CN1864629A - 用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于血氧饱和度检测技术领域,其特征在于:以适量的正常人全血、脂肪乳、K2HPO4·3H2O和NaH2 PO4·2H2O为主配制液体模型,以连二亚硫酸钠为还原剂。在该液体模型中分批次加入该还原剂,得到多个呈阶梯状下降且稳定的氧饱和度状态,分别用血气分析仪和待校准的组织氧检测仪测定其氧饱和度,从而得到的拟合直线即为该组织氧检测仪的校准直线。本方法具有不会改变组织模型的光学吸收和散射特性、准确度高、还原剂用量易于控制、校准过程简便的优点。
Description
技术领域
本专利申请属于生物医学工程技术领域,特别涉及到生物医学光学技术领域。
背景技术
用近红外光谱(near infrared spectroscopy,NIRS)方法实现人体组织氧合状况的无损、实时、连续、定量检测是生物医学光学领域中的一项重要技术,并且仍是当前该领域的研究热点。本研究小组已经独立自主研发成功了相关的组织氧检测仪器,该仪器基于稳态NIRS技术,可以连续无损检测人体局部组织的氧饱和度(regional tissue oxygen saturation,rSO2)。本小组现已将该技术和仪器应用到不同的临床领域,总结了相关规律,并已就以上成果申请了多项专利(已授权的专利共有5项,授权号分别为ZL1540314,ZL1542434,ZL1544919,ZL1544947和ZL2742921)。但是,为使这项技术广泛应用于临床,就必须在临床使用之前对该NIRS仪器进行校准,以有效评价其测得的rSO2的准确度。
发明内容
本发明的目的是确定用血气分析仪校准NIRS组织氧检测仪的实验方案及步骤;并在此前提下选用新型的无机还原剂,实现模型氧饱和度的“阶梯”状下降,以提高校准的精度。
本发明的特征在于其依次含有以下步骤:
步骤(1):根据待模拟的人体组织的吸收系数μa、约化散射系数μs’,配制液体组织模型;在1000ml液体组织模型中,各组分如下:
吸收介质,为正常人的全血,占总体积比2%~6%,
散射介质,为脂肪乳,占总体积比2.5%,
缓冲液,每1000ml缓冲液中溶有20g K2HPO4·3H2O以及2.9g NaH2PO4·2H2O,其余为去离子蒸馏水,该缓冲液占总体积比为95.5%~91.5%;
步骤(2):组成实验装置
把步骤(1)选定的液体模型倒入标称容积为1000ml的大烧杯中,向其中通入氧气并搅拌,通入氧气的流量为每分钟200ml~500ml,通入氧气的持续时间为4~5分钟,具体的流量和持续时间要根据液体模型的具体配方确定;通氧完毕后,根据所用的血气分析仪的要求,从步骤(2)得到的液体模型中抽取少量液体,用血气分析仪测定其氧饱和度,若氧饱和度大于98%,则该液体模型已完全氧合;然后待该模型液面上的气泡散去后,在液面上罩上一层PVC透明薄膜,使其同液面紧密接触,再把待校准的基于近红外光谱的组织氧检测仪的探头固定在所述的PVC透明薄膜上并相互紧密接触;
步骤(3):分批次地加入还原剂连二亚硫酸钠(Na2S2O4),并迅速搅拌均匀,使用所述组织氧检测仪测得的模型氧饱和度rSO2出现阶梯状下降,同时在所述阶梯的平台上用所采用的血气分析仪测得其氧饱和度StO2,从而得到多个稳定氧合状态下的rSO2值和对应的StO2值;对所述的rSO2值和StO2值进行直线拟合,即可得到被校准的组织氧检测仪的一条校准直线,据此求出拟合的线性度R;在所述步骤(3)中每批次加入的Na2S2O4的量以所选用的液体模型能出现稳定的阶梯状下降的氧饱和度为准。
先前我们曾使用酵母作为还原剂,但有关实验表明这有以下缺点:一是酵母不溶于该组织模型,其悬浮颗粒会影响模型的光学吸收和散射特性;二是加入酵母后,模型的氧饱和度从100%附近持续下降到接近0%(图6),因此难以得到多个稳定的氧合状态;三是每次使用的酵母的活性可能差别很大,因此用量难以控制。
本发明提出的校准方法使用Na2S2O4作为还原剂。同使用酵母相比,一方面Na2S2O4极易溶于模型,并且它与组织模型的反应不会产生气体或难溶物质,因此不会改变组织模型的光学吸收和散射特性。另一方面加入适量的Na2S2O4可使模型的氧饱和度呈现“阶梯”状下降(图1),从而可得到多个稳定的氧合状态,有利于提高校准精度。同时每次的Na2S2O4用量容易控制,这使得校准过程简便易行。以上这些都是使用Na2S2O4作为还原剂所带来的显著优点。
附图说明
图1使用Na2S2O4作为还原剂,模型的氧饱和度阶梯下降的示意图。
图2本发明所述校准实验装置的示意图:1,PVC薄膜;2,NIRS仪器的探头;3,NIRS仪器的探头连线;4,NIRS仪器;5,液体组织模型;6,加入的还原剂。
图3本发明所述校准步骤的流程图。
图6使用酵母作为还原剂时,模型的氧饱和度下降的示意图。
具体实施方式
目前在检测氧饱和度的领域,只有血气分析的结果可以作为“金标准”。为此我们使用血气分析仪校准NIRS仪器。测试的对象为液体组织模型,其中含有一定量的全血和散射介质,其在近红外波段(700-900nm)的光学吸收和散射特性接近人体组织。
首先向模型中充入适量的氧气,以使模型充分氧合,从而其氧饱和度上升到很接近100%。然后则要通过加入适量的还原剂,得到模型的逐次降低的多个稳定的氧合状态;并用该NIRS仪器和血气分析仪在每个状态下同时测量模型的氧饱和度,以得到rSO2和StO2的多组数据,最终得到校准直线。每次血气分析需要一定的时间(一般1~2分钟),这段时间内模型的氧饱和度应保持不变,从而上述每个氧合状态的稳定时间应超过2分钟。
我们通过多次实验发现,使用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)作为还原剂,可使模型的氧饱和度随其加入呈现“阶梯”状下降:即每加入一定量Na2S2O4的同时,模型的氧饱和度迅速下降到某一水平(一般下降5~20个百分点,具体的下降幅度与Na2S2O4的具体用量有关),然后可保持在此“平台”至少30分钟,这对血气分析是足够的(图1)。这就得到了多个稳定的氧合状态,从而可提高校准的精度,并且实施比较简便。
具体的实施方式如下:
(一)配制液体组织模型
液体组织模型由正常人的全血、散射介质和缓冲液混合而成,共1000ml。其中正常人的全血为吸收介质,脂肪乳(intralipid-20%)为散射介质。缓冲液的作用是保持组织模型的pH值处于正常人血液pH值的范围内(7.35-7.45),并与血细胞等渗。缓冲液的配方如下:每1000ml缓冲液中溶有20g K2HPO4·3H2O和2.9g NaH2PO4·2H2O,其余为去离子蒸馏水。经计算,室温下该缓冲液的pH值稳定在7.4;同时其渗透性为0.3mol/L,与人血等渗。
表1列出了几种常用的液体组织模型的配方,以及每种模型在波长760nm、805nm和850nm(均位于近红外波段)下的吸收系数μa和约化散射系数μs’。这里μa不但与波长有关,而且与组织模型的氧饱和度有关;而μs’基本不随波长和氧饱和度的变化而变化。下述几种模型的μa和μs’均位于人体不同组织的μa和μs’的范围之内,实际校准时可根据待模拟的组织选择其中某一种模型。
表1 几种液体组织模型的配方
模型编号 | A | B | C | D | E | |
模型 | 全血(ml) | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 |
配方 | 脂肪乳(ml)缓冲液(ml) | 25955 | 25945 | 25935 | 25925 | 25915 |
μa(cm-1) | 波长760nm波长805nm波长850nm | 0.052~0.1780.069~0.0950.067~0.123 | 0.078~0.2670.104~0.1430.100~0.185 | 0.104~0.3560.139~0.1910.134~0.246 | 0.130~0.4450.173~0.2380.167~0.308 | 0.155~0.5340.208~0.2860.200~0.370 |
μs’(cm-1) | 4.7~5.2 | 4.7~5.2 | 4.7~5.2 | 4.7~5.2 | 4.7~5.2 |
(二)组成实验装置
将上述液体模型倒入标称容积为1000ml的大烧杯中,向其中通入一定量的氧气并搅拌,从而使其均匀氧合。通入氧气的流量和通氧的持续时间与模型的具体配方有关,如表2所示。通氧完毕后从该模型中抽取少量(约1ml)液体送入血气分析仪(Nova m7型,美国Nova公司),结果表明此时模型均已完全氧合(StO2>98%)。
表2 通入氧气的流量与通氧的持续时间
模型编号 | A | B | C | D | E |
通入氧气的流量(ml/min)通氧时间(min) | 2004 | 3004 | 3005 | 4005 | 5005 |
通氧完毕并待液面上的气泡散去后,在液面上罩上一层透明的PVC薄膜,使其同液面紧密接触;该薄膜的厚度约为50μm,其对光传播的影响可忽略。然后将该NIRS仪器的探头固定于该薄膜上并与其紧密接触,组成如图2的实验装置。
(三)还原剂的使用
我们选用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)作为还原剂,它极易溶于水,其溶液可与氧在常温下发生如下反应:
由于充氧完毕后模型已完全氧合,即其中的还原血红蛋白(Hb)均与氧结合生成氧合血红蛋白(HbO2),因此Na2S2O4在上述模型中的反应如下:
这导致模型的HbO2减少,Hb增加,其氧饱和度下降。
向模型中加入一定量的Na2S2O4并迅速搅拌均匀,NIRS仪器的监测结果表明,此时模型的rSO2的确出现如图1的“阶梯”状下降;每个“阶梯”的“平台”可持续至少30分钟,远大于每次血气分析所需的时间(1-2分钟)。这样可得到模型的多个稳定的氧合状态。每个状态下都用血气分析仪测得其StO2,直到StO2<30%为止。
对充分氧合后的液体组织模型A~E(具体配方见表1),每次加入Na2S2O4的量(以Na2S2O4·2H2O计),以及对应的稳定氧合状态的StO2如表3所示。经计算,对表3的任意一种情况,加入的Na2S2O4均不会改变模型的pH值和渗透压。
表3 每次加入Na2S2O4的质量(以Na2S2O4·2H2O计)及加入后血气分析仪测得StO2的范围
模型A | 模型B | 模型C | 模型D | 模型E | ||||||
用量(mg) | StO2(%) | 用量(mg) | StO2(%) | 用量(mg) | StO2(%) | 用量(mg) | StO2(%) | 用量(mg) | StO2(%) | |
加入前第一次第二次第三次第四次第五次第六次第七次第八次第九次 | 050~608~125~85~85~85~85~85~85~8 | ≥9890~9575~9065~8055~7045~6035~50<40<30<20 | 070~9010~158~128~128~128~128~128~128~12 | ≥9885~9575~9065~8055~7045~6035~50<40<30<20 | 0100~12015~2010~1510~1510~1510~1510~1510~1510~15 | ≥9890~9580~9070~8560~7550~6535~50<40<30<20 | 0120~15018~2412~1812~1812~1812~1812~1812~1812~18 | ≥9890~9580~9070~8560~7550~6535~50<40<30<20 | 0150~18025~3015~2215~2215~2215~2215~2215~2215~22 | ≥9885~9575~9065~8055~7045~6035~50<40<30<20 |
由上述步骤可得到每个稳定氧合状态对应的rSO2和StO2。对其进行直线拟合,即可得到NIRS仪器的一条校准直线,并可求出拟合的线性度R。
图3给出了上述(一)~(三)的流程图。
这里以表1所述的模型C为例,详细叙述校准过程的具体步骤和结果。该模型在近红外波段的光学参数接近成人的脑组织。
1.按照表1的要求配成液体组织模型C,并按照表2的要求充入氧气。充氧完毕后组成如图2的实验装置。打开NIRS仪器测量模型的rSO2。
2.称取200mg的Na2S2O4·2H2O固体,并在标称容积10ml的封闭试管中将其溶于冷的缓冲液(温度低于20℃),配成10ml溶液。
3.按照表3的要求移取一定量的上述Na2S2O4溶液(第一次4~5ml,第二、三次0.75~1ml,以后每次0.5~0.75ml)加入模型中并搅拌。如前所述,这可得到稳定的氧合状态。在此氧合状态下从模型中抽取少量(约1ml)液体送入血气分析仪,得到StO2;同时读出NIRS仪器测得的rSO2。重复此步骤直到组织模型的StO2<30%。这样就可得到rSO2和StO2的多组数据。
一次校准实验得到的上述数据如表4,其中共加入了8次Na2S2O4。
表4 一次校准实验的结果(使用组织模型C)
加入Na2S2O4溶液(ml) | StO2(%) | rSO2(%) | |
加入前第一次第二次第三次第四次第五次第六次第七次第八次 | 01.01.00.60.60.60.60.60.6 | 99.995.086.583.974.556.741.734.422.0 | 989587807159523820 |
4.对表4的rSO2和StO2进行直线拟合,得到一条校准直线。
5.得到上述校准直线后,可按照表2的要求向模型中充氧,然后重复上述步骤2~4,即可再得到一条校准曲线。每次配好的组织模型可以重复进行3~5次上述校准。
校准结果满足如下条件时,可认为该NIRS仪器测得的rSO2足够准确:
(1)校准直线的线性度R>0.95;
(2)StO2在40%~80%时,上述校准直线与理想的校准直线(即rSO2=StO2)的误差均小于5%。
图4为由表4的结果得到的校准直线(实线
即rSO2和StO2的拟合直线)和理想的校准直线(虚线
即rSO2=StO2)。可见首先rSO2和StO2具有很好的线性关系(R=0.9889),其次这两条直线很接近,满足上述要求(1)(2)。这说明此次校准结果是足够准确的。
我们使用模型C共进行了三次校准实验,得到三条校准直线的线性度R分别为0.9889,0.9978和0.9698。我们将这三条直线显示在图5中。可见这三次校准的结果同样满足上述要求(1)(2)。图5同时显示了这三次实验的平均结果,可见这三条校准直线很接近其平均校准直线(其中校准直线2与平均的校准直线几乎完全重合)。这表明上述校准实验具有较好的可重复性。
Claims (8)
1.用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于,该方法依次含有以下步骤:
步骤(1):根据待模拟的人体组织的吸收系数μa、约化散射系数μs’,配制液体组织模型在1000ml液体组织模型中,各组分如下:
吸收介质,为正常人的全血,占总体积比2%~6%,
散射介质,为脂肪乳,占总体积比2.5%,
缓冲液,每1000ml缓冲液中溶有20g K2HPO4·3H2O以及2.9g NaH2PO4·2H2O,其余为去离子蒸馏水,该缓冲液占总体积比为95.5%~91.5%;
步骤(2):组成实验装置
把步骤(1)选定的液体模型倒入标称容积为1000ml的大烧杯中,向其中通入氧气并搅拌,通入氧气的流量为每分钟200ml~500ml,通入氧气的持续时间为4~5分钟,具体的流量和持续时间要根据液体模型的具体配方确定;通氧完毕后,根据所用的血气分析仪的要求,从步骤(2)得到的液体模型中抽取少量液体,用血气分析仪测定其氧饱和度,若氧饱和度大于98%,则该液体模型已完全氧合;然后待该模型液面上的气泡散去后,在液面上罩上一层PVC透明薄膜,使其同液面紧密接触,再把待校准的基于近红外光谱的组织氧检测仪的探头固定在所述的PVC透明薄膜上并相互紧密接触;
步骤(3):分批次地加入还原剂连二亚硫酸钠,并迅速搅拌均匀,使用所述组织氧检测仪测得的模型氧饱和度rSO2出现阶梯状下降,同时在所述阶梯的平台上用所采用的血气分析仪测得其氧饱和度StO2,从而得到多个稳定氧合状态下的rSO2值和对应的StO2值;对所述的rSO2值和StO2值进行直线拟合,即可得到被校准的组织氧检测仪的一条校准直线,据此求出拟合的线性度R;在所述步骤(3)中每批次加入的连二亚硫酸钠的量以所选用的液体模型能出现稳定的阶梯状下降的氧饱和度为准。
2.根据权利要求1所述的用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于:当人体不同组织的约化散射系数μs’在4.7~5.2cm-1之间,吸收系数μa在波长760nm下为0.052~0.178cm-1之间、波长805nm下为0.069~0.095cm-1之间、波长850nm下为0.067~0.123cm-1之间时,液体组织模型的配方为:全血20ml、脂肪乳25ml、缓冲液955ml。
3.根据权利要求1所述的用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于:当人体不同组织的约化散射系数μs’在4.7~5.2cm-1之间,吸收系数μa在波长760nm下为0.078~0.267cm-1之间、波长805nm下为0.104~0.143cm-1之间、波长850nm下为0.100~0.185cm-1之间时,液体组织模型的配方为:全血30ml、脂肪乳25ml、缓冲液945ml。
4.根据权利要求1所述的用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于:当人体不同组织的约化散射系数μs’在4.7~5.2cm-1之间,吸收系数μa在波长760nm下为0.104~0.356cm-1之间、波长805nm下为0.139~0.191cm-1之间、波长850nm下为0.134~0.246cm-1之间时,液体组织模型的配方为:全血40ml、脂肪乳25ml、缓冲液935ml。
5.根据权利要求1所述的用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于:当人体不同组织的约化散射系数μs’在4.7~5.2cm-1之间,吸收系数μa在波长760nm下为0.130~0.445cm-1之间、波长805nm下为0.173~0.238cm-1之间、波长850nm下为0.167~0.308cm-1之间时,液体组织模型的配方为:全血50ml、脂肪乳25ml、缓冲液925ml。
6.根据权利要求1所述的用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于:当人体不同组织的约化散射系数μs’在4.7~5.2cm-1之间,吸收系数μa在波长760nm下为0.155~0.534cm-1之间、波长805nm下为0.208~0.286cm-1之间、波长850nm下为0.200~0.370cm-1之间时,液体组织模型的配方为:全血60ml、脂肪乳25ml、缓冲液915ml。
7.根据权利要求1所述的用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于:所述的氧饱和度StO2的阶梯状下降的幅度每次在5~20个百分点之内。
8.根据权利要求1所述的用血气分析仪校准组织氧检测仪的方法,其特征在于:所述血气分析仪为美国Nova公司生产的Novam7型。
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