CN103267758A - 用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条及其制备方法 - Google Patents
用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种快速检测试剂条及其制造方法，特别涉及一种用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条及其制备方法。它包括用于支撑反应物体系的支持物；用于吸附所述反应物的滤纸；所述反应物包括为显色剂、乙醇氧化酶和/或过氧化物酶、含氮杂环化合物以及添加剂，所述添加剂为牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮或乙基纤维素中的一种或两种以上。其制备方法包括反应液A的配制；第一次浸液及干燥；反应液B的配制；第二次浸液及干燥和试纸条的组装。本发明的试剂条能够有效避免产生假阳性现象、稳定性好。
Description
技术领域
本发明涉及一种快速检测试剂条及其制造方法，特别涉及一种用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条及其制备方法。
背景技术
酒精检测的用途广泛，它包括医院对酒精中毒患者的检测、企业对诸如矿井、有机溶剂生产车间或仓库等易燃、易爆场所作业人员有否酒后操作的监测等。尽管如此酒精检测最为重要的用途是用于机动车驾驶员体内酒精浓度的测定。酒后驾车是一个世界性的安全问题。据国外报道，每年交通死亡事故与酒后驾车相关的比例很高。据世界卫生组织(WHO)公布，车祸丧生中80%以上的交通事故是由司机引发，而其中5O%以上则属司机酒后驾车所致。
在我国，驾驶人员酒后驾驶的现象十分普遍，在国家新出台的《交通道路管理法》中明确规定严禁酒后驾车，并制定了《车辆驾驶人员血液、呼气酒精含量值与检验》标准，该标准规定血液中酒精含量达10mg/dl驾驶员为酒后驾驶，1OOmg/dl认定为醉酒驾驶。其判别方法有两种:
（一）用呼出气体酒精含量探测器检测法，此方法是指在规定的温度，湿度和压力下，用上述仪器分析测定呼出肺气中乙醇的含量。此种探测器可采用燃料电池式、气敏半导体元件式、电化学以及红外线吸收式传感器型等，此类探测器价格不一，检测效果不同，有些价格非常昂贵，不易携带。根据我国的国情，每个交警不可能人手一机，且这种探测器必须有专业人员进行不定期的校对和维护保养，才能测量准确，同时，在使用过程中存在卫生问题。
(二)血液酒精含量检验法，它采用顶空气相色谱仪进行检验，目前，该检验方法为法定检验方法，这种测试方法测试结果准确可靠，但缺点是只适用于实验室专业人员操作，且测试结果需要较长时间，不能进行大批量筛选。不能用于道路现场检测，人们正在寻找一种快速准确、适合交警现场执法的检测用具或用品。
CN1837821A(2006-9-27)公开了一种制备检测唾液酒精含量试纸的方法及该试纸，选取纯棉浆滤纸，做试纸的底物载体，应用固体化学技术，将四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶及乙醉氧化酶和牛血清白蛋白依次加入各试剂到试纸上，分步真空干燥，该试纸通过检测被测人唾液酒精含量反映出其血液中酒精含量。然而该方法制备的试纸容易产生假阳性现象，稳定性有待改进。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种能够有效避免产生假阳性现象、稳定性好的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条。
本发明的第二目的是提供一种所述用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的制备方法。
本发明的第一技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条，其包括：用于支撑反应物体系的支持物；
用于吸附所述反应物的滤纸；
所述反应物为显色剂、乙醇氧化酶和/或过氧化物酶、含氮杂环化合物以及添加剂，所述添加剂为牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮或乙基纤维素中的一种或两种以上。
本发明的优点是：
（1）试剂条中包含的两种酶可以促进反应，灵敏度高，反应快速，无需借助复杂的检测器或传感器即可在两分钟内快速显示结果；
（2）结合本发明特定的含氮杂环化合物和添加剂，能抑制所述两种酶的非特异性反应，有效避免产生假阳性现象，使产品有更优良的稳定性，并且使本发明的试剂条保质期由原来的4-8个月延长至12-15个月。
所述假阳性是指非酒精含量的液体也使所述干化学法快速诊断试剂条显色。
作为优选，所述添加剂为聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白组成的混合物。
本发明采用两种组分混合后的添加剂效果更好，这可能是白蛋白对酶有稳定作用，聚乙烯吡咯烷酮能隔离空气中的氧气和水分，两种添加剂发挥了稳定协同增效作用。
更优选地，所述聚乙烯吡咯烷酮与牛血清白蛋白的比例为0.2～20。
所述比例混合的添加剂的稳定协同增效作用效果更好。
作为优选，所述含氮杂环化合物包括2-巯代苏糖醇、喹啉或噻唑中的一种或两种以上组成的混合物。
作为优选，所述显色剂包括：N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐、对羟基苯甲酸钠、3-羟基-2，4，6-三溴苯甲酸、N-乙基-N-(3-磺丙基)间胺钠盐、2-羟基-3，5-二氯苯磺酸钠盐、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐、4-氨基安替比林或3，3’，5，5’－四甲基联苯胺中的一种或两种以上。
作为优选，所述支持物为塑料基片。
更优选地，所述塑料基片为聚氯乙烯或聚苯乙烯。
作为优选，所述滤纸为whatman公司生产的31ET滤纸。
本发明的第二技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的制备方法，其包括以下步骤：
(1)反应液A的配制：反应液A包括称量下述物质并混合均匀后获得的物质:
水 1L；
GOOD缓冲液 20～200mM；
乙二胺四乙酸 10～100mM；
添加剂 3～30g
含氮杂环化合物 20～100mg；
乙醇氧化酶 1～10KU；
过氧化物酶 10～40KU；
(2)第一次浸液及干燥：将滤纸按照试剂条的尺寸加工成型，然后浸泡在所述反应液A中，取出并干燥；
(3)反应液B的配制：反应液B包括称量下述物质并混合均匀获得的物质:
丙酮 400mL；
添加剂 1～10g
聚乙二醇6000 5～10g；
显示剂 50～200mg ；
8-羟基喹啉-5-磺酸 20～100mg；
(4)第二次浸液及干燥：将步骤（2）所得滤纸浸泡在所述反应液B中，取出并干燥；
(5)试纸条的组装：将步骤（4）所得滤纸用切纸机裁切，然后粘贴到塑料基片上，再在切纸机上裁切成需要宽度的试剂条；
其中所述添加剂为牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮或乙基纤维素中的一种或两种以上。
Good缓冲液是一有机物组成的酸碱缓冲液都可以称为GOODS缓冲液。本发明所使用的Good缓冲液中的HEPES最佳含量为100mM,用氢氧化钠调节pH至7.0。
本发明制备方法的优点是：
（1） 通过本发明的分次浸泡和干燥，防止溶液之间反应变色，并且增加最终产品的稳定性，避免产品假阳性现象的出现；
（2） 本发明选用含氮杂环化合物，同时选用特定配比的牛血清白蛋白及聚乙烯吡咯烷酮作为添加剂与其余成分配比形成A液，选用乙基纤维素作为添加剂与其余成分配比形成B液,和显示剂，通过其相互结合及其相互配比，能抑制所述两种酶的非特异性反应，有效避免产品测试时产生假阳性现象，使产品有更优良的稳定性，并且使本发明的试剂条保质期由原来的4-8个月延长至12-15个月。
作为优选，所述反应液A中还包括N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐10～50mM，所述反应液B中的显示剂为4-氨基安替比林。
所述的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐和4-氨基安替比林配对使用作为显示剂，一个在A液中，另一个在B液中；如果样本中有乙醇，测试后试纸显色为红色。
作为优选，所述反应液B中的显示剂为3，3，5，5-四甲基联苯胺。
仅在B液中使用一种显示剂，如果样本中有乙醇，测试后试纸显色为蓝色。
作为优选，所述反应液A中的添加剂为聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白组成的混合物。
更优选地，所述聚乙烯吡咯烷酮为2～20g，所述牛血清白蛋白为1～10g。
作为优选，所述反应液B中的添加剂为乙基纤维素。
作为优选，所述反应液B中还包括10～50mg的含氮杂环化合物。
作为优选，所述含氮杂环化合物为2-巯代苏糖醇、喹啉或噻唑中的一种或两种以上组成的混合物。
更优选地，所述含氮杂环化合物为2-巯代苏糖醇。
作为优选，所述滤纸为whatman公司生产的31ET滤纸。
通过所述时间的浸泡，滤纸在反应液A中为微过饱和态，可以避免滤纸在干燥过程中产生边缘效应，并进一步避免产品产生假阳性的问题。
作为优选，所述步骤（2）的干燥温度为50～70℃，干燥时间为45-55分钟。
作为优选，所述步骤（4）的干燥温度为50～70℃，干燥时间为15-25分钟。
通过在反应液A和反应液B中浸泡后进行不同时间的干燥，使得浸泡后呈微过饱和态的滤纸避免滤纸在干燥过程中产生边缘效应，并进一步避免产品产生假阳性的问题。
作为优选，所述步骤（5）是将步骤（4）所得滤纸用切纸机裁切成5mm宽的试纸条，然后粘贴到塑料基片上，再在切纸机上裁切成3-5mm宽的试剂条。
具体实施方式
实施例一
反应液A的配制：反应液A包括称量下述物质并混合均匀后获得的物质:
水 1L；
GOOD缓冲液 20～200mM；
乙二胺四乙酸 10～100mM；
聚乙烯吡咯烷酮为2～20g
牛血清白蛋白为1～10g
2-巯代苏糖醇 20～100mg；
乙醇氧化酶 1～10KU；
过氧化物酶 10～40KU；
N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐10～50mM
第一次浸液及干燥：将whatman公司生产的31ET滤纸按照试剂条的尺寸加工成型，然后浸泡在所述反应液A中，取出并在60℃干燥50分钟；
反应液B的配制：反应液B包括称量下述物质并混合均匀获得的物质:
丙酮 400mL；
乙基纤维素 1～10g
聚乙二醇6000 5～10g；
2-巯代苏糖醇 10～50mg ；
4-氨基安替比林 50～200mg ；
8-羟基喹啉-5-磺酸 20～100mg；
第二次浸液及干燥：将第一次浸液干燥后所得滤纸浸泡在所述反应液B中，取出并在50～70℃干燥15-25分钟；
试纸条的组装：将第二次浸液及干燥所得滤纸用切纸机裁切成5mm宽的试纸条，然后粘贴到聚苯乙烯塑料基片上，再在切纸机上裁切成3-5mm宽的试剂条。
最终获得本发明用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条，灵敏度是20mg/dl，测试范围是0～300mg/dl。
【检测方法】：
检测时将唾液收集在收集器皿中，用试纸沾取唾液，试纸在唾液中沾湿1～2秒即取出，放置2分钟后观察试纸外观颜色的变化，如果试纸变成红色，则说明样本中有乙醇存在。拿试纸的色卡和试纸显色做比对，色卡上的每个色块都标明了相应的浓度值。如果试纸没有变色，说明样本中没有乙醇。
【检测统计】：做500次检测试验，统计是否有假阳性现象。统计结果：500次检测试验中未发现一例假阳性结果。
另外，经检测，本发明的试剂条保质期为15个月。
实施例二
反应液A的配制：反应液A包括称量下述物质并混合均匀后获得的物质:
水 1L；
GOOD缓冲液 20～200mM；
乙二胺四乙酸 10～100mM；
聚乙烯吡咯烷酮为1～18g
牛血清白蛋白为2～5g
喹啉 20～100mg；
乙醇氧化酶 1～10KU；
过氧化物酶 10～40KU；
第一次浸液及干燥：将whatman公司生产的31ET滤纸按照试剂条的尺寸加工成型，然后浸泡在所述反应液A中，取出并在50℃干燥45分钟；
反应液B的配制：反应液B包括称量下述物质并混合均匀获得的物质:
丙酮 400mL；
乙基纤维素 1～10g
聚乙二醇6000 5～10g；
3，3，5，5-四甲基联苯胺 50～200mg ；
8-羟基喹啉-5-磺酸 20～100mg；
第二次浸液及干燥：将第一次浸液干燥后所得滤纸浸泡在所述反应液B中，取出并在50℃干燥25分钟；
试纸条的组装：将第二次浸液及干燥所得滤纸用切纸机裁切成5mm宽的试纸条，然后粘贴到聚氯乙烯塑料基片上，再在切纸机上裁切成3-5mm宽的试剂条。
【检测方法】：
检测时将唾液收集在收集器皿中，用试纸沾取唾液，试纸在唾液中沾湿1～2秒即取出，放置2分钟后观察试纸外观颜色的变化，如果试纸变成蓝色，则说明样本中有乙醇存在。拿试纸的色卡和试纸显色做比对，色卡上的每个色块都标明了相应的浓度值。如果试纸没有变色，说明样本中没有乙醇。
【检测统计】：做500次检测试验，统计是否有假阳性现象。统计结果：100次检测试验中未发现一例假阳性结果，200次检测试验中未发现一例假阳性结果，300次检测试验中未发现一例假阳性结果，400次检测试验中未发现一例假阳性结果，500次检测试验中发现一例假阳性结果。
另外，经检测，本发明的试剂条保质期为14个月。
实施例三
反应液A的配制：反应液A包括称量下述物质并混合均匀后获得的物质:
水 1L；
GOOD缓冲液 20～200mM；
乙二胺四乙酸 10～100mM；
聚乙烯吡咯烷酮为 8～15g
牛血清白蛋白为 4～8g
噻唑 20～100mg；
乙醇氧化酶 1～10KU；
过氧化物酶 10～40KU；
第一次浸液及干燥：将whatman公司生产的31ET滤纸按照试剂条的尺寸加工成型，然后浸泡在所述反应液A中，取出并在70℃干燥55分钟；
反应液B的配制：反应液B包括称量下述物质并混合均匀获得的物质:
丙酮 400mL；
乙基纤维素 1～10g
聚乙二醇6000 5～10g；
3-羟基-2，4，6-三溴苯甲酸 50～200mg ；
8-羟基喹啉-5-磺酸 20～100mg；
第二次浸液及干燥：将第一次浸液干燥后所得滤纸浸泡在所述反应液B中，取出并在70℃干燥15分钟；
试纸条的组装：将第二次浸液及干燥所得滤纸用切纸机裁切成5mm宽的试纸条，然后粘贴到聚氯乙烯塑料基片上，再在切纸机上裁切成3-5mm宽的试剂条。
检测方法同实施例一，如果试纸变成蓝色，则说明样本中有乙醇存在。拿试纸的色卡和试纸显色做比对，色卡上的每个色块都标明了相应的浓度值。
【检测统计】：做500次检测试验，统计是否有假阳性现象。统计结果：500次检测试验中仅发现两例假阳性结果。
另外，经检测，本发明的试剂条保质期为13个月。
对比实施例一
测量人体唾液中酒精含量的检测试纸条，由试纸手柄、显色块和对比色块组成，在对比色块上设有酒精含量与颜色的对照表，显色块中含有显色剂、酒精酶、磷酸盐，显色块粘贴在试纸手柄的上端。
上述显色块的制作方法如下: 配制酶试剂，用酶试剂将过滤纸条浸透，酶试剂由显色剂(酚兰指示剂)5%、酒精酶(酒精脱氢酶)3%、磷酸盐(NAD)6%配制而成，取出后置于在温度35℃～39℃，相对温度小于10%的洁净房中凉干，取出后直接粘贴在聚苯乙烯纸上，用切纸机切成5mm～70mm的试纸条，装入铝箔袋中，用真空封口机封口即可，所有工艺流程均在干燥、洁净房间内完成。
【检测统计】：做500次检测试验，统计是否有假阳性现象。统计结果：500次检测试验中每100例至少发现二十例以上出现假阳性结果。
另外经检测，本发明的试剂条保质期为6个月。
对比实施例二
试剂条制备方法同实施例一，不同的是反应液A和反应液B中不含有2-巯代苏糖醇。
【检测统计】：做500次检测试验，统计是否有假阳性现象。统计结果：500次检测试验中每100例至少发现十五例以上出现假阳性结果。
另外经检测，本发明的试剂条保质期为8个月。
对比实施例三
试剂条同实施例二，不同的是反应液A中不含有牛血清白蛋白和聚乙烯吡咯烷酮，反应液B中不含有乙基纤维素。
【检测统计】：做500次检测试验，统计是否有假阳性现象。统计结果：500次检测试验中每100例至少发现十八例以上出现假阳性结果。
另外经检测，本发明的试剂条保质期为7个月。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1. 用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条，其特征在于包括：
用于支撑反应物体系的支持物；
用于吸附所述反应物的滤纸；
所述反应物包括为显色剂、乙醇氧化酶和/或过氧化物酶、含氮杂环化合物以及添加剂，所述添加剂为牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮或乙基纤维素中的一种或两种以上。
2. 根据权利要求1所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条，其特征在于：所述聚乙烯吡咯烷酮与牛血清白蛋白的比例为0.2～20。
3. 根据权利要求1所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条，其特征在于：所述含氮杂环化合物包括2-巯代苏糖醇、喹啉或噻唑中的一种或两种以上组成的混合物。
4. 根据权利要求1或2所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条，其特征在于：所述显色剂包括：N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐、对羟基苯甲酸钠、3-羟基-2，4，6-三溴苯甲酸、N-乙基-N-(3-磺丙基)间胺钠盐、2-羟基-3，5-二氯苯磺酸钠盐、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐、4-氨基安替比林或3，3’，5，5’－四甲基联苯胺中的一种或两种以上。
5. 制备权利要求1所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)反应液A的配制：反应液A包括称量下述物质并混合均匀后获得的物质:
水 1L；
GOOD缓冲液 20～200mM；
乙二胺四乙酸 10～100mM；
添加剂 3～30g
含氮杂环化合物 20～100mg；
乙醇氧化酶 1～10KU；
过氧化物酶 10～40KU；
(2)第一次浸液及干燥：将滤纸按照试剂条的尺寸加工成型，然后浸泡在所述反应液A中，取出并干燥；
(3)反应液B的配制：反应液B包括称量下述物质并混合均匀获得的物质:
丙酮 400mL；
添加剂 1～10g
聚乙二醇6000 5～10g；
显示剂 50～200mg ；
8-羟基喹啉-5-磺酸 20～100mg；
(4)第二次浸液及干燥：将步骤（2）所得滤纸浸泡在所述反应液B中，取出并干燥；
(5)试纸条的组装：将步骤（4）所得滤纸用切纸机裁切，然后粘贴到塑料基片上，再在切纸机上裁切成需要宽度的试剂条；
其中所述添加剂为牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮或乙基纤维素中的一种或两种以上。
6. 根据权利要求5所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的制备方法，其特征在于：所述反应液A中还包括N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)间甲苯胺钠盐10～50mM，所述反应液B中的显示剂为4-氨基安替比林。
7. 根据权利要求5所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的制备方法，其特征在于：所述反应液B中的显示剂为3，3，5，5-四甲基联苯胺。
8. 根据权利要求7所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的制备方法，其特征在于：所述反应液A中的添加剂为聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白组成的混合物。
9. 根据权利要求8所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的制备方法，其特征在于：所述聚乙烯吡咯烷酮为2～20g，所述牛血清白蛋白为1～10g。
10. 根据权利要求8或9所述的用于测试唾液中酒精含量的干化学法快速诊断试剂条的制备方法，其特征在于：所述反应液B中还包括10～50mg的含氮杂环化合物。
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