一种高活性双歧杆菌干粉制剂的复合保护剂
技术领域
本发明涉及一种高活性双歧杆菌干粉制剂的复合保护剂,属于双歧杆菌制品制备技术领域。
背景技术
双歧杆菌(Bifidobacteria)是人体肠道中典型的有益菌,人体肠道中双歧杆菌的数量作为衡量机体健康的重要指标已日益受到人们的重视。但由于机体衰老、环境污染、饮食改变、滥用抗生素、放化疗等原因,往往使人体肠道的双歧杆菌数量下降,导致肠道微生态失调,引起菌群易位,诱发内源感染,造成机体病变。因此,研制开发双歧杆菌制品,通过外源方式补充双歧杆菌在人体肠道定植的数量,对于调整人体肠道微生态平衡,提高免疫力,促进健康,具有重要意义。近年来,国内外双歧杆菌制品行业发展迅猛,成为全球发展最快的行业之一,在食品和医药工业中占有越来越重要的地位,产品已达70多种。然而,由于双歧杆菌具有对营养要求苛刻、专性厌氧、对低pH环境敏感等特殊的生物学性状,目前上市的许多双歧杆菌制品普遍存在活菌含量低、活菌保藏期短等质量问题。尤其是液态制品,在冷藏条件下,活菌保藏期(活菌含量≥1×106cfu/mL)一般只有5~7d。因此,提高双歧杆菌制品的活菌含量、延长活菌保藏期是目前双歧杆菌活菌制品研发过程中亟待解决的技术关键问题。为了提高双歧杆菌液态制品的活菌含量并延长活菌保藏期,国内外研究者曾先后采用提高基质pH值、获得人工驯化的耐氧菌株和耐酸菌株的技术并配合冷藏和冷冻保藏的方法。在冷藏的条件下,采用提高基质pH值、获得人工驯化的耐氧菌株和耐酸菌株的技术,其液态活菌保藏期(活菌含量≥1×106cfu/mL)最多可延至15d~21d;而采用冷冻保藏的方法,虽然可以显著延长液态活菌保藏期,但维持冷冻费用较高,运输不方便,对冷冻保藏中心的依赖性过强。双歧杆菌干粉制品系采用双歧杆菌优良菌种经液体深层高密度培养,浓缩分离,与保护剂介质混溶,再经干燥过程,无菌包装而制成。干燥工艺有:真空低温干燥法、喷雾干燥法和真空冷冻干燥法(简称:冻干法)。真空低温干燥法和喷雾干燥法制备的双歧杆菌干粉制品,一般活菌含量相对偏低;而利用冻干技术制备的双歧杆菌干粉制品,不仅活菌含量高、保藏期长,而且保藏和运输方便,机械化程度高,便于工业化批量生产;它既可直接口服,又可作为添加剂、发酵剂用于研制开发其它双歧杆菌功能性食品和医药制剂,具有极其广阔的推广前景。影响双歧杆菌冻干制品活菌含量(细胞冻干存活率)和活菌保藏期(细胞贮藏稳定性)的主要因素有:菌株特性、培养基、培养条件、收获期、起始细胞浓度、冻干保护剂及其pH值、冷冻速度、干燥过程、残留水分、包装形式、保藏温度等。其中,冻干保护剂是最为复杂、最难选择的关键因素,它不仅影响双歧杆菌在冻干过程中的细胞存活率,也影响保藏期间的细胞稳定性。所以,冻干保护剂的配方及其制备方法属于商业机密。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高活性双歧杆菌干粉制剂的复合保护剂,解决了双歧杆菌干粉制品及其功能性食品、医药制剂生产过程中存在的活菌含量低、保藏期短问题。
本发明的构思是这样的。发明者以自行分离选育的活力高、耐氧性和抗逆性强的双歧杆菌(两歧双歧杆菌Bbm和长双歧杆菌Blm)为试验菌株,研究了十九种食品级单一保护剂对双歧杆菌细胞冻干存活率的影响,初步筛选出抗冷冻或抗干燥的单一保护剂。在此基础上,研究了不同的复合保护剂对双歧杆菌细胞冻干存活率的影响,筛选优化出五种优良的抗冷冻干燥的复合保护剂。对五种复合保护剂制成的双歧杆菌冻干粉剂进行细胞加速试验,进一步筛选出一种既抗冷冻干燥又耐贮藏的优良复合保护剂。具体地,本发明所说的高活性双歧杆菌干粉制剂的复合保护剂配方组成为:β-环状糊精10g、乳糖2-5g、海藻糖0.5-2g、酵母膏0.5-2g、维生素E 0.05-0.1g、蒸馏水100mL。
本发明的复合保护剂制备工艺为:
①按量称取β-环状糊精,105℃干热灭菌60min,冷却;
②按量称取维生素E,过滤除菌;
③预先用碱液调节配制复合保护剂所用蒸馏水的pH值至7.0左右;
④在预先调节pH值的蒸馏水中按量添加乳糖、海藻糖和酵母膏,加热溶解混均;
⑤115℃灭菌10min,冷却至室温;
⑥添加β-环状糊精和维生素E,混均即可。
利用本发明的复合保护剂制成的双歧杆菌冻干粉剂,以不同封存方式(常压封存、真空封存)进行包装,在不同温度(-18℃、4℃)下贮藏,定期检测冻干粉剂的活菌数,确定了采用该复合保护剂制成的双歧杆菌冻干粉剂的保藏条件和保藏期,从而直接考察了采用该复合保护剂的实际应用效果。研究结果表明:采用此复合保护剂制成的两歧双歧杆菌Bbm或长双歧杆菌Blm单一菌株冻干粉剂,其活菌含量均达1.0×1011cfu/g以上;采用该复合保护剂配方制成的长双歧杆菌Blm和两歧双歧杆菌Bbm的单一菌株冻干粉剂,在同一封存方式不同保藏温度下或同一保藏温度不同封存方式下,保藏1年,活菌含量下降不足1个log数量级,均在1010cfu/g以上。
本发明取得的技术效果是:
(1)本发明提供的用于制备长双歧杆菌和两歧双歧杆菌的单一菌株冻干粉剂的高效复合保护剂原料易得、成本低廉;
(2)本发明的复合保护剂工艺简单、制作方便;
(3)采用本发明的高效复合保护剂制成的双歧杆菌冻干粉剂,解决了在研制开发高活力双歧杆菌干粉制剂过程中的技术关键问题。
(4)采用本发明的高效复合保护剂制成的两歧双歧杆菌或长双歧杆菌冻干粉剂,不仅活菌含量高、保藏期长、保藏和运输方便、便于工业化批量生产,而且可以根据需要,制成胶囊、片剂、粉剂等不同产品形式,既可直接口服,又可作为添加剂、发酵剂用于研制开发其它双歧杆菌功能性食品和医药制剂。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明。
实施例1
一、本发明的复合保护剂配方:β环状糊精10g、乳糖5g,海藻糖1g、酵母膏1g、
维生素E0.1g、水100mL(预先用碱液调节蒸馏水的pH值至7.0左右)。
二、制备:
将组成该复合保护剂的各组分(β-环状糊精、维生素E除外)准确称量,混合;加热溶解,冷却至室温;115℃灭菌10min,冷却至室温;采用无菌操作添加过滤除菌的维生素E和105℃干热灭菌60min的β-环状糊精,混匀即得成品。双歧杆菌Bbm的冻干菌粉活菌数达1.28×1011cfu/g。
实施例2
一、本发明的复合保护剂配方:β环状糊精10g、乳糖3g,海藻糖2g、酵母膏1g、维生素E0.06g、水100mL(预先用碱液调节蒸馏水的pH值至7.0左右)。
二、制备:
将组成该复合保护剂的各组分(β-环状糊精、维生素E除外)准确称量,混合;加热溶解,冷却至室温;115℃灭菌10min,冷却至室温;采用无菌操作添加过滤除菌的维生素E和105℃干热灭菌60min的β-环状糊精,混匀即得成品。双歧杆菌Blm的冻干菌粉活菌数达1.14×1011cfu/g。
实施例3
一、本发明的复合保护剂配方:β环状糊精10g、乳糖4g,海藻糖0.8g、酵母膏2g、维生素E0.1g、水100mL(预先用碱液调节蒸馏水的pH值至7.0左右)。
二、制备:
将组成该复合保护剂的各组分(β-环状糊精、维生素E除外)准确称量,混合;加热溶解,冷却至室温;115℃灭菌10min,冷却至室温;采用无菌操作添加过滤除菌的维生素E和105℃干热灭菌60min的β-环状糊精,混匀即得成品。双歧杆菌Bbm的冻干菌粉活菌数达1.20×1011cfu/g。
实施例4
一、复合保护剂配方:β环状糊精10g、乳糖2g,海藻糖3g、酵母膏2g、维生素E 0.1g、水100mL(预先用碱液调节蒸馏水的pH值至7.0左右)。
二、制备:
将组成该复合保护剂的各组分(β-环状糊精、维生素E除外)准确称量,混合;加热溶解,冷却至室温;115℃灭菌10min,冷却至室温;采用无菌操作添加过滤除菌的维生素E和105℃干热灭菌60min的β-环状糊精,混匀即得成品。双歧杆菌Blm的冻干菌粉活菌数达1.08×1011cfu/g。
实施例5
一、本发明的复合保护剂配方:β环状糊精10g、乳糖5g,海藻糖2g、酵母膏0.5g、维生素E0.1g、水100mL(预先用碱液调节蒸馏水的pH值至7.0左右)。
二、制备:
将组成该复合保护剂的各组分(β-环状糊精、维生素E除外)准确称量,混合即得成品;加热溶解,冷却至室温;115℃灭菌10min,冷却至室温;采用无菌操作添加过滤除菌的维生素E和105℃干热灭菌60min的β-环状糊精,混匀即得成品。双歧杆菌Bbm的冻干菌粉活菌数达1.11×1011cfu/g。