发明内容
本发明涉及到以下发明。
1.氨基化复合型糖链衍生物。
2.式(1)表示的氨基化复合型糖链衍生物。
[式中,R1表示-NH-(CO)-CH2X-、-NH-(CO)-(CH2)b-CH2X、异硫氰酸酯基、-NH-(CO)a-(CH2)b-CO2H、-NH-(CO)a-(CH2)b-CHO。X表示卤素原子、a为0或1,b表示1~4的整数。R2和R3是氢原子、式(2)~(5)表示的基团,可以相同,也可以不同。但是R2和R3都是氢或式(5)的情况,R2或R3是氢原子,另一个R2或R3为式(5)的情况除外。]
3.上述的氨基化复合型糖链衍生物,其中R1是-NH-卤化乙酰基。
4.上述氨基化复合型糖链衍生物与氨基酸的巯基结合的糖肽。
5.糖肽的制造方法,其特征是:使上述氨基化复合型糖链衍生物与氨基酸的巯基结合。
6.糖肽,其特征是:上述氨基化复合型糖链衍生物与氨基酸的巯基结合的糖肽是抗体。
7.糖肽的制造方法,其特征是:将糖肽的糖从氨基酸上切下,然后结合上述氨基化复合型糖链衍生物。
8.糖肽的制造方法,其特征是:将糖肽的糖从氨基酸上切下,然后结合上述氨基化复合型糖链衍生物后得到的糖肽是抗体。
本发明的氨基化复合型糖链衍生物是将与复合型天冬酰胺结合型糖链的1位的碳结合的羟基用-NH-(CO)-CH2X-、-NH-(CO)-(CH2)b-CH2X、异硫氰酸酯基、-NH-(CO)a-(CH2)b-CO2H、-NH-(CO)a-(CH2)b-CHO(X表示卤素原子、a为0或1,b表示1~4的整数)中任一个置换后的化合物。
复合型天冬酰胺结合型糖链可以举出如式(6)表示的糖链。
(式中,R4和R5是氢原子、上述式(2)~(5)表示的基团,可以相同,也可以不同。但是R4和R5都是氢或式(5)时,R4或R5是氢原子,另一个R4或R5为式(5)的情况除外。)
该复合型天冬酰胺结合型糖链可以根据例如国际公开公报wO03/008431号公报合成。另外也可以使用酶从糖蛋白切出糖链的方法或化学切断的方法。作为酶可以使用糖肽酶A或N-聚糖酶。作为化学切断法可以通过肼分解制造糖链。
氨基化复合型糖链衍生物是将与复合型天冬酰胺结合型糖链的1位的碳结合的羟基用-NH-(CO)-CH2X-、-NH-(CO)-(CH2)b-CH2X、异硫氰酸酯基、-NH-(CO)a-(CH2)b-CO2H、-NH-(CO)a-(CH2)b-CHO(X表示卤素原子、a为0或1,b表示1~4的整数)中任一个置换后的化合物。例如,可以用下面式(1)表示。其中作为卤素原子可举出如氟、氯、溴、碘。
(式中,R1~R3与上述相同)
氨基化复合型糖链衍生物可以用众所周知的方法进行制造,例如只要使带有-NH-(CO)-(CH2)b-CH2X、异硫氰酸酯基、-NH-(CO)a-(CH2)b-CO2H、-NH-(CO)a-(CH2)b-CHO(X表示卤素原子、a为0或1,b表示1~4的整数)的化合物与氨基化复合型糖链衍生物反应就可以制造。具体来说,当R1为-NH-溴乙酰基时,在缩合剂存在下,于溶剂中使1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链与溴乙酸反应。作为溶剂,只要是1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链和溴乙酸溶解的溶剂就可以,例如水、DMF等。作为缩合剂,例如1-均三甲基苯基磺酰基-3-硝基-1,2,4-三氮杂茂环(MSNT)、二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)等,相对于1摩尔1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链优选使用1~10摩尔缩合剂。而相对于1摩尔1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链优选使用1~10摩尔溴乙酸。反应通常在0~80℃下、优选10~60℃下,更优选15~35℃下进行,通常进行30分钟~5小时就可以。反应结束后,可以适当地用众所周知的方法[例如高效液相层析(HPLC)]进行精制。
本发明的结合了1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链的糖肽是在任意的氨基酸经肽键结合的肽上通过该肽的巯基使1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链结合的糖肽。
本发明中所说的肽指的是2个或2个以上同种或异种氨基酸经一方的羧基与另一方的氨基之间脱水形成酰胺键、即肽键(-CO-NH-)生成的化合物。由约10个以下氨基酸构成的比较小的肽称为寡肽,10个以上氨基酸构成的肽称为多肽。多肽中包括蛋白质。
肽可以通过固相合成法、液相合成法、对由细胞合成、天然存在的肽进行分离提取的方法等可以获得。
本发明的结合了1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链的糖肽可以通过使氨基化复合型糖链衍生物与含有巯基的肽反应进行制造。反应通常在0~80℃下、优选10~60℃下,更优选15~35℃下进行,通常进行30分钟~5小时就可以。反应结束后,可以适当地用众所周知的方法[例如高效液相层析(HPLC)]进行精制。具体来说,使氨基化复合型糖链衍生物和含有巯基的肽于磷酸缓冲液中、在室温下反应。反应结束后通过HPLC进行精制就可以获得本发明的结合了1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链的糖肽。
另外,通过上述制造方法使氨基化复合型糖链衍生物与事先结合了糖或糖链的含有巯基的糖肽反应,可以获得含有多个糖或糖链的结合了1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链的糖肽。
另外,通过使氨基化复合型糖链衍生物与事先结合了糖或糖链的含有巯基的糖肽反应,通过切断预先含有的糖或糖链,可以获得结合了1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链的糖肽。此时,在对预先含有的糖或糖链进行切断时,例如优选使用酶进行酶切。可以在氨基化复合型糖链衍生物导入前,也可以在导入后切都可以,最好是在切断的同时将氨基化复合型糖链衍生物导入肽中。作为进行切断的酶只要是切断肽和糖或糖链的还原末端的酶(糖水解酶)就可以,例如可以使用PNGase F等。反应通常在0~80℃下、优选10~60℃下,更优选15~35℃下进行,通常进行30分钟~5小时就可以。反应结束后,可以适当地用众所周知的方法[例如高效液相层析(HPLC)]进行精制。
本发明的结合了1-氨基-复合型天冬酰胺结合型糖链的糖肽比天然存在的复合型天冬酰胺结合型糖肽在对糖水解酶的抗性上更优越(难被水解)。因此,在血中的稳定性提高,血中寿命延长。
本发明的结合了氨基化复合型糖链衍生物的糖肽由于肽的氨基酸序列、糖链的结合位置或糖链的结构和种类均一,所以该糖肽作为生理活性分子时(例如抗体),生理活性分子的生理活性是均一的。
本发明的结合了氨基化复合型糖链衍生物的糖肽的制造方法可以对有选择地与肽的巯基结合的氨基化复合型糖链衍生物在任意位置有选择地导入复合型天冬酰胺结合型糖链。
本发明的结合了氨基化复合型糖链衍生物的糖肽的制造方法可以制造高分子量(例如分子量1万以上)的糖肽。
本发明的结合了氨基化复合型糖链衍生物的糖肽的制造方法可以不破坏糖肽的折叠将任意的复合型天冬酰胺结合型糖链有选择地导入任意位置。
具有实施方式
以下给出参考例和实施例,对本发明进行具体说明,但本发明并不限定于这些例子。
参考例1(二唾液酸糖链天冬酰胺的合成)
使粗精制的SGP(唾液酸基糖肽(シアリルグリコペプチド))500mg和叠氮钠10mg(319μmol)溶解于25ml Tris-盐酸-氯化钙缓冲液(TRIZMA BASE 0.05mol/l,氯化钙0.01mol/l,pH7.5)。然后向该溶液中加于5ml Tris-盐酸-氯化钙缓冲液中溶解了50mg的肌动蛋白酶-E(蛋白质分解酶,科研制药),于37℃下静置。115小时后,将溶液冷冻干燥。将残留物用凝胶过滤柱层析精制2次,得到252mg二唾液酸糖链天冬酰胺。
1H-NMR(30℃)δ5.13(s,1H,Man 4-H-1),5.07(d,1H,J=9.5Hz,GlcNAc1-H-1),4.95(s,1H,Man 4-H-1),4.77(s,1H,Man 3-H-1),4.61(d,1H,J=7.6Hz,GlcNAc2-H-1),4.60(d,2H,J=7.6Hz,GlcNAc 5,5-H-1),4.44(d,2H,J=8.0Hz,Gal 6,6-H-1),4.25(bd,1H,Man 3-H-2),4.20(bdd,1H,Man 4-H-2),4.12(bd,1H,Man 4-H-2),2.94(dd,1H,J=4.5Hz,17.2Hz,Asn-βCH),2.85(dd,1H,J=7.0Hz,17.2Hz,Asn-βCH),2.67,2.66(dd,2H,J=4.6Hz,12.4Hz,NeuAc 7,7-H-3eq),2.07(s,3H,Ac),2.06(s,6H,Ac×2),2.02(s,6H,Ac×2),2.01(s,3H,Ac),1.71(dd,2H,J=12.4Hz,12.4Hz,NeuAc7,7-H-3ax)
参考例2(用Fmoc基保护了天冬酰胺的氨基氮的二唾液酸糖链天冬酰胺的合成)
使参考例1中得到的二唾液酸糖链天冬酰胺80mg(0.034mmol)溶解于2.7ml蒸馏水和4.1ml丙酮混合溶液中,然后加入9-芴基甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸盐(Fmoc-OSn)34.7mg(0.103mmol)和碳酸氢钠11.5mg(0.137mmol),于室温下搅拌2小时。通过TLC确认反应结束后,对溶液进行减压浓缩,除去丙酮。将残留物充填到结合了十八烷基甲硅烷基的硅胶柱(ODS柱)进行精制,得到目的Fmoc-二唾液酸糖链天冬酰胺60.1mg,收率68%。
1H-NMR(30℃)
8.01(2H,d,J=7.5Hz,Fmoc),7.80(2H,d,J=7.5Hz,Fmoc),7.60(2H,dd,J=7.5Hz,Fmoc),7.53(2H,dd,J=7.5Hz,Fmoc),5.23(1H,s,Man 4-H1),5.09(1H,d,J=9.4Hz,GlcNAc 1-H1),5.04(1H,s,Man 4-H1),4.86(1H,s,Man 3-H1),4.70~4.66(m,GlcNAc 2-H1 GlcNAc 5,5-H1),4.54(2H,d,J=7.9Hz,Gal 6,6-H1),4.44(1H,d,FmocCH),4.34(1H,bd,Man3-H2),4.29,(1H,bd,Man 4-H2),4.20(1H,bd,Man 4-H2),2.77(2H,dd,NeuAc 7,7-H3eq),2.80(1H,bdd,Asn-βCH),2.62(1H,bdd,Asn-βCH),2.14(18H,s×6,-Ac),1.80(2H,dd,NeuAc 7,7-H3ax)
参考例3(HOOC-Arg-Glu-Glu-Gln-Tyr-Cys-Ser-Thr-Tyr-Arg-Val-NH2的合成)
将HMPA-PEGA树脂370mg加入到固相合成用柱子,用CH2Cl2,DMF充分洗涤后用于反应。
使Fmoc-Arg(OtBu)-OH、1-均三甲基苯基磺酰基-3-硝基-1,2,4-三氮杂茂环(MSNT)、N-甲基咪唑溶解于CH2Cl2中后搅拌5分钟,然后加入到已经加入树脂的固相合成用柱中,于室温搅拌3小时。搅拌后将树脂用亚甲基氯化物、异丙醇、DMF进行清洗、干燥。然后用20分钟用20%乙酸酐DMF溶液将固相上未反应的羟基进行乙酰化封闭。用DMF将树脂洗涤后,通过使用20%哌啶/DMF溶液搅拌20分钟,脱去Fmoc基,得到树脂-Arg-NH2。用DMF洗涤后,使其干燥。
在该树脂上对谷氨酸(Glu)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、酪氨酸(Tyr)、半胱氨酸(Cys)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)、精氨酸(Arg)、缬氨酸(Val)同样进行缩合和Fmoc基的脱保护,得到树脂-Arg-Glu-Glu-Gln-Tyr-Cys-Ser-Thr-Tyr-Arg-Val-NH2。
谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、酪氨酸(Tyr)、半胱氨酸(Cys)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、精氨酸(Arg)、缬氨酸(Val)这些氨基酸使用对羧基进行了pfp酯化的Fmoc-AA-Opfp(AA=氨基酸),通过3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基(Dhbt)缩合。所有的缩合都是在DMF溶液中进行。
将树脂洗涤后,加95%TFA水溶液,于室温下搅拌3小时后切去树脂。将树脂过滤除去后,在室温下对反应溶液进行减压浓缩后,溶解在水中进行冷冻干燥。
参考例4(HOOC-Ser-Ser-Asn(disialooligo)-Cys-Leu-Leu-Ala-NH2的合成)
将HMPA-PEGA树脂370mg加入到固相合成用柱子,用CH2Cl2,DMF充分洗涤后用于反应。
使Fmoc-Ser(OtBu)-OH、1-均三甲基苯基磺酰基-3-硝基-1,2,4-三氮杂茂环(MSNT)、N-甲基咪唑溶解于CH2Cl2中后搅拌5分钟,然后加入到已经加有树脂的固相合成用柱中,于室温搅拌3小时。搅拌后将树脂用亚甲基氯化物、异丙醇、DMF进行清洗、干燥。然后用20分钟用20%乙酸酐DMF溶液将固相上未反应的羟基进行乙酰化封闭。用DMF将树脂洗涤后,通过使用20%哌啶/DMF溶液,搅拌20分钟,脱去Fmoc基,得到树脂-Ser-NH2。用DMF洗涤后,使其干燥。
然后,使用Fmoc-Ser(OtBu)-OH通过HOBt·H2O和DIPCDI进行缩合。
接下来将参考例2的Fmoc-二唾液酸糖链天冬酰胺溶解于DMSO、DMF1比1的混合溶剂中,使用HATU和DIPEA,于室温下搅拌24小时,使其缩合。用DMF洗涤后,在10%乙酸酐/2-丙醇∶甲醇中搅拌20分钟进行封闭。将树脂用2-丙醇、DMF洗涤后,在20%哌啶/DMF中搅拌20分钟,将Fmoc基脱去,用DMF将树脂洗涤。
在该树脂上对半胱氨酸(Cys)、亮氨酸(Leu)、亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala)同样进行缩合和Fmoc基的脱保护,得到树脂-Ser-Ser-Asn(disialooligo)-Cys-Leu-Leu-Ala-NH2。
半胱氨酸(Cys)、亮氨酸(Leu)、丙氨酸(Ala)这些氨基酸使用对羧基进行了pfp酯化的Fmoc-AA-Opfp(AA=氨基酸),通过3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基(Dhbt)缩合。所有的缩合都是在DMF溶液中进行。
将树脂洗涤后,加95%TFA水溶液,于室温下搅拌3小时后切断树脂。将树脂过滤除去后,在室温下对反应溶液进行减压浓缩后,溶于水进行冷冻干燥。将冷冻干燥品溶解于pH11氢氧化钠水溶液中,对苄酯进行水解后,用乙酸中和,经HPLC精制得到目的HOOC-Ser-Ser-Asn(disialooligo)-Cys-Leu-Leu-Ala-NH2。(YMC-Pack A-314S-5ODS柱300×6.0mm,展开溶剂:0.1%TFA水溶液B:0.1%TFA乙腈∶水=90∶10梯度A l00%0.60ml/min→B 100% 0.60ml/min 60分钟)。
参考例5(二唾液酸糖链合成)
将SGP(100mg)溶解于50mM磷酸缓冲液pH7.0中,加PNGase F(BioLabs Inc.1U)。于37℃下温育24小时,通过TLC(IPA∶1M NH4OAc=1∶1)确认反应结束后,进行冷冻干燥。冷冻干燥品用凝胶过滤柱层析(Sephadex G25 1.5cm×30cm,水,流速1.0ml/min)进行精制,得到产量74mg的二唾液酸糖链。
1H-NMR(400MHz,D2O)
δ5.28(bd,1H,GlcNAc 1-H-1a),5.23(s,1H,Man 4-H-1),5.03(s,1H,Man 4’-H-1),4.86(s,1H,Man 3-H-1),4.70(m,3H,GlcNAc 2,5,5’-H-1),4.53(d,2H,Gal 6,6’-H-1),4.34(bs,1H,Man 3-H-2),4.28(bd,1H,Man 4-H-2),4.20(bd,1H,Man 4’-H-2),2.76(bdd,2H,NeuAc 7,7’-H-3eq),2.17(s,3H,Ac),2.16(s,6H,Ac×2),2.13(s,6H,Ac×3),1.80(dd,2H,NeuAc 7,7’-H-3ax)
参考例6(氨基化)
将参考例5的二唾液酸糖链(10mg)溶解于饱和碳酸氢铵水溶液中,将浓度调整到30mM。于室温下反应,维持在常处于饱和的状态。使其反应7天,通过TLC(IPA∶1M NH4OAc=1∶1)确认反应基本结束后,将反应溶液直接进行冷冻干燥。为了除去碳酸氢铵,反复进行3次冷冻干燥,以粗制状态得到产量9mg的氨基化的二唾液酸糖链。
1H-NMR(400MHz,D2O)
δ5.22(s,1H,Man 4-H-1),5.03(s,1H,Man 4’-H-1),4.86(s,1H,Man 3-H-1),4.69(m,3H,GlcNAc 2,5,5’-H-1),4.53(d,2H,Gal 6,6’-H-1),4.34(bs,1H,Man 3-H-2),4.28(bd,1H,Man4-H-2),4.23(bd,1H,GlcNAc 1-H-1),4.20(bd,1H,Man 4’-H-2),2.76(bdd,2H,NeuAc 7,7’-H-3eq),2.17(s,3H,Ac),2.16(s,6H,Ac×2),2.12(s,6H,Ac×3),1.80(dd,2H,NeuAc 7,7’-H-3ax)
实施例1(溴乙酰化)
将参考例6的氨基化的二唾液酸糖链(粗制5mg)溶于100μl水,加碳酸氢钠2mg。然后加溶解在DMF(100μl)的溴乙酸6.2mg和DCC 4.6mg,于室温下使其反应。1.5小时后,通过TLc(IPA∶1M NH4OAc=2∶1)确认反应结束后,用碳酸氢钠进行中和,过滤后进行减压浓缩。然后用凝胶过滤柱层析(Sephadex G25,1.5cm×30cm,水,流速1.0ml/min)进行精制,得到产量4mg的溴乙酰化的二唾液酸糖链,产率为77%。
1H-NMR(400MHz,D2O)
δ5.22(s,1H,Man 4-H-1),5.16(bd,1H,GlcNAc 1-H-1),5.03(s,1H,Man 4’-H-1),4.86(s,1H,Man 3-H-1),4.70(m,3H,GlcNAc 2,5,5’-H-1),4.53(d,2H,Gal 6,6’-H-1),4.34(bs,1H,Man 3-H-2),4.28(bd,1H,Man 4-H-2),4.20(bd,1H,Man 4’-H-2),2.77(bdd,2H,NeuAc 7,7’-H-3eq),2.17(s,3H,Ac),2.15(s,6H,Ac×2),2.12(s,6H,Ac×2),2.10(s,3H,Ac),1.80(dd,2H,.NeuAc 7,7’-H-3ax)
实施例2
将实施例1的溴乙酰化的二唾液酸糖链2mg和参考例3中合成的肽链1.8mg(Arg-Glu-Glu-Gln-Tyr-Cys-Ser-Thr-Tyr-Arg-Val)溶解于170μl的100mM磷酸缓冲液pH7.0中,于室温下进行温育。用HPLC确认原料消失后,直接用HPLC[柱子:Mightysil-GP(5μm)、φ10×250mm,梯度:由0.1%三氟乙酸/水100%→0.1%三氟乙酸、乙腈/水=90/10 75%;60分钟线性,流速2.5ml]进行精制,得到产量为2mg的二唾液酸糖肽,产率64%。
1H-NMR(400MHz,D2O)
δ7.18(4H,Ph),6.89(4H,Ph),5.22(s,1H,Man 4-H-1),5.14(bd,1H,GlcNAc 1-H-1),5.04(s,1H,Man 4’-H-1),4.86(s,1H,Man 3-H-1),4.69-4.63(m,5H,GlcNAc 2,5,5’-H-1,Tyr-αH,Cys-αH),4.55-4.52(m,4H,Gal 6,6’-H-1,Gln-αH,Ser-αH),4.44-4.38(m,4H,Glu-αH×2,Arg-Hα,Thr-αH),4.34(bs,1H,Man 3-H-2),4.28(m,3H,Man 4-H-2,Thr-βH),4.23(d,1H,J=5.9Hz,Val-αH),4.20(bd,1H,Man 4’-H-2),4.15(1H,Arg-αH),3.30,3.25(each 2H,Arg-δCH2),3.14-2.99(6H,Cys-βH,Tyr-βH×2),2.76(bdd,2H,NeuAc 7,7’-H-3eq),2.57(2H,Gln- γCH2),2.49,2.35(each 2H,Glu-γCH2),2.23-2.10(m,3H,Val-βH,Gln-βH),2.16(s,3H,Ac),2.15(s,6H,Ac×2),2.12(s,6H,Ac×2),2.10-1.98(m,6H,Glu-βH×2,Arg-βH),2.07(s,3H,Ac),1.92-1.57(m,8H,NeuAc 7,7’-H-3ax,Arg-βH,Arg-γCH2×2),1.23(d,3H,Thr-γCH3),1.04(d,6H,Val-γCH3)
实施例3(使用1-溴乙酰基-二唾液酸糖链的替换)
将参考例4合成的二唾液酸糖肽1mg和实施例1的溴乙酰化的二唾液酸糖链1mg溶解于200μl的100mM磷酸缓冲液中,加入可将天冬酰胺结合型糖链从天冬酰胺切下的酶PNGase F(5U),于室温下使其反应。生成物通过用HPLC进行精制,得到目的的在半胱氨酸上结合了二唾液酸糖链的二唾液酸糖肽。
(YMC-Pack A-314 S-5 ODS柱300×6.0mm,展开溶剂:0.1%TFA水溶液B:0.1%TFA 乙腈∶水=90∶10梯度A 100% 0.60ml/min→B100% 0.60ml/min 60分钟)
试验例1(对糖水解酶的抗性)
将实施例3得到的二唾液酸糖肽1mg溶解于200μl的100mM磷酸缓冲液中,加入可将天冬酰胺结合型糖链从天冬酰胺切下的酶PNGaseF(5U),于室温下使其反应,测定二唾液酸糖链从肽上被切下的时间。直至被切下的时间是6小时。
将参考例4得到的二唾液酸糖肽1mg溶解于200μl的100mM磷酸缓冲液中,加入可将天冬酰胺结合型糖链从天冬酰胺切下的酶PNGaseF(5U),于室温下使其反应,测定二唾液酸糖链从天冬酰胺切下的时间。直至被切下的时间是30分钟。
就像该结果所表明的那样,可知与天然型结合型糖肽(参考例4)相比,对糖水解酶的抗性提高了。
实施例4
将Anti-CD20嵌合抗体(Mutant)(株式会社医学生物学研究所制造:通过突变技术,将氨基酸序列第297位的天冬酰胺变换为半胱氨酸的抗体)43.9μg和实施例1的溴乙酰化的二唾液酸糖链100μg溶解于300μl的100mM磷酸缓冲液中,于室温下温育。反应结束后,通过蛋白A柱层析和凝胶过滤层析进行精制,得到目的的在半胱氨酸上结合了二唾液酸糖链的抗体。抗体通过电泳(10%SDS-PAGE(用2-巯基乙醇):分子量标记是BIO-RAD公司生产prestained SDS-PAGEstandard broad range(目录号No161-0318))和MASS进行了确认。结果如图3所示。
利用本发明可以获得能够维持充分血中浓度的新的氨基化复合型糖链衍生物和糖肽。