缩、封闭和伤疤愈合。

术语“新生”用于指恢复(restare)受损伤和结痂组织的血管分布和弹性。术语“损伤”用于指外科手术、外伤、溃疡、烧伤、化学试剂和病毒细菌感染引起伤口。术语“结痂的”组织是一类伤口愈合期间或其它病理过程所形成的纤维或胶原组织。结痂的伤疤组织是数以百计的非组织化胶原纤维产生的纤维组织，由于组织部位中的损伤或炎症而形成。

伤口污染可能是由于直接接触感染性物质或引入的脏物、灰尘及病人皮肤或胃肠道的外源性微生物。例如，已知尽管采取了有效措施来避免感染，实际上所有烧伤在后12-24小时内细菌即开始形成菌落。

一般而言，感染因引发组织损伤和炎症而防碍伤口的伤疤愈合。随后因进行性炎症、残留物的形成、酶的释放和激活、自由基的产生、氧的消耗和神经损伤而防碍伤口的恢复。因此应谨慎预防炎症而使伤口的伤疤愈合，避免影响组织抵抗感染的能力并抑制巨噬细胞的基本功能。

现有技术表明，用于伤口伤疤愈合的医疗方案多种多样，它们各有优点和局限性。可使用的局部治疗活性物质包括使用：抗生素、铋盐、碳水化合物、激素、血浆、锌和鞣酸、电刺激治疗、高压氧、超声波疗法和激光。

仍需考虑强化伤口治疗的传统方法，这涉及采用天然产品来帮助伤疤愈合，如苦配巴油(copaiba oil)(Coorea，1984；Eurides & Mazzanti，1995)；木瓜蛋白酶(papaina)(Sanchez Neto等，1993)；糖(Prata等，1988)；胶原(Abramo，1990)和维生素A(Bondi，1989)。

Barbatiman(barbatimao)(stryphnodendron polyphyllum和S.adstringens；Martius)，具体说，是本创新药物制剂中涉及的植物性治疗剂，包括在帕拉洲到圣保罗洲发现的巴西植物群豆科树生金合欢植物。其树皮厚并具有粘合作用，该作用与其中的活性成分如鞣酸有关。

由于类似于化学组合物，这些植物的树皮提取物可用于制备伤疤愈合植物性治疗剂。

Brazilian Pharmacology(1959)提及含有鞣酸的植物树皮对小鼠具有重要的药理学活性如对真皮伤口(PANIZZA，1998和EURIDES，1996)、胃溃疡(FAVARETTO等，1985)和十二指肠溃疡(RIZZINI&MORS，1976)有抗炎症作用(LIMA，1998)和伤疤愈合作用。鞣酸还可辅助治疗湿疹，优点是不会产生在高剂量糖皮质激素治疗中常见的副作用(MROWIETS等，1991)。

据Mello(1998)所述，从Barbatiman树皮制取的此提取物的主要特征是鞣酸含量丰富。1996年，Mello等人(apud MELLO，1998)分离和鉴定了Barbatiman树皮粗提物中的22种化合物，它们都是浓缩形式的鞣酸，是几种生物活动的相关活性组分，占植物树皮的25-30％(PANIZZA等，1998)。已得到研究的化学组分有proantocianidinas，prorobinetinidinas，黄烷-3-01和prodelfinidinas。按Lima等(1998)所述，Barbatiman的抗炎症活性归因于proantocianidinas。

另有对三种Barbatiman的鞣酸组合物进行的研究，即S.polyphyllum，S.adstringebs和Dimorphandramollis(SANTOS，2002)，已用化学方法对其进行了评价。要强调的是尽管D.Mollis被称为Barbatiman，但其化学性质不同于其它二种，见下表。

水解后Barbatiman提取物的色谱分析

物种	植物	飞燕草素(Delphinidina)	矢车菊素(Cyanidina)	没食子酸(Galic Acid，galico)	黄酮醇II(FlavonolsII)
						S.adstringens	树皮	+	-	+	-
	叶	+	-	+	+
						S.polyphyllum	树皮	+	-	+	-
	叶	+	-	+	+
						D.mollis	树皮	_	+	-	+
	叶	_	_	-	+

按Haslam(1996)所述，鞣酸的粘合特性来自于其可通过化学性质已相当明确的连接链与蛋白质相结合。这种鞣酸/蛋白质和/或多糖复合物可在受损皮肤或粘膜上形成保护性涂层，在此涂层下，创伤、烧伤和炎症可自然康复。

鞣酸对细菌和真菌也有抑制作用(抗微生物活性)，其根据是推测鞣酸能抑制细菌和真菌的酶与这些酶的底物之间的作用。另外，鞣酸可作用于微生物的细胞膜而改变其代谢，鞣酸与金属离子形成的组合物可减少微生物代谢对必须离子的利用率(SIMOES，2000)。

Neto等(1996)比较了金盏菊(Calendula officinalis L)与Stryphnodendron Barbatiman(Vellozo)Martius(Barbatiman)治疗人血管曲张溃疡和皮肤病损时伤疤愈合的效果。结果显示，不论用calendula还是Barbatiman治疗对烧伤康复都有效，在治疗血管曲张溃疡时联用的愈合速度更快。

早期研究表明，激光是一种可加速组织愈合过程的物理疗法。激光是一种特殊形式的电磁能，在可见电磁谱或红外区操作，可采用不同类型的激光，无论其能量高低。

按Baxter等(1994)所述，激光成功之处在于起在组织中诱导的反应，如减少水肿，减少炎症作用，提高吞噬作用过程、胶原的合成和再形成，大多数生物学作用涉及伤疤愈合时的细胞增殖，主要是成纤维细胞和巨噬细胞的增殖(O’KANE等，1994)。

体外研究常见报导皮肤和粘膜伤口的伤疤愈合时间缩短与组织恢复反应的主要细胞，成纤维细胞的增殖和蛋白质合成的激活相关(ABERGEL，1984；BOUL TON，1986；HALLMAN，1988；LOEVSCALL-ARENHOLT-BINDSLEV，1994)。

激光器在溃疡恢复中是一种重要的非侵入性器械(SCHINDL等，1999)，许多疾病包括静脉和糖尿病溃疡(ALGAN等，2001)其伤疤的愈合时间取决于溃疡的大小和病因。

1991年Arantes发现采用低强度激光治疗下肢真皮病损，70％的病人愈合而不复发，30％症状改善。与之相比，采用通常的临床方法38％全愈，48％改善，14％没有康复。

伤疤愈合除用局部使用产品治疗外，物理性治疗装置，如超声波(US)和低强度激光可作为替代方法用于组织康复的治疗。

超声波是另一种广泛用于加快组织康复过程的疗法，其功能源于能对损伤组织产生加热和不加热(机械)作用(STARCKEY，2001；DYSON，1992)。低强度超声波通常由于稳定的波长、声流、微电流和空腔振荡所产生的非加热作用而具有治疗效果(DYSON，1987)。

皮肤除了起屏障功能外，还可作为给药的途径，其优点是减少了口服给药或其它被认为具有侵袭性给药方法可能引起的副作用(MATCHED，2002)。目前对透皮递送低分子量药物，甚或高分子量的蛋白质如胰岛素技术的兴趣与日俱增，因此法可避免注射给药时的疼痛和对皮肤可能造成的永久性伤害。

近年进行的研究目的是改善皮肤的渗透性，包括采用化学性“促进剂”(MORGANTI等，2001)和物理性“促进剂”，如离子电渗疗法，一种利用电流来促进治疗药物皮内渗透的电治疗技术(BARRY，2001)，已获得广泛应用的有fonoforese和sonoforese(MATCHED & BOUCAUD，2002)。

此技术包括超声波与凝胶或油膏形式的几种药物联合使用令药物透过角质层扩散。超声波可提高高分子量和低分子量疏水提取物透过角质层的扩散系数(MITRAGOTRI，2001；JOSHI-RAJE，2002)，将这种可渗透角质的提取物与化学促进剂一起应用(TEZEL等，2002)可提高(potencializando)几种药物的吸收。在这方面，Skanem & Fentner(1984)披露在先前不同的研究中皆采用了超声波改变皮肤局部状况以利于药物扩散。

无明显差别的超声波产热会引起药物输送强度、频率和方式发生不大的改变。产热的级别受到细微因素的影响，如变压器的移动、施加超声波的解剖学部位、运载体的用量和类型、偶合压力与照射的方法、微电流和空腔振动作用产生的力。

在进行本研究之前，回顾文献所述，注意到无论是否与金盏草植物联合应用，Barbatiman的广泛使用仍然是经验性疗法，即用Barbatiman树皮制备的浸液直接施加到皮肤部位，这种方法无须考虑渗透控制、局部水份、加入的物质污染等，也缺乏可用以衡量剂量、控制用药和选择临床方法学的药物形式。

综上所述，在患有溃疡，无论血管曲张性或压迫性溃疡的那些病人中，如果在伤口的伤疤愈合治疗期间最重要的事情是注意局部无菌，预防炎症和感染，这种方法就决不能重复使用，因为伤口组织的伤疤愈合过程在外部干涉下必会由于胶原的合成加速而发生第二期愈合。

为了在人类和兽医学中以药物方式利用Stryphnodendron树皮的性能(Barbatiman)，本申请人开发了本发明，它涉及治疗伤疤愈合的本发明的植物性治疗药物，包括其制备方法、应用、有效和衍生组分，并验证了用产自巴西的天然药用植物，具体是用其提取物和部分配制的产品的治疗作用，该植物具体是含有高含量鞣酸组分和总酚的Stryphnodendronpolyphythum。开发的部分染料和粉末具有理想的物理和生物化学性能并加入了运载体成分从而可以在临床和制药时定剂量。

采用含有Stryphnodendron提取物制剂的优点是可通过其抗微生物作用提高伤疤愈合的能力，因使病灶部位的微生物保持在最低水平有利于伤疤愈合。

如上所述从Stryphnodendron树皮提取的染料，在旋转蒸发器上浓缩，流动空气循环干燥，定量分析此树皮中主要的鞣酸和总酚含量(AOAC，FBras，IV，supplement 35，30-32页)。总酚的平均含量在40-50％之间变化。然后按照巴西药典第4版中的说明制备含有一定剂量的药物。

制备活性成分浓度不同的该药物并通过了临床前研究。在伤疤愈合过程中验证了效果最好的浓度。评价的150个病灶中60％结疤全愈。

文献报导说伤疤愈合受到存在的微生物影响，这些微生物大多数为多重抗药性微生物。

采用标准的和从被感染的痂分离得到的微生物种类进行体外微生物试验，证明Stryphnodendron提取物对革兰阳性菌的GIM为62.5/lg/ml，对革兰阴性菌的GIM为250/lg/ml。受试药物所含活性物质的浓度分别是革兰阳性和革兰阴性菌GIM的400倍和100倍。

临床上观察到被感染的痂对活性成分的治疗也有反应，伤疤愈合不需要补充使用抗生素。

在Barbatiman植物性治疗药物临床研究期间，接受所开发的药物治疗的病人经历了治疗前、治疗期间和治疗后的肉眼和显微镜水平的器官检查(胃、肾、肝、脾)，以及实施室检查，如血色素、肾和肝功能生化试验，结果表明此植物性药物不影响生化和血液学参数(见图所示)。

通过对病人施用此植物性治疗药物而获得了治疗作用的结果，植物性治疗药物含3％Stryphnodendron活性成分(下文更详细限定)，对150个组织损伤级别不同的结痂的伤疤愈合作用评价的临床结果公布如下：

-治疗的病损主要是一级(61.2％)和二级(20.1％)病损，此药物使伤疤完全愈合的效力是一级病损58.8％，二级病损35.6％。

-伤疤愈合的进程显示70％以上受治疗的病损在最久二个月内出现伤疤愈合。

-发现该产品对所有级别的病损都有效。

附图的简要说明

为了补充本文描述以获得对本发明特征的更好了解，根据优选的实施方案，提供了一系列附图以示范方式说明本发明，但不是限制本发明。

图1显示用喷雾形式的本发明产品治疗的病人的年龄分布范围；

图2以表格形式显示受治疗病人病损数目的不同；

图3是“受治疗的病损对治疗时间”图，显示伤疤愈合的进展与病损等级相一致；

图4显示与“受治疗的病损和治疗时间”相关的另一个图，表明治疗时间随病损产生的部位而不同；

图5显示接受治疗病损(压迫性溃疡)的分类等级分布；

图6以表格形式显示接受治疗的压迫性溃疡伤疤愈合的效果；

图7是另一表格图，显示与接受治疗病损级别相关的效果；

图8是在30-210天内血管曲张溃疡的治疗效果表格图，以及与分类等级相关的治疗效果。

发明详述

本发明涉及在伤疤愈合、微生物性质及其它医学和兽医学上具有活性作用的植物性治疗药物，用于治疗溃疡(阻塞性或血液供应不佳的溃疡)和感染；其制备工艺和应用，更具体说，本发明公开了一种通过局部给药加速人和动物的病损伤疤愈合及受伤组织新生的植物性治疗制剂，其生物活性来自于称为Stryphnodendron属(样本polyphyllum及adstringens)的Barbatiman植物。这种药物可启动和刺激胶原的正常合成并有效作用于组织康复和再生，对阻塞性病损(压迫性或血管曲张性)中繁殖的，或外科手术引起的病损中的、因烧伤和病损感染而致的溃疡中的多重抗药性细菌具有抗微生物活性。

可按照以下确定的步骤和描述进行Barbatiman的植物性治疗药物中间体的制备并获得以下理化特性：

制备Stryphnodendron染料

用该植物的磨碎的树皮制备染料，在确定体积的工业用酒精与水的混合物(2∶1)中浸泡磨碎的树皮15天，浸泡后过滤混合物，补足体积以达到足够的量。

制备浓缩的Stryphnodendron染料

在旋转浓缩机中真空浓缩染料，最高温度600℃，按设计溶液A、B和C的浓度分别为50％、25％和10％水平。此染料为暗棕红色液体，稀释后呈草莓红色，无特殊气味，口感有点粘。pH为100％：4.0-4.5，总酚含量1.70-1.75g/100mL。

Stryphnodendron的干燥提取物

Stryphnodendron的干燥提取物通过将先前分离的干染料装在开口容器中，在50℃流动空气循环下放置5天让溶剂更好蒸发掉而获得。最终产物为暗棕红色固体，溶于水性运载体时为草莓红色，无特殊气味，口感有点粘。总酚含量：60.0-65.0g/100g。

制备此植物性治疗产品的制剂含有Stryphnodendron树皮染料干燥提取物和辅助物质尼泊金(防腐剂)、甘油(增稠剂)、磷酸二氢钠(pH调节剂)，以下为其配方：

Stryphnodendron干提取物------------含2-5％总酚和1.8-40％鞣酸

甘油---------------------------------10％

尼泊金(对羟苯甲酸甲酯)---------------0.2％

磷酸二氢钠---------------------------适量pH5.5-6.0

纯水---------------------------------100.0ml

该制剂的理想浓度是Stryphnodendron干提取物的含量应为4.4-5.0g/100ml，产生的总酚浓度为60.0-65.0g/100g，即该制剂产品含3％的总酚。

研究的化学成分是proantocianidinas，prorobinetinidinasflavan-3-01和prodelfinidina，Stryphnodendron的消炎活性归因于存在Proantocianidinas。

此局部应用组合物可采用载体有凝胶、喷雾剂、霜剂、软膏和其它可维持伤口一定湿度的物质，以利于此种新的植物性治疗药物发挥其活性。

上述制剂的制备步骤如下：

制备步骤：

1.称取一定量的Stryphnodendron干提取物、甘油、尼泊金，量取相对应的纯水体积；

2.将Stryphnodendron干提取物和甘油放在装有适当搅拌器的罐中；

3.加入部分蒸馏水开始搅拌；

4.将尼泊金加入一份温水中溶解；

5.在搅拌下将溶解的尼泊金加到桶中的混合物里；

6.用足够时间搅匀直到完全溶解；

7.加入剩余体积的水，加热混合物至沸10分钟，然后冷却此混合物；

8.搅拌下加入磷酸二氢钠使pH达到5.5-6.0；

9.上述步骤后加入蒸馏水至总体积以补充因蒸发损失的量。

10.开始过滤，得到适当成分并提供质量控制分析用的样品；

11.取出制品将其装入相应的包装中。

该局部用于伤疤愈合的新的植物性治疗药物也可采用另一种用法，即与物理治疗装置如超声波(US)和低强度激光联用，以加快组织恢复治疗进程。

虽然对本发明已作了详细说明，但应理解这些说明的目的不是将本发明限制于本文所详述的应用和步骤。本发明可有其它应用，可采用各种方式进行这些应用。应理解本文所用专业术语的目的是为了描述而非限制本发明。

Claims (4)

1.一种用于伤疤愈合的局部应用的组合物，该组合物由来自Stryphnodendron树皮提取的染料的干提取物、10％甘油、0.2％尼泊金、适量的磷酸二氢钠和100.0ml的纯水组成，使pH达到5.5-6.0，所述干提取物中含有总酚和鞣酸，所述组合物中总酚含量为2-5％，鞣酸含量为1.8-40％。

2.如权利要求1所述的局部应用组合物，其特征在于，所述总酚是由提取自Stryphnodendron polyphyllum或Stryphnodendron adstringens植物树皮的酚类化合物组成。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物用下列方法制备：

称取一定量的Stryphnodendron干提取物、甘油、尼泊金，量取相对应的纯水体积；

将Stryphnodendron干提取物和甘油放在装有适当搅拌器的罐中；

加入部分蒸馏水开始搅拌；

将尼泊金加入一份温水中溶解；

在搅拌下将溶解的尼泊金加到桶中的混合物里；

用足够时间搅匀直到完全溶解；

加入剩余体积的水，加热混合物至沸10分钟，然后冷却此混合物；

搅拌下加入磷酸二氢钠使pH达到5.5-6.0；和

加入蒸馏水至总体积以补充因蒸发损失的量。

4.如权利要求3所述的局部应用的组合物，其特征在于，该组合物含有的总酚由提取自Stryphnodendron polyphyllum或Stryphnodendronadstringens植物树皮的酚类化合物组成。 

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