CN1874792A

CN1874792A - 包含基质金属蛋白酶底物的化合物及其使用方法

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Publication number: CN1874792A
Application number: CN 200480032651
Authority: CN
Inventors: 托马斯·D·哈里斯; 帕德马贾·亚拉曼奇利
Original assignee: Bristol Myers Squibb Pharma Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Pharma Co
Priority date: 2003-09-03
Filing date: 2004-09-02
Publication date: 2006-12-06

Abstract

公开了用于诊断试剂的化合物，所述的诊断试剂用于检测、成像和/或监测在患者中有关的部位与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调。还公开了包含所述化合物的组合物以及试剂盒。此外，还公开了检测、成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶存在或与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调的方法。

Description

包含基质金属蛋白酶底物的化合物及其使用方法

本公开涉及诊断试剂。更具体地，本公开涉及用于检测和/或成像和/或监测与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调的化合物、诊断试剂、组合物以及试剂盒。此外，本公开涉及一种检测和/或成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶的存在或与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调的方法。

基质金属蛋白酶(MMPs)是结构上相关的含锌酶家族，介导细胞外基质的完整性(Chem.Rev.，1999，99，2735-2776)。其可由许多结缔组织和促炎性细胞如成纤维细胞、成骨细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和内皮细胞分泌。目前已经有大量的证据表明基质金属蛋白酶(MMPs)在结缔组织包括蛋白聚糖和胶原中的不受控制的裂解中很重要，导致细胞外基质的重吸收。这为许多心血管病理疾病的特征，如动脉粥样硬化、心力衰竭、再狭窄以及再灌注损伤。通常，这些分解代谢酶的合成水平以及在其细胞外活性水平被紧密地调节，通过特异性的抑制剂如α-2-巨球蛋白和TIMP(金属蛋白酶组织抑制剂)的作用，这些抑制剂与MMPs形成无活性的复合物。因此，细胞外基质降解以及重建被TIMPs和MMPs的相对表达而调节。基于其结构域结构，MMPs被分成数个家族：溶基质蛋白(最小限度的结构域，MMP-7)，胶原酶(血色素结合蛋白结构域，MMP-1、MMP-8、MMP-13)，明胶酶(纤连蛋白结构域，MMP-2，MMP-9)，溶基质素(血色素结合蛋白结构域，MMP-3、MMP-10、MMP-11)，和金属弹性酶(MMP-12)。此外，最近已经发现了跨膜结构域家族(MT-MMPs)，并包括MMP-14至MMP-17。

能够检测心脏中MMPs水平的增加对检测在许多心脏疾病发生情形下的组织降解极其有用。最近已经意识到在冠状动脉中的组合物以及动脉粥样化斑的易受攻击为血栓-介导的急性冠状事件的关键决定性因素，如不稳定心绞痛、心肌梗塞和死亡(Circulation，1995，92：657-671)。在炎性粥样斑块中涉及的许多成分中之一为分泌基质金属蛋白酶的巨噬细胞(Circulation，1996，94：2013-2020)。MMPs通常为裂解心脏的蛋白酶-抗性纤维状细胞外基质成分如胶原的酶家族。这些细胞外基质蛋白赋予粥样斑纤维性外壳(Circulation，1995，91：2844-2850)。

聚集在炎症区域如动脉粥样硬化斑的巨噬细胞释放这些MMPs，降解结缔组织基质蛋白(Falk，1995)。事实上，研究已经证实金属蛋白酶及其mRNA二者都存在于动脉粥样硬化斑中(Am.J.Physiol.，1998，274：H1516-1523；Circ.Res.1995，77：863-868；Proc.Natl.Acad.Sci.，1991，88：8154-8158)，尤其使在人动脉粥样硬化斑易受攻击的区域(J.Clin.Invest.，1994，94：2493-2503)。在人粥样斑部位存在的可由巨噬细胞释放的金属蛋白酶包括间质胶原酶(MMP-1)，明胶酶A和B(分别为MMP-2和MMP-9)和溶基质素(MMP-3)(Circulation，1994，90：775-778)。尽管所有的MMPs可在人粥样斑部位升高，已经暗示明胶酶B可能为在斑中最为广泛存在的MMPs之一，因为它几乎被所有的活化的巨噬细胞所表达(Circulation，1995，91：2125-2131)。相对于稳定心绞痛患者，MMP-9已经显示在不稳定心绞痛的经皮腔内斑块旋切物质更广泛地存在(Circulation，1995，91：2125-2131)。

左心室细胞外基质，包含许多胶原和弹性蛋白，也被认为参与维持左心室(LV)几何形状。因此，这些心肌膜的细胞外组分的改变可能影响LV功能并且为与LV退化以及最终的心力衰竭进行性变化的标志物(CoAm.J.Physiol.，1998，274：H1516-1523)。

在充血性心力衰竭(CHF)中，并在LV中的CHF状态与MMP活性的关系至少在临床方面还有些不清楚。但是，在临床前CHF模型中，LV的功能的变化已经与升高的MMP活性关联起来了。例如，在CHF的猪模型中，观察到LV功能的下降与显著的MMP-1(～300％)、MMP-2(～200％)和MMP-3(500％)的增加一致(Am.J.Physiol.，1998，274：H1516-1523)。已经证实猪模型中的轻度缺血和再灌注选择性地激活MMP-9(Circulation，1999，100 Suppl.1，I-12)。类似地，在CHF的狗模型中，发现明胶酶水平(例如MMP-2和MMP-9)在严重的心力衰竭中升高(Can.J.Cardiol.，1994，10：214-220)。发现MMP-2和MT1-MMP的水平(膜型MMP、MMP-14)在人肌细胞的活检样品中增加，所述的肌细胞源自扩张性心肌病患者(Circulation，1999，100 Suppl.1，I-12)。

病理上，已经确证MMPs与数种疾病状态有关。例如，其中与正常血清值比较，已经在肺癌患者中以及在那些具有远端转移患者中检测到异常的MMP-2水平，观察到血清MMP-2水平在IV期疾病中显著升高(CancerRes.，1992，53：4548)。此外，在患结肠和乳腺癌的患者中还观察到MMP-9血浆水平的升高(癌症Res.，1993，53：140)。

与外伤膝盖损伤后比较，已经在来自类风湿性关节炎患者的滑液中观察导升高水平的溶基质素(MMP-3)以及间质胶原酶(MMP-1)(Arth.Rheum.，1992，35：35)。胶原酶I型(MMP-1)和胶原酶IV型(MMP-2)的mRNA表达水平的增加也已经在溃疡性结肠炎中显示出增加，与节段性回肠炎以及对照比较(Gastroenterology，1992，Abstract 661)。此外，在慢性炎性结肠炎的兔模型中也已经证实了明胶酶抗原的免疫组织学表达增加(Gastroenterology，1992，Abstract 591)。

已经表明明胶酶MMPs为最紧密地涉及肿瘤的生长和传播。已经知道明胶酶的表达水平在恶性肿瘤中升高，并且明胶酶可降解基底膜，导致肿瘤转移。实体肿瘤生长必须的血管发生，最近也已经证实在其病理学上具有明胶酶成分。此外，有证据暗示明胶酶涉及与动脉粥样硬化有关的斑块破裂。由MMPs介导的其他疾病包括再狭窄、MMP-介导的骨质减少、中枢神经系统的炎性疾病、皮肤老化、肿瘤生长、骨关节炎、类风湿性关节炎、脓毒性关节炎、角膜溃疡、异常伤口愈合、骨病、蛋白尿、动脉瘤主动脉疾病、外伤性关节损伤后的变性性软骨丢失、神经系统的脱髓鞘疾病、肝硬变、肾脏的肾小球疾病、胎膜过早破裂、炎性肠疾病、牙周病、年龄有关的黄斑变性、糖尿病性视网膜病、增殖性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病、眼睛炎症、圆锥角膜、斯耶格伦(氏)综合征、近视、眼瘤、眼睛血管发生/新生血管形成以及角膜移植片排斥。最近的评述，参见：ResearchFocus，1996，Vol.1，16-26；Curr.Opin.Ther.Patents 1994，4(1)：7-16；Curr.Medicinal Chem.，1995，2：743-762；Exp.Opin.Ther.Patents，1995，5(2)：1087-110；以及Exp.Opin.Ther.Patents，1995，5(12)：1287-1196。

靶向一或多种MMPs的诊断试剂可用于检测和监测退行性疾病过程中细胞外基质降解的程度。包含针对一或多种MMPs(例如MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9)的配体的诊断试剂，将使诊断成像探针集中于病理部位以用于这些疾病的非侵入性成像。

例如，已知将MMP抑制剂偶联至成像剂用于检测和监测MMP水平。参见，例如国际公开号WO 01/60416。但是，所述的靶向通常涉及偶联成像剂和MMP之间的一对一相互作用，MMP通常以相对低的浓度存在。因此，利用这种方法的在特定组织富集的靶向成像探针分子的数目是有限的并因此限定了该方法的灵敏度。

为了避免这种灵敏度限制，MMP底物可偶联至成像剂用于检测和监测MMP水平。由于多重偶联的成像剂可与各种MMP分子相互作用，在患者中有关的区域的成像剂浓度存在放大作用。因此可以有利地开发诊断试剂用于检测和/或成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶的存在以及与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调的方法，尤其那些具有更大的特异性以及灵敏度以及那些利用不同的捕获机制的诊断试剂。局限于MMP活性区域的化合物将使这些疾病的检测和定位成为可能，相对于正常组织而言，这些部位具有与改变的MMP水平有关。

在一种实施方案中，本公开涉及化合物或其可药用衍生物，包括：

a.至少一个靶向基团；

b.任选的螯合剂(chelator)；

c.掩蔽的捕获基团；以及

d.任选的连接基团；

其中所述的靶向基团为基质金属蛋白酶底物；

其中所述的螯合剂能够偶联至诊断成分；

其中所述的掩蔽的捕获基团能够暴露以形成暴露的捕获基团；

其中所述的暴露的捕获基团能够固定在患者的有关部位；

其中，并在使用的时候，所述化合物的固定通过所述的暴露的捕获基团和在所述的患者的有关部位的物质之间的相互作用而实现，所述的物质与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调相关；

条件是所述的相互作用是非受体介导的；以及

条件是，当使用的时候，当所述的物质为蛋白的时候，所述的相互作用为共价键。

在另一个实施方案中，本公开涉及化合物或其可药用衍生物，包括：

a.至少一个靶向基团；

b.任选的螯合剂；

c.掩蔽的捕获基团；以及

d.任选的连接基团；

其中所述的靶向基团为基质金属蛋白酶底物；

其中所述的螯合剂能够偶联至诊断成分；

其中所述的暴露的捕获基团能够固定在患者的有关部位；

条件是所述的相互作用是非受体介导的；以及

条件是当使用的时候，所述的暴露捕获基团被固定之前和之后，源自诊断成分的信号基本上没有变化。

在另一个实施方案中，本公开提供了制备1，2-二羰基化合物的方法，该方法包括：

a.将根据上述的化合物与MMP反应；

b.将步骤a的产物与APN反应以形成α-氨基酮；以及

c.利用血清胺氧化酶氧化所述的α-氨基酮。

在另一个实施方案中，本公开涉及诊断试剂，包括：

a.如上描述的化合物或其可药用衍生物，以及

b.诊断成分。

在另一个实施方案中，本公开涉及组合物，包括：

a.如上描述的化合物或诊断试剂；以及

b.可药用载体。

在其他的实施方案中，本公开涉及一种用于检测、成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶存在的试剂盒，包括：

a.如上描述的诊断试剂；

b.可药用载体；以及

c.用于制备用于检测、成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶存在的组合物的使用说明。

在其他的实施方案中，本公开涉及一种检测、成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶存在的方法，包括下述步骤：

a.对所述的患者给药如上描述的诊断试剂；以及

b.利用诊断成像技术获得患者中所述的诊断试剂富集部位的图像。

在另一个实施方案中，本公开涉及一种检测、成像和/或监测患者中与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调的方法，所述的方法包括下述步骤：

a.对所述的患者给药如上描述的诊断试剂；以及

在其他的实施方案中，本公开涉及一种检测、成像和/或监测患者中动脉粥样硬化，包括冠状动脉粥样硬化或脑血管动脉粥样硬化的方法，包括下述步骤：

a.对所述的患者给药如上描述的诊断试剂；以及

在其他的实施方案中，本公开涉及一种通过确定所述的患者中活动性动脉粥样硬化的程度鉴别处于患短暂脑缺血发作、中风、急性心肌缺血、充血性心力衰竭、心肌梗塞或心源性死亡的患者的方法，包括进行如上描述的方法之一。

在其他的实施方案中，本公开涉及一种对患者中心脏再灌注和细胞外基质降解同时成像的方法，包括下述步骤

a.给药如上描述的诊断试剂，其中所述的诊断成分为γ-发射放射性同位素或正电子-发射放射性同位素；

b.给药心脏再灌注化合物，其中所述的化合物用γ-发射放射性同位素或正电子-发射放射性同位素进行放射标记，所述的放射性同位素显示出γ发射能量或正电子发射能量，所述的γ发射能量或正电子发射能与步骤a中偶联至靶向基团的所述诊断成分的γ发射能量或正电子发射能量在光谱上可区分；以及

c.利用诊断成像技术获得在步骤a和b中给药的化合物在光谱上可区分的γ-发射能量或正电子-发射能量富集部位的同时图像。

在另一个实施方案中，本公开涉及检测和/或成像和/或监测患者中癌性肿瘤的方法，包括下述步骤：

a.对所述的患者给药如上描述的诊断试剂；以及

在其他的实施方案中，本公开涉及组合物，包括至少一种包含MMP底物和/或诊断试剂的化合物，和/或可药用载体。

在任何特定基团中的碳原子数目表示在引述的基团之前。例如，术语“C_6-10芳基”表示包含6～10个碳原子的芳基，并且术语“C_6-10芳基-C_1-10烷基”指通过1～10个碳原子的烷基基团连接至母体分子的6～10个碳原子的芳基。

这里使用的术语“链烯基”，指包含至少一个碳痰碳双键的直或支链烃。

这里使用的术语“烷氧基”，指通过氧原子连接至母体分子部分的烷基。

这里使用的术语“烷氧基烷基”，指通过烷基连接至母体分子部分的烷氧基。

这里使用的术语“烷基”，指衍生自直或支链饱和的烃的基团。

这里使用的术语“烷基芳基”，指通过芳基连接至母体分子部分的烷基。

这里使用的术语“亚烷基芳基”，指二价芳基烷基，其中连接至母体分子部分的一点在烷基部分上并且另一点在芳基部分上。

这里使用的术语“亚烷基”，指衍生自直或支链饱和的烃的二价基团。

这里使用的术语“氨基酸残基”指衍生自天然存在的或合成的有机化合物的基团，所述的化合物包含氨基(-NH₂)，羧酸基团(-COOH)，以及多种侧链基团中的任何一种，尤其是具有基本结构NH₂CHRCOOH的20种化合物中的任何一种，并且所述的基团通过肽键连接在一起以形成蛋白或充当化学信使以及作为代谢中的中间体。

这里使用的术语“氨基羧酸盐”，指-OC(O)NH₂。

这里使用的术语“辅助性(ancillary)”或“共-配体(co-ligand)”指与螯合剂或试剂的放射性核结合单元一起完成放射性核配位层(coordination sphere)的配体。对于包括二元配体体系的放射性药品，放射性核配位层包括一或多种螯合剂或一或多种试剂的结合单元以及一或多种辅助性或共配体，条件是存在总共两种类型的配体、螯合剂或结合单元。例如，包括一种螯合剂或一种试剂的结合单元以及两种相同的辅助性或共配体的放射药物，以及包括两种螯合剂或来自一种或两种试剂的结合单元以及一种辅助性或共配体的放射药物都被认为是包括二元配体体系。对于包括三元配体体系的放射性药品，包括一或多种螯合剂或一或多个试剂的结合单元以及一或多种两种不同类型的辅助性或共配体的放射性核配位层，条件是存在总共三种类型的配体、螯合剂或结合单元。例如，包括一种螯合剂或一种试剂的结合单元以及两种不同的辅助性或共配体的放射药物被认为是包括三元配体体系。

用于制备放射性药品以及用于所述的放射性药品的诊断试剂盒制备的辅助性或共配体包括一或多个氧、氮、碳、硫、磷、砷、硒以及碲供体原子。配体可为在放射药物合成中的转移配体并可充当在另一种放射药物中的辅助性或共配体。配体被称为转移(transfer ligand)或辅助性或共配体取决于配体是否保持在放射药物的放射性核(radionuclide)配位层中，取决于放射性核以及螯合剂或一种试剂或多种试剂结合单元的配位化学。

这里使用的术语“芳基”，指苯基，或二环稠合环体系，其中一或多个环为苯基。二环稠合环体系由稠合至单环环烯基、单环环烷基，或另一个苯基的苯基组成。本发明的芳基可通过该基团中任何可被取代的碳原子连接至母体分子部分。代表性的芳基的实例包括，不限于，蒽基、薁基、芴基、茚满基、茚基、萘基、苯基和四氢萘基。

这里使用的术语“芳基烷基”，指通过烷基连接至母体分子部分的芳基。

这里使用的术语“芳基烷基芳基”，指通过芳基连接至母体分子部分的芳基烷基。

这里使用的术语“亚芳基烷基”，指二价芳基烷基，其中连接母体分子部分的一个连接点在芳基部分上并且另一个在烷基部分上。

这里使用的术语“亚芳基”，指二价芳基。

这里使用的术语“抑菌剂”指抑制制剂中细菌生长的成分，或者是在使用前的储存期间或者是在诊断试剂盒用来合成诊断试剂之后。

这里使用的术语“缓冲剂”，指用来保持反应混合物的pH为从约3至约10的物质。

这里使用的术语“碳水合物”指多羟基醛、酮、醇或酸，或其衍生物，包括其具有缩醛类型的聚合连接的聚合物。

这里使用的术语“载体”，指可用于与本公开的化合物和/或诊断试剂一起对患者给药的佐剂或溶媒，其不破坏化合物和/或诊断试剂的活性，并且当以足以输送有效量的诊断试剂和/或化合物的量给药的时候是无毒性的。

这里使用的术语“螯合剂”和“结合单元”，指通过一个或多个供体原子结合金属离子在试剂上的的部分或基团。

这里使用的术语“偶联的”，指在两种成分之间形成化学键。

这里使用的术语“氰基”，指-CN。

这里使用的术语″环烯基″，指非芳香的、部分不饱和的单环，二环或三环环体系，具有3～14个碳原子以及0个杂原子。环烯基代表性的实例包括，不限于，环己烯基、八氢萘基和降冰片烯基。

这里使用的术语″环烷基″，指饱和的单环、二环或三环烃环体系，具有3～14个碳原子和0个杂原子。环烷基代表性的实例包括，不限于，环丙基、环戊基、二环[3.1.1]庚基和金刚烷基。

这里使用的术语“亚环烷基”，指二价环烷基。

这里使用的术语“环糊精”指环状的寡糖。环糊精的实例包括，不限于，α-环糊精、羟基乙基-α-环糊精、羟基丙基-α-环糊精、β-环糊精、羟基丙基-β-环糊精、羧基甲基-β-环糊精、二羟基丙基-β-环糊精、羟基乙基-β-环糊精、2，6二-O-甲基-β-环糊精、硫酸化-β-环糊精、γ-环糊精、羟基丙基-γ-环糊精、二羟基丙基-γ-环糊精、羟基乙基-γ-环糊精和硫酸化γ-环糊精。

这里使用的术语“诊断试剂”指可用来检测、成像和/或监控病症、病理性失调和/或疾病的存在和/或进程的化合物。

这里使用的术语“诊断成分”，指分子的部分或多个部分，容许用于检测、成像和/或监测病症、病理性失调和/或疾病的存在和/或进程。

这里使用的术语“诊断成像技术”，指用来检测诊断试剂的步骤。

这里使用的术语“诊断试剂盒”和“试剂盒”，指称为制剂的组分的集合，在一或多瓶中，由临床或药房的终端操作使用者用来配制诊断试剂。该试剂盒提供了所有必须的组分以配制并使用诊断试剂(除了那些对终端操作使用者而言为常规可得的如注射用水或盐水以外)，如诊断成分(例如，放射性核)的溶液，在诊断试剂的合成中加热的设备，给药诊断试剂予患者的必要的设备如注射器以及屏蔽物(如果需要)，以及成像设备。

这里使用的术语“供体原子”指通过化学键直接连接至金属的原子。

这里使用的术语“内源性”，指在有机体或细胞内产生的物质。

这里使用的术语″杂环基”，指5-，6-或7-员环，包含1、2或3个独立地选自氮、氧和硫的杂原子。5-员环具有0～2个双键并且6-和7-员环具有0～3个双键。术语″杂环基″还包括二环基团，其中杂环基环稠合至苯基、单环环烯基、单环环烷基，或另一种单环杂环基。本发明的杂环基能基团通过基团中的碳原子或氮原子连接至母体分子部分。杂环基的实例包括，不限于，苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚啉基、吲哚基、异噻唑基、异唑基、吗啉基、唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡咯并吡啶基、吡咯基、噻唑基、噻吩基和硫吗啉基。

这里使用的术语“杂环基烷基”，指通过烷基连接至母体分子部分的杂环基。

这里使用的术语“亚杂环基烷基”，指二价杂环基烷基，其中连接至母体分子部分的一个点在杂环基部分上并且另一个在烷基部分上。

这里使用的术语“亚杂环基”，指二价杂环基。

这里使用的术语“疏水氨基酸残基”指如上定义的氨基酸残基，其在生理pH值不包含离子化基团，并且导致亲脂性的增加并且抑制包含该残基的化合物从靶标的扩散，如脂质-充满的冠状斑。疏水氨基酸残基的实例包括不限于，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、酪氨酸及其衍生物。

这里使用的术语“配体”，指在中心原子周围形成配合物的原子或者分子或基团或者离子。

这里使用的术语“连接基团”，指充当分子两个其他部分之间的间隔基团的分子部分。连接基团还可充当如这里描述的其他的功能。

这里使用的术语“冻干剂”指具有有利于冻干的物理性质的组分，如玻璃转化温度，并且加入至制剂中以改善用于冻干制剂的所有的组分组合的物理性质。

这里使用的术语“掩蔽的捕获基团”，指分子或其部分，由于存在掩蔽基团对特定的化学功能基团显示下降的结合亲和力。一旦掩蔽基团去除，形成了暴露的捕获。这里使用的术语“暴露的捕获基团”，指分子或其部分，显示相对于掩蔽的捕获基团对特定的化学功能基团增加的结合亲和力。

这里使用的术语“金属药物”指包括金属的药物。金属为诊断应用中可成像信号的根源并且为放射治疗应用中细胞毒性辐照的根源。

这里使用的术语“可药用”指那些化合物、材料、组合物和/或剂型在其合理的医学判断范围之内，合适用于与人和动物的组织接触，而不引起过度的毒性、刺激性、过敏反应或其他的问题或并发症，具有合理的益处/风险比。

这里使用的术语“放射药物”，指其中金属为放射性同位素的金属药物。

这里使用的术语“试剂”指能够直接转化成本公开诊断试剂的本公开的化合物。试剂可直接用于制备本公开的诊断试剂或可为本公开试剂盒的组分。

这里使用的术语“还原剂”，指与放射性核(其通常地以相对不具有反应活性的高氧化态化合物得到)反应通过转移电子至放射性核以降低其氧化态的化合物，从而使其更具反应性。

这里使用的术语“增溶剂”为改善制剂需要的介质中一或者多种其他组分的溶解度的组分。

这里使用的术语“稳定剂”指加入到金属药物或诊断试剂盒中以稳定金属药物或延长在使用前的该试剂盒贮存期限的组分。稳定剂可为抗氧化剂、还原剂或自由基(radical)清除剂并能够提供改善的稳定性，通过优选地与降解其他的组分或金属药物的物质反应。

这里使用的术语“稳定”，指具有容许加工以及为用于这里详细描述的目的在足够长的时期内保持其完整性的能力的化合物。通常地，本公开的化合物在40℃或更低的温度下在没有湿气或其他的化学反应条件下稳定至少1周。

这里使用的术语“无菌”，指没有致病微生物或使用方法以保持无致病微生物。

这里使用的术语“底物”，指可被酶作用的物质。在本公开中，底物为基质金属蛋白酶作用的物质。

这里使用的术语“表面活性剂”，指在溶液中产生界面张力下降的任何两亲性物质。

这里使用的术语“可药用衍生物”，指本公开的化合物的任何可药用盐、酯、酯的盐，或其他衍生物(对接受者给药后，能够提供(直接地或间接地)本公开的化合物或代谢物或其残基)。通常地，衍生物为那些增加本公开的化合物生物利用度的化合物，当所述的化合物对哺乳动物给药的时候(例如，通过口服给药化合物以更容易地吸收到血液内)或提高母体化合物转运至生物间隔(例如，脑或淋巴系统)，相对于母体分子。

这里使用的术语“聚亚烷基而醇”指具有小于约5000分子量的聚乙二醇、聚丙二醇或聚丁二醇，以羟基或烷基醚基团结尾。

这里使用的术语“转移配体”指与金属离子形成中间配合物的配体，所述的中间配合物足够稳定以防止不期望的副-反应但是活性足够转化为金属药物。中间配合物的形成为动力学有利的，而金属药物的形成使热力学稳定的。用于制备金属药物和诊断试剂盒(用于制备诊断放射性药品)的转移配体包括不限于葡萄糖酸锑钠、葡庚糖酸盐、甘露醇、葡萄糖二酸盐、N，N，N’，N’-乙二胺四乙酸、焦磷酸盐和亚甲基二磷酸盐。通常，转移配体包括氧或氮供体原子。

本发明的化合物中存在不对称中心。取决于在手性碳原子周围的取代基的构型，这些中心用符号“R”或“S”表示，。应该理解的是本发明包括本发明化合物所有的立体异构体形式，或其混合物。化合物的单一立体异构体可从包含手性中心的商业可得的起始原料合成制备得到或制备出对映体产物的混合物然后分离，如转化为非对映体的混合物然后通过分离或重结晶、层析技术，或在手性层析柱上进行直接的分离。特定立体化学的起始化合物是商业可得的或可利用本领域公知的技术进行制备和拆分。

本公开的一些化合物还可存在可分离的不同的稳定构象形式。由于不对称单键周围的旋转限制导致的扭转不对称，例如由于立体阻碍或环张力，可容许分离不同的构象异构体。本公开包括这些化合物的各个构象异构体及其混合物。

由于在本发明的化合物中存在双键，本公开包含源自这些双键周围的取代基排列的各种几何异构体及其混合物。应该理解的是本公开包括异构形式及其混合物。对于碳碳双键，术语“E”表示较高级的取代基在碳碳双键的对侧，并且术语“Z”表示较高级的取代基在碳碳双键的同侧。

当在任何取代基或在任何结构式中的任何变量出现多于一次的时候，在每次出现的定义独立于在其他任何一次出现的定义。因此，例如，如果一个基团显示被0-2个R²³取代，则所述的基团可任选地被至多2个R²³取代，并且在每次出现的R²³独立地选自可能的R²³的限定选项。此外，例如，对于基团-N(R²⁴)₂，在氮上的两个R²⁴取代基的每一个独立地选自可能的R²⁴的限定选项。只有当所述的组合得到稳定的化合物，取代基和/或变量的组合才是容许的。当连接取代基的化学键显示与连接环中2个原子的键交叉，则所述的取代基可键合至环上的任何原子。

本公开的化合物需要至少2个结构域或组分部分：至少一个靶向基团(“S”)，其中所述的靶向基团为MMP底物；以及至少一个掩蔽的捕获基团(“M-T”)。本公开的化合物可任选地包括能够偶联至诊断成分(“D”，或者这里称为“报告基团”或“成像基团”)的螯合剂(“C”)和/或连接基团(“L”)。

由于一分子的MMP可水解多个MMP底物分子，本公开的诊断试剂具有固有的内在扩增的优点。本公开的诊断试剂通常地满足任何诊断试剂的标准，包括化学稳定性、高纯度的标记、快速血液清除以及有利的生物分布。此外，本公开的诊断试剂还通常地满足下述标准：

(1)诊断试剂通常地自由地扩散进入或者离开靶物质，如冠状斑。

(2)诊断试剂通常对见于血液以及其他非靶组织的蛋白酶稳定。

(3)诊断试剂通常地包含能被MMP裂解暴露的掩蔽的捕获基团。

(4)诊断试剂通常地能固定在靶物质如冠状斑内部，并聚集在靶物质中以容许信号随时间增加。

据信本公开的诊断试剂的选择性源自在体内一些组织、器官或间隔中相对于体内正常的组织、器官或间隔具有较高的MMPs浓度，如易损的冠状斑与稳定的冠状斑比较。捕获机制不需要是组织特异性的。但是，如果捕获机制是组织特异性的，则非常有利，因为提供了双倍水平的特异性，从而提供更大的靶标-背景信号。

在一个本公开的实施方案中，当其固定在患者的靶标的时候，诊断成分的信号基本上不会改变。这意味着当结合分子的时候，信号基本上没有提高。在上下文使用的时候，“基本上”指信号改变不超过20％。在另一个实施方案中，信号改变不超过10％。在另一个实施方案中，信号改变不超过5％。在另一个实施方案中，信号改变不超过1％并且在另一个实施方案中，信号改变不超过0％。

诊断成分可为回波发生物质(echogenic substance)(液体或其他)、非金属同位素、光学报告基团、硼中子吸收剂、顺磁性金属离子、铁磁(性)金属、γ-发射放射性同位素、正电子-发射放射性同位素或x-射线吸收剂。

诊断试剂可为连接至公知可用通过γ闪烁扫描术或正电子发射断层摄影术(PET)成像的放射性同位素的MMP底物。或者，MMP靶向配体可结合至单一或多个螯合剂基团以连接一或多个顺磁性金属原子。这将引起在用核磁共振成像系统成像的时候的组织的受损部位的磁性的局部改变，如驰豫(relaxivity)或磁化率。或者，MMP底物可结合至用于包封/稳定气体的微球的磷脂或聚合物材料，在组织受损部位定位后可利用超声成像可检测。

合适的回波发生气体包括六氟化硫或全氟碳气体，如全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟环丁烷、全氟戊烷或全氟己烷。

合适的非金属同位素包括碳-11、氮-13、氟-18、碘-123和碘-125。

合适的光学报告基团包括荧光报告基团和化学发光基团。

合适的放射性同位素包括：^99mTc、⁹⁵Tc、¹¹¹In、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Ga、和⁶⁸Ga。在本公开的具体实施方案中，合适的放射性同位素包括99mTc和¹¹¹In。

合适的顺磁性金属离子包括：Gd(III)，Dy(III)，Fe(III)和Mn(II)。

合适的x-射线吸收剂包括：Re、Sm、Ho、Lu、Pm、Y、Bi、Pd、Gd、La、Au、Au、Yb、Dy、Cu、Rh、Ag和Ir。

当诊断成分为放射性同位素的时候，诊断试剂还可包括能够稳定放射性同位素的第一种辅助性配体以及第二种辅助性配体。大量的配体可充当辅助性或共配体，选择由多种考虑决定，如放射药物合成的方便性、辅助性配体的化学以及物理性质、形成速率、产率以及形成的放射性药品的异构体形式的数目、给药所述的辅助性或共配体予患者而对所述的患者不引起不利的生理后果的能力，以及配体在冻干的试剂盒制剂中的相容性。辅助性配体的电荷以及亲脂性将影响放射性药品的电荷和亲脂性。例如，使用4，5-二羟基-1，3-苯二磺酸盐得到具有另外两个阴离子基团的放射性药品，由于磺酸盐在生理条件下将为阴离子。使用N-烷基取代的3，4-羟基吡啶酮将得到具有可变程度的亲脂性的放射性药品，取决于烷基取代基的大小。

掩蔽的捕获基团，M-T，能够暴露以形成暴露的捕获基团，T，能够固定在患者中有关的部位。所述的化合物的固定通过暴露的捕获基团和与病理性失调有关的或相关的物质之间的非受体介导的相互作用而实现。当与病理性失调有关的物质不是蛋白、胆固醇或脂质的时候，相互作用可为共价的或非共价的，条件是不是受体-介导的。

掩蔽的捕获基团(M-T)“掩蔽”(或降低了)诊断试剂与在组织内期望检测和/或成像和/或监测的病理性失调相关的物质之间的结合。一旦掩蔽的捕获基团(M-T)的掩蔽(M)通过酶裂解去除形成暴露的捕获基团(T)，则表现出增加的试剂的结合亲和力。这导致至少两种分子片段的物理分开，一种包含暴露的捕获基团和靶向基团，并且另一种为掩蔽的捕获基团的掩蔽部分。

本公开的化合物的必须以及任选的结构域或部分可以多种相互位置进行排列。尽管这些结构域可以在它们之间没有任何特定的分界线的形式存在(例如，掩蔽的捕获基团可为靶向基团的部分)，方便地表述为分开的分子单元。例如，可包含下述结构：

其中

S为包括MMP底物的靶向基团；

D为诊断成分；

M为捕获基团；

T为捕获基团的掩蔽基团；

各m、n、o、p和q相同或不同并且大于或等于1。通常m、n、o、p和q小于5，并通常地等于1。

所述的化合物可包括生理可接受的连接基团，连接化合物的功能结构域。在一种实施方案中，掩蔽的捕获基团任选地包括生理相容的连接基团，将掩蔽的捕获基团连接至本公开的化合物的其他功能结构域。通常，连接基团对诊断试剂的结合或成像增加功能没有显著的贡献。在一些情形下，基于合成的考虑，连接基团优选地存在。在其他的情形下，连接基团可促进掩蔽的捕获基团的生物活性的实施。连接基团的实例包括线性、支或环烷基、芳基、醚、多羟基、聚醚、聚胺、杂环、芳香基团、酰肼、肽、类肽或其他的生理相容共价连接或其组合。

在一些实施方案中，本公开的化合物具有约1至约10个靶向基团。在另一个实施方案中，所述的化合物具有约1至约5个靶向基团并且在另一个实施方案中，所述的化合物具有约一个靶向基团。

在公开的所述的化合物中，靶向基团为一或多种MMPs的底物，例如其中MMPs选自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14及其组合。在另一个实施方案中，MMPs选自MMP-2、MMP-9、MMP-14及其组合。

MMP底物包括肽序列。将肽序列可衍生自胶原、蛋白聚糖、层粘连蛋白、纤连蛋白、明胶、半乳凝集素-3、软骨连接蛋白、髓鞘碱性蛋白、激肽释放酶14、ladinin 1、内皮糖蛋白、内皮肽受体、层粘连蛋白α2链、磷酸调节中性内肽酶、ADAM 2、demoglein 3、整联蛋白β5、整联蛋白βv、整联蛋白β6、整联蛋白βx、整联蛋白β9、弹性蛋白、perlacan、巢蛋白(entactin)、玻连蛋白、生腱蛋白、巢蛋白(nidogen)、硫酸皮肤素、proTNF-α、聚集蛋白聚糖、转化蛋白酶、核心蛋白聚糖、组织因子通路抑制剂、糖蛋白、NG2蛋白聚糖、神经蛋白聚糖、PAI-3、大内皮肽-1、brevican/BEHAB、核心蛋白聚糖、FGFR-1、IGFBP-3、IL-1β、α₂-巨球蛋白、MCP-3、妊娠区蛋白、proMMP-1、proMMP-2、SPARC、P物质、β蛋白聚糖或牙本质。

在一些实施方案中，肽序列为Pro-X-X-Hy-(Ser/Thr)(SEQ ID NO：1)at P₃through P_2’，Gly-Leu-(Lys/Arg)at P₁ through P_2’，Arg residues at P₁ and P₂，IPEN-FFGV(SEQ ID NO：2)，BPYG-IGSP(SEQ ID NO：3)，HPSA-FSEA(SEQ ID NO：4)，GPQG-LLGA(SEQ ID NO：5)，GPAG-LSVL(SEQ ID NO：6)，GPAG-IVTK(SEQ ID NO：7)，DAAS-LLGL(SEQ ID NO：8)，RPAV-MTSP(SEQ ID NO：9)，PPGA-YHGA(SEQ ID NO：10)，LRAY-LLPA(SEQ ID NO：11)，SPYE-LKAL(SEQ ID NO：12)，TAAA-LTSC(SEQ ID NO：13)，GPEG-LRVG(SEQ ID NO：14)，GHAR-LVHV(SEQ ID NO：15)，QPVG-INTS(SEQ ID NO：16)，ELGT-YNVI(SEQ ID NO：17)，DVAQ-FVLY(SEQ ID NO：18)，DVAN-YNFF(SEQ ID NO：19)，HPVG-LLAR(SEQ ID NO：20)，KPQQ-FFGL(SEQ ID NO：21)，IPVS-LRSG(SEQ ID NO：22)，HVLN-LRST(SEQ ID NO：23)，DPES-IRSE(SEQ ID NO：24)，DPLE-FKSH(SEQ ID NO：25)，RPIP-ITAS(SEQ ID NO：26)，RVLG-LKAH(SEQ ID NO：27)，KVLN-LTDN(SEQ ID NO：28)，PPEA-LRGI(SEQ ID NO：29)，IVAM-LRAP(SEQ ID NO：30)，TAAA-ITGA SEQ ID NO：31)，Ac-PLG-Hphe-OL(SEQ ID NO：32)，Suc-PLG-Hphe-基(SEQ ID NO：33)，或Ac-POG-Hphe-L(SEQ ID NO：34)；

其中

X独立地为氨基酸残基；

Hy为疏水氨基酸残基；以及

G、A、V、L、I、M、F、P、S、T、Y、N、Q、D、E、K、R、H、B和O为本领域的普通技术人员公知的针对具体氨基酸的单字母缩写。

本公开的化合物可任选地包含螯合剂(“C”)。在本公开的化合物的一些实施方案中，螯合剂为能够形成回波发生物质-填充的脂质球或微气泡(microbubble)的表面活性剂。在一些在其他的实施方案中，螯合剂为具有选自下式的结合单元

以及

其中

各A¹独立地选自-NR¹⁹R²⁰、-NHR²⁶、-SH、-S(Pg)，-OH、-PR¹⁹R²⁰、-P(O)R²¹R²²、连接所述的靶向基团的化学键以及连接所述的连接基团的化学键；

各A²独立地选自N(R²⁶)，N(R¹⁹)，S、O、P(R¹⁹)，以及-OP(O)(R²¹)O-；

A³为N；

A⁴选自OH和OC(＝O)C_1-20烷基；

A⁵为OC(＝O)C_1-20烷基；

各E独立地选自被0-3个R²³取代的C_1-16亚烷基、被0-3个R²³取代的C_6-10亚芳基、被0-3个R²³取代的C_3-10亚环烷基、被0-3个R²³取代的杂环基-C_1-10亚烷基、被0-3个R²³取代的C_6-10芳基-C_1-10亚烷基、被0-3个R²³取代的C_1-10烷基-C_6-10亚芳基以及被0-3个R²³取代的亚杂环基；

E¹选自化学键以及E；

各自E²独立地选自被0-3个R²³取代的C_1-16烷基、被0-3个R²³取代的C_6-10芳基、被0-3个R²³取代的C_3-10环烷基、被0-3个R²³取代的杂环基-C_1-10烷基、被0-3个R²³取代的C_6-10芳基-C_1-10烷基、被0-3个R²³取代的C_1-10烷基-C_6-10芳基、以及被0-3个R²³取代的杂环基；

E³为被1-3个R³²取代的C_1-10亚烷基；

Pg为硫醇保护基；

R¹⁹和R²⁰各自独立地选自连接至连接基团的化学键、连接至靶向基团的化学键、氢、被0-3个R²³取代的C_1-10烷基、被0-3个R²³取代的芳基、被0-3个R²³取代的C_3-10环烷基、被0-3个R²³取代的杂环基-C_1-10烷基、被0-3个R²³取代的C_6-10芳基-C_1-10烷基和被0-3个R²³取代的杂环基；申请人去除了R19和R20为电子的可能性

R²¹和R²²各自独立地选自连接至连接基团的化学键、连接至靶向基团的化学键、-OH、被0-3个R²³取代的C_1-10烷基、被0-3个R²³取代的芳基、被0-3个R²³取代的C_3-10环烷基、被0-3个R²³取代的杂环基-C_1-10烷基、被0-3个R²³取代的C_6-10芳基-C_1-10烷基以及被0-3个R²³取代的杂环基；

各R²³独立地选自连接至连接基团的化学键、连接至靶向基团的化学键、＝O、卤素、三氟甲基、氰基、-CO₂R²⁴、-C(＝O)R²⁴、-C(＝O)N(R²⁴)₂、-CHO、-CH₂OR²⁴、-OC(＝O)R²⁴、-OC(＝O)OR²⁴、-OR²⁴、-OC(＝O)N(R²⁴)₂、-NR²⁴C(＝O)R²⁴、-NR²⁴C(＝O)OR²⁴、-NR²⁴C(＝O)N(R²⁴)₂、-NR²⁴SO₂N(R²⁴)₂、-NR²⁴SO₂R²⁴、-SO₃H、-SO₂R²⁴、-SR²⁴、-S(＝O)R²⁴、-SO₂N(R²⁴)₂、-N(R²⁴)₂、-NHC(＝S)NHR²⁴、＝NOR²⁴、NO₂、-C(＝O)NHOR²⁴、-C(＝O)NHNR²⁴R²⁴、-OCH₂CO₂H、2-(1-吗啉代)乙氧基、C_1-5烷基、C_2-4链烯基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基甲基、C_2-6烷氧基烷基、被0-2个R²⁴取代的芳基和杂环基；

各R²⁴独立地选自连接至连接基团的化学键、连接至靶向基团的化学键、氢、C_1-6烷基、苯基、苄基和C_1-6烷氧基；申请人去除了氰基、硝基、三氟甲基以及卤素，由于它们在大多数上述化合物中不可能存在，

R²⁶为键合至金属的配位键或肼保护基；

各R³²选自R³⁴、＝O、-CO₂R³³、-C(＝O)R³³、-C(＝O)N(R³³)₂、-CH₂OR³³、-OR³³、-N(R³³)₂和C₂-C₄链烯基；

各R³³独立地选自R³⁴、氢、C₁-C₆烷基、苯基、苄基和三氟甲基；以及

R³⁴为连接至所述的连接基团的化学键；

其中A¹、R¹⁹、R²⁰、R²¹、R²²、R²³、R²⁴和R³⁴中至少一个为键连至所述的连接基团或所述的靶向基团的化学键；申请人在该限制条件中加入了R19、20、21、22、24和34；是否可行？

在本公开的实施方案中，螯合剂具有下式结构：

其中

A^1a为键连至所述的连接基团的化学键；

A^1b、A^1c、A^1d和A^1e各自为OH；

A^3a、A^3b和A^3c各自为N；

E^a、E^b和E^c为C₂亚烷基；

E^d、E^e、E^f和E^g为被0-1个R²³取代的C₂亚烷基；以及

R²³为＝O。

在本公开的另一个实施方案中，螯合剂具有下式结构：

其中

A^1a、A^1b、A^1d和A^1e各自为OH；

A^1c为键连至所述的连接基团的化学键；

A^3a、A^3b和A^3c各自为N；

E^a、E^d、E^e、E^f和E^g为被0-1个R²³取代的C₂亚烷基；

E^b和E^c为C₂亚烷基；以及

R²³为＝O。

在本公开的另一个实施方案中，螯合剂螯合剂具有下式结构：

其中：

A^3a、A^3b、A^3c和A^3d各自N；

A^1a为键连至所述的连接基团的化学键；

A^1b、A^1c和A^1d各自为-OH；

E^a、E^c、E^g和E^e各自为被0-1个R²³取代的C₂亚烷基；

E^b、E^d、E^f和E^h各自为C₂亚烷基；以及

R²³为＝O。

在本公开的另一个实施方案中，螯合剂具有下式结构：

其中

A^1a为-NHR²⁶；

A^1b为NHR¹⁹；

E为化学键；

R¹⁹为被R²³取代的杂环基，所述的杂环基选自吡啶和嘧啶；

R²⁶为键合至金属的配位键或肼保护基；

R²³选自键连至所述的连接基团的化学键、C(＝O)NHR²⁴和C(＝O)R²⁴；以及

R²⁴为键连至所述的连接基团的化学键。

在本公开的另一个实施方案中，螯合剂具有下式结构：

其中

A^1a和A^1c各自为-S(Pg)；

A^1b为键连至所述的连接基团的化学键；

A^2a和A^2b各自为-NH；

E^a和E^d为被0-1个R²³取代的C₂亚烷基；

E^b为被0-1个R²³取代的C_1-3亚烷基；

E^c为CH₂；以及

R²³为＝O；

在本公开的另一个实施方案中，螯合剂具有下式结构：

其中：

A^1a为键连至所述的连接基团的化学键；

A^2a为NH；

A^2b为-OP(O)(R²¹)O-；

A^2c和A^2d各自为O；

E^a为被R²³取代的C₁亚烷基；

E^b为被0-1个R²³取代的C₂亚烷基；

E^c和E^d为C₁亚烷基；

E^2a和E^2b各自为被0-1个R²³取代的C_1-16烷基；

R²¹为-OH；以及

R²³为＝O。

本公开的诊断试剂的关键特征之一在于一旦MMP底物结构域靶向诊断试剂至患者中靶器官、间隔或区域的附近，其中该处MMP活性与有关的病理性失调相关，包含诊断成分的诊断试剂被捕获，即，保持合适成像的一段时间但是通常地在不引起有害作用的期间内从体内清除。诊断试剂的捕获可利用掩蔽的捕获基团实现。当掩蔽的捕获基团被“暴露”的时候，容许包含诊断成分的诊断试剂的部分固定在患者有关的部位。

存在许多机制可使暴露的捕获基团在有关的物质中被捕获。合适的捕获机制包括不限于：

(1)由于包含暴露的捕获基团的诊断试剂相对于包含掩蔽的捕获基团的诊断试剂的亲脂性增加导致的捕获；

(2)由于包含暴露的捕获基团的诊断试剂通过脂质双层插入导致的捕获；

(3)由于在包含暴露的捕获基团的诊断试剂和与有关的病理性失调相关的物质之间形成共价键导致的捕获；以及

(4)通过细胞运载体基团导致的捕获。

由于包含暴露的捕获基团的诊断试剂相对于包含掩蔽的捕获基团的诊断试剂的亲脂性增加导致的捕获，可以许多不同的方式实现，包括，例如，在诊断试剂的一些结构域中加入亲脂性官能团或亲水性官能团。

在本公开的实施方案中，并在包含诊断成分或结构域的诊断试剂的部分，化合物加入亲脂性官能团。一旦MMP裂解MMP底物，包含诊断成分或结构域的片段具有更大的有效的亲脂性从而通过非共价结合与有关的亲脂性物质相互作用，如在软的充满脂质-核心包含高水平氧化脂蛋白的冠状斑。在其他的实施方案中，暴露的捕获基团自身包括亲脂性官能团。亲脂性官能团可衍生自长链烷基、长链链烯基、长链炔基、环烷基、或氨基酸的亲脂性残基。在一个实例中，亲脂性官能团包含至少6个碳原子。在另一个实例中，亲脂性官能团包含12个碳原子，并且在另一个实例中，其包含18个碳原子。长链烷基、长链链烯基、长链炔基和环烷基可任选地被芳香环取代。长链链烯基和长链炔基基团可任选地具有另外的不饱和的位置，包括双或三键或其组合。此外，长链烷基、长链链烯基、长链炔基和环烷基可任选地包含不能被离子化的官能团，如，例如，醚、硫醚、醇、醛、酮；以及在生理pH下被认为非碱的胺，如吡啶和苯胺。亲脂性官能团可衍生自氨基酸，如，但不限于，缬氨酸、正缬氨酸、亮氨酸、正亮氨酸、异亮氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、高苯基丙氨酸、四氢异喹啉-3-羧酸、甲硫氨酸、O-甲基丝氨酸和吡啶基丙氨酸。

在其他的实施方案中，基质金属蛋白酶底物还包括亲水性官能团。亲水性官能团可衍生自极性的氨基酸，如，例如，天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、磺丙氨酸和鸟氨酸；糖以及极性的聚合物，如，例如，聚亚烷基二醇、线性的聚胺和dendrimers。或者，官能团可加入以降低MMP底物的亲脂性。合适的官能团包括但不限于，胺、醇、羧酸、磺酸、磷酸和膦酸。一旦MMP裂解MMP底物，包含诊断成分或结构域的片段具有更大的有效的亲脂性并且从而通过非共价结合与有关的亲脂性物质相互作用。

实施例1至40和58证实了由于亲脂性增加导致的捕获。文献报道了更大亲脂性的化合物比较低亲脂性化合物以更慢的速率通过组织。参见，例如，Circ.Res.，2000，879-884。在实施例1至40和58中，诊断成分连接至MMP底物分子的更亲脂性末端。一旦被MMPs裂解，极性的氨基酸被去除，导致亲脂性的总体增加。

另一种捕获方法是诊断试剂的暴露的捕获基团的脂质双层插入。在该捕获机制中，通过连接至MMP底物肽，亲脂性基团可防止将其自身插入到脂质双层中。通过MMPs和氨基肽酶N(APN)去除肽暴露捕获基团，导致包含靶向基团的诊断试剂部分在有关的脂质双层物质中被截留。已经报道氨基肽酶存在于冠状斑中，例如，以比正常大动脉壁更高的浓度(Atheroschlerosis，1971，14，169-180)，并且见于大多数细胞类型中，包括巨噬细胞(Adv.Exp.Med.Biol.，2000，477，1-24)。通常地，保留在脂质双层-插入基团上的官能基团(X，见下面)尽可能地小且无胺性。合适的实例包括羟基链烷酸、羟基苯基链烷酸、吡啶盐、氨基苯基链烷酸、烯胺和4-氨基吡啶盐。许多不同的化学物质可用来掩蔽脂质双层插入基团，其中残留的官能团X为基团如醇、苯酚以及弱碱性的胺。参见，例如，J.Pharm.Sci.，1997，86，765-767；Advanced Drug Delivery Reviews，1989，3，39-65。

A.羟基链烷酸

实施例19-23证实了羟基链烷酸插入到脂质双层中。在活的细胞悬浮液的实验中，观察到细胞结合(实施例47)。对氨基苄基醇为针对许多这些化合物的自身-参与(immolative)的掩蔽基团。去除MMP底物肽产生供电子的胺，后者去稳定与碳酸酯氧连接的化学键。导致p-氨基苄基醇、二氧化碳以及羟基链烷酸的快速消去。实施例24为模型化合物，用于测定氨基肽酶将从掩蔽基团上去除最后MMP底物氨基酸。在该实施例中暴露的基团为酰肼。实施例25利用同样的间隔基团，但是暴露了羟基链烷酸。对于利用p-氨基苄基醇作为掩蔽基团的实例(那里称为前药)，参见Bioorg.Med.Chem.Lett.，2002，12，217-219。

B.羟基苯基链烷酸

实施例26显示了羟基苯基链烷酸将与细胞结合。预示性的实施例51和52举例说明了利用两个自身-参与的掩蔽基团，利用如下所示的环化反应释放苯酚。去除MMP底物肽将非亲核的酰胺转化成亲核的胺，促进环化反应。

C.吡啶盐(实施例53)

从吡啶、苯胺以及其他的胺产生的季铵盐可用作带有前药连接基团的离去基，如下面所示的p-氨基苄基。思想与如上针对p-氨基苄基醇描述的相同。暴露的胺的供电子特性去稳定苄基-氮键，导致叔胺的快速消去(参见，例如，J.Pharm.Sci.，1982，71，729-735)。

D.氨基苯基链烷酸(实施例55)

与上述吡啶实施例类似，苯胺在生理pH下将保持不被质子化并因此将容许利用脂质双层。靶组织中的氨基肽酶将识别分子作为底物并且去除最终的氨基酸，暴露苯胺。

E.烯胺(实施例54)

MMP底物肽的去除将产生伯胺的烯胺，然后互变异构化得到亚胺并且然后水解得到酮。酮足够非极性容许脂质双层插入。

F.4-氨基吡啶盐(实施例56)

MMP底物可被MMP和APN去除，产生电子供给环形成取代的1H-吡啶-4-亚胺。这将水解形成1H-吡啶-4-酮。

在一些实施方案中，暴露的捕获基团能够与病理性失调相关的物质形成共价键。合适的暴露的捕获基团可与所述的物质中的基团形成迈克尔加成物、腙、β-砜、席夫碱、二硫化物、环己烯、环己烯衍生物，或肟。迈克尔加成物可在马来酰亚胺和胺或硫醇之间形成。腙可在肼或酰肼和醛或酮之间形成。β-砜可由亲核试剂对乙烯基砜的1，4-加成而形成。席夫碱可由胺(芳基或脂肪族)与醛或酮的缩合而形成。二硫化物可从两个硫醇的反应而形成。环己烯(或其衍生物产物)可从二烯和亲双烯体的Diels-Alder缩合而形成。肟可从酮或醛与O-烷氧基羟基胺的反应而形成。在其他的实施方案中，本公开的化合物的官能团可与靶蛋白中的精氨酸残基反应并形成共价键。

诊断试剂可通过形成稳定的腙(实施例6～18)而被捕获。斑中LDL的氧化导致形成醛。公知的是醛与肼和酰肼反应以形成如下所示的稳定的腙。在这些实施例中，MMPs和氨基肽酶(例如，APN)将去除掩蔽肽以产生游离的肼或酰肼，随后将与醛反应形成稳定的腙，将报告基团捕获在斑中。

实施例6～9描述了模型化合物，设计用来证实APN将去除MMP底物序列中的最终氨基酸以暴露反应活性的官能团。实施例10～18表示完整的肽-酰肼。这些用来测试作为MMPs的底物。

诊断试剂可通过与精氨酸(实施例57)或任何内源性生物分子反应而被捕获。1，2-二羰基化合物容易与蛋白中精氨酸的胍基侧链反应，并且该反应为衍生肽和蛋白的方法的基础。在实施例57中，二羰基利用乙烯基酯被掩蔽。连接基团属于三甲基“锁”类型(参见J.Org.Chem.，1997，62，1363-1367)。

另一种捕获机制涉及通过细胞运载体基团捕获，如在实施例59中所描述。大量的小肽已经显示具有通过细胞膜的能力，并且当与这些肽偶联之后，通常不能通过渗透通过细胞膜的分子将能够被转运到细胞中(参见Bioconj.Chem.，2001，12，825-841)。在实施例60中，报告基团偶联至转运肽的C-端，而MMP底物肽偶联至赖氨酸的侧链，从而防止进入细胞直到被MMPs和APN去除。

其他的捕获机制通过结合可溶酶蛋白，如MMPs、组织蛋白酶，氨基肽酶、neprolysin等，或非酶蛋白，如白蛋白的配体而被捕获。合适的配体包括药物、亲脂性有机分子、两亲性有机分子、卟啉、甾族化合物、脂质、激素、肽、蛋白、寡核苷酸(DNA、RNA或其化学-修饰的形式)，抗体(包括单克隆以及基因工程形式及其片段)或其他的生物分子，所述的其他生物分子公知结合至少一种组织中包含用于成像的生物活性可溶酶蛋白或非酶蛋白。在一个实施方案中，配体的结合是可逆的以促进成像后从患者中的排泄。可溶的酶蛋白以及可溶的非酶蛋白的合适的实例包括公开在US2002/064476中的那些，所述的公开这里以其整体引入作为参考。

应该理解为本公开的化合物可附加合适的化学基团进行修饰以提高选择性的生物性质。所述的修饰是本技术领域中公知的并且包括增加生物渗透进入给定的生物间隔(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)，增加口服利用度、增加溶解度以容许注射给药、改变代谢以及改变排泄速率。

应该理解为本公开的化合物可在溶液中，并在药物组合物以及在体内采用多种构像以及离子形式。尽管这里描述的具体的本公开化合物为具体的构像以及离子形式，这些化合物的其他的构像以及离子形式是可以预见的并且包含在这些描述中。

可用于本公开的药物组合物的可药用载体、佐剂和溶媒包括，不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白，如人血清白蛋白，缓冲剂物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、TRIS(三(羟基甲基)氨基-甲烷)，饱和的植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧基甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-ne-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

根据本公开，药物组合物可为无菌注射制剂的形式，例如无菌注射水或油悬浮液。该悬浮液可根据本领域公知的技术进行配制，使用合适的分散或湿润试剂和混悬试剂。无菌注射制剂还可为无菌注射溶液或在无毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的悬浮液，例如为在1，3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的溶媒和溶剂为水、Ringer’s溶液以及等张的氯化钠溶液。此外，无菌、不挥发性油常规用作溶剂或悬浮溶媒。为了这种目的，可以使用任何混和的不挥发性油，包括合成的单-或二-甘油酯。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备制备注射液，以及天然的可药用的油，如橄榄油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙基化的形式。这些油溶液或悬浮液还可包含长链的醇稀释剂或分散剂。

在一些情形下，取决于注射的剂量以及速率，血浆蛋白的结合位点可被前药以及活化剂饱和。这将导致蛋白-结合的试剂的级分下降并影响其半衰期或耐受性以及试剂的有效性。在这些情形下，期望注射前药试剂结合无菌白蛋白或血浆替代溶液。或者，可以使用包含造影剂的仪器/注射器并将其与抽取到注射器中的血液混和；然后再注射到患者体内。

本公开的化合物、诊断试剂和药物组合物可通过口服、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻内、口含、阴道或通过植入的药物长效制剂进行给药，长效制剂包含常规的无毒性可药用载体、佐剂和溶媒。这里使用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、肝内，损害部位内以及颅内注射或输液技术。

当经口服给药的时候，本公开的药物组合物可以任何的口服可接受剂型给药，包括不限于，胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在口服使用的片剂的情形下，常规使用的载体包括乳糖以及玉米淀粉。润滑试剂，如硬脂酸镁，也通常地加入。对于以胶囊形式口服给药，有用的稀释剂包括乳糖以及干玉米淀粉。当需要水悬浮液用于口服的时候，活性成分与乳化剂和悬浮剂结合。如果需要，可加入一些甜味剂、调味剂或着色剂。

或者，当以栓剂的形式对直肠给药的时候，本公开的药物组合物可通过将药物与合适的无刺激性的赋形剂进行混和而制备，所述的赋形剂在室温下为固体但是在直肠温度下为液体，并因此在直肠中熔化以释放药物。所述的物质包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

如前所述，本公开的药物组合物还可经局部给药，尤其是当治疗的靶标包括利用局部给药容易接近的区域或器官的时候，包括眼睛、皮肤或肠道下端。合适的局部制剂容易制备成适于用于各种区域或器官。

肠道下端的局部应用可以直肠栓剂制剂(见上)或在合适的灌肠剂进行给药。还可以使用局部-透皮贴剂。

对于局部应用，药物组合物可配制成包含悬浮或溶解在一或多种载体中的活性组分的合适软膏。局部给药本公开化合物的载体包括，不限于，矿物油、液体凡士林油、白色的凡士林油、丙二醇、聚-氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化的蜡和水。或者，药物组合物可配制成合适的洗液或乳膏，包含悬浮或溶解在一或多种载体中的活性组分。合适的载体包括，不限于，矿物油、山梨聚糖单硬脂酸酯、聚山梨酯60、鲸蜡基酯蜡、十六烷基(cetearyl)醇、2-辛基十二烷醇、苄基醇和水。

对于眼睛使用，药物组合物可配制成在等张的pH调节的无菌盐水中的微粉化的悬浮液，或者，通常地，在等张的pH调节的无菌盐水中的溶液，存在或者不存在防腐剂如苯扎氯铵。或者，对于眼睛使用，药物组合物可配制成软膏如凡士林油。

为了通过鼻腔气雾剂或吸入给药，本公开的药物组合物可根据本领域公知的药物制剂技术进行配制并可配制成盐水溶液，采用苄基醇或其他的合适的防腐剂、吸收促进剂以提高生物利用度、碳氟化合物，和/或其他的常规的溶解或分散剂。

可与载体物质混和以产生单一剂型的活性成分的用量根据治疗的主体以及具体的给药方式而变化。典型的制剂包括从约5％至约95％活性化合物(w/w)。通常地，所述的制剂包含从约20％至约80％活性化合物。

对于静脉以及其他的给药方式，可接受的剂量范围为从约0.001至约1.0mmol/kg体重，典型的活性成分化合物的剂量范围为从约0.001至约0.5mmol/kg体重。甚至更典型地为从约0.01至约0.1mmol/kg，并且最典型的活性成分化合物的剂量为从约0.02至约0.05mmol/kg。

正如本领域的普通技术人员将意识到，可能需要低于或高于上述的剂量。对任何具体的患者的具体的给药方案取决于多种因素，包括使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速率、药物联用以及接诊医生的判断。

应该意识到优选的药物组合物为那些包括优选的本公开的化合物以及诊断试剂。

本公开的另一方面涉及用于制备诊断试剂的诊断试剂盒，所述的诊断试剂用于检测、成像和/或监测与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调。本公开的诊断试剂盒包括一或多个小瓶，包含无菌、无热源制剂，所述的制剂包括预定量的本公开的试剂，以及任选地其他的成分如一或两种辅助性配体如tricine和3-[双(3-磺基苯基)膦]苯磺酸(TPPTS)、还原剂、转移配体、缓冲剂、冻干剂、稳定剂、增溶剂以及抑菌剂。试剂盒还可包括还原剂，如，例如，锡(II)。

制剂中包括一或多种任选的组分通常将改善终端使用者合成诊断试剂的方便性、制备试剂盒的方便性、试剂盒的贮存期限或放射药物的稳定性以及贮存期限。包括含肼或腙结合基团的试剂的诊断试剂盒需要包括一或两种辅助性配体。包含制剂所有或部分的一或多个小瓶将独立地为无菌溶液或冻干固体的形式。

本公开的另一方面为诊断试剂盒，用于制备用于诊断心血管疾病、感染疾病、炎性疾病和癌症的诊断试剂。本公开的诊断试剂盒包括一或多个小瓶，包含无菌、无热源制剂，所述的制剂包括预定量的在本公开中描述的螯合剂、稳定的共配体、还原剂以及任选地其他的组分如缓冲剂、冻干剂、稳定剂、增溶剂以及抑菌剂。

制剂中包括一或多种任选的组分通常将改善终端使用者合成诊断试剂的方便性、制备试剂盒的方便性、试剂盒的贮存期限或放射药物的稳定性以及贮存期限。在制剂中包括任选的组分实现的改善，必须相对于制剂增加的复杂程度以及制备试剂盒增加的成本进行权衡。包含制剂所有或部分的一或多个小瓶将独立地为无菌溶液或冻干固体的形式。

用于诊断试剂及其试剂盒的制备的缓冲剂包括不限于磷酸盐、柠檬酸盐、磺基水杨酸盐以及乙酸盐。更完整的清单可见于United StatesPharmacopeia。

用于诊断试剂及其试剂盒的制备的冻干剂包括不限于甘露醇、乳糖、山梨醇、葡聚糖、Ficoll和聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。

用于诊断试剂及其试剂盒的制备的稳定剂包括不限于抗坏血酸、半胱氨酸、二羟基丙硫醇、亚硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、龙胆酸和纤维醇。

用于诊断试剂及其试剂盒的制备的增溶剂包括不限于乙醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇、聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯、山梨聚糖单油酸酯、聚山梨酯、聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)聚(氧乙烯)嵌段共聚物(Pluronics)和卵磷脂。典型的增溶剂为聚乙二醇和Pluronics共聚物。

用于诊断试剂及其试剂盒的制备的抑菌剂包括不限于苄基醇、苯扎氯铵、氯丁醇以及对羟基苯甲酸甲基酯、丙基酯或丁基酯。

诊断试剂盒中的组分还可充当多于一种功能。还原剂还可充当稳定剂，缓冲剂还可充当转移配体，冻干剂还可充当转移、辅助性或共配体等。

制剂中各种组分的预定量利用多种考虑因素进行确定，在一些情形下对一种组分是特定的，在其他的情形下取决于另一种组分的用量或任选的组分的存在及其用量。通常，使用各种组分的最小量，将得到制剂的期望效果。制剂的期望效果为终端实施使用者能够合成诊断试剂以及具有高度的把握：诊断试剂能够安全地给药于患者并将提供关于患者疾病状态的诊断信息。

本公开的诊断试剂盒还能够包含书面使用说明，指导终端实施使用者合成诊断试剂。这些使用说明可附着到一或多个小瓶上或附着到容器上，其中所述的小瓶或多个小瓶进行包装以便于运输或可以为单独的插页，称为包装插页。

在制剂的最终形式中对终端使用者提供X-射线造影剂、超声造影剂和核磁共振成像造影剂的金属药物，通常地包含一个小瓶中，为冻干固体或水溶液的形式。终端使用者用水或盐水重构冻干的固体并抽取患者的剂量或简单地从提供的水溶液制剂中抽取所述的剂量。

这些诊断试剂，无论是用于γ闪烁扫描术、正电子发射断层摄影术、MRI、超声或x-射线成像增强，尤其可用于检测并监控心血管疾病随时间的变化。由于MMPs的过表达程度与心脏或血管组织的降解有关(JACC，1999，33：835-842)，因此可能评价心血管疾病损伤(即，斑)的严重程度以及目前的活性，通过定量在有关疾病位点这些成像试剂的局部化程度。此外，利用这些诊断试剂有可能监测药物治疗制定有关的MMP活性的变化，所述的药物治疗将减缓血管系统中动脉粥样硬化变化的进程或引起逆转或与充血性心力衰竭有关的心肌降解的逆转。因此，应该意识到心脏中的MMPs成像通常可用于检测、定位和监测多种心脏疾病变化的进程/复原，所述的心脏疾病与心脏组织中的MMP含量改变有关。

本公开的方法可用来检测、成像、和/或监测的病理性失调包括癌症(尤其是在转移前的细胞外基质的降解)，动脉粥样硬化(尤其是动脉粥样硬化斑的纤维外壳的降解导致破裂、血栓形成以及心肌梗塞或不稳定心绞痛)，类风湿性关节炎和骨关节炎(软骨聚集蛋白聚糖和胶原的破坏)，牙周病、炎症、自身免疫性疾病、器官移植排斥、溃疡(角膜、表皮和胃)、硬皮病、大疱性表皮松解症、子宫内膜异位、肾脏疾病和骨病。本公开的化合物、诊断试剂、组合物、试剂盒以及方法尤其可用于终端动脉粥样硬化，包括冠状动脉粥样硬化和脑血管动脉粥样硬化和癌性肿瘤。本公开的化合物、诊断试剂、组合物、试剂盒以及方法尤其可用于诊断处于患短暂脑缺血发作或中风高风险的或处于患急性心肌缺血、心肌梗塞或心源性死亡高风险的患者。

本公开的超声造影剂包括连接至或掺入到生物相容气体的微气泡、液体载体以及表面活性剂微球中的多个基质金属蛋白酶底物基团，还包括在靶向基团和微气泡之间的任选的连接基团。在上下文中，术语“液体载体”指水溶液并且术语“表面活性剂”指在溶液中产生界面张力下降的任何两亲性物质。用于形成表面活性剂微球的合适的表面活性剂公开在EP-A-0,727,225中，这里整体引入作为参考。术语“表面活性剂微球”包括纳米球、脂质体、小囊等。生物相容气体可为气体，或碳氟化合物，如C_3-5全氟烷烃，提供了回波发生性质方面的差异并因此在超声成像中形成反差。气体被包封或包含在微球中，所述的微球连接至生物导向的基团，任选地通过连接基团。所述的连接可为共价的、离子性的或通过范德华力。所述的造影剂的具体实例包括脂质包封的全氟化碳，带有多个MMP抑制化合物。

本公开的X-射线造影剂包括一或多个基质金属蛋白酶底物靶向基团，连接至一或多个X-射线吸收原子或原子数大于20或更大的“重”原子上，还包括在靶向基团和X-射线吸收原子之间的任选的连接基团。X-射线造影剂中通常使用的重原子为碘。最近，X-射线造影剂包括金属螯合物(US-A-5,417,959)以及包括许多金属离子的多螯合物(US-A-5,679,810)已经被公开了。更最近地，多核簇配合物已经公开了作为X-射线造影剂(US-A-5,804,161、US-A-5,458,869、US-A-5,614,168、US-A-5,482,699和US-A-5,932,190)。

本公开的MRI诊断试剂包括一或多种基质金属蛋白酶底物靶向基团，连接至一或多种顺磁性金属离子，还包括在靶向基团和顺磁性金属离子之间的任选的连接基团。顺磁性金属离子为金属配合物或金属氧化物粒子的形式。US-A-5,412,148和US-A-5,760,191描述了顺磁性金属离子的螯合剂用于MRI造影剂的实例。US-A-5,801,228、US-A-5,567,411和US-A-5,281,704，描述了多螯合剂用于配合多于一个顺磁性金属离子用于MRI造影剂的实例。US-A-5,520,904描述了包括顺磁性金属离子用作MRI造影剂的微粒组合物。

本公开的诊断试剂可通过数种方法进行合成：

(1)一种方法涉及合成靶向MMP底物基团，以及一或多种底物基团与一或多个金属螯合剂或结合基团的直接连接或连接至包含顺磁性金属离子或重原子的固体颗粒或连接至回波发生气体微气泡。

(2)另一种方法涉及将MMP底物基团连接至连接基团，然后连接至一或多个金属螯合剂或结合基团或连接至包含顺磁性金属离子或重原子的固体颗粒或连接至回波发生气体微气泡。

(3)另一种方法涉及其中MMP底物连接至连接基团的部分的合成，通过将带有连接基团的残基掺入到MMP底物的合成中。然后将形成的部分连接至一个或多个金属螯合剂或结合基团或连接至包含顺磁性金属离子或重原子的固体颗粒或连接至回波发生气体微气泡。

(4)另一种方法涉及带有连接基团片段的MMP底物的合成，其中的一个或多个片段然后连接至其他的连接基团并且然后连接至多个金属螯合剂或结合基团或连接至包含顺磁性金属离子或重原子的固体颗粒或连接至回波发生气体微气泡。

任选地带有连接基团，Ln，或连接基团的片段的MMP底物基团，可使用对本领域的普通技术人员公知的标准合成的方法进行合成。

通常，肽、多肽和肽模拟物通过下述方法延长：对C-端残基的α-胺脱保护并使用描述的方法通过肽连接偶联下一个合适地保护的氨基酸。反复脱保护和偶联步骤直到得到期望的序列。这种偶联用组成氨基酸以逐步的方式进行，或片段的缩合方式进行(2至数个氨基酸)，或两种方法的结合，或根据最初描述在J.Am.Chem.Soc.，1963，85，2149-2154中的方法进行固相肽合成。

肽、多肽和肽模拟物还可使用自动合成设备进行合成。除了前述以外，肽、多肽和肽模拟物合成的步骤记载在Stewart和Young，Solid PhaseSynthesis，2nd ed，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL(1984)；Gross，Meienhofer，Udenfriend，Eds.，The peptides：Analysis，Synthesis，Biology，Vol.1，2，3，5，and 9，Academic Press，New York，(1980-1987)；Bodanszky，Peptide Chemistry：APractical Textbook，Springer-Verlag，New York(1988)；以及Bodanszky等，ThePractice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，New York(1984)中。

在两个氨基酸衍生物、氨基酸和肽、多肽或肽模拟物、两个肽、多肽或肽模拟物片段之间的偶联或肽、多肽或肽模拟物的环合可使用标准偶联步骤进行，如叠氮化合物方法、混和碳酸酐(氯甲酸异丁基酯)方法、碳二亚胺(二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或水-溶碳二亚胺)方法、活泼酯(对硝基苯基酯、N-羟基琥珀酰亚胺酯)方法、Woodward试剂K方法、羰基二咪唑方法，磷试剂如BOP-Cl，或氧化-还原方法。这些方法(尤其是碳二亚胺)中的一些可通过加入1-羟基苯并三唑而提高。这些偶联反应可在溶液(液相)或固相中进行。

组成氨基酸或氨基酸模拟物的官能团通常地在偶联反应期间被保护异避免形成非期望的键连。可使用的保护基列在Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley & Sons，New York(1981)and The peptides：Ahalysis，Synthesis，Biology，Vol.3，Academic Press，New York(1981)中。

C-端残基的α-羧基可利用酯进行保护，后者可裂解的得到羧酸。这些保护基包括：

(1)烷基酯如甲基和叔丁基酯；

(2)芳基酯如苄基和取代的苄基酯，或

(3)可被温和的碱处理或温和的还原方式裂解的酯，如三氯乙基和苯甲酰甲基酯。

在固相的情形下，C-端氨基酸连接至不溶的载体(通常为聚苯乙烯)上。这些不溶的载体包含与羧基反应的基团，形成的化学键对延长条件稳定但后续很容易裂解。实例包括：肟树脂(DeGrado和Kaiser(1980)J.Org.Chem.45，1295-1300)、氯或溴甲基树脂、羟基甲基树脂和氨基甲基树脂。许多这些树脂是商业可得到的，并且已经连接了期望的C-端氨基酸。

各种氨基酸的α-氨基通常地被保护。可使用本领域中公知的任何保护基。这些实例为：

(1)酰基型如甲酰基，三氟乙酰基、邻苯二甲酰以及对甲苯磺酰基；

(2)芳香的氨基甲酸酯型如苄氧基羰基(Cbz)以及取代的苄氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧基羰基和9-芴基-甲氧基羰基(Fmoc)；

(3)脂肪族氨基甲酸酯型如叔丁氧基羰基(Boc)，乙氧基羰基，二异丙基甲氧基羰基和烯丙基氧基羰基；

(4)环烷基氨基甲酸酯型如环戊氧基羰基和金刚烷基氧基羰基；

(5)烷基型如三苯基甲基和苄基；

(6)三烷基甲硅烷如三甲基甲硅烷；以及

(7)含硫型如苯基硫代羰基和二硫杂琥珀酰基(succinoyl)。

典型的α-氨基保护基为Boc或Fmoc。许多用于肽合成合适地进行了保护的氨基酸或氨基酸模拟衍生物是商业可得到的。

α-氨基保护基在偶联下一个氨基酸之间被裂解。当使用Boc基团的时候，选择的方法为三氟乙酸，纯的或在二氯甲烷中，或HCl在二烷中。形成的铵盐然后在偶联之前中和或原位用碱性溶液如水性缓冲剂，或叔胺的二氯甲烷或二甲基甲酰胺溶液处理。当使用Fmoc基团的时候，选择的试剂为哌啶或取代的哌啶的二甲基甲酰胺溶液，但是可以使用任何仲胺或碱的水溶液。脱保护在0℃和室温之间的温度下进行。

带有侧链官能团的任何氨基酸或氨基酸模拟物通常地在制备肽的过程中被保护起来，使用任何上述基团。本领域普通技术人员将意识到那些侧链官能团的合适保护基的选择以及使用将取决于氨基酸或氨基酸模拟物以及在肽、多肽或肽模拟物中存在的其他的保护基。所述的保护基的选择非常重要，因为在α-氨基的脱保护和偶联期间必须不被去除。

例如，当Boc选择用于α-胺保护的时候，下述的保护基是可以接受的：对甲苯磺酰基(tosyl)基团和硝基适于精氨酸；苄氧基羰基、取代的苄氧基羰基、对甲苯磺酰基或三氟乙酰基适于赖氨酸；苄基或烷基酯如环戊基适于谷氨酸和天冬氨酸；苄基醚适于丝氨酸和苏氨酸；苄基醚、取代的苄基醚或2-溴苄氧基羰基适于酪氨酸；对甲基苄基、对甲氧基苄基、乙酰胺基甲基、苄基，或叔丁基磺酰基适于半胱氨酸；以及色氨酸的吲哚可不进行保护或用甲酰基保护。

当Fmoc选择用于α-胺保护的时候，通常叔丁基保护基是可以接受的。例如，Boc可用于赖氨酸，叔丁基醚用于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸和叔丁基酯用于谷氨酸和天冬氨酸。

一旦肽、多肽或肽模拟物延长或环肽或肽模拟物的延长和环化完成，所有的保护基被去除。对于液相合成，保护基可通过选择的保护基所决定的任何方式被去除。这些步骤对本领域的普通技术人员而言是公知的。

当固相合成用于合成环肽或肽模拟物的时候，肽或肽模拟物应该从树脂上去除，而不是同时从官能团上去除保护基，因为可能干扰环化步骤。因此，如果肽或肽模拟物在溶液中进行环化，需要选择裂解条件以同时产生游离的α-羧酸以及游离的α-氨基，不同时去除其他的保护基。或者，肽或肽模拟物通过肼解可从树脂上去除并且然后利用叠氮化物的方法进行偶联。另一种非常方便的方法涉及在肟树脂上肽或肽模拟物的合成，然后通过分子内的亲核置换离开树脂，产生环肽或肽模拟物(Tetrahedron Letters，1990，43，6121-6124)。当使用肟树脂的时候，通常选择Boc保护策略。然后，去除侧链保护基的优选的方法通常涉及用包含添加剂如二甲基硫醚、苯甲醚、苯甲硫醚，或对甲酚的无水HF在0℃处理。肽或肽模拟物的裂解也可以其他的酸试剂如三氟甲烷磺酸/三氟乙酸混合物实现。

用于本公开非常见的氨基酸可利用对本领域的普通技术人员而言熟悉的标准方法进行合成(The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology，Vol.5，pp.342-449，Academic Press，New York(1981))。N-烷基氨基酸可使用以前描述的步骤进行制备(Cheung等，Can.J.Chem.，1977，55，906；Freidinger等，J.Org.Chem.，1982，48，77)。

连接基团与MMP底物的连接；螯合剂或结合单元与底物或与连接基团的连接；以及带有连接基团的片段的底物与剩余的连接基团的连接，联合形成基团、MMP底物-连接基团，以及然后连接至螯合剂可利用标准技术实现。这些包括，不限于，酰胺化、酯化、烷基化以及形成脲或硫脲。进行这些连接的步骤可见于Brinkley，M.，Bioconjugate Chemistry，1992，3，1中。

许多方法可用于将MMP底物连接至包含顺磁性金属离子或重原子的固体颗粒，通过本领域普通技术人员的固体颗粒的表面修饰。通常，靶向基团或靶向基团和连接基团的结合连接至与固体颗粒的表面成分发生反应的偶联基团。偶联基团可为任何数目的甲硅烷，后者与固体颗粒表面的羟基反应，如在US-A-6,254,852中所描述的，并且还包括多膦酸酯、聚羧酸酯、聚磷酸酯或其混合物，其与固体颗粒的表面偶联，如在US-A-5,520,904中所描述的。

许多反应流程可用来连接MMP底物，S，至表面活性剂微球，X3。这些在下述反应流程中举例说明，其中F表示形成表面活性剂微球的表面活性剂基团。

酰化反应：

其中Y为离去基或活泼酯

二硫化物偶联：

磺酰胺偶联：

还原酰胺化：

在这些反应流程中，取代基F和S也可颠倒。

连接基团Ln可发挥数种作用。首先，其提供了在金属螯合剂或结合基团，Ch，包含顺磁性金属离子或重原子的固体颗粒，X2，以及表面活性剂微球，X3，以及一或多个MMP底物，S，之间的间隔基团，以将基团Ch-X、Ch-X1、X2和X3对S的识别序列与心血管病理有关的MMPs的相互作用的干扰的可能性降低到最低。在试剂中加入连接基团的必要性取决于S、Ch-X、Ch-X1、X2和X3。如果Ch-X、Ch-X1、X2和X3在基本上不降低其抑制MMPs能力的情形下不能连接至S，则使用连接基团。连接基团还提供了独立地连接多个底物到一个基团上的手段，所述的一个基团连接至Ch-X、Ch-X1、X2，或X3。

连接基团还提供了掺入药代动力学修饰进入本公开的诊断试剂的手段。药代动力学修饰剂发挥导向注射药物的生物分布而不是通过靶向基团与心血管病理中表达的MMPs的相互作用。许多官能团可发挥药代动力学修饰剂，包括但不限于，碳水合物，聚亚烷基二醇、肽或其他的聚氨基酸以及环糊精。修饰剂可用来提高或降低亲水性以及提高或降低血液清除速率。修饰剂还可用来导向药物的清除途径。优选的药代动力学修饰剂为那些产生中度至快速的血液清除以及增加的肾脏排除的物质。

选自金属螯合剂或结合基团以形成稳定的配合物，金属离子根据具体的应用进行选择。选择用于诊断放射性药品的螯合剂或者键合基团以与具有可成像γ射线或正电子发射，如^99mTc、⁹⁵Tc、¹¹¹In、⁶²Cu、⁶⁰Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y的放射性同位素形成稳定的配合物。

锝、铜和镓同位素的螯合剂选自二胺二硫醇、单胺-单酰胺二硫醇、三酰胺-单硫醇、单胺-二酰胺-单硫醇、二胺二肟和肼。螯合剂通常为四齿的，供体原子选自氮、氧和硫。典型的试剂包括具有胺氮和硫醇硫供体原子和肼结合单元的螯合剂。硫醇硫原子以及肼可带有保护基，可在使用试剂以合成放射药物之前置换或更通常地合成放射药物期间被原位置换。

示例性的硫醇保护基包括在Greene and Wuts，Protective Groups inOrganic Synthesis，John Wiley & Sons，New York(1991)中列出地那些。可以使用本领域公知的任何硫醇保护基。硫醇保护基的实例包括，不限于下述：乙酰氨基甲基、苯甲酰基氨基甲基、1-乙氧基乙基、苯甲酰基和三苯基甲基。

肼结合单元的示例性保护基为腙，其可为具有选自氢、烷基、芳基和杂环取代基的醛或酮腙。腙的实例记载在US-A-5,750,088中。

当结合金属放射性核的时候，肼结合单元称为酰肼基，或二氮烯基基团并充当放射性核与放射药物其他部分的连接点。二氮烯基基团可为末端(只有一个基团原子键合至放射性核)或螯合的。为了具有螯合的二氮烯基基团，至少一个其他的基团原子必须也键合至放射性核。键合至金属的原子称为供体原子。

¹¹¹In和⁸⁶Y的螯合剂选自环状的以及无环的聚氨基羧酸盐如DTPA，DOTA，DO3A，2-苄基-DOTA，α-(2-苯乙基)1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-乙酸-4，7，10-三(甲基乙酸)、2-苄基-环己基二乙烯三胺五乙酸，2-苄基-6-甲基-DTPA以及6，6”-双[N，N，N”，N”-四(羧基甲基)氨基甲基)-4’-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2，2’：6’，2”-三联吡啶。合成这些非商业可得的螯合剂的步骤可见于J.Chem.Soc.Perkin Trans.，1992，1，1175；Bioconjugate Chem.，1991，2，187；J.Nucl.Med.，1990，31，473；US-A-5,064,956和US-A-4,859,777中。

金属离子的配位层包括键合至金属的所有的配体或基团。对于为了使过渡金属放射性核稳定，通常地具有包括大于或等于4以及小于或等于8整数的配位数(供体原子的数目)；即有4～8个原子键合至金属并且具有完全的配位层。稳定放射性核配合物的必须的配位数由放射性核、其氧化态、以及供体原子的类型而决定。如果螯合剂或结合单元不提供通过完整其配位层从而稳定金属放射性核所需要的所有的原子，配位层由称为辅助性或共配体的其他的配体的供体原子完成，其也可以使末端的或螯合的。

大量的配体可充当辅助性或共配体，选择基于多种考虑，如，放射药物合成的便利性、辅助性配体的化学以及物理性质、形成的速率、产率以及形成的放射性药品的异构体形式的数目、给药所述的辅助性或共配体于患者而对所述的患者不引起不利的生理后果的能力，以及配体在冻干试剂盒制剂中的相容性。辅助性配体的电荷以及亲脂性将影响放射性药品的电荷以及亲脂性。例如，例如，使用4，5-二羟基-1，3-苯二磺酸盐得到具有另外的两个阴离子基团的放射性药品，由于磺酸盐在生理条件下将为阴离子。使用N-烷基取代的3，4-羟基吡啶酮将得到具有可变程度的亲脂性的放射性药品，取决于烷基取代基的大小。

本公开的优选的锝放射性药品包括酰肼基或二氮烯基结合单元以及辅助性配体，A_L1，或结合单元以及两种类型的辅助性配体A_L1荷A_L2，或四齿螯合剂包括2个氮以及2个硫原子。辅助性配体A_L1包括2个或多个硬供体原子如氧和胺氮(sp³杂化的)。供体原子占据放射性核金属配位层中的至少2个位点；辅助性配体A_L1充当三元配体体系中三个配体之一。辅助性配体A_L1的实例包括不限于二氧配体以及官能团化的氨基羧酸盐。大量的所述的配体可从商业的途径得到。

辅助性二氧配体包括通过至少2个氧供体原子配位金属离子的配体。实例包括不限于：葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、2-羟基异丁酸盐、乳酸盐、、酒石酸盐、甘露醇、葡萄糖二酸盐、麦芽醇、Kojic acid、2，2-双(羟基甲基)丙酸，4，5-二羟基-1，3-苯二磺酸盐，或取代的或未取代的1，2-或3，4-羟基吡啶酮。(这些实例中的配体名称指配体的质子化的或未质子化的形式)。

官能团化的氨基羧酸盐包括胺氮和氧供体原子组合的配体。实例包括不限于：亚胺二乙酸，2，3-二氨基丙酸、次氮基三乙酸、N，N’-乙二胺二乙酸、N，N，N′-乙二胺三乙酸、羟基乙基乙二胺三乙酸和N，N′-乙二胺双-羟基苯基甘氨酸。(这些实例中的配体名称指配体的质子化的或未质子化的形式)。

一系列的官能团化的氨基羧酸盐公开在US-A-5,350,837中，产生形成速率的改善的锝标记的肼基修饰的蛋白。我们已经确定一些这样的氨基羧酸盐导致本公开的放射性药品的产率改善。优选的辅助性配体A_L1包括为甘氨酸的衍生物的官能团化的氨基羧酸盐；最优选的为tricine(三(羟基甲基)甲基甘氨酸)。

本公开的最优选的锝诊断试剂包括酰肼基或二氮烯基结合单元以及两种类型的辅助性配体称为A_L1和A_L2，或二胺二硫醇螯合剂。第二种类型的辅助性配体A_L2包括一或多个软供体原子选自膦磷、胂胂、亚胺氮(sp²杂化的)，硫(sp²杂化的)以及碳(sp杂化的)；具有p-酸特性的原子。配体A_L2可为单齿、二齿或三齿；齿数由配体中供体原子的数目决定。二齿配体中2个供体原子之一以及三齿配体中3个供体原子之一必须为软供体原子。US-A-5,744,120和US-A-5,739,789公开了包括一或多个辅助性或共配体A_L2的放射性药品，其比不包括一或多个辅助性配体A_L2的放射性药品更稳定；即，其具有最小数目的异构体形式，具有随时间不发生改变的相对比率，以及在稀释的时候基本上保持完整。

包括膦或胂供体原子的配体A_L2为三取代的膦、三取代的胂、四取代的二膦和四取代的二胂。包括亚胺氮的配体A_L2为不饱和的或芳香的含氮5或6-员杂环。包括硫(sp²杂化的)供体原子的配体为硫代羰基，并且包括基团C＝S。包括碳(sp杂化的)供体原子的配体为异腈，包括基团CNR，其中R为有机基团。大量的所述的配体可从商业的途径获得。异腈可按照如在US-A-4,452,774和US-A-4,988,827中描述的方法进行合成。

优选的辅助性配体A_L2为三取代的膦和不饱和的或芳香的5或6员杂环。最优选的辅助性配体A_L2为三取代的膦以及不饱和的5-员杂环。

辅助性配体A_L2可被烷基、芳基、烷氧基、杂环基、芳基烷基、烷基芳基和芳基烷基芳基取代，并且可或没有带有包括杂原子如氧、氮、磷或硫的官能团。所述官能团的实例包括不限于：羟基、羧基、甲酰胺、硝基、醚、酮、氨基、铵、磺酸盐、磺酰胺、膦酸盐和磷酰胺。可选择官能团以改变配体的亲脂性和水溶解度，可影响放射性药品的生物性质，如改变在非靶组织、细胞或流体的分布，以及从体内清除的机制和速率。

用于选自带有顺磁性金属离子如Gd(III)、Dy(III)、Fe(III)和Mn(II)稳定的配合物的核磁共振成像造影剂的螯合剂选自环以及非环状的多氨基羧酸盐如DTPA，DOTA，DO3A，2-苄基-DOTA，α-(2-苯乙基)1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-乙酸-4，7，10-三(甲基乙酸)、2-苄基-环己基二乙烯三胺五乙酸、2-苄基-6-甲基-DTPA，以及6，6”-双[N，N，N”，N”-四(羧基甲基)氨基甲基)-4’-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2，2’：6’，2”-三联吡啶。

本公开的诊断试剂具有两个关键的特征决定其活性：MMP选择性以及从血液中的清除速率。优选的本公开的诊断试剂包括对MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9或MMP-14单独或组合相对于其他的MMPs显示出选择性的靶向基团。最优选的为对MMP-2、MMP-9或MMP-14单独或组合相对于其他的MMPs显示出选择性的MMP底物。

从血液中的清除速率对心脏成像操作尤其重要，由于与期望成像的疾病病灶相比，心脏血液池很大。对于有效的心脏成像剂，靶标与背景的比(疾病病灶-血液以及疾病病灶-肌肉)通常地大于或等于约1.5，通常地大于或等于约2.0，并且更通常地甚至更大。优选的本公开的药物具有的血液清除速率，在注射后2小时得到小于约10％i.d./g，在小鼠模型中测定；或在注射后2小时小于约0.5％i.d./g，在狗模型中测定。最优选的本公开诊断试剂具有的血液清除速率，在注射后2小时得到小于约3％i.d./g，在小鼠模型中测定；或在注射后2小时小于约0.05％i.d./g，在狗模型中测定。

包含锝还包括酰肼基或二氮烯基结合单元的本公开的诊断试剂很容易地进行制备：混和放射性核的盐、本公开的试剂、辅助性配体A_L1、辅助性配体A_L2和还原剂，在水溶液中并在从约0℃至约100℃的温度下。包含锝包括具有2个氮以及2个硫原子的四齿螯合剂的本公开的诊断试剂很容易地进行制备：混和放射性核的盐、本公开的试剂以及还原剂，在水溶液中并在从约0℃至约100℃的温度下。

当本公开的试剂中结合单元存在腙基团的时候，在用金属放射性核配合以前首先通常地转化成肼，其可被或不被质子化。腙基团向肼的转化可在与放射性核反应之前进行，其中放射性核和辅助性或共配体或配体不与试剂合并，而是与带有螯合剂或结合单元的水解形式的试剂合并，或在放射性核存在下，其中试剂自身与放射性核以及辅助性或共配体或配体合并。在后一种情形下，反应混合物的pH通常为中性或酸性。

或者，包括酰肼基或二氮烯基结合单元的本公开的诊断试剂可按照下述方法进行制备：首先在水溶液中混和放射性核的盐、辅助性配体A_L1以及还原剂，在从约0℃至约100℃的温度下以用辅助性配体A_L1形成中间放射性核配合物，然后加入本公开的试剂以及辅助性配体A_L2并且还在从约0℃至约100℃的温度下反应。

或者，包括a酰肼基或二氮烯基结合单元的本公开的诊断试剂可可按照下述方法进行制备：首先在水溶液中混和放射性核的盐、辅助性配体A_L1、本公开的试剂以及还原剂，在从约0℃至约100℃的温度下以形成中间放射性核配合物，并且然后加入辅助性配体A_L2，并且还在约0℃至约100℃的温度下反应。

锝放射性核通常地为高锝酸盐或高铼酸盐(perrhenate)以及可药用阳离子的化学形式。高锝酸盐形式通常地高锝酸钠盐如从商业^99mTc生产者得到。用于制备本公开的放射性药品的高锝酸盐的用量范围从约0.1mCi至约1Ci，或更通常地从约1至约200mCi。

用于制备本公开的锝诊断试剂的本公开的试剂用量范围为从约0.01μg至约10mg，或更通常地从约0.5μg至约200μg。用量通常由其他的反应物以及要制备本公开的放射性药品决定。

辅助性配体A_L1的用量范围为从约0.1mg至约1g，或更通常地从约1mg至约100mg。具体的放射药物的精确量随要制备本公开的放射性药品、使用的步骤以及其他的试剂而变化。太大量的A_L1将导致形成副产物，包括A_L1但是没有生物活性分子标记的锝或副产物包括生物活性分子以及辅助性配体A_L1但是没有辅助性配体A_L2标记的锝。太少量的A_L1将导致其他的副产物的形成，如生物活性分子以及辅助性配体A_L2但是没有辅助性配体A_L1标记的锝或还原的水解的锝，或锝胶体。

辅助性配体A_L2的用量范围为从约0.001mg至约1g，或更通常地从约0.01mg至约10mg。具体放射药物的精确量随要制备的本公开的放射性药品、使用的步骤以及其他反应物及其用量而变化。太大量的A_L2将导致产生副产物，包括A_L2但是无生物活性分子标记的锝，或副产物，包括生物活性分子以及辅助性配体A_L2但是无辅助性配体A_L1标记的锝。

在本公开的另一个实施方案中，放射标记的包含MMP底物-诊断试剂的闪烁法成像可与放射标记的心脏再灌注成像试剂的闪烁法成像同时获得。这种同时双重同位素成像可利用具有光谱上可分开的γ发射能量的MMP底物的放射性同位素以及再灌注成像试剂实现。例如，^99mTc心脏再灌注成像剂(如^99mTc-Sestamibi)或Tl201(为氯化亚铊)，以及¹¹¹In-标记的MM底物化合物利用标准γ相机同时成像。这是可能，因为^99mTc的γ能量为约140KeV或Tl201的γ能量为约80KeV，容易与γ能量为约160KeV和250KeV区的¹¹¹In分开。这种心脏再灌注和细胞外基质降解(如用包含MMP底物诊断试剂的定位所证实)同时成像尤其可用于心脏中诊断试剂分布定位的改善分析性评价，基于与在^99mTc-Sestamibi或Tl201成像所见到的再灌注分布比较。此外，再灌注和细胞外基质降解的同时成像容许更完整地评价潜在的心脏疾病，从血流改变以及生活改变两方面，在患者上在单一的成像中。

心脏再灌注和细胞外基质降解的同时双重-同位素成像容许在一个成像期间定位易受攻击斑的部位以及显影心脏再灌注。此外，与充血性心力衰竭有关的组织变化(源自包含MMP底物的诊断试剂)以及冠状动脉疾病有关的组织变化(源自再灌注成像剂)的同时成像尤其可用于表征充血性心力衰竭的潜在病因。

已经报道了患者中不同放射同位素-标记的放射性药品的同时成像。例如，Antunes，等，Am J.Cardiol.，1992，70，426-431，已经证实了可能用¹¹¹In-antimyosin抗体成像心肌梗塞以及用Tl201成像心脏再灌注。但是，本公开的双重的同位素成像是新的，因为首次报道了同时双重同位素成像包含MMP底物的放射标记的诊断试剂和心脏再灌注成像化合物的方法。使用包含MMP底物的诊断试剂的闪烁法成像以及再灌注成像的闪烁法成像的结合在一个成像期间为成像医师提供了关于缺血冠状动脉疾病或充血性心力衰竭不同寻常量的临床信息，。

用于合成本公开的诊断试剂的合适的还原剂包括亚锡盐、连二亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硼氢化物盐、抗坏血酸、半胱氨酸、膦以及亚铜或亚铁盐以及甲脒亚磺酸，其中所述的盐为任何可药用形式。特定的还原剂为亚锡盐。其他的还原剂记载在US-A-5,662,882中。还原剂的用量范围为从约0.001mg至约10mg，或更通常地从约0.005mg至约1mg。

本公开的铟、铜、镓和钇诊断试剂行容易通过将放射性核的盐和本公开的试剂混合制备得到，在水溶液中，并在从约0℃至约100℃的温度下进行。这些放射性核通常地以在无机酸中的稀水溶液得到，如氢氯酸、硝酸或硫酸。放射性核与从1至约1000当量的溶解在水溶液本公开的试剂混和。缓冲剂通常地用来维持反应混合物的pH从约3至约10。

本公开的钆、镝、铁和锰诊断试剂可通过将顺磁性金属离子盐以及本公开的试剂在水溶液中并在从约0℃至约100℃的温度下混和而容易地制备。顺磁性金属离子通常地以在无机酸中的稀水溶液得到，如氢氯酸、硝酸或硫酸。顺磁性金属离子与从1至约1000当量的溶解在水溶液本公开的试剂混和。缓冲剂通常地用来维持反应混合物的pH从约3至约10。

制备的总时间随金属离子、反应物及其用量以及用于制备的步骤而变化。制备可为完全的，产生大于约80％产率的放射药物，在约1分钟或可能需要更多的时间。如果需要或者期望更高纯度的金属药物，将产物可利用本领域的普通技术人员公知的许多技术中的任何一种进行纯化，如液体层析、固相萃取、溶剂萃取、透析或超过滤。

诊断放射性药品可经静脉注射给药，通常为盐水溶液的形式，以约1至约100mCi/70kg体重的剂量，或通常地以约5至约50mCi的剂量。成像使用公知的步骤进行。

包含核磁共振成像造影成分的本公开的诊断试剂可按照如其他MRI试剂同样的方式使用，具体方式记载在US-A-5,155,215；US-A-5,087,440；Magn.Reson.Med.，1986，3，808；Radiology，1988，166，835；以及Radiology，1988，166，693中。通常，将造影剂的无菌水溶液以从约0.01～约1.0mmoles每千克体重的剂量范围静脉内对患者给药。

用作X-射线造影剂的时候，本公开的诊断试剂通常应该具有约1mM至约5M的重原子浓度，通常地约0.1M至约2M。经静脉注射给药的剂量，通常的范围为从约0.5mmol/kg至约1.5mmol/kg，通常地约0.8mmol/kg至约1.2mmol/kg。成像使用公知的技术进行，通常地X-射线计算断层摄影术。

包含超声造影成分的本公开的诊断试剂以约10至约30μL的回波发生气体每千克体重的剂量经静脉注射给药或以约3μL/kg/分钟的速率通过输液给药。成像可使用公知的声像图检技术进行。

本公开的其他特征在了解了用于说明并不是用于限制本公开的示例性实施方案的下述描述将变得明显。本公开参考下述具体的非限制性的实施例进行举例说明。有机化学领域的普通技术人员将很容易了解针对公开化合物的其他合成路线。这里使用的试剂和中间体或者是商业提供的或者根据标准的文献步骤制备得到，除非另有记载。

实施例1

(1S)-1-[(2S)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-{6-[(6-肼基(3-吡啶基))羰基氨基]己酰基}吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-羧基丁酰基氨基]丙烷-1，3-二羧酸三氟乙酸盐的合成

部分A-Fmoc-Ahx-PLG-Hphe-OLEE-Wang树脂的制备

将Fmoc-Glu(Ot-Bu)-Wang树脂(2.000g，取代水平＝0.9mmol/g)放置在50ml Advanced ChemTech反应器中。树脂通过用N，N-二甲基甲酰胺(2×20mL)洗涤溶胀，并进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20mL)处理30分钟去除Fmoc基团。(步骤2)将树脂充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Glu(Ot-Bu)-OH(3.064g，7.2mmol)、HOBt(1.102g，7.2mmol)、HBTU(2.731g，7.2mmol)在10mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液以及3mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行4小时。(步骤4)将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤5)发现偶联反应完成超过95％，如用半定量的茚三酮分析和定量的苦味酸分析或富烯-哌啶分析评价。重复步骤1-5直到得到序列G-Hphe-OLEE。剩余氨基酸的偶联需要在40％DMSO的N，N-二甲基甲酰胺的溶液中偶联两次以实现高的偶联产率。

部分B-Hynic-Ahx-PLG-Hphe-OLEE-OH的制备

将上述部分A中制备的肽-树脂的一半用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)处理30分钟。将树脂充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入Boc-Hynic-OH(0.912g，3.6mmol)，HOBt(0.551g，3.6mmol)，HBTU(1.366g，3.6mmol)的10mL的N，N-二甲基甲酰胺溶液和3mL的二异丙基乙胺，并将反应进行4小时。将树脂充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。发现偶联反应完全，如用半定量的茚三酮分析和定量的苦味酸分析或富烯-哌啶分析评价得到。

将一半的上述树脂用9.00mL的三氟乙酸、0.236mL的H₂O和0.236mL的TIS搅拌2小时。通过滤过烧结的玻璃漏斗去除树脂并用三氟乙酸充分洗涤(2×2mL)。将滤液浓缩至2mL并用醚稀释(10mL)。过滤收集形成的沉淀，用醚洗涤(3×5mL)并干燥得到为无色的固体标题化合物(0.673g)。通过反相HPLC进行纯化：用Phenomenex Luna C18(2)柱(41.2×250mm)，以及0.50％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的18～36％乙腈的梯度，以80mL/分钟的流速洗脱，然后在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上进行纯化，使用0.67％/分钟的包含0.1M NH₄OAc(pH 7)的18～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。将产物级分冻干得到无色的固体的标题化合物为(0.040g，总产率7.5％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 591.0[2M+H](100％)，1180.9[M+H](20％)；FT-MS：计算值C56H85N13O15[M+2H]：590.8217，实测值：590.8214。L-亮氨酸的手性分析：99.8％。

实施例2

1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-({1-[6-(2-{2-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基](2R)-3-苯基丙酰基氨基}(2R)-3-苯基丙酰基氨基)己酰基](2S)吡咯烷-2-基}羰基氨基)(2S)-4-甲基戊酰基氨基]乙酰基氨基}(2S)-4-苯基丁酰基氨基)(2S)-5-氨基戊酰基氨基](2S)-4-甲基戊酰基氨基}(2S)-4-羧基丁酰基氨基)(1S)丙烷-1，3-二羧酸三氟乙酸盐的合成

将实施例1，部分A的肽-树脂(0.500g，取代水平＝0.45mmol/g)放置在50mL反应器中。将树脂通过用N，N-二甲基甲酰胺洗涤溶胀(2×20mL)，并进行下述步骤：(步骤1)去除Fmoc，使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20mL)处理30分钟。(步骤2)将树脂充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-f-OH(0.349g，0.9mmol)，HOBt(0.138g，0.9mmol)，HBTU(0.341g，0.9mmol)在10mL的40∶60 DMSO：N，N-二甲基甲酰胺中的溶液以及3mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行10小时。(步骤4)将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤5)将Fmoc-f-OH(0.349g，0.9mmol)，HOBt(0.138g，0.9mmol)，HBTU(0.341g，0.9mmol)在10mL的40％DMSO中的N，N-二甲基甲酰胺溶液以及3mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行4小时。(步骤6)将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤7)发现偶联反应完全，如用半定量的茚三酮分析和定量的苦味酸分析或富烯-哌啶分析评价。加入第二份D-苯基丙氨酸重复步骤1-7。

将树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)处理30分钟，并充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。将2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(0.396g，0.9mmol)和HOAt(0.122g，0.9mmol)在10mL的40∶60 DMSO：N，N-二甲基甲酰胺中的溶液和3mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行18小时。将树脂充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。将上述偶联步骤重复超过三次直至判断反应完全，如用小部分的裂解的肽的LC/MS评价。在最后的偶联过程中，将离液序列高的盐(chaotropic salt)KSCN(0.776g，0.4M的20ml溶液)加入至偶联溶液中作为催化剂。

将一半的上述树脂搅拌与2mL的95％三氟乙酸，2.5％H₂O和2.5％TIS反应2小时。通过烧结的玻璃漏斗过滤去除树脂并用三氟乙酸充分洗涤(2×2mL)。将滤液浓缩至2mL并用醚稀释(10mL)。过滤收集形成的沉淀，用醚洗涤(3×5mL)并干燥得到为无色固体的标题化合物(0.126g)。使用反相HPLC进行纯化：使用Phenomenex Jupiter C18柱(41.2×250mm)和0.83％/分钟的包含0.1M NH₄OAc(pH 7)的22.5～45％乙腈的梯度，以80mL/分钟的流速洗脱，然后在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上进行纯化，使用0.17％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的31.5～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。将产物级分冻干得到无色的固体标题化合物(8.0mg，总产率4.4％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 822.0[2M+H](100％)，1643.6[M+H](70％)；FT-MS：计算值C81H107N15O20S[M+2H]：821.8842，实测值：821.8831.

实施例3

1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-({1-[6-(2-[2-{2-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基](2R)-3-苯基丙酰基氨基}(2R)-3-苯基丙酰基氨基](2R)-3-苯基丙酰基氨基)己酰基](2S)吡咯烷-2-基}羰基氨基)(2S)-4-甲基戊酰基氨基]乙酰基氨基}(2S)-4-苯基丁酰基氨基)(2S)-5-氨基戊酰基氨基](2S)-4-甲基戊酰基氨基}(2S)-4-羧基丁酰基氨基)(1S)丙烷-1，3-二羧酸三氟乙酸盐的合成

上述实施例2的HPLC纯化，还制备出三-D-苯基丙氨酸肽。将产物级分冻干得到为无色固体的标题化合物(3.0mg，总产率1.4％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 895.7[2M+H](100％)，1790.7[M+H](30％)；FT-MS：计算值C90H116N16O21S[M+2H]：895.4184，实测值：895.4172.

实施例4

(1S)-1-[(2S)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-{6-[(7-甲氧基-2-氧代(2H-色烯-3-基))羰基氨基]己酰基}吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-羧基丁酰基氨基]丙烷-1，3-二羧酸的合成

将实施例1，部分A的肽-树脂(0.2g，取代水平＝0.45mmol/g)放置在50mL反应器中。将树脂通过用N，N-二甲基甲酰胺洗涤溶胀(2×20mL)，并使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20mL)处理30分钟去除Fmoc。将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。将7-甲氧基香豆素-3-羧酸(0.04g，0.18mmol)、HOBt(0.028g，0.18mmol)和HBTU(0.069g，0.18mmol)在10mL的40∶60 DMSO：N，N-二甲基甲酰胺中的溶液以及3mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行3小时。将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。上述偶联反应重复超过两次直到用半定量的茚三酮分析和定量的苦味酸分析或富烯-哌啶分析评价确定反应完全。

将上述树脂与2mL的95％三氟乙酸，2.5％H₂O和2.5％TIS搅拌1.5小时。通过烧结的玻璃漏斗过滤去除树脂并用三氟乙酸充分洗涤(2×2mL)。将滤液浓缩至2mL并用醚稀释(10mL)。过滤收集形成的沉淀，用醚洗涤(3×5ml)并干燥得到油状的标题化合物(0.145g)。利用反相HPLC实现纯化：使用Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)和1％/分钟的包含0.1MNH₄OAc(pH 7)的18～45％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。将产物级分冻干得到为无色的固体标题化合物(0.011g，总产率10％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 624.5[2M+H](60％)，1247.6[M+H](100％)；FT-MS：计算值C61H86N10O18[M+2H]：624.3134，实测值：624.3127.

实施例5

4-(N-{6-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基]己基}氨基甲酰基)(4S)-4-[(2S)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-羧基丁酰基氨基]丁酸双-铵盐的合成

部分A-Ac-PLG-Hphe-OLEE-亚己基-NH-三苯甲基树脂的制备

将1，6-二氨基己烷三苯甲基树脂(2.000g，取代水平＝0.81mmol/g)放置在50mL Advanced ChemTech反应器中。进行下述步骤：(步骤1)将树脂充分洗涤(20ml体积)：二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3x)。(步骤2)将Fmoc-Glu(t-Bu)-OH(2.76g，6.5mmol)，HOBt(0.99g，6.5mmol)和HBTU(2.46g，6.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(15mL)中的溶液和二异丙基乙胺(3mL)加入至树脂中，并将反应进行4小时。(步骤3)将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤4)将20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)加入至树脂中，并反应30分钟。(步骤5)将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤6)通过富烯-哌啶分析分析树脂显示0.33mmol/g的负载系数。重复步骤2-6直到得到需要的氨基酸序列。所有的偶联步骤以定量的产率进行。用Fmoc-Orn(Ot-Bu)-OH需要双重的偶联。将树脂用乙酸酐(0.666mL，6.6mmol)和二异丙基乙胺(1.4mL，7.92mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液处理2.0小时，充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，和二氯甲烷(3×)，并真空干燥。

部分B-Ac-PLG-Hphe-OLEE-亚己基-NH2的制备

将部分A的肽-树脂(1.0g)放置在30mL烧结的玻璃漏斗中，并用二氯甲烷洗涤(2×25mL)。将肽-树脂用5∶1∶94三氟乙酸∶Et3SiH∶二氯甲烷的溶液(10mL)处理2分钟。利用压力直接将溶液过滤到10％吡啶的甲醇溶液(2mL)中。重复裂解步骤五次。将合并的滤液浓缩以去除二氯甲烷和甲醇，提供无色油性固体。用水研磨(40mL)过滤收集得到无色干燥的固体。将粗制的产物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含100mM乙酸铵的31.5～67.5％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在28.5分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(61.3mg，19.6％；HPLC纯度，100％)。

MS：m/e 537.0[(M-Boc-2(t-Bu)+2H](100％)，565.2[(M-Boc-(t-Bu))+2H](45％)，593.2[(M-Boc)+2H](30％)，654.2[(M+Na)+2H](65％)，1285.2[M+H](95％)，1307.1[M+Na](25％)。

部分C-4-(N-{6-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基]己基}氨基甲酰基)(4S)-4-[(2S)-2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4-羧基丁酰基氨基]丁酸双-铵盐的制备

将部分B的产物(20.2mg，0.0157mmol)和二异丙基乙胺(20μL，0.0785mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液(7mL)用HOAt(2.15mg，0.0157mmol)和2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(6.9mg，0.0157mmol)处理。将形成的溶液在氮气气氛下在环境温度搅拌。在5小时的时候，将另外的HOAt(2.15mg，0.0157mmol)和2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(6.9mg，0.0157mmol)加入至反应器中。搅拌总计30小时后，减压去除N，N-二甲基甲酰胺得到绿色的油，用醚研磨(4×2mL)得到粉末的绿色固体。将溶解在97∶3三氟乙酸/Et₃SiH中的固体在氮气气氛下40℃搅拌30分钟。将溶液浓缩并将形成的油经HPLC纯化：在Phenomenex JupiterC18柱(21.2×250mm)上，使用1.12％/分钟的包含100mM乙酸铵的5.85～50.85％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在29.0分钟洗脱的主要产物峰得到12.1mg(56.0％)需要的无色固体的产物，HPLC检测的纯度为99.2％。

MS：m/e 688.8[M+2H](100％)，1375.8[M+H](30％)；高分辨MS：计算值C65H95N14O17S[M+H]：1375.6715，实测值：1375.6704。

实施例6

2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-({4-[((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨基]苯基}羰基氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的合成

部分A-(4-{[(叔丁氧基)羰基氨基]氨基}苯基)-N-{2-[(苯基甲氧基)羰基氨基]乙基}甲酰胺的制备

将4-[2-(叔丁氧基羰基)肼基]苯甲酸(Schwartz，D.A.，等；Bioconj.Chem.，1991，2，333-336)(1.8g，7.29mmol)和二异丙基乙胺(2.0mL，11.5mmol)溶解在N，N-二甲基甲酰胺(8mL)中，并在氮气气氛下在室温搅拌。将溶液用PyBroP(3.4g，7.29mmol)和N-(2-氨基乙基)-氨基甲酸苄基酯盐酸盐(1.68g，7.29mmol)处理。在2小时，将另外的PyBroP(0.34g，0.729mmol)和N-(2-氨基乙基)氨基甲酸苄基酯盐酸盐(0.17g，0.729mmol)加入至反应溶液中。在6小时，加入另外的PyBroP(0.68g，1.46mmol)和N-(2-氨基乙基)氨基甲酸苄基酯盐酸盐(0.34g，1.46mmol)。将溶液搅拌总计8小时并真空浓缩得到黄黑色的油。将粗制的产物结晶(醚)得到2.08g(66.8％)的为无色的固体标题化合物，LC/MS检测的纯度100％。MS：m/e 429.3[M+H](100％)。

部分B-2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{[4-({(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基)苯基]羰基氨基}乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将部分A的产物(405.9mg，0.95mmol)溶解在1∶1三氟乙酸/二氯甲烷(10mL)中，并在氮气气氛下在环境温度反应10分钟。将溶液浓缩得到金黄色的油，并溶解在N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中。将该溶液加入至Boc-亮氨酸水合物(550mg，2.19mmol，NovaBiochem)，HBTU(664mg，1.75mmol)和二异丙基乙胺(1.78mL，10.22mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中，并在环境温度搅拌30分钟。真空去除N，N-二甲基甲酰胺并将形成的琥珀色的油经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter柱(41.4×250mm)上，使用0.66％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的29.7～49.5％乙腈梯度，以80mL/分钟的流速洗脱。冻干在23.0分钟洗脱的主要产物峰得到334.2mg(62.1％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 442.5[M+H-Boc](15％)；486.6[M+H-(t-Bu)](60％)；542.5[M+H](23％)；1084.1[2M+H](100％)；1106.1[2M+Na](25％)。

部分C-(2S)-N-({4-[N-(2-氨基乙基)氨基甲酰基]苯基}氨基)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备

将部分B的产物(291.2mg，0.538mmol)在乙醇(25mL)中并在20％Pd/C(60mg)上60psi在氢化20小时。通过滤过Celite去除催化剂并将滤液浓缩至得到油性的固体。将油溶解在1∶1乙腈∶水(30mL)中，并冻干得到无色片状固体的标题化合物231.6mg(105.7％y)，HPLC检测的纯度为87.9％。

MS：m/e 352.5[M+H-(t-Bu)](42％)；408.6[M+H](100％)；815.8[2M+H](25％)

部分D-2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-({4-[((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-氨基]苯基}羰基氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的制备

部分C的产物(50.0mg，0.123mmol)，2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]-苯磺酸钠(54.2mg，0.123mmol)，HOAt(16.9mg，0.123mmol)和二异丙基乙胺(120μL，0.615mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液在氮气气氛下在环境温度搅拌3小时。真空去除N，N-二甲基甲酰胺得到琥珀色的油，将其用0.1M HCl(2×5mL)研磨并用水洗涤(3×5mL)得到黄/褐色固体。将固体溶解在1∶1三氟乙酸/二氯甲烷(7mL)中，并在氮气气氛下在环境温度反应10分钟。将溶液减压浓缩并将形成的琥珀色的油经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.675％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的0～27％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在28.5分钟洗脱的主要产物峰得到57.4mg(72.0％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

¹H NMR(DMSO d-6)：δ10.33(s，1H)，9.17(broad s，1H)，8.72-8.02(m，7H)，7.83-7.69(m，3H)，7.43-7.31(m，2H)，7.22(d，J＝9.0Hz，1H)，6.76(d，J＝8.8Hz，2H)，3.82(s，1H)，3.42(s，4H)，1.74-1.50(m，3H)，1.01-0.73(m，6H)；

MS：m/e 611.6[M+H](100％)；1222.1[2M+H](20％)；高分辨MS：计算值C31H45N4O10S[M+H]：611.2395，实测值：611.2386。

实施例7

2-[2-({5-[N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)(1Z)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的合成

部分A-2-{(1Z)-2-氮杂-2-[(5-{N-[(叔丁氧基)羰基氨基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]乙烯基}苯磺酸的制备

将肼基甲酸叔丁基酯(0.30g，2.27mmol)和二异丙基乙胺(1.9mL 11.35mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的的溶液用HOAt(0.31g，2.27mmol)和2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(1.00g，2.27mmol)处理，并在氮气气氛下在环境温度搅拌。在第27小时，加入另外的(0.454mmol)肼基甲酸叔丁基酯，并且在45小时再加入。在第70小时，真空去除N，N-二甲基甲酰胺得到琥珀色的油，将其溶解在1∶1乙腈/水中，并冻干得到粘性的黄色固体。将固体用0.1M HCl(2×25mL)研磨，用水洗涤(3×15mL)并在硫酸钙上真空干燥得到0.961g(97％)需要的产物，HPLC检测的纯度为87.8％。

MS：m/e 436.5[M+H](100％)，871.7[2M+H](100％)，1307.0[3M+H](30％)。

部分B-2-(2-{[5-(N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}(1Z)-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将上述部分A的产物(900mg，2.07mmol)溶解在1∶1三氟乙酸/二氯甲烷(15mL)中，并在环境温度反应10分钟。将溶液减压浓缩得到金黄色的油，将其溶解在N，N-二甲基甲酰胺(7mL)中。将该溶液加入至Boc-亮氨酸水合物(770mg，3.1mmol，NovaBiochem)，HBTU(940mg，2.47mmol)和二异丙基乙胺(4.3mL，25mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中，并在环境温度搅拌30分钟。真空去除N，N-二甲基甲酰胺并将形成的琥珀色的油用0.1M HCl(2×20mL)研磨，用水洗涤(3×20mL)，并在硫酸钙上真空干燥得到1.25g(111％)需要的产物，HPLC检测的纯度为76.43％。

MS：m/e 449.5[M+H-Boc](100％)，493.5[M+H-(t-Bu)](35％)，1097.9[2M+H](45％)。

部分C-2-[2-({5-[N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)(1Z)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将上述部分B的产物(100mg，0.182mmol)溶解在1∶1三氟乙酸/二氯甲烷(6mL)中，并反应10分钟。减压去除溶剂并将形成的琥珀色的油经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter柱(21.4×250mm)上，使用0.45％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的4.5～18％乙腈梯度，以80mL/分钟的流速洗脱。冻干在23.0分钟洗脱的主要产物峰得到30.4mg(37.5％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

¹H NMR(DMSO d-6)：δ10.53(s，1H)，9.14(s，1H)，8.62(s，1H)，8.34-8.00(m，4H)，7.79(d，J＝7.62Hz，1H)，7.46-7.30(m，2H)，7.27(d，J＝8.94Hz，1H)，3.86(s，1H)，1.89-1.54(m，3H)，1.02-0.82(m，6H)；

MS：m/e 336.3[M+H-Leu](20％)；449.4[M+H](100％)；高分辨MS：计算值C19H24N6O5S[M+H]：449.1602，实测值：449.1586。

实施例8

2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的合成

部分A-N-[(叔丁氧基)羰基氨基](4-{[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]甲基}苯基)甲酰胺的制备

将Fmoc-Amb-OH(2.50g，6.7mmol)，HOBt(1.11g，7.3mmol)，HBTU(2.77g，7.3mmol)和二异丙基乙胺(3mL，17.2mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中的的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌20分钟，并用肼基甲酸叔丁基酯(0.74g，5.6mmol)处理。另外的2小时之后，将反应用乙酸乙酯(50mL)稀释，连续地用0.1N HCl(3×30mL)，0.1N NaOH(30mL)，水(30mL)洗涤，在MgSO₄上干燥并蒸发至干。形成的黄色的固体从乙酸乙酯/己烷重结晶得到为无色的固体标题化合物(2.37g，87％)。

¹H NMR(CDCl3)：δ8.15(bs，1H)，7.79-7.51(m，6H)，7.45-7.20(m，6H)，6.85(bs，1H)，5.18(s，1H)，4.57-4.45(m，2H)，4.45-4.12(m，2H)，1.49(s，9H)；13C NMR(CDCl3)：δ166.8，156.6，155.8，143.8，143.2，141.4，130.6，127.8，127.7，127.5，127.0，124.9，120.0，82.5，66.8，47.3，44.6，28.1；

MS：m/e 388.5[M-Boc+H]；高分辨MS：计算值C23H21N3O3[M-Boc+H]：388.1656，实测值：388.1643。

部分B-[4-(氨基甲基)苯基]-N-[(叔丁氧基)羰基氨基]甲酰胺的制备

将部分A的产物(0.80g，1.6mmol)用2mL的20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺在室温在氮气气氛下处理20分钟。真空去除N，N-二甲基甲酰胺并将残留物在硅胶上层析，连续用9∶1 CHCl₃/甲醇，8∶1 CHCl₃/甲醇，4∶1 CHCl₃/甲醇和100％甲醇洗脱得到无色粘性油状的标题化合物(0.32g，74％)。

MS：m/e 166.3[M-Boc+H]。

部分C-2-{(1E)-2-氮杂-2-[(5-{N-[(4-{N-[(叔丁氧基)羰基氨基]氨基甲酰基}苯基)甲基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]乙烯基}苯磺酸的制备

将部分B的产物(0.309g，1.2mmol)，2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(0.513g，1.2mmol)，HOAt(0.159g，1.2mmol)和二异丙基乙胺(0.3mL，1.7mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌18小时。将反应用10mL的0.1N HCl稀释。过滤收集形成的固体，用0.1N HCl然后用水洗涤(3×10mL)，并干燥得到为无色的固体标题化合物(0.625g，95％，HPLC纯度＞95％)。MS：m/e 469.1[M+H]。

部分D-2-((1E)-2-{[5-(N-{[4-(N-氨基氨基甲酰基)苯基]甲基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸钠的制备

将部分C的产物(0.22g，0.4mmol)用6mL的50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液在环境温度在氮气气氛下处理10分钟。真空去除溶剂得到无色固体。形成的固体经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上，使用1％/分钟的包含0.1M NaOAc(pH 7)的9～36％乙腈梯度，以80mL/分钟的流速洗脱。对在15分钟洗脱的主要产物峰进行脱盐：在PhenomenexLuna C18(2)柱(41.4×250mm)上，用水稀释至乙腈浓度为5.4％并泵送到柱上。将柱用等梯度的5.4％乙腈以80mL/分钟的流速洗脱10分钟，然后以80mL/分钟的流速通过2.2％/分钟的5.4～45％乙腈梯度洗脱。冻干在15分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(0.14g，78％)。

MS：m/e 469.1[M+H]。

部分E-2-((1E)-2-{[5-(N-{[4-(N-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)苯基]甲基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将Boc-Leu-OH(0.130g，0.5mmol)，HOBt(0.078g，0.5mmol)，HBTU(0.190g，0.5mmol)和二异丙基乙胺(0.149mL，0.5mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌20分钟，并用部分D的产物(0.200g，0.4mmol)处理。将溶液在环境温度搅拌4小时并用0.1NHCl(15mL)稀释。过滤收集形成的沉淀，连续地用0.1N HCl(2×10mL)和水(3×15mL)洗涤，并干燥得到为无色的固体标题化合物(0.11g，38％)。

¹H NMR(CD3CN：DMSO-d₆，2∶1)：δ13.04(bs，1H)，10.12(s，1H)，9.71(s，1H)，9.41(s，1H)，9.09(s，1H)，8.52(s，1H)，8.36(d，J＝9.0Hz，1H)，8.28(d，J＝6.9Hz，1H)，7.89-7.87(m，1H)，7.84(d，J＝8.13Hz，2H)，7.49-7.44(m，2H)，7.42(d，J＝8.13Hz，2H)，7.20(d，J＝8.90Hz，1H)，6.45(d，J＝8.90Hz，1H)，4.56(d，J＝5.8Hz，2H)，4.14(q，J＝7.9Hz，1H)，1.68-1.73(m，1H)，1.52(t，J＝7.3Hz，2H)，1.39(s，9H)，0.97-0.86(m，6H)；

13C NMR(CD3CN：DMSO-d₆，2∶1)：δ173.3，166.6，156.5，148.6，144.2，132.5，130.9，129.9，128.7，128.3，127.9，127.4，122.1，79.4，52.7，43.7，42.2，28.8，25.3，23.5，22.2；

MS：m/e 582.2[M-Boc+H]。

部分F-2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将部分E的产物(0.11g，0.2mmol)用8mL的50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液在环境温度在氮气气氛下处理10分钟。将溶液浓缩并将形成的无色粘性油经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用1.2％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的9～45％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。将在12.9分钟洗脱的主要产物峰冻干得到为无色的固体标题化合物(51mg，产率57％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ10.56(s，1H)，10.53(s，1H)，9.20(bs，2H)，8.61(s，1H)，8.40-8.06(m，5H)，7.86(d，J＝8.2Hz，2H)，7.80(d，J＝6.7Hz 1H)，7.46(d，J＝8.2Hz，2H)，7.44-7.34(m，2H)，7.25(d，J＝9.1Hz，1H)，4.55(d，J＝8.6Hz，2H)，1.85-1.77(m，1H)，1.72-1.63(m，1H)，1.63-1.52(m，1H)，0.94(q，J＝6.0Hz，6H)；

MS：m/e 582.6[M+H]；高分辨MS：计算值C27H31N7O6S[M+H]：582.2129，实测值：582.2146.

实施例9

N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-6-[(7-甲氧基-2-氧代(2H-色烯-3-基))羰基氨基]己酰胺的合成

部分A-(2S)-N-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备

将Fmoc-Leu-OH(0.50g，1.4mmol)和二异丙基乙胺(0.62mL，3.5mmol)在无水的THF(10mL)中的溶液用氯甲酸异丁基酯(0.18mL，1.5mmol)处理，并在0℃在氮气气氛下搅拌15分钟。加入肼基甲酸叔丁基酯(0.19g，1.4mmol)在无水的THF(5mL)中的溶液，并将反应在环境温度在氮气气氛下搅拌16小时。将反应用乙酸乙酯(25mL)稀释，连续地用0.1N HCl(25mL)，饱和的NaHCO₃(25mL)，0.1N NaOH(2×25mL)，水(25mL)，以及盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩得到无色粘性油状的标题化合物(0.44g，66％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(CD3CN)：δ8.17 Is，1H)，7.85(d，J＝7.51Hz，2H)，7.72-7.65(m，2H)，7.43(t，J＝7.51Hz，2H)，7.39-7.32(m，2H)，6.93(s，1H)，5.90(d，J＝7.8Hz，1H)，4.41-4.21(m，3H)，4.17-4.06(m，1H)，1.74-1.63(m，1H)，1.59-1.50(m，2H)，1.42(s 9H)，1.00-0.81(m，6H)；

13C NMR(CD3CN)：δ173.3，157.2，156.3，145.3，145.2，142.3，129.0，128.2，81.4，67.4，53.2，48.2，41.9，28.5，25.5，23.4，21.9；MS：m/e 468.1[M+H]。

部分B-(2S)-N-氨基-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺三氟乙酸盐的制备

将部分A的产物(0.44g，0.9mmol)用10mL的50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液在室温在氮气气氛下处理10分钟。将溶液浓缩得到浅黄色粘性油状的标题化合物(0.47g，产率138％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(CD3CN)：δ7.84(d，J＝7.51Hz，2H)，7.68(t，J＝6.93Hz，2H)，7.43(t，J＝7.51Hz，2H)，7.38-7.31(m，2H)，5.96(s，1H)，5.78(bs，2H)，1.76-1.49(m，3H)，1.02-0.79(m，6H)；MS：m/e 368.3[M+H]。

部分C-N-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-[(叔丁氧基)羰基氨基]己酰胺的制备

将Boc-Ahx-OH(0.15g，0.6mmol)，HOBt(0.11g，0.7mmol)，HBTU(0.27g，0.7mmol)和二异丙基乙胺(3mL，17.2mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌15分钟，并用部分B的产物(0.2g，0.5mmol)处理。将反应搅拌1小时，用乙酸乙酯(15mL)稀释，连续地用0.1N HCl(15mL)，0.1N NaOH(2×15mL)，水(15mL)，以及盐水(15mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩得到为无色的固体标题化合物(0.28g，87％)。

MS：m/e 481.4[M-Boc+H]。

部分D-N-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-氨基己酰胺三氟乙酸盐的制备

将部分C的产物(0.28g，0.5mmol)用12mL的50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液在环境温度在氮气气氛下处理10分钟。将溶液减压浓缩并将残留物用醚(3mL)研磨得到无色固体(0.26g，113％)。

¹H NMR(CD3CN)：δ8.76-8.49(m，1H)，7.85(d，J＝7.5Hz，2H)，7.73-7.64(m，2H)，7.43(t，J＝7.5Hz，2H)，7.38-7.33(m，2H)，7.05(bs，2H)，4.41-4.12(m，4H)，2.96(t，J＝7.0Hz，2H)，2.22(t，J＝6.8Hz，2H)，1.76-1.35(m，11H)，1.00-0.81(m，6H)；

MS：m/e 481.4[M+H]。

部分E-N-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-[(7-甲氧基-2-氧代(2H-色烯-3-基))羰基氨基]己酰胺的制备

将7-甲氧基香豆素-3-羧酸(0.022g，0.1mmol)，HOBt(0.015g，0.1mmol)，HBTU(0.038g，0.1mmol)和二异丙基乙胺(0.03mL，0.2mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌10分钟，并用部分D的产物(0.040g，0.08mmol)处理。将溶液在环境温度搅拌4小时并减压浓缩。将形成的残留物用CH2Cl2(3mL)和THF(3mL)洗涤，并干燥得到微黄色的固体标题化合物(0.031g，55％)。

MS：m/e 683.7[M+H]。

部分F-N-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)-6-[(7-甲氧基-2-氧代(2H-色烯-3-基))羰基氨基]己酰胺三氟乙酸盐的制备

将部分E的产物(0.020g，0.03mmol)用1mL的20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液在室温在氮气气氛下处理20分钟。真空去除N，N-二甲基甲酰胺，并将残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用1.35％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的4.5～45％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在23.4分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(0.012g，89％)。

¹H NMR(CDCl3)：δ10.32-9.55(m，1H)，8.95(s，1H)，8.83(s，1H)，8.25(bs，1H)，7.65-7.58(m，1H)，6.97-6.81(m，2H)，4.34(s，1H)，3.89(s，3H)，3.86-3.30(m，5H)，2.34(s，1H)，1.88-1.53(m，7H)，1.45-1.35(m，2H)，1.00-0.78(m，6H)；MS：m/e 461.5[M+H]；

高分辨MS：计算值C23H32N4O6[M+H]：461.2395，实测值：461.2391。

实施例10

2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸铵的合成

部分A-Fmoc-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L-HMPB-BHA树脂的制备

将HMPB-BHA树脂(5.00g，取代水平＝0.61mmol/g)放置在100mLAdvanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×40mL)洗涤溶胀。加入Fmoc-Leu-OH(3.23g，9.15mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(35mL)溶液并将树脂在室温混合15分钟。加入吡啶(1.09g，13.73mmol)和2，6-二氯苯甲酰氯(1.92g，9.15mmol)，并将混合物轻轻振荡20小时。将树脂充分洗涤(40mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。残留的树脂羟基通过用苯甲酰氯(1.5mL)和吡啶(1.5mL)在二氯甲烷(40mL)中反应2小时而封闭。通过定量的富烯-哌啶分析测定取代水平为0.4mmol/g。

进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟去除Fmoc。(步骤2)将树脂充分洗涤(40mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Tyr(Ot-Bu)-OH(3.68g，8mmol)，HOBt(1.22g，8mmol)和HBTU(3.03g，8mmol)在10mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液和3mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行8小时。(步骤4)将树脂充分洗涤(40mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤5)将Fmoc-Tyr(Ot-Bu)-OH(3.68g，8mmol)，HOBt(1.22g，8mmol)，HBTU(3.03g，8mmol)在10mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液和3mL二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行4小时。(步骤6)将树脂充分洗涤(40mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤7)利用半定量的茚三酮分析和定量的苦味酸分析或富烯-哌啶分析评价发现偶联反应完全。重复步骤1-7直到得到序列Fmoc-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L。

部分B-Ac-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L-OH的制备

将部分A的产物(1g，取代水平＝0.4mmol/g)，放置在50mL AdvancedChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×20mL)洗涤溶胀。使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20mL)处理30分钟去除Fmoc。将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入乙酸酐(0.38mL，4mmol)和二异丙基乙胺(0.84mL，4mmol)，并将树脂混合18小时。通过小部分的裂解的肽的LC/MS评价发现反应完全。

将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(10mL)处理。2分钟后，利用压力将溶液直接过滤到10％吡啶的甲醇溶液(2mL)中。重复裂解步骤九次。将合并的滤液蒸发至5％的体积，用水(15mL)稀释，并在冰-水浴中冷却。在烧结的玻璃漏斗中过滤收集形成的沉淀，用水洗涤，并真空干燥。经HPLC实现纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(41.2×250mm)上，使用1.2％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的45～81％乙腈梯度得到为无色的固体标题化合物(0.103g，总产率31％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 821.8[M+H](100％)；FT-MS：计算值C44H64N6O9[M+H]：821.4808，实测值：821.4792。

部分C-2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸铵的制备

将上述部分B的产物(5.0mg，0.006mmol)和实施例8部分D的产物(2.9mg，0.006mmol)溶解在N，N-二甲基甲酰胺(60μL)中，并用可力丁(0.8μL，0.006mmol)调节碱性。将溶液用HOAt(1.7mg，0.012mmol)和DIC(2.0μL，0.012mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌18小时。减压去除N，N-二甲基甲酰胺并将残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用1.12％/分钟的包含0.1M NH4OAc(pH 7)的36～58.5％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在12.3分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(3.9mg，51％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 1272.4[M+H]。L-亮氨酸的手性分析：99.6％。

部分D-2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸铵的制备

部分C的产物(6.9mg，0.005mmol)溶解在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶苯甲醚∶水(2mL)中，并在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液真空浓缩，并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.05M NH4OAc(pH 7)的22.5～45％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在21.9分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(1mg，15％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 1215.3[M+H]；高分辨MS：计算值C61H74N12O13S[M+H]：1215.5292，实测值：1215.5285。L-亮氨酸的手性分析：99.8％。

实施例11

2-((1E)-2-{[5-(N-{[4-(N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)苯基]甲基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸铵的合成

部分A-2-((1E)-2-{[5-(N-{[4-(N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-5-[(叔丁氧基)羰基氨基]戊酰基氨基}-乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)-苯基]甲基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将实施例14，部分B的产物(20.0mg，0.028mmol)，实施例8，部分D的产物(13.3mg，0.028mmol)和HOAt(7.7mg，0.057mmol)在DMSO(150μL)中的的溶液用可力丁(3.4μL，0.028mmol)和DIC(8.9μL，0.057mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌。2小时后，加入另外的实施例8，部分D的产物(2mg，0.004mmol)和可力丁(7.6μL，0.063mmol)。将反应另外搅拌18小时，并经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.45％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的31.5～45％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在18.2分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(9mg，27％，HPLC纯度，100％)。MS：m/e 1153.4[M+H]。

部分B-2-((1E)-2-{[5-(N-{[4-(N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)苯基]-甲基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸铵的制备

将部分A的产物(9mg，0.008mmol)在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶苯甲醚∶水(6.0mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液浓缩并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1M NH4OAc(pH 7)的9～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在29.5分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(5.8mg，71％，HPLC纯度，100％)。

MS：m/e 1052.4[M+H]；高分辨MS：计算值C51H64N12O11S[M+H]：1053.4611，实测值：1053.4592；L-亮氨酸的手性分析：99.8％。

实施例12

3-(N-{2-[2-(N-{1-[N-({N-[1-(N-{1-[N-(1-{N-[(4-{[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基]甲基}苯基)羰基氨基]-氨基甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨基甲酰基](1S)-2-(4-羟基苯基)乙基}氨基甲酰基)(1S)-3-苯基丙基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酰基](1S)-3-甲基丁基}-氨基甲酰基)(2S)吡咯烷基]-2-氧代乙基}乙酰基氨基)丙酸的合成

部分A-Fmoc-NGlu(Boc)-PLG-Hphe-Y(Ot-Bu)-L-HMPB-BHA树脂的制备

将实施例10，部分A的肽-树脂(1g，取代水平＝0.4mmol/g)放置在50mL Advanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×20mL)洗涤溶胀。使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20mL)处理30分钟去除Fmoc。将树脂充分洗涤(20ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。将树脂用Fmoc-NGlu(Boc)-OH(Simon，R.J.等Proc.Nat.Acad.Sci.：USA 1992，89，9367-9371)(0.51g，1.2mmol)，HOBt(0.18g，1.2mmol)，HBTU(0.46g，1.2mmol)和二异丙基乙胺(0.68mL，4mmol)处理，并混合10小时。通过小部分的裂解的肽LC/MS评价发现偶联反应完全。

部分B-Ac-NGlu(Ot-Bu)-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L-ONH4的制备

将部分A的肽-树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(20mL)处理30分钟。将树脂充分洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入乙酸酐(0.38mL，4mmol)和二异丙基乙胺(0.84mL，4mmol)，并将树脂混合18小时。小部分的裂解的肽的LC/MS评价发现偶联反应完全。

将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(10mL)处理。2分钟之后，利用压力将溶液直接过滤到10％吡啶的甲醇溶液(2mL)中。裂解步骤重复三次。将合并的滤液浓缩并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上使用0.9％/分钟的包含0.1M NH4OAc(pH 7)的36～63％乙腈梯度得到为无色的固体标题化合物(0.12g，总产率30％，HPLC纯度100％)。MS：m/e 1006.5[M+H](100％)。

部分C-2-((1E)-2-{[5-(N-{[4-(N-{(2S)-2-[(2S)-2-((2S)-2-{2-[(2S)-2-({(2S)-1-[2-(N-{2-[(叔丁基)氧基羰基]乙基}乙酰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-基}羰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]乙酰基氨基}-4-苯基丁酰基氨基)-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)苯基]甲基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将上述部分B的产物(20.0mg，0.02mmol)以及实施例8，部分D的产物(9.3mg，0.02mmol)在DMSO(100μL)中的溶液用HOAt(5.4mg，0.04mmol)，可力丁(2.6μL，0.02mmol)和DIC(6.2μL，0.04mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌3小时。加入另外的实施例8，部分D的产物(2mg，0.004mmol)和可力丁(2.6μL，0.02mmol)，并将反应再搅拌2小时。将溶液经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用1％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的40.5～63％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在22.4分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(0.16g，57％，HPLC纯度100％)。MS：m/e 1456.5[M+H]。

部分D-3-(N-{2-[2-(N-{1-[N-({N-[1-(N-{1-[N-(1-{N-[(4-{[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基]甲基}苯基)羰基氨基]-氨基甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨基甲酰基](1S)-2-(4-羟基苯基)乙基}氨基甲酰基)(1S)-3-苯基丙基]氨基甲酰基}甲基)氨基甲酰基](1S)-3-甲基丁基}氨基甲酰基)(2S)吡咯烷基]-2-氧代乙基}乙酰基氨基)丙酸的制备

将部分A的产物溶解在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶苯甲醚∶水(3mL)中，并在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液减压浓缩，并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用1％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的9～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在28.2分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(2.6mg，57％，HPLC纯度，100％)。

MS：m/e 1344.4[M+H]；高分辨MS：计算值C66H81N13O16S[M+H]：1344.5718，实测值：1344.5706；L-亮氨酸的手性分析：99.2％。

实施例13

2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的合成

部分A-N-[(叔丁氧基)羰基氨基]-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺的制备

将Fmoc-6-Ahx-OH(3.00g，8.5mmol)，HOBt(1.41g，9.2mmol)，HBTU(3.49g，9.2mmol)和二异丙基乙胺(3.45mL，19.9mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(15mL)中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌20分钟，并用肼基甲酸叔丁基酯(0.93g，7.0mmol)和二异丙基乙胺(1mL，5.8mmol)处理。将溶液搅拌5小时，用乙酸乙酯(15mL)稀释，连续地用0.1N HCl(3×15mL)，水(25mL)，以及盐水(30mL)洗涤，干燥(Mugs4)，并浓缩得到黄色的油。将油经在硅胶上快速层析纯化，用95∶5 CH₂Cl₂∶甲醇洗脱得到为无色的固体标题化合物(2.51g，71％，HPLC纯度，100％)。

¹H NMR(CDCl3)：δ7，75(d，J＝7.5Hz，2H)，7.58(d，J＝7.5Hz，2H)，7.39(t，J＝7.5Hz，2H)，7.37-7.28(m，3H)，6.48(s，1H)，4.95(s，1H)，4.39(d，J＝6.7Hz，2H)，4.21(t，J＝6.7Hz，1H)，3.17(s，2H)，2.21(t，J＝7.2Hz，2H)，1.82-1.59(m，4H)，1.45(s，9H)，1.40-1.32(m，2H)；13CNMR(CDCl3)：δ172.4，156.5，155.5，144.0，141.3，127.6，127.0，125.0，119.9，81.9，66.5，47.3，40.7，33.8，29.5，28.1，25.9，24.6；

MS：m/e 368.3[M-Boc+H]；高分辨MS：计算值C26H33N3O5[M+H]：468.2493，实测值：468.2485。

部分B-6-氨基-N-[(叔丁氧基)羰基氨基]己酰胺的制备

将部分A的产物(1.44g，3.1mmol)用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(4.0mL)在室温在氮气气氛下处理20分钟。将溶液减压浓缩并将形成的固体经在硅胶上快速层析纯化，连续用甲醇，100∶3甲醇∶TEA和100∶6甲醇∶TEA洗脱，得到为无色的固体标题化合物(0.79g，104％)。

¹H NMR(CDCl3)：δ4.12(bs，2H)，2.80-2.68(m，2H)，2.24(t，J＝7.3Hz，2H)，1.72-1.60(m，2H)，1.58-1.46(m，2H)，1.45(s，9H)，1.43-1.33(m2H)；MS：m/e 246.3[M+H]。

部分C-2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[N-(5-{N-[(叔丁氧基)羰基氨基]氨基甲酰基}戊基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠的制备

将部分B的产物(0.72g，2.9mmol)，2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(1.29g，2.9mmol)，HOAt(0.40g，2.9mmol)和二异丙基乙胺(1.02mL，5.9mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌。2小时之后，加入另外的2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基苯磺酸钠(0.27g，0.6mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL，0.6mmol)，并将反应搅拌过夜。将反应混合物过滤并将滤液浓缩。将形成的残留物经在硅胶上快速层析纯化，用85∶15 CH₂Cl₂/甲醇洗脱，得到为无色的固体标题化合物(0.81g，产率50％，HPLC纯度，＞95％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ11.32(s，1H)，9.45(s，1H)，9.01(s，1H)，8.63(s，1H)，8.59(d，J＝2.1Hz，1H)，8.34-8.23(m，1H)，8.08-7.97(m，2H)，7.78(dd，J＝1.4，7.5Hz，1H)，7.40-7.18(m，3H)，3.28-3.17(m，2H)，2.07(t，J＝7.2Hz，2H)，1.60-1.45(m，4H)，1.45-1.21(m，11H)；MS：m/e 449.2[M-Boc+H]。

部分D-2-{(1E)-2-[(5-{N-[5-(N-氨基氨基甲酰基)戊基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的制备

将部分C的产物(0.37g，0.7mmol)用50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(5mL)在室温在氮气气氛下处理10分钟。将溶液减压浓缩并将残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(41.4×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的0～27％乙腈梯度，以80mL/分钟的流速洗脱。冻干在18.9分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(0.24g，80％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ10.75(s，1H)，9.22(s，1H)，8.64-8.54(m，1H)，8.53(d，J＝1.8Hz，1H)，8.29-8.11(m，2H)，7.80(dd，J＝1.9，7.0Hz，1H)，7.47-7.32(m，2H)，7.23(d，J＝9.1Hz，1H)，4.50(bs，3H)，3.26(q，J＝6.4Hz，2H)，2.23(t，J＝7.3Hz，2H)，1.66-1.45(m，4H)，1.40-1.22(m，2H)；MS：m/e 449.1[M+H]。

部分E-2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将实施例10，部分B的产物(20.0mg，0.024mmol)，实施例13，部分D的产物(10.9mg，0.024mmol)，和HOAt(6.6mg，0.048mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(100μL)中的溶液用可力丁(11.2μL，0.084mmol)和DIC(7.6μL，0.048mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌。并在2小时(3mg，0.007mmol)和在5小时(8mg，0.018mmol)加入另外的实施例13，部分D的产物。将反应搅拌另外的18小时并减压浓缩。将形成的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna柱(21.2×250mm)上，使用0.67％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的36～54％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在21.7分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(11mg，36％，HPLC纯度，100％)。MS：m/e 1251.6[M+H]。

部分F-2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将部分E的产物(11mg，0.009mmol)在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶苯甲醚∶水(2mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.5％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的31.5～45％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在15.4分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(3mg，29％，HPLC纯度，100％)。

MS：m/e 1195.5[M+H]；高分辨MS：计算值C59H78N12O13S[M+H]：1195.5605，实测值：1195.5579。

L-亮氨酸的手性分析：99.8％。

实施例14

2-((1E)-2-{[5-(N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸铵的合成

部分A-Fmoc-PO(Boc)G-Hphe-L-HMPB-BHA树脂的制备

将HMPB-BHA树脂(2.000g，取代水平＝0.68mmol/g)放置在200mLAdvanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×50mL)洗涤溶胀。将Fmoc-Leu-OH(3.60g，10.2mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液加入至容器中，并将混合物轻微振荡15分钟。加入2，6-二氯苯甲酰氯(1.5mL，10.9mmol)和吡啶(1.23mL，15.3mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)并将混合物在氮气气氛下在环境温度振荡15小时。将树脂洗涤(50mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)，二氯甲烷(3x)和N，N-二甲基甲酰胺(3x)。将苯甲酰氯(2.5mL，21.0mmol)和吡啶(2.5mL，30.6当量)在N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液加入至树脂中，并将容器在氮气气氛下振荡10小时并洗涤(50mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)和二氯甲烷(3x)。对干燥的树脂样品进行富烯-哌啶分析显示负载量为0.450mmol/g。

进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(50mL)处理30分钟去除Fmoc。(步骤2)将树脂洗涤(50ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Hphe-OH(3.01g，7.5mmol)，HOBt(1.15g，7.5mmol)和HBTU(2.84g，7.5mmol)在50mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液以及2mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行5小时。(步骤4)如步骤2洗涤树脂。(步骤5)重复步骤3和4。(步骤6)利用定性的Kaiser测试监测反应完全。重复步骤1-6直到得到需要的序列。

部分B-Ac-PO(Boc)G-Hphe-L-OH的制备

将部分A的产物(1.5g)放置在100mL Advanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×20mL)洗涤溶胀。将肽-树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(30mL)处理30分钟，然后洗涤(30ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)核N，N-二甲基甲酰胺(3×)。将树脂用乙酸酐(0.63mL，6.75mmol)和二异丙基乙胺(1.4mL，8.1mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(30mL)处理，然后洗涤(30ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)核二氯甲烷(3×)，并真空干燥。将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(12mL)处理。2分钟之后，利用氮气压力将溶液直接过滤到包含1∶9吡啶/甲醇(2mL)的烧瓶中。重复裂解步骤十(10)次。合并的滤液浓缩得到油性的固体。将粗制的产物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的18～45％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在28.5分钟洗脱的主要产物峰得到313.1mg(66.0％)为无色的固体标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 603.7[M+H-Boc](100％)，703.8[M+H](95％)，1428.4[2M+Na]。

部分C-2-((1Z)-2-{[5-(N-氨基氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸钠的制备

将实施例7，部分A的产物(150mg，0.344mmol)溶解在1∶1三氟乙酸∶二氯甲烷(8mL)中，并在氮气气氛下在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩得到金黄色的油，将其经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用1.08％/分钟的包含50mM乙酸铵的4.5～31.5％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。将产物级分冻干得到无色固体，将其经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250)上，使用1％/分钟的包含100mM乙酸钠的0～30％乙腈梯度洗脱。将主要的产物峰在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上脱盐，用水稀释至乙腈浓度为4％并泵送到柱上。将柱以20mL/分钟的流速用4％乙腈等梯度洗脱15分钟，然后2.3％/分钟的4～50％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干主要产物级分得到为无色的固体标题化合物(86.3g，59.0％)，HPLC检测的纯度为98.6％。

MS：m/e 336.1[M+H](100％)，671.1[2M+H](75％)，1006.3[3M+H](15％)。

部分D-2-((1E)-2-{[5-(N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-5-[(叔丁氧基)羰基氨基]戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将部分B的产物(20.0mg，0.0285mmol)、部分C产物(9.5mg，0.0285mmol)和HOAt(3.9mg，0.0285mmol)在DMSO(150μL)中的溶液用可力丁(16μL，0.114mmol)和DIC(4.5μL，0.0285mmol)处理，并在氮气气氛下在室温搅拌。24小时后，将反应溶液用另外的部分C产物(4.8mg，0.0143mmol)，DIC(2.3μL，0.0143mmol)和可力丁(12μL，0.0855mmol)处理。在第44小时，反应经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用1.29％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的13.5～52.2％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在23～26.5分钟洗脱的产物峰得到为无色的固体标题化合物(19.6mg，68.0％)，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 460.9[M-Boc+2H](30％)，920.4[M+H-Boc](10％)，1020.4[M+H](100％)。

部分E-2-((1E)-2-{[5-(N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸铵的制备

将部分D产物(19.0mg，0.0186mmol)溶解在1∶1三氟乙酸∶二氯甲烷(5mL)中，并在氮气气氛下在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并将形成的固体经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上使用0.45％/分钟的包含100mM乙酸铵的18～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在第27分钟洗脱的主要产物峰得到10.9mg(60.0％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 460.7[M+2H](100％)；920.3[M+H](90％)；高分辨MS：计算值C43H58N11O10S[M+H]：920.4083，实测值：920.4063；

L-亮氨酸的手性分析：99.9％。

实施例15

3-[N-(2-{2-[N-(1-{N-[(N-{1-[N-(1-{N-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基]氨基甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨基甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨基甲酰基)甲基]氨基甲酰基}(1S)-4-氨基丁基)氨基甲酰基](2S)吡咯烷基}-2-氧代乙基)乙酰基氨基]丙酸铵盐的合成

部分A-Ac-NGlu(O-t-Bu)-PO(Boc)G-Hphe-L-OH的制备

实施例14，部分A的产物(1.00g，取代水平＝0.5mmol/g)放置在200mlAdvanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×50mL)洗涤溶胀。进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(50mL)处理30分钟去除Fmoc。(步骤2)将树脂洗涤(50mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-NGlu(Ot-Bu)-OH(0.64g，1.5mmol)，HOBt(0.23g，1.5mmol)，和HBTU(0.57g，1.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(60mL)和二异丙基乙胺(1mL)加入至树脂中，并将反应进行10小时，然后按照步骤2洗涤。(步骤4)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(50mL)处理30分钟去除Fmoc，然后按照步骤2洗涤。(步骤5)将树脂用乙酸酐(0.3mL，5mmol)和二异丙基乙胺(0.81mL，6mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(60mL)溶液处理，并将混合物在氮气气氛下振荡18小时。将树脂洗涤(50mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)和二氯甲烷(3x)，并真空干燥。

将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(12mL)处理2分钟。通过应用压力将溶液直接过滤到包含1∶9吡啶∶甲醇(2mL)的烧瓶中。将裂解步骤重复十(10)次。合并的滤液浓缩得到油性的固体。将粗制的产物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(41.4×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的31.5～58.5％乙腈梯度，以80mL/分钟的流速洗脱。冻干在第20.3分钟洗脱的主要产物峰得到165.3mg(37.1％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为93.7％。MS：m/e788.4[M+H-Boc](85％)，888.5[M+H](100％)。

部分B-2-{(1E)-2-[(5-{N-[(2S)-2-((2S)-2-{2-[(2S)-2-({(2S)-1-[2-(N-{2-[(叔丁基)氧基羰基]乙基}乙酰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-基}羰基氨基)-5-[(叔丁氧基)羰基氨基]戊酰基氨基]乙酰基氨基}-4-苯基丁酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸铵的制备

将部分A的产物(15.0mg，0.0169mmol)，实施例14，部分C的产物(5.67mg，0.0169mmol)，和HOAt(2.32mg，0.0169mmol)在DMSO(150μL)中的溶液用可力丁(9μL，0.0676mmol)和DIC(2.65μL，0.0169mmol)处理并在氮气气氛下在室温搅拌。4小时之后，加入另外的实施例14，部分C的产物(2.85mg，0.0084mmol)，DIC(1.33μL，0.0084mmol)和可力丁(4.5μL，0.0338mmol)。将反应搅拌另外的16小时，并经纯化HPLC：在Phenomenex JupiterC18柱(21.2×250mm)上，使用0.52％/分钟的包含100mM乙酸铵的33.8～49.5％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在第17～22.5分钟洗脱的主要峰产物得到10.6mg(52.0％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 525.4[(M-Boc-(t-Bu))+2H](90％)，1205.4[M+H](100％)，L-亮氨酸的手性分析：95.4％。

部分C-3-[N-(2-{2-[N-(1-{N-[(N-{1-[N-(1-{N-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基]氨基甲酰基}(1S)-3-甲基丁基)氨基甲酰基](1S)-3-苯基丙基}氨基甲酰基)甲基]氨基甲酰基}(1S)-4-氨基丁基)氨基甲酰基](2S)吡咯烷基}-2-氧代乙基)乙酰基氨基]丙酸铵盐的制备

将部分B的产物(9.6mg，0.008mmol)溶解在38∶1∶1三氟乙酸/苯甲醚/水(4mL)中，并在氮气气氛下在环境温度搅拌10分钟。将溶液浓缩并将形成的固体经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.45％/分钟的包含100mM乙酸铵的18～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在20分钟洗脱的主要产物峰得到5.6mg(66.7％)为无色的固体的标题化合物，检测的纯度为100％HPLC。

MS：m/e 525.3[M+2H](40％)；1049.4[M+H](100％)；高分辨MS：计算值C43H58N11O10S[M+H]：1049.4509实测值：1049.4512；

L-亮氨酸的手性分析：99.5％。

实施例16

2-[(1E)-2-({5-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸铵的合成

部分A-2-[(1E)-2-({5-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将实施例10，部分B的产物(15.0mg，0.0183mmol)，实施例14，部分C的产物(6.12mg，0.0183mmol)，和HOAt(2.51mg，0.0183mmol)在DMSO(150μL)中的溶液用可力丁(9.7μL，0.0732mmol)和DIC(2.87μL，0.0183mmol)处理，并在氮气气氛下在室温搅拌。1.5小时之后，反应混合物用另外的实施例14，部分C的产物(3.0mg，0.0092mmol)，DIC(1.45μL，0.0092mmol)，和可力丁(4.9μL，0.0366mmol)处理。将反应搅拌总计22小时并经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的36～63％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在23.7分钟洗脱的主要产物峰得到11.3mg(54.3％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。MS：m/e 1138.5[M+H](100％)；L-亮氨酸的手性分析：98.7％。

部分B-脱保护

将部分A的产物(9.6mg，0.0084mmol)溶解在38∶1∶1三氟乙酸∶苯甲醚∶水(4mL)中，并在在氮气气氛下在环境温度搅拌15分钟。将溶液减压浓缩并将形成的固体经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.0.9％/分钟的包含100mM乙酸铵的22.5～49.5％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在21.5分钟洗脱的主要产物峰得到3.1mg(34.2％)为无色的固体标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 541.7[M+2H](25％)；1082.5[M+H](100％)；高分辨MS：计算值C53H68N11O12S[M+H]：1082.4764.实测值：1082.4762.

实施例17

2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸铵的合成

部分A-Fmoc-PLG-Hphe-O(Boc)L-HMPB-BHA树脂的制备

将HMPB-BHA树脂(8.000g，取代水平＝0.68mmol/g)放置在200mLAdvanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×45mL)洗涤溶胀。将Fmoc-Leu-OH(5.77g，16.32mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液(45mL)加入至容器中，并将混合物振荡15分钟。加入2，6-二氯苯甲酰氯(2.5mL，16.32mmol)和吡啶(2.0mL，24.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(45mL)溶液并将混合物在氮气气氛下在环境温度振荡18小时。将树脂洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)，二氯甲烷(3x)和N，N-二甲基甲酰胺(3x)。将苯甲酰氯(3.0mL，26mmol)和吡啶(3.0mL，36.7mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(90mL)中的溶液加入至树脂中，并将容器在氮气气氛下振荡3小时并洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)和二氯甲烷(3x)。对干燥的树脂样品进行的富烯-哌啶分析显示负载量为0.340mmol/g。

进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(90mL)处理30分钟去除Fmoc。(步骤2)将树脂洗涤(90ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Orn(Boc)-OH(3.71g，8.16mmol)，HOBt(1.25g，8.16mmol)，和HBTU(3.10g，8.16mmol)在90mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液和2mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行5小时。(步骤4)按照步骤2洗涤树脂。(步骤5)将Fmoc-Orn(Boc)-OH(3.71g，8.16mmol)和PyBroP(3.8g，8.16mmol)在90mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液和2mL的二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行5小时。(步骤7)将树脂洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，和二氯甲烷(3×)。(步骤6)富烯-哌啶分析检测反应完全。重复步骤1～7直到得到需要的序列。偶联产率＞95％。

部分B-Ac-PLG-Hphe-O(Boc)L-OH的制备

将部分A的肽-树脂(2.5g)放置在100mL Advanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×30mL)洗涤溶胀。将树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(30mL)处理30分钟以去除Fmoc保护基，然后洗涤(30ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入乙酸酐(0.78mL，4.2mmol)，二异丙基乙胺(0.88mL，5.0mmol)，和N，N-二甲基甲酰胺(30mL)，并将混合物轻微振荡2小时。将肽-树脂洗涤(30mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，和二氯甲烷(3×)，并真空干燥。将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(12mL)处理2分钟。通过应用压力将溶液直接过滤到包含1∶9吡啶∶甲醇(2mL)的烧瓶中。重复裂解步骤十次(10)。合并的滤液浓缩得到无色油性的固体。将粗产物用水(2×25mL)研磨并干燥减压得到干燥的固体。将该固体经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的22.5～58.5％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在28.5分钟洗脱的主要产物峰得到68.4mg(9.3％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。MS：m/e 716.6[M+H-Boc](90％)，816.7[M+H](100％)。

部分C-2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-[(叔丁氧基)羰基氨基]戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将部分B的产物(15.0mg，0.0184mmol)，实施例8部分D的产物(8.62mg，0.0184mmol)，和HOAt(2.52mg，0.0184mmol)在DMSO(150μL)中的溶液用可力丁(9.7μL，0.0736mmol)和DIC(2.88μL，0.0184mmol)处理，并在氮气气氛下在室温搅拌。5小时后，反应溶液用另外的实施例8，部分D的产物(2.16mg，0.0046mmol)，DIC(0.72μL，0.0046mmol)，和可力丁(2.5μL，0.0184mmol)处理，搅拌另外的15小时。将反应经HPLC纯化：在P C18henomenex Luna柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的27～54％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在24.9分钟洗脱的主要产物峰得到14.1mg(60.0％)为无色的固体需要的产物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 583.9[M-Boc+2H](100％)，1166.5[M+H-Boc](20％)，1266.5[M+H](100％)；L-亮氨酸的手性分析：98.9％。

部分D-2-[(1E)-2-({5-[N-({4-[N-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)氨基甲酰基]苯基}甲基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸铵的制备

将部分C的产物(13.0mg，0.0103mmol)溶解在1∶1三氟乙酸∶二氯甲烷(3mL)中，并在氮气气氛下在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并将形成的固体经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.45％/分钟的包含100mM乙酸铵的22.5～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在28.0分钟洗脱的主要产物峰得到10.9mg(60.0％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 584.0[M+2H](55％)；1166.5[M+H](100％)；高分辨MS：计算值C57H76N13O12S[M+H]：1166.5451，实测值：1166.5456；L-亮氨酸的手性分析：99.9％。

实施例18

2-((1E)-2-{[5-(N-{[4-(N-{2-[2-(2-{2-[2-({1-[(2R)-2-(乙酰基氨基)-3-(氨基氧基磺酰基)丙酰基](2S)吡咯烷-2-基}羰基氨基)(2S)-4-甲基戊酰基氨基]乙酰基氨基}(2S)-4-苯基丁酰基氨基)(2S)-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基](2S)-4-甲基戊酰基氨基}氨基甲酰基)苯基]甲基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸铵的合成

部分A-Ac-Csa-PLG-Hphe-Y(t-Bu)L-OH的制备

将实施例10，部分A的肽-树脂(500mg，取代水平＝0.4mmol/g)放置在50mL Advanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×20mL)洗涤溶胀。进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20mL)处理30分钟去除Fmoc。(步骤2)将树脂洗涤(20mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Csa-OH(Hubbuch，A.；Danho，W.；Zahn，H.Liebigs Ann.Chem.1979，776-783)(240mg，0.60mmol)，HOBt(90mg，0.60mmol)，和HBTU(230mg，0.60mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液和二异丙基乙胺(1mL)加入至树脂中，并将混合物轻微振荡5小时，然后按照步骤2洗涤。(步骤4)重复步骤3。(步骤5)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20mL)处理30分钟去除Fmoc，然后按照步骤2洗涤。(步骤5)将肽-树脂用乙酸酐(0.35mL 4mmol)和二异丙基乙胺(0.87mL，5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中处理，并将混合物在氮气气氛下振荡18小时。将树脂洗涤(20mL体积)；N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)，和二氯甲烷(3x)，并真空干燥。

将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(10mL)处理2分钟。通过应用压力将溶液直接过滤到包含1∶9吡啶∶甲醇(2mL)的烧瓶中。重复裂解步骤十次(10)。合并的滤液浓缩得到无色油性的固体。将粗制的产物经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(41.4×250mm)上，使用0.66％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的26.1～45.9％乙腈梯度，以80mL/分钟的流速洗脱。将24～28分钟的主要产物峰冻干得到67.3mg的标题化合物和从酪氨酸上缺失叔丁基的肽的51∶49混合物。这两种产物的总产率为17.0％。

MS(保护的)：m/e 972.5[M+H](100％)；MS(脱保护的)：m/e 916.3[M+H](100％)。

部分B-偶联反应

将部分A的产物(15.0mg，0.0154mmol)，实施例8，部分D的产物(7.3mg，0.0154mmol)，和HOAt(2.15mg，0.0154mmol)在DMSO(150μL)中的溶液用可力丁(7.2μL，0.0543mmol)和DIC(2.50μL，0.0154mmol)处理，并在氮气气氛下在室温搅拌。3小时后，将反应溶液用另外的实施例8，部分D的产物(1.83mg，0.0039mmol)，DIC(0.54μL，0.0039mmol)，和可力丁(1.8μL，0.0154mmol)处理，搅拌另外的17小时。将反应经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的18～54％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在29.5分钟洗脱出保护产物的偶联物并冻干得到无色固体(5.0mg)。在19.0分钟洗脱标题化合物并冻干得到无色固体，经HPLC纯化：在Phenomenex Jupiter C18柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含100mM乙酸铵的18～54％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在21.0分钟洗脱的主要产物峰得到7.1mg(64.5％，对保护的偶联物校准)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 1367.4[M+H](100％)；高分辨MS：计算值C64H80N13O17S2[M+H]：1366.5215，实测值：1366.5208；

L-亮氨酸的手性分析：99.9％。

实施例19

2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-(乙酰基氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的合成

将乙酸酐(10.9μL，0.12mmol)，实施例13，部分D的产物(52mg，0.12mmol)，和HOAt(30.8mg，0.23mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的溶液用二异丙基乙胺(100μL，0.57mmol)和DIC(35.5μL，0.24mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌3小时。将溶液浓缩并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的0～27％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在23分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体的标题化合物(36mg，63％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ9.72-9.60(m，2H)，9.32(s，1H)，8.66(s，1H)，8.50-8.43(m，1H)，8.42-8.19(m，2H)，7.85-7.73(m，1H)，7.53-7.36(m，2H)，7.20(d，J＝9.3Hz，1H)，3.13-3.32(m，2H)，2.12(t，J＝7.2Hz，2H)，1.83(s，1H)，1.63-1.42(m，4H)，1.41-1.22(m，2H)；

MS：m/e 491.2[M+H]；高分辨MS：计算值C21H26N6O6S[M+H]：491.1707，实测值：491.1702.

实施例20

2-((1E)-2-氮杂-2-{[5-(N-{5-[N-(12-羟基十二烷酰氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}乙烯基)苯磺酸的合成

将12-羟基十二烷酸(25mg，0.12mmol)，实施例13，部分D的产物(52mg，0.12mmol)和HOAt(30.8mg，0.23mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的溶液用二异丙基乙胺(100μL，0.57mmol)和DIC(35.5μL，0.24mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌3小时。加入另外的实施例13，部分D的产物(8mg，0.02mmol)，并将反应再搅拌3小时。将反应经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸18～45％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在洗脱21分钟的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(29mg，39％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ9.63(s，2H)，9.30(s，1H)，8.64(s，1H)，8.50-8.44(m，1H)，8.40-8.18(m，2H)，7.88-7.75(m，1H)，7.52-7.46(m，2H)，7.20(d，J＝9.2Hz，1H)，3.36(t，J＝6.4Hz，2H)，3.31-3.18(m，2H)，2.17-2.00(m，4H)，1.62-1.18(m，24H)；MS：m/e 647.4[M+H]；高分辨MS：计算值C31H46N6O7S[M+H]：647.3221，实测值：647.3217.

实施例21

2-((1E)-2-氮杂-2-{[5-(N-{5-[N-(十二烷酰氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}乙烯基)苯磺酸的合成

将月桂酸(23.2mg，0.12mmol)，实施例13，部分D的产物(52mg，0.12mmol)和HOAt(30.8mg，0.23mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的溶液用二异丙基乙胺(100μL，0.57mmol)和DIC(35.5μL，0.24mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌2小时。将溶液减压浓缩并经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.6％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的31.5～49.5％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在31.1分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(34mg，47％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ9.63(s，2H)，9.30(s，1H)，8.64(s，1H)，8.50-8.43(m，1H)，8.40-8.18(m，2H)，7.85-7.75(m，1H)，7.50-7.36(m，2H)，7.20(d，J＝9.2Hz，1H)，3.31-3.18(m，2H)，2.18-2.00(m，4H)，1.62-1.39(m，6H)，1.39-1.11(m，18H)，0.90-0.78(m，3H)；

MS：m/e 631.3[M+H]。高分辨MS：计算值C31H46N6O6S[M+H]：631.3272，实测值：631.3272.

实施例22

2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[N-(5-羟基十二烷酰氨基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸的合成

将δ-十二内酯(dedocanolactone)(7.9mg，0.04mmol)和实施例14，部分C的产物(20mg，0.06mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的溶液用2-乙基己酸钠(16.5mg，0.1mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌18小时，然后在50℃加热48小时。将溶液浓缩并将残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用1.35％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的18～45％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在19.2分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(1.2mg，7.0％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 534.3[M+H]；高分辨MS：计算值C25H35N5O6S[M+H]：534.2381，实测值：534.2375.

实施例23

2-{(1E)-2-氮杂-2-[(5-{N-[2-(8-羟基十二烷酰氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]乙烯基}苯磺酸的合成

部分A-乙基7-(氯羰基)庚酸酯(heptanoate)的制备

将乙基hydrogen seburate(5.0g，24.7mmol)在包含5滴的N，N-二甲基甲酰胺的无水的二氯甲烷(15mL)中的溶液用草酰氯(2.16mL，24.7mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌3小时。减压去除溶剂得到无色油(5.49g，101％)。IR(将CH₂Cl₂溶液沉积在NaCl板上，cm^-1)：1797.4(C＝O)，1730.9(C＝O)；

¹H NMR(CDCl3)：δ4.11(q，J＝7.1Hz，2H)，2.87(t，J＝7.3Hz，2H)，2.28(t，J＝7.5Hz，2H)，1.73-1.67(m，2H)，1.67-1.57(m，2H)，1.38-1.30(m，4H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H)；13C NMR(CDCl3)：δ173.7，173.6，60.2，47.0，34.2，28.5，28.0，24.7，24.5，14.2.

部分B-8-氧代十二烷酸乙基酯的制备

将无水的氯化锌(0.69g，5.1mmol)在无水的醚(10mL)中的溶液在-78℃用滴加丁基氯化镁(2.53mL，2.0M的醚溶液，5.1mmol)处理。将温度升高至0℃并将反应混合物用部分A的产物(1.23g，5.6mmol)的无水的THF溶液(10mL)然后用Pd(PPh₃)₄(0.057g，0.05mmol)处理。形成的混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌1.5小时。通过加入1N HCl(2mL)中止反应并用己烷萃取(2×20mL)。将合并的有机层用饱和的NaHCO₃(30mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，并浓缩。将形成的残留物在硅胶上层析，用1∶3乙酸乙酯/己烷洗脱得到浅黄色的油状标题化合物(1.06g，96％)。IR(将CH₂Cl₂溶液沉积在NaCl板上，cm^-1)：1737.5(C＝O)，1704.3(C＝O)；¹H NMR(CDCl3)：δ4.10(q，J＝7.1Hz，2H)，2.37(t，J＝7.5Hz，4H)，2.26(t，J＝7.5Hz，2H)，1.63-1.50(m，6H)，1.31-1.26(m，6H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H)，0.89(t，J＝7.5Hz，3H)；13C NMR(CDCl3)：δ211.4，173.7，60.2，42.6，42.5，34.3，28.9，28.8，26.0，24.8，23.6，22.4，14.2，13.8；MS：m/e 279.1[M+Na]。

部分C-8-氧代十二烷酸的制备

将部分B的产物(0.50g，2.1mmol)在THF(7mL)和水(2mL)中的溶液用3N LiOH(7.06mL，20.1mmol)处理，并在室温在氮气气氛下快速搅拌18小时。去除THF并将得到的混合物用37％HCl(2.5mL)酸化至pH 4并用CH₂Cl₂(20mL)萃取。将有机层用饱和的NaHCO₃(20mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，并浓缩得到为无色的固体标题化合物(0.32g，72％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.42-2.33(m，4H)，2.08-2.03(m，2H)，1.47-1.39(m，6H)，1.28-1.14(m，6H)，0.85(t，J＝7.4Hz，3H)；13C NMR(DMSO-d₆)：δ210.5，174.7，41.7，41.5，34.2，28.4，28.3，25.4，24.6，23.1，21.7，13.7；MS：m/e 197.3[M-H₂O+H]。

部分D-8-羟基十二烷酸的制备

将部分C的产物(0.15g，0.7mmol)在乙醇(3mL)中的溶液用NaBH₄(0.013g，0.3mmol)在0℃在氮气气氛下处理10分钟。加入另外的NaBH₄(0.052g，1.2mmol)，并将反应搅拌1.5小时。将反应用1N HCl(10mL)中止。减压去除乙醇并将形成的溶液用CH₂Cl₂萃取(3×10mL)。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，并浓缩得到为无色的固体的标题化合物(0.118g，78％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ11.95(s，1H)，4.19(s，1H)，2.18(t，J＝7.4Hz，2H)，1.52-1.47(m，2H)，1.35-1.20(m，14H)，0.86(t，J＝7.0Hz，3H)；

13C NMR(DMSO-d₆)：δ174.4，69.4，37.1，36.9，33.6，28.9，28.6，27.5，25.1，24.4，22.3，14.0；MS：m/e 181.4[M-H₂O+H]。

部分E-2-((1E)-2-氮杂-2-{[5-(N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}乙烯基)苯磺酸的制备

将2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠(5.50g，12.5mmol)和HOAt(1.70g，12.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(8mL)中的溶液用N-Boc-乙二胺(2.00g，12.5mmol)和二异丙基乙胺(4.38mL，25.0mmol)处理，并将形成的溶液在室温在氮气气氛下搅拌4小时。减压去除N，N-二甲基甲酰胺并将形成的残留物在硅胶上层析，用甲醇洗脱得到浅黄色的固体标题化合物(3.48g，120％)。

MS：m/e 464.1[M+H]。

部分F-2-[(1E)-2-({5-[N-(2-氨基乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将部分E的产物(2.8g，6.0mmol)溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷(10mL)中，并在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液浓缩并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(41.4×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的0～18％乙腈的梯度，以80mL/分钟的流速洗脱。将在约17.0分钟洗脱出的主要产物峰合并，并冻干得到为无色的固体的标题化合物(1.39g，产率64％，HPLC纯度：100％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ9.18(s，1H)，8.68-8.52(m，2H)，8.28-8.05(m，2H)，7.91-7.65(m，4H)，7.50-7.32(m，2H)，7.27(d，J＝9.0Hz，1H)，3.62-3.45(m，2H)，3.15-2.94(m，2H)；

MS：m/e 364.1[M+H]。高分辨MS：计算值C15H17N5O4S[M+H]：364.1074，实测值：364.1078.

部分G-2-{(1E)-2-氮杂-2-[(5-{N-[2-(8-羟基十二烷酰氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]乙烯基}苯磺酸的制备

将部分F的产物(0.025g，0.07mmol)，部分D的产物(0.015g，0.07mmol)，二异丙基乙胺(23μL，0.14mmol)，和HOAt(19mg，0.14mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液用DIC(21μL，0.14mmol)和二异丙基乙胺(21μL，0.13mmol)处理，并将反应在室温在氮气气氛下搅拌18小时。将溶液减压浓缩并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex LunaC18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的18～41.4％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。冻干在21分钟洗脱的主要产物峰得到为无色的固体标题化合物(22.7mg，产率58％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 562.3[M+H]；高分辨MS：计算值C27H39N6O6S[M+H]：562.2694，实测值：562.2681.

实施例24

2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-({[4-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基}羰基氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的合成

部分A-(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-[4-(羟基甲基)苯基]-4-甲基戊酰胺的制备

将Boc-Leu-OH(2.02g，8.1mmol)，PABA(1.00g，8.1mmol)，和EEDQ(2.21g，8.9mmol)在1∶1甲苯∶乙醇(20mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌4小时。将溶液减压浓缩并将形成的残留物在硅胶上层析，连续用1∶4乙酸乙酯∶己烷，1∶2乙酸乙酯∶己烷和1∶1乙酸乙酯∶己烷洗脱得到为无色的固体标题化合物(2.62g，96％)。

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.46(s，1H)，7.49(d，J＝8.3Hz，2H)，7.28(d，J＝8.3Hz，2H)，4.98(s，1H)，4.64(s，2H)，4.27(s，1H)，1.83-1.73(m，2H)，1.70(s，1H)，1.62-1.55(m，1H)，1.47(s，9H)，1.030.93(m，6H)；

MS：m/e 237.3[M-Boc+H]；高分辨MS：计算值C18H28N2O4[M+H]：337.2122，实测值：337.2118.

部分B-(4-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲基(4-硝基苯氧基)甲酸酯的制备

将部分A的产物(1.00g，3.0mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(0.6g，3.0mmol)在无水的二氯甲烷(10mL)中的溶液冷却至0℃，用吡啶(0.4mL，4.9mmol)处理在环境温度在氮气气氛下搅拌2小时。将溶液用CH₂Cl₂(30mL)稀释，用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，在MgSO₄上干燥，并减压浓缩。将形成的残留物经快速硅胶层析纯化，用3∶1乙酸乙酯/己烷洗脱得到无色结晶固体的标题化合物(1.02g，68％)。

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.48(s，1H)，8.30-8.26(m，2H)，7.57(d，J＝8.4Hz，2H)，7.42-7.36(m，4H)，5.25(s，2H)，4.92(s，1H)，4.24(s，1H)，1.85-1.70(m，2H)，1.62-1.53(m，1H)，1.48(s，9H)，1.02-0.95(m，6H)；13C NMR(CDCl₃)：δ170.9，155.5，152.4，145.4，138.6，129.8，129.7，125.3，121.8，119.9，80.8，70.7，53.8，40.2，28.3，24.8，22.9，21.9；

MS：m/e 524.3[M+Na]；高分辨MS：计算值C18H28N2O4[M+H]：502.2184，实测值：502.2183.

部分C-2-((1E)-2-{[5-(N-{5-[N-({[4-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基}羰基氨基)氨基甲酰基]戊基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将部分B的产物(105mg，0.2mmol)和实施例13，部分D的产物(50mg，0.11mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液用TEA(17μL，0.12mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌2天。将溶液减压浓缩并形成的黄色的粘性油状物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷(4mL)中，并在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液浓缩并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.67％/分钟的包含0.1MNH4OAc(pH 7)的15～35％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在23.2分钟洗脱的主要产物峰冻干得到为无色的固体标题化合物(14mg，产率18％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ11.30(s，1H)，10.43(s，1H)，9.60(s，1H)，9.05-9.00(m，2H)，8.59(d，J＝2.1Hz，1H)，8.30-8.25(m，1H)，8.05-7.98(m，2H)，7.78(dd，J1＝7.7Hz，J2＝1.3Hz，1H)，7.60(d，J＝8.1Hz，2H)，7.37-7.25(m，4H)，7.22(d，J＝8.8Hz，1H)，5.0(s，2H)，3.83(t，J＝7.0Hz，1H)，3.26-15(m，2H)，2.06-2.01(m，2H)，1.72-1.48(m，7H)，1.43-1.23(m，2H)，0.95-0.83(m，6H)；

13C NMR(DMSO-d₆)：δ171.9，171.8，164.8，158.5，156.1，147.8，145.9，137.8，136.7，132.2，132.0，128.7，128.6，127.5，126.7，125.1，121.0，119.3，105.2，65.5，52.1，40.7，33.0，28.9，25.9，24.7，23.7，22.7，21.8，21.0；

MS：m/e 711.3[M+H]。

实施例25

[4-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲基[11-(N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}氨基甲酰基)十一烷酰氧基]甲酸酯的合成

部分A-(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-N-[4-(羟基甲基)苯基]-4-甲基戊酰胺的制备

将Fmoc-Leu-OH(2.0g，5.7mmol)，PABA(0.7g，5.7mmol)和EEDQ(1.4g，6.3mmol)在1∶1甲苯∶乙醇(30mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌3天。加入另外的PABA(0.14g，1.1mmol)，并将反应再搅拌18小时。加入另外的EEDQ(0.4g，1.9mmol)，并将反应再搅拌2小时，并浓缩。将形成的残留物溶解在二氯甲烷(20mL)中，连续地用1N HCl(3×20mL)，饱和的NaHCO₃(3×20mL)，以及盐水(20mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。形成的固体经快速硅胶层析纯化，用50∶1二氯甲烷∶甲醇洗脱得到为无色的固体的标题化合物(2.03g，78％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ9.96(s，1H)，7.89(d，J＝7.5Hz，2H)，7.74(t，J＝7.0Hz，2H)，7.63(d，J＝8.2Hz，1H)，7.55(d，J＝8.4Hz，2H)，7.44-7.38(m，2H)，7.34-7.29(m，2H)，7.23(d，J＝8.4Hz，2H)，5.08(t，J＝5.7Hz，1H)，4.43(d，J＝5.7Hz，2H)，4.30-4.19(m，4H)，1.73-1.64(m，1H)，1.63-1.56(m，1H)，1.49-1.44(m，1H)，0.96-0.73(m，6H)；

13C NMR(DMSO-d₆)：δ171.3，156.0，143.9，143.7，140.7，137.5，137.4，127.6，127.0，126.8，125.3，120.1，119.0，65.5，62.5，53.8，46.7，40.6，24.3，23.0，21.4；

MS：m/e 459.2[M+H](100％)，481.2[M+Na](60％)。

部分B-(4-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲基(4-硝基苯氧基)甲酸酯的制备

将部分A的产物(0.50g，1.1mmol)和4-硝基苯基氯甲酸酯(0.66g，3.3mmol)在无水的二氯甲烷(15mL)中的溶液用吡啶(0.73mL，8.9mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌1.5小时。将反应混合物过滤并将滤液浓缩。将形成的残留物经快速硅胶层析纯化，用1∶3 EtOA∶己烷洗脱得到无色结晶固体的标题化合物(0.13g，19％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ10.13(s，1H)，8.31(d，J＝9.1Hz，2H)，7.88(d，J＝7.3Hz，2H)，7.74(t，J＝7.0Hz，2H)，7.69-7.62(m，3H)，7.59-7.53(m，2H)，7.44-7.35(m，4H)，7.36-7.29(m，2H)，5.25(s，2H)，4.33-4.20(m，4H)，1.74-1.65(m，1H)，1.64-1.56(m，1H)，1.51-1.43(m，1H)，0.95-0.83(m，6H)；

13C NMR(DMSO-d₆)：δ171.7，156.0，155.3，151.9，145.1，143.8，143.7，140.7，139.4，129.4，129.3，127.6，127.0，126.2，125.4，125.3，123.9，122.6，120.1，119.2，115.9，70.2，65.6，53.8，46.6，40.5，24.3，23.0，21.4；

MS：m/e 624.2[M+H]。

部分C-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}-12-羟基十二烷酰胺的制备

将12-羟基十二烷酸(0.135g，0.6mmol)，N-Boc-乙二胺(0.100g，0.6mmol)，HOAt(0.170g，1.2mmol)，和二异丙基乙胺(0.22mL，1.2mmol)在无水的N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液用DIC(0.19mL，1.2mmol)处理，并将反应在室温在氮气气氛下搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯(25mL)稀释，连续地用1N HCl(25mL)，0.5N NaOH(25mL)，以及盐水(25mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，并浓缩。将形成的残留物经快速硅胶层析纯化，用乙酸乙酯洗脱得到为无色的固体标题化合物(0.237g，LC/MS[1]显示含有1，3-二异丙基脲)。MS：m/e 259.4[M-Boc+H]。

部分D-(4-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲基[11-(N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}氨基甲酰基)十一烷酰基]甲酸酯的制备

将部分B的产物(50mg，0.08mmol)，部分C的产物(42mg，0.08mmol)，和DMAP(11mg，0.09mmol)在无水的二氯甲烷(3mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌28小时。将溶液减压浓缩并将形成的微黄色的粘性油用4mL的50％乙腈：水在室温在氮气气氛下处理10分钟。去除溶剂并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用1.76％/分钟的包含0.1％甲酸的51.3～90％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在23.2分钟洗脱的主要产物峰冻干得到为无色的固体标题化合物(22mg，产率33％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(CDCl₃)：δ8.32(bs，1H)，7.75(d，J＝7.5Hz，2H)，7.58-7.53(m，2H)，7.53-7.47(m，2H)，7.37(t，J＝7.4Hz，2H)，7.33(d，J＝8.4Hz，2H)，7.28-7.25(m，2H)，6.15(bs，1H)，5.31(bs，1H)，5.10(s，2H)，4.95(bs，1H)，4.49-4.42(m，2H)，4.30(bs，1H)，4.20(t，J＝6.8Hz，1H)，4.13(t，J＝6.5Hz，2H)，3.39-3.27(m，2H)，3.26-3.21(m，2H)，2.14(t，J＝7.5Hz，2H)，1.81-1.53(m，7H)，1.42(s，9H)，1.36-1.30(m，2H)，1.30-1.19(m，12H)，1.00-0.90(m，6H)；

MS：m/e 843.5[M+H]；高分辨MS：计算值C48H66N4O9[M+H]：843.4903，实测值：843.4897.

部分E-[4-((2S)-2-氨基-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲基[11-(N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}氨基甲酰基)十一烷酰基]甲酸酯的制备

将部分D的产物(7.0mg，0.008mmol)用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)在室温在氮气气氛下处理5分钟。将溶液减压浓缩得到浅黄色的固体的标题化合物。MS：m/e 621.5[M+H](100％)。

实施例26

2-((1E)-2-氮杂-2-{[5-(N-{2-[8-(4-羟基苯基)辛酰基氨基]乙基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}乙烯基)苯磺酸的合成

将8-(4-羟基苯基)辛酸(15.0mg，0.0635mmol)，实施例23，部分F的产物(23.1mg，0.0635mmol)，和HOAt(8.7mg，0.0635mmol)在DMSO(200μL)中的溶液用可力丁(35μL，0.254mmol)和DIC(9.9μL，0.0635mmol)处理，并在氮气气氛下在室温搅拌。21小时之后，将反应混合物用另外的实施例23，部分F的产物(11.6mg，0.0318mmol)，DIC(5.0μL，0.0318mmol)，和可力丁(17.5μL，0.127mmol)处理。48小时之后，将反应混合物用另外的实施例23，部分F的产物(5.8mg，0.0159mmol)，DIC(0.2.5μL，0.0159mmol)，和可力丁(9μL，0.0635mmol)处理。58小时之后，将反应混合物再用实施例23，部分F的产物(5.8mg，0.0159mmol)，DIC(0.2.5μL，0.0159mmol)，和可力丁(9μL，0.0635mmol)处理。在总的反应时间63小时的时候，将反应溶液经HPLC纯化：在Phenomenex Luna柱(21.2×250mm)上，使用1.12％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的0～56.2％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在36.2分钟洗脱的主要产物峰冻干得到16.3mg(51.7％)为无色的固体需要的产物，HPLC检测的纯度为100％。

MS：m/e 582.2[M+H](100％)，1163.3[2M+H](35％)。

实施例27～44

复合物[99mTc(HYNIC-MMPsub)(tricine)(TPPTS)]的合成

向包含4.84mg TPPTS，6.3mg tricine，40mg甘露醇、琥珀酸缓冲液，pH4.8以及0.1％Pluronic F-64表面活性剂的铅防护的冻干的小瓶中，加入1.1mL无菌注射水、0.2mL(20μg)的适当的HYNIC-偶联的基质金属蛋白酶底物(MMPsub)在去离子水或50％乙醇水溶液中的溶液以及0.2mL的99mTcO4-(50±5mCi)的盐水溶液。将重构的试剂盒在95℃水浴中加热10分钟，冷却至室温5分钟。将反应混合物的样品用HPLC分析。RCP结果显示在表1中。

HPLC方法

检测器：INUSβ-Ram，UV在220nm

柱：Zorbax Rx C18，25cm×4.6mm

Guard：Zorbax C18

温度：环境温度

流速：1.0mL/分钟

溶剂A：25mM乙酸铵(无pH调节)

溶剂B：100％乙腈

梯度A

时间(分钟)	0	20	21	25	26	32
时间(分钟)	0	20	21	25	26	32	％溶剂B	10	40	60	60	10	10

梯度B

时间(分钟)	0	20	21	25	26	32
时间(分钟)	0	20	21	25	26	32	％溶剂B	5	15	60	60	5	5

梯度C

时间(分钟)	0	20	21	25	26	32
时间(分钟)	0	20	21	25	26	32	％溶剂B	0	20	60	60	0	0

梯度D

时间(分钟)	0	20	21	25	26	32
时间(分钟)	0	20	21	25	26	32	％溶剂B	30	50	70	70	30	30

表1

[99mTc(HYNIC-MMPsub)(tricine)(TPPTS)]复合物的分析和产率数据

实施例	HYNIC偶联物#	HPLC梯度	％RCP	RT(分钟)
实施例	HYNIC偶联物#	HPLC梯度	％RCP	RT(分钟)	27	1	A	95.7	11.7
28	2	A	97.2	15.1	27	1	A	95.7	11.7
28	2	A	97.2	15.1	29	3	A	84.1	14.2
30	5	A	79.6	12.7	29	3	A	84.1	14.2
30	5	A	79.6	12.7	31	8	B	76.1	12.8
32	10	A	93.7	18.3	31	8	B	76.1	12.8
32	10	A	93.7	18.3	33	11	A	94.5	14.4
34	12	A	89.8	14.2	33	11	A	94.5	14.4
34	12	A	89.8	14.2	35	13	A	96.8	16.9
36	14	A	94.9	13.8	35	13	A	96.8	16.9
36	14	A	94.9	13.8	37	15	A	94.4	11.9
38	16	A	95.2	16.6	37	15	A	94.4	11.9
38	16	A	95.2	16.6	39	17	A	91.2	16.9
40	19	C	99.3	9.8	39	17	A	91.2	16.9
40	19	C	99.3	9.8	41	20	A	90.8	12.8
42	21	D	87.4	8.9	41	20	A	90.8	12.8
42	21	D	87.4	8.9	43	22	A	91.1	14.6
44	26	A	97.8	12.8	43	22	A	91.1	14.6

实施例45

MMP底物的水解的动力学测定

部分A-MMP-2和MMP-9的激活以及活性部位确定

将纯化的MMP-2(10μg)或MMP-9(10μg)在100μL的TCN缓冲液中重构。通过与2nM氨基苯基乙酸汞(APMA)在37℃孵育5.5小时活化纯化的人MMP-9。通过与2nM APMA在37℃孵育2小时活化Pro-MMP-2。在孵育结束的时候，将100μl的100％甘油加入至活化的MMP-2和活化的MMP-9(终浓度50％甘油)中。将活化的MMP-2和活化的MMP-9等分并在-20℃储存。

部分B-MMP-2/MMP-9的活性部位确定

在进行动力学研究之前，活性蛋白酶的水平通常通过活性部位的测定进行量化。使用GM6001溶解在100％ DMSO中以2.5mM的储存浓度测定MMP-9和MMP-2的活性部位。在TCN缓冲液中进行GM6001的稀释(1∶2)得到在活性部位测定分析的5nM～0.04nM GM6001的终浓度。活化的MMP-2或活化的MMP-9(2nM)与渐增浓度的GM6001在96孔黑色微量滴定板中并在37℃预先孵育15分钟。将荧光底物I(Mca-P-L-G-L-Dpa-A-R-NH₂)(150μL)在分析缓冲液(500mM tricine/pH 7.5，100mM CaCl₂，0.2％ NaN₃)中的溶液加入至各孔中。将板在室温剧烈振荡1分钟，并在27℃孵育1小时。用20μL的0.5M EDTA中止反应。将板在荧光分光光度计上以激发波长320nm和发射波长395nm进行测量。使用Morrison方程以及Kaleidagraph软件(Reading，PA)测定活化酶的浓度。

部分C-底物水解的动力学测定

使用放射HPLC分析测定底物水解的动力学参数。使用该分析测定不同底物被活化的MMP-2和活化的MMP-9转化。不同受试底物的储存溶液(10mM)利用100％ DMSO配制。受试底物的储存溶液在缓冲溶液(50mMHepes/pH 7.5，10mM CaCl₂，0.1％ Brij)中稀释1000倍(10nM)得到工作储存溶液。将受试底物的工作储存溶液(15μl)加入至试管中的缓冲液(120μL)中，并在37℃温育2分钟。向该溶液中加入15μL的活化MMP-2(终浓度10nM)或活化MMP-9的工作储存液(终浓度2nM)。最终，加入4μCi的放射标记的受试底物并将溶液混合物并立即将67.5μL的混合物转移至HPLC管中，后者包含7.5μl的0.5M EDTA以进行t＝0分钟测量。将试管中的其余的混合物在37℃孵育60分钟。在60分钟的时间点，将67.5μl的混合物转移道HPLC管中，后者包含7.5μL的0.5M EDTA以进行t＝60分钟测量。利用反相HPLC在Zorbax Rx-C18柱(4.6×250mm)上进行放射标记的底物和产物的分离，保持柱温25℃，使用1mL/分钟的流速以及60μL的进样量。流动相A(MPA)为25mM乙酸铵并且流动相B(MPB)为100％乙腈。步进梯度2％MPB 3分钟，40％MPB 13分钟，80％MPB 18分钟用于分离产物和底物。利用IN/US beta ram监测器检测放射标记。积分峰面积并将底物峰面积用来测定下述方程中速率常数k：

k＝(-ln(St/So))/t

其中St＝在第60分钟的底物峰

So＝在第0分钟的底物峰

T＝3600秒

在该反应中，底物浓度远小于Km，因此

Kcat/Km＝k/[Et](M^-1S^-1)

各种受试底物的Kcat/Km值显示在表2中。

表2

底物水解分析的结果

实施例	MMP2K_cat/K_m(M^-1s^-1)	MMP9K_cat/K_m(M^-1s^-1)	小鼠MMP9K_cat/K_m(M^-1s^-1)
实施例	MMP2K_cat/K_m(M^-1s^-1)	MMP9K_cat/K_m(M^-1s^-1)	小鼠MMP9K_cat/K_m(M^-1s^-1)	1	83,900	1670
5	8025	1986		1	83,900	1670
5	8025	1986		3	11631	1742
2	81562	6675		3	11631	1742
2	81562	6675		1	42526	2978
10	63172	189715.1454		1	42526	2978
10	63172	189715.1454		14	63685	4454	897
11	77740	22049	14352	14	63685	4454	897
11	77740	22049	14352	12	＞100,000	＞100,000	＞100,000
16	63199	＞100,000	＞100,000	12	＞100,000	＞100,000	＞100,000
16	63199	＞100,000	＞100,000	13	＞100,000	＞100,000	＞100,000
17	42684	57730	47964	13	＞100,000	＞100,000	＞100,000
17	42684	57730	47964	15	265	613	571
18	19465	41623	30996	15	265	613	571

实施例46

测试底物的氨基肽酶N裂解

氨基肽酶N切割连接至另一种氨基酸的蛋白和肽的N-端的氨基酸。在我们的测试底物中的最终的连接由连接至酰肼的氨基酸组成。氨基肽酶裂解该氨基酸暴露活性的酰肼。我们的目标在于研究氨基肽酶N裂解氨基酸和酰肼之间的酰胺键的活性。测试底物的储备溶液配制成浓度为25mM的100％DMSO溶液。将储备溶液(6μL)加入至缓冲液(50mM Hepes/pH 7.5，10mM CaCl₂，0.1％Brij)中，以使测试底物在反应中的最终浓度为1mM。向该反应混合物中，加入0.02U的酶(APN)，将溶液混合，并立即将67.5μL混合物转移到包含33.2μL乙酸的HPLC管中进行t＝0分钟测试。将测试管中的剩余混合物在37℃孵育25分钟。在第25分钟时间点，将67.5μL的混合物转移到包含33.2μl的乙酸的HPLC管中以进行t＝25分钟测试。利用反相HPLC分离测试底物和产物：在Zorbax SB-C18柱(4.6×150mm，5微米)上，使用0.1％三氟乙酸/乙腈梯度方法，UV检测。对峰面积积分并将底物峰面积用来确定下述方程中的速率常数k：

K＝{(％水解的/100)*[S]}/[E]*[时间]

其中S＝μmoles表示的测试底物浓度

E＝以单位/ml表示的氨基肽酶N浓度，

K＝μmoles水解的底物/分钟/酶单位

测试底物的水解速率显示在表3中。

表3：

测试底物的APN水解结果

实施例	水解速率(分钟^-1，U^-1)
实施例	水解速率(分钟^-1，U^-1)	8	0.6μmoles
9	0.62μmoles	8	0.6μmoles
9	0.62μmoles	7	1.2μmoles
6	0μmoles	7	1.2μmoles
6	0μmoles	24	0.52μmoles

实施例47

脂质双层插入

该分析用来研究测试底物在细胞脂质双层中的定位。将人单核细胞细胞系THP-1细胞系用于该分析中。将THP-1细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤并使用2×10⁶个细胞用于在150μL反应体积中的各反应。将测试底物加入至细胞悬浮液中得到在反应中0.15mM的终浓度。将反应在37℃孵育1小时。将上清液中的受试化合物利用HPLC分析并定量。测定在细胞存在和不存在的条件下的上清液中的化合物水平并产生下述比值：

R＝细胞不存在下的化合物水平/细胞存在下的化合物水平

比值随与细胞结合的上升而增加。比值1表示与细胞无结合。多种测试化合物的细胞结合数据显示在表4中。

表4：测试底物的细胞结合结果

实施例	比率
实施例	比率	29	＞5
19	1.1	29	＞5
19	1.1	22	1.55

实施例48

2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(12-{[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基羰氧基}十二烷酰氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的合成

部分A-Ac-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-OH的制备

将HMPB-BHA树脂放置在肽合成反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2x)洗涤溶胀。加入Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH的N，N-二甲基甲酰胺溶液并将树脂在室温混合15分钟。加入吡啶和2，6-二氯苯甲酰氯并将混合物轻微振荡20小时。然后将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。树脂残留的羟基通过用苯甲酰氯和吡啶在二氯甲烷中反应2小时进行封闭。取代水平通过定量的富烯-哌啶分析测定。然后进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟去除Fmoc基团。(步骤2)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Hphe-OH，HOBt和HBTU在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液和二异丙基乙胺加入至树脂中，并将反应进行8小时。(步骤4)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤5)进行双重偶联，如果定量的富烯-哌啶分析显示首次的偶联不完全。(步骤6)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。重复步骤1-6，直到得到序列Fmoc-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-OH。

将肽-树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟，并充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入乙酸酐和二异丙基乙胺，并将树脂混合直到小部分的裂解的肽LC/MS显示发现封闭反应完全。将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液处理。2分钟之后，利用压力直接将溶液过滤到10％吡啶的甲醇溶液中。重复裂解步骤9次。蒸发合并的滤液至5％的体积，用水稀释，并在冰-水浴中冷却。在烧结的玻璃漏斗中过滤收集形成的沉淀，用水洗涤，并真空干燥。将形成的残留物在C18上经HPLC纯化柱，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱得到标题化合物。

部分B-11-(N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}氨基甲酰基)十一烷基{[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基}甲酸酯的制备

将上述部分A的产物、实施例25，部分E的产物、HOAt、可力丁和DIC溶解在在最小量的DMSO中，并在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时。将溶液经在C18柱上HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分C-2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(12-{[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基羰氧基}十二烷酰氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸

将部分B的产物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中，并在环境温度在氮气气氛下搅拌60分钟。将溶液减压浓缩。将残留物溶解在1∶1甲苯∶乙醇中，用二异丙基乙胺将pH调节至7，并将溶液用6-({(1E)-2-[2-(钠代氧基磺酰基)苯基]-1-氮杂乙烯基}氨基)吡啶-3-羧酸(Bioconjugate Chem.1999，10，808-814)和EEDQ处理。将反应在环境温度在氮气气氛下进行4小时并减压浓缩。将形成的残留物经在C18柱上HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例49

2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(8-{[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基羰氧基}十二烷酰氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的合成

部分A-(2S)-N-({N-[(1S)-1-(N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[4-(羟基甲基)苯基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]-2-[4-(叔丁氧基)苯基]乙基}氨基甲酰基)-3-苯基丙基]氨基甲酰基}甲基)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备

将实施例10，部分B的产物、PABA和EEDQ在1∶1甲苯∶乙醇中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌3天。如果反应不完全，加入另外的PABA，并将反应再搅拌24小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物经在C18柱上HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分B-4-硝基苯基{[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基}甲酸酯的制备

将部分A的产物和4-硝基苯基氯甲酸酯在无水的二氯甲烷中的溶液冷却至0℃，用吡啶处理，并在环境温度在氮气气氛下搅拌2小时。将溶液用CH₂Cl₂稀释，用水和盐水洗涤，在MgSO₄上干燥，并减压浓缩。将形成的残留物经快速硅胶层析纯化，用乙酸乙酯/己烷洗脱得到标题化合物。

部分C-2-((1E)-2-{[5-(N-{2-[8-({[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲基}氧基羰氧基)十二烷酰氨基]乙基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将上述部分B的产物、实施例23的产物以及DMAP在无水的二氯甲烷中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌直到HPLC分析确定反应完全。将溶液减压浓缩并将形成的残留物经在C18柱上反相HPLC色谱纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。冻干主要的产物级分得到标题化合物。

部分D-最终脱保护

将部分C的产物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中，并在环境温度在氮气气氛下搅拌60分钟。将溶液减压浓缩并将形成的残留物经在C18柱上HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例50

2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(8-{[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲氧基羰氧基}十六烷-15-烯酰基氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的合成

部分A-8-氧代十六烷-15-烯酸乙基酯的制备

在-78℃，将无水的氯化锌的无水的醚溶液通过滴加7-辛烯基溴化镁(从8-溴-1-辛烯和镁在醚中的溶液制备得到)处理。将温度升高至0℃并将反应混合物用实施例23，部分A产物的无水的THF溶液处理，然后用Pd(PPh₃)₄处理。形成的混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌直至TLC或HPLC分析显示反应完成。通过加入1N HCl中止反应并用己烷萃取。将合并的有机层用饱和的NaHCO₃洗涤，干燥(MgSO₄)，并浓缩。将形成的残留物在硅胶上层析，用乙酸乙酯/己烷洗脱得到标题化合物。

部分B-8-氧代十六烷-15-烯酸的制备

将部分A的产物在THF和水中的混合物用3N LiOH处理，并在室温在氮气气氛下快速搅拌18小时。去除THF并将形成的混合物用浓盐酸酸化至pH 4并用二氯甲烷萃取。将合并的有机萃取物用饱和的NaHCO₃洗涤，干燥(MgSO₄)，并浓缩得到标题化合物，其不经进一步的纯化直接用于下一反应。

部分C-8-羟基十六烷-15-烯酸的制备

在0℃在氮气气氛下，将部分B的产物在乙醇中的溶液用NaBH₄处理直到TLC或HPLC显示反应完全。如果需要加入另外的NaBH₄。用1N HCl中止反应。减压去除乙醇并将形成的溶液用CH₂Cl₂萃取。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，并浓缩得到标题化合物，其不经进一步的纯化直接用于下一反应。

部分D-2-{(1E)-2-氮杂-2-[(5-{N-[2-(8-羟基十六烷-15-烯酰基氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]乙烯基}苯磺酸的制备

将上述部分C的产物、实施例23，部分F的产物、二异丙基乙胺和HOAt在无水的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液用DIC处理，并将反应在室温在氮气气氛下搅拌18小时。将溶液减压浓缩并将形成的残留物经在C18柱上HPLC纯化：使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。冻干主要的产物峰得到标题化合物。

部分E-(2S)-N-({N-[(1S)-1-(N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[4-(羟基甲基)苯基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]-4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}氨基甲酰基)-3-苯基丙基]氨基甲酰基}甲基)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备

将实施例17，部分B的产物、PABA和EEDQ在1∶1甲苯∶乙醇中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌3天。如果反应不完全加入另外的PABA，并将反应再搅拌24小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物经在C18柱上HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分F-[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-5-[(叔丁氧基)羰基氨基]戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]甲基(4-硝基苯氧基)甲酸酯的制备

将部分E的产物和4-硝基苯基氯甲酸酯在无水的二氯甲烷中的溶液冷却至0℃，用吡啶处理，并在环境温度在氮气气氛下搅拌2小时。将溶液用CH₂Cl₂稀释，用水和盐水洗涤，在MgSO₄上干燥，并减压浓缩。将形成的残留物经在C18柱上HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％甲酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分G-2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(8-{[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-5-[(叔丁氧基)羰基氨基]戊酰基氨基)苯基]甲氧基羰氧基}十六烷-15-烯酰基氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的制备

将部分D和F的产物以及DMAP在无水的二氯甲烷中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌直到HPLC分析确定反应完全。将溶液减压浓缩并将形成的残留物经在C18柱上反相HPLC层析纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。冻干主要的产物级分得到标题化合物。

部分H-最终脱保护

将部分G的产物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中，并在环境温度在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例51

4-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基](4S)-4-(N-{2-[8-(4-{2-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-苯基]乙酰氧基}苯基)-辛酰基氨基]乙基}氨基甲酰基)丁酸的合成

部分A-(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-N-[2-(2-羟基乙基)苯基]-4-甲基戊酰胺的制备

将Fmoc-Leu-OH，2-(4-氨基苯基)乙醇和EEDQ在1∶1甲苯∶乙醇中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌3天。如果反应不完全，加入另外的2-(4-氨基苯基)乙醇和EEDQ，并将反应再搅拌24小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物溶解在二氯甲烷中，并连续地用0.1N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，并浓缩，并将残留物经硅胶快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分B-2-(2-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)乙酸的制备

将部分A的产物和重铬酸吡啶在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在环境温度搅拌8小时。将溶液用10体积的水稀释并将沉淀的产物萃取到醚中。将合并的醚萃取物连续地用水和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将粗制产物经从乙醇重结晶纯化得到标题化合物。

部分C-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}-8-(4-羟基苯基)辛酰胺

将8-(4-羟基苯基)辛酸、N-Boc-乙二胺和EEDQ在1∶1甲苯∶乙醇中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌24小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物溶解在二氯甲烷中，并连续地用0.1N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，并浓缩，并将残留物经硅胶快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分D-4-[7-(N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}氨基甲酰基)庚基]苯基2-[2-(甲基氨基)苯基]乙酸酯的制备

将包含数滴N，N-二甲基甲酰胺的部分B的产物在无水的二氯甲烷中的溶液用一当量的草酰氯处理，并在环境温度搅拌3小时。将溶液用部分C的产物和二异丙基乙胺处理，并在环境温度在氮气气氛下搅拌18小时。将溶液连续地用0.1N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物经快速硅胶层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分E-(4S)-4-{N-[2-(8-{4-[2-(2-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)乙酰氧基]苯基}辛酰基氨基)乙基]氨基甲酰基}-4-[(苯基甲氧基)羰基氨基]丁酸叔丁基酯的制备

将部分E的产物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中并在环境温度在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液浓缩并将残留物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺中，并用二异丙基乙胺和Cbz-Glu(t-Bu)-OSu处理(至pH 8-9)。将溶液在环境温度搅拌18小时并浓缩。将形成的残留物经在C18柱上HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分F-(4S)-4-(N-{2-[8-(4-{2-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)苯基]乙酰氧基}苯基)辛酰基氨基]乙基}氨基甲酰基)-4-[(苯基甲氧基)羰基氨基]丁酸叔丁基酯的制备

将部分E的产物溶解在20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺中，并在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并充分地在高真空下干燥。将形成的残留物以及实施例48，部分A的产物溶解在最小量的无水的DMSO中，并将溶液用HOAt、可力丁和DIC处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分G--4-[(6-{[(1E)-1-氮杂-2-(2-磺基苯基)乙烯基]氨基}(3-吡啶基))羰基氨基](4S)-4-(N-{2-[8-(4-{2-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-[叔丁氧基]苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-苯基]乙酰氧基}苯基)-辛酰基氨基]乙基}-氨基甲酰基)丁酸叔丁基酯的制备

将部分F的产物在乙醇中的溶液在10％Pd/C上在60psi下氢化直到HPLC显示Cbz基团完全去除。通过Celite过滤去除催化剂并将滤液减压浓缩，将残留物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺中，并用二异丙基乙胺、HOAt和2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并减压浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分H-最终脱保护

将部分G的产物溶解在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶苯甲醚∶水(2mL)中，并在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例52

2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{8-[2-(N-{2-[((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-6-(二甲基氨基)己酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)甲基]苯基}-N-甲基氨基甲酰氧基)-5-丁基苯基]辛酰基氨基}-乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的合成

部分A-Ac-PLG-Hphe-K(Me2)-L-OH的制备

使用实施例10部分A和B的步骤制备标题化合物，将在第二偶联步骤中用Fmoc-Lys(Me2)替换Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH。将粗制的肽在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分B-(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-N-[(1S)-3-甲基-1-(N-{[2-(甲基氨基)苯基]甲基}氨基甲酰基)丁基]-6-(二甲基氨基)己酰胺的制备

将部分A的产物、N-甲基-2-氨基甲基苯胺(Coyne，W.E.；Cusic，J.W.J.Med.Chem.1968，11，1208-1213)，HBTU和二异丙基乙胺在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌18小时。将溶液浓缩并将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶10mM NH4OAc梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分C-8-(5-丁基-2-羟基苯基)-8-氧代辛酸乙基酯的制备

将实施例23，部分A的产物、4-丁基苯酚和吡啶在二氯甲烷中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌2天。将溶液连续地用1.0N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物溶解在最小量的1，2-二氯乙烷(DCE)中，并用氯化铝处理。将混合物加热回流6小时，冷却至室温，并倾入到冰上。分层并将水层用二氯甲烷萃取。将合并的二氯甲烷和DCE层连续地用饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物经快速硅胶层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分D-8-(5-丁基-2-羟基苯基)辛酸的制备

将部分C的产物在KOH的含水乙醇中的溶液加热回流3小时并浓缩以去除乙醇。将水溶液用醚洗涤并用浓盐酸酸化。形成的沉淀萃取到二氯甲烷中。将二氯甲烷萃取物用水洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物溶解在二乙二醇中，并用2当量的肼水合物和3当量的KOH处理。将溶液加热回流1小时，冷却，并用水稀释。将溶液用浓HCl调节酸性，并将产物萃取到二氯甲烷中。将合并的二氯甲烷萃取物干燥(MgSO4)，并浓缩，并将残留物重结晶得到标题化合物。

部分E-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}-8-(5-丁基-2-羟基苯基)辛酰胺的制备

将部分D的产物、N-Boc-乙二胺和EEDQ在1∶1甲苯∶乙醇中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌24小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物溶解在二氯甲烷中，并连续地用0.1N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，并浓缩，并将残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分F-8-[2-(N-{2-[((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-6-(二甲基氨基)己酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)甲基]苯基}-N-甲基氨基甲酰氧基)-5-丁基苯基]-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}辛酰胺的制备

将部分E的产物、吡啶和三光气在二氯甲烷中的溶液在0℃搅拌30分钟。加入部分B的产物，并将溶液在环境温度搅拌18小时。将溶液浓缩并将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分G-2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{8-[2-(N-{2-[((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-6-(二甲基氨基)己酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)甲基]苯基}-N-甲基氨基甲酰氧基)-5-丁基苯基]辛酰基氨基}乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将部分F的产物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中，并在环境温度在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液浓缩，并将残留物溶解在N，N-二甲基甲酰胺中，用二异丙基乙胺调节碱性并用2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基](2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸钠和HOAt处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌18小时并浓缩真空。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例53

2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(10-{1-[(4-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-{2-[N-(4-氨基丁基)乙酰基氨基]乙酰基}吡咯烷-2-基)羰基氨基]-5-氨基戊酰基氨基}-乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-苯基)甲基](4-吡啶)}十一烷酰氨基)-乙基]-氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸双-三氟乙酸盐的合成

部分A-(10E)-11-(4-吡啶基)十一烷-10-烯酸甲基酯的制备

将10-溴代癸酸甲基酯和三苯基膦在乙酸乙酯中的溶液加热回流6小时。将混合物冷却并用醚稀释。过滤收集形成的盐沉淀，用醚洗涤，并干燥。在另一个烧瓶中，将无水的DMSO用NaH处理并在氮气气氛下温热至60℃以形成dimsyl钠试剂。将盐加入至dimsyl钠的溶液中，并将溶液在环境温度搅拌3小时。加入4-吡啶甲醛并将溶液在环境温度搅拌18小时。将溶液用己烷稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将产物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分B-11-(4-吡啶基)十一烷酸的制备

将部分A的产物溶解在乙醇中，并在10％Pd/C上在60psi氢化。通过滤过Celite去除催化剂并将滤液减压浓缩。将残留物溶解在稍微过量的KOH的乙醇溶液中，并加热回流24小时。将溶液通过由IRC-50树脂制备的离子交换柱脱盐。减压浓缩洗脱液得到标题化合物。

部分C-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}-11-(4-吡啶基)十一烷酰胺的制备

将部分B的产物、N-Boc-乙二胺和HBTU在无水的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌18小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物溶解在二氯甲烷中，并连续地用水、饱和的NaHCO3、和饱和的NaCl洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，并浓缩，并将残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分D-11-{1-[(4-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲基](4-吡啶)}-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}十一烷酰胺溴化物的制备

将实施例25，部分A的产物、三苯基膦以及四溴化碳在二氯甲烷中的溶液在环境温度搅拌18小时。将溶液浓缩至小体积并滤过氧化铝以去除三苯基膦氧化物。浓缩洗脱液并将残留物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺中，并用上述部分C的产物处理。将溶液在环境温度搅拌18小时并浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％甲酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分E-2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(11-{1-[(4-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)甲基](4-吡啶)}十一烷酰氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸盐的制备

将部分D的产物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中，并在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液浓缩并真空干燥。将残留物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺并用二异丙基乙胺、HOAt和2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基]-(2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸盐处理中。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并减压浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分F-Ac-NLys(Boc)-PO(Boc)G-Hphe-OH的制备

将HMPB-BHA树脂放置在肽合成反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2x)洗涤溶胀。加入Fmoc-Hphe-OH的N，N-二甲基甲酰胺溶液并将树脂在室温混合15分钟。加入吡啶和2，6-二氯苯甲酰氯并将混合物轻微振荡20小时。然后将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。树脂残留的羟基通过与苯甲酰氯和吡啶在二氯甲烷中反应2小时进行封闭。利用定量的富烯-哌啶分析确定取代水平。然后进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液处理30分钟去除Fmoc基团。(步骤2)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Gly-OH、HOBt和HBTU在N，N-二甲基甲酰胺和二异丙基乙胺中的溶液加入至树脂中，并将反应进行8小时。(步骤4)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤5)如果定量的富烯-哌啶分析显示首次的偶联不完全进行二重偶联，(步骤6)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。重复步骤1-6直到得到序列Fmoc-NLys(Boc)-PO(Boc)G-Hphe-OH。

将肽-树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟，并充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入乙酸酐和二异丙基乙胺，并将树脂混合直到小部分的裂解的肽的LC/MS评价发现封闭反应完全。将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液处理。2分钟之后，利用压力将溶液直接过滤到10％吡啶的甲醇溶液中。将裂解步骤重复9次。合并的滤液蒸发至5％体积，用水稀释并在冰-水浴上冷却。在烧结的玻璃漏斗中过滤收集形成的沉淀用水洗涤，并真空干燥。将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱得到标题化合物。

部分G-2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{10-[1-({4-[(2S)-2-((2S)-2-{2-[(2S)-2-({(2S)-1-[2-(N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}乙酰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-基}羰基氨基)-5-[(叔丁氧基)羰基氨基]戊酰基氨基]乙酰基氨基}-4-苯基丁酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]苯基}甲基)(4-吡啶)]-十一烷酰氨基}乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸盐的制备

将部分E的产物溶解在20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺中，并在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并充分地在高真空下干燥。将形成的残留物以及将部分F的产物溶解在最小量的无水的DMSO中，并将溶液用HOAt、可力丁和DIC处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并浓缩真空。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分H-最终脱保护

部分G的产物在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌10分钟并在高真空下浓缩至干。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例54

2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(8-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-{2-[N-(4-氨基丁基)乙酰基氨基]乙酰基}吡咯烷-2-基)羰基氨基]-6-(脒基氨基)己酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}(7Z)十一烷-7-烯酰基氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸三氟乙酸盐的合成

部分A-Ac-NLys(Boc)P-Cit-G-Hphe-OH的制备

利用针对实施例53，部分F描述的步骤合成标题化合物，用Fmoc-Cit-OH替换Fmoc-O(Boc)-OH。

部分B-(8Z)-9-氮杂-8-丁基-12，12-二甲基-12-硅杂十三烷-8-烯酸乙基酯的制备

向实施例23，部分B的产物、2-(三甲基甲硅烷基)乙胺(Sommer，L.H.；Rockett，J.J.Am.Chem.Soc.1951，73，5130-5134)，以及催化量的对甲苯磺酸在氯仿的溶液中加入活化的4A分子筛。将反应在环境温度在氮气气氛下放置2天。将有机溶液从分子筛中倾析出来，连续地用饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩得到标题化合物，其直接用于下一反应。

部分C-8-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-N-(3，3-二甲基-3-硅杂丁基)-4-甲基戊酰基氨基}(7Z)十二烷-7-烯酸乙基酯的制备

将部分B的产物和Fmoc-亮氨酸酐(Heimer，E.P.；Chang，C.D.；Lambros，T.；Meienhofer，J.Int.J.Peptide Protein Res.1981，18，237)在吡啶中的溶液加热回流1小时。将溶液浓缩并将残留物溶解在乙酸乙酯中，并连续地用0.1N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将形成的残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分D-8-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}(7Z)十一烷-7-烯酸乙基酯的制备

将部分C的产物的THF溶液用TBAF处理，并在环境温度在氮气气氛下搅拌2小时。将溶液浓缩并将残留物溶解在乙酸乙酯中。将有机溶液连续地用水和饱和的NaCl洗涤、干燥(MgSO4)，并浓缩。将粗制产物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分E-2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(8-{(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}(7Z)十一烷-7-烯酰基氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的制备

将部分D的产物在THF和水中的溶液用3N LiOH处理。在室温在氮气气氛下快速搅拌直到用TLC检测确定酯水解。去除THF并将形成的混合物小心地用HCl酸化至pH 4并用二氯甲烷萃取。将有机萃取物用水洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱。将形成的产物以及实施例23，部分F的产物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺中。将溶液用二异丙基乙胺调节碱性并用HBTU和HOAt处理。将反应在环境温度在氮气气氛下搅拌6小时并减压浓缩。将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分F-2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{8-[(2S)-2-((2S)-2-{2-[(2S)-2-({(2S)-1-[2-(N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}乙酰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-基}羰基氨基)-6-(脒基氨基)己酰基氨基]乙酰基氨基}-4-苯基丁酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基](7Z)十一烷-7-烯酰基氨基}乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将部分E的产物溶解在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中，并在室温在氮气气氛下搅拌10分钟。将溶液浓缩并在高真空下干燥。将上述部分A的产物残留物、HBTU、HOAt和二异丙基乙胺在无水的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌24小时。将溶液浓缩并将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分G-最终脱保护

将部分G的产物在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌10分钟并在高真空下浓缩至干。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例55

2-((1E)-2-{[5-(N-{2-[11-(4-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-{2-[N-(4-氨基丁基)乙酰基氨基]乙酰基}吡咯烷-2-基)羰基氨基]-6-(脒基氨基)己酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)十一烷酰氨基]乙基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸三氟乙酸盐的合成

部分A-(10E)-11-[4-(2，2，2-三氟乙酰基氨基)苯基]十一烷-10-烯酸甲基酯的制备

将10-溴代癸酸甲基酯和三苯基膦在乙酸乙酯的溶液加热回流6小时。将混合物冷却并用醚稀释。过滤收集形成的盐沉淀，用醚洗涤，并干燥。在另一个烧瓶中，将无水的DMSO用NaH处理并温热至在氮气气氛下60℃以形成dimsyl钠试剂。将盐加入至dimsyl钠的溶液中，并将溶液在环境温度搅拌3小时。加入4-(三氟乙酰胺基)苯甲醛(Bonar-Law，R.P.J.Org.Chem.1996，61，3623-3634)，并将溶液在环境温度搅拌18小时。将溶液用己烷稀释，用水洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将产物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分B-11-(4-氨基苯基)十一烷酸的制备

将部分A的产物溶解在乙醇中，并在10％Pd/C上在60psi氢化。通过滤过Celite去除催化剂，并将滤液减压浓缩。将残留物溶解在稍微过量的KOH的乙醇溶液中，并加热回流24小时。通过由IRC-50树脂制备的离子交换柱对溶液脱盐。减压浓缩洗脱剂得到标题化合物。

部分C-2-((1E)-2-{[5-(N-{2-[11-(4-氨基苯基)十一烷酰氨基]乙基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将部分B的产物、实施例23，部分F的产物和HBTU在无水的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌18小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物溶解在二氯甲烷中，并连续地用水，饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，并浓缩，并将残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分D-2-((1E)-2-{[5-(N-{2-[11-(4-{(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}苯基)十一烷酰氨基]乙基}氨基甲酰基)(2-吡啶基)]氨基}-2-氮杂乙烯基)苯磺酸的制备

将部分C的产物、Fmoc-Leu-OH、部分E的产物、HOAt、可力丁和DIC溶解在在最小量的中DMSO中，并在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时。将溶液在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分E-2-{(1E)-2-[(5-{N-[2-(11-{4-[(2S)-2-((2S)-2-{2-[(2S)-2-({(2S)-1-[2-(N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}乙酰基氨基)乙酰基]吡咯烷-2-基}羰基氨基)-6-(脒基氨基)己酰基氨基]乙酰基氨基}-4-苯基丁酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]苯基}十一烷酰氨基)乙基]氨基甲酰基}(2-吡啶基))氨基]-2-氮杂乙烯基}苯磺酸的制备

将部分D的产物溶解在20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺中并在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并充分地在高真空下干燥。将形成的残留物以及实施例54，部分A的产物溶解在最小量的无水的DMSO中，并将溶液用HOAt、可力丁和DIC处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并真空浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分F-最终脱保护

将部分E的产物在50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌10分钟并在高真空下浓缩至干。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例56

2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{12-[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)吡啶]十二烷酰氨基}乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸盐的合成

部分A-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}-12-溴代十二烷酰胺的制备

将12-溴代十二烷酸、N-Boc-乙二胺、HBTU和2，6-二-叔丁基吡啶在无水的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌6小时。将溶液减压浓缩并将残留物溶解在乙酸乙酯中。将有机溶液连续地用1.0N HCl、饱和的NaHCO₃和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将形成的残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分B-(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-4-甲基-N-(4-吡啶基)戊酰胺的制备

将Fmoc-Leu-OH、4-氨基吡啶、HOAt，可力丁和DIC在最小量的DMSO中的溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时。将溶液经在硅胶上快速层析纯化得到标题化合物。

部分C-(2S)-N-[(N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[(1S)-3-甲基-1-(N-(4-吡啶基)氨基甲酰基)丁基]氨基甲酰基}-2-[4-(叔丁氧基)苯基]乙基)氨基甲酰基]-3-苯基丙基}氨基甲酰基)甲基]-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备

将部分B的产物溶解在20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺中并在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并充分地在高真空下干燥。将形成的残留物以及实施例48，部分A的产物溶解在最小量的无水的DMSO中，并将溶液用HOAt、可力丁和DIC处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并真空浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶50mMNH4OAc梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分D-12-[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(叔丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-吡啶基]-N-{2-[(叔丁氧基)羰基氨基]乙基}十二烷酰胺，溴化物的制备

将部分A和C的产物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺中，并在环境温度搅拌18小时，并浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％甲酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分E-2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{12-[4-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)吡啶]十二烷酰氨基}乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}-氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸盐的制备

将部分D的产物溶解在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶Et3SiH∶水中，并在60℃在氮气气氛下加热搅拌30分钟。将溶液减压浓缩。残留物溶解在1∶1甲苯∶乙醇中，用二异丙基乙胺调节pH至7，并将溶液用6-({(1E)-2-[2-(钠代氧基磺酰基)苯基]-1-氮杂乙烯基}氨基)吡啶-3-羧酸(Bioconjugate Chem.1999，10，808-814)和EEDQ处理。将反应在环境温度在氮气气氛下进行4小时并减压浓缩。将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例57

2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{2-[4-(2-{3-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-羟基苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4，6-二甲基苯基]-3-甲基丁酰氧基}丙-2-烯酰基)苯基]乙酰基氨基}-乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的合成

部分A-3-(2-氨基-4，6-甲基苯基)-3-甲基丁-1-醇的制备

将3，5-二甲基苯胺，3，3-二甲基丙烯酰氯和TEA在二氯甲烷中的溶液在室温搅拌2小时。将溶液连续地用水、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相。将纯化的中间体溶解在无水的THF中，并用氢化铝锂处理。将反应在氮气气氛下在环境温度搅拌2小时并通过加入饱和的氯化铵溶液中止。通过滤过Celite去除沉淀的无机盐。将滤液浓缩并将残留物经在快速硅胶层析上纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分B-(2S)-2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-N-[2-(3-羟基-1，1-二甲基丙基)-3，5-二甲基苯基]-4-甲基戊酰胺的制备

将Fmoc-Leu-OH、部分A的产物和EEDQ在1∶1甲苯∶乙醇中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌3天。如果反应不完全，加入另外的2-(4-氨基苯基)乙醇和EEDQ，并将反应再搅拌24小时。将溶液减压浓缩，并将形成的残留物溶解在二氯甲烷中，并连续地用0.1N HCl，饱和的NaHCO3，和饱和的NaCl洗涤。将有机溶液干燥(MgSO4)，并浓缩，并将残留物经硅胶快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分C-(2S)-N-({N-[(1S)-1-(N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[2-(3-羟基-1，1-二甲基丙基)-3，5-二甲基苯基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]-2-[4-(3，3-二甲基-3-硅杂丁氧基)苯基]乙基}氨基甲酰基)-3-苯基丙基]氨基甲酰基}甲基)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰胺的制备

将部分B的产物溶解在20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并在高真空下充分地干燥。将形成的残留物以及Ac-PLG-Hphe-Y(Tse)-OH(根据实施例48，部分A的步骤制备，用Fmoc-Tyr(Tse)-OH替换Fmoc-Tyr(t-Bu)-OH)溶解在最小量的无水的DMSO中，并将溶液用HOAt、可力丁和DIC处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分D-3-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4苯基丁酰基氨基]-3-[4-(3，3-二甲基-3-硅杂丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4，6-二甲基苯基]-3-甲基丁酸的制备

将部分D的产物、TEMPO和BAIB在50∶50乙腈∶水中的溶液在0℃搅拌6小时并浓缩。碘代苯副产物利用共蒸去除，将残留物溶解在50∶50i-PrOH∶水中，并浓缩。将粗制的产物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分E-1-甲基乙烯基3-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(3，3-二甲基-3-硅杂丁氧基)苯基]丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4，6-二甲基苯基]-3-甲基丁酸酯的制备

将部分D的产物、乙烯基乙酸酯、醋酸汞，以及浓硫酸的溶液加热回流3小时。加入醋酸钠以中和酸并将混合物浓缩至干。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分F-N-{2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]乙基}-2-[4-(2-氧代丙酰基)苯基]乙酰胺的制备

将2-[4-(2-氧代丙酰基)苯基]乙酸(McPherson，D.W.；Umbricht，G.；Knapp，F.F.，Jr.J.Labelled Compounds Radiopharm.1990，28，877-899)，N-(2-氨基乙基)(芴-9-基甲氧基)甲酰胺、HBTU和二异丙基乙胺在无水的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液在环境温度搅拌6小时并减压浓缩。残留物溶解在乙酸乙酯中并连续地用1.0N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩。将残留物经在硅胶上快速层析纯化，使用己烷∶乙酸乙酯流动相洗脱得到标题化合物。

部分G-2-{4-[(N-{2-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]乙基}氨基甲酰基)甲基]苯基}-1-亚甲基-2-氧代乙基3-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-[4-(3，3-二甲基-3-硅杂丁氧基)苯基]-丙酰基氨基}4-甲基戊酰基氨基)-4，6-二甲基苯基]-3-甲基丁酸酯的制备

将部分E和F的产物和p-TsOH在CHCl3中的溶液加热回流18小时。

将溶液连续地用1.0N HCl、饱和的NaHCO3和饱和的NaCl洗涤，干燥(MgSO4)，并浓缩至干。将残留物使用水∶乙腈梯度在C18柱上经HPLC纯化。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分H-2-[(1E)-2-({5-[N-(2-{2-[4-(2-{3-[2-((2S)-2-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-苯基丁酰基氨基]-3-(4-(3，3-二甲基-3-硅杂丁氧基)苯基)丙酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-4，6-二甲基苯基]-3-甲基丁酰氧基}-丙-2-烯酰基)苯基]乙酰基氨基}乙基)氨基甲酰基](2-吡啶基)}氨基)-2-氮杂乙烯基]苯磺酸的制备

将部分G的产物溶解在20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺中并在环境温度搅拌10分钟。将溶液减压浓缩并在高真空下充分地干燥。将残留物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺中，并用二异丙基乙胺，HOAt和2-[(1E)-2-氮杂-2-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷基)氧基羰基]-(2-吡啶基)}氨基)乙烯基]苯磺酸盐处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌24小时并减压浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分I-最终脱保护

将部分H的产物在THF中的溶液用TBAF处理，并在环境温度在氮气气氛下搅拌2小时。将溶液浓缩并将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例58

肽H-D-Tic-D-Tic-PLG-Hphe-OLEE-OH的4-[((4，4，4-三苯基丁基){[N-(4，4，4-三苯基丁基)氨基甲酰基]甲基}-氨基)甲基]苯甲酸的偶联物的合成

部分A-Fmoc-D-Tic-D-Tic-Ahx-PLG-Hphe-O(Boc)LE(t-Bu)E(t-Bu)-Wang树脂的制备

将实施例1，部分A的肽-树脂放置在50mL反应器中，用N，N-二甲基甲酰胺洗涤溶胀，并进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟去除Fmoc基团。(步骤2)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-D-Tic-OH、HOBt和HBTU在40∶60 DMSO：N，N-二甲基甲酰胺和二异丙基乙胺中的溶液加入到树脂中，并将反应进行10小时。(步骤4)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤5)将Fmoc-D-Tic-OH、HOBt和HBTU在10mL的40％DMSO在N，N-二甲基甲酰胺和二异丙基乙胺中的溶液加入到树脂中，并将反应进行4小时。(步骤6)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤7)利用半定量的茚三酮分析和定量的苦味酸分析或富烯-哌啶分析发现偶联反应完全。加入另一份的D-Tic重复步骤1-7。

部分B-与Fmoc-D-Tic-D-Tic-Ahx-PLG-Hphe-O(B oc)LE(t-Bu)E(t-Bu)-Wang树脂形成的4-[((4，4，4-三苯基丁基){[N-(4，4，4-三苯基丁基)氨基甲酰基]甲基}氨基)甲基]苯甲酸偶联物

将部分A的肽-树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液处理30分钟，并用充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。将2，5-二氧代吡咯烷基4-[((4，4，4-三苯基丁基){[N-(4，4，4-三苯基丁基)氨基甲酰基]甲基}氨基)甲基]苯甲酸酯(Harris，T.D.；Rajopadhye，M.；Damphousse，P.R.；GloWacka，D.；Yu，K.；Bourque，J.P.；Barrett，J.A.；Damphousse，D.J.；Heminway，S.J.；Lazewatsky，J.；Mazaika，T.；Carroll，T.R.Bioorg.Med.Chem.Lett.1996，6，1741-1746)，和HOAt在40∶60 DMSO：N，N-二甲基甲酰胺和二异丙基乙胺中的溶液加入到树脂中，并将反应进行18小时。将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。重复上述偶联步骤，直到利用小部分的裂解的肽的LC/MS确定反应完全。

部分C-裂解和最终脱保护

将部分B的肽-树脂与95∶2.5∶25.5三氟乙酸∶H₂O∶TIS搅拌2小时。通过滤过烧结的玻璃漏斗滤除树脂并用三氟乙酸充分洗涤。将滤液浓缩至小体积并用醚稀释。过滤收集形成的沉淀，用醚洗涤并在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例59

Ac-RRRR-K[Ac-PLG-Hphe-基]-RRRR-OH的HYNIC偶联物的合成

部分A-Ac-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-k(Teoc)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-HMBP-BHA树脂的制备

将HMPB-BHA树脂放置在肽合成反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2x)洗涤溶胀。加入Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH的N，N-二甲基甲酰胺溶液并将树脂在室温混合15分钟。将吡啶和2，6-二氯苯甲酰氯加入并将混合物轻微振荡20小时。将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。残留的树脂羟基通过与苯甲酰氯和吡啶在二氯甲烷中反应2小时而封闭。利用定量的富烯-哌啶分析测定取代水平。然后进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟去除Fmoc基团。(步骤2)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Hphe-OH、HOBt和HBTU在N，N-二甲基甲酰胺和二异丙基乙胺中的溶液加入至树脂中，并将反应进行8小时。(步骤4)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤5)如果定量的富烯-哌啶分析显示首次偶联不完全，进行二重偶联。(步骤6)将树脂充分洗涤；N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。重复步骤3-6直到获得序列Fmoc-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-k(Teoc)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-HMPB-BHA树脂。将肽-树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟，并充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入乙酸酐和二异丙基乙胺，并将树脂混合直到利用小部分的裂解的肽LC/MS评价发现封闭反应完全。将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和甲醇(3×)，并干燥。

部分B-Ac-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-K[Ac-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L]-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-HMBP-BHA树脂的制备

将部分A的肽-树脂放置在肽合成反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2x)洗涤溶胀。将树脂用TBAF在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液处理，并将混合物轻轻地振荡18小时。然后进行下述步骤：(步骤1)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤2)将Fmoc-Leu-OH，HOBt和HBTU在N，N-二甲基甲酰胺和二异丙基乙胺中的溶液加入至树脂中，并将反应进行8小时。(步骤3)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤4)如果定量的富烯-哌啶分析显示首次的偶联不完全，进行第二次偶联。(步骤5)将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤6)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺处理30分钟去除Fmoc基团。重复步骤1-6直到序列Fmoc-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L已经加到赖氨酸侧链上。将乙酸酐和二异丙基乙胺加入，并将树脂混合直到利用小部分的裂解的肽的LC/MS评价发现封闭反应完全。将树脂充分洗涤：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及甲醇(3×)，并干燥。

部分C-Ac-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-k[Ac-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L]-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH的制备

将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液处理。2分钟之后，利用压力将溶液直接过滤到10％吡啶的甲醇溶液中。重复裂解步骤9次。将合并的滤液蒸发至5％的体积，用水稀释，并在冰-水浴中冷却。在烧结的玻璃漏斗中过滤收集形成的沉淀，用水洗涤，并真空干燥。将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度得到标题化合物。

部分D-Ac-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-k[Ac-PLG-Hphe-Y(t-Bu)-L]-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-D-Arg(Pbf)-OH的Hynic的偶联物的制备

将部分C的产物、实施例23，部分F的产物、二异丙基乙胺和HOAt在无水的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液用HBTU处理，并在环境温度在氮气气氛下搅拌48小时。将溶液浓缩并将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分E-最终脱保护

部分D的产物溶解在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶Et3SiH∶水中并在60℃在氮气气氛下加热搅拌30分钟。将溶液减压浓缩并将形成的残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

实施例61

N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-(乙酰基氨基)己酰胺三氟乙酸盐的合成

部分A-Fmoc-PL-NLys(Boc)-LL-HMPB-BHA树脂的制备

将HMPB-BHA树脂(8.000g，取代水平＝0.68mmol/g)放置在200mLAdvanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×45mL)洗涤溶胀。将Fmoc-Leu-OH(5.77g，16.32mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(45mL)中的溶液加入至容器中，并将混合物振荡15分钟。加入2，6-二氯苯甲酰氯(2.5mL，16.32mmol)和吡啶(2.0mL，24.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(45mL)溶液并将混合物在氮气气氛下在环境温度振荡18小时。将树脂洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)，二氯甲烷(3x)和N，N-二甲基甲酰胺(3x)。将苯甲酰氯(3.0mL，26mmol)和吡啶(3.0mL，36.7mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(90mL)中的溶液加入至树脂中，并将容器在氮气气氛下振荡3小时并洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)和二氯甲烷(3x)。在干燥的树脂样品进行的富烯-哌啶分析显示载量为0.340mmol/g。

进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(90mL)处理30分钟去除Fmoc。(步骤2)将树脂洗涤(90ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Leu-OH(2.88g，8.16mmol)，HOBt(1.25g，8.16mmol)，以及HBTU(3.10g，8.16mmol)在90mL的N，N-二甲基甲酰胺和2mL的二异丙基乙胺中的溶液加入至树脂中，并将反应进行5小时。(步骤4)按照在步骤2的方法洗涤树脂。(步骤5)将Fmoc-Leu-OH(2.88g，8.16mmol)和PyBroP(3.8g，8.16mmol)在90mL的N，N-二甲基甲酰胺和2mL的二异丙基乙胺中的溶液加入至树脂中，并将反应进行5小时。(步骤7)将树脂洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，以及二氯甲烷(3×)。(步骤6)通过富烯-哌啶分析监测反应完全。重复步骤1-7直到得到需要的序列。偶联产率＞95％。

部分B-Ac-PL-NLys(Boc)-LL-OH的制备

将部分A的肽-树脂(2.5g)放置在100mL Advanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×30mL)洗涤溶胀。将树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(30mL)处理30分钟以去除Fmoc保护基，然后洗涤(30ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。将乙酸酐(0.78mL，4.2mmol)，二异丙基乙胺(0.88mL，5.0mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(30mL)加入，并将混合物轻微振荡2小时。将肽-树脂洗涤(30mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，和二氯甲烷(3×)，并真空干燥。将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(12mL)处理2分钟。通过应用压力将溶液直接过滤到包含1∶9吡啶：甲醇(2mL)的烧瓶中。重复裂解步骤十(10)次。合并的滤液浓缩得到无色油状的固体。将粗制的产物用水(2×25mL)研磨并干燥减压得到干燥的固体。将该固体经HPLC纯化：在PhenomenexLuna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸36～54％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在第14.4分钟洗脱的主要产物峰冻干得到63.6mg(63％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。MS：m/e 725.4[M+H](70％)，625.3[M+H-Boc](100％)。

部分C-N-氨基-6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酰胺三氟乙酸盐的制备

将实施例13，部分A的产物(3.00g，6.44mmol)用20mL的50％三氟乙酸的二氯甲烷溶液在环境温度在氮气气氛下处理30分钟。将溶液减压浓缩得到浅黄色的油状物。将油溶解在30∶70乙腈∶水(40mL)中，并冻干得到灰白色固体(2.30g，74％)。

¹H NMR(CDCl₃)：δ10.36(s，1H)，7.89(d，J＝7.3Hz，2H)，7.67(d，J＝7.7Hz，2H)，7.41(t，J＝7.7Hz，2H)，7.33(t，J＝7.3Hz，2H)，7.25(t，J＝6.0Hz，1H)，4.30(d，J＝6.6Hz，2H)，4.20(t，J＝6.6Hz，1H)，2.96(q，J＝6.0Hz，2H)，2.158(t，J＝7.5Hz，2H)，1.51(pen，J＝7.8Hz，2H)，1.39(pen，J＝7.8Hz，2H)，1.26(m，2H)；

MS：m/e 368.2[M+H](100％)。

部分D-N-((2S)-2-{(2S)-2-[2-((2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰基氨基)乙酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-4-甲基戊酰基氨基)-6-氨基己酰胺三氟乙酸盐的制备

将部分B的肽(31.0mg，0.043mmol)和HOAt(5.8mg，0.043mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液用可力丁(28.3μL，0.214mmol)调节碱性。将溶液用DIC(13.2μL，0.086mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌15分钟。加入部分C的产物(31.4mg，0.086mmol)，并将反应在室温搅拌。18小时小时后，加入另外的部分C的产物(31.4mg，0.086mmol)和DIC(13.2μL，0.086mmol)。3天后，反应完成并溶剂减压去除得到粗制的为黄色的油的标题化合物。

将上述的油溶解在20％哌啶/N，N-二甲基甲酰胺(0.25mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌15分钟。将溶液真空浓缩，并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的18～45％乙腈(pH 2)的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在24.0分钟洗脱的主要产物峰冻干得到为无色的固体的标题化合物(14.3mg，39％，HPLC纯度100％)。MS：m/e 852.6[M+H](100％)。

部分E-N-{(2S)-2-[(2S)-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)-4-甲基戊酰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-6-(乙酰基氨基)己酰胺三氟乙酸盐的制备

将部分D的产物(4.4mg，0.005mmol)在0.5mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液用乙酸酐(2.4μL，0.026mmol)和二异丙基乙胺(4.5μL，0.026mmol)处理。将溶液在室温在氮气气氛下搅拌5分钟，并减压蒸发溶剂。将形成的残留物溶解在50∶50三氟乙酸∶水(1mL)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌20分钟。将溶液真空浓缩，并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的13.5～31.5％乙腈(pH 2)的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在18.5分钟洗脱的主要产物峰冻干得到为无色的固体标题化合物(3.2mg，83％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 794.5[M+H](100％)，397.8[M+2H](80％)；

高分辨MS：计算值C₃₉H₇₁N₉O₈[M+H]：794.5498，实测值：794.5491。L-亮氨酸的手性分析：99.8％。

实施例62

(2S)-N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[6-(乙酰基氨基)己酰基氨基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]-2-(4-羟基苯基)乙基}-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)庚-6-烯酰胺的合成

部分A-Fmoc-PLG-Ahp-基-HMPB-BHA树脂的制备

将HMPB-BHA树脂(8.000g，取代水平＝0.68mmol/g)放置在200mLAdvanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×45mL)洗涤溶胀。将Fmoc-Leu-OH(5.77g，16.32mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(45mL)加入至所述的容器中，并将混合物振荡15分钟。加入2，6-二氯苯甲酰氯(2.5mL，16.32mmol)和吡啶(2.0mL，24.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(45mL)中的溶液并将混合物在氮气气氛下在环境温度振荡18小时。将树脂洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)，二氯甲烷(3x)和N，N-二甲基甲酰胺(3x)。将苯甲酰氯(3.0mL，26mmol)和吡啶(3.0mL，36.7mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(90mL)中的溶液加入至树脂中，并将容器在氮气气氛下振荡3小时并洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3x)，二氯甲烷(3x)，甲醇(1x)和二氯甲烷(3x)。在干燥的树脂样品上进行富烯-哌啶分析显示载量为0.340mmol/g。

进行下述步骤：(步骤1)使用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(90mL)处理30分钟去除Fmoc。(步骤2)将树脂洗涤(90ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，以及N，N-二甲基甲酰胺(3×)。(步骤3)将Fmoc-Tyr(O-tBu)-OH(3.75g，8.16mmol)，HOBt(1.25g，8.16mmol)以及HBTU(3.10g，8.16mmol)在90mL的N，N-二甲基甲酰胺和2mL的二异丙基乙胺中的溶液加入至树脂中，并将反应进行5小时。(步骤4)将树脂按照步骤2洗涤。(步骤5)将Fmoc-Tyr(O-tBu)-OH(3.75g，8.16mmol)和PyBroP(3.8g，8.16mmol)在90mL的N，N-二甲基甲酰胺和2mL的二异丙基乙胺中的溶液加入至树脂中，并将反应进行5小时。(步骤7)将树脂洗涤(90mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，和二氯甲烷(3×)。(步骤6)利用富烯-哌啶分析监测反应完全。重复步骤1-7直到获得需要的序列。偶联产率＞95％。

部分B-Ac-PLG-Ahp-Y(O-tBu)L-OH的制备

将部分A的肽-树脂(2.5g)放置在100mL Advanced ChemTech反应器中，并用N，N-二甲基甲酰胺(2×30mL)洗涤溶胀。将树脂用20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺(30mL)处理30分钟以去除Fmoc保护基，然后洗涤(30ml体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，二氯甲烷(3×)，和N，N-二甲基甲酰胺(3×)。加入乙酸酐(0.78mL，4.2mmol)，二异丙基乙胺(0.88mL，5.0mmol)，和N，N-二甲基甲酰胺(30mL)，并将混合物轻微振荡2小时。将肽-树脂洗涤(30mL体积)：N，N-二甲基甲酰胺(3×)，二氯甲烷(3×)，甲醇(3×)，以及二氯甲烷(3×)，并真空干燥。将肽-树脂放置在烧结的玻璃漏斗中，并用1％三氟乙酸的二氯甲烷溶液(12mL)处理2分钟。通过应用压力将溶液直接过滤到包含1∶9吡啶∶甲醇(2mL)的烧瓶中。重复裂解步骤十(10)次。将合并的滤液浓缩得到无色油性固体。将粗制的产物用水研磨(2×25mL)，并减压干燥得到干燥的固体。将该固体经HPLC纯化：在Phenomenex LunaC18(2)柱(21.2×250mm)上，使用1.0％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的40～65％乙腈的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在21.4分钟洗脱的主要产物峰冻干得到84.6mg(77％)为无色的固体的标题化合物，HPLC检测的纯度为100％。MS：m/e 785.5[M+H](100％)；高分辨MS：计算值C₄₁H₆₄N₆O₉[M+H]：785.4807，实测值：785.4806。

部分C-(2S)-N-[(1S)-1-(N-{(1S)-1-[N-(6-氨基己酰基氨基)氨基甲酰基]-3-甲基丁基}氨基甲酰基)-2-[4-(叔丁氧基)苯基]乙基]-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}-乙酰基氨基)庚-6-烯酰胺三氟乙酸盐的制备

将部分B的产物(52.1mg，0.066mmol)和HOAt(9.0mg，0.066mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液用可力丁(43.9μL，0.332mmol)调节碱性。将溶液用DIC(20.6μL，0.133mmol)处理，并在室温在氮气气氛下搅拌15分钟。加入实施例61，部分C(48.8mg，0.133mmol)的产物，并将反应在室温搅拌。18小时之后，加入另外的实施例61，部分C的产物(48.8mg，0.133mmol)和DIC(41.2μL，0.265mmol)。将反应在3天内完成，并将溶剂减压去除得到黄色的油。

将上述的油溶解在TAEA(0.25mL，1.659mmol)中的溶液在室温在氮气气氛下搅拌30分钟。将溶液真空浓缩，并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的31.5～49.5％乙腈(pH 2)的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在25.6分钟洗脱的主要产物峰冻干得到为无色的固体标题化合物(38.3mg，63％，HPLC纯度100％)。

MS：m/e 912.6[M+H](100％)；高分辨MS：计算值C₄₇H₇₇N₉O₉[M+H]：912.5917，实测值：912.5913.

部分D-(2S)-N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[6-(乙酰基氨基)己酰基氨基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]-2-(4-羟基苯基)乙基}-2-(2-{(2S)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-4-甲基戊酰基氨基}乙酰基氨基)庚-6-烯酰胺的制备

将部分C的产物(9.1mg，0.010mmol)在0.5mL的N，N-二甲基甲酰胺中的溶液用Ac₂O(4.7μL，0.050mmol)和二异丙基乙胺(8.7μL，0.050mmol)处理。将溶液在室温在氮气气氛下搅拌5分钟并减压蒸发溶剂。将形成的残留物溶解在95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶苯甲醚∶水(1mL)中并在室温在氮气气氛下搅拌20分钟。将溶液真空浓缩，并将得到的残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18(2)柱(21.2×250mm)上，使用0.9％/分钟的包含0.1％三氟乙酸22.5～45％乙腈(pH 2)的梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在18.5分钟洗脱的主要产物峰冻干得到为无色的固体标题化合物(8.5mg，94％，HPLC纯度100％)。

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ9.78-9.76(m，1H)，9.70-9.69(m，1H)，9.12(bs，1H)，7.99-7.89(m，3H)，7.80-7.70(m，2H)，7.01(d，J＝8.3Hz，2H)，6.62(d，J＝8.3Hz)，5.77-5.70(m，1H)，4.98(d，J＝17.1Hz，1H)，4.92(d，J＝10.2Hz，1H)，4.44-4.35(m，3H)，4.28-4.20(m，2H)，3.78-3.64(m，2H)，3.57-3.51(m，1H)，2.99(q，J＝6.5Hz，2H)，2.89-2.86(m，1H)，2.67-2.62(m，1H)，2.09(t，J＝7.4Hz，2H)，2.03-1.73(m，13H)，1.66-1.21(m，17H)，0.89-0.81(m，12H)；

MS：m/e 898.5[M+H](90％)，449.4[M+2H](100％)；L-亮氨酸的手性分析：99.8％。

实施例63

N-[(1E)-8-(乙酰基氨基)辛-1-烯基](2S)-2-氨基-4-甲基戊酰胺，甲酸盐

部分A-8-碘代辛-1-炔的制备

将PPh₃(13.7g，52.4mmol)和咪唑(3.57g，52.4mmol)溶解在CH₂Cl₂(100mL)中，并用I₂(13.3g，52.4mmol)一次性地处理。在22℃通过套管用5分钟向该溶液转移辛-7-炔-1-醇(4.40g，34.9mmol)在CH₂Cl₂中的溶液(50mL)。搅拌2小时后，将混合物用戊烷(450mL)稀释，并通过滤过烧结的漏斗去除形成的沉淀。将滤液真空浓缩并重复研磨步骤。将形成的浅黄色的油经硅胶层析纯化(100％戊烷；R_f＝0.4戊烷)得到无色油状物(7.01g，29.7mmol；85.1％)。

¹H NMR(CDCl₃，600MHz)：δ3.20(2H，t，J＝6.6Hz)，2.21(2H，td，J＝6.6，2.4Hz)，1.95(1H，t，J＝2.4Hz)，1.85(2H，quin，J＝7.2Hz)，1.55(2H，m)，1.43(4H，m)。

¹³C NMR(CDCl₃，150MHz)：δ84.6，68.5，33.6，30.2，28.4，27.8，18.5，7.2.

部分B-(1E)-1，8-二碘代辛-1-烯的制备

在22℃，将部分A的产物(4.32g，18.3mmol)通过套管以在CH₂Cl₂中的溶液(20mL)转移到Cp₂ZrHCl(11.8g，45.8mmol)的CH₂Cl₂溶液(80mL)中。将黄色的溶液搅拌2.5小时然后加入饱和的I₂的CH₂Cl₂溶液，使用滴液漏斗滴加，直到出现不变的紫色(～100mL)。然后将混合物倾入到戊烷(500mL)中，并通过滤过烧结的漏斗去除形成的沉淀。然后将滤液用饱和的Na₂S₂O₃溶液(3×200mL)，H₂O(100mL)和饱和的NaCl(200mL)洗涤。然后将有机层在Na₂SO₄上干燥，过滤并真空浓缩得到黄色的油。经硅胶层析纯化(100％戊烷；R_f＝0.6，戊烷)得到无色油状物(4.27g，11.7mmol；64.1％)。

¹H NMR(CDCl₃，600MHz)：δ6.49(1H，dt，J＝14.4，7.2Hz)，5.84(1H，dt，J＝14.4，1.5Hz)，3.17(2H，t，J＝6.9Hz)，2.05(2H，qd，J＝7.2，1.8Hz)，1.81(2H，m)，1.37(4H，m)，1.31(2H，m)。¹³C NMR(CDCl₃，150MHz)：δ146.4，74.6，35.6，33.3，30.2，28.1，27.8，7.0.

部分C-(1E)-8-叠氮基-1-碘代辛-1-烯的制备

在22℃，将部分B的产物(2.17g，5.96mmol)以在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液(30mL)转移到固体NaN₃(657mg，10.1mmol)中。搅拌1小时形成均一的溶液然后用饱和的NaCl溶液(150mL)稀释。然后将形成的混合物转移到分液漏斗中，并用戊烷洗涤(3×50mL)。将合并的有机洗涤液在Na₂SO₄上干燥，过滤并真空浓缩。经硅胶层析纯化(100％戊烷；R_f＝0.3，戊烷)得到无色的油(1.30g，4.66mmol；78.1％)。

¹H NMR(CDCl₃，600MHz)：δ6.49(1H，dt，J＝14.2，7.1Hz)，5.98(1H，dt，J＝14.4，1.5Hz)，3.25(2H，t，J＝6.9Hz)，2.05(2H，qd，J＝7.4，1.5Hz)，1.59(2H，m)，1.42-1.29(6H，m)。

¹³C NMR(CDCl₃，150MHz)：δ146.4，74.5，51.4，35.9，28.7，28.4，28.2，26.4.

部分D-N-((1E)-8-叠氮基辛-1-烯基)(2S)-2-氨基-4-甲基戊酰胺的制备

将5mL锥形烧瓶中装入部分C的产物(279mg，1.00mmol)，N，N’-二甲基乙二胺(11μL，0.10mmol；10mol％)和无水的THF(1.00mL)，并放置。将碘化铜(I)(0.95×10¹mg，0.050mmol；5mol％)，亮氨酸酰胺(2.60×10²mg，2.00mmol)和Cs₂CO₃(489mg，1.50mmol)加入到烤箱-干燥的25mL Schlenk管中。然后将该管排除空气并用干燥的氮气回填3次。使用气密性注射器，然后将预先配制的碘乙烯溶液通过侧臂转移到该烧瓶中；另外的1.00mLTHF用于估量转移。将烧瓶密封然后浸入在预热的油浴中，并在70℃保持16小时。冷却至22℃后将形成的悬浮液用乙酸乙酯(1mL)稀释并直接放置到预先制备的硅胶柱上。用9∶1 CH₂Cl₂/甲醇(R_f＝0.4，9∶1 CH₂Cl₂/甲醇)洗脱，浓缩后，得到浅黄色的油(244mg，0.867mmol；86.7％)。

¹H NMR(C₆D₆，600MHz)：δ8.77(1H，brd，J＝10.2Hz)，7.12(1H，ddt，J＝14.3，11.1，1.4Hz)，4.94(1H，dt，J＝14.3，7.2Hz)，3.05(1H，dd，J＝9.6，4.3Hz)，2.67(2H，t，J＝7.0Hz)，1.86(2H，qd，J＝7.2，1.4Hz)，1.72(1H，ddd，J＝13.8，9.3，4.4Hz)，1.40(1H，m)，1.16(4H，m)，1.04(1H，ddd，J＝13.8，9.6，5.2Hz)，1.00(5H，m)，0.79(3H，d，J＝6.6Hz)，0.72(3H，d，J＝6.6Hz)。

¹³C NMR(C₆D₆，150MHz)：δ171.8，123.4，111.9，53.3，51.2，44.2，30.1，29.9，28.9，28.7，26.7，24.9，23.4，21.4。

MS(ESI)：m/z 304.4(4，M+Na)，282.4(100，M+H).

部分E-N-((1E)-8-叠氮基辛-1-烯基)(2S)-4-甲基-2-(丙-2-烯氧基羰基氨基)戊酰胺的制备

将部分D的产物(111mg，0.394mmol)的THF容液(3.00mL)用i-Pr₂NEt(75μL，0.43mmol)处理然后冷却至0℃。然后加入烯丙基氯甲酸酯(44μL，0.41mmol)，并将溶液在0℃搅拌1小时。然后将形成的溶液温热至22℃并真空浓缩。将由此得到的油状物经纯化硅胶层析(60∶31∶9戊烷/乙醚/甲醇；R_f＝0.4，60∶31∶9戊烷/乙醚/甲醇)得到无色油(142mg，0.389mmol；98.5％)。

¹H NMR(C₆D₆，600MHz)：δ8.08(1H，brd，J＝8.5Hz)，7.03(1H，dd，J＝14.2，10.5Hz)，5.72(1H，ddt，J＝17.0，10.7，5.5Hz)，5.37(1H，d，J＝7.8Hz)，5.12(1H，dq，J＝17.2，1.6Hz)，5.03(1H，dt，J＝14.2，7.1Hz)，4.97(1H，dq，J＝10.5，1.4Hz)，4.46(2H，ABqdt，J_AB＝13.4Hz，J_d＝5.6Hz，J_t＝1.4Hz)，4.34-4.30(1H，m)，2.68(2H，t，J＝6.9Hz)，1.83(2H，brq，J＝7.3Hz)，1.61-1.56(2H，m)，1.45-1.40(1H，m)，1.21-1.12(4H，m)，1.07-0.99(4H，m)，0.84(3H，d，J＝5.8Hz)，0.80(3H，d，J＝6.4Hz)。

¹³C NMR(C₆D₆，150MHz)：δ169.5，156.8，133.1，123.2，117.5，113.5，66.0，53.8，51.2，41.2，30.0(2)，28.8，28.7，26.7，24.8，23.0，21.9。

MS(ESI)：m/z 388.3(61，M+Na)，366.3(100，M+H).

部分F-N-((1E)-8-氨基辛-1-烯基)(2S)-4-甲基-2-(丙-2-烯氧基羰基氨基)戊酰胺，甲酸盐的制备

在22℃，将部分E的产物(123mg，0.337mmol)的THF溶液(5.00mL)用PPh₃(221mg，0.843mmol)处理。完全溶解后，加入H₂O(182μL，10.1mmol)，并将溶液在22℃搅拌1小时然后在70℃搅拌1小时。亚氨基正膦(iminophosphorane)水解完全后，真空去除所有的挥发性成分，并将残留物经HPLC纯化：在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上，使用1.5％/分钟的包含0.1％HCO₂H的10～40％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在10分钟洗脱的主要产物峰冻干得到白色的固体(45.0mg，0.117mmol；34.7％)。

¹H NMR(C₆D₆，600MHz)：δ9.94(1H，brd，J＝10.0Hz)，8.83(1H，s)，7.36(1H，d，J＝8.6Hz)，6.93(1H，dd，J＝14.3，10.0Hz)，5.76(1H，ddt，J＝17.1，10.6，5.4Hz)，5.36(1H，dt，J＝14.3，7.2Hz)，5.18(1H，dq，J＝17.2，1.7Hz)，4.96(1H，dq，J＝10.5，1.6Hz)，4.49-4.41(3H，m)，2.62(2H，dd，J＝7.5，7.4Hz)，1.87(2H，q，J＝7.0Hz)，1.78-1.73(1H，m)，1.66(1H，ddd，J＝13.5，10.1，5.2Hz)，1.57(1H，ddd，J＝13.5，8.8，5.1Hz)，1.44(2H，m)，1.19(2H，m)，1.15-1.09(5H，m)，0.87(3H，d，J＝6.6Hz)，0.85(3H，d，J＝6.6Hz)。

¹³C NMR(C₆D₆，150MHz)：δ170.6，166.7，156.5，133.9，124.0，116.9，112.6，65.0，54.0，41.8，30.2(2)29.9，28.7，26.6，24.9，23.3，21.9。

MS(ESI)：m/z 362.3(3，M+Na)，340.4(100，M+H).

部分G-N-[(1E)-8-(乙酰基氨基)辛-1-烯基](2S)-2-氨基-4-甲基戊酰胺，甲酸盐的制备

在22℃，将部分F的产物(15.0mg，38.9μmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(3.00mL)用i-Pr₂NEt(27.0μL，155μmol)处理，然后用Ac₂O(11.0μL，117μmol)处理。将溶液搅拌0.5小时然后用H₂O(30mL)稀释，转移到分液体漏斗中，并用乙酸乙酯洗涤(3×20mL)。将合并的有机层用饱和的NaHCO₃溶液(20mL)，H₂O(20mL)和饱和的NaCl(20mL)洗涤，然后在Na₂SO₄上干燥，过滤并真空浓缩。将该物质不经过进一步的纯化用于下一步骤。MS(ESI)：m/z 404.3(22，M+Na)，382.4(100，M+H).

将粗制的乙酰胺再溶解在乙腈/H₂O(3.00mL；2∶1 v/v)中，并在22℃用Pd(OAc)₂(0.17mg，0.76μmol；2mol％)处理然后用TPPTS(0.89mg，1.6μmol；4mol％)和Et₂NH(10.0μL，97.3μmol)处理。在0.5小时内观察到完全的脱保护。将溶液直接负载到Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上，使用0.80％/分钟的包含0.1％HCO₂H的10～30％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在14分钟洗脱的主要产物峰冻干得到白色的固体(8.0mg，23μmol；60％两步)。

¹H NMR(C₆D₆，600MHz)：δ9.82(1H，brd，J＝9.9Hz)，7.57(1H，brs)，6.97(1H，dd，J＝14.2，9.9Hz)，5.33(1H，dt，J＝14.3，7.2Hz)，3.61(1H，dd，J＝8.5，5.6Hz)，3.20(2H，td，J＝7.1，5.8Hz)，1.92-1.88(2H，m)，1.89(3H，s)，1.77(1H，ddd，J＝14.4，6.5，5.0Hz)，1.67(1H，ddd，J＝13.7，8.2，5.6Hz)，1.47-1.40(3H，m)，1.25-1.15(6H，m)，0.86(3H，d，J＝6.6Hz)，0.84(3H，d，J＝6.5Hz)。

¹³C NMR(C₆D₆，150MHz)：δ172.0，163.3，123.7，112.8，53.5，43.8，42.1，30.2，30.1，29.9，28.9，27.0，24.8，23.3，23.1，22.1.MS(ESI)：m/z 298.4(100，M+H)，284.4(3).

实施例64

N-[(1E)-5-(乙酰基氨基)戊-1-烯基](2R)-2-氨基-4-甲基戊酰胺，甲酸盐

部分A-N-((1E)-5-叠氮基戊-1-烯基)(2R)-2-氨基-4-甲基戊酰胺的制备

如实施例63部分D描述，向5mL锥形瓶中装入(1E)-5-叠氮基-1-碘戊-1-烯(237mg，1.00mmol)，N，N’-二甲基乙二胺(11μL，0.10mmol；10mol％)和无水的THF(1.00mL)，并放置。将碘化铜(I)(0.95×10¹mg，0.050mmol；5mol％)，亮氨酸酰胺(2.60×10²mg，2.00mmol)和Cs₂CO₃(489mg，1.50mmol)装入到烤箱-干燥25mL Schlenk管中。然后将该容器排气并用干燥的氮气回充三次。使用气密性注射器，然后将预先制备的碘乙烯溶液通过侧臂转移到烧瓶中；另外的1.00mL THF用来定量转移。然后将烧瓶浸入预热的油浴中，并在70℃保持16小时。冷却至22℃后，将形成的悬浮液用乙酸乙酯(1mL)稀释并直接放置在预先制备的硅胶柱的顶部。用9∶1 CH₂Cl₂/甲醇(R_f＝0.3，9∶1 CH₂Cl₂/甲醇)洗脱，浓缩后，得到浅黄色的油(2.10×10²mg，0.877mmol；87.7％)。

¹H NMR(C₆D₆)，600MHz)：δ8.70(1H，brd，J＝9.0Hz)，7.01(1H，ddt，J＝14.3，11.1，1.3Hz)，4.69(1H，dt，J＝14.3，7.2Hz)，3.03(1H，dd，J＝9.7，4.3Hz)，2.63(2H，t J＝7.0Hz)，1.73(1H，ddd，J＝13.7，9.3，4.3Hz)，1.72-1.68(2H，m)，1.43-1.36(1H，m)，1.19(2H，quin，J＝7.1Hz)，1.04(1H，ddd，J＝14.0，9.6，5.2Hz)，0.80(3H，d，J＝6.6Hz)，0.72(3H，d，J＝6.6Hz)。

HRMS计算值C₁₁H₂₂N₅O：240.1824(M+H)。实测值：240.1819.

部分B-N-((1E)-5-叠氮基戊-1-烯基)(2R)-4-甲基-2-(丙-2-烯氧基羰基氨基)戊酰胺的制备

将部分A的产物(105mg，0.439mmol)的THF溶液(5.00mL)用i-Pr₂NEt(84.0μL，0.482mmol)处理然后冷却至0℃。然后加入烯丙基氯甲酸酯(49.0μL，0.461mmol)，并将溶液在0℃搅拌0.5小时然后温热至22℃并搅拌0.75小时。然后将形成的溶液真空浓缩并直接经硅胶层析(71∶24∶5戊烷/乙酸乙酯/甲醇；R_f＝0.9，9∶1 CH₂Cl₂/甲醇)纯化得到白色的固体(141mg，0.436mmol；99.4％)。

¹H NMR(C₆D₆，600MHz)：δ7.36(1H，brs)，6.86(1H，ddt，J＝14.3，10.4，1.4Hz)，5.70(1H，ddt，J＝17.1，10.5，5.5Hz)，5.09(1H，dq，J＝17.2，1.6Hz)，4.96(1H，dq，J＝10.5，1.4Hz)，4.75(1H，brd，J＝7.0Hz)，4.64(1H，dt，J＝14.3，7.2Hz)，4.44(2H，ABqdt，J_AB＝13.4Hz，J_d＝5.6Hz，J_t＝1.4Hz)，4.18-4.14(1H，m)，2.60(2H，t，J＝6.9Hz)，1.65-1.61(2H，m)，1.56-1.46(2H，m)，1.26(1H，brs)，1.14(2H，quin，J＝7.2Hz)，0.80(3H，d，J＝6.1Hz)，0.74(3H，d，J＝6.5Hz)。

MS(ESI)：m/z 324.3(10，M+H)，296.4(100，M+H-N₂).

部分C-N-((1E)-5-氨基戊-1-烯基)(2R)-4-甲基-2-(丙-2-烯氧基羰基氨基)戊酰胺，甲酸盐的制备

将部分B的产物(134mg，0.414mmol)的THF溶液(15.00mL)用PPh₃(273mg，1.04mmol)和H₂O(223μL，12.4mmol)处理，并在22℃搅拌1小时然后在70℃搅拌1小时。随着亚氨基正膦的完全水解，真空去除所有的挥发性成分，并将残留物经HPLC纯化，在Phenomenex Luna C18柱(21.2×250mm)上，使用1.5％/分钟的包含0.1％HCO₂H的9～36％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在9分钟洗脱的主要产物峰冻干白色的固体(69.0mg，0.201mmol；48.5％)。

¹H NMR(DMSO-d₆，600MHz)：δ9.91(1H，brd，J＝9.8Hz)，8.50(1H，s)，7.52(1H，d，J＝8.2Hz)，6.66(1H，dd，J＝14.3，10.0Hz)，5.91(1H，ddt，J＝17.1，10.6，5.3Hz)，5.30(1H，dt，J＝17.2，1.4Hz)，5.25(1H，dt，J＝14.2，7.2Hz)，5.17(1H，brd，J＝10.5Hz)，4.51-4.45(2H，m)，4.07(1H，ddd，J＝10.1，8.2，5.0Hz)，2.72(2H，dd，J＝7.5，7.3Hz)，2.04(2H，q，J＝7.1Hz)，1.66-1.62(1H，m)，1.59(2H，quin，J＝7.3Hz)，1.51(1H，ddd，J＝13.3，10.4，5.1Hz)，1.39(1H，ddd，J＝13.6，8.9，4.9Hz)，0.89(3H，d，J＝6.7Hz)，0.87(3H，d，J＝6.6Hz)。

HRMS计算值C₁₅H₂₈N₃O₃(M+H)：298.2131。实测值：298.2123.

部分D-N-[(1E)-5-(乙酰基氨基)戊-1-烯基](2R)-4-甲基-2-(丙-2-烯氧基羰基氨基)戊酰胺的制备

在22℃，将部分C的产物(56.0mg，0.163mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(4.00mL)用i-Pr₂NEt(142μL，0.815mmol)处理，然后用Ac₂O(77.0μL，0.815mmol)处理。将溶液搅拌0.5小时然后用H₂O和乙酸乙酯(40mL每种)稀释，转移到分液漏斗中。分层并将水层用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将合并的有机层用饱和的NaHCO₃溶液(20mL)，H₂O(20mL)和饱和的NaCl(20mL)洗涤，然后在Na₂SO₄上干燥，过滤并真空浓缩得到45.0mg浅黄色的油状物。将该物质不经过进一步的纯化用于下一步骤。

¹H NMR(DMSO-d₆，600MHz)：δ9.75(1H，d，J＝9.9Hz)，7.78(1H，brs)，7.38(1H，d，J＝8.2Hz)，6.57(1H，dd，J＝14.3，9.9Hz)，5.90(1H，ddt，J＝17.1，10.6，5.3Hz)，5.28(1H，dq，J＝17.2，1.6Hz)，5.21(1H，dt，J＝14.3，7.2Hz)，5.17(1H，dq，J＝10.5，1.3Hz)，4.48-4.43(2H，m)，4.00(1H，ddd，J＝10.1，8.5，5.0Hz)，3.00(2H，td，J＝6.8，6.0Hz)，1.96(2H，q，J＝7.0Hz)，1.78(3H，s)，1.63-1.56(1H，m)，1.47(1H，ddd，J＝13.6，10.2，5.1Hz)，1.42(2H，quin，J＝7.2Hz)，1.35(1H，ddd，J＝13.6，8.8，4.9Hz)，0.87(3H，d，J＝6.6Hz)，0.85(3H，d，J＝6.6Hz)。MS(ESI)：m/z 362.4(23.2，M+Na)，340.4(100，M+H)，215.3(6).

部分E-N-[(1E)-5-(乙酰基氨基)戊-1-烯基](2R)-2-氨基-4-甲基戊酰胺，甲酸盐的制备

将部分D的粗制的乙酰胺(45.o mg，0.133mmol)溶解在乙腈/H₂O(3.00mL；2∶1v/v)中，并在22℃用Pd(OAc)₂(0.60mg，2.7μmol；2mol％)处理，然后用TPPTS(3.0mg，5.3μmol；4mol％)和Et₂NH(35.0μL，0.338mmol)处理。在0.5小时之内观察到完全的脱保护。将溶液直接负载到PhenomenexLuna C18柱(21.2×250mm)上，使用0.86％/分钟的包含0.1％HCO₂H的5～35％乙腈梯度，以20mL/分钟的流速洗脱。在17分钟洗脱的主要产物峰冻干得到白色的固体(31.0mg，0.103mmol；63.1％两步)。

¹H NMR(C₆D₆，600MHz)：δ9.99(1H，brd，J＝9.3Hz)，8.21(1H，s)，7.54(1H，brs)，7.07(1H，dd，J＝14.1，9.9Hz)，5.39(1H，dt，J＝14.3，7.3Hz)，3.65(1H，dd，J＝8.3，5.9Hz)，3.25(2H，td，J＝6.6，6.1Hz)，2.04-1.99(2H，m)，1.91(3H，s)，1.82-1.78(1H，m)，1.73(1H，ddd，J＝13.6，8.1，5.7Hz)，1.55(2H，quin，J＝7.1Hz)，1.50(1H，ddd，J＝13.5，8.4，5.8Hz)，0.90(3H，d，J＝6.5Hz)，0.88(3H，d，J＝6.5Hz)。

¹³C NMR(C₆D₆，150MHz)：δ171.2，168.8，162.9，123.5，111.6，52.8，43.0，38.1，29.8，27.0，24.2，22.7，22.5，21.5。

HRMS计算值C₁₃H₂₆N₃O₂(M+H)：256.2025.实测值：256.2016.

实施例65-147

MMP底物-酰肼-Hynic偶联物的合成

用于制备实施例10-18的Hynic偶联物的步骤用于合成实施例65-147的MMP底物-酰肼-Hynic偶联物。产率和纯度数据显示在表5中，并且质谱数据显示在表6中。

表5.实施例65-147的产率和纯度数据

实施例#		产率，％	纯度，％(HPLC)	手性纯度％/氨基酸
实施例#		产率，％	纯度，％(HPLC)	手性纯度％/氨基酸	65	NLys-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	43	100
66	Ac-P-Cit-G～Hphe-L-Ahxh-Hynic	29	100	97.4％L-Leu	65	NLys-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	43	100
66	Ac-P-Cit-G～Hphe-L-Ahxh-Hynic	29	100	97.4％L-Leu	67	Ac-PHG～Hphe-L-Ahxh-Hynic	37	96	94.7％L-Leu
68	NLys-NLys-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Hynic	14	100	99.3％L-Leu	67	Ac-PHG～Hphe-L-Ahxh-Hynic	37	96	94.7％L-Leu
68	NLys-NLys-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Hynic	14	100	99.3％L-Leu	69	Ac-PRQ～ITA-Ahxh-Hynic	58	100
70	Ac-PRQ～IT-Ahxh-Hynic	40	93		69	Ac-PRQ～ITA-Ahxh-Hynic	58	100
70	Ac-PRQ～IT-Ahxh-Hynic	40	93		71	Ac-PRR～LTA-Ahxh-Hynic	67	100	97.9％L-Ala
72	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	36	100	99.3％L-Ala	71	Ac-PRR～LTA-Ahxh-Hynic	67	100	97.9％L-Ala
72	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	36	100	99.3％L-Ala	73	Ac-PLG～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	75	97	99.9％L-Leu
74	Ac-PLG～Hphe-OLR-Ahxh-Hynic	73	100	95.0％L-Arg	73	Ac-PLG～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	75	97	99.9％L-Leu
74	Ac-PLG～Hphe-OLR-Ahxh-Hynic	73	100	95.0％L-Arg	75	Ac-POG～Hphe-LQ-Ahxh-Hynic	44	100	93.8％L-Glu
76	Ac-PLG～Hphe-YLA-Ahxh-Hynic	26	98	96.9％L-Ala	75	Ac-POG～Hphe-LQ-Ahxh-Hynic	44	100	93.8％L-Glu
76	Ac-PLG～Hphe-YLA-Ahxh-Hynic	26	98	96.9％L-Ala	77	Ac-PLG～LL-Ahxh-Hynic	35	100	92.8％L-Leu
78	Ac-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	54	100	83.9％L-Ala	77	Ac-PLG～LL-Ahxh-Hynic	35	100	92.8％L-Leu
78	Ac-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	54	100	83.9％L-Ala	79	Ac-PLG～LYL-Ahxh-Hynic	59	100	99.3％L-Leu
80	Ac-P-Cit-G～Hphe-LT-Ahxh-Hynic	3	98		79	Ac-PLG～LYL-Ahxh-Hynic	59	100	99.3％L-Leu
80	Ac-P-Cit-G～Hphe-LT-Ahxh-Hynic	3	98		81	Ac-PLG～Hphe-RL-Ahxh-Hynic	8	98
82	Ac-PLG～Hphe-OLA-Ahxh-Hynic	19	95		81	Ac-PLG～Hphe-RL-Ahxh-Hynic	8	98
82	Ac-PLG～Hphe-OLA-Ahxh-Hynic	19	95		83	Ac-P-Cit-G-Hphe-LA-Hynic	51	96	99.2％L-Ala
84	Ac-P-Cha-G～Smc-HA-Ahxh-Hynic	31	96	98.0％L-Ala	83	Ac-P-Cit-G-Hphe-LA-Hynic	51	96	99.2％L-Ala
84	Ac-P-Cha-G～Smc-HA-Ahxh-Hynic	31	96	98.0％L-Ala	85	Ac-PLG～LLA-Ahxh-Hynic	45	98	85.3％L-Ala
86	Ac-POG～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	35	100	99.8％L-Nle	85	Ac-PLG～LLA-Ahxh-Hynic	45	98	85.3％L-Ala
86	Ac-POG～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	35	100	99.8％L-Nle	87	Ac-PLG～Hphe-YLR-Ahxh-Hynic	42	100	99.0％L-Arg
88	Ac-PLG～LR-Ahxh-Hynic	56	100	99.5％L-Arg	87	Ac-PLG～Hphe-YLR-Ahxh-Hynic	42	100	99.0％L-Arg
88	Ac-PLG～LR-Ahxh-Hynic	56	100	99.5％L-Arg	89	Ac-PLG～LHL-Ahxh-Hynic	61	100	99.9％L-Leu
90	Ac-POG～Hphe-Smc-T-Ahxh-Hynic	47	100	100％L-Thr	89	Ac-PLG～LHL-Ahxh-Hynic	61	100	99.9％L-Leu
90	Ac-POG～Hphe-Smc-T-Ahxh-Hynic	47	100	100％L-Thr	91	Ac-PRG～LLT-Ahxh-Hynic	98	100	100％L-Thr
92	Ac-PRG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	44	100	98.4％L-Ala	91	Ac-PRG～LLT-Ahxh-Hynic	98	100	100％L-Thr
92	Ac-PRG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	44	100	98.4％L-Ala	93	Ac-PLG～LRA-Ahxh-Hynic	56	100	96.3％L-Ala
94	Ac-P-Cit-G～Hphe-LQ-Hynic	36	100	99.5％L-Gln	93	Ac-PLG～LRA-Ahxh-Hynic	56	100	96.3％L-Ala
94	Ac-P-Cit-G～Hphe-LQ-Hynic	36	100	99.5％L-Gln	95	Ac-POG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	38	100	98.9％L-Ala
96	Ac-PLG～LRL-Ahxh-Hynic	64	100	99.7％L-Leu	95	Ac-POG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	38	100	98.9％L-Ala
96	Ac-PLG～LRL-Ahxh-Hynic	64	100	99.7％L-Leu	97	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	48	100	100％L-Thr
98	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Hynic	72	100	89.8％L-Ala	97	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	48	100	100％L-Thr
98	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Hynic	72	100	89.8％L-Ala	99	Ac-PLG～LOL-Ahxh-Hynic	42	98	99.8％L-Leu
100	Ac-POG-Hphe-LTR-Ahxh-Hynic	55	97	89.1％L-Arg	99	Ac-PLG～LOL-Ahxh-Hynic	42	98	99.8％L-Leu
100	Ac-POG-Hphe-LTR-Ahxh-Hynic	55	97	89.1％L-Arg	101	Ac-POG～LLA-Ahxh-Hynic	53	100	90.7％L-Ala
102	Ac-PLG～LL-Ambh-Hynic	98	100	97.9％L-Leu	101	Ac-POG～LLA-Ahxh-Hynic	53	100	90.7％L-Ala
102	Ac-PLG～LL-Ambh-Hynic	98	100	97.9％L-Leu	103	Ac-P-DArg-R～LTA-Ahxh-Hynic	8	98
104	Ac-P-NLys-R～LTA-Ahxh-Hynic	39	99		103	Ac-P-DArg-R～LTA-Ahxh-Hynic	8	98
104	Ac-P-NLys-R～LTA-Ahxh-Hynic	39	99		105	Ac-PLG～Hphe-RLA-Ambh-Hynic	97	100	98.0％L-Ala

表5，续

实施例#		产率，％	纯度，％(HPLC)	手性纯度％/氨基酸
实施例#		产率，％	纯度，％(HPLC)	手性纯度％/氨基酸	106	Ac-P-Cit-G～Aib-LA-Ahxh-Hynic	40	99	96.5％L-Ala
107	H-DArg-P-Cit-G～cLeu-LA-Ahxh-Hynic	66	100	98.0％L-Ala	106	Ac-P-Cit-G～Aib-LA-Ahxh-Hynic	40	99	96.5％L-Ala
107	H-DArg-P-Cit-G～cLeu-LA-Ahxh-Hynic	66	100	98.0％L-Ala	108	Ac-P-Cit-G～Chg-LA-Ahxh-Hynic	48	100
109	Ac-NLys-PLG～LL-Ahxh-Hynic	40	100	97.4％L-Leu	108	Ac-P-Cit-G～Chg-LA-Ahxh-Hynic	48	100
109	Ac-NLys-PLG～LL-Ahxh-Hynic	40	100	97.4％L-Leu	110	Ac-NLys-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	41	100	99.2％L-Ala
111	Ac-PLG～LYA-Ahxh-Hynic	83	97.6	84.7％L-Ala	110	Ac-NLys-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	41	100	99.2％L-Ala
111	Ac-PLG～LYA-Ahxh-Hynic	83	97.6	84.7％L-Ala	112	Ac-PLG～Hphe-RLT-Ahxh-Hynic	53	98.3	100％L-Thr
113	Ac-PLG～LAL-Ahxh-Hynic	87	100	95.2％L-Leu	112	Ac-PLG～Hphe-RLT-Ahxh-Hynic	53	98.3	100％L-Thr
113	Ac-PLG～LAL-Ahxh-Hynic	87	100	95.2％L-Leu	114	Ac-VRW～LLA-Ahxh-Hynic	28	100	99.8％L-Ala
115	Ac-VRW～LTA-Ahxh-Hynic	12	100	99.0％L-Ala	114	Ac-VRW～LLA-Ahxh-Hynic	28	100	99.8％L-Ala
115	Ac-VRW～LTA-Ahxh-Hynic	12	100	99.0％L-Ala	116	Ac-LRY～Cha-TA-Ahxh-Hynic	61	100	98.6％L-Ala
117	Ac-P-Cit-Cit～LTA-Ahxh-Hynic	66	93		116	Ac-LRY～Cha-TA-Ahxh-Hynic	61	100	98.6％L-Ala
117	Ac-P-Cit-Cit～LTA-Ahxh-Hynic	66	93		118	Ac-Tic-Cit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	56	89
119	Ac-PRR～Cha-TA-Ambh-Hynic	4	100		118	Ac-Tic-Cit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	56	89
119	Ac-PRR～Cha-TA-Ambh-Hynic	4	100		120	Piv-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	32	93.4	100％L-Thr
121	Suc-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	41	100	100％L-Thr	120	Piv-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	32	93.4	100％L-Thr
121	Suc-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	41	100	100％L-Thr	122	Ac-P-Cit-G～Tle-LA-Ahxh-Hynic	62	100	99.5％L-Ala
123	Ac-PR-Cit～LSA-Ahxh-Hynic	59	99	98.8％L-Ala	122	Ac-P-Cit-G～Tle-LA-Ahxh-Hynic	62	100	99.5％L-Ala
123	Ac-PR-Cit～LSA-Ahxh-Hynic	59	99	98.8％L-Ala	124	H-γ-DGlu-PLG-LYT-Ahxh-Hynic	11	92	100％L-Thr
125	Ac-Inp-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	66	99	96.3％L-Ala	124	H-γ-DGlu-PLG-LYT-Ahxh-Hynic	11	92	100％L-Thr
125	Ac-Inp-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	66	99	96.3％L-Ala	126	Ac-P-Cit-Aib～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	59	99	98.4％L-Ala
127	H-NLys-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	40	90	100％L-Thr	126	Ac-P-Cit-Aib～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	59	99	98.4％L-Ala
127	H-NLys-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	40	90	100％L-Thr	128	Ac-P-Cit-G～Nle-LA-Ahxh-Hynic	69	100	95.5％L-Ala
129	Ac-P-Cit-Hse～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	71	100	99.5％L-Ala	128	Ac-P-Cit-G～Nle-LA-Ahxh-Hynic	69	100	95.5％L-Ala
129	Ac-P-Cit-Hse～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	71	100	99.5％L-Ala	130	Ac-P-Hcit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	39	100	100％L-Ala
131	Ac-Hpro-Cit-G～Hphe-TA-Ahxh-Hynic	52	100	100％L-Ala	130	Ac-P-Hcit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	39	100	100％L-Ala
131	Ac-Hpro-Cit-G～Hphe-TA-Ahxh-Hynic	52	100	100％L-Ala	132	Ac-P-O(Me)2-G～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	40	100	67.4％L-Nle
133	Ac-P-DLeu-G～LL-Ahxh-Hynic	36	100		132	Ac-P-O(Me)2-G～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	40	100	67.4％L-Nle
133	Ac-P-DLeu-G～LL-Ahxh-Hynic	36	100		134	Ac-P-Cit-G～Igl-LA-Ahxh-Hynic	36	98
135	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Hynic	23	100		134	Ac-P-Cit-G～Igl-LA-Ahxh-Hynic	36	98
135	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Hynic	23	100		136	Ac-PLG～Hphe-K(Me)2-L-Ahxh-Hynic	70	100	86.0％L-Leu
137	Ac-P-NMeArg-R～LTA-Ambh-Hynic	5	100		136	Ac-PLG～Hphe-K(Me)2-L-Ahxh-Hynic	70	100	86.0％L-Leu
137	Ac-P-NMeArg-R～LTA-Ambh-Hynic	5	100		138	Ac-P-Cit-G～Abu-LA-Ahxh-Hynic	50	100	97.4％L-Ala
139	Ac-PRG～Hphe-Dab-A-Ahxh-Hynic	50	100	92.8％L-Ala	138	Ac-P-Cit-G～Abu-LA-Ahxh-Hynic	50	100	97.4％L-Ala
139	Ac-PRG～Hphe-Dab-A-Ahxh-Hynic	50	100	92.8％L-Ala	140	Ac-DAla-PRG～Ile-LA-Ahxh-Hynic	64	100	48.2％L-Ala
141	Ac-DArg-P-Aib-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	65	98	93.8％L-Ala	140	Ac-DAla-PRG～Ile-LA-Ahxh-Hynic	64	100	48.2％L-Ala
141	Ac-DArg-P-Aib-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	65	98	93.8％L-Ala	142	Ac-P-Cit-Abu～LTA-Ahxh-Hynic	63	96	97.6％L-Ala
143	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	46	98		142	Ac-P-Cit-Abu～LTA-Ahxh-Hynic	63	96	97.6％L-Ala
143	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	46	98		144	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Hynic	39	95
145	Ac-PL-DAla～LL-Ahxh-Hynic	18	100		144	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Hynic	39	95
145	Ac-PL-DAla～LL-Ahxh-Hynic	18	100		146	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-Hynic	30	99
147	Ac-P-Cit-G～S(OBn)-LA-Ahxh-Hynic	24	100		146	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-Hynic	30	99

表6.实施例65-147的质谱数据

	低分辨MS，偶联物		高分辨MS，偶联物
	低分辨MS，偶联物		高分辨MS，偶联物		实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	实测值
65	1301.6/M+H/40％	651.3/M+2H/100％	C65H84N14O13S[M+H]：1301.6136	1301.6126	实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	实测值
65	1301.6/M+H/40％	651.3/M+2H/100％	C65H84N14O13S[M+H]：1301.6136	1301.6126	66	1076.4/M+H/100％
67	1056.4/M+H/100％	528.7/M+2H/75％	C50H65N13O11S[M+H]：1056.4720	1056.4696	66	1076.4/M+H/100％
67	1056.4/M+H/100％	528.7/M+2H/75％	C50H65N13O11S[M+H]：1056.4720	1056.4696	68	1410.6/M+H/30％	705.9/M+2H/95％	C68H100N16O14S[M+2H]：705.3736	705.3731
69	1157.3/M+H/60％	579.2/M+2H/100％			68	1410.6/M+H/30％	705.9/M+2H/95％	C68H100N16O14S[M+2H]：705.3736	705.3731
69	1157.3/M+H/60％	579.2/M+2H/100％			70	1086.4/M+H/75％	543.9/M+2H/100％
71	1185.4/M+H/25％	593./M+2H/100％	C51H80N18O13S[2M+H]：593.3009	593.3004	70	1086.4/M+H/75％	543.9/M+2H/100％
71	1185.4/M+H/25％	593./M+2H/100％	C51H80N18O13S[2M+H]：593.3009	593.3004	72	1147.4/M+H/100％	574.3/M+2H/100％
73	1189.4/M+H/100％	595.3/M+2H/20％			72	1147.4/M+H/100％	574.3/M+2H/100％
73	1189.4/M+H/100％	595.3/M+2H/20％			74	1302.6/M+H/30％	651.8/M+2H/100％
75	1161.4/M+H/100％	581.8/M+2H/50％	C54H76N14O13S[2M+H]：581.2791	581.2789	74	1302.6/M+H/30％	651.8/M+2H/100％
75	1161.4/M+H/100％	581.8/M+2H/50％	C54H76N14O13S[2M+H]：581.2791	581.2789	76	1266.4/M+H/100％	633.7/M+2H/65％	C62H83N13O14S[2M+H]：633.8024	633.803
77	984.5/M+H/100％	536.2/20％	C46H69N11O11S{M+H]：984.4971	984.4988	76	1266.4/M+H/100％	633.7/M+2H/65％	C62H83N13O14S[2M+H]：633.8024	633.803
77	984.5/M+H/100％	536.2/20％	C46H69N11O11S{M+H]：984.4971	984.4988	78	1259.6/M+H/90％	630.5/M+2H/100％	C59H86N16O13S[M+H]：1259.6354	1259.6325
79	1147.5/M+H/100％		C55H78N12O13S[M+H]：1147.5605	1147.5627	78	1259.6/M+H/90％	630.5/M+2H/100％	C59H86N16O13S[M+H]：1259.6354	1259.6325
79	1147.5/M+H/100％		C55H78N12O13S[M+H]：1147.5605	1147.5627	80	1177.4/M+H/95％	598.3/M+2H/100％
81	1188.4/M+H/95％	594.8/M+2H/100％			80	1177.4/M+H/95％	598.3/M+2H/100％
81	1188.4/M+H/95％	594.8/M+2H/100％			82	1217.5/M+H/65％	609.3/M+2H/100％
83	1034.0/M+H/70％	517.3/M+2H/100％			82	1217.5/M+H/65％	609.3/M+2H/100％
83	1034.0/M+H/70％	517.3/M+2H/100％			84	1123.3/M+H/60％	562.2/M+2H/100％	C50H70N14O12S2[M+H]：1123.4812	1123.481
85	1055.4/M+H/100％	607.3/20％	C49H74N12O12S[M+H]：1055.5343	1055.5349	84	1123.3/M+H/60％	562.2/M+2H/100％	C50H70N14O12S2[M+H]：1123.4812	1123.481
85	1055.4/M+H/100％	607.3/20％	C49H74N12O12S[M+H]：1055.5343	1055.5349	86	1146.4/M+H/100％	573.8/M+2H/40％	C55H79N13O12S[2M+H]：	573.7926
87	1351.0/M+H/100％	676.2/M+2H/40％	C65H90N16O14S[2M+H]：676.3244	676.3254	86	1146.4/M+H/100％	573.8/M+2H/40％	C55H79N13O12S[2M+H]：	573.7926
87	1351.0/M+H/100％	676.2/M+2H/40％	C65H90N16O14S[2M+H]：676.3244	676.3254	88	1027.5/M+H/75％	514.3/M+2H/100％	C46H70N14O11S[M+H]：1027.5142	1027.5139
89	1121.6/M+H/93％	561.3/M+2H/100％	C52H76N14O12S[M+H]：1121.5561	1121.5556	88	1027.5/M+H/75％	514.3/M+2H/100％	C46H70N14O11S[M+H]：1027.5142	1027.5139
89	1121.6/M+H/93％	561.3/M+2H/100％	C52H76N14O12S[M+H]：1121.5561	1121.5556	90	1138.3/M+H/45％	569.8/M+2H/100％	C51H71N13O12S2[M+H]：1138.4808	1138.4805
91	1128.4/M+H/100％	564.9/M+2H/45％	C50H77N15O13S[M+H]：1128.5619	1128.5625	90	1138.3/M+H/45％	569.8/M+2H/100％	C51H71N13O12S2[M+H]：1138.4808	1138.4805
91	1128.4/M+H/100％	564.9/M+2H/45％	C50H77N15O13S[M+H]：1128.5619	1128.5625	92	1146.4/M+H/100％	573.7/M+2H/50％	C53H75N15O12S[M+H]：1146.5513	1146.5514
93	1098.4/M+H/85％	549.8/M+2H/100％	C49H75N15O12S[M+H]：1098.5513	1098.5514	92	1146.4/M+H/100％	573.7/M+2H/50％	C53H75N15O12S[M+H]：1146.5513	1146.5514
93	1098.4/M+H/85％	549.8/M+2H/100％	C49H75N15O12S[M+H]：1098.5513	1098.5514	94	1204.4/M+H/100％	602.8/M+2H/30％
95	1104.4/M+H/100％	552.8/M+2H/40％			94	1204.4/M+H/100％	602.8/M+2H/30％
95	1104.4/M+H/100％	552.8/M+2H/40％			96	1140.4/M+H/100％	570.9/M+2H/95％	C52H81N15O12S[M+H]：1140.5983	1140.5982
97	1135.5/M+H/100％		C53H74N12O14S[M+H]：1135.5241	1135.5243	96	1140.4/M+H/100％	570.9/M+2H/95％	C52H81N15O12S[M+H]：1140.5983	1140.5982
97	1135.5/M+H/100％		C53H74N12O14S[M+H]：1135.5241	1135.5243	98	1128.4/M+H/100％		C54H73N13N12S[M+H]：1128.5295	1128.5278
99	1098.4/M+H/60％	549.9/M+2H/100％	C51H79N13O12S[M+H]：1098.5765	1098.5781	98	1128.4/M+H/100％		C54H73N13N12S[M+H]：1128.5295	1128.5278
99	1098.4/M+H/60％	549.9/M+2H/100％	C51H79N13O12S[M+H]：1098.5765	1098.5781	100	1290.6/M+H/50％	645.8/M+2H/100％	C59H87N17O14S[M+2H]：645.8242	645.8248
101	1056.4/M+H/100％		C48H73N13O12S[M+H]：1056.5295	1056.529	100	1290.6/M+H/50％	645.8/M+2H/100％	C59H87N17O14S[M+2H]：645.8242	645.8248
101	1056.4/M+H/100％		C48H73N13O12S[M+H]：1056.5295	1056.529	102	1004.4/M+H/100％	536.4/45％
103	1185.6/M+H/25％	593.3/M+2H/100％			102	1004.4/M+H/100％	536.4/45％
103	1185.6/M+H/25％	593.3/M+2H/100％			104	579.3/M+2H/100％	1157.4/M+2H/20％	C51H80N16O13S[M+2H]：579.2978	579.2985
105	1279.5/M+H/100％	640.5/M+2H/40％	C61H82N16O13S[M+H]：1279.6041	1279.604	104	579.3/M+2H/100％	1157.4/M+2H/20％	C51H80N16O13S[M+2H]：579.2978	579.2985

表6，续

	低分辨MS，偶联物		高分辨MS，偶联物
	低分辨MS，偶联物		高分辨MS，偶联物		实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	实测值
106	1071.4/M+H/100％	536.3/M+2H/50％			实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	实测值
106	1071.4/M+H/100％	536.3/M+2H/50％			107	1211.5/M+H/25％	606.4/M+2H/100％
108	1125.4/M+H/100％	553.4/M+2H/40％			107	1211.5/M+H/25％	606.4/M+2H/100％
108	1125.4/M+H/100％	553.4/M+2H/40％			109	1112.6/M+H/100％	556.8/M+2H/65％	C52H81N13O12S[M+H]：1112.5921	1112.592
110	1387.6/M+H/10％	694.7/M+2H/100％	C65H98N18O14S[M+2H]：694.3688	694.3719	109	1112.6/M+H/100％	556.8/M+2H/65％	C52H81N13O12S[M+H]：1112.5921	1112.592
110	1387.6/M+H/10％	694.7/M+2H/100％	C65H98N18O14S[M+2H]：694.3688	694.3719	111	1105.5/M+H/100％	657.3/13％	C52H72N12O13S[M+H]：1105.5135	1105.515
112	1289.6/M+H/100％	645.5/M+2H/75％	C60H88N16O14S[M+H]：1289.6459	1289.642	111	1105.5/M+H/100％	657.3/13％	C52H72N12O13S[M+H]：1105.5135	1105.515
112	1289.6/M+H/100％	645.5/M+2H/75％	C60H88N16O14S[M+H]：1289.6459	1289.642	113	1055.6/M+H/100％	607.3/20％	C49H74N12O12S[M+H]：1055.5343	1055.534
114	1229.6/M+H/100％	615.3/M+2H/80％	C58H84N16O12S[M+H]：1229.6248	1229.626	113	1055.6/M+H/100％	607.3/20％	C49H74N12O12S[M+H]：1055.5343	1055.534
114	1229.6/M+H/100％	615.3/M+2H/80％	C58H84N16O12S[M+H]：1229.6248	1229.626	115	1217.6/M+H/100％	609.3/M+2H/80％	C56H78N16O13S[M+H]：1217.5884	1217.586
116	1248.4/M+H/100％	624.9/M+2H/60％	C58H85N15O14S[M+H]：1248.6194	1248.622	115	1217.6/M+H/100％	609.3/M+2H/80％	C56H78N16O13S[M+H]：1217.5884	1217.586
116	1248.4/M+H/100％	624.9/M+2H/60％	C58H85N15O14S[M+H]：1248.6194	1248.622	117	1187.6/M+H/100％	594.2/M+2H/45％
118	1183.5/M+H/100％	592.2/M+2H/85％			117	1187.6/M+H/100％	594.2/M+2H/45％
118	1183.5/M+H/100％	592.2/M+2H/85％			119	1245.6/M+H/25％	622.8/M+2H/100％
120	1177.5/M+H/100％	589.8/M+2H/40％	C56H80N12O14S[M+H]：1177.5710	1177.572	119	1245.6/M+H/25％	622.8/M+2H/100％
120	1177.5/M+H/100％	589.8/M+2H/40％	C56H80N12O14S[M+H]：1177.5710	1177.572	121	1193.4/M+H/100％	597.3/M+2H/30％	C55H76N12O16S[M+H]：1193.5296	1193.528
122	1099.4/M+H/100％	550.3/M+2H/75％	C49H74N14O13S[M+H]：1099.5353	1099.535	121	1193.4/M+H/100％	597.3/M+2H/30％	C55H76N12O16S[M+H]：1193.5296	1193.528
122	1099.4/M+H/100％	550.3/M+2H/75％	C49H74N14O13S[M+H]：1099.5353	1099.535	123	1172.5/M+H/100％	586.8/M+2H/85％	C50H77N17O14S[M+H]：1172.5629	1172.563
124	1222.4/M+H/100％	611.8/M+2H/100％			123	1172.5/M+H/100％	586.8/M+2H/85％	C50H77N17O14S[M+H]：1172.5629	1172.563
124	1222.4/M+H/100％	611.8/M+2H/100％			125	1161.4/M+H/50％	581.3/M+2H/100％
126	1175.5/M+H/95％	588.4/M+2H/100％			125	1161.4/M+H/50％	581.3/M+2H/100％
126	1175.5/M+H/95％	588.4/M+2H/100％			127	1221.6/M+H/15％	611.3/M+2H/40％	C57H84N14O14S[M+2H]：611.3079	611.3085
128	1099.4/M+H/100％	550.3/M+2H/75％			127	1221.6/M+H/15％	611.3/M+2H/40％	C57H84N14O14S[M+2H]：611.3079	611.3085
128	1099.4/M+H/100％	550.3/M+2H/75％			129	1165.4/M+H/100％	583.3/M+2H/70％	C52H72N14O15S[M+H]：1165.5095	1165.511
130	1135.5/M+H/100％	568.3/M+2H/85％	C51H70N14O14S[M+H]：1135.4989	1135.498	129	1165.4/M+H/100％	583.3/M+2H/70％	C52H72N14O15S[M+H]：1165.5095	1165.511
130	1135.5/M+H/100％	568.3/M+2H/85％	C51H70N14O14S[M+H]：1135.4989	1135.498	131	1149.4/M+H/100％	575.3/M+2H/60％	C52H72N14O14S[M+H]：1149.5146	1149.517
132	1174.5/M+H/100％	588.2/M+2H/55％	C97H83N13O12S[M+H]：1174.6077	1174.605	131	1149.4/M+H/100％	575.3/M+2H/60％	C52H72N14O14S[M+H]：1149.5146	1149.517
132	1174.5/M+H/100％	588.2/M+2H/55％	C97H83N13O12S[M+H]：1174.6077	1174.605	133	984.4/M+H/100％	492.9/M+2H/30％	C46H69N11O11S[M+H]：984.4971	984.5009
134	1159.4/M+H/100％	580.3/M+2H/75％	C54H74N14O13S[M+H]：1159.5353	1159.537	133	984.4/M+H/100％	492.9/M+2H/30％	C46H69N11O11S[M+H]：984.4971	984.5009
134	1159.4/M+H/100％	580.3/M+2H/75％	C54H74N14O13S[M+H]：1159.5353	1159.537	135	1160.5/M+H/100％	581.0/M+2H/85％	C56H81N13O12S[M+H]：1160.5921	1160.588
136	1188.6/M+H/100％		C58H85N13O12S[M+H]：1188.6234	1188.626	135	1160.5/M+H/100％	581.0/M+2H/85％	C56H81N13O12S[M+H]：1160.5921	1160.588
136	1188.6/M+H/100％		C58H85N13O12S[M+H]：1188.6234	1188.626	137	1245.6/M+H/25％	623.3/M+2H/100％
138	1071.4/M+H/100％	536.3/M+2H/70％			137	1245.6/M+H/25％	623.3/M+2H/100％
138	1071.4/M+H/100％	536.3/M+2H/70％			139	1133.5/M+H/55％	567.4/M+2H/100％
140	1170.4/M+H/100％	585.8/M+2H/90％			139	1133.5/M+H/55％	567.4/M+2H/100％
140	1170.4/M+H/100％	585.8/M+2H/90％			141	1231.4/M+H/100％	616.5/M+2H/40％
142	1115.3/M+H/100％	558.4/M+2H/50％			141	1231.4/M+H/100％	616.5/M+2H/40％
142	1115.3/M+H/100％	558.4/M+2H/50％			143	1233.5/M+H/55％	617.3/M+2H/100％
144	1161.4/M+H/100％	581.3/M+2H/30％			143	1233.5/M+H/55％	617.3/M+2H/100％
144	1161.4/M+H/100％	581.3/M+2H/30％			145	998.2/M+H/100％
146	1024.4/M+H/100％				145	998.2/M+H/100％
146	1024.4/M+H/100％				147	1163.5/M+H/100％

实施例148-230

复合物[^99mTc(HYNIC-MMPsub)(tricine)(TPPTS)]的合成

在实施例27-44中描述的步骤用来制备这些另外的^99mTc复合物。这些复合物的分析和产率数据显示在表7中。

表7.[^99mTc(HYNIC-MMPsub)(tricine)(TPPTS)]复合物的分析和产率数据

实施例#	Hynic偶联物#	RT(min)	RCP纯度，％(HPLC)	HPLC梯度
实施例#	Hynic偶联物#	RT(min)	RCP纯度，％(HPLC)	HPLC梯度	148	65	13.7	80.0	20-40/20min
149	66	12.5	98.0	10-40/20min	148	65	13.7	80.0	20-40/20min
149	66	12.5	98.0	10-40/20min	150	67	13.1	74.0	10-40/20min
151	68	12.5	78.6	20-40/20min	150	67	13.1	74.0	10-40/20min
151	68	12.5	78.6	20-40/20min	152	69	11.8	90.0	0-40/20min
153	70	11.7	89.0	0-40/20min	152	69	11.8	90.0	0-40/20min
153	70	11.7	89.0	0-40/20min	154	71	11.8	86.9	0-40/20min
155	72	14.1	99.1	0-40/20min	154	71	11.8	86.9	0-40/20min
155	72	14.1	99.1	0-40/20min	156	73	15.9	96.7	10-40/20min
157	74	12.8	95.8	20-40/20min	156	73	15.9	96.7	10-40/20min
157	74	12.8	95.8	20-40/20min	158	75	13.2	88.7	20-40/20min
159	76	14.5	97.5	20-40/20min	158	75	13.2	88.7	20-40/20min
159	76	14.5	97.5	20-40/20min	160	77	11.1	97.0	20-40/20min
161	78	13.4	93.4	20-40/20min	160	77	11.1	97.0	20-40/20min
161	78	13.4	93.4	20-40/20min	162	79	12.6	100	20-40/20min
163	80	12.0	95.0	10-40/20min	162	79	12.6	100	20-40/20min
163	80	12.0	95.0	10-40/20min	164	81	13.4	100	20-40/20min
165	82	13.6	96.5	20-40/20min	164	81	13.4	100	20-40/20min
165	82	13.6	96.5	20-40/20min	166	83	13.7	96.1	10-40/20min
167	84	14.8	71.5	20-40/20min	166	83	13.7	96.1	10-40/20min
167	84	14.8	71.5	20-40/20min	168	85	16.1	97.0	20-40/20min
169	86	10.8	93.5	20-40/20min	168	85	16.1	97.0	20-40/20min
169	86	10.8	93.5	20-40/20min	170	87	13.4，14.0	68.1	20-40/20min
171	88	12.2	100	10-40/20min	170	87	13.4，14.0	68.1	20-40/20min
171	88	12.2	100	10-40/20min	172	89	14.6	70.1	10-40/20min
173	90	11.3	95.1	20-40/20min	172	89	14.6	70.1	10-40/20min
173	90	11.3	95.1	20-40/20min	174	91	15.5	89.9	0-40/20min
175	92	14.8	97.6	10-40/20min	174	91	15.5	89.9	0-40/20min
175	92	14.8	97.6	10-40/20min	176	93	12.6	98.9	10-40/20min
177	94	13.8	100	10-40/20min	176	93	12.6	98.9	10-40/20min
177	94	13.8	100	10-40/20min	178	95	13.2	97.3	10-40/20min
179	96	15.0	92.4	10-40/20min	178	95	13.2	97.3	10-40/20min
179	96	15.0	92.4	10-40/20min	180	97	13.8	98.5	10-40/20min
181	98	15.6	98.4	10-40/20min	180	97	13.8	98.5	10-40/20min
181	98	15.6	98.4	10-40/20min	182	99	14.7	98.4	10-40/20min
183	100	14.0	96.9	10-40/20min	182	99	14.7	98.4	10-40/20min
183	100	14.0	96.9	10-40/20min	184	101	11.0	87.7	10-40/20min
185	102	12.5	97.1	20-40/20min	184	101	11.0	87.7	10-40/20min
185	102	12.5	97.1	20-40/20min	186	103	13.6	92.5	0-40/20min
187	104	12.9	83.9	0-40/20min	186	103	13.6	92.5	0-40/20min
187	104	12.9	83.9	0-40/20min	188	105	14.3	59.2	20-40/20min

表7，续

实施例#	Hynic偶联物#	RT(min)	RCP纯度，％(HPLC)	HPLC梯度
实施例#	Hynic偶联物#	RT(min)	RCP纯度，％(HPLC)	HPLC梯度	189	106	14.3	87.2	0-40/20min
190	107	14.5	73.2	0-40/20min	189	106	14.3	87.2	0-40/20min
190	107	14.5	73.2	0-40/20min	191	108	15.8	80.6	0-40/20min
192	109	17.4	72.9	0-40/20min	191	108	15.8	80.6	0-40/20min
192	109	17.4	72.9	0-40/20min	193	110	19.1	82.0	0-40/20min
194	111	17.2	75.1	0-40/20min	193	110	19.1	82.0	0-40/20min
194	111	17.2	75.1	0-40/20min	195	112	19.9	100	0-40/20min
196	113	17.9	99.2	0-40/20min	195	112	19.9	100	0-40/20min
196	113	17.9	99.2	0-40/20min	197	114	21.1	94.9	0-40/20min
198	115	19.2	96.6	0-40/20min	197	114	21.1	94.9	0-40/20min
198	115	19.2	96.6	0-40/20min	199	116	13.2	90.3	0-40/20min
200	117	19.4	93.4	0-40/20min	199	116	13.2	90.3	0-40/20min
200	117	19.4	93.4	0-40/20min	201	118	17.3	100	0-40/20min
202	119	15.3	93.7	0-40/20min	201	118	17.3	100	0-40/20min
202	119	15.3	93.7	0-40/20min	203	120	19.5	100	0-40/20min
204	121	17.2	84.7	0-40/20min	203	120	19.5	100	0-40/20min
204	121	17.2	84.7	0-40/20min	205	122	13.3	96.0	0-40/20min
206	123	12.7	100	0-40/20min	205	122	13.3	96.0	0-40/20min
206	123	12.7	100	0-40/20min	207	124	15.6	92.0	0-40/20min
208	125	15.2	100	0-40/20min	207	124	15.6	92.0	0-40/20min
208	125	15.2	100	0-40/20min	209	126	18.0	99.0	0-40/20min
210	127	16.2	99.0	0-40/20min	209	126	18.0	99.0	0-40/20min
210	127	16.2	99.0	0-40/20min	211	128	15.3	98.7	0-40/20min
212	129	14.4	100	0-40/20min	211	128	15.3	98.7	0-40/20min
212	129	14.4	100	0-40/20min	213	130	15.5	100	0-40/20min
214	131	16.0	98.4	0-40/20min	213	130	15.5	100	0-40/20min
214	131	16.0	98.4	0-40/20min	215	132	18.2	100	0-40/20min
216	133	18.6	38.0	0-40/20min	215	132	18.2	100	0-40/20min
216	133	18.6	38.0	0-40/20min	217	134	17.9	95.4	0-40/20min
218	135	19.6	85.1	0-40/20min	217	134	17.9	95.4	0-40/20min
218	135	19.6	85.1	0-40/20min	219	136	18.7	94.6	0-40/20min
220	137	13.5	70.4	0-40/20min	219	136	18.7	94.6	0-40/20min
220	137	13.5	70.4	0-40/20min	221	138	14.1	99.7	0-40/20min
222	139	14.7	64.8	0-40/20min	221	138	14.1	99.7	0-40/20min
222	139	14.7	64.8	0-40/20min	223	140	15.1	100	0-40/20min
224	141	16.4	65.4	0-40/20min	223	140	15.1	100	0-40/20min
224	141	16.4	65.4	0-40/20min	225	142	15.5	97.9	0-40/20min
226	143	23.0	95.0	0-40/20min	225	142	15.5	97.9	0-40/20min
226	143	23.0	95.0	0-40/20min	227	144	15.7	100	0-40/20min
228	145	18.2	96.9	0-40/20min	227	144	15.7	100	0-40/20min
228	145	18.2	96.9	0-40/20min	229	146	21.9	93.2	0-40/20min
230	147	18.1	99.7	0-40/20min	229	146	21.9	93.2	0-40/20min

实施例231

体外血浆蛋白结合

部分A-样品制备

小鼠、兔和人血浆通过商业供应商(Biological Specialty Corporation，Colmar，Pennsylvania)购得。购自相同供应商的超过滤/去蛋白人血浆，用来作为用于消减背景的无蛋白对照基质。放射标记的化合物(Tc-99m或C-14)加入至血浆中以分别获得0.6-2.0uCi/mL或0.01-0.2uCi/mL的最终浓度。将样品涡旋并在37℃在震荡器平台上孵育30分钟。化合物还配制在去蛋白血浆中，并用来测定非特异性结合。

部分B-样品分析

血浆或去蛋白血浆(0.025mL)等分(n＝3)转移到分别的小管中用于过滤前计数，使用Tri-carb2500TR液闪计数器(Perkin Elmer，Gaithersburg，MD)或Wallac Wizardγ计数器(Perkin Elmer，Boston，MA)。将0.3mL等分的血浆或去蛋白血浆转移到Centrifree微分配筒中，MW阈值30,000道尔顿(n＝3)，并在2500x g在室温离心20分钟。离心后，将0.025mL等分(n＝4)的滤液转移到小管中，并计数放射活性。

部分C-数据分析

使用下述等式计算结合血浆蛋白的化合物的百分比：

其中：

化合物总量＝在超过滤之前在0.025mL样品中的放射活性(dpm)。

未结合的化合物＝0.025mL滤液中的放射活性(dpm)

计算结合至超过滤/去蛋白人血浆的化合物，并作为背景从在血浆中孵育的所有样品减去。数据显示在表8中。

实施例232

体外血液稳定性

将放射标记的测试化合物(Tc-99m，C-14)在新鲜的肝素化的小鼠血液(0.2-5.0uCi/mL)中在37℃摇动孵育15分钟。将血液(0.3mL)直接转移到1mL的乙腈中，后者抑制酯酶活性以及化合物的代谢。将受试化合物还在盐水中孵育15分钟以评价非基质稳定性。将样品涡旋30秒然后在2500x g离心20分钟。将上清液转移到新鲜的管中，其中并在加热块中并在37℃在氮气气流下将乙腈蒸发至干。将样品用0.1％甲酸再重建至0.3mL。利用带有放射性检测的反相HPLC分析等分(0.05mL)以评价化合物稳定性。数据显示在表8中。

实施例233

体内血液稳定性

静脉给药0.1-7.0mCi/kg放射标记的测试化合物(Tc-99m，C-14)15分钟后从小鼠收集血液样品(0.3mL)，并立即加入到0.9mL的乙腈中。将样品涡旋30秒并在2500xg离心20分钟。将上清液转移到新鲜的管中，其中并在加热块中并在37℃在氮气气流下将乙腈蒸发至干。将样品用0.1％甲酸再重建至0.3mL。利用带有放射性检测的反相HPLC分析等分(0.05mL)以评价化合物稳定性。数据显示在表8中。

表8.实施例18、27-30、32-40和148-230的MMP-2和MMP-9活性、蛋白结合以及稳定性

					稳定性，小鼠，15Min
					稳定性，小鼠，15Min		实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
18	Ac-Csa-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	19,465	41,623				实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
18	Ac-Csa-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	19,465	41,623				27	Hynic-Ahx-PLG～Hphe-OLEE-OH	83,900	1,670	26/-/28
28	Hynic-ff-Ahx-PLG～Hphe-OLEE-OH	81,562	6,675				27	Hynic-Ahx-PLG～Hphe-OLEE-OH	83,900	1,670	26/-/28
28	Hynic-ff-Ahx-PLG～Hphe-OLEE-OH	81,562	6,675				29	Hynic-fff-Ahx-PLG～Hphe-OLEE-OH	11,631	1,742
30	Ac-PLG～Hphe-OLEE-Ahx-Hynic	8,025	1,986				29	Hynic-fff-Ahx-PLG～Hphe-OLEE-OH	11,631	1,742
30	Ac-PLG～Hphe-OLEE-Ahx-Hynic	8,025	1,986				32	Ac-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	63,172	189,715	72/80/70	100	9
33	Ac-POG～Hphe-L-Ambh-Hynic	77,740	22,049	44/50/40			32	Ac-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	63,172	189,715	72/80/70	100	9
33	Ac-POG～Hphe-L-Ambh-Hynic	77,740	22,049	44/50/40			34	Ac-NGlu-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	326,930	＞100,000	76/76/76/30	40	72
35	Ac-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Hynic	＞100,000	＞100,000	66/83/42			34	Ac-NGlu-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	326,930	＞100,000	76/76/76/30	40	72
35	Ac-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Hynic	＞100,000	＞100,000	66/83/42			36	Ac-POG～Hphe-L-Hynic	63,685	4,453	36/62/27
37	Ac-NGlu-POG～Hphe-L-Hynic	265	613	27/38/18			36	Ac-POG～Hphe-L-Hynic	63,685	4,453	36/62/27
37	Ac-NGlu-POG～Hphe-L-Hynic	265	613	27/38/18			38	Ac-PLG～Hphe-YL-Hynic	63,199	＞100,000
39	Ac-PLG～Hphe-OL-Ambh-Hynic	42,684	57,730	47/75/86	92	91	38	Ac-PLG～Hphe-YL-Hynic	63,199	＞100,000
39	Ac-PLG～Hphe-OL-Ambh-Hynic	42,684	57,730	47/75/86	92	91	40	Ac-Ahxh-Hynic	na	na	86/20/40
148	NLys-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	121,054	264,154	57/67/45	14	12	40	Ac-Ahxh-Hynic	na	na	86/20/40
148	NLys-PLG～Hphe-YL-Ambh-Hynic	121,054	264,154	57/67/45	14	12	149	Ac-P-Cit-G～Hphe-L-Ahxh-Hynic	161,025	33,268	32/55/45	36	9
150	Ac-PHG～Hphe-L-Ahxh-Hynic	22,093	4,433	51/67/59			149	Ac-P-Cit-G～Hphe-L-Ahxh-Hynic	161,025	33,268	32/55/45	36	9
150	Ac-PHG～Hphe-L-Ahxh-Hynic	22,093	4,433	51/67/59			151	NLys-NLys-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Hynic	26,284	33,774	41/48/49/54
152	Ac-PRQ～ITA-Ahxh-Hynic	2,395	3,524	13/21/11/42	13		151	NLys-NLys-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Hynic	26,284	33,774	41/48/49/54
152	Ac-PRQ～ITA-Ahxh-Hynic	2,395	3,524	13/21/11/42	13		153	Ac-PRQ～IT-Ahxh-Hynic	898	1,705	15/21/10/-24
154	Ac-PRR～LTA-Ahxh-Hynic	10,115	33,479	16/21/12/-075	0		153	Ac-PRQ～IT-Ahxh-Hynic	898	1,705	15/21/10/-24
154	Ac-PRR～LTA-Ahxh-Hynic	10,115	33,479	16/21/12/-075	0		155	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	827,227	583,549	30/43/25/98	100	0
156	Ac-PLG～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	156,802	170,616	44/67/62/22	30	10	155	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	827,227	583,549	30/43/25/98	100	0
156	Ac-PLG～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	156,802	170,616	44/67/62/22	30	10	157	Ac-PLG～Hphe-OLR-Ahxh-Hynic	46,574	22,065	18/56/53/46	85	18
158	Ac-POG～Hphe-LQ-Ahxh-Hynic	＞250,000	84,763	24/36/36/76	100	0	157	Ac-PLG～Hphe-OLR-Ahxh-Hynic	46,574	22,065	18/56/53/46	85	18
158	Ac-POG～Hphe-LQ-Ahxh-Hynic	＞250,000	84,763	24/36/36/76	100	0	159	Ac-PLG～Hphe-YLA-Ahxh-Hynic	221,288	201,323	46/59/43/32	0	8

表8，续

					稳定性，小鼠，15Min
					稳定性，小鼠，15Min		实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
160	Ac-PLG～LL-Ahxh-Hynic	＞250,000	217,677	33/50/24/16	94	11	实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
160	Ac-PLG～LL-Ahxh-Hynic	＞250,000	217,677	33/50/24/16	94	11	161	Ac-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	64,013	57,711	26/50/40/15	5	44
162	Ac-PLG～LYL-Ahxh-Hynic	65,285	94,978	32/58/44/18	85	7	161	Ac-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	64,013	57,711	26/50/40/15	5	44
162	Ac-PLG～LYL-Ahxh-Hynic	65,285	94,978	32/58/44/18	85	7	163	Ac-P-Cit-G～Hphe-LT-Ahxh-Hynic			26/40/22/40	16	0
164	Ac-PLG～Hphe-RL-Ahxh-Hynic	241,959	168,186	47/64/46/17	＞20	17	163	Ac-P-Cit-G～Hphe-LT-Ahxh-Hynic			26/40/22/40	16	0
164	Ac-PLG～Hphe-RL-Ahxh-Hynic	241,959	168,186	47/64/46/17	＞20	17	165	Ac-PLG～Hphe-OLA-Ahxh-Hynic	29,512	14,104	32/50/34/34	71	0
166	Ac-P-Cit-G-Hphe-LA-Hynic	＞250,000	＞250,000	37/53/28/31	0	0	165	Ac-PLG～Hphe-OLA-Ahxh-Hynic	29,512	14,104	32/50/34/34	71	0
166	Ac-P-Cit-G-Hphe-LA-Hynic	＞250,000	＞250,000	37/53/28/31	0	0	167	Ac-P-Cha-G～Smc-HA-Ahxh-Hynic	145,749	＞250,000	29/46/39/79	0	0
168	Ac-PLG～LLA-Ahxh-Hynic	387,194	225,526	38/40/41/24	77	0	167	Ac-P-Cha-G～Smc-HA-Ahxh-Hynic	145,749	＞250,000	29/46/39/79	0	0
168	Ac-PLG～LLA-Ahxh-Hynic	387,194	225,526	38/40/41/24	77	0	169	Ac-POG～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	401,093	51,950	47/57/45/26	67	0
170	Ac-PLG～Hphe-YLR-Ahxh-Hynic	363,880	242,786	37/72/18/44	84	30	169	Ac-POG～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	401,093	51,950	47/57/45/26	67	0
170	Ac-PLG～Hphe-YLR-Ahxh-Hynic	363,880	242,786	37/72/18/44	84	30	171	Ac-PLG～LR-Ahxh-Hynic	161,793	142,848	15/38/34/15	90	0
172	Ac-PLG～LHL-Ahxh-Hynic	73,721	156,170	29/41/28/24	93	0	171	Ac-PLG～LR-Ahxh-Hynic	161,793	142,848	15/38/34/15	90	0
172	Ac-PLG～LHL-Ahxh-Hynic	73,721	156,170	29/41/28/24	93	0	173	Ac-POG～Hphe-Smc-T-Ahxh-Hynic	＞500,000	85,367	32/37/25/15	0	0
174	Ac-PRG～LLT-Ahxh-Hynic	98,638	73,345	26/32/27/87	0	0	173	Ac-POG～Hphe-Smc-T-Ahxh-Hynic	＞500,000	85,367	32/37/25/15	0	0
174	Ac-PRG～LLT-Ahxh-Hynic	98,638	73,345	26/32/27/87	0	0	175	Ac-PRG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	34/34/20/22	0	0
176	Ac-PLG～LRA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	20/30/90//10	0	0	175	Ac-PRG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	34/34/20/22	0	0
176	Ac-PLG～LRA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	20/30/90//10	0	0	177	Ac-P-Cit-G～Hphe-LQ-Hynic	171,020	79,552	32/39/31/11	39	0
178	Ac-POG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	29/31/28/12	0	0	177	Ac-P-Cit-G～Hphe-LQ-Hynic	171,020	79,552	32/39/31/11	39	0
178	Ac-POG～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	29/31/28/12	0	0	179	Ac-PLG～LRL-Ahxh-Hynic	181,818	167,012	23/38/23/18	64	10
180	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	185,624	223,422	30/68/46/2.9	40	63	179	Ac-PLG～LRL-Ahxh-Hynic	181,818	167,012	23/38/23/18	64	10
180	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	185,624	223,422	30/68/46/2.9	40	63	181	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	46/73/65/-4.4	67	15
182	Ac-PLG～LOL-Ahxh-Hynic	91,360	39,373	23/29/23/15	100	0	181	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Hynic	＞500,000	＞500,000	46/73/65/-4.4	67	15
182	Ac-PLG～LOL-Ahxh-Hynic	91,360	39,373	23/29/23/15	100	0	183	Ac-POG～Hphe-LTR-Ahxh-Hynic	＞500,000	105,427	17/33/10/16	74	0
184	Ac-POG～LLA-Ahxh-Hynic	＞500,000	186,640	38/14/41/05	0	0	183	Ac-POG～Hphe-LTR-Ahxh-Hynic	＞500,000	105,427	17/33/10/16	74	0
184	Ac-POG～LLA-Ahxh-Hynic	＞500,000	186,640	38/14/41/05	0	0	185	Ac-PLG～LL-Ambh-Hynic	33,550	36,301	46/73/65/-44	97	47

表8，续

					稳定性，小鼠，15Min
					稳定性，小鼠，15Min		实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
186	Ac-P-DArg-R～LTA-Ahxh-Hynic	6,882	0	2.7/na/na/1.4	0	0	实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
186	Ac-P-DArg-R～LTA-Ahxh-Hynic	6,882	0	2.7/na/na/1.4	0	0	187	Ac-P-NLys-R～LTA-Ahxh-Hynic	0	0	23/29/23/15	0	0
188	Ac-PLG～Hphe-RLA-Ambh-Hynic	197	4,553	17/33/1.0/16	0	0	187	Ac-P-NLys-R～LTA-Ahxh-Hynic	0	0	23/29/23/15	0	0
188	Ac-PLG～Hphe-RLA-Ambh-Hynic	197	4,553	17/33/1.0/16	0	0	189	Ac-P-Cit-G～Aib-LA-Ahxh-Hynic	0	772	14/24/12/2.2	6	41
190	H-DArg-P-Cit-G～cLeu-LA-Ahxh-Hynic	77	0	18/24/20/-4.2	0	0	189	Ac-P-Cit-G～Aib-LA-Ahxh-Hynic	0	772	14/24/12/2.2	6	41
190	H-DArg-P-Cit-G～cLeu-LA-Ahxh-Hynic	77	0	18/24/20/-4.2	0	0	191	Ac-P-Cit-G～Chg-LA-Ahxh-Hynic	14,415	20,717	24/38/35/6.7	8	2
192	Ac-NLys-PLG～LL-Ahxh-Hynic	76,287	83,184	24/36/27/0.8	78	0	191	Ac-P-Cit-G～Chg-LA-Ahxh-Hynic	14,415	20,717	24/38/35/6.7	8	2
192	Ac-NLys-PLG～LL-Ahxh-Hynic	76,287	83,184	24/36/27/0.8	78	0	193	Ac-NLys-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	461,387	372,802	25/30/9.0/23	0	0
194	Ac-PLG～LYA-Ahxh-Hynic	404,019	511,527	36/61/32/5.9	20	1	193	Ac-NLys-PLG～Hphe-RLA-Ahxh-Hynic	461,387	372,802	25/30/9.0/23	0	0
194	Ac-PLG～LYA-Ahxh-Hynic	404,019	511,527	36/61/32/5.9	20	1	195	Ac-PLG～Hphe-RLT-Ahxh-Hynic	118,836	103,248	38/67/26/36	34	0
196	Ac-PLG～LAL-Ahxh-Hynic	4,381	7,138	23/42/22/7.9	80	6	195	Ac-PLG～Hphe-RLT-Ahxh-Hynic	118,836	103,248	38/67/26/36	34	0
196	Ac-PLG～LAL-Ahxh-Hynic	4,381	7,138	23/42/22/7.9	80	6	197	Ac-VRW～LLA-Ahxh-Hynic	43,043	72,248	67/62/55/27	0	0
198	Ac-VRW～LTA-Ahxh-Hynic	14,449	29,875	47/44/25/26	0	0	197	Ac-VRW～LLA-Ahxh-Hynic	43,043	72,248	67/62/55/27	0	0
198	Ac-VRW～LTA-Ahxh-Hynic	14,449	29,875	47/44/25/26	0	0	199	Ac-LRY～Cha-TA-Ahxh-Hynic	0	811	49/61/48/24	0	0
200	Ac-P-Cit-Cit～LTA-Ahxh-Hynic	27,321	29,292	13/23/12/35	0	0	199	Ac-LRY～Cha-TA-Ahxh-Hynic	0	811	49/61/48/24	0	0
200	Ac-P-Cit-Cit～LTA-Ahxh-Hynic	27,321	29,292	13/23/12/35	0	0	201	Ac-Tic-Cit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	3,097	1,880	45/39/32/12	0	15
202	Ac-PRR～Cha-TA-Ambh-Hynic	0	1,578	37/50/22/6.9	0	0	201	Ac-Tic-Cit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	3,097	1,880	45/39/32/12	0	15
202	Ac-PRR～Cha-TA-Ambh-Hynic	0	1,578	37/50/22/6.9	0	0	203	Piv-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	569,232	281,385	56/94/50/-3.5	23	2
204	Suc-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	141,057	80,965	39/63/60/5.7	78	2	203	Piv-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	569,232	281,385	56/94/50/-3.5	23	2
204	Suc-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	141,057	80,965	39/63/60/5.7	78	2	205	Ac-P-Cit-G～Tle-LA-Ahxh-Hynic	164	0	18/25/14/-8.1	8	19
206	Ac-PR-Cit～LSA-Ahxh-Hynic	14,735	40,146	17/25/10/2.9	0	0	205	Ac-P-Cit-G～Tle-LA-Ahxh-Hynic	164	0	18/25/14/-8.1	8	19
206	Ac-PR-Cit～LSA-Ahxh-Hynic	14,735	40,146	17/25/10/2.9	0	0	207	H-γ-DGlu-PLG-LYT-Ahxh-Hynic	152,578	59,385	23/34/12/48	56	0
208	Ac-Inp-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	4,582	1,651	35/47/28/7.3	26	0	207	H-γ-DGlu-PLG-LYT-Ahxh-Hynic	152,578	59,385	23/34/12/48	56	0
208	Ac-Inp-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	4,582	1,651	35/47/28/7.3	26	0	209	Ac-P-Cit-Aib～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	275	0	33/36/22/-7.7	22	18
210	H-NLys-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	85,142	148,727	27/33/18/6.5	0	0	209	Ac-P-Cit-Aib～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	275	0	33/36/22/-7.7	22	18
210	H-NLys-PLG～LYT-Ahxh-Hynic	85,142	148,727	27/33/18/6.5	0	0	211	Ac-P-Cit-G～Nle-LA-Ahxh-Hynic	173,759	115,756	17/24/13/60	26	0

表8，续

					稳定性，小鼠，15Min
					稳定性，小鼠，15Min		实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
212	Ac-P-Cit-Hse～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	91,443	38,282	16/24/11/2.1	8	12	实施例#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
212	Ac-P-Cit-Hse～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	91,443	38,282	16/24/11/2.1	8	12	213	Ac-P-Hcit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	293,419	395,665	19/26/17/7.8	8	1
214	Ac-Hpro-Cit-G～Hphe-TA-Ahxh-Hynic	99,649	159,688	23/32/21/5.5	0	7	213	Ac-P-Hcit-G～Hphe-SA-Ahxh-Hynic	293,419	395,665	19/26/17/7.8	8	1
214	Ac-Hpro-Cit-G～Hphe-TA-Ahxh-Hynic	99,649	159,688	23/32/21/5.5	0	7	215	Ac-P-O(Me)2-G～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	566,772	26,991	35/50/41/8.4	61	0
216	Ac-P-DLeu-G～LL-Ahxh-Hynic	5,013	438	23/47/41/9.2	100	17	215	Ac-P-O(Me)2-G～Hphe-L-Nle-Ahxh-Hynic	566,772	26,991	35/50/41/8.4	61	0
216	Ac-P-DLeu-G～LL-Ahxh-Hynic	5,013	438	23/47/41/9.2	100	17	217	Ac-P-Cit-G～Igl-LA-Ahxh-Hynic	189	0	34/38/25/7.1	10	3
218	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Hynic	78,925	93,353	41/79/39/11	84	75	217	Ac-P-Cit-G～Igl-LA-Ahxh-Hynic	189	0	34/38/25/7.1	10	3
218	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Hynic	78,925	93,353	41/79/39/11	84	75	219	Ac-PLG～Hphe-K(Me)2-L-Ahxh-Hynic	72,015	55,017	38/82/46/20	92	83
220	Ac-P-NMeArg-R～LTA-Ambh-Hynic	879	792	19/24/14/4.2	0	0	219	Ac-PLG～Hphe-K(Me)2-L-Ahxh-Hynic	72,015	55,017	38/82/46/20	92	83
220	Ac-P-NMeArg-R～LTA-Ambh-Hynic	879	792	19/24/14/4.2	0	0	221	Ac-P-Cit-G～Abu-LA-Ahxh-Hynic	17,556	20,578	12/21/13/3.6	0	0
222	Ac-PRG～Hphe-Dab-A-Ahxh-Hynic	590,880	474,310	30/35/26/-0.9	0	6	221	Ac-P-Cit-G～Abu-LA-Ahxh-Hynic	17,556	20,578	12/21/13/3.6	0	0
222	Ac-PRG～Hphe-Dab-A-Ahxh-Hynic	590,880	474,310	30/35/26/-0.9	0	6	223	Ac-DAla-PRG～Ile-LA-Ahxh-Hynic	130,378	61,740	15/26/15/-9.3	0	0
224	Ac-DArg-P-Aib-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	18,584	0	35/38/26/1.5	0	4	223	Ac-DAla-PRG～Ile-LA-Ahxh-Hynic	130,378	61,740	15/26/15/-9.3	0	0
224	Ac-DArg-P-Aib-G～Hphe-LA-Ahxh-Hynic	18,584	0	35/38/26/1.5	0	4	225	Ac-P-Cit-Abu～LTA-Ahxh-Hynic	55,354	77,834	19/27/19/-4.7	9	2
226	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	42,648	11,437	30/40/40/2.7	89	33	225	Ac-P-Cit-Abu～LTA-Ahxh-Hynic	55,354	77,834	19/27/19/-4.7	9	2
226	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-Hynic	42,648	11,437	30/40/40/2.7	89	33	227	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Hynic	179,973	187,202	75/84/87/-43	100	51
228	Ac-PL-DAla～LL-Ahxh-Hynic	0	0	23/55/36/10	100	94	227	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Hynic	179,973	187,202	75/84/87/-43	100	51
228	Ac-PL-DAla～LL-Ahxh-Hynic	0	0	23/55/36/10	100	94	229	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-Hynic	119,777	147,465	55/76/66/23	100	45
230	Ac-P-Cit-G～S(OBn)-LA-Ahxh-Hynic	＞250,000	＞250,000	29/38/44/5.8	53	38	229	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-Hynic	119,777	147,465	55/76/66/23	100	45

1)H/R/M/S＝人/大鼠/小鼠/盐水对照

实施例234-269

MMP底物-酰肼胺的合成

实施例61和62的步骤用于制备实施例234-269的MMP底物-酰肼游离胺偶联物。产率和纯度数据显示在表9中，并且质谱数据显示在表10中。

表9.实施例234-269的产率以及纯度数据

实施例#	序列	产率，％	纯度，％(HPLC)
实施例#	序列	产率，％	纯度，％(HPLC)	234	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-H	44	90
235	Ac-PLG～LL-Ahxh-H	20	100	234	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-H	44	90
235	Ac-PLG～LL-Ahxh-H	20	100	236	Ac-PLG～LY(t-Bu)T-Ahxh-H	42	95
237	Ac-PLG～LW(Boc)A-Ahxh-H	35	90	236	Ac-PLG～LY(t-Bu)T-Ahxh-H	42	95
237	Ac-PLG～LW(Boc)A-Ahxh-H	35	90	238	Ac-PO(Boc)G～Hphe-LTR-Ahxh-H	55	95
239	Ac-PLG～Hphe-K(Boc)L-Ahxh-H	71	100	238	Ac-PO(Boc)G～Hphe-LTR-Ahxh-H	55	95
239	Ac-PLG～Hphe-K(Boc)L-Ahxh-H	71	100	240	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-H	31	100
241	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-H	85	100	240	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-H	31	100
241	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-H	85	100	242	Ac-P-Cit-G～S(OBn)～LA-Ahxh-H	59	100
243	Ac-NGlu(t-Bu)-PLG～Hphe-YL-Ahxh-H	53	100	242	Ac-P-Cit-G～S(OBn)～LA-Ahxh-H	59	100
243	Ac-NGlu(t-Bu)-PLG～Hphe-YL-Ahxh-H	53	100	244	Ac-PLG～Cit-LA-Ahxh-H	28	95
245	Ac-P-NLeu-G～LL-Ahxh-H	19	98	244	Ac-PLG～Cit-LA-Ahxh-H	28	95
245	Ac-P-NLeu-G～LL-Ahxh-H	19	98	246	Ac-PL-NLys(Boc)～LL-Ahxh-H	39	100
247	Ac-P-Cit-G～Hphe-O(Boc)L-Ahxh-H	14	90	246	Ac-PL-NLys(Boc)～LL-Ahxh-H	39	100
247	Ac-P-Cit-G～Hphe-O(Boc)L-Ahxh-H	14	90	248	Ac-PLG～LY(t-Bu)Q(Trt)-Ahxh-H	57	100
249	Ac-Oic-LG～LL-Ahxh-H	43	90	248	Ac-PLG～LY(t-Bu)Q(Trt)-Ahxh-H	57	100
249	Ac-Oic-LG～LL-Ahxh-H	43	90	250	Ac-PLG～Ahp-Y(t-Bu)L-Ahxh-H	63	100
251	Ac-PL-Sar～LL-Ahxh-H	87	100	250	Ac-PLG～Ahp-Y(t-Bu)L-Ahxh-H	63	100
251	Ac-PL-Sar～LL-Ahxh-H	87	100	252	Ac-PLG～Pabu-Cit-L-Ahxh-H	20	100
253	Ac-P-Cha-G～LL-Ahxh-H	48	100	252	Ac-PLG～Pabu-Cit-L-Ahxh-H	20	100
253	Ac-P-Cha-G～LL-Ahxh-H	48	100	254	Ac-P-Cha-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-H	70	100
255	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cha-A-Ahxh-H	15	100	254	Ac-P-Cha-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-H	70	100
255	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cha-A-Ahxh-H	15	100	256	Ac-PL-NLys(boc)～LL-NHNH-H	49	100
257	Ac-PLG～Hphe-R(Pmc)-Ahxh-H	53	100	256	Ac-PL-NLys(boc)～LL-NHNH-H	49	100
257	Ac-PLG～Hphe-R(Pmc)-Ahxh-H	53	100	258	Ac-PLG～Ahp-O(Boc)L-Ahxh-H	48	100
259	Ac-PLG～LY(t-Bu)-Ahxh-H	96	100	258	Ac-PLG～Ahp-O(Boc)L-Ahxh-H	48	100
259	Ac-PLG～LY(t-Bu)-Ahxh-H	96	100	260	Ac-PLG～Hphe-O(Boc)L-Ahxh-H	14	100
261	Ac-PLG～L-Pya-L-Ahxh-H	58	100	260	Ac-PLG～Hphe-O(Boc)L-Ahxh-H	14	100
261	Ac-PLG～L-Pya-L-Ahxh-H	58	100	262	Ac-PLG～LYS(t-Bu)-Ahxh-H	45	100
263	Ac-PLG～LY(t-Bu)V-Ahxh-H	65	100	262	Ac-PLG～LYS(t-Bu)-Ahxh-H	45	100
263	Ac-PLG～LY(t-Bu)V-Ahxh-H	65	100	264	Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-L-Ahxh-H	23	100
265	Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-R(Pmc)L-Ahxh-H	36	100	264	Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-L-Ahxh-H	23	100
265	Ac-PL-NLys(Boc)～Hphe-R(Pmc)L-Ahxh-H	36	100	266	Ac-PL-NLys(Boc)-LL-dLeu-Ahxh-H	66	97
267	Ac-PL-NLys(Boc)～S(OBn)-LL-Ahxh-H	20	95	266	Ac-PL-NLys(Boc)-LL-dLeu-Ahxh-H	66	97
267	Ac-PL-NLys(Boc)～S(OBn)-LL-Ahxh-H	20	95	268	Ac-PL-NLys(Boc)～LL-Ambh-H	5	100
269	Ac-PL-NLys(Boc)～Ahp-Y(t-Bu)L-Ahxh-H	30	95	268	Ac-PL-NLys(Boc)～LL-Ambh-H	5	100

表10.实施例234-269的质谱数据

	低分辨MS		高分辨MS
	低分辨MS		高分辨MS		实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	测量值
234	844.5/M+H/60％	422.9/M+2H/100％			实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	测量值
234	844.5/M+H/60％	422.9/M+2H/100％			235	681.5/M+H/100％
236	944.5/M+H/100％	416.9/40％			235	681.5/M+H/100％
236	944.5/M+H/100％	416.9/40％			237	925.5/M+H/100％	435.4/30％
238	1409.7/M+H/30％	705.5/M+2H/100％			237	925.5/M+H/100％	435.4/30％
238	1409.7/M+H/30％	705.5/M+2H/100％			239	957.6/M+H/100％	429.5/M+2H/90％
240	858.6/M+H/100％	429.9/M+2H/10％			239	957.6/M+H/100％	429.5/M+2H/90％
240	858.6/M+H/100％	429.9/M+2H/10％			241	721.5/M+H/100％
242	860.4/M+H/100％	430.8/M+2H/35％	C40H65N11O10[M+H]：860.4989	860.4988	241	721.5/M+H/100％
242	860.4/M+H/100％	430.8/M+2H/35％	C40H65N11O10[M+H]：860.4989	860.4988	243	844.4/M+H/100％
244	796.5/M+H/100％				243	844.4/M+H/100％
244	796.5/M+H/100％				245	681.5/M+H/100％
246	852.6/M+H/100％				245	681.5/M+H/100％
246	852.6/M+H/100％				247	987.6/M+H/30％	444.5/M+2H/100％
248	1157.7/M+H/100％	915.6/M-trt+H/25％	C64H88N10O10[M+Na]：1179.658	1179.658	247	987.6/M+H/30％	444.5/M+2H/100％
248	1157.7/M+H/100％	915.6/M-trt+H/25％	C64H88N10O10[M+Na]：1179.658	1179.658	249	735.6/M+H/100％	368.4/M+2H/15％
250	912.6/M+H/100％	428.9/M+2H/25％	C47H77N9O9[M+H]：912.5917	912.5913	249	735.6/M+H/100％	368.4/M+2H/15％
250	912.6/M+H/100％	428.9/M+2H/25％	C47H77N9O9[M+H]：912.5917	912.5913	251	695.5/M+H/100％	348.4/M+2H/5％	C34H62N8O7[M+H]：695.4814	695.4821
252	887.5/M+/15％	444.3/M+2H/100％			251	695.5/M+H/100％	348.4/M+2H/5％	C34H62N8O7[M+H]：695.4814	695.4821
252	887.5/M+/15％	444.3/M+2H/100％			253	721.5/M+H/100％		C36H64N8O7[M+H]：721.4971	721.4963
254	926.5/M+H/100％	463.9/M2H/40％	C46H75N11O9[M+H]：926.5822	926.5858	253	721.5/M+H/100％		C36H64N8O7[M+H]：721.4971	721.4963
254	926.5/M+H/100％	463.9/M2H/40％	C46H75N11O9[M+H]：926.5822	926.5858	255	884.5/M+H/100％
256	739.5/M+H/100％				255	884.5/M+H/100％
256	739.5/M+H/100％				257	1038.6/M+H/100％	519.9/M+2H/80％
258	907.7/M+H/100％	404.4/60％			257	1038.6/M+H/100％	519.9/M+2H/80％
258	907.7/M+H/100％	404.4/60％			259	787.5/M+H/100％	366.3/10％
260	943.5/M+H/100％	422.4/M+2H/15％	C47H78N10O10[M+H]：943.5975	943.5971	259	787.5/M+H/100％	366.3/10％
260	943.5/M+H/100％	422.4/M+2H/15％	C47H78N10O10[M+H]：943.5975	943.5971	261	829.7/M+H/25％	415.4/M+2H/100％	C41H68N10O8[M+2H]：415.2684	415.2684
262	930.6/M+H/100％		C47H79N9O10[M+H]：930.6023	930.6008	261	829.7/M+H/25％	415.4/M+2H/100％	C41H68N10O8[M+2H]：415.2684	415.2684
262	930.6/M+H/100％		C47H79N9O10[M+H]：930.6023	930.6008	263	886.7/M+H/100％		C45H75N9O9[M+H]：886.5761	886.575
264	900.5/M+H/100％	400.9/17％	C46H77N9O9[M+H]：900.5917	900.5913	263	886.7/M+H/100％		C45H75N9O9[M+H]：886.5761	886.575
264	900.5/M+H/100％	400.9/17％	C46H77N9O9[M+H]：900.5917	900.5913	265	1322.7/M+H/100％	662.0/M+2H/100％	C66H107N13O13S[M+H]：1322.7905	1322.788
266	965.5/M+H/100％	433.4/M+H/20％			265	1322.7/M+H/100％	662.0/M+2H/100％	C66H107N13O13S[M+H]：1322.7905	1322.788
266	965.5/M+H/100％	433.4/M+H/20％			267	1029.6/M+H/100％		C52H88N10O11[M+H]：1029.6707	1029.671
268	872.5/M+H/100％				267	1029.6/M+H/100％		C52H88N10O11[M+H]：1029.6707	1029.671
268	872.5/M+H/100％				269	1083.6/M+H/100％	492.5/65％

实施例270-305

[¹⁴C]乙酰基-MMP底物-酰肼偶联物的合成

部分A-[¹⁴C]乙酸钠溶液的制备

将250毫居里的[1-¹⁴C]乙酸，钠盐，固体(50-60mCi/mmole比活性)，从General Electric Health Care(以前称为Amersham Biosciences)得到。将[1-¹⁴C]乙酸，钠盐，固体溶解在25.0mL的无水乙腈中以制备¹⁴C乙酸钠储备溶液。将溶液涡旋混合10分钟。取出等分用于放射测定，使用液闪计数器(LSC)方法。LSC放射测定利用下述方法测定：将被测定的放射活性溶液等分分配到10mL玻璃闪烁管中，后者包含5mL的Perkin Elmer UltimaGold^TM闪烁液体，并随后测量放射活性计数，使用或者Packard model2500TR或1600TR LSC。随后将该储备溶液稀释10倍以配制用于反应的溶液。在各反应之前，对试剂溶液进行LSC放射测定。

部分B-[¹⁴C]乙酸钠与MMP底物-酰肼的偶联

MMP底物和烯酰胺的乙酰化按照下述方法进行偶联：将胺与含¹⁴C的乙酸钠在O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、N，N二异丙基乙基-胺(二异丙基乙胺)在二甲基甲酰胺(N，N-二甲基甲酰胺)中并在环境温度(25℃)下进行反应。将内容物在5mL内部锥形的Wheaton^TM厚壁反应管中进行，并反应1小时。

部分C-脱保护以及最终的纯化

侧链保护基使用下述方法之一去除：

方法A：50∶50三氟乙酸∶二氯甲烷在RT处理15分钟。

方法B：95∶2.5∶2.5三氟乙酸∶苯甲醚∶水在RT处理45分钟。

方法C：2mol％Pd(OAc)₂，4mol％TPPTS，Et₂NH在2∶1乙腈∶水中的水溶液

将粗制的反应混合物使用接口质量光度计(LC/MS)的HPLC在ZorbaxEclipse XDB C-18(4.6mm×250mm)柱上进行分析。将溶液减压浓缩并将粗制的产物经HPLC纯化：在Phenomenex^TM LUNA C18(2)柱(10mm×250mm)上，使用4.2％/分钟的包含0.1％三氟乙酸的0～63％乙腈梯度，以5mL/分钟的流速洗脱。减压浓缩产物级分并经LC/MS分析：在Zorbax EclipseXDB C-18柱(4.6mm×250mm)上，使用4.2％/分钟的包含0.1％甲酸的0～63％乙腈梯度洗脱。放射活性检测器用来确证RCP。纯度数据显示在表11中。

表11.[¹⁴C]乙酰基-MMP底物-酰肼偶联物的分析以及产率数据

实施例#	胺前体#	脱保护方法	％RCP	保留时间(min)
实施例#	胺前体#	脱保护方法	％RCP	保留时间(min)	270	234	-	80	10.1
271	235	-	98	10.2	270	234	-	80	10.1
271	235	-	98	10.2	272	236	B	96	10.7
273	237	B	100	11.5	272	236	B	96	10.7
273	237	B	100	11.5	274	238	B	100	10.3
275	239	A	100	12.6	274	238	B	100	10.3
275	239	A	100	12.6	276	240	-	100	16.7
277	241	-	100	16.2	276	240	-	100	16.7
277	241	-	100	16.2	278	242	-	100	12.9
279	243	B	100	10.7	278	242	-	100	12.9
279	243	B	100	10.7	280	244	-	83	12.6
281	245	A	95	9.4	280	244	-	83	12.6
281	245	A	95	9.4	282	246	A	100	11.6
283	247	A	100	11.3	282	246	A	100	11.6
283	247	A	100	11.3	284	248	B	95	12.5
285	249	-	97	15.2	284	248	B	95	12.5
285	249	-	97	15.2	286	250	B	90	13.7
287	251	-	90	11.5	286	250	B	90	13.7
287	251	-	90	11.5	288	252	-	99	10.4
289	253	-	98	14.5	288	252	-	99	10.4
289	253	-	98	14.5	290	254	-	98	13.6
291	255	-	100	12.4	290	254	-	98	13.6
291	255	-	100	12.4	292	256	A	100	11.1
293	257	B	100	11.8	292	256	A	100	11.1
293	257	B	100	11.8	294	258	A	100	12.1
295	259	B	100	11.8	294	258	A	100	12.1
295	259	B	100	11.8	296	260	A	90	12.6
297	261	-	100	11.1	296	260	A	90	12.6
297	261	-	100	11.1	298	262	B	100	12.3
299	263	B	100	13.3	298	262	B	100	12.3
299	263	B	100	13.3	300	264	A	100	12.5
301	265	B	94	11.0	300	264	A	100	12.5
301	265	B	94	11.0	302	266	A	92	12.6
303	267	A	100	13.5	302	266	A	92	12.6
303	267	A	100	13.5	304	268	A	100	12.0
305	269	B	100	12.2	304	268	A	100	12.0

实施例270-305

MMP活性、蛋白结合、体外稳定性以及体内稳定性

使用在实施例45中描述的步骤，评价¹⁴C-标记的酰肼偶联物270-305作为MMP-2和MMP-9的底物活性。使用在实施例231中描述的步骤测定蛋白结合。分别根据实施例232和233的步骤测定体外和体内稳定性。数据汇总在表12中。

表12.实施例270-305的MMP-2和MMP-9活性、蛋白结合以及稳定性

					稳定性，小鼠，15Min
					稳定性，小鼠，15Min		Ex#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
270	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Ac[C14]	＞750,000	651,807	-12/-1.2/2.9/5	31	0	Ex#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
270	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Ac[C14]	＞750,000	651,807	-12/-1.2/2.9/5	31	0	271	Ac-PLG～LL-Ahxh-Ac[C14]	147,567	134,448	1.7/.4/1.7/3.5	94	0
272	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Ac[C14]	412,626	＞500,000	3.8/14/4.1/0.5	92	0	271	Ac-PLG～LL-Ahxh-Ac[C14]	147,567	134,448	1.7/.4/1.7/3.5	94	0
272	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Ac[C14]	412,626	＞500,000	3.8/14/4.1/0.5	92	0	273	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Ac[C14]	712,271	＞750,000	2.7/na/na/1.4	36	62
274	Ac-POG～Hphe-LTR-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	246,044	3.4/1.4/-0.4/3.4	23	7	273	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Ac[C14]	712,271	＞750,000	2.7/na/na/1.4	36	62
274	Ac-POG～Hphe-LTR-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	246,044	3.4/1.4/-0.4/3.4	23	7	275	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Ac[C14]	102,664	119813	-2.5/-1.5/-0.7/-0.1	100	100
276	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Ac[C14]	473,393	＞500,000	23/28/61/13	88	0	275	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Ac[C14]	102,664	119813	-2.5/-1.5/-0.7/-0.1	100	100
276	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Ac[C14]	473,393	＞500,000	23/28/61/13	88	0	277	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-Ac[C14]	359,036	475,032		78	0
278	Ac-P-Cit-G～S(OBn)-LA-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000		29	9	277	Ac-PLG～L-Cha-Ahxh-Ac[C14]	359,036	475,032		78	0
278	Ac-P-Cit-G～S(OBn)-LA-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000		29	9	279	Ac-NGlu-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Ac[C14]	351,477	213,148	18/25/30/9.5	84	0
280	Ac-PLG～Cit-LA-Ahxh-Ac[C14]	16,271	34,046	-1.3/-1.9/-1.1/0.1	93	15	279	Ac-NGlu-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Ac[C14]	351,477	213,148	18/25/30/9.5	84	0
280	Ac-PLG～Cit-LA-Ahxh-Ac[C14]	16,271	34,046	-1.3/-1.9/-1.1/0.1	93	15	281	Ac-P-NLeu-G～LL-Ahxh-Ac[C14]	0	0	-6.3/4.6/-0.4/2.6	100	27
282	Ac-PL-NLys～LL-Ahxh-Ac[C14]	180,012	194,529	-0.5/na/na/-0.3	99	35	281	Ac-P-NLeu-G～LL-Ahxh-Ac[C14]	0	0	-6.3/4.6/-0.4/2.6	100	27
282	Ac-PL-NLys～LL-Ahxh-Ac[C14]	180,012	194,529	-0.5/na/na/-0.3	99	35	283	Ac-P-Cit-G～Hphe-OL-Ahxh-Ac[C14]	42,516	28,556	5.4/7.7/9.8/2.5	96	72
284	Ac-PLG～LYQ-Ahxh-Ac[C14]	439,260	658,127	1.3/6.4/7.4/0.2	64	0	283	Ac-P-Cit-G～Hphe-OL-Ahxh-Ac[C14]	42,516	28,556	5.4/7.7/9.8/2.5	96	72
284	Ac-PLG～LYQ-Ahxh-Ac[C14]	439,260	658,127	1.3/6.4/7.4/0.2	64	0	285	Ac-Oic-LG～LL-Ahxh-Ac[C14]	0	0	8.5/29/-9.1/9.1	60	0
286	Ac-PLG～Ahp-YL-Ahxh-Ac[C14]	38,691	60,351	18/14/12/12	80	28	285	Ac-Oic-LG～LL-Ahxh-Ac[C14]	0	0	8.5/29/-9.1/9.1	60	0
286	Ac-PLG～Ahp-YL-Ahxh-Ac[C14]	38,691	60,351	18/14/12/12	80	28	287	Ac-PL-Sar～LL-Ahxh-Ac[C14]	110,543	142,613	0.7/4.5/3.8/3.6	89	4
288	Ac-PLG～Pabu-Cit-L-Ahxh-Ac[C14]	0	0	-1.4/1.9/-2.3/10.3	93	93	287	Ac-PL-Sar～LL-Ahxh-Ac[C14]	110,543	142,613	0.7/4.5/3.8/3.6	89	4
288	Ac-PLG～Pabu-Cit-L-Ahxh-Ac[C14]	0	0	-1.4/1.9/-2.3/10.3	93	93	289	Ac-P-Cha-G～LL-Ahxh-Ac[C14]	24,657	180,419	19/21/46/4.5	4	2
290	Ac-P-Cha-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-Ac[C14]	22,646	＞500,000	33/16/12/15	93	20	289	Ac-P-Cha-G～LL-Ahxh-Ac[C14]	24,657	180,419	19/21/46/4.5	4	2
290	Ac-P-Cha-G～Hphe-Cit-L-Ahxh-Ac[C14]	22,646	＞500,000	33/16/12/15	93	20	291	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cha-A-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000	19/34/41/3.8	96	8
292	Ac-PL-NLys～LL-NHNH-Ac[C14]	133,549	138,091	3.1/4.0/2.6/16	100	49	291	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cha-A-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000	19/34/41/3.8	96	8
292	Ac-PL-NLys～LL-NHNH-Ac[C14]	133,549	138,091	3.1/4.0/2.6/16	100	49	293	Ac-PLG～Hphe-R-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000	7.6/19/10/2.1	91	66
294	Ac-PLG～Ahp-OL-Ahxh-Ac[C14]	4,967	9,343	5.0/5.2/8.0/4.9	81	66	293	Ac-PLG～Hphe-R-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000	7.6/19/10/2.1	91	66
294	Ac-PLG～Ahp-OL-Ahxh-Ac[C14]	4,967	9,343	5.0/5.2/8.0/4.9	81	66	295	Ac-PLG～LY-Ahxh-Ac[C14]	282,901	336,278	8.0/9.1/7.4/-0.1	95	0

表12，续

					稳定性，小鼠，15Min
					稳定性，小鼠，15Min		Ex#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
296	Ac-PLG～Hphe-OL-Ahxh-Ac[C14]	53,814	77,493	1.1/13/8.4/7.1	81	73	Ex#	序列	MMP2Kcat/Km	MMP9Kcat/Km	蛋白结合，％(H/R/M/S)¹	体外	体内血液
296	Ac-PLG～Hphe-OL-Ahxh-Ac[C14]	53,814	77,493	1.1/13/8.4/7.1	81	73	297	Ac-PLG～L-Pya-L-Ahxh-Ac[C14]	92,966	161,687	-1.8/1.4/-5.9/2.6	52	0
298	Ac-PLG～LYS-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000	3.3/11/8.4/1.9	87	0	297	Ac-PLG～L-Pya-L-Ahxh-Ac[C14]	92,966	161,687	-1.8/1.4/-5.9/2.6	52	0
298	Ac-PLG～LYS-Ahxh-Ac[C14]	＞500,000	＞500,000	3.3/11/8.4/1.9	87	0	299	Ac-PLG～LYV-Ahxh-Ac[C14]	396,120	＞500,000	3.0/13/12/9.9
300	Ac-PL-NLys～Hphe-L-Ahxh-Ac[C14]	464,638	288,845	5.8/3.8/7.3/5.5	94	71	299	Ac-PLG～LYV-Ahxh-Ac[C14]	396,120	＞500,000	3.0/13/12/9.9
300	Ac-PL-NLys～Hphe-L-Ahxh-Ac[C14]	464,638	288,845	5.8/3.8/7.3/5.5	94	71	301	Ac-PL-NLys～Hphe-RL-Ahxh-Ac[C14]	102,471	114,096	3.0/-2.1/-2.6/4.4	72	7
302	Ac-PL-NLys-LL-dLeu-Ahxh-Ac[14C]	0	0	4.8/3.6/1.9/6.1	91	82	301	Ac-PL-NLys～Hphe-RL-Ahxh-Ac[C14]	102,471	114,096	3.0/-2.1/-2.6/4.4	72	7
302	Ac-PL-NLys-LL-dLeu-Ahxh-Ac[14C]	0	0	4.8/3.6/1.9/6.1	91	82	303	Ac-PL-NLys～S(OBn)-LL-Ahxh-Ac[C14]	165,283	271,181	2.4/0.9/-10/6.1	76	16
304	Ac-PL-NLys～LL-Ambh-Ac[C14]	68,635	88,016	7.6/6.9/16/5.7			303	Ac-PL-NLys～S(OBn)-LL-Ahxh-Ac[C14]	165,283	271,181	2.4/0.9/-10/6.1	76	16
304	Ac-PL-NLys～LL-Ambh-Ac[C14]	68,635	88,016	7.6/6.9/16/5.7			305	Ac-PL-NLys～Ahp-YL-Ahxh-Ac[C14]	0	0	-4.7/-1.4/-5.2/5.9	0	0

1)H/R/M/S＝人/大鼠/小鼠/盐水对照

实施例306-331

实施例234-269的¹²C替代品的合成和表征

实施例61和62的步骤用来制备从实施例234-269选择的化合物的¹²C替代品。产率和纯度数据显示在表13中，并且质谱数据显示在表14中。

表13.实施例306-331的产率和纯度数据

实施例#	序列	产率，％	纯度，％(HPLC)
实施例#	序列	产率，％	纯度，％(HPLC)	306	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Ac	81	98
307	Ac-PLG～LL-Ahxh-Ac	98	100	306	Ac-P-Cit-G～Hphe-LA-Ahxh-Ac	81	98
307	Ac-PLG～LL-Ahxh-Ac	98	100	308	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Ac	67	100
309	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Ac	40	100	308	Ac-PLG～LYT-Ahxh-Ac	67	100
309	Ac-PLG～LWA-Ahxh-Ac	40	100	310	Ac-POG～Hphe-LTR-Ahxh-Ac	99	100
311	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Ac	47	99	310	Ac-POG～Hphe-LTR-Ahxh-Ac	99	100
311	Ac-PLG～Hphe-KL-Ahxh-Ac	47	99	312	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Ac	74	100
313	Ac-NGlu-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Ac	100	100	312	Ac-PLG～S(OBn)-LL-Ahxh-Ac	74	100
313	Ac-NGlu-PLG～Hphe-YL-Ahxh-Ac	100	100	314	Ac-PLG～Cit-LA-Ahxh-Ac	86	100
315	Ac-P-NLeu-G～LL-Ahxh-Ac	91	100	314	Ac-PLG～Cit-LA-Ahxh-Ac	86	100
315	Ac-P-NLeu-G～LL-Ahxh-Ac	91	100	316	Ac-PL-NLys～LL-Ahxh-Ac	73	100
317	Ac-P-Cit-G～Hphe-OL-Ahxh-Ac	60	100	316	Ac-PL-NLys～LL-Ahxh-Ac	73	100
317	Ac-P-Cit-G～Hphe-OL-Ahxh-Ac	60	100	318	Ac-PLG～LYQ-Ahxh-Ac	95	100
319	Ac-Oic-LG～LL-Ahxh-Ac	78	100	318	Ac-PLG～LYQ-Ahxh-Ac	95	100
319	Ac-Oic-LG～LL-Ahxh-Ac	78	100	320	Ac-PLG～Ahp-YL-Ahxh-Ac	94	100
321	Ac-PL-Sar～LL-Ahxh-Ac	60	100	320	Ac-PLG～Ahp-YL-Ahxh-Ac	94	100
321	Ac-PL-Sar～LL-Ahxh-Ac	60	100	322	Ac-PLG～Pabu-Cit-L-Ahxh-Ac	30	100
323	Ac-P-Cha-G～LL-Ahxh-Ac	94	100	322	Ac-PLG～Pabu-Cit-L-Ahxh-Ac	30	100
323	Ac-P-Cha-G～LL-Ahxh-Ac	94	100	324	Ac-P-Cha-G～Hphe-Cit-Ahxh-Ac	93	100
325	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cha-A-Ahxh-Ac	95	100	324	Ac-P-Cha-G～Hphe-Cit-Ahxh-Ac	93	100
325	Ac-P-Cit-G～Hphe-Cha-A-Ahxh-Ac	95	100	326	Ac-PL-NLys～LL-NHNH-Ac	103	100
327	Ac-PLG～Hphe-R-Ahxh-Ac	59	100	326	Ac-PL-NLys～LL-NHNH-Ac	103	100
327	Ac-PLG～Hphe-R-Ahxh-Ac	59	100	328	Ac-PLG～LY-Ahxh-Ac	64	100
329	Ac-PLG～L-Pya-L-Ahxh-Ac	68	100	328	Ac-PLG～LY-Ahxh-Ac	64	100
329	Ac-PLG～L-Pya-L-Ahxh-Ac	68	100	330	Ac-PLG～LYS-Ahxh-Ac	50	100
331	Ac-PLG～LYV-Ahxh-Ac	43	100	330	Ac-PLG～LYS-Ahxh-Ac	50	100

表14.实施例306-331的质谱数据

	低分辨MS		高分辨MS
	低分辨MS		高分辨MS		实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	测量值
306	886.5/M+H/60％	443.9/M+2H/100％	C42H67N11O10[M+H]：886.5145	886.515	实施例#	离子1/归属/强度	离子2/归属/强度	计算值CxHxNxOxSx[M+H]：	测量值
306	886.5/M+H/60％	443.9/M+2H/100％	C42H67N11O10[M+H]：886.5145	886.515	307	723.5/M+H/100％	362.3/M+2H/30％	C35H62N8O8[M+H]：723.4763	723.4771
308	874.5/M+H/100％	437.8/M+2H/60％	C42H67N9O10[M+H]：874.5033	874.5048	307	723.5/M+H/100％	362.3/M+2H/30％	C35H62N8O8[M+H]：723.4763	723.4771
308	874.5/M+H/100％	437.8/M+2H/60％	C42H67N9O10[M+H]：874.5033	874.5048	309	867.5/M+H/100％	434.2/M+2H/40％	C43H66N10O9[M+H]：867.5087	867.5071
310	1029.6/M+H/20％	515.5/M+2H/100％	C48H80N14O11[M+2H]：515.3130	515.3143	309	867.5/M+H/100％	434.2/M+2H/40％	C43H66N10O9[M+H]：867.5087	867.5071
310	1029.6/M+H/20％	515.5/M+2H/100％	C48H80N14O11[M+2H]：515.3130	515.3143	311	899.5/M+H/100％	450.4/M+2H/98％
312	900.5/M+H/100％	450.9/M+2H/55％			311	899.5/M+H/100％	450.4/M+2H/98％
312	900.5/M+H/100％	450.9/M+2H/55％			313	1063.5/M+H/100％	532.3/M+2H/30％	C53H78N10O13[M+H]：1063.582	1063.583
314	838.5/M+H/100％	419.9/M+2H/75％	C38H67N11O10[M+H]：838.5151	838.5153	313	1063.5/M+H/100％	532.3/M+2H/30％	C53H78N10O13[M+H]：1063.582	1063.583
314	838.5/M+H/100％	419.9/M+2H/75％	C38H67N11O10[M+H]：838.5151	838.5153	315	723.5/M+H/100％		C35H62N8O8[M+H]：723.4763	723.4773
316	794.5/M+H/100％	397.8/M+2H/80％	C39H71N9O8[M+H]：794.5498	794.5491	315	723.5/M+H/100％		C35H62N8O8[M+H]：723.4763	723.4773
316	794.5/M+H/100％	397.8/M+2H/80％	C39H71N9O8[M+H]：794.5498	794.5491	317	929.5/M+H/55％	465.4/M+2H/100％
318	901.5/M+H/100％	451.4/M+2H/95％	C43H68N10O11[M+H]：901.5142	901.5132	317	929.5/M+H/55％	465.4/M+2H/100％
318	901.5/M+H/100％	451.4/M+2H/95％	C43H68N10O11[M+H]：901.5142	901.5132	319	776.6/M+H/100％		C39H68N8O8[M+H]：777.5233	777.5233
320	898.5/M+H/90％	449.4/M+2H/100％			319	776.6/M+H/100％		C39H68N8O8[M+H]：777.5233	777.5233
320	898.5/M+H/90％	449.4/M+2H/100％			321	737.5/M+H/100％		C36H64N8O8[M+H]：737.4920	737.491
322	929.5/M+H/20％	465.4/M+2H/100％	C44H73N12O10+[2M+H]：465.2820	465.2828	321	737.5/M+H/100％		C36H64N8O8[M+H]：737.4920	737.491
322	929.5/M+H/20％	465.4/M+2H/100％	C44H73N12O10+[2M+H]：465.2820	465.2828	323	763.5/M+H/100％		C38H66N8O8[M+H]：763.5076	763.5084
324	900.6[/M+H/100％	450.9/M+2H/75％	C43H69N11O10[M+H]：900.5301	900.5317	323	763.5/M+H/100％		C38H66N8O8[M+H]：763.5076	763.5084
324	900.6[/M+H/100％	450.9/M+2H/75％	C43H69N11O10[M+H]：900.5301	900.5317	325	924.6/M+H/100％		C45H71N11O10[M+H]：926.5458	926.5453
326	681.5/M+H/100％		C33H60N8O7[M+H]：681.4658	681.4657	325	924.6/M+H/100％		C45H71N11O10[M+H]：926.5458	926.5453
326	681.5/M+H/100％		C33H60N8O7[M+H]：681.4658	681.4657	327	814.5/M+H/63％	407.9/M+2H/100％
328	773.4/M+H/100％	387.4/M+2H/42％			327	814.5/M+H/63％	407.9/M+2H/100％
328	773.4/M+H/100％	387.4/M+2H/42％			329	871.5/M+H/100％	436.4/M+2H/87％
330	860.4/M+H/100％	430.8/M+2H/48％			329	871.5/M+H/100％	436.4/M+2H/87％
330	860.4/M+H/100％	430.8/M+2H/48％			331	872.5/M+H/100％	436.9/M+2H/63％

实施例332-344

烯酰胺的合成和APN活性

实施例63和64的步骤用来制备那些另外的烯酰胺。烯酰胺的结构、偶联反应的产率以及质谱数据显示在表15中。氨基肽酶-N(APN)去除末端氨基酸的能力使用在实施例46中描述的方法测定。水解速率显示在表16中。

表15.选择的烯酰胺的产率和物理数据

表16.APN对选择的烯酰胺的N-端残基的水解

实施例#	速率(mmol底物·分钟^-1·U酶^-1)^a
实施例#	速率(mmol底物·分钟^-1·U酶^-1)^a	332	1.89(0.802)
333	0.264(0.209)	332	1.89(0.802)
333	0.264(0.209)	334	0.095(0.070)
335	0.137(0.153)^b	334	0.095(0.070)
335	0.137(0.153)^b	336	0.565(0.420)^c
337	0.000(0.000)	336	0.565(0.420)^c
337	0.000(0.000)	338	1.377(0.775)^d
339	0.345(0.325)	338	1.377(0.775)^d
339	0.345(0.325)	342	0.286(0.269)
63	0.202(0.167)	342	0.286(0.269)
63	0.202(0.167)	344	1.183(0.753)

a)APN分析以3个酶浓度进行：0、6.5×10⁴和15.0×10³U。给出的数据为6.5×10⁴U浓度时候的情形。在15.0×10³U情形下得到的数据列在括号中。用30％的AcOH水溶液稀释中止酶活性。所有的数据n＝2。b)由于底物的酸敏感性用乙腈变性酶。c)三次结果的平均。d)两次结果的平均。

实施例345-350

[¹⁴C]乙酰基-烯酰胺的合成

实施例270-305的步骤用来制备放射性标记的烯酰胺。纯度数据显示在表17中，并且蛋白结合以及稳定性数据显示在表18中。

表17.[¹⁴C]乙酰基-烯酰胺的分析和产率数据

实施例#	胺前体实施例#	脱保护方法	％RCP	保留时间(min)
实施例#	胺前体实施例#	脱保护方法	％RCP	保留时间(min)	345	64	C	95	9.0
346	341	C	100	11.1	345	64	C	95	9.0
346	341	C	100	11.1	347	342	C	100	11.2
348	343	C	99	14.0	347	342	C	100	11.2
348	343	C	99	14.0	349	63	C	100	13.9
350	344	C	100	9.2	349	63	C	100	13.9

表18.选择的[C14]标记的烯酰胺的蛋白结合以及稳定性数据

实施例#	蛋白结合(已经被减去)				血液稳定性
	蛋白结合(已经被减去)				血液稳定性		人	兔	小鼠	盐水	体外	体内
	345	0.8	16.8	5.3	0.2	100	人	兔	小鼠	盐水	体外	体内	63
346	345	0.8	16.8	5.3	0.2	100	26.0	68.8	52.5	-1.2	97	67	63
346	347	37.5	42.2	43.4	-0.8	100	26.0	68.8	52.5	-1.2	97	67	19
348	347	37.5	42.2	43.4	-0.8	100	78.6	85.2	80.9	-7.8	100	42	19
348	349	81.8	74.2	77.0	-8.0	na	78.6	85.2	80.9	-7.8	100	42	na
350	349	81.8	74.2	77.0	-8.0	na	71.8	67.6	75.1	-0.9	8	0	na

实施例351

(2S)-N-[(N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[7-([¹⁴C]乙酰基氨基)-2-氧代庚基]基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]-3-甲基丁基}氨基甲酰基)甲基]-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的合成

部分A-N-(7-溴-6-氧代庚基)(芴-9-基甲氧基)甲酰胺的制备

将6-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]己酸和N-甲基吗啉的无水THF溶液冷却至0℃并用氯甲酸异丁基酯处理。将混合物在氮气气氛下搅拌30分钟并滤过Celite床。在0℃用10分钟，将滤液加入到新鲜制备的醚-重氮甲烷中。将形成的溶液搅拌3小时并将缓慢的氮气气流鼓泡通过溶液以去除过量的重氮甲烷。在温度低于35℃的情形下将溶液在旋转蒸发仪上浓缩。残留物溶解在醚中，冷却至-20℃并用48％HBr的水溶液处理。将溶液在-20℃搅拌30分钟，用醚稀释，并用水洗涤(3x)。将有机层干燥(Na₂SO₄)，并浓缩。将残留物经在硅胶上快速层析纯化得到标题化合物。

部分B-(芴-9-基甲氧基)-N-{6-氧代-7-[N-(氧代甲基)羰基氨基]庚基}甲酰胺的制备

将部分A的产物和二甲酰基胺钠在无水的乙腈中的混合物在环境温度在氮气气氛下搅拌直到TLC显示起始原料消失。过滤混合物以去除沉淀的NaBr并将滤液浓缩。将残留物经在硅胶上快速层析纯化得到标题化合物。

部分C-N-(7-氨基-6-氧代庚基)(芴-9-基甲氧基)甲酰胺，三氟乙酸盐的制备

将部分B的产物和6N HCl的混合物加热回流30分钟。将溶液浓缩至干，并将粗制产物经HPLC纯化：在上C18柱使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分D-(2S)-N-{[N-((1S)-1-{N-[(1S)-1-(N-{7-[(芴-9-基甲氧基)羰基氨基]-2-氧代庚基}氨基甲酰基)-3-甲基丁基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]甲基}-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰胺的制备

将部分C的产物以及实施例61部分B的产物溶解在无水的N，N-二甲基甲酰胺中，并用HBTU和二异丙基乙胺处理。将溶液在环境温度在氮气气氛下搅拌4小时并真空浓缩。将残留物在C18柱上经HPLC纯化，使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分E-(2S)-N-({N-[(1S)-1-(N-{(1S)-1-[N-(7-氨基-2-氧代庚基)氨基甲酰基]-3-甲基丁基}氨基甲酰基)-3-甲基丁基]氨基甲酰基}甲基)-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-{4-[(叔丁氧基)羰基氨基]丁基}-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备

将部分D的产物溶解在20％哌啶的N，N-二甲基甲酰胺中，并在环境温度搅拌20分钟。将溶液减压浓缩并在高真空下充分地干燥。将粗制产物经HPLC纯化：在上C18柱使用水∶乙腈∶0.1％三氟乙酸梯度洗脱。将产物级分冻干得到标题化合物。

部分F-(2S)-N-[(N-{(1S)-1-[N-((1S)-1-{N-[7-([¹⁴C]乙酰基氨基)-2-氧代庚基]氨基甲酰基}-3-甲基丁基)氨基甲酰基]-3-甲基丁基}氨基甲酰基)甲基]-2-[((2S)-1-乙酰基吡咯烷-2-基)羰基氨基]-N-(4-氨基丁基)-4-甲基戊酰胺，三氟乙酸盐的制备

在实施例270-305中描述的放射标记步骤用来制备标题化合物。

一般条件。¹H NMR谱在Bruker Avance DRX(600MHz)光度计上记录。化学位移相对于四甲基甲硅烷以ppm报告，源自不完全氘代的残留溶剂共振作为内标(CDCl₃：δ7.25ppm，C₆D₆：δ7.16ppm，DMSO-d₆：δ2.50ppm)。数据报告如下：化学位移、积分、多重性(s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quin＝五重峰，br＝宽峰，m＝多重峰)，以及耦合常数。¹³C NMR谱在Bruker Avance DRX(150MHz)上记录，完全质子去耦合。化学位移相对于四甲基甲硅烷以ppm报告，溶剂作为内参(CDCl₃：δ77.0ppm，C₆D₆：δ128.4ppm，DMSO-d₆：δ39.5ppm)。低分辨的质谱在Agilent Technologies1100Series LC/MS ESI-MS(阳离子模式)上进行。低分辨的质谱在IonSpectFTMS；ESI-MS(阳离子模式)上进行。

除非另有说明，所有的反应在烤箱-(150℃)和火焰-干燥的玻璃器皿中在干燥的氮气惰性气氛中进行。标示的温度为反应浴中的温度，而环境实验温度为22℃。无水的溶剂来自Aldrich。

下面描述了需要预先制备或纯化的试剂的。.¹辛-7-炔-1-醇从辛-3-炔-1-醇根据已经发表的步骤进行制备。.²PPh₃(己烷)和咪唑(CH₂Cl₂)利用重结晶纯化。N，N’-二甲基乙二胺在使用之前从固体KOH蒸馏出来。碘化亚铜从饱和的碘化钠水溶液中重结晶。亮氨酸酰胺按照下述2步以游离碱的形式从相应的Cbz-保护的氨基酸制备得到：a)EtO₂CCl，Et₃N，NH₄OH；b)H₂，Pd/C。氯甲酸烯丙基酯、Et₃N和Et₂NH在使用之前从CaH₂蒸馏出来。(1E)-5-叠氮基-1-碘代戊-1-烯从戊-4-炔-1-醇按照类似于针对(1E)-8-叠氮基-1-碘代辛-1-烯的方式制备出来。.³所有其他的试剂以从Aldrich，Fluka或StremChemicals得到的形式使用。

1这里描述的技术一般性描述见：Armarego，W.L.F.；Perrin，D.D.Purification of LaboratoryChemicals，4^th ed.；Butterworth-Heinemann：Oxford，U.K.，1998.

2Denmark，S.E.；Yang，S.-M.J.Am Chem.Soc.2002，124，2102.

3替代性的制备，参见：Tucker，C.E.；Majid，T.N.；Knochel，P.J.Am.Chem.Soc 1992，114，3983.

缩写

Abu＝2-氨基丁酸

Ahp＝2-氨基-6-庚烯酸

Ahxh＝6-氨基己酰基酰肼

Aib＝2-氨基异丁酸

Ambh＝4-(氨基甲基)苯甲酰基酰肼

Cha＝环己基丙氨酸

Chg＝环己基甘氨酸

Dab＝2，4-二氨基丁酸

Hcit＝高瓜氨酸

Hpro＝高脯氨酸

Hse＝高丝氨酸

Igl＝茚满基甘氨酸

Inp＝Isonipicotic acid

Oic＝八氢吲哚基-2-羧酸

Pabu＝2-氨基-4-(1’-吡啶)丁酸酯

Piv＝特戊酰基

Pra＝炔丙基甘氨酸

Pya＝3-(4’-吡啶基)丙氨酸

Smc＝S-甲基半胱氨酸

Suc＝琥珀酰基

Tic＝1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸

单字母缩写表示的标准氨基酸

Ahx＝6-氨基己酸

Amb＝4-氨基甲基苯甲酸

APMA＝氨基苯基乙酸汞

BAIB＝[双(乙酰氧基)碘]苯

Cit＝瓜氨酸

Csa＝磺基丙氨酸

DIC＝二异丙基碳二亚胺

EEDQ＝2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉

GM6001＝MMP抑制剂伊洛马司他

Hphe＝高苯丙氨酸

Hynic＝6-肼基烟酸

MPeg3＝2-[2-(-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙酸

NGlu＝谷氨酸的类肽单体

NLys＝赖氨酸的类肽单体

PABA＝对氨基苄基醇

TBAF＝氟化四丁基铵

TCN缓冲液＝50MM Tris-HCl/pH 7.5，10mM CaCl₂，150mM NaCl

TEA＝三乙基胺

TEMPO＝2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基，自由基

Tse＝三甲基甲硅烷基乙基

WSC＝1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

一般条件

固相肽合成在Advanced Chemtech Model ACT90肽合成仪上进行。

手性氨基酸分析按照Gerhardt，J.；Nicholson，G.J.Editor(s)：Hodges，Robert S.；Smith，John A.，Proc.Am.Pept.Symp.，13th(1994)，241-3中记载的方法进行，但是有如下的细微改变。在Chirasil-Val(0.25mm×25m)毛细管柱上分离N-三氟乙酰基氨基酸甲基酯，使用EI-SIM-质谱仪进行检测。以50℃柱温进样并以4℃/分钟升温至200℃。

Claims

1.化合物或其可药用衍生物，包括：

a.至少一个靶向基团；

b.任选的螯合剂；

c.掩蔽的捕获基团；以及

d.任选的连接基团；

其中所述的靶向基团为基质金属蛋白酶底物；

其中所述的螯合剂能够偶联至诊断成分；

其中所述的暴露的捕获基团能够固定在患者的有关部位；

条件是所述的相互作用是非受体介导的；以及

2.化合物或其可药用衍生物，包括：

a.至少一个靶向基团；

b.任选的螯合剂；

c.掩蔽的捕获基团；以及

d.任选的连接基团；

其中所述的靶向基团为基质金属蛋白酶底物；

其中所述的螯合剂能够偶联至诊断成分；

其中所述的暴露的捕获基团能够固定在患者的有关部位；

条件是所述的相互作用是非受体介导的；以及

3.根据权利要求1的化合物，其中所述的病理性失调为冠状动脉斑。

4.根据权利要求1的化合物，其中所述的病理性失调为癌性肿瘤。

5.根据权利要求1的化合物，其中所述的靶向基团为一或多种基质金属蛋白酶的底物，其中所述的基质金属蛋白酶选自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9和MMP-14。

6.根据权利要求1的化合物，其中所述的基质金属蛋白酶底物包括肽序列。

7.根据权利要求6的化合物，其中所述的肽序列衍生自胶原、蛋白聚糖、层粘连蛋白、纤连蛋白、明胶、半乳凝集素-3、软骨连接蛋白、髓鞘碱性蛋白、激肽释放酶14、ladinin 1、内皮糖蛋白、内皮肽受体、层粘连蛋白α2链、磷酸调节中性内肽酶、ADAM 2、demoglein 3、整联蛋白β5、整联蛋白βv、整联蛋白β6、整联蛋白βx、整联蛋白β9、弹性蛋白、基底膜蛋白聚糖、巢蛋白、玻连蛋白、生腱蛋白、巢蛋白、硫酸皮肤素、proTNF-α、聚集蛋白聚糖、转化蛋白酶、核心蛋白聚糖、组织因子通路抑制剂、糖蛋白、NG2蛋白聚糖、神经蛋白聚糖、PAI-3、大内皮肽-1、brevican/BEHAB、核心蛋白聚糖、FGFR-1、IGFBP-3、IL-1β、α2-巨球蛋白、MCP-3、妊娠区蛋白、proMMP-1、proMMP-2、SPARC、P物质、β蛋白聚糖或牙本质。

8.根据权利要求1的化合物，其中所述的螯合剂为能够形成回波发生物质-填充的脂质球或微气泡的表面活性剂。

9.根据权利要求1的化合物，其中所述的暴露的捕获基团能够与物质形成共价键，所述的物质与所述的病理性失调有关。

10.根据权利要求9的化合物，其中所述的暴露的捕获基团与所述的物质中的基团形成迈克尔加成物、腙、β-砜、席夫碱、二硫化物、环己烯、环己烯衍生物，或肟。

11.根据权利要求9的化合物，其中所述的暴露的捕获基团与所述的物质中的内源性生物分子反应。

12.根据权利要求2的化合物，其中所述的暴露的捕获基团为可溶酶蛋白或可溶非酶蛋白的配体，所述的可溶酶蛋白或可溶非酶蛋白与患者的所述的有关部位有关。

13.根据权利要求12的化合物，其中所述的配体选自药物、亲脂性有机分子、两亲性有机分子、卟啉、甾族化合物、脂质、激素、肽、蛋白、寡核苷酸和抗体。

14.制备1，2-二羰基化合物的方法，该方法包括：

a.将根据权利要求1的化合物与MMP反应；

b.将步骤a的产物与APN反应以形成α-氨基酮；以及

c.利用血清胺氧化酶氧化所述的α-氨基酮。

15.一种诊断试剂，包括：

a.根据权利要求1的化合物或其可药用衍生物，以及

b.诊断成分。

16.诊断试剂，包括：

a.根据权利要求的化合物1或其可药用衍生物，以及

b.诊断成分，

其中并在所述的诊断试剂固定的时候，所述的诊断成分的信号基本上不改变。

17.根据权利要求15的诊断试剂，其中所述的诊断成分为回波发生物质、非金属同位素、光学报告分子、硼中子吸收剂、顺磁性金属离子、铁磁性金属、γ-发射放射性同位素、正电子-发射放射性同位素，或x-射线吸收剂。

18.根据权利要求17的诊断试剂，其中所述的诊断成分为γ-发射放射性同位素或正电子-发射放射性同位素，选自：^99mTc、⁹⁵Tc、¹¹¹In、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Ga和⁶⁸Ga。

19.根据权利要求18的诊断试剂，其中所述的γ-发射放射性同位素为^99mTc。

20.根据权利要求18的诊断试剂，其中所述的γ-发射放射性同位素为¹¹¹In。

21.根据权利要求17的诊断试剂，其中所述的非金属同位素为碳-11、氮-13、氟-18、碘-123或碘-125。

22.根据权利要求15的诊断试剂，还包括能够稳定所述的诊断成分的第一种辅助性配体和第二种辅助性配体。

23.组合物，包括：

a.根据权利要求1的化合物；以及

b.可药用载体。

24.组合物，包括：

a.根据权利要求15的诊断试剂；以及

b.可药用载体。

25.一种用于检测、成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶存在的试剂盒，包括：

a.根据权利要求1的化合物；

b.诊断成分；

c.可药用载体；以及

d.用于制备用于检测、成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶存在的组合物的使用说明，所述的组合物包括诊断试剂。

26.根据权利要求25的试剂盒，其中所述的试剂盒还包括一或多种辅助性配体和还原剂。

27.根据权利要求26的试剂盒，其中所述的辅助性配体为tricine和3-[双(3-磺基苯基)膦]苯磺酸。

28.根据权利要求26的试剂盒，其中所述的还原剂为锡(II)。

29.用于形成诊断试剂的试剂盒，包括：

预定量的根据权利要求24的无菌组合物；

预定量的无菌、可药用稳定性共配体，选自二氧螯合剂以及官能化的氨基羧酸盐；

预定量的无菌、可药用的还原剂；以及

任选地，预定量的一种或多种无菌的可药用组分，选自缓冲剂、冻干剂、稳定剂、增溶剂和抑菌剂。

30.一种检测、成像和/或监测患者中基质金属蛋白酶存在的方法，包括下述步骤：

a.对所述的患者给药根据权利要求15的诊断试剂；以及

31.一种检测、成像和/或监测患者中与基质金属蛋白酶活性有关的病理性失调的方法，所述的方法包括下述步骤：

a.对所述的患者给药根据权利要求15的诊断试剂；以及

32.根据权利要求30的方法，其中所述的病理性失调为癌症、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、炎症、自身免疫性疾病、器官移植排斥、溃疡、硬皮病、大疱性表皮松解症、子宫内膜异位、肾脏疾病或骨病。

33.一种鉴别处于患短暂性缺血发作或中风高风险的患者的方法，包括下述步骤

a.对所述的患者给药根据权利要求15的诊断试剂；以及

b确定所述的患者中活动性动脉粥样硬化的程度，包括利用诊断成像技术获得患者中所述的诊断试剂富集部位的图像。

34.一种鉴别处于患急性心肌缺血、心肌梗塞或心源性死亡高风险的患者的方法，包括下述步骤

a.对所述的患者给药根据权利要求15的诊断试剂；以及

b.确定所述的患者中活动性动脉粥样硬化的程度，包括利用诊断成像技术获得患者中所述的诊断试剂富集部位的图像。

35.一种检测、成像和/或监测患者中充血性心力衰竭的方法，包括下述步骤

a.对所述的患者给药根据权利要求15的诊断试剂；以及

b.包括利用诊断成像技术获得患者中所述的诊断试剂富集部位的图像。

36.一种对患者中心脏再灌注和细胞外基质降解同时成像的方法，包括下述步骤

a.给药根据权利要求15的诊断试剂，其中所述的诊断成分为γ-发射放射性同位素或正电子-发射放射性同位素；