CN1850824B

CN1850824B - 不含苯的汉防己甲素及其制备方法

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Publication number: CN1850824B
Application number: CN2006100464389A
Authority: CN
Inventors: 富力; 赫澜铭; 鲁明明; 鲁岐
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2006-04-27
Filing date: 2006-04-27
Publication date: 2012-11-21
Anticipated expiration: 2026-04-27
Also published as: CN1850824A

Abstract

一种不含苯的汉防己甲素的制备方法是：将80-95％乙醇溶剂与原料以重量比为1∶2～4进行回流提取，提取温度80～95℃，提取次数2～3，每次2～4小时；将乙醇提取液减压回收溶剂得浓缩干膏；用原料1/3至2倍重量的0.5～5％酸水溶解浓缩干膏至沉淀完全；过滤，滤液加入氨水调至PH＝8～10；向上述液体中加入是其体积1/5至等体积氯仿萃取2～5次，合并提取液，回收氯仿得浓缩物；用原料量1％至2倍量的丙酮溶解浓缩物，过滤，放置0.1～6小时析出结晶物，即得纯度≥80％汉防己甲素；重复上述操作，重结晶一次，可得纯度≥90％汉防己甲素；再次重结晶，可得纯度≥95-99％汉防己甲素。本发明的方法可工业化批量生产不含苯的汉防己甲素。

Description

不含苯的汉防己甲素及其制备方法

技术领域本发明涉及一种化学物质，特别是汉防己甲素及其制备方法。

背景技术汉防己甲素别名粉防己碱，是存在于中药防己中的一种异喹啉生碱，分子量为622.74。主要用作抗风湿及抗肿瘤辅助药的原料药。但是中药防己中存在多种结构相似的生物碱，其中以汉防己甲素和乙素结构最为相似，两者结构式如下：

汉防己甲素分子结构式

汉防己乙素分子结构式

上述两者较难分离纯化和分析测定。

目前汉防己甲素的制备方法主要有2种，一种是溶剂提取-干柱层析分离纯化法，另一种是溶剂提取-苯纯化法。其中前者是粉防己根粗粉，95％乙醇回流提取3次，回收乙醇至糖浆状，搅拌下加入50℃的1％的盐酸中，过滤，滤液用环己烷-乙酸乙酯(1∶3)萃取2次，酸水液加氨水调PH9，再用上述混合溶剂萃取，萃取液用无水硫酸钠脱水，蒸干，丙酮热溶，用硅胶G适量拌匀，干法装层析柱，用环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(6∶2∶1)加压洗脱，TLC检查，合并相同流份得到汉防己甲素。其虽可制备不含苯的汉防己甲素，但工艺方法复杂、制备量小、不能实现工业化批量生产[参考文献：杨云、冯卫生主编。中药化学成分提取分离手册，中国中医药出版社，1998年出版，132页]。后者的制备方法是：将粉防己根粗粉用90％乙醇回流提取6小时，回收乙醇至无醇味，加入1％的盐酸搅拌溶解，过滤，用氨水调PH＝9左右，加入氯仿萃取数次，合并提取液，用水洗涤两次，水层弃去，氯仿层用无水碳酸钠脱水。过滤，回收氯仿，残留物减压抽松，用少量丙酮洗涤结晶，干燥后得总生物碱。加入5倍量冷苯浸泡1小时，过滤，所得苯不溶物用少量苯洗涤一次，合并苯液，回收苯，所得残渣用丙酮重结晶一次，得到汉防己甲素结晶[参考文献：孙文基主编。天然药物成分提取分离与制备，中国医药科技出版社，1999年出版，416-417页]。其虽可工业化批量生产汉防己甲素，但此法操作过程也比较繁琐，同时苯又增加了生产过程的环境污染，特别是使得到的汉防己甲素含有毒溶剂——苯的残留，它又存在危害人体健康的风险。

发明内容本发明的目的在于提供一种可用作药物制剂并可工业化批量生产的不含苯的汉防己甲素及其制备方法。

本发明的汉防己甲素为不含苯，纯度80～99％的针状结晶体。

本发明所用的原料为中药防己，其可以是《中华人民共和国药典》规定的正品粉防己Stephania tetrandra S.Moor也可以是其它商用防己药材，如木防己Cocculus orbiculatus(L.)DC.、广防己Aristolochia fangchi Y.C.Wu ex Chew et Hwang及汉中防己Aristolochia Hemsl。

本发明的制备方法如下：

1.将80-95％乙醇溶剂与上述药材以重量比为1∶2～4进行回流提取，提取温度80-95℃，提取次数2～3，每次2～4小时，

2.将乙醇提取液减压回收溶剂得浓缩干膏，真空度0.01-0.08MPa，温度60-80℃，

3.用原料1/3至2倍重量的0.5-5％酸水溶解浓缩干膏至沉淀完全，所用酸水中的酸可以是无机酸，包括盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、亚硝酸、高氯酸；也可以是有机酸，包括饱和及不饱和低级脂肪酸、饱和及不饱和高级脂肪酸、饱和及不饱和支链脂肪酸、饱和及不饱和芳香酸、饱和及不饱和二元酸、饱和及不饱和多元酸等。

4.过滤，取滤液，向滤液加入氨水将其调至PH＝8～10，

5.向上述液体中加入是其体积1/5至等体积氯仿萃取2～5次，分别取氯仿层，合并提取液，

6.于真空度0.01～0.08MPa、温度40～60℃回收氯仿得浓缩物，

7.加入药材投料量1％至2倍重量的丙酮溶解浓缩物，过滤，放置0.1～6小时待析出针状结晶物，即得纯度≥80％汉防己甲素(a)；重复上述操作，重结晶一次，可得纯度≥90％汉防己甲素(b)；再次重结晶，可得纯度≥95-99％汉防己甲素(c)。

本发明的不含苯的汉防己甲素，可以用作口服和注射用药物制剂的原料药。

本发明相比现有技术具有如下优点：

(1)生产过程无苯污染：由于本发明方法不采用苯分离和去除汉防己乙素，因此制得的汉防己甲素不会含苯残留，为医药制剂提供了无苯残留的优质原料；同时生产过程不用苯，因此彻底消除了苯对环境的污染，利于操作人员的身体健康。

(2)制备工艺简优：所述制备工艺不需经过柱层析，也不需要经过苯分离和去除汉防己乙素，而是用丙酮直接结晶的方法制得90～99％高纯度的汉防己甲素，其制备方法更易于工业化操作。

(3)生产成本低：本发明省去苯、无水硫酸钠，也省去试剂级三氧化铝柱层析或硅胶G柱层析步骤及所用填料，所以生产成本明显降低。

附图说明

图1是高效液相色谱法测定标准品汉防己甲素纯度的谱图。

图2是高效液相色谱法测定本发明实施例1获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图3是高效液相色谱法测定本发明实施例1获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图4是高效液相色谱法测定本发明实施例1获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图5是高效液相色谱法测定本发明实施例2获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图6是高效液相色谱法测定本发明实施例2获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图7是高效液相色谱法测定本发明实施例2获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图8是高效液相色谱法测定本发明实施例3获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图9是高效液相色谱法测定本发明实施例3获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图10是高效液相色谱法测定本发明实施例3获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图11是高效液相色谱法测定本发明实施例4获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图12是高效液相色谱法测定本发明实施例4获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图13是高效液相色谱法测定本发明实施例4获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图14是高效液相色谱法测定本发明实施例5获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图15是高效液相色谱法测定本发明实施例5获得的汉防己甲素纯度的谱图。

图16是高效液相色谱法测定本发明实施例5获得的汉防己甲素纯度的谱图。

具体实施方式

实施例1

将溶剂80％乙醇与10千克粉防己以重量比1∶2进行回流提取，温度95℃，提取2次，每次2小时；将上述乙醇提取液在真空度0.01MPa、温度80℃条件下减压蒸馏回收溶剂得浓缩干膏，用3.3千克的0.5％盐酸(无机酸)溶解浓缩干膏并至沉淀完全；过滤，滤液加入氨水调至PH8，再加入是滤液1/5体积氯仿萃取2次；分取氯仿层，合并萃取液，在真空度0.08MPa、温度40℃条件下减压蒸馏回收氯仿得浓缩物；加入0.1千克的丙酮溶解，过滤，放置3小时待析出针状结晶物，即得纯度82.62％的汉防己甲素粗晶体(a)18.2克，其纯度测定谱图见图2汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；重复上述操作，重结晶一次，可得纯度91.45％的汉防己甲素针状晶体(b)10.1克，其纯度测定谱图见图3汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；再次重结晶，可得纯度99.05％汉防己甲素针状晶体(c)0.2克，其纯度测定谱图见图4汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)。

实施例2

将溶剂95％乙醇与广防己20千克以重量比1∶4进行回流提取，温度80℃，提取3次，每次4小时；将上述乙醇提取液在真空度0.08MPa、温度60℃条件下减压回收溶剂得浓缩干膏，用40千克的5％乙酸(有机酸)溶解浓缩干膏并至沉淀完全；过滤，滤液加入氨水调至PH10，再加入等体积氯仿萃取2次；分取氯仿层，合并萃取液，在真空度0.01MPa、温度60℃条件下回收氯仿得浓缩物；用40千克的丙酮溶解浓缩物，过滤，放置6小时待析出针状结晶物，即得纯度83.32％的汉防己甲素粗晶体(a)11.5克，其纯度测定谱图见图5汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；重复上述操作，重结晶一次，可得纯度90.15％的汉防己甲素针状晶体(b)8.3克，其纯度测定谱图见图6汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；再次重结晶，可得纯度95.67％汉防己甲素针状晶体(c)0.1克，其纯度测定谱图见图7汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)。

实施例3

将溶剂90％乙醇与1千克木防己以重量比1∶2进行回流提取，温度90℃，提取3次，每次3小时；将上述乙醇提取液在真空度0.05MPa、温度70℃条件下减压蒸馏回收溶剂得浓缩干膏，用2千克的1.0％苯甲酸(芳香酸)溶解浓缩干膏并至沉淀完全；过滤，滤液加入氨水调至PH9，再加入是滤液1/4体积氯仿萃取4次；分取氯仿层，合并萃取液，在真空度0.05MPa、温度50℃条件下减压蒸馏回收氯仿得浓缩物；加入0.1千克的丙酮溶解，过滤，放置0.1小时待析出针状结晶物，即得纯度82.97％的汉防己甲素粗晶体(a)4.1克，其纯度测定谱图见图8汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；重复上述操作，重结晶一次，可得纯度91.95％的汉防己甲素针状晶体(b)1.6克，其纯度测定谱图见图9汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；再次重结晶，可得纯度98.20％汉防己甲素针状晶体(c)0.06克，其纯度测定谱图见图10汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)。

实施例4

将溶剂85％乙醇与粉防己2千克以重量比1∶2进行回流提取，温度85℃，提取2次，每次4小时；将上述乙醇提取液在真空度0.06MPa、温度65℃条件下减压回收溶剂得浓缩干膏，用1.3千克的4％乙二酸(二元有机酸)溶解浓缩干膏并至沉淀完全；过滤，滤液加入氨水调至PH10，再加入滤液2/3体积氯仿萃取3次；分取氯仿层，合并萃取液，在真空度0.02MPa、温度45℃条件下回收氯仿得浓缩物；用3.6千克的丙酮溶解浓缩物，过滤，放置5小时待析出针状结晶物，即得纯度82.70％的汉防己甲素粗晶体(a)6.6克，其纯度测定谱图见图11汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；重复上述操作，重结晶一次，可得纯度92.81％的汉防己甲素针状晶体(b)2.6克，其纯度测定谱图见图12汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；再次重结晶，可得纯度98.28％汉防己甲素针状晶体(c)0.15克，其纯度测定谱图见图13汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)。

实施例5

将溶剂95％乙醇与汉中防己1千克以重量比1∶3进行回流提取，温度85℃，提取3次，每次2小时；将上述乙醇提取液在真空度0.04MPa、温度75℃条件下减压回收溶剂得浓缩干膏，用1.5千克的5％反丁烯二酸(不饱和脂肪酸)溶解浓缩干膏并至沉淀完全；过滤，滤液加入氨水调至PH8，再加入滤液1/2体积氯仿萃取2次；分取氯仿层，合并萃取液，在真空度0.03MPa、温度55℃条件下回收氯仿得浓缩物；用2千克的丙酮溶解浓缩物，过滤，放置5.5小时待析出针状结晶物，即得纯度82.88％的汉防己甲素粗晶体(a)7.1克，其纯度测定谱图见图14汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；重复上述操作，重结晶一次，可得纯度91.56％的汉防己甲素针状晶体(b)2.9克，其纯度测定谱图见图15汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)；再次重结晶，可得纯度99.03％汉防己甲素针状晶体(c)0.3克，其纯度测定谱图见图16汉防己甲素产品纯度测定谱图(HPLC)。

实施例6

色谱柱：ODS C185微米4.6×250毫米，流动相：甲醇∶0.08％三乙胺溶液＝80∶20(V/V)，流速：1.0ml/min，柱温：30℃，检测波长：280nm。

分别取实施例1制得汉防己甲素(a)、(b)和(c)，加流动相溶液溶解，制成每1毫升含10毫克的供试品溶液，吸取10微升注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，用面积归一化法计算主成分纯度，结果测定其纯度分别为82.62％、91.45％、99.05％，纯度测定谱图分别见图2～4。

Claims

1.一种不含苯的汉防己甲素的制备方法，其特征在于：

(1)将80-95％乙醇溶剂与中药防己以重量比为1：2-4进行回流提取，提取温度80-95℃，提取次数2-3，每次2-4小时；

(2)将乙醇提取液减压回收溶剂得浓缩干膏；

(3)用中药防己1/3至2倍重量的0.5-5％酸水溶解浓缩干膏至沉淀完全，其中所述的酸选择无机酸或有机酸；

(4)过滤，滤液加入氨水调至PH＝8-10；

(5)向上述液体中加入是其体积1/5至等体积氯仿萃取2-5次，合并提取液，回

收氯仿得浓缩物；

(6)用中药防己1％至2倍重量的丙酮溶解浓缩物，过滤，放置0.1-6小时待析出针状结晶物，即得纯度≥80％汉防己甲素。

2.根据权利要求1所述的不含苯的汉防己甲素的制备方法，其特征在于：重复上述步骤(6)的操作，重结晶一次，可得纯度≥90％汉防己甲素。