CN1800852B - 一种改进速率法检测临床诊断试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种改进速率法检测临床诊断试剂。其特征在于，在速率法检测类诊断试剂中含有二硫苏糖醇。由于本发明在所述的临床诊断试剂中加入了二硫苏糖醇，可有效减缓还原型辅酶I(NADH，H+)和还原型辅酶II(NADPH，H+)的自行氧化，显著提高速率法检测类诊断试剂稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及涉及一种速率法检测临床诊断试剂，具体涉及一种含有辅酶I(化学名为尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸)或辅酶II(化学名为尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸磷酸)。
背景技术
目前，常用的速率法检测类诊断试剂主要有：
门冬氨酸氨基转移酶活力测定试剂、丙氨酸氨基转移酶活力测定试剂、α-羟丁酸脱氢酶活力测定试剂、乳酸脱氢酶活力测定试剂、尿素浓度测定试剂等。其中含有辅酶I(化学名为尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸)或辅酶II(化学名为尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸磷酸)，辅酶I或辅酶II是参与生物体内氧化还原反应的重要物质，有还原型(NADH，H+；NADPH，H+)和氧化型(NAD+；NADP+)两种形式。由于还原型辅酶I、II对340nm波长的光有特异吸收，而氧化型辅酶I、II在该波长的光吸收大大减弱，因此辅酶I被作为监测生化反应的指标，广泛应用于生化检测试剂，尤其是应用于速率法检测类临床诊断试剂中。
然而，还原型辅酶I(NADH，H+)和还原型辅酶II(NADPH，H+)化学性质不够稳定，在自然环境中可自行氧化，使得含有还原型辅酶的临床诊断试剂，主要是速率法检测类临床诊断试剂不稳定。
公开号为CN1179792A的中国专利申请，提供了一种保持还原型辅酶的方法，该方法利用一种酶和底物将已氧化的辅酶还原成还原型辅酶，这种催化反应速率缓慢，并不干扰测定时的化学反应，这样便可使得在储存过程中氧化的辅酶再生。但这种方法成本较高；而且，加入的酶本身也是不稳定的。美国专利US5654288公开了一种脂质体包裹来稳定还原型辅酶的方法，但脂质体带来的溶液浊度干扰测定结果。美国专利US5278044公开了一种用碱性碳酸缓冲液(PH9.5-11.0)稳定NADH的方法，但用于速率法检测类临床诊断试剂，碱性环境影响酶促反应，进而影响诊断结果。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是公开一种改进速率法检测临床诊断试剂，以克服现有技术不稳定的缺陷。
本发明的改进速率法检测临床诊断试剂，其特征在于，在速率法检测类诊断试剂中含有1-20mMol/L的二硫苏糖醇(1，6-Dithiothreitol，简写DTT)；
所说的改进速率法检测临床诊断试剂包括但不限于：
门冬氨酸氨基转移酶活力测定试剂、丙氨酸氨基转移酶活力测定试剂、α-羟丁酸脱氢酶活力测定试剂、乳酸脱氢酶活力测定试剂、尿素浓度测定试剂等，其中含有辅酶I(化学名为尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸)或辅酶II(化学名为尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸磷酸)，包括还原型(NADH，H+；NADPH，H+)或氧化型(NAD+；NADP+)。
本发明的临床诊断试剂可采用简单的物理混合方法制备。
由于本发明在所述的临床诊断试剂中加入了二硫苏糖醇，可有效减缓还原型辅酶I(NADH，H+)和还原型辅酶II(NADPH，H+)的自行氧化，显著提高速率法检测类诊断试剂稳定性。
具体实施方式
对比实施例1
α-羟丁酸脱氢酶测定试剂：
试剂A 三羟甲基氨基甲烷0.10mol/L
α-丁酮酸1.80mmol/L
Triton X-1000.50mol/L
叠氮钠1.00g/L
试剂B 还原辅酶I1.30mmol/L
叠氮钠1.00g/L
采用简单的物理混合方法制备。
4℃放置6个月后，测试血清，其变异度为11.3％。
实施例1
试剂A 三羟甲基氨基甲烷0.10mol/L
α-丁酮酸1.80mmol/L
Triton X-1000.50mol/L
叠氮钠1.00g/L
试剂B 还原辅酶I1.30mmol/L
二硫苏糖醇15mMol/L
叠氮钠1.00g/L
4℃放置6个月后，测试与对比实施例2同一份标准质控的血清，其变异度为3.2％。
采用简单的物理混合方法制备。
对比实施例2
普通丙氨酸氨基转移酶测定试剂
试剂A 三羟甲基氨基甲烷0.10mol/L
乙二胺四乙酸二钠盐5.00m mol/L
叠氮钠1.00g/L
丙氨酸45.25g/L
乳酸脱氢酶3.00KU/L
试剂B 3-环己氨基-2羟基-1-丙磺酸30mmol/L
α-酮戊二酸二钠盐12.00g/L
乙二胺四乙酸二钠盐5.00m mol/L
叠氮钠 1.00g/L
还原辅酶I 1.20mmol/L
采用简单的物理混合方法制备。
4℃放置6个月后，测试血清，其变异度为12.8％。
实施例2
稳定型丙氨酸氨基转移酶测定试剂
试剂A 三羟甲基氨基甲烷0.10mol/L
乙二胺四乙酸二钠盐5.00m mol/L
叠氮钠 1.00g/L
丙氨酸 45.25g/L
乳酸脱氢酶 3.00KU/L
试剂B 3-环己氨基-2羟基-1-丙磺酸30mmol/L
α-酮戊二酸二钠盐12.00g/L
乙二胺四乙酸二钠盐5.00m mol/L
叠氮钠 1.00g/L
二硫苏糖醇20mMol/L
还原辅酶I 1.20mmol/L
采用简单的物理混合方法制备。
4℃放置6个月后，测试与对比实施例2同一份标准质控的血清，其变异度为3.7％
Claims (5)
1.一种改进速率法检测临床诊断试剂，其特征在于，在速率法检测类诊断试剂中含有15-20mMol/L的二硫苏糖醇，以及在所述的临床诊断试剂中含有尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸或尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸磷酸。
2.根据权利要求1所述的临床诊断试剂，其特征在于，所说的改进速率法检测临床诊断试剂选自：
门冬氨酸氨基转移酶活力测定试剂、丙氨酸氨基转移酶活力测定试剂、α-羟丁酸脱氢酶活力测定试剂、乳酸脱氢酶活力测定试剂、尿素浓度测定试剂。
3.根据权利要求2所述的临床诊断试剂，其特征在于，尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸或尼克酰氨腺嘌啉二核苷酸磷酸包括还原型或氧化型。
4.根据权利要求2所述的临床诊断试剂，其特征在于，改进速率法检测临床诊断试剂为α-羟丁酸脱氢酶测定试剂，其组分和浓度为：
试剂A 三羟甲基氨基甲烷 0.10mol/L
α-丁酮酸 1.80mmol/L
Triton X-100 0.50mol/L
叠氮钠 1.00g/L
试剂B 还原辅酶I 1.30mmol/L
叠氮钠 1.00g/L。
5.根据权利要求2所述的临床诊断试剂，其特征在于，改进速率法检测临床诊断试剂为丙氨酸氨基转移酶测定试剂，其组分和浓度为：
试剂A 三羟甲基氨基甲烷 0.10mol/L
乙二胺四乙酸二钠盐 5.00m mol/L
叠氮钠 1.00g/L
丙氨酸 45.25g/L
乳酸脱氢酶 3.00KU/L
试剂B 3-环己氨基-2羟基-1-丙磺酸 30mmol/L
α-酮戊二酸二钠盐 12.00g/L
乙二胺四乙酸二钠盐 5.00m mol/L
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