CN1829731A - 硫代吗啉代甾族化合物、它们用于制备减数分裂调节药物的用途以及它们的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通式(I)的硫代吗啉代甾族化合物，其可以有利地用于刺激人卵母细胞的减数分裂，该甾族化合物的特定特征是通过亚烷基间隔基连接于该甾体骨架的C17上的硫代吗啉代基团。

Description

硫代吗啉代甾族化合物、它们用于制备减数分裂调节药物的用途以及 它们的制备方法
本发明涉及药学活性的硫代吗啉代甾族化合物、包含这些化合物的药物组合物、这些化合物用于制备适用于调节生殖特别是减数分裂的药物组合物、避孕药或促生育药物(profertility drug)的用途、调节生殖例如减数分裂的方法、提高卵母细胞发育成哺乳动物的可能性的方法以及制备(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇的方法。
减数分裂是生殖细胞的独特和最终事件，它是有性繁殖的基础。减数分裂包括两次减数分裂。在第一次分裂中，在染色体对分开为子细胞之前发生母系基因和父系基因的交换。它们仅含有半数(ln)染色体和2c DNA。第二次减数分裂的进行不伴有DNA合成。因此这次分裂导致仅含有1c DNA的单倍体生殖细胞的形成。
减数分裂在雄性与雌性生殖细胞中是相似的过程，但产生卵子和精子的时间进程和分化过程却有非常大的差异。所有的雌性生殖细胞在生命早期通常在出生之前进入第一次减数分裂前期，但是此后所有的雌性生殖细胞都以卵母细胞的形式停止在该前期(核网状态)中直至青春期后排卵。因此，从生命的早期雌性就具有了卵母细胞储备并直至该储备用尽。雌性中的减数分裂直至受精后才完成，而且每个生殖细胞仅产生一个卵子和两个流产极体(abortive polar body)。与此相反，雄性生殖细胞中仅有一些从青春期进入减数分裂，并在整个生命过程中产生很多生殖细胞。
对于控制雄性和雌性开始减数分裂的机制知之甚少。新研究表明卵泡嘌呤、次黄嘌呤和腺嘌呤可能是卵母细胞中减数分裂停滞的原因[S.M.Downs等，Dev.Biol.，82，454-458(1985)；J.J.Epplg.等，Dev.Biol.，119，313-321(1986)；S.M.Downs，Mol.Reprod.Dev.，35，82-94(1993)]。Byskov等首次描述了胎鼠性腺培养物体系中存在扩散性减数分裂调节物质[A.G.Byskov等，Dev.Biol.，52，193-200(1976)]。减数分裂激活物质(MAS)由正在进行减数分裂的胎鼠卵巢分泌，而减数分裂抑止物质(MPS)由形态学上已分化的具有静止的非减数分裂的生殖细胞的睾丸释放。已表明MAS和MPS的相对浓度调节雄性和雌性生殖细胞减数分裂的开始、停止和重新开始[A.G.Byskov等，在The Physiology of Reproduction(E.Knobil和J.D.Neill编著)中，RavenPress，New York(1994)]。显然，如果可以调节减数分裂，生殖就可以控制。最近的一篇文章[A.G.Byskov等，Nature，374，559-562(1995)]描述了某些甾醇的分离。这些甾醇从牛睾丸和卵泡液中分离出来，它们激活卵母细胞的减数分裂[T-MAS(睾丸减数分裂激活甾醇)和FF-MAS(卵泡液减数分裂激活甾醇)：4，4-二甲基-5α-胆甾-8，14，24-三烯-3β-醇]。
还表明微摩尔浓度的合成FF-MAS能够以剂量依赖性的方式在被磷酸二酯酶抑制剂IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)停滞的大鼠卵母细胞中诱导减数分裂的重新开始[C.Hegele-Hartung等，Biol.Reprod.，64，418-424(2001)]。证明了当在FF-MAS存在下将CEO(卵丘包裹的卵母细胞)和DO(裸卵母细胞)一起体外培养可以观察到这一作用。
其它调节减数分裂的物质在以下文献中描述。
在WO 98/52965 A1中描述了激活减数分裂的20-芳烷基-5α-孕烷衍生物。
在WO 00/68245A1中公开了能够抑制减数分裂因而可用作男性和女性避孕药的甾族化合物。这些化合物主要是不饱和胆甾烷衍生物，其特征是3β-氢原子连接于胆甾烷骨架的C14碳原子上。
在WO 96/00235A1中描述了诱导减数分裂的已知为胆固醇生物合成中间体的甾醇以及某些结构相关的合成甾醇。已发现这些物质可以调节减数分裂。与胆固醇相似，这些甾醇在甾醇骨架的C17上有侧链，且还具有Δ7、Δ8或Δ8(14)双键中的至少一个。
在WO 96/27658A1中公开了刺激生殖细胞减数分裂的方法，其包括给予体内细胞、离体细胞或体外细胞有效量的化合物，该化合物引起内源性减数分裂激活物质累积至可诱导减数分裂的水平。公开了引起内源性减数分裂激活物质累积的这些化合物是两性霉素B、氨基胍、3β，5α，6β-三羟基胆甾烷、梅拉通宁、6-氯梅拉通宁和5-甲氧基色胺以及它们的其它衍生物和激动剂。另外，还报道减数分裂激活物质有5α-胆甾烷-3β-醇，D-高-胆甾-8，14-二烯-3β-醇和22，25-二氮杂胆甾醇、25-氮杂-24，25-二氢羊毛甾醇、24，25-亚氨基羊毛甾醇、23-和24-氮杂胆甾醇以及25-氮杂胆甾醇衍生物。
在WO 97/00884A1和WO 98/28323A1中描述了可用于体外、体内或离体刺激减数分裂的物质。因此所公开的化合物是天然减数分裂激活物质的激动剂，而且因此可用于治疗雌性和雄性中由于减数分裂刺激不足导致的不育症。在该文献中还公开了一些可以是天然减数分裂激活物质拮抗剂的化合物，因此这些化合物可适合用作避孕药。所公开的化合物还包括5α-胆甾-8-烯-3β-醇和5α-胆甾-8，14-二烯-3β-醇，其中它们在连接于胆固醇骨架的C17的侧链上可具有氨基，该氨基通过C4间隔基连接于甾醇骨架上。C1-4烷基或C3-6环烷基连接于氨基上。
此外，在WO 99/58549A1中公开了有效调节减数分裂的甾醇衍生物。描述了这些化合物具有缓解雌性和雄性特别是人的不育症的能力。作为有效调节物质的甾醇衍生物特别是(20R)-20-甲基-23-二甲氨基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇、(20R)-20-甲基-23-二甲氨基-5α-孕-5，7-二烯-3β-醇、4，4-二甲基-24-苯氨基-5α-胆甾-8，14-二烯-3β-醇、4，4-二甲基-24-(N，N-二甲基氨基)-24-氰基-5α-胆甾-8，14-二烯-3β-醇以及在甾醇骨架中具有一个或多个双键的各种24-酸酰胺。
在WO 02/079220A2中描述了具有减数分裂调节能力的甾族化合物，这些化合物主要是具有连接于C20上的氨甲基或氨乙基基团的甾醇。氨基可以是例如含氮杂环，更具体地是哌啶环。这些化合物的一个实例是(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇。通常这些化合物对卵母细胞特别是CEO(＝卵丘包裹的卵母细胞)表现出刺激减数分裂的作用。在一个具体的实例中公开了一种硫代吗啉代化合物。
J.J.Sheets和L.E.Vickery在：“Active Site-directed Inhibitors ofCytochrome P-450scc”J.Biol.Chem.，Vol.258(19)，1983，第11446-11452页中也描述了在C17上的侧链中具有氨基的不饱和甾醇衍生物，描述了这些甾醇对牛肾上腺皮质胆固醇侧链裂解细胞色素P-450(P-450scc)的作用。在该文献中特别公开了22-氨基-23，24-双-去甲-胆-5-烯-3β-醇和23-氨基-24-去甲胆-5-烯-3β-醇。
A.T.Mangla和W.D.Nes在：“Sterol C-methyl Transferase fromPrototheca wickerhamii，Mechanism，Sterol Specificity Inhibition”Bioorg.and Med.Chem.(2000)，8(5)，925-936中报道了在C17上的侧链中具有氨基的其它不饱和衍生物。在该文献中特别公开了23-氮杂-酵母甾醇。
已发现当使用以前描述的减数分裂调节物质时体外裸卵母细胞重新开始减数分裂。但是，当刺激被粒细胞包围的卵母细胞(CEO)减数分裂时这些化合物中的很多却仅具有微弱的效果。体外受精率和进一步再转移植入率以及妊娠结束时胎儿成活数都不够高。
将上述文献的公开内容引入作为参考。
本发明的一个目的是找到可用于调节雌性和雄性，特别是哺乳动物，尤其是人的生殖，特别是减数分裂的物质。
本发明的另一个目的是提供包含所述新物质的新的药物组合物。
本发明的另一个优选的目的是提供所述新物质用于制备适用于调节生殖，特别是减数分裂的药物组合物的用途。
本发明的另一个优选的目的是提供调节生殖如减数分裂的新方法。
本发明的另一个目的是提供治疗人不育症的方法。
本发明的另一个目的是促进人卵母细胞的成熟。
本发明的再一个目的是促进核、胞浆和/或膜卵母细胞的同步成熟。
本发明的再一个目的是提高卵母细胞的生育力。
本发明的再一个目的是提高体外成熟和受精的人卵母细胞的植入率。
本发明的再一个目的是减少人胚前期染色体异常(非整倍性)的发生率。
本发明的再一个目的是提高人前期胚胎的分裂率。
本发明的再一个目的是提高人前期胚胎的质量。
本发明的另一个目的是提供制备所述新物质的方法。
根据本发明，通式I的硫代吗啉甾族化合物可以有利地用于调节哺乳动物例如雌性和雄性，特别是人的生殖例如减数分裂：
Figure A20048002156900101
其中在化合物I的I’部分中
Figure A20048002156900111
C5和C6之间、C6和C7之间、C7和C8之间、C8和C9之间、C8和C14之间、C14和C15之间的每个键独立地是单键或双键，这些键至少有一个是双键，且其中C5、C6、C7、C8、C9、C14和C15中每个碳原子至多通过一个双键连接于各自的相邻碳原子上，条件是在该甾体骨架中没有C5和C6之间的唯一双键(这后一条件表示只具有Δ5双键的化合物不包括在本发明之内)，且
其中
R4和R4’独立地选自氢和甲基。
本发明的甾族化合物中的通式I’的部分优选包含C8和C14之间的一个双键或者包含两个共轭双键，优选C8和C9之间及C14和C15之间的两个双键或者C5和C6之间及C7和C8之间的两个双键。
R4和R4’优选是相同基团，即它们都是氢或都是甲基。
其余氢原子可以连接于C1、C2、C5、C6、C7上，任选连接于C8、C9、C11、C12、C14、C15、C16和C17上，这取决于各自的C原子是否是双键的一部分。在C10、C13和C18中甲基分别连接于甾体骨架和侧链上。
根据本发明，更优选所述甾族化合物选自：
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇：
                       化合物IA
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8(14)-烯-3β-醇：
Figure A20048002156900122
                       化合物IB
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇：
                       化合物IC
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-孕-5，7-二烯-3β-醇：
Figure A20048002156900131
                   化合物ID
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-5α-孕-8(14)-烯-3β-醇：
Figure A20048002156900132
                   化合物IE。
根据本发明最优选的硫代吗啉代化合物是具有化学式IA的(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇。因此，用如果甾体骨架含有Δ8，14双键系统且如果R4和R4’是甲基(化合物IA)的硫代吗啉代衍生物诱导卵泡培养物体系成熟达到最佳性能。
这些新的甾族化合物具有多个手性中心，因此这些化合物以几种异构体形式存在。除非本文另外说明，所有这些异构体形式都在本发明的范围之内。
已令人惊奇地发现，本发明的化合物对卵母细胞特别是CEO具有很强的减数分裂刺激作用，尽管这些化合物与甾醇FF-MAS的结构差异很大。在这方面，本发明的化合物优于以前描述过的减数分裂调节物质[例如：A.G.Byskov等，Nature，374，559-562(1995)]。优选的通式I的化合物是当在如下文所描述的卵母细胞测试中测试时诱导至少40％、优选至少60％、特别是至少80％的生发泡破裂的那些化合物。
本发明的化合物优于以前描述的化合物的第二个方面是：FF-MAS不能诱导卵泡培养物体系的成熟，而本发明的化合物却能够在这种情况下激活减数分裂。
与WO 02/079220A2中公开的化合物相比，本发明的硫代吗啉代甾族化合物表现出更强的成熟刺激活性，特别是在体外受精中，和体外受精后更高的再转移至雌性的输卵管(tube)中的成功再转移率。另外，如果刺激的卵母细胞的再转移已经实施，所述新化合物在妊娠结束时胎儿成活数方面表现优异的特性。而且，本发明化合物在水中的溶解度高于现有技术中的化合物。如在小鼠中所示，还发现生发泡的生长受到更好的刺激。
对于本发明的硫代吗啉代化合物，当它们与WO 02/079200A2中公开的最有效的化合物相比，特别是与(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(该文献中的2号化合物)相比时，这些新化合物的上述优点也是如此。
由于这一原因，这些新的甾族化合物可以例如用于体内用途以及特别地包括体外用途在内的非体内用途。该甾族化合物特别适用于哺乳动物特别是人的体外和体内受精。
这些新化合物的优异性质可归因于该化合物中结构特征的组合，即主要是双键在甾体骨架中的位置和通过亚甲基间隔基与甾体骨架的C17碳原子相连的侧链中的硫代吗啉代基团以及C20-R20基团。
优选的本发明的药学可接受的化合物是通式I的甾族化合物的盐。这些盐的实例列于Journal of Pharmaceutical Science，66，2et seq.(1977)中，该文献在此引入本文作为参考。这种盐的实例包括有机酸如甲酸、富马酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸等的盐。形成药学可接受的盐的合适的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等。
本发明的另一个目的是提供包含至少一种通式I的硫代吗啉代甾族化合物和至少一种药学可接受的赋形剂的药物组合物，所述赋形剂选自本领域熟知的赋形剂。赋形剂例如可以是至少一种载体、稀释剂、吸收促进剂、防腐剂、缓冲剂、药物组合物是液体时用于调节药物的渗透压和流变学性质的试剂、至少一种表面活性剂、溶剂、片剂崩解剂、微胶囊、填充剂、润滑添加剂、着色剂、调味剂以及其它成分。这些物质是本领域常规使用的。本发明的硫代吗啉代甾族化合物优选以有效量包含于药物组合物中。
固体载体的实例是碳酸镁、硬脂酸镁、糊精、乳糖、蔗糖、滑石粉、明胶、果胶、淀粉、硅胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡和可可脂。
液体组合物包括无菌溶液剂、混悬剂和乳剂，它们可以例如口服给药、经鼻给药或者以软膏的形式给药。这些液体组合物也适用于注射或用于与离体或体内应用有关的用途。对于口服给药，该液体可以包含药学可接受的油和/或亲脂性表面活性剂和/或与水混溶的溶剂。在此方面参考WO 97/21440A1。
液体组合物还可以包含本领域常规使用的其它成分，这些成分中的一些在以上的列表中已提及。另外用于经皮给予本发明化合物的组合物可以以药贴的形式提供。用于经鼻给药的组合物可以以液体或者粉末状的鼻腔喷雾剂形式提供。
为增加硫代吗啉代甾族化合物的生物利用度，这些化合物还可以配制成环糊精包合物。为此目的，将这些化合物与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物复合。
外用给药的药膏、软膏、洗剂和其它液体必须能够将本发明的硫代吗啉代甾族化合物以足够的量递送至需要调节减数分裂的个体。为此目的，药物中包含上述用于调节药物的流变学性质的赋形剂和其它添加剂、用于增强皮肤渗透能力的其它物质和护肤物质如调理剂和水分调节剂。
该药物还可以包含用于增强或调节硫代吗啉代甾族化合物的效力或产生该药物的其它期望作用的其它活性剂。
对于肠胃外给药，甾族化合物可以溶解或悬浮于药学可接受的稀释剂中。油通常与溶剂、表面活性剂、混悬剂或乳化剂组合使用，所述油例如橄榄油、花生油、豆油、蓖麻油等。对于制备注射用药物可以使用任何液体载体。这些液体通常还包含用于调节其粘度的活性剂和用于调节液体等渗性的活性剂。
硫代吗啉代甾族化合物还可以作为可注射贮存单元(injectabledepot)或植入物给药，它们例如可通过皮下给药，使得可能实现硫代吗啉代甾族化合物的缓释。为此目的，可以使用各种技术，例如通过包含含有活性化合物的膜的贮存单元给药，或通过缓溶贮存单元给药。植入物可以例如包含可生物降解的聚合物或作为惰性材料的合成硅酮。
硫代吗啉代甾族化合物的使用剂量可由医生确定并取决于所使用的具体甾族化合物、给药途径和使用目的。通常地，本发明的药物组合物通过如下步骤制备：将活性化合物与液体或固体辅助成分紧密混合，然后如果需要，将产物制成期望的制剂。
每日给予哺乳动物例如给予人的甾族化合物通常不超过3000mg，优选不超过350mg，在某些优选情况下不超过30mg。
本发明还涉及通式I的硫代吗啉代甾族化合物用于制备用于调节生殖例如减数分裂的组合物的用途。该组合物优选可以作为药物应用。
本发明还涉及通式I的新的硫代吗啉代甾族化合物用于制备避孕药或促生育药物的用途。
本发明还涉及通式I的硫代吗啉代甾族化合物用于非体内使用的用途。
本发明还涉及调节生殖例如减数分裂的方法，其包括给予需要这种调节的个体有效量的至少一种通式I的硫代吗啉代甾族化合物。
本发明还涉及用于提高卵母细胞发育成为哺乳动物的可能性的方法，其包括使从哺乳动物中取出的卵母细胞与通式I的硫代吗啉代甾族化合物接触。
本文所用的调节生殖例如减数分裂是指本发明的化合物尤其适合于刺激哺乳动物特别是人的卵母细胞的生殖例如减数分裂，因此这些作为天然减数分裂激活物质(FF-MAS)激动剂类似物的化合物可以用于治疗雌性和雄性中由于减数分裂激活不足而引起的不育症。
给予包含本发明化合物的组合物的给药途径可以是任何能够将活性甾族化合物有效地转运至它的作用部位的途径。
因此，当将所述甾族化合物给予哺乳动物时，这些药物组合物以药物组合物的形式方便地提供，该组合物包含至少一种本发明的硫代吗啉代甾族化合物和药学可接受的载体。在口服使用时，这种组合物优选是片剂或胶囊剂的形式。
所述硫代吗啉代甾族化合物可以通过与已知化合物的制备相似的方法合成。因此，式I的甾族化合物的合成可以按照详尽的甾醇和甾族化合物文献中描述的成熟的合成途径来进行。以下文献可以用作合成方法的主要来源：L.F.Fieser & M.Fieser：Steroids，ReinholdPublishing Corporation，N.Y.，1959；Rood′s Chemistry of CarbonCompounds(S.Coffrey编著)：Elsevier Publishing Company，1971；以及特别是Dictionary of Steroids(R.A.Hill，D.N.Kirk，H.L.J.Makin和G.M.Murphy编著)，Chapman & Hall，这些文献在此引入本文作为参考。最后一篇文献包括了对涵盖直至1990年的原文的广泛的引用目录。
本发明还特别地涉及制备(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)的方法，该方法包括以下方法步骤：
a)从(20S)-20-羟甲基-孕-4-烯-3-酮开始；
b)通过烷基化在C4上引入两个烷基；
c)将酮基还原为羟基；
d)用酰基，优选用苯甲酰基保护所得的羟基；
e)通过溴化/脱去溴化氢引入Δ7双键；
f)通过在酸存在下加热使二烯Δ5，7异构化为二烯Δ8，14；
g)将20-羟基氧化为醛基；
h)用硫代吗啉将醛基还原胺化，并通过还原反应除去苯甲酰基。
该第一合成方法的相应的合成路线如图1(路线1)所示。根据该路线，首先(20S)-20-羟甲基-孕-4-烯-3-酮1侧链中的羟基被保护为甲硅烷基醚例如三异丙基甲硅烷基(TIP)醚，得到化合物2(方法步骤a)。为制备化合物3，在碱如叔丁醇钾存在下通过用甲基碘烷基化来在甾体骨架的C4中引入两个甲基(方法步骤b)。在下一步中，用常规还原剂如氢化铝锂或硼氢化钠还原3-酮基(方法步骤c)。然后将所得的醇4保护为例如苯甲酸酯(化合物5，方法步骤d)。然后经溴化/脱去溴化氢反应顺序引入第二个双键(方法步骤e)。然后将化合物6中所得的Δ5，7-二烯系统通过在盐酸存在下加热使之异构化为Δ8，14-二烯系统，得到化合物7(方法步骤f)。在这一酸催化步骤中，只有侧链中的羟基被去保护，并得到化合物7。结果侧链中的羟基与Dess-Martin-Periodinane发生选择性氧化反应，得到醛8(方法步骤g)，其作为通过还原胺化在侧链中引入硫代吗啉基团的中间体。为此目的，可以使用不同的还原剂如硼氢化钠或三(乙酰氧基)硼氢化物。还原胺化后，在LiAlH4的还原条件下在同一容器处理中将3-苯甲酸酯去保护(方法步骤h)。结果得到本发明的甾族化合物I。
在方法步骤d)中代替形成苯甲酸酯可以将另外的保护酰基如乙酰基引入。如果立即形成乙酸酯而不是苯甲酸酯，方法步骤f)中的羟基去保护不仅发生在侧链还发生在C3位。在这种情况下，相应的醛的选择性氧化必须小心进行以防止C3位的羟基氧化。如果方法步骤d)中形成苯甲酸酯，只有侧链中的羟基发生氧化。由于方法步骤d)后所得到的产物开始结晶，如果使用苯甲酸酯保护基团，中间体8的纯化可能更简单。这还能够减少纯化步骤。因此优选形成苯甲酸酯。
关于合成C4位没有甲基和/或甾体骨架中有另一个双键模式的甾族化合物的方法参见WO 02/079220A2，其相关的公开内容引入本文作为参考。
以下给出实施例以更详细地描述本发明。
实施例1：(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)
a)(20S)-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-4-烯-3-酮(方法步骤a)
在室温下，向30g(20S)-20-[(羟甲基)-孕-4-烯-3-酮和13.5g咪唑在300ml二氯甲烷中的溶液中滴加26ml的三异丙基甲硅烷基氯。将反应混合物在相同的温度下搅拌20小时，然后倾倒入水中。用乙酸乙酯萃取水层。合并有机层，用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发，得到45.4g粗制(20S)-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-4-烯-3-酮，为棕色油状物，使用时未进一步纯化。
MS(C1+)：487(M+H)
b)(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3-酮(方法步骤b)
在50℃的温度下，将45.4g粗制(20S)-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-4-烯-3-酮在320ml四氢呋喃中的溶液加入42.3g叔丁基钾在950ml叔丁醇的溶液中。将混合物在相同的温度下搅拌10分钟。然后加入50ml甲基碘，继续搅拌1小时。将反应混合物倾倒入水中，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发。残余物经柱色谱纯化，得到27.3g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3-酮，为淡黄色固体。
MS(C1+)：515(M+H)
c)(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3β-醇(方法步骤c)
在室温下，向27.3g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3-酮在500ml四氢呋喃中的溶液中小心分批加入1.24g氢化铝锂。将反应混合物搅拌1小时，然后冷却至0℃。依次加入2.5ml水、2.5ml 1N氢氧化钠溶液和7.5ml水。将混合物通过硅藻土(celite)过滤。减压蒸发滤液。残余物经柱色谱法纯化，得到18.2g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3β-醇，为淡黄色固体。
MS(C1+)：517(M+H)
d)(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3β-醇乙酸酯(方法步骤d)
在室温下，向18.2g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3β-醇在175ml吡啶中的溶液中加入6.24ml乙酸酐。将反应混合物搅拌20小时，然后倾倒入冰/盐酸的混合物中，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并减压蒸发，得到16.2g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3-醇乙酸酯，为白色固体，使用时未进一步纯化。
MS(C1+)：559(M+H)
e)(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5，7-二烯-3β-醇乙酸酯(方法步骤e)
在70℃下，向16.2g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3β-醇乙酸酯在100ml苯和100ml己烷的混合物中的溶液中分批加入4.93g 1，3-二溴-5，5-二甲基-乙内酰脲。30分钟后将混合物冷却至0℃，过滤。真空蒸发滤液。
向所得残余物中加入160ml甲苯和7.8ml 2，4，6-三甲基吡啶。将混合物回流2.5小时。冷却后，用1N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤反应混合物。用硫酸钠干燥有机层，过滤，并真空蒸发。残余物经柱色谱法纯化，得到12.5g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5，7-二烯-3β-醇乙酸酯，为白色固体。
MS(C1+)：557(M+H)
f)(20S)-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-3β，21-二醇(方法步骤f)
将16.1g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5，7-二烯-3β-醇乙酸酯、210ml乙醇、28ml苯和28ml浓盐酸的混合物回流6小时。冷却后，将混合物倾倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩。残余物从二氯甲烷和甲醇中重结晶，得到4.48g(20S)-21-羟基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-3β-醇
MS(E1+)：358(M)
g)(20S)-3β-羟基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醛(方法步骤g)
在室温下，向1g(20S)-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-3β，21-二醇在10ml二氯甲烷中的溶液中加入5.4ml 0.5M Dess-Martin-Periodinane溶液。将混合物搅拌1小时，倾倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩。残余物经柱色谱纯化后，得到230mg(20S)-3β-羟基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醛，为白色固体。
MS(EI+)：356(M)
h)(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(方法步骤h)
在室温下，将38mg三(乙酰氧基)硼氢化钠加入42mg(20S)-3β-羟基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醛和20μl硫代吗啉在3ml四氢呋喃中的溶液中。将混合物搅拌2小时，倾倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩。残余物经柱色谱纯化后，得到15mg(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇，为白色固体。
MS(E1+)：443(M)
NMR谱与其结构一致。
X射线结构分析也证实了该结构。
实施例2：根据反应路线1图1的反应
重复实施例1的反应，制备中间体化合物5、6、7和8的苯甲酸酯类似物。为此目的，将几个方法步骤中的反应条件作如下修改：
方法步骤a)TIPSCI、咪唑、CH2Cl2，室温，4小时反应时间
方法步骤b)叔丁基钾、甲基碘、叔丁醇，室温，30分钟反应时间
方法步骤c)LiAlH4、四氢呋喃，室温，30分钟反应时间
方法步骤d)苯甲酰氯、吡啶，0℃，1小时反应时间；结晶；4步52％
方法步骤e)1，3-二溴-5，5-二甲基-咪唑烷-2，4-二酮、苯、己烷，70℃，30分钟反应时间；然后2，4，6-三甲基吡啶、甲苯、回流，2小时反应时间
方法步骤f)HCl、乙醇，回流，4小时反应时间，色谱，2步70％
方法步骤g)Dess-Martin-Periodinane、CH2Cl2，室温
方法步骤h)硫代吗啉、NaBH(OAc)3、四氢呋喃，室温，6小时反应时间；
然后与LiAlH4反应，室温；18小时反应时间，色谱，乙醇(2x)结晶，收率：2步19％，并纯化(纯度＞93％)。
这一反应顺序的总收率计算为8步6.9％。
本文以下详细描述反应顺序和反应条件：
a-d)(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3β-醇苯甲酸酯(化合物5，参见路线图1)(方法步骤a、b、c、d)
该化合物的合成与实施例1方法步骤a、b、c、d中描述的乙酸酯路线类似，其描述也见于Organic Letters，5，1837-1839(2003)。苯甲酰化后仅进行一步结晶作为纯化步骤。步骤a、b、c、d的总收率是52％。
e)(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5，7-二烯-3β-醇苯甲酸酯(化合物6，参见路线图1)(方法步骤e)
在70℃下，向30.0g(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基]-孕-5-烯-3β-醇苯甲酸酯在160ml苯和160ml己烷的混合物中的溶液中分批加入9.81g 1，3-二溴-5，5-二甲基-乙内酰脲。30分钟后将混合物冷却至0℃并过滤。真空蒸发滤液。
向所得残余物中加入280ml甲苯和12.7ml 2，4，6-三甲基吡啶。将混合物回流2.5小时。冷却后用0.5N盐酸、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤反应混合物。用硫酸钠干燥有机层，过滤并真空蒸发，得到31.8g粗制(20S)-4，4-二甲基-20-[((三异丙基)氧基)甲基]-孕-5，7-二烯-3β-醇苯甲酸酯，使用时未进一步纯化。
f)(20S)-3β-苯甲酰氧基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醇(化合物7，参见路线图1)(方法步骤f)
将31.8g(20S)-4，4-二甲基-20-[(三异丙基)氧基]甲基]-孕-5，7-二烯-3β-醇苯甲酸酯、467ml乙醇、67ml苯和67ml浓盐酸的混合物回流5小时。冷却后将混合物倾倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩。残余物经柱色谱法纯化后，得到15.7g(20S)-3β-苯甲酰氧基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醇。
g)(20S)-3β-苯甲酰氧基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醛(化合物8，参见路线图1)(方法步骤g)
在0℃下，向17.6g(20S)-3β-苯甲酰氧基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醇在470ml四氢呋哺和4.1ml吡啶中的溶液中加入17.3mlDess-MartinPeriodinane。将混合物搅拌30分钟，暖至室温，倾倒入pH为7的柠檬酸盐缓冲液中，用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩，得到17.6g粗制(20S)-3β-苯甲酰氧基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醛，使用时未进一步纯化。
h)(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物I，参见路线图1)(方法步骤h)
在室温下，将3.9g三(乙酰氧基)硼氢化钠加入8.8g粗制(20S)-3β-苯甲酰氧基-4，4，20-三甲基-孕-8，14-二烯-21-醛和2.7ml硫代吗啉在400ml四氢呋喃中的溶液中。将混合物搅拌2小时，然后分批加入10.56g氢化铝锂，用NaOH和水终止反应，用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤并减压浓缩。残余物经柱色谱和从乙醇中两次连续结晶来纯化，得到1.67g(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4，-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇，为白色固体(1.43g+0.24g，两次结晶获得的产物)。
所有的化合物都经1H-NMR和MS表征。经X射线结构分析最终证明(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)的结构。
化学和理化特征以及制剂(溶解度)：
可以证明引入含氮侧链增加所述化合物在水中的溶解度(浊度法测量)。
发现FF-MAS在水中的溶解度只有＜0.1％mg/l。测量(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)在水中溶解度为～4mg/l。
卵母细胞体外成熟和受精(生物测试体系)：
a)卵丘包裹的卵母细胞测定：
测试的详细描述：
MI停止的卵母细胞的激活可通过生发泡(GV)的消失来评价。称为生发泡破裂(GVB)的GV的消失后，排出第一个极体(PB)(C.Grndahl，J.L.Ottesen，M.Lessl，P.Faarup，A.Murray，FC Grnvald，C.Hegele-Hartung，I.Ahnfelt-Rnne，″Meiosis-activating sterol promotesresumption of meiosis in mouse oocytes cultured in vitro in contrast torelated oxysterols″，Biol.Reprod.，58，1297-1302(1998)；C.Hegele-Hartung，J.Kuhnke，M.Lessl，C.Grndahl，J.Ottesen，H.M.Beier，S.Eisner，U.Eichenlaub-Ritter，″Nuclear cytoplasmic maturationof mouse oocytes after treatment with synthetic meiosis-activating sterolin vitro″，Biol.Reprod.，61，1362-1372(1999))。
从体重为13-16克的未成熟雌性小鼠(C57BL/6J×DBA/2J F1)获得卵丘包裹的卵母细胞(CEO)，这些小鼠在控制的温度(20-22℃)、光照(灯光06:00-18:00)和相对湿度(50-70％)下饲养。小鼠接受腹膜内注射含20IU FSH的0.2ml促性腺激素。48小时后用颈脱臼处死动物。解剖取出卵巢，在Hx-培养基(见下)中在立体显微镜下用一副27号针手工破裂卵泡分离卵母细胞。将显示具有完整生发泡的卵丘包裹的卵母细胞置于α-极限必需培养基(不含核糖核苷的α-MEM，补充有8mg/ml人血清白蛋白(HSA)、0.23mM丙酮酸、2mM谷氨酰胺、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素)中。为使卵母细胞维持在生发泡期，在培养基中补充3mM次黄嘌呤，称为Hx-培养基。
从溶解在乙醇中的含1mg/ml的储备液制备(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)稀释液。向对照物中加入乙醇(3.8μl/ml)不影响对照水平。将CEO(35-45CEO，在0.4ml Hx-培养基中)在37℃下于含5％CO2空气的湿润气氛中培养24小时。对照孔(相同培养基而不加受试化合物)总是与测试孔同时培养。
培养期结束时分别计数有生发泡(GV)、生发泡破裂(GVB)和有极体(PB)的CEO数。％GVB定义为正在进行GVB的CEO数占该孔CEO总数的百分比，计算方法为：
％GVB＝(GVB数+PB数/CEO总数)×100
％PB定义为显示排出一个极体的CEO数占该孔CEO总数的百分比。
结果：
图2表示通过GVB和PB(n＝5；*p＜0.05)监测的(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)对CEO减数分裂的激活。新化合物IA在1μM(p＜0.01；n＝10)、3μM(p＜0.05；n＝7)和10μM(p＜0.001；n＝6)时显著增强减数分裂的激活。
用其它新化合物重复相同实验：
IB：(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8(14)-烯-3β-醇
IC：(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇
ID：(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-孕-5，7-二烯-3β-醇，和
IE：(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-5α-孕-8(14)-烯-3β-醇。
在次黄嘌呤(Hx)存在下的CEO减数分裂激活的结果显示在表1中。对于每个化合物进行两次实验，将结果与作为对照的Hx-培养基和浓度为10μM的FF-MAS相比较。
此外，还使用化合物IE测定了在Hx存在下CEO减数分裂激活的浓度依赖性，化合物IE是除了化合物IA之外最有效的受试化合物。与Hx-培养基、FF-MAS和(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(WO 02/079220A2中公开的2号化合物)相比较的减数分裂激活的浓度依赖性显示在表2中。
b)体外受精(IVF)
为研究(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)对IVF率的影响，使CEO在新化合物存在或不存在下体外成熟，然后进行IVF。FF-MAS和(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(WO 02/079220A2公开的2号化合物)作为对照化合物。由于临床处置中的体外成熟培养基将不含有次黄嘌呤，所以该新化合物未在任何培养基中使用，其因自发的减数分裂成熟导致卵母细胞几乎100％的减数分裂激活。因此随后的IVF的变化可能是由于受试化合物对胞浆成熟的作用。
年龄为21-24天的未成熟雌性小鼠(C57BL/6J×DBA/2J F1)作为卵母细胞供者。动物皮下注射10IU孕马血清促性腺激素(PMSG)以诱导卵泡生长。48小时后通过颈脱臼处死动物，解剖取出卵巢。用8周的雄性小鼠(C57BL/6J×DBA/2J F1)作为精子供者。
通过用一副27号针手工破裂卵泡从卵巢中分离出卵母细胞。选出显示完整GV的球形裸卵母细胞(NkO)和CEO并置于补充有8mg/ml人血清白蛋白(HSA)、0.23mM丙酮酸、2mM谷氨酰胺、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的α-极限必需培养基(不含核糖核苷的α-MEM，Gibco BRL，Gaithersburg；Cat.No.22561)。
将卵母细胞在含有0.4ml各自的卵母细胞培养基的4孔培养皿中在培养基中洗涤三次，不覆盖油层。在37℃下5％CO2空气的湿润气氛中在(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(化合物IA)、FF-MAS和(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(后两者是对比化合物)存在下培养卵母细胞。
卵母细胞培养基中补充有6.4％胎牛血清(FBS)。新化合物IA和提及的两个对比化合物的溶液从含有1mg/ml溶于无水乙醇中的化合物的储备液来制备。对照组与相应量的乙醇一起培养。
18-19小时的培养时间后，将卵母细胞进一步处理以进行体外受精。只有显示GVB或PB的卵母细胞定义为“体外成熟的卵母细胞”。不用受试化合物将卵母细胞简单地洗涤，然后转移至预先准备好的授精皿中，其中每500μl培养基中含有约600000个获能精子(从雄性小鼠的附睾中获得)。然后将培养皿在37℃和确定的气体条件(含5％CO2的空气)下，在上述用于卵母细胞成熟的补充有8mg/ml HAS、0.23mM丙酮酸、100IU青霉素/ml和100μg链霉素/ml的改良α-MEM中培养。
授精22-24小时后检查卵母细胞以检查受精情况并记录前核(PN)的数和2细胞期胚胎的数。受精率由到达PN或2-细胞胚胎期的卵母细胞数相对于授精的总数来确定。
结果：
图3表示新化合物IA和两个提及的化合物(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇(2号化合物)或FF-MAS组与载体对照组相比具有更高的小鼠卵母细胞受精率(*p＜0.05；***p＜0.001；n＝18)。图3a给出了占实验中使用的卵母细胞总数(每个实验每组中大约每组100个卵母细胞)的百分比的值。图3b给出了根据载体组标准化的作为刺激因子的数据。
再转移实验：
体外受精根据以上IVF实验中所述的进行。
再转移前一天，使处于动情前期周期状态的雌性受者小鼠(代孕母亲)与切除输精管的雄性小鼠交配以引起假孕。一天后进行阴道检查。具有阳性无精阴道栓的动物(交配成功)进入实验。该日定为妊娠第0日(＝无菌交配后第0日，p.c.第0日)。无菌交配后第0日在麻醉下将18个2细胞胚胎转移至代孕母亲的右侧输卵管中。对侧输卵管保留不用(检查假孕)。妊娠第19日处死代孕母亲。取出胚胎并检查。立即取出卵巢和子宫，记录植入位点、成活胎儿、死亡胎儿以及再吸收的数。将显然未妊娠的子宫置于10％硫化铵水溶液中约10分钟将子宫内膜中可能的植入位点染色。将每个成活胎儿分别称重，并通检查性腺确定其性别。
在生育力试验中，将269只小鼠随机分为6组，并植入7-10个体外受精卵。体外受精在载体(第1组)或物质(第2至6组)存在下进行。各组如表3中所示分配。
主要感兴趣的是与载体对照相比所述物质的提高生育力的能力。另外，还研究了与物质FF-MAS相比的提高。
主要感兴趣的变量是植入点数和成活胎儿数。
方法：
必须认为植入点和成活胎儿的数据具有二态特征，即它可以速率或以在转移卵的数方面成功和失败的数来表示。因此，D.Collett：″Modelling Binary Data″，2nd edition，Chapman & Hall/CRC，BocaRaton描述的方法是数据分析的适宜方法。
由于一组的成功比值与另一组的成功比值相比适于解释这些数据，因此该分析集中于比值比的计算。一组与另一组相比的比值比定义为：
比值比(第1组，第2组)＝or1，2＝比值(第1组)/比值(第2组)
其中组的比值可以用该组的失败数除成功数来估算。
为表述任何实验结果的显著性，比值比的95％置信区间的计算如下：
[exp(log(or1，2)/1.96·se(log(or1，2)))；exp(log(or1，2)+1.96·se(log(or1，2)))]
其中se(log(or1，2))是log比值比的标准误(相应公式参见D.Collett(2003))。
如果下置信限大于1，则可以说一组的比值显著高于另一组的比值。
与载体对照的比较：
计算所有组的成功数(即植入点数和成活胎儿数)和失败数(即转移卵数减去植入点数或成活胎儿数)作为计算比值比的基础。表4显示这些数和六组所得的比值。
五组与载体对照相比的比值比和它们的置信区间显示在表5中。
对于植入点数，化合物IA的两种剂量都显示比值的显著增加。这一新化合物在1μM时使成功植入的比值增加了51％，而在10μM时导致55％的更高的成功植入的机会。FF-MAS和2号化合物((20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇)都没有显示比值的显著增加。
较低剂量的化合物IA使成活胎儿的成功比值增加了70％。其它组与载体对照相比均未显示显著性差异。
与FF-MAS的比较：
第3-6组与FF-MAS(第2组)比较的比值比以及它们置信区间显示在表6中。
由于所有的置信区间都包括值1，所以在四种物质组和FF-MAS之间不能得出显著性差异的结论。
图4表示每个转移的2细胞胚胎的植入率，其在用FF-MAS(10μM)与1μM和10μM的新化合物IA处理的情况中达到更高的数。存活幼崽数显示在图5中。用FF-MAS和新化合物IA(1μM和10μM)处理后再次记录存活幼崽数。每组的妊娠率显示在图6中。
引人注意地，新化合物IA在浓度为0.1μM时已经对2细胞和胚泡率显示了有益的作用，在浓度为1μM时这一作用趋于更高。
应理解本文描述的实施例和实施方案只是为举例说明的目的，根据其的各种修改和变化以及本申请中描述的特征的组合对于本领域技术人员来说是显而易见的并包括在所述发明的精神和范围内以及所附的权利要求的范围内。本文引用的全部出版物、专利和专利申请在此引入本文作为参考。
          表1：在Hx存在下CEO减数分裂的激活
                        减数分裂激活(％)
  化合物，10μM   Hx(对照)   FF-MAS，10μM
  化合物IB   -   30   48
  15   24   32
  化合物IC   64   4   20
  69   20   16
  化合物ID   89   50   71
  58   32   56
  化合物IE   96   20   60
  80   12   28
                表2：在Hx存在下CEO减数分裂的激活
                        减数分裂激活(％)
          化合物IE   Hx(对照)   FF-MAS   2号化合物*)
  1μM   3μM   10μM   10μM   10μM
  44   24   60   17   24   48
*)(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇
表3：
  组号   描述
  1   载体对照
  2   FF-MAS，10μM
  3   2号化合物*)，1μM
  4   2号化合物*)，10μM
  5   化合物IA，1μM
  6   化合物IA，10μM
*)(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇
表4：每组成功数、失败数和比值
  变量   组号   描述   成功   失败   比值
  植入点数   1   载体对照   86   344   0.25
  2   FF-MAS，10μM   100   335   0.30
  3   2号化合物*)，1μM   97   357   0.27
  4   2号化合物*)，10μM   90   332   0.27
  5   化合物IA，1μM   120   317   0.38
  6   化合物IA，10μM   123   317   0.39
  成活胎儿数   1   载体对照   31   399   0.08
  2   FF-MAS，10μM   45   390   0.12
  3   2号化合物*)，1μM   32   422   0.08
  4   2号化合物*)，10μM   37   385   0.10
  5   化合物IA，1μM   51   386   0.13
  6   化合物IA，10μM   40   400   0.10
*)(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇
表5：与载体对照相比的比值比和置信限
  变量   组号   描述         95％置信限
  比值比   下限   上限
  植入点数   2   FF-MAS，10μM   1.19   0.86   1.65
  3   2号化合物*)，1μM   1.09   0.78   1.51
  4   2号化合物*)，10μM   1.08   0.78   1.51
  5   化合物IA，1μM   1.51   1.10   2.08
  6   化合物IA，10μM   1.55   1.13   2.13
  成活胎   2   FF-MAS，10μM   1.49   0.92   2.40
  3   2号化合物*)，1μM   0.98   0.58   1.63
  4   2号化合物*)，10μM   1.24   0.75   2.03
  儿数   5   化合物IA，1μM   1.70   1.07   2.71
  6   化合物IA，10μM   1.29   0.79   2.10
*)(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇
表6：与FF-MAS相比的比值比和置信限
  变量   组号   描述     95％置信限
  比值比   下限   上限
  植入点数   3   2号化合物*)，1μM   0.91   0.66   1.25
  4   2号化合物*)，10μM   0.91   0.66   1.25
  5   化合物IA，1μM   1.27   0.93   1.72
  6   化合物IA，10μM   1.30   0.96   1.76
  成活胎儿数   3   2号化合物*)，1μM   0.66   0.41   1.06
  4   2号化合物*)，10μM   0.83   0.53   1.32
  5   化合物IA，1μM   1.15   0.75   1.75
  6   化合物IA，10μM   0.87   0.55   1.36
*)(20S)-20-[(哌啶-1-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇

Claims (12)

1.通式I的硫代吗啉代甾族化合物
Figure A2004800215690002C1
其中在化合物I的I’部分中
C5和C6之间、C6和C7之间、C7和C8之间、C8和C9之间、C8和C14之间、C14和C15之间的每个键独立地是单键或双键，这些键至少有一个是双键，条件是在该甾体骨架中没有C5和C6之间的唯一双键，且
其中
R4和R4’独立地选自氢和甲基。
2.根据权利要求1的甾族化合物，其中通式I’的部分中C8和C14之间存在一个双键，或者C8和C9之间及C14和C15之间存在两个双键，或者C5和C6之间及C7和C8之间存在两个双键。
3.根据权利要求1和2之任一项的甾族化合物，其选自：
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇：
Figure A2004800215690003C1
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8(14)-烯-3β-醇：
Figure A2004800215690003C2
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇：
Figure A2004800215690003C3
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-孕-5，7-二烯-3β-醇：
(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-5α-孕-8(14)-烯-3β-醇：
Figure A2004800215690004C2
4.一种药物组合物，其含有至少一种权利要求1-3之任一项的通式I的硫代吗啉代甾族化合物和至少一种药学可接受的赋形剂。
5.根据权利要求4的药物组合物，其中所述通式I的甾族化合物以有效量被包含。
6.根据权利要求1-3之任一项的通式I的硫代吗啉代甾族化合物用于制备用于调节生殖特别是减数分裂的药物组合物的用途。
7.根据权利要求6的用途，用于非体内使用。
8.根据权利要求1-3之任一项的通式I的硫代吗啉代甾族化合物用于制备避孕药或促生育药物的用途。
9.一种调节生殖特别是减数分裂的方法，其包括给予需要这种调节的个体有效量的至少一种根据权利要求1-3之任一项的通式I的硫代吗啉代甾族化合物。
10.一种提高卵母细胞发育成为哺乳动物的可能性的方法，其包括使从哺乳动物中取出的卵母细胞与权利要求1-3之任一项的硫代吗啉代甾族化合物接触。
11.一种制备(20S)-20-[(硫代吗啉-4-基)甲基]-4，4-二甲基-5α-孕-8，14-二烯-3β-醇的方法，其包括：
a)从(20S)-20-羟甲基-孕-4-烯-3-酮开始；
b)通过烷基化在C4上引入两个烷基；
c)将酮基还原为羟基；
d)用酰基保护所得的羟基；
e)通过溴化/脱去溴化氢引入Δ7双键；
f)通过在酸存在下加热使二烯Δ5，7异构化为二烯Δ8，14；
g)将17-羟基氧化为醛基；
h)用硫代吗啉将醛基还原胺化，并通过还原反应除去酰基。
12.根据权利要求11的方法，其中所述酰基是苯甲酸酯基团。
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