CN1837821A

CN1837821A - 制备检测唾液酒精含量试纸的方法及该试纸

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Publication number: CN1837821A
Application number: CN 200510013235
Authority: CN
Inventors: 丁国兴
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2005-03-24
Filing date: 2005-03-24
Publication date: 2006-09-27

Abstract

一种制备检测唾液酒精含量试纸的方法，选取纯棉浆滤纸，做试纸的底物载体，应用固体化学技术，将四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶及乙醇氧化酶和牛血清白蛋白依次加入各试剂到试纸上，分步真空干燥，本发明试纸可通过检测被测人唾液酒精含量反映出其血液中酒精含量。由于所选用两种酶酶促反应的灵敏度高，反应快速，制备试纸的各种物质均不含毒性物质，所以可口含检测，安全可靠；且无需借助复杂的传感器主机出示结果，可直接与比色卡对照读数；本发明试纸测定结果重复性好、便于携带、制备工艺简单，成本低廉，易于产业推广，便于现场检测，可用于酒后驾车的检测和作为法医尸检的简易工具。

Description

制备检测唾液酒精含量试纸的方法及该试纸

技术领域

本发明属于检测唾液乙醇的技术领域，尤其是检测唾液中酒精含量的试纸，特别适用于现场测试。

背景技术

酒精检测的社会应用很广泛，也很重要，而现场检测机动车驾驶人员体内酒精含量，尤显重要。依血液或唾液中酒精浓度，分析判定交通事故责任，是国际上通用的做法，在实践中，取血样检测酒精含量，总有卫生安全隐患；习知的也有取尿样检测的，这种做法在操作上也有很多问题，如尿样真实性判定问题等，因而人们更青睐于取唾液进行酒精检测的技术应用。

习知的技术，如已公开的中国专利申请03128880.4，涉及一种应用玻化技术生产定量检测唾液乙醇传感器用双酶试条，其配方为：缓冲系统用量0.5～0.8M，pH值6.5～8.0；表面活性剂是丁二酸二辛酯磺酸钠(AOT)，用量0.1％～0.3％(v/v)；乙醇氧化酶(AOD)活化剂是叠氮化钠(NaN#-[3])，用量0.05％～0.10％(w/v)；还原剂用量0.01％～0.10％(w/v)；稳定剂是VI型玻化载体，由山梨醇、明胶、右旋糖苷和植物种子粗提液组成，用量5％～15％(w/v)；显色剂用量1.0％～2.5％(w/v)；显色剂溶剂是二甲苯原液；助染剂是褚红染料，用量0.5％～1.5％(w/v)；乙醇氧化酶用量30～45u/ml；过氧化物酶采用辣根过氧化物酶(HRP)，用量450～650u/ml。它应用室温玻化技术，使乙醇氧化酶在室温下稳定，并将该玻化技术生产定量检测唾液乙醇传感器用双酶试条，生产的产品为便携式一次性玻态试条式传感器。该技术有赖于通过传感器进行检测分析，得出结果。该双酶试条中用的A10D活化剂和显色剂溶剂，都是有毒物质，不能直接用于人体，它适于取唾液样，再检测。

习知的技术问题是，在交通执法中，不能现场快速检测判定，被测人是否饮酒，及饮酒多少。业界亟待一种犹如PH试纸一样，安全、准确、简单、易于操作的酒精含量检测产品问世。

发明内容

本发明所要解决的问题在于克服前述技术存在的上述缺陷，而提供一种能通过接触人唾液，快速显示出唾液中酒精含量，并能更为准确反映出当事人的血液酒精含量以及短时期内的饮酒量的试纸及其制备方法。

本发明的首要目的是提供一种制备检测唾液酒精含量试纸的方法；

本发明的再一目的是提供一种检测唾液酒精含量试纸。

本发明试纸的制备方法解决其技术问题是采取以下技术方案来实现的，依据本发明提供的一种制备检测唾液酒精含量试纸的方法及该试纸，依次具有如下步骤：

第一步，按设定尺寸，加入设定浓度的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺溶液，浸透试纸本体至过饱和态；

第二步，通过真空干燥固化3.3’.5.5’-四甲基联苯胺，将浸透3.3’.5.5’-四甲基联苯胺溶液的试纸本体，置于真空干燥器中，真空加热，至试纸本体干燥；

第三步，加入磷酸盐缓冲液溶液，加入设定浓度的磷酸盐缓冲液，浸透到固化有3.3’.5.5’-四甲基联苯胺的试纸本体，至过饱和态；

第四步，通过真空干燥固化磷酸盐缓冲液，将由第三步浸透磷酸盐缓冲液的试纸本体，置于真空干燥器中，真空加热，至的该试纸本体干燥；

第五步，加入设定浓度的辣根过氧化物酶，浸透到依次固化有3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液的试纸本体，至过饱和态；

第六步，通过真空干燥固化辣根过氧化物酶，将由第五步浸透辣根过氧化物酶的试纸本体，置于真空干燥器中，真空加热，至的该试纸本体干燥；

第七步，加入乙醇氧化酶和牛血清白蛋白溶液，加入设定浓度的乙醇氧化酶和牛血清白蛋白溶液，浸透到依次固化有3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶的试纸本体，至过饱和态；

第八步，通过真空干燥固化乙醇氧化酶和牛血清白蛋白，将由第七步浸透乙醇氧化酶和牛血清白蛋白的试纸本体，置于真空干燥器中，真空加热，至该试纸本体干燥。

本发明试纸的制备方法解决其技术问题还可用以下技术方案进一步实现：

前述试纸的制备方法，其中：所述的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺为过饱和水溶液；所述磷酸盐缓冲液的浓度比为取1当量；所述辣根过氧化物酶的浓度比为每毫升水83.3个国际单位；所述的乙醇氧化酶和牛血清白蛋白溶液的浓度比为按每毫升水12个国际单位的乙醇氧化酶加4.4毫克牛血清白蛋白；

前述试纸的制备方法，其中：所述的第二、四、六、八步骤中的真空加热干燥工序，其加热温度设置为摄氏65度，时间设为15-20分钟；

前述试纸的制备方法，其中：第二步骤中真空加热干燥的时间为15分钟；

前述试纸的制备方法，其中：所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.5；

前述试纸的制备方法，其中：所述试纸本体每5×5平方毫米滤纸浸入前述各溶液的量分别是约14微升；

前述试纸的制备方法，其中：所述的试纸本体是纯棉浆大于95-98％、不含漂白物质和任何强氧化性物质的纯棉浆滤纸。

本发明试纸解决其技术问题是采取以下技术方案来实现的，依据本发明提供的一种检测唾液酒精含量试纸，包括附着试剂物的试纸本体，和承载该试纸本体的支持体，其中：所述的试纸本体具有依次浸透，并经分别真空干燥固化的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶以及乙醇氧化酶和牛血清白蛋白成分。

本发明试纸解决其技术问题还可以采取以下技术方案进一步实现。

前述试纸，其中：所述的试纸本体是纯棉浆大于95-98％、不含漂白物质和任何强氧化性物质的纯棉浆滤纸。

前述试纸，其中：所述的试纸本体上的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶以及乙醇氧化酶和牛血清白蛋白成分为：过饱和水溶液的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、1当量的磷酸盐缓冲液、每毫升水83.3个国际单位的辣根过氧化物酶、浓度比为每毫升水12个国际单位的乙醇氧化酶加4.4毫克牛血清白蛋白的乙醇氧化酶和牛血清白蛋白溶液，依次浸透真空干燥固化后的成分量。

本发明与现有技术相比具有显著的优点和有益效果。

由以上技术方案可知，本发明在优异的结构配置下，至少有如下的优点：

本发明将滤纸加样量定为微过饱和态，可以很好的避免刚好饱和的试纸在干燥过程中产生强烈的边缘效应；加样顺序的合理设置，可以有效避免产品产生假阳性或假阴性的问题；真空加热干燥处理，可以避免底物TMB被氧化。

本发明试纸可通过检测被测人唾液酒精含量反映出其血液中酒精浓度。由于所选用两种酶酶促反应的灵敏度高，反应快速，制备试纸的各种物质均不含毒性物质，所以可以口含检测，安全可靠；且无需借助复杂的检测器或传感器显示结果，可直接与比色卡对照读数；本发明试纸测定结果重复性好、便于携带、制备工艺简单，成本低廉，易于产业推广，便于现场检测，可用于酒后驾车的检测和作为法医尸检现场的简易检测工具，与现有技术相比具有显著的技术进步，堪称具有新颖性、创造性、实用性的好技术。

本发明的具体实施方式由以下实施例及其附图详细给出。

附图说明

图1是本发明结构示意图；

具体实施方式

以下结合附图及较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式、结构、特征及其功效，详细说明如后。

一种制备检测唾液酒精含量试纸的方法，选取纯棉浆大于95-98％、不含漂白物质和任何强氧化性物质的纯棉浆滤纸，做试纸的底物载体，称之试纸本体1，应用固体化学技术，将3.3’.5.5’-四甲基联苯胺(TMB)、磷酸盐缓冲液(Buffer)、辣根过氧化物酶(HRP)以及乙醇氧化酶(A10D)和牛血清白蛋白(BSA)依次加入各试剂到试纸上，分步真空干燥，其具体步骤是：

取前述试纸本体5×5平方毫米，

加入3.3’.5.5’-四甲基联苯胺(TMB)溶液，取过饱和水溶液的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺(TMB)溶液浸透试纸本体至过饱和态，每5×5平方毫米滤纸浸入所述3.3’.5.5’-四甲基联苯胺(TMB)溶液14微升；

通过真空干燥固化3.3’.5.5’-四甲基联苯胺(TMB)，将浸透(TMB)3.3’.5.5’-四甲基联苯胺溶液的试纸本体，放在真空干燥器内，真空干燥20分钟，尤以真空干燥15分钟最佳，本例选用DZ-1BC型真空干燥器；

加入磷酸盐缓冲液(Buffer)溶液，取1当量的磷酸盐缓冲液(Buffer)浸透试纸本体至过饱和态，每5×5平方毫米滤纸浸入所述磷酸盐缓冲液(Buffer)溶液14微升；所述磷酸盐缓冲液的pH值以7.5为最佳；

通过真空干燥固化磷酸盐缓冲液(Buffer)，将浸透磷酸盐缓冲液(Buffer)溶液的试纸本体，放在真空干燥器内，真空干燥20分钟；

加入辣根过氧化物酶(HRP)溶液，所述的辣根过氧化物酶(HRP)按每毫升水83.3个国际单位浓度比加入，浸透试纸本体至过饱和态，每5×5平方毫米滤纸浸入所述辣根过氧化物酶(HRP)溶液14微升；

通过真空干燥固化辣根过氧化物酶(HRP)，将浸透辣根过氧化物酶(HRP)溶液的试纸本体，放在真空干燥器内，真空干燥20分钟；

加入乙醇氧化酶(A10D)和牛血清白蛋白(BSA)溶液，按每毫升水12个国际单位的乙醇氧化酶加4.4毫克牛血清白蛋白的浓度比，取乙醇氧化酶和牛血清白蛋白溶液浸透试纸本体至过饱和态，每5×5平方毫米滤纸浸入所述乙醇氧化酶溶液14微升；

通过真空干燥固化乙醇氧化酶和牛血清白蛋白，将浸透乙醇氧化酶(AlOD)和牛血清白蛋白(BSA)溶液的试纸本体，放在真空干燥器内；

将分步固化了前述各试剂物的试纸本体粘贴在PVC衬板2上，抽真空密封包装，制成成品。所述的粘贴材料应选用不与前述试剂物发生化学变化的粘合材料。使用时，口含测试，通过试纸显色与比色卡对照，即可读出唾液酒精含量值。

由于底物极易被氧化，固前述的滤纸中不应含有强氧化性成分，例如：漂白粉等。

四甲基联苯胺(TMB)显色是在过氧化物酶存在下，与过氧化氢反应，其还原型[TMB(R)]被氧化为氧化型[TMB(O)]，形成多种复杂的络合物。其中吸收光谱特征峰有两个：波长λ1＝640nm，波长λ2＝450nm，溶液颜色是黄绿色(黄色与蓝色按不同比例混合的结果)。

磷酸盐缓冲液(Buffer)不易产生边缘效应和假阴性，其pH值在7.5处最佳，偏酸会影响均匀度和造成发黄现象，偏碱会使显色不明显。其它成分的定量其最适浓度，使最后现色效果最佳。

试验表明，本发明所述的试纸的颜色梯度可很好的反映出唾液与酒精配制的混合溶液中酒精浓度。人在饮酒后30-120分钟，可通过检测其唾液酒精含量反映出其血液中酒精浓度。酶促反应的灵敏度高，反应快速，不含毒性物质，可口含检测。

反应方程式：

这是两个由双氧水偶联的酶促反应，分别由乙醇氧化酶和过氧化物酶催化，反应敏感。

依照本发明试纸的制备方法，还可制备出检测尿醇含量的试纸，以用于尸检中死亡原因和死者生前状态的判定。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种制备检测唾液酒精含量试纸的方法，依次具有如下步骤：

第五步，加入辣根过氧化物酶溶液，浸透依次固化有3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液的试纸本体至过饱和态；

2.如权利要求1所述试纸的制备方法，其特征在于：所述的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺选取过饱和水溶液；所述的磷酸盐缓冲液的浓度比为取1当量；所述的辣根过氧化物酶溶液的浓度比为每毫升水83.3个国际单位；所述的乙醇氧化酶和牛血清白蛋白溶液的浓度比为按每毫升水12个国际单位的乙醇氧化酶加4.4毫克牛血清白蛋白。

3.如权利要求1或2所述试纸的制备方法，其特征在于：所述的第二、四、六、八步骤中的真空加热干燥工序，其加热温度设置为摄氏65度，时间设为15-20分钟。

4.如权利要求3所述试纸的制备方法，其特征在于：所述的第二步骤中真空加热干燥的时间为15分钟。

5.如权利要求4所述试纸的制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.5。

6.如权利要求5所述试纸的制备方法，其特征在于：所述试纸本体每5×5平方毫米滤纸浸入前述各溶液的量分别是约14微升。

7.如权利要求6所述试纸的制备方法，其特征在于：所述的试纸本体是纯棉浆大于95-98％、不含漂白物质和任何强氧化性物质的纯棉浆滤纸。

8.一种检测唾液酒精含量试纸，包括附着试剂物的试纸本体，和承载该试纸本体的支持体(2)，其特征在于：所述的试纸本体(1)具有依次浸透，并经分别真空干燥固化的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶以及乙醇氧化酶和牛血清白蛋白成分。

9.如权利要求8所述试纸，其特征在于：所述的试纸本体是纯棉浆大于95-98％、不含漂白物质和任何强氧化性物质的纯棉浆滤纸。

10.如权利要求9所述试纸，其特征在于：所述的试纸本体上的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶以及乙醇氧化酶和牛血清白蛋白成分为：过饱和水溶液的3.3’.5.5’-四甲基联苯胺、1当量的磷酸盐缓冲液、每毫升水83.3个国际单位的辣根过氧化物酶、浓度比为每毫升水12个国际单位的乙醇氧化酶加4.4毫克牛血清白蛋白的乙醇氧化酶和牛血清白蛋白溶液，依次浸透真空干燥固化后的成分量。