WO2012000070A1 - Composição farmacêutica para tratamento de infecções hpv utilizando extratos de barbatimão - Google Patents

Composição farmacêutica para tratamento de infecções hpv utilizando extratos de barbatimão Download PDF

Info

Publication number
WO2012000070A1
WO2012000070A1 PCT/BR2011/000205 BR2011000205W WO2012000070A1 WO 2012000070 A1 WO2012000070 A1 WO 2012000070A1 BR 2011000205 W BR2011000205 W BR 2011000205W WO 2012000070 A1 WO2012000070 A1 WO 2012000070A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extracts
pharmaceutical composition
hpv infections
barbatimon
treatment
Prior art date
Application number
PCT/BR2011/000205
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Manoel Alvaro De Freitas Lins Neto
Luiz Carlos Caetano
Pedro Accioly de Sá Peixoto NETO
Zenaldo Porfírio DA SILVA
Original Assignee
Universidade Federal De Alagoas- Ufal
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universidade Federal De Alagoas- Ufal filed Critical Universidade Federal De Alagoas- Ufal
Priority to PCT/BR2011/000205 priority Critical patent/WO2012000070A1/pt
Priority to US13/807,560 priority patent/US9023405B2/en
Publication of WO2012000070A1 publication Critical patent/WO2012000070A1/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses

Definitions

  • the present invention relates to the application of mainly alcoholic, hydroalcoholic and aqueous extracts of bark, bark, stem and pod bark of Abarema cochliocarpos (Gomes) Barneby & Grimes and / or Stryphnodendron barbatiman, Stryphnodendron coriaceum. Benth., S. diacolor Benth., S. pulcherrimum (Wildd) Hoch., Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville, Stryphnodendron obovatum Benth., Stryphnodendron polyphyllum M.
  • Abarema cochliocarpos (Gomes) Barneby & Grimes and / or Stryphnodendron barbatiman, Stryphnodendron coriaceum. Benth., S. diacolor Benth., S. pulcherrimum (Wildd) Hoch., Str
  • the human papillomavirus is a DNA virus of the Papoviridae family, with over 100 identified types, some responsible for vulgar warts, others for anogenital warts and nasopharyngeal papillomas.
  • HPV does not act alone in oncogenesis; Other factors, such as the host's immune status, nutritional status, smoking and alcohol use all work together.
  • HPV reaches the basal cell nucleus through epithelial microrelations, and the first signs of viral genome transcription appear about 4 weeks after infection. The incubation period varies from 3 to 18 months and the persistence of lesions can be assessed in weeks, months or years.
  • As the cell differentiates there is increased antigen production and viral replication in the surface cells, so that the amount of DNA increases toward the surface of the cell. epithelium. During this process, both genome proteins and capsid-related structural proteins accumulate.
  • HPV infection is characterized by apparent, vegetative, vascularized, sessile lesions with multiple papillary projections called acuminate condyloma. Most of these lesions are related to HPV 6 (65%) and 11 (20%), the rest with less common types. They most commonly occur in patients between 16 and 25 years. HPV vaginal lesions may coexist with vulvar warts in 30% of patients and over 85% of them will have cervical infection.
  • Abarema cochliocarpos popularly known as barbatim ⁇ o
  • Treatments include the use of cytotoxic drugs, surgical methods, and uses of immunomodulatory therapies can be performed using different drugs as follows: a) Drying acids: bichloroacetic or trichloroacetic are effective in moist mucous membrane lesions due to elevated aqueous content of these tissues. These acids should be applied directly to the warts, preferably with skin magnification. It has high local recurrence rates around 30%. (b) Podophyllin whose biological effect is due to the antimitotic effect. Has toxic effects systemic: neurological or hepatorenal toxicity and bone marrow suppression. It is contraindicated in pregnancy. Application should be restricted to the keratinized skin area.
  • the success rate is 20-40% in six months, and through c) Focal physical destruction in which electrocautery, cryosurgery or laser ablation can be employed. Indicated in cases of relapsing skin lesions where thick keratin prevents the penetration of topical medication. Topical therapy may initially treat condylomatosis; however, the failure rate in primary therapy with secondary recurrence is approximately 50%. Subsequent treatments depend on the appearance of the lesion. Coarse, relapsing, and keratinized warts are best treated with methods of physical destruction. The extensive and diffuse picture of warts growing between each treatment session responds best to interferon treatment and the use of continuous topical therapy.
  • Interferons ⁇ (leukocyte derivative), ⁇ (fibroblast derivative) and ⁇ (lymphocyte derivative) are used to treat viral lesions inducing antiviral, antiproliferative and immunostimulant effects. Intralesional interferon exacerbates the topical podophyllin response (Douglas et al, 1990). Systemic interferon provides complementary benefits in relapsing juvenile laryngeal papillomatosis (Leventhal et al., 1991) and in the treatment of laryngeal disease in older patients.
  • 5-Fluorouracil indicated as an adjunct in the treatment of antimetabolic vaginal condylomatosis, inhibits the production of ribonucleic acid and DNA.
  • Treatment should be individualized to avoid chronic vaginal ulcerations. Keratinized and flat vaginal lesions do not respond to treatment, as do classic condyloma.
  • the use of 5-FU has been discontinued due to the high rate of complications including chronic ulcerations, chemical vaginitis, adenosis, and vulvar vestibulitis.
  • Administration may be topical, intralesional and parenteral, results are varied with generally dose-dependent responses. The biggest limitations are the high cost and side effects.
  • Imiquimode creams act as an immune response modifier inducing multiple interferon- ⁇ subtypes and some cytokines, including Tumor Necrosis Factor (TNF) and interleukins.
  • TNF Tumor Necrosis Factor
  • This chain stimulates killer cells, T cells, polymorphones and macrophages, increasing antitumor activity. It is indicated for the treatment of acuminated condyloma of the external genitalia and perianals and can be used in pregnancy (class B). Its use in occluded mucous membrane, as vagina na and cervix, is outlawed due to the greater absorption of these mucous membranes. Common side effects with interferon are erythema, itching, peeling and edema. The cure rate reaches 50-56% and rarely - in less than 5% of patients - can occur headache, myalgia and symptoms simulating flu.
  • the use of Barbatim ⁇ o ointment in the treatment of HPV has the following advantages: absence of side effects, ease of self-application, unrestricted use for children and pregnant women, low local recurrence rate, around 11%, low cost, mainly because the raw material is easily found in the national flora, besides the advantage that it can be used internally, ie in the rectal, vaginal, penile and buccal mucosa without offering risks of Side effects.
  • Ointment Preparation The ointment is prepared by heating 0.4L vegetable oil (canola) and edible paraffin (70g) in a water bath at 60 ° C for 30min. In Then, the concentrated volume of the alcoholic extract of barbatim ⁇ o (0, 1 L) obtained in item 1 is added slowly, while the mixture is homogenized manually with wooden spoon, making uniform circular movements for 10min.
  • the container is then removed from the water bath and homogenization continued for a further 15min.
  • the ready-to-use ointment is then transferred to 5 100 mL plastic pots and should contain from 20% to 30% (w / w) of the active ingredient.
  • Barbatim ⁇ o extracts were obtained from the bark and red bark of the stem and bark of mature pods, containing at least 20% (w / w) of tannins. Bark and bark of healthy plants of Abarema cochliocarpos were collected in two locations: Arboretum of Campus A.C. Sim ⁇ es, UFAL, Maceió - AL and plants of the Atlantic Forest of Coruripe - AL. The husks of mature reddish-colored pods also contain the active ingredients studied. A specimen of the Abarema cochliocarpos plant is found in the Herbarium of the Institute of Environment of the State of Alagoas (I-MA-AL) under the registration mac 8830.
  • I-MA-AL Institute of Environment of the State of Alagoas
  • the biological activities of the hydrated alcoholic extract (92.8 ° GL) of the bark and bark were carried out on Artemia salina larvae and microbiological against seven bacterial species, four Candida species (yeast fungi).
  • the assays were performed at the IQB / UFAL Natural Products Chemistry Laboratory and at the ICBS / UFAL Applied Microbiology Laboratory.
  • Microbiological tests were performed with alcoholic extract of bark and bark of the barbatim ⁇ o stem at a concentration of 100 mg.mL "1 suspended in methanol: water (1: 2) (v / v) solution.
  • the diffusion method on modified Kirby and Bauer Agar was used. The microorganisms were picked into tubes containing 2 mL of BHI liquid medium and incubated at 37 ° C for 24h. The presence of turbidity in the medium is indicative of bacterial growth.
  • Ethanolic extracts resuspended in MeOH: H 2 O (1: 2) were added (40 pL of ethanolic extract at The plates were incubated in an oven at 37 ° C for a period of 24h.
  • the halos were measured with halometers and halos> 10.0 mm were considered as an indicator of antimicrobial activity. All tests were performed in duplicate. and the results determined by the average inhibition, according to LIMA, et al., 2002.
  • the evaluation of the antimicrobial activity of the extracts was carried out in vitro using the following microorganisms: Bacteria - Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Alcaligenes faecalis Streptococcus pyogenes and Salmonella enteriditis, and the fungi Candedida albicides. , pertainingida tropicalis, pertainingida krusei and admiida guilliermondi, all from the Micotheque of the Applied Microbiology Laboratory - L @ MA, ICBS-UFAL.
  • Hydroethanolic extracts were active against all microorganisms tested. In some cases, obtaining better results than the antibiotic tested, such as against strains of P. aeruginosa, BAC 57, BAC 101, BAC 104, BAC 105 and BAC 125.
  • the evaluation of the toxic activity of the alcoholic extract (92.8 ° GL) was carried out in saline medium with freshly hatched Artemia saline Leach microlessels at concentrations of 10, 100 and 200pg.mL "1 .
  • the hydroethanolic extract of barbatim ⁇ o bark and bark had as DI_5o (Lethal Dose) the application of 75 ⁇ _, making a dosage of 250 mg. Kg "1. Decreased metabolism and tachycardia were observed in the experimental animals.
  • mice used in the experiments were from the CCBi / UFAL vivarium and the CCBS / UFS vivarium.
  • New Zealand albino rabbits came from farms in the municipality of Maceió. The animals were treated against parasites (worms) and acclimatized in the CCBi / UFAL vivarium.
  • the primary skin irritation tests were performed according to BRITO (1994) and consisted of the application of the drug to the intact skin of the animals.
  • Three adult New Zealand albino rabbits were used.
  • the animals were housed in individual cages at room temperature, in periods of 12h light and dark, with PURINA feed and water ad libitum.
  • the animals were shaved 24 hours before application, and four application sites were demarcated, two of them subjected to abrasion.
  • Each animal had its own control.
  • 500 l of the crude ethanolic bark extract (0.1 g.mL " 1 ) was applied in a single dose to the gauze and then placed on the animals' skin.
  • the gauze pad was fixed with hypoallergenic adhesive.
  • the animals were placed in separate cages on drug exposure for four hours. At the end of the exposure period, the analyzed region was washed with water. Observations were made for 1 hour, 24 hours and 72 hours after the removal of the compresses. At the drug application site, it was sought to check for the formation of erythema, bedsores or edema, according to the system employed by the Federal Hazardous Substances of the United States of America. A small redness, without edema, was observed during the first 60 minutes of the experiment on the scarified skin, which disappeared before completing the 24h reading.
  • the acute eye irritation test aimed to analyze reversible changes in the eyes of rabbits as a result of the instillation of the hydroethanolic extract of the barbatim ⁇ o barks.
  • the hydroethanolic extract of the barbatim ⁇ o was resuspended in water at a concentration of 0.1 g.mL "1 , and 100 ⁇ of the extract was instilled into the conjunctival pocket of the animal's right eye, after gently lifting the lower eyelid of the eyeball. were not washed during the first 24h following drug instillation 100 ⁇ _ of distilled water was applied to each animal's left eye, serving as a control.In the fourth animal 100% of 1% HCI was instilled into the right eye, serving the eye. left as a control.
  • the eyes were examined 24, 48, and 72 h after instillation with the aid of an ophthalmoscope. Macroscopic lesions on the iris, cornea, and conjunctiva were observed and compared with the control eye. The quotation of eye injuries was made according to the illustrated guide to eye irritation (BRITO, 1994). According to the in vivo tests, we can see that there was no perceptual reaction in the cornea, iris and conjunctiva after instillation of 100 ⁇ _ of 20% barbatimon extract compared to the positive control with 1% HCI and negative control with water. distilled. In pharmacological tests no eye changes or primary skin irritation were observed.
  • the animals received local anesthesia with lidocaine hydrochloride and inhaled with sulfuric ether. Four incisions were made in the skin of each animal until reaching the subcutaneous, maintaining a distance of approximately 3 cm from each cut.
  • Control group A received treatment during the 14 days of 0.9% NaCl saline experiment.
  • Group B was treated with rifamycin and group C received the ethanolic extract of the barbatim ⁇ o houses, resuspended in water (0.1 g / ml).
  • the cuts were open and the animals received treatment from the day of the incision until the 14th day of the experiment.
  • parts of 1/3 of the animals and part of the liver were removed for histological analysis, and the animals were then sacrificed.
  • the liver parts and part were removed from the other animals and taken for histological analysis.
  • Macroscopic analyzes were performed for the degree of scar retention and microscopic for the degree of epithelialization, intensity of inflammatory reaction, type of inflammatory reaction and presence of neovascularization according to ARAUJO et al. (1998).
  • the barbatim ⁇ o presented excellent healing activity, verified mainly in the first 72h, being better than those treated with rifamycin and saline solution. Barbatim ⁇ o favored the disappearance of purulent secretion, favored hyperemia and the appearance of granulation tissue.
  • mice Twenty-eight healthy adult mice were used in the abortive activity test, twenty-one females and seven males. The animals were mated for 96 h, one male and three females. Males were discarded and females were separated into 3 groups: group 1 had eight animals, group 2 eight animals and group 3 five animals.
  • Group 1 received the hot aqueous extract of the barks at a concentration of 0.5% for a period of 4 days, alternating 12 h water and 12 h extract after dehulling.
  • Group 2 received the extract 5 day until the 8th day of the experiment, alternating 12 h and 12 h of water extract.
  • Group 3 was the control, receiving only water during the experiment.
  • the animals were weighed during the experiment and, on the 20th day after desalting, the pregnant women were anesthetized with sulfuric ether and placed on the operating table in the supine position to facilitate the surgical incision.
  • a median infra-umbilical longitudinal laparotomy was performed. After the incision, with the aid of scissors and dissection tweezers, the skin and muscle of the abdominal wall were raised, and later the peritoneum opening, allowing visualization of the entire abdominal cavity. Thus, the counting of uterine implants and resorption was performed.
  • the gel or ointment containing the barbatim ⁇ o extract was tested in the eyeball of experimental animals following the method of Draize JH (1956) The skin game. International Record of Medicine and General Practice Clinics, 169 (1), p.37-39. demonstrating zero irritation index, which corresponds to non-irritating product. The antiedematous action was evidenced when the carrageenan-induced rat paw model was used, demonstrating an effect similar to dexamethasone, without its drawbacks.
  • the ointment containing 20% (w / w) free barbatim ⁇ o hydroethanolic extract was applied topically twice daily for 60 days.
  • the patients were analyzed biweekly (total of 2 visits per research subject) for macroscopic evaluation and the possible therapeutic effect on perianal, vulvar and penile lesions.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

A presente invenção refere-se à aplicação de extratos, principalmente alcoólicos, hidroalcoólicos e aquosos das cascas, entrecascas, dos caules e das cascas das vagens de Abarema cochliocarpos (Gomes) Barneby & Grimes e/ou Stryphnodendron barbatiman, Stryphnodendron coriaceum Benth., S. diacolor Benth., S. pulcherrimum (Wildd) Hoch., Stryphnodendron adstríngens (Mart.) Coville, Stryphnodendron obovatum Benth., Stryphnodendron polyphyllum M. e Pithecellobium avaremotemo Mart., todas conhecidas com nome popular de barbatimão utilizado para tratamento (como adjuvante) das infecções relacionados aos Papilomavírus humano (HPV) e para profilaxia do câncer cervical.

Description

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO"
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se à aplicação de ex- tratos, principalmente alcoólicos, hidroalcoólicos e aquosos das cascas, entrecascas, dos caules e das cascas das vagens de Abarema cochliocarpos (Gomes) Barneby & Grimes e/ou Stryphnodendron barbatiman, Stryphnodendron coria- ceum Benth., S. diacolor Benth., S. pulcherrimum (Wildd) Hoch., Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville, Stryphnodendron obovatum Benth., Stryphnodendron polyphyllum M. e Pithecellobium avaremotemo Mart., todas conhecidas com nome popular de barbatimão, isoladamente ou em mistura de diferentes proporções destes produtos e/ou junto o(s) extrato(s) de outras fontes naturais e/ou sintéticas, usado(s) para compor preparação de composições farmacêuticas, em particular nas apresentações para uso em áreas genitais, por vias vaginal, vulvar, perianal, canal anal, peniana, em forma de sabões, tinturas, emulsões A/O e O/A (pomadas, cremes e géis), aerossóis, pastas, óvulos, supositórios e similares, utilizadas para tratamento (como adjuvante) das infecções relacionados aos Papilomavírus humano (HPV) e para profilaxia do câncer cervical, compreendendo formulações contendo os mencionados extratos, frações desses materiais e/ou constituinte(s) químico(s), usados como princípios ativos e/ou excipiente farmacológico.
O papilomavírus humano é um vírus de DNA da família Papoviridae, com mais de 100 tipos identificados, alguns responsáveis por verrugas vulgares, outros por verrugas anogenitais e papilomas da nasofaringe. O HPV não atua isoladamente na oncogênese; outros fatores, tais como: estado imunológico do hos- pedeiro, estado nutricional, uso de fumo e álcool atuam em conjunto. O HPV atinge o núcleo das células basais através de microrrelações do epitélio, e os primeiros sinais de transcrição do genoma virótico aparecem cerca de 4 semanas após a infecção. O período de incubação varia de 3 a 18 meses e a persistência das lesões pode ser avaliada em semanas, meses ou anos. À medida que a célula se diferencia, há maior produção de antígenos e replicação virótica nas células superficiais, de modo que a quantidade de DNA aumenta em direção à superfície do epitélio. Durante este processo, há acúmulo tanto de proteínas do genoma quanto de proteínas estruturais relacionadas ao capsídeo.
A infecção pelo HPV se caracteriza por lesões aparentes, vegetativas, vas- cularizadas, sésseis e com múltiplas projeções papilares, denominadas condiloma acuminado. A maioria destas lesões está relacionada com o HPV 6 (65%) e o 11 (20%), o restante com tipos menos comuns. Ocorrem, mais comumente, em pacientes entre 16 e 25 anos. As lesões vaginais por HPV podem coexistir com verrugas vulvares em 30% das pacientes e mais de 85% delas terão infecção cervical.
Sobre o Barbatimão
Abarema cochliocarpos, conhecida popularmente como barbatimão, é uma espécie endémica do Brasil pertencente à família Mimosaceae. Trata-se de uma árvore frondosa de pequeno a médio porte, possuindo folhas compostas, inflores- cência em glomérulos globosos, flores ligeiramente amareladas, frutos do tipo legume contorcido e sementes brancas acinzentadas, amplamente utilizada in natura no Brasil como planta medicinal (Santos et al., 2007). Esta planta é denominada popularmente de barbatimão, babatimão, bordão-de-velho (Braga, 1976: p.89). A etnofarmacologia revela a utilização no combate de processos infecciosos da pele, como cicatrizante, no combate de leucorréias e de verrugas (Corrêa, 1984; p.199, 200).
Vários trabalhos encontrados na literatura descrevem a constituição química dos taninos encontrados em cascas do barbatimão. As protobinetinidinas (Mello & Nahrstetd, 1996), a proantocianidina dimérica presente no extrato solúvel em acetona (Mello e cols., 1999) que apresentou atividade antiinflamatória (Lima e cols., 1998).
Estado da Técnica
Os tratamentos incluem o uso de drogas citotó- xicas, métodos cirúrgicos e usos de terapias imunomoduladoras podem ser realizados utilizando diferentes drogas apresentadas a seguir: a) Ácidos desseca n- tes: bicloroacético ou tricloroacético são efetivos em lesões úmidas de membranas mucosas devido ao elevado conteúdo aquoso destes tecidos. Estes ácidos devem ser aplicados diretamente sobre as verrugas, preferencialmente com mag- nificação da pele. Apresenta altos índices de recidiva local em torno de 30%. b) Podofilina cujo efeito biológico deve-se ao efeito antimitótico. Tem efeitos tóxicos sistémicos: toxidade neurológica ou hepatorrenal e supressão da medula óssea. É contra-indicado na gravidez. A aplicação deve ser restrita à área de pele querati- nizada. A taxa de sucesso é de 20-40% em seis meses, e através da c) Destruição física focal na qual pode ser empregado o eletrocautério, criocirurgia ou a- blação a laser. Indicada nos casos de lesões cutâneas renitentes em que a quera- tina espessa impede a penetração da medicação tópica. A terapia tópica poderá inicialmente tratar a condilomatose; entretanto, a taxa de falha na terapia primária com recorrência secundária é de aproximadamente 50%. Os tratamentos subsequentes dependem da aparência da lesão. As verrugas grosseiras, recidivantes e queratinizadas são melhores tratadas com métodos de destruição física. O quadro extenso e difuso de verrugas que crescem entre cada sessão de tratamento, responde melhor ao tratamento com interferon e uso de terapia tópica contínua. Os interferons α (derivado de leucócito), β (derivado de fibroblasto) e γ (derivado de linfócito) são utilizados no tratamento de lesões virais induzindo efeitos antivirais, antiproliferativos e imunoestimulantes. O interferon intralesional exacerba a resposta podofilina tópica (Douglas et ai, 1990). O interferon sistémico fornece benefícios complementares na papilomatose laríngea juvenil recidivante (Leventhal et al., 1991) e no tratamento de doença da laringe em pacientes mais velhos.
O 5-fluorouracil (5-FU), indicado como coadjuvante no tratamento de condilomatose vaginal, antimetabólico, inibe a produção de ácido ribonucléico e DNA. O tratamento deve ser individualizado para evitar ulcerações vaginais crónicas. Lesões vaginais queratinizadas e planas não respondem o tratamento, assim como os condilomas clássicos. O uso de 5-FU tem sido descontinuado pela alta taxa de complicações, incluindo ulcerações crónicas, vaginite química, adenose e vestibulite vulvar. A administração pode ser tópica, intralesional e parenteral, os resultados são variados com respostas geralmente dose-dependentes. As maiores limitações são o alto custo e efeitos colaterais. Por outro lado, Imiquimode cremes atuam como modificador da resposta imune induzindo múltiplos subtipos de interferon-α e de algumas citoquinas, entre elas o Fator de Necrose Tumoral (TNF) e interleucinas. Esta cadeia estimula células killer, células T, polimorfonu- cleares e macrófagos, aumentando atividade antitumor. É indicado no tratamento de condilomas acuminados da genitália externa e perianais, podendo ser utilizado na gravidez (classe B). Sua utilização em membrana mucosa ocluída, como vagi- na e cérvix, é proscrita devido à maior absorvição destas mucosas. Efeitos colaterais comuns com interferon são eritema, prurido, descamação e edema. A taxa de cura atinge de 50-56% e raramente - em menos de 5% das pacientes - pode o- correr cefaléia, mialgias e sintomas simulando gripe.
Sumário da Invenção
Pelo exposto, constata-se a imediata necessidade de disponibilidade de novas drogas para tratamentos de infecções pelo HPV. Para tanto, são apresentados através desse instrumento de propriedade industrial os produtos fitoterápicos que incluem em sua formulação os princípios ativos do Abarema cochliocarpos (Gomes) Barneby & Grimes e/ou outras espécies identificadas como barbatimão. Os produtos desenvolvidos foram avaliados em testes pré-clínicos e clínicos, cujos resultados terapêuticos representam uma nova alternativa para tratamento de infecções promovidos pelo HPV e para a profilaxia do câncer cervical.
Diferente das soluções presentes no estado da técnica o uso da pomada de Barbatimão no tratamento do HPV, traz as seguintes vantagens: ausência de efeitos colaterais, facilidade de auto-aplicação, uso sem restrições para crianças e mulheres gestantes, baixo índice de recidiva local, em torno de 11%, baixo custo, devido principalmente a matéria prima ser facilmente encontrada na flora nacio- nal, além da vantagem que a mesma pode ser usada internamente, ou seja, na mucosa retal, vaginal, peniana e bucal sem oferecer riscos de efeitos colaterais.
Descrição Detalhada da Patente
1. Obtenção dos extratos: (a) Cascas de barbatimão (Abarema cochliocarpos) secas e moídas em moinho elétrico (1 Kg) são extraídas através de maceração com álcool etílico (92,8° GL) (3L x 2) por 72h, (b) e após filtração com papel (Watman no. 2) foi concentrado em evaporador rotatório a 60°C até o volume de 0,1 L. São obtidos 0,4 Kg do extrato seco, ou seja, rendimento de 35 a 45% p/p em relação ao peso seco das cascas e entrecascas. Já o extrato aquoso forneceu um rendimento de 33% (p/p) enquanto que o extrato hidroalcoólico (9:1) forneceu rendimento de 38% (p/p) com procedimentos de preparação idênticos ao do extrato etanólico hidratado (92,8° GL).
2. Preparação da Pomada: A pomada é preparada aquecendo-se óleo vegetal (canola) 0,4L e parafina comestível (70g) em banho-maria a 60 °C, por 30min. Em seguida, o volume concentrado do extrato alcoólico do barbatimão (0, 1 L) obtido no item 1 , é adicionado lentamente, enquanto a mistura é homogeneizada manualmente com colher de madeira, fazendo-se movimentos circulares uniformes por 10min.
3. O recipiente é então retirado do banho-maria e a homogeneização continuada por mais 15min. A pomada obtida, pronta para uso, é então transferida para 05 potes plásticos de 100 mL e deve conter de 20% a 30% (p/p) do principio ativo.
Estudos Fitoquímicos
Os estudos fitoquímicos, toxicológicos, farmacológicos e clínicos com os extratos alcoólicos e aquosos hidroalcoólicos do barbatimão são descritos a seguir.
Coleta do material botânico
Os extratos de barbatimão foram obtidos a partir das cascas e entrecascas vermelhadas do caule e da casca das vagens maduras, contendo no mínimo 20% (p/p) de taninos. Coletaram-se cascas e entrecascas de caules de plantas sadias de Abarema cochliocarpos em duas localidades: Arboreto do Campus A.C. Simões, UFAL, Maceió - AL e de plantas da Mata Atlântica da região de Coruripe - AL. As cascas das vagens maduras de coloração avermelhada também contem os princípios ativos estudados. Um exemplar da planta Abarema cochliocarpos encontra-se no herbário do Instituto do Meio Ambiente do Estado de Alagoas (I- MA-AL) sob o registro mac 8830.
Testes Biológicos
As avaliações das atividades biológicas do extrato alcoólico hidratado (92,8° GL) das cascas e entrecascas foram realizados sobre larvas de Artemia salina, e microbiológico frente a sete espécies de bactérias, 4 espécies de Cândida (fungos leveduriformes). Os ensaios foram realizados no Laboratório de Química de Produtos Naturais do IQB/UFAL e no Laboratório de Microbiologia Aplicada do ICBS/UFAL.
Testes Microbiológicos
Os testes microbiológicos foram realizados com o extrato alcoólico de cascas e entrecascas do caule de barbatimão na concentração de 100 mg.mL"1 res- suspendidos em solução de metanol:água (1 :2) (v/v). Na determinação da atividade antimicrobiana, foi utilizado o método de difusão em Agar de Kirby e Bauer modificado (MOURA, 1977). Os microrganismos foram repicados para tubos contendo 2 mL do meio líquido BHI e incubados em estufa a 37°C por 24h. A presença de turvação no meio é o indicativo de cresci- mento bacteriano. Foi então adicionado, 1 mL do BHI (aproximadamente 109 mi- crorganismos/mL) em tubos contendo 12 mL de agar Mueller Hinton a temperatura de 45°C e vertido em placas contendo uma base de Agar Bacteriológico com a formação de poços (0,7cm). Fez-se controle para cada microrganismo com anti- microbiano padrão, cloranfenicol a (30 pg mL"1), tetraciclina (30 pg.mL"1), itraco- nazol (1 1 ,6 μg/ mL"1), cetoconazol (1 ,6 μg mL"1) fluconazol (700 μg mL"1) e nista- tina (350μg/MI). Os extratos etanólicos ressuspendidos em MeOH:H2O (1 :2) foram adicionados (40 pL do extrato etanólico a cada um dos respectivos poços. As placas foram incubadas em estufa a 37°C por um período de 24h. Os halos foram medidos com halômetros, sendo considerados halos > 10,0 mm como indicador de atividade antimicrobiana. Todos os testes foram realizados em duplicata e os resultados determinados pela média de inibição, de acordo com LIMA, et al., 2002.
Os estudos de avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos foram realizados in vitro, utilizando os seguintes microrganismos: Bactérias - Staphylo- coccus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Alcaligenes faecalis Streptococcus pyogenes e Salmonella enteriditis, e os fungos leveduriformes - Cândida albicans, Cândida tropicalis, Cândida krusei e Cândida guilliermondi, todos oriundos da micoteca do Laboratório de Microbiologia Aplicada - L@MA, ICBS-UFAL.
Os extratos hidroetanólicos foram ativos contra todos os microrganismos experimentados. Em alguns casos, obtendo melhor resultado do que o antibiótico testado, como, por exemplo, frente a cepas de P. aeruginosa, BAC 57, BAC 101 , BAC 104, BAC 105 e BAC 125.
Das 12 cepas de S. aureus testadas com o extrato hidroetanólico, 100% delas apresentaram resultados satisfatórios, principalmente frente a cepas mul- tirresistentes BAC 95 e BAC 97.
Já frente aos fungos leveduriformes do género Cândida as cepas das espécies FUN 05 de C. albicans, com 24 mm de halo; FUN 36 de C. tropicalis, com 18 mm de halo; FUN 1 1 de C. krusei, com 24 mm de halo; e FUN 46 de C. guilli- ermondi, com halo 23 mm apresentaram os melhores resultados.
Todos os extratos testados apresentaram resultados frente a P. aerugino- sa, S. aureus e fungos do género Cândida. Os resultados obtidos demonstraram o amplo espectro antimicrobiano das cascas, vagens e sementes de A. cochliocar- pos contra microrganismos de interesse clínico.
Testes toxicológicos
Os testes toxicológicos foram realizados com microlarvas de Artemia salina e camundongos da espécie Mus musculus.
A avaliação da atividade tóxica do extrato alcoólico (92,8° GL) foi realizada em meio salino com microlarvas recém eclodidas de Artemia salina Leach, nas concentrações de 10, 100 e 200pg.mL"1.
Para realização dos bioensaios utilizou-se a metodologia de Santos Pimenta LP, Pinto GB, Takahashi JA, e Silva LG, Boaventura MA. Biological screening of Annonaceous Brazilian Medicinal Plants using Artemia salina (brine shrimp test). Phytomedicine 10 (2-3) 209 - 212. com adaptações. Cada solução foi avaliada nos testes tóxicos em triplicatas, utilizando 10 larvas de A. salina. Essa experiência foi mantida a temperatura ambiente (26 - 28°C) sob iluminação artificial por um período de 24 horas consecutivas. Um teste controle foi preparado usando-se um volume de 5mL de solução salina com 10 larvas de A. salina, sob as mesmas condições experimentais dos testes descritos anteriormente. Os resultados desses bioensaios mostraram que o extrato não apresentou toxicidade nas concentrações até 100 pg.mL"1.
Na determinação da CL5o (Concentração Letal) foram utilizados 16 camundongos da espécie Mus musculus, adultos e sadios, machos e fêmeas. Os animais foram pesados em balança semi-analítica (0,001 g) e divididos em 4 grupos. No grupo 1 foi inoculado intraperitonialmente 70pL do extrato hidroetanólico de barbatimão, ressuspendido em água a 0, 1 g.mL"1. No 2o grupo foi inoculado 75pL e no grupo 3, 80pL. No grupo 4, foi inoculado intra- peritonialmente 80pL de água destilada, sendo dessa forma o grupo controle. Foi considerada a dose letal, a concentração que matou 50% dos animais inoculados em 96h. Nos animais mortos foi executada uma autópsia para retirada do fígado e do baço para pesagem em balança semi-analítica. Os vivos restantes receberam anestesia inalatória por éter sulfúrico e segundo procedimento acima descrito, foi realizado a exérese do fígado e do baço para pesagem em balança semi- analítica.
O extrato hidroetanólico das cascas e entrecascas de barbatimão, teve como DI_5o (Dose Letal) a aplicação de 75μΙ_, perfazendo uma dosagem de 250 mg. Kg"1. Foi observada a diminuição do metabolismo e taquicardia nos animais experimentados.
Testes farmacológicos
As avaliações farmacológicas, pré-clinicas e clínicas dos extratos hidroeta- nólicos de barbatimão foram realizados in vitro e in vivo, para as seguintes ativi- dades: irritação primária da pele, irritação ocular aguda, cicatrização e abortiva.
Os camundongos, machos e fêmeas da espécie Mus musculus, utilizados nos experimentos foram oriundos do biotério do CCBi/UFAL e do biotério da CCBS/UFS. Os coelhos albinos neozelandeses foram oriundos de criadouros do município de Maceió. Os animais foram tratados contra parasitas (vermifugados) e aclimatados no biotério do CCBi/UFAL.
Os testes de irritação primária da pele foram realizados de acordo com BRITO (1994) e consistiram na aplicação da droga sobre a pele íntegra dos animais. Foram utilizados três coelhos albinos neozelandeses adultos. Os animais foram acomodados em gaiolas individuais a temperatura ambiente, em períodos de claro e escuro de 12h, com ração PURINA e água ad libitum. Os animais foram depilados 24 horas antes da aplicação, sendo demarcados quatro sítios de aplicação, dois deles submetidos à abrasão. Cada animal possuía seu próprio controle. Foram aplicados 500 L do extrato bruto etanólico das cascas (0,1g.mL" 1), numa dose única, sobre a gaze e depois colocadas na pele dos animais. A compressa de gaze foi fixada com esparadrapo hipoalérgico.
Os animais foram colocados em gaiolas separadas em exposição à droga por quatro horas. Ao final do período de exposição, a região analisada foi lavada com água. Foram feitas observações por 1 hora, 24 horas e 72 horas após a retirada das compressas. No local de aplicação da droga, buscou-se verificar se houve a formação de eritema, escaras ou edemas, de acordo com o sistema empregado pelo Federal Hazardous Substances dos Estados Unidos da América. Foi observada uma pequena vermelhidão, sem edema, durante os primeiros 60 minutos de experimento na pele que foi escarificada, tendo o mesmo desaparecido antes de completar a leitura de 24h.
De acordo com BRITO (1994), para obtenção do grau de irritação da pele, provocado pela substância, deve-se somar os subtotais e dividir por 4, que equivale a eritema de pele íntegra e escarificada e eritema e edema de pele íntegra e escarificada, obtendo-se assim o grau de irritabilidade cutânea da substância. Foi obtido o grau de 0,25, que classifica a substância (0-1 ) como uma substância não-irritante.
O teste de irritação ocular aguda visou analisar alterações reversíveis sobre os olhos de coelhos como consequência da instilação do extrato hidroetanólico das cascas de barbatimão.
Quatro coelhos albinos neozelandeses adultos e sadios foram os animais escolhidos para o teste. Os animais foram acomodados em gaiolas individuais a temperatura ambiente, em períodos de claro e escuro de 12h, com ração PURINA e água ad libitum. Os dois olhos de cada animal foram examinados 24h antes da aplicação da substância teste, evitando-se assim trabalhar com animais com lesão ou defeito ocular pré-existente.
O extrato hidroetanólico do barbatimão foi ressuspendido em água na concentração de 0, 1 g.mL"1 , sendo instilado 100μί do extrato dentro da bolsa conjuntival do olho direito do animal, após levantar delicadamente a pálpebra inferior do globo ocular. Os olhos dos animais não foram lavados durante as primeiras 24h que se seguiram à instilação da droga. No olho esquerdo de cada animal foi aplicado 100μΙ_ de água destilada, servindo com controle. No quarto animal foi instilado 100μΙ_ de HCI a 1 % no olho direito, servindo o olho esquerdo como controle.
Os olhos foram examinados após 24, 48 e 72 h após a instilação, com a ajuda de um oftalmoscópio, observando-se lesões macroscópicas na íris, córnea e conjuntiva e comparando-as com o olho controle. A cotação das lesões oculares foi feita de acordo com o guia ilustrado de irritação ocular (BRITO, 1994). De acordo com os testes realizados in vivo, podemos constatar que não houve reação perceptiva na córnea, íris e conjuntiva após instilação de 100 μΙ_ de extrato de barbatimão a 20%, em comparação com o controle positivo com HCI 1 % e controle negativo com água destilada. Nos testes farmacológicos não foram observadas alterações oculares e nem irritação primária da pele.
No teste de cicatrização foram utilizados 36 coelhos albinos neozelandeses adultos e sadios, pesando entre 1250 e 1700 Kg. Os animais foram depilados e acomodados em gaiolas individuais a temperatura ambiente, em períodos de claro e escuro de 12h, com ração PURINA e água ad libitum.
Os animais receberam anestesia local com cloridrato de lidocaína e inalatória com éter sulfúrico. Foram feitas quatro incisões na pele de cada animal até atingir o subcutâneo, mantendo uma distância de aproximadamente 3 cm de cada corte.
Os animais foram divididos em 3 grupos: O grupo A, controle, recebeu tratamento durante os 14 dias de experimento de solução salina de NaCI a 0,9%. O grupo B foi tratado com rifamicina e o grupo C recebeu o extrato etanólico das casas de barbatimão, ressuspendidos em água (0,1g/ml_). Os cortes ficaram abertos e os animais receberam o tratamento desde o dia da incisão até o 14° dia de experimento. No 7° de experimento, foi feita a retirada das peças de 1/3 dos animais e parte do fígado para análise histológica, sendo os animais depois sacrificados. No 14° dia de experimento, depois de sacrificados, as peças e parte do fígado foram retiradas dos demais animais e levados para análise histológica.
Foram feitas análises macroscópicas quanto ao grau de retenção cicatricial e microscópica quanto ao grau de epitelização, intensidade da reação inflamatória, tipo de reação inflamatória e presença de neovascularização de acordo com ARAUJO et al. (1998).
Pode-se constatar que as lesões realizadas cirurgicamente e tratadas diariamente com extrato de barbatimão, rifamicina e salina estéril, apresentaram um perfil diferente no processo de cura. Dessa forma, notamos que o extrato de bar- batimão propiciou uma melhor ação até as 72 h de tratamento, onde não foi observada a presença de secreção purulenta. O mesmo não aconteceu com os tes- tes usando rifamicina e solução salina, onde foi evidenciada a presença de secreção purulenta.
O barbatimão apresentou ótima atividade cicatrizante, verificada principalmente nas primeiras 72h, sendo melhor que as tratadas com rifamicina e solução salina. O barbatimão favoreceu o desaparecimento da secreção purulenta, favoreceu a hiperemia e aparecimento de tecido de granulação.
No teste de atividade abortiva foram utilizados vinte e oito camundongos adultos e sadios, sendo vinte e uma fêmeas e sete machos. Os animais foram acasalados por um período de 96 h, um macho e três fêmeas. Os machos foram desprezados e as fêmeas foram separadas em 3 grupos: no grupo 1 ficaram oito animais, no grupo 2 oito animais e no grupo 3 cinco animais. O grupo 1 recebeu o extrato aquoso a quente das cascas na concentração de 0,5% por um período de 4 dias, alternando 12 h água e 12 h extrato, após desacasalamento. O grupo 2, recebeu o extrato do 5o dia até o 8o dia do experimento, alternando 12 h de água e 12 h de extrato. O grupo 3 foi o controle, recebendo apenas água durante o experimento.
Os animais foram pesados durante o experimento e, no 20° dia após desacasalamento, as grávidas foram anestesiadas com éter sulfúrico e colocadas na mesa cirúrgica em decúbito dorsal, para facilitar a incisão cirúrgica. Foi realizada uma laparotomia longitudinal mediana infra-umbilical. Após a incisão, com o auxílio de tesoura e pinças de dissecação, foram levantados a pele e o músculo da parede abdominal e posteriormente a abertura do peritônio, permitindo visualização de toda cavidade abdominal. Dessa forma foi realizada a contagem de implantes uterinos e reabsorções.
A ingestão de barbatimão por ratas grávidas não alterou seu índice de fertilidade nem o índice de implantação, significando que a planta não altera os mecanismos das primeiras divisões celulares e também não interfere nos processos de implantação.
Testes pré-clínicos
O gel ou a pomada contendo o extrato de barbatimão foi testado no globo ocular de animais de experimentação, seguindo o método de Draize JH (1956) The skin game. International Record of Medicine and General Practice Clinics, 169 (1), p.37-39. demonstrando índice de irritação zero, o que corresponde a produto não irritante. A ação antiedematosa foi evidenciada, quando usado o modelo de pata de rato induzido por carragenina, demonstrando efeito similar ao da dexametasona, sem os inconvenientes desta.
A ação cicatrizante dos extratos hidroetanólicos de barbatimão, quando em formulação apresentada na forma de creme e comparada à substância padrão (fibrinolisina+desoxirribonuclease+cloranfenicol), mostrou-se evidente ao se realizar o teste cicatrizante em Modelo de ferida aberta. Nestes testes com a pomada observou-se uma espessa crosta, que contribuiu para reduzir a irritabilidade, a dor, e estancar pequenos sangramentos.
Avaliação Clínica dos extratos de Barbatimão
Os estudos clínicos com os extratos de barbatimão demonstravam sua a- ção antinflamatória e cicatrizante em mulheres com cervicite e cervicovaginites. Essa ação farmacológica foi comprovada na prática clínica através do uso popu- lar. Estudos recentes quanto aos aspectos, clínico e biofarmacêutico, demonstraram a ação eficaz do barbatimão comparado às substâncias padrão, quando empregado nas vaginites, cervicites e cervicovaginites, levando ao desaparecimento do corrimento, odor desagradável, prurido e dor em número significante de pacientes portadores dessas enfermidades ginecológicas.
A pomada contendo 20% (p/p) do extrato hidroetanólico do barbatimão, o- ferecida gratuitamente, foi aplicada topicamente duas vezes ao dia durante 60 dias. Os pacientes foram analisados quinzenalmente (total de 2 visitas por indivíduo da pesquisa) para avaliação macroscópica e constatação do possível efeito terapêutico sobre as lesões perianais, vulvares e penianas.
Este trabalho teve um estudo prospectivo, sendo sido selecionados 50 pacientes dos sexos masculino e feminino com diagnóstico clínico para o condiloma acuminatum (HPV), na faixa etária de 21 a 50 anos, atendidos no ambulatório de Proctologia do Hospital Universitário da UFAL, no período de outubro de 2002 a setembro de 2009. Todas as lesões foram fotografadas no início, durante e após o prazo proposto do tratamento. Esses indivíduos da pesquisa foram devidamente esclarecidos e aceitaram participar do trabalho. Realizamos o seguimento de todos os pacientes havendo desaparecimento das lesões em 45 pacientes os outros desistiram do tratamento e não retornaram para o ambulatório. Houve regres- são total das lesões nos 45 pacientes e não foi evidenciada recidiva das lesões. Na avaliação clinica geral do fitoterápico, concluiu-se que o produto apresenta resultados clínicos altamente significativos nos tratamentos decorrentes das infecções por HPV.

Claims

REIVINDICAÇÕES
1. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV", caracterizado por compreender extratos alcoólicos, hidroetanólicos e aquosos das cascas, entrecascas, do caule, dos galhos e da vagem de Abarema cochliocarpos e sinonímias de barbatimão;
2. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", de acordo com a reivindicação de 1 , caracterizado por ser composição farmacêutica para tratamento das infecções e profilaxia do câncer cervical promovidas pelo Papilomavirus Humano (HPV);
3. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 2 caracterizado por ser aplicado em adultos, crianças e gestantes;
4. "APLICAÇÃO DE COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizada para ser aplicada sobre as infecções promovidas pelo HPV em todo o corpo humano;
5. "APLICAÇÃO DE COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizada para ser aplicada sobre as infecções promovidas pelo HPV na mucosa bucal, intravaginal, vulvar, intraretal, canal anal, margem anal, peniana;
6. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizada para a preparação de composições farmacêuticas em forma de sabões;
7. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizada para a preparação de composições farmacêuticas em forma de tinturas;
8. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMAO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizada para a preparação de composições farmacêuticas em forma de aerossóis;
9. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMAO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, caracterizada para a preparação de composições farmacêuticas em forma de óvulos;
10. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMAO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizada para a preparação de composições farmacêuticas em forma de supositórios;
11. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMAO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizada para a preparação de composições farmacêuticas em forma de pomadas, cremes, géis e emulsões A/O e O/A;
12. "PROCESSO DE PREPARAÇÃO DE POMADA PARA TRATAMENTO EXTERNO DE HPV", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 11 , caracterizada por conter de 20% a 30% (p/p) do principio ativo na preparação de medicamentos;
13. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMAO", segundo qualquer uma das reivindicações de 1 a 12, caracterizada por compreender formulações contendo extratos: hidroetanólicos, etanólicos e aquosos, associados a extratos e excipientes provenientes de outras fontes naturais, nas apresentações contendo percentuais de até 80% em peso dos respectivos extratos;
14. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", segundo qualquer uma das reivindicações de 1 a 13, caracterizada por compreender formulações contendo extratos: hidroetanólicos, etanólicos e aquosos, associados a extratos e excipientes provenientes de outras fontes sintéticas, nas apresentações contendo percentuais de até 80% em peso dos respectivos extratos;
15. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", segundo qualquer uma das reivindicações de 1 a 14, caracterizada por compreender formulações farmacêuticas com constituinte(s) químico(s), fração(ões) de extratos, sumos da referida planta, contendo porcentuais de até 50% em peso da soma dos respectivos produtos;
16. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", segundo qualquer uma das reivindicações de 1 a 15, caracterizada por compreender formulações farmacêuticas com os componentes tanínicos e seus derivados funcionais (ésteres e amidas) extraídos de barbatimão Abarema cochliocarpos contendo até 50% em peso da soma dos respectivos produtos;
17. "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA PARA TRATAMENTO DE INFECÇÕES HPV UTILIZANDO EXTRATOS DE BARBATIMÃO", segundo qualquer uma das reivindicações de 1 a 16, caracterizada por compreender formulações farmacêuticas de forma associada a fármaco(s) vitamina(s), sal(is), açúcar(es) e outros excipientes, adequados á tratamento de infecções por HPV e suas manifestações;
18. "PROCESSO DE PREPARAÇÃO DE EXTRATO ETANÓLICO DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo processo que segue as seguintes etapas (a) compreende cascas de barbatimão {Abarema cochliocarpos) secas e moídas em moinho elétrico, (b) extraídas através de maceração com álcool, (c) e após filtração, (d) concentra em evaporador rotatório até 60°C;
19. "PROCESSO DE PREPARAÇÃO DE EXTRATO ETANÓLICO DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 18, caracterizado por o álcool utilizado na etapa (b) é o etanólico;
20. "PROCESSO DE PREPARAÇÃO DE EXTRATO DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizada por compreender extratos aquosos de barbatimão (Abarema cochliocarpos), com procedimento de preparação idêntica ao do extrato etanólico hidratado descrito na reivindicação 18;
21. "PROCESSO DE PREPARAÇÃO DE EXTRATO DE BARBATIMÃO", de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizada por compreender extratos hidroalcoólicos (9:1) de barbatimão {Abarema cochliocarpos), com procedimento de preparação idêntica ao do extrato etanólico hidratado descrito na reivindicação 18.
PCT/BR2011/000205 2010-07-01 2011-06-28 Composição farmacêutica para tratamento de infecções hpv utilizando extratos de barbatimão WO2012000070A1 (pt)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/BR2011/000205 WO2012000070A1 (pt) 2010-07-01 2011-06-28 Composição farmacêutica para tratamento de infecções hpv utilizando extratos de barbatimão
US13/807,560 US9023405B2 (en) 2010-07-01 2011-06-28 Pharmaceutical composition using stryphnodendron extracts for treating HPV infections

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BR000168 2010-07-01
PCT/BR2011/000205 WO2012000070A1 (pt) 2010-07-01 2011-06-28 Composição farmacêutica para tratamento de infecções hpv utilizando extratos de barbatimão

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012000070A1 true WO2012000070A1 (pt) 2012-01-05

Family

ID=45401243

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/BR2011/000205 WO2012000070A1 (pt) 2010-07-01 2011-06-28 Composição farmacêutica para tratamento de infecções hpv utilizando extratos de barbatimão

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2012000070A1 (pt)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140023738A1 (en) * 2010-07-01 2014-01-23 Universidade Federal De Alagoas - Ufal Pharmaceutical composition using stryphnodendron extracts for treating hpv infections
CN106177007A (zh) * 2016-08-16 2016-12-07 华中科技大学同济医学院附属同济医院 一种用于治疗高危型hpv持续感染的宫颈疾病的中药栓剂及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR9705744A (pt) * 1997-09-09 1999-05-25 Ferrante De Araujo Vera Marcia Elementos terapêuticos e processo para tratamento de psoríase e suas lesões
WO2003066013A1 (fr) * 2002-02-04 2003-08-14 Laboratoire Nuxe Composition cosmetique et/ou dermatologique a base d'extrait de barbitamao.
BR0105968A (pt) * 2001-11-28 2003-08-19 Tarcilio Roberto Lima Medicamento natural para tratamento alternativo anti-hiv
WO2005044288A1 (en) * 2003-11-11 2005-05-19 Aerp Associaçâo De Ensino De Ribeirâo Preto Composition for topic use containing an extract of stryphnodendron, its preparation as well as its application
BRPI0601025A (pt) * 2006-03-24 2007-11-27 Paulo Roberto Jannott Newlands cartão agregador de funções

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR9705744A (pt) * 1997-09-09 1999-05-25 Ferrante De Araujo Vera Marcia Elementos terapêuticos e processo para tratamento de psoríase e suas lesões
BR0105968A (pt) * 2001-11-28 2003-08-19 Tarcilio Roberto Lima Medicamento natural para tratamento alternativo anti-hiv
WO2003066013A1 (fr) * 2002-02-04 2003-08-14 Laboratoire Nuxe Composition cosmetique et/ou dermatologique a base d'extrait de barbitamao.
WO2005044288A1 (en) * 2003-11-11 2005-05-19 Aerp Associaçâo De Ensino De Ribeirâo Preto Composition for topic use containing an extract of stryphnodendron, its preparation as well as its application
BRPI0601025A (pt) * 2006-03-24 2007-11-27 Paulo Roberto Jannott Newlands cartão agregador de funções

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Pagina da Web: HPV eu tenho! Pomada de barbatimao", 13 December 2008 (2008-12-13), Retrieved from the Internet <URL:http://hpveutenho.blogspot.com/2008/12/nossa-hoje-fui-passar-pomada-de.html> *
FELIPE ET AL.: "Antiviral effect of Guazuma ulmifolia and Stryphnodendron adstringens on poliovirus and bovine herpesvirus.", BIOL. PHARM. BULL., vol. 29, no. 6, 2006, pages 1092 - 1095 *
HERNANDES L ET AL.: "Wound-healing evaluation of ointment from Stryphnodendron adstringens (barbatimao) in rat skin.", BRAZ. JOUR. PHARM. SCIEN., vol. 46, no. 3, July 2010 (2010-07-01), pages 431 - 436 *
LOPES ET AL.: "Influence of extracts of Stryphnodendron polyphyllum Mart. and Stryphnodendron obovatum Benth. on the cicatrisation of cutaneous wounds in rats.", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, vol. 99, 2005, pages 265 - 272, XP025270110, DOI: doi:10.1016/j.jep.2005.02.019 *
MELO ET AL.: "Effect of Stryphnodendron adstringens (barbatimao) bark on animal models of nociception.", REVISTA BRASILEIRA DE CIENCIAS FARMACEUTICAS, vol. 43, no. 3, July 2007 (2007-07-01), pages 465 - 469 *
SANTOS SC ET AL.: "Atividade antimicrobiana in vitro do extrato de,Abarema cochliocarpos (Gomes) Bameby & Grimes.", REVISTA BRASILEIRA DE FARMACOGNOSIA, vol. 17, no. 2, April 2007 (2007-04-01), pages 215 - 219 *
SILVA ET AL.: "Anti-intlammatory intestinal activity of Abarema cochliacarpos (Gomes) Bameby & Grimes in TNBS colitis model.", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, vol. 128, 2010, pages 467 - 475 *
SILVA ET AL.: "Antinociceptive effects of Abarema cochliacarpos", REVISTA BRASILEIRA DE FARMACOGNOSIA, vol. 19, no. 1A, January 2009 (2009-01-01), pages 46 - 50 *
SOARES DE JESUS ET AL., AÇÃO ANTIBACTERIANA E ANTIADERENTE DE PITHECELLOBUIM COCHLIOCARPUM (GOMEZ) MACBR S *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140023738A1 (en) * 2010-07-01 2014-01-23 Universidade Federal De Alagoas - Ufal Pharmaceutical composition using stryphnodendron extracts for treating hpv infections
US9023405B2 (en) * 2010-07-01 2015-05-05 Universidade Federal de Alagoas—UFAL Pharmaceutical composition using stryphnodendron extracts for treating HPV infections
CN106177007A (zh) * 2016-08-16 2016-12-07 华中科技大学同济医学院附属同济医院 一种用于治疗高危型hpv持续感染的宫颈疾病的中药栓剂及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109568206B (zh) 一种专用于女性的抑菌组合物及洗液和制备方法
CN108348577B (zh) 贻贝粘蛋白产品及其抑制皮肤炎症的应用
US20190008906A1 (en) Compositions for management of wounds, skin diseases, dehydration, chronic diseases, and respiratory diseases
CN110478477A (zh) 一种促进女性生殖健康的中药生物制剂及其制备方法
CN107456509B (zh) 一种用于女性阴道预防、保健以及治疗妇科生殖道炎症的外用生物制剂以及制备方法
EP0279984B1 (en) Pharmaceutical use of graminaceous extracts
CN113081928A (zh) 一种植物抑菌凝胶及其制备方法和应用
EP0109993B1 (en) Method for extracting propolis and water soluble dry propolis powder obtained thereby and cosmetic and pharmaceutical preparations containing same
CN108324922A (zh) 一种预防和治疗妇科炎症的凝胶组合物
CN109833431A (zh) 一种抑菌凝胶及其制备方法
Muhammed et al. Effect of application of Fenugreek (Trigonella foenum-graecum) on skin wound healing in rabbits
Mzindle Anti-inflammatory, anti-oxidant and wound-healing properties of selected South Africa medicinal plants
CN105662996A (zh) 治疗月经相关性痤疮的中药面膜
US7780992B2 (en) Antiviral medicament
WO2012000070A1 (pt) Composição farmacêutica para tratamento de infecções hpv utilizando extratos de barbatimão
US9023405B2 (en) Pharmaceutical composition using stryphnodendron extracts for treating HPV infections
CN108619486B (zh) 一种治疗皮肤病的软膏剂及其制备方法
JP3103373B2 (ja) ククイナット外皮由来の抗ウイルス剤
CN109453146B (zh) 抗病原微生物的组合物及其制备方法和应用
WO2021213485A1 (zh) 蒲公英及其单体化合物在杀螨中的应用
BRPI1004542B1 (pt) composição farmacêutica à base de extrato de abarema cochliocarpos, útil no tratamento de infecções por papiloma vírus humano e seu processo de preparação
CN102145072A (zh) 一种治疗小儿湿疹及皮炎类皮肤病的中药组合物
Grant Pharmaceutical composition using stryphnodendron extracts for treating HPV infections
CN101559215B (zh) 皮肤生理修复液及其制备方法
Marlinawati et al. Effect of Papaya Leaf Extract Gel (Carica papaya) on Incision Wound Healing in Rattus norvegicus

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11800000

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 11800000

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13807560

Country of ref document: US