CN1800384A - 降钙素原的制备方法 - Google Patents
降钙素原的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1800384A CN1800384A CN 200510061471 CN200510061471A CN1800384A CN 1800384 A CN1800384 A CN 1800384A CN 200510061471 CN200510061471 CN 200510061471 CN 200510061471 A CN200510061471 A CN 200510061471A CN 1800384 A CN1800384 A CN 1800384A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pct
- procalcitonin
- purifying
- obtains
- recombinant plasmid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010048233 Procalcitonin Proteins 0.000 title claims description 63
- CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N procalcitonin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CSSC1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 CWCXERYKLSEGEZ-KDKHKZEGSA-N 0.000 title claims description 63
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 17
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 6
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 claims description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 4
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 claims description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims description 3
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 abstract 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 208000010718 Multiple Organ Failure Diseases 0.000 description 4
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 3
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 3
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 3
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- YDTFRJLNMPSCFM-YDALLXLXSA-M levothyroxine sodium anhydrous Chemical compound [Na+].IC1=CC(C[C@H](N)C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 YDTFRJLNMPSCFM-YDALLXLXSA-M 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000012407 engineering method Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000029744 multiple organ dysfunction syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000004412 neuroendocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
降钙素原(PCT)的制备方法属于医药和生物工程技术领域，涉及一种临床上可以快速准确反应炎症指标的多肽PCT的制备方法，发明采用PCT cDNA以基因工程方法制备含116个氨基酸残基的PCT。用PCR技术将表达PCT的目的基因扩增，纯化其产物，将纯化的PCR产物予BamH I与Hind III双酶切后定向插入经同样双酶切的pet41a，获得重组质粒，再将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经培养扩增，抽提纯化，镍柱收集目标峰，真空冷冻干燥。本发明方法获得的降钙素原得率高、成本低，可以为制备临床诊断试剂提供大量的原材料。
Description
技术领域
本发明属于医药和生物工程技术领域，涉及一种临床上可以快速准确反应炎症指标的多肽的制备方法，具体为降钙素原(PCT)的制备方法。
背景技术
随着细菌耐药性、重症感染患者的增加，如何快速诊断炎症显得愈发重要。常规用于诊断炎症治疗过程的指标如体温、WBC计数、血沉或C反应蛋白(CRP)等，因其都不是十分可靠的指标，是非特异性参数，临床医生迫切需要一种快速准确反应炎症的指标来确诊。
降钙素原(PCT)是一种无激素活性的CT前肽，由116个氨基酸组成，分子量为13kD，由CALC-1基因编码，半衰期为25～30小时，在体内外稳定性很好，不会降解为降钙素，亦不受体内激素水平的影响。正常情况下，PCT有极少量在甲状腺细胞中生成并释放入血循环，健康人血中浓度约0.0025ng/mL，一般的方法检测不到。在严重感染时，血PCT水平则明显增高，此时PCT主要由甲状腺外组织产生。有学者提出神经内分泌细胞、肺、肝脏和血液中的白细胞可能是产生PCT的部位，故在严重感染时，即使甲状腺全部切除的病人也不会影响其PCT血浓度的升高。PCT主要是在细菌毒素和炎性细胞因子的刺激下产生，而在非感染性炎症状态下血清PCT一般不升高。动物实验提示：PCT可能是一种次级炎症因子。它本身不能启动炎症反应，但可放大并加重炎症的病理过程。PCT的生成非常快，对内毒素刺激反应2～6h之内即升高。最初升高后，PCT值的下降取决于其在血浆中的衰减和新生成的PCT之间的平衡，由于PCT经肾脏清除很少，因此肾功能损伤的病人清除PCT半衰期并没有显著廷长。
降钙素原(PCT)是一种急性时相反应蛋白，在炎症早期较CRP出现要早或同步。在严重全身性细菌、真菌、寄生虫、急性疟疾感染，系统炎性反应综合征(SIRS)，多器官功能衰竭综合征(MODS)的辅助诊断方面，PCT是一个具有高灵敏度、特异性的新指标，不仅能早期鉴别细菌与非细菌感染，更是败血症的预警和诊断指标，且PCT与细菌感染的程度成正相关，它的上升或下降直接反应疾病恶化或好转的趋势，因此，PCT的检测在细菌性与非细菌性感染、败血症、MODS的鉴别诊断、预后判断、疗效观察及术后细菌感染并发症监测等方面具有极大的临床应用价值。如用PCT快速半定量检测盒(PCT-Q)测定脓毒性休克患者血浆PCT水平，从而作出休克的病因诊断并指导临床用药，其他还有如半自动定量法(LUMITest/免疫发光技术)、全自动快速定量法(KRYPTOR/时间分辨荧光增强发射分析技术)等。
现有技术对降钙素原(PCT)的制备方法是直接从组织细胞提取，得率低、成本高。不能大量应用于临床。
发明内容
为了提高降钙素原(PCT)的得率，降低成本，为制备临床诊断试剂提供大量的原材料，本发明采用PCT cDNA以基因工程方法制备含116个氨基酸残基的PCT。
本发明降钙素原(PCT)的制备方法为下述步骤：
(1)采用经组织培养的人甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)，经trizol裂解、抽提得到PCTmRNA；
(2)将PCTmRNA逆转录得到PCT的cDNA，也可直接化学合成得到PCT的cDNA；
(3)采用PCR技术将表达PCT的目的基因扩增，并纯化其产物；
(4)将纯化的PCR产物于BamH I与Hind III双酶切后定向插入经同样双酶切的pet41a，获得重组质粒Pet41a+PCT；
(5)将重组质粒Pet41a+PCT转化至大肠杆菌DH5a，经培养扩增，抽提纯化，测序分析，获测序正确的重组质粒；
(6)将测序正确的重组质粒转化至BL21(DE3)菌，在30℃，0.1mM IPTG条件下表达重组蛋白；
(7)将表达重组蛋白的活化菌株接种到2-YT培养基恒温振荡培养，进行摇瓶实验，工程菌在发酵罐中高密度发酵，种子菌按5％比例接种，在低溶氧条件下诱导，放罐，离心得菌体；
(8)将离心得到的菌体沉淀进行细胞裂解，洗涤出包涵体，溶解包涵体，过镍柱纯化；
(9)通过免疫测定或生物活性测定检测降钙素原峰部分，得到纯化的降钙素原。
依据以上步骤获得的降钙素原可以应用于制备对各类感染诊断的试剂盒。
具体实施方式
本发明结合实施例作进一步说明。
实施例1降钙素原的制备
1、前降钙素原(PCT)的cDNA制备：
可由PCTmRNA逆转录而来，也可直接化学合成。
PCT cDNA序列依据：美国国立卫生图书馆，序列编号：[gi：22557434]。
2、克隆制备：
用经典的方法分、切、接、转、筛制备PCT的表达克隆。
用PCR技术将表达PCT的目的基因扩增，并纯化其产物。再将纯化的PCR产物予BamH I与Hind III双酶切后定向插入经同样双酶切的pet41a，获得重组质粒。然后将上述质粒转化至大肠杆菌DH5α，经培养扩增，抽提纯化，并用全自动测序仪进行序列分析。将测序正确的重组质粒转化至BL21(DE3)菌，在30℃，0.1mM IPTG的条件下进行培养。培养后裂解菌液，用SDS-PAGE分离各蛋白条带，并用Western Blot仪检测。
3、PCT的表达、纯化：
将表达克隆转化至表达宿主，表达后纯化。通过亲和层析分离含降钙素原达到95％以上的纯品，并通过免疫测定或生物活性测定检测降钙素原峰部分，得到纯化的降钙素原。
3.1表达菌株的发酵：
将活化的菌株按5％的接种量接入到2-YT培养基(含有kanamycin 50μg/ml)中，37℃，300r/min，恒温振荡培养，进行摇瓶实验。工程菌高密度发酵在15L发酵罐中进行。种子菌按5％比例接种，37℃，300r/min，kanamycin 50μg/ml。高溶氧培养4小时。在1mmol/L IPTG，低溶氧条件下诱导4小时，放罐，离心得到菌体。
3.2PCT纯化：
3.2.1细胞的裂解：将离心得到的大肠杆菌沉淀加裂解缓冲液进行细胞裂解，裂解缓冲液：50mmol/L Tris·Cl(pH8.0)、1mmol/L EDTA、100mmol/L NaCl。
3.2.2包涵体的洗涤：用微量离心机于4℃以12000g将细胞裂解液反复进行离心沉淀，并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析沉淀重悬液以确定是否大多数目的蛋白均在沉淀中。
3.2.3包涵体的溶解：将洗过的沉淀悬浮在含0.1mmol/L PMSF(现加现用)、8mol/L(去离子的)尿素的裂解缓冲液中，在室温及一定PH值下，再加SDS凝胶加样缓冲液对其进行溶解，并测其溶解度。
3.2.4过柱纯化：镍柱收集目标峰，真空冷冻干燥。SDS-PAGE鉴定蛋白纯度。纯化后的降钙素原的氨基酸序列符合：美国国立卫生图书馆，序列编号：[gi：22557434]。
实施例2降钙素原的应用1
应用本发明方法获得的降钙素原，是一个具有高灵敏度、高特异性的新指标，能早期鉴别细菌与非细菌感染，也有助于败血症、MODS的鉴别诊断，同时对对这些疾病预后的判断、疗效的观察及术后细菌感染并发症的监测亦具有极大的临床应用价值。
运用该发明技术获得的降钙素原免疫动物制备抗体，可以制成诊断试剂盒，用于对上述疾病的诊断、鉴别诊断及预后与疗效的观察。
实施例3降钙素原的应用2
运用本发明的制成成品的降钙素原可用于临床药物的制备。
无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的优选具体实施方案应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。
Claims (2)
1、降钙素原(PCT)的制备方法，其特征在于下述步骤：
(1)采用经组织培养的人甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)，经trizol裂解、抽提得到PCTmRNA；
(2)将PCTmRNA逆转录得到PCT的cDNA，也可直接化学合成得到PCT的cDNA；
(3)采用PCR技术将表达PCT的目的基因扩增，并纯化其产物；
(4)将纯化的PCR产物于BamH I与Hind III双酶切后定向插入经同样双酶切的pet41a，获得重组质粒Pet41a+PCT；
(5)将重组质粒Pet41a+PCT转化至大肠杆菌DH5a，经培养扩增，抽提纯化，测序分析，获测序正确的重组质粒；
(6)将测序正确的重组质粒转化至BL21(DE3)菌，在30℃，0.1mM IPTG条件下表达重组蛋白；
(7)将表达重组蛋白的活化菌株接种到2-YT培养基恒温振荡培养，进行摇瓶实验，工程菌在发酵罐中高密度发酵，种子菌按5％比例接种，在低溶氧条件下诱导，放罐，离心得菌体；
(8)将离心得到的菌体沉淀进行细胞裂解，洗涤出包涵体，溶解包涵体，过镍柱纯化；
(9)通过免疫测定或生物活性测定检测降钙素原峰部分，得到纯化的降钙素原。
2、按权利要求1所述降钙素原的制备方法，其特征在于：依据以上步骤获得的降钙素原应用于制备对各类感染诊断的试剂盒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510061471 CN1800384A (zh) | 2005-11-08 | 2005-11-08 | 降钙素原的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510061471 CN1800384A (zh) | 2005-11-08 | 2005-11-08 | 降钙素原的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1800384A true CN1800384A (zh) | 2006-07-12 |
Family
ID=36810597
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200510061471 Pending CN1800384A (zh) | 2005-11-08 | 2005-11-08 | 降钙素原的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1800384A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102395887A (zh) * | 2009-04-28 | 2012-03-28 | B.R.A.H.M.S有限公司 | 用于检测降钙素原的免疫测定法 |
| CN103123359A (zh) * | 2007-08-03 | 2013-05-29 | B.R.A.H.M.S有限公司 | 降钙素原（pct）在患原发性非传染疾病的患者的风险分级和预后中的应用 |
| CN109541220A (zh) * | 2018-10-09 | 2019-03-29 | 温州启星生物技术有限公司 | C-反应蛋白、降钙素原、肝素结合蛋白和血清淀粉样蛋白a1的制备方法和应用 |
-
2005
- 2005-11-08 CN CN 200510061471 patent/CN1800384A/zh active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103123359A (zh) * | 2007-08-03 | 2013-05-29 | B.R.A.H.M.S有限公司 | 降钙素原（pct）在患原发性非传染疾病的患者的风险分级和预后中的应用 |
| US11241395B2 (en) | 2007-08-03 | 2022-02-08 | B.R.A.H.M.S. Gmbh | Use of procalcitonin (PCT) in risk stratification and prognosis of patients with a primary, non-infectious disease |
| CN102395887A (zh) * | 2009-04-28 | 2012-03-28 | B.R.A.H.M.S有限公司 | 用于检测降钙素原的免疫测定法 |
| CN102395887B (zh) * | 2009-04-28 | 2015-04-08 | B.R.A.H.M.S有限公司 | 用于检测降钙素原的免疫测定法 |
| CN109541220A (zh) * | 2018-10-09 | 2019-03-29 | 温州启星生物技术有限公司 | C-反应蛋白、降钙素原、肝素结合蛋白和血清淀粉样蛋白a1的制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109750054B (zh) | 一种牛支原体蛋白基因MbovGdpP及其应用 | |
| CN86102858A (zh) | 制备猪支原体的重组表面抗原及其疫苗的方法 | |
| CN106967696A (zh) | 一种蒿属植物花粉的过敏原及其应用 | |
| CN108474038A (zh) | 评估全身炎症反应综合征(sirs)患者并发症风险的方法 | |
| CN116284339A (zh) | 一种重组iii型胶原蛋白、核酸、表达载体、菌株及其应用 | |
| CN113122453A (zh) | 一种用于分离旱獭组织中布鲁氏菌的培养基及其制备方法 | |
| CN1800384A (zh) | 降钙素原的制备方法 | |
| CN117065053B (zh) | 含重组碱性磷酸酶的酵母细胞的药物制备用途 | |
| CN101870974A (zh) | 蛋白酶激活受体激动剂的制备方法及其用途 | |
| CN115109117B (zh) | 一种多管藻藻红蛋白血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法与应用 | |
| CN101921799B (zh) | 马血清淀粉样蛋白a1制备方法及表达载体和基因工程菌 | |
| CN100404549C (zh) | 埃可病毒30型衣壳蛋白(vp)的制备方法 | |
| CN109839508A (zh) | Rbm24-S181位点磷酸化作为精神压力类疾病及相关心脏疾病用药的标记物的应用 | |
| CN112225781B (zh) | 一种表达新型冠状病毒n蛋白的方法 | |
| CN112877345B (zh) | 一种半胱氨酸脱硫酶tp0614的基因及其重组蛋白与应用 | |
| CN1766106A (zh) | 脑钠肽（bnp）制备方法 | |
| CN110272501B (zh) | 猪源杂合防御肽pl-5及其制备方法和应用 | |
| CN110714070A (zh) | 一种草鱼细菌性肠炎生物标记物及治疗靶点的应用 | |
| CN105368847B (zh) | 一种防治鸡球虫病的chp317基因、疫苗及其制备方法 | |
| CN117534732B (zh) | 一种抑制il-12与其受体结合的多肽及其应用 | |
| CN112877335B (zh) | 三疣梭子蟹血管生成素PtANG基因及其编码蛋白和应用 | |
| RU2766346C1 (ru) | Способ определения противомикробной активности пептидов | |
| CN110714016B (zh) | Jnk基因及其作为鱼类细菌性肠炎诊断分子标记物和治疗靶点的应用 | |
| CN113999299B (zh) | 人肌红蛋白的高效表达方法 | |
| CN110187100B (zh) | Prokineticin2在制备脓毒症诊断试剂、治疗药物中的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20060712 |