CN1762406A - 苦碟子注射液的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

一种苦碟子注射液的质量控制方法，主要包括性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定项目，其特征在于：它是将苦碟子对照药材、总黄酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜内酯、总香豆素、三萜皂苷作为该中药注射液的质量控制的检测指标。本发明使药材、成品间有良好的相关性，本申请人研究的苦碟子注射液指纹图谱能很好的控制产品质量。

Description

苦碟子注射液的质量控制方法

(一)技术领域

本发明属于中药的技术领域，具体是涉及一种苦碟子注射液的质量控制方法。

(二)背景技术

苦碟子注射液是现代中药制剂，以抱茎苦荬菜为原料制成，具有活血止痛、清热祛瘀，扩张冠状血管，改善心肌血氧供应，增加纤维蛋白溶解酶活性，抑制血栓形成的功效，用于冠心病、心绞痛、脑血栓、脑梗塞等的注射液，目前临床上还用于治疗眼底疾病、恶性肿瘤、病毒性肺炎、病毒性肝炎、视神经萎缩、糖尿病并发症、脉管炎、颈椎病等疾病。苦碟子注射液在保证产品质量稳定可控安全的基础之上，不断地更新发展，为了更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，更好地指导生产，使工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质量，需要研究、控制该注射液质量的方法。

(三)发明内容

本发明的目的在于：提供一种苦碟子注射液的质量控制方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好地控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好地指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地。

本发明这样构成：苦碟子注射液的质量控制方法，主要包括性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定等项目，它涉及以苦碟子药材或其提取物制成的中药注射液或含各种有效部位使用的注射液的质量控制方法，该质量控制方法是将苦碟子对照药材、总黄酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜内酯、总香豆素、三萜皂苷作为该中药注射液的质量控制的检测指标。

上述的质量控制指标的检测指标可优选为：将腺苷、木樨草素及其苷、总黄酮、苦碟子对照药材作为该中药注射液的鉴别方法的检测指标。

上述的质量控制指标的检测指标可优选为：将苦碟子对照药材、总黄酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜内酯、总香豆素、三萜皂苷作为该中药注射剂的含量测定方法的检测指标。

上述的质量控制指标的检测指标可优选为：将腺苷、木樨草素及其苷、总黄酮、苦碟子对照药材、倍半萜内酯作为该中药注射剂的指纹图谱研究的检测指标。

上述的苦碟子注射液的性状为浅棕黄色至棕黄色的澄明液体。

在本发明所述的一种苦碟子注射液的质量控制方法中，对于苦碟子的鉴别技术，可采用下述方法：

1：采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30ul之间某一体积，以苦碟子对照药材，以腺苷作为对照品，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩等方法，展开剂可以为氯仿、异丙醇、丙酮、水、甲醇、甲酸、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、氨水、正丁醇中的至少一种按照常规的一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以2～30％硫酸乙醇、或喷以1～10％茚三酮乙醇等溶液显色的方法。

2：采用高效液相色谱法，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩等方法，一般使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的至少一种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以苦碟子对照药材、腺苷、术樨草素苷作为对照品，检测波长在200～500nm范围内。

本发明所述的一种苦碟子注射液的质量控制方法中，所述的检查：包括pH值、装量差异、澄明度、无菌、不溶性微粒、蛋白质、鞣质、树脂、草醋盐、硫酸盐、钙盐、钾离子、重金属、砷盐、农药残留等全部项目或部分项目，具体检测方法与当时现行版的中国药典附录收载的保持一致，钾离子、重金属、砷盐的检测方法还包括以微波消解法处理样品，进而采用原子吸收法、等离子发射光谱或电感耦合等离子质谱(ICP-MS)法进行测定的方法；药品中的技术要求为：(1)pH值在2～10之间；(2)重金属不得过百万分之二十：(3)砷盐不得过百万分之二；(4)有机氯农药残留总量不得过百万分之一；(5)硫酸盐按中国药典附录检查与标准硫酸钾溶液1ml制成的对照液比较，不得更浓(0.005％)；(6)钙盐取本品2ml，加草酸铵试液1ml，摇匀，放置10分钟，不得出现浑浊。

在本发明所述的一种苦碟子注射液的质量控制方法中：对于指纹图谱，采用高效液相色谱法，样品前处理包括直接取样，可采取：

(1)以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩等方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、乙腈、水、0.1～10％的冰醋酸、庚烷磺酸钠、二甲基甲烷0.4％磷酸中的至少一种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以梯度或等度洗脱的方法分离，检测波长在200～600nm范围内，以腺苷、木樨草素及其苷、总黄酮、苦碟子对照药材及其提取物中全部或部分品种作为特征指纹峰或内标物峰。

(2)使用C18类型填料的色谱柱，以A为0.4％磷酸溶液，B为乙睛为流动相，以梯度洗脱的方法分离，检测波长为348nm，以木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作为特征指纹峰或内标物峰。

本发明所述的一种苦碟子注射液的质量控制方法中，对于含量测定采用下述方法：

1：以可见紫外分光光度法测定本品中的总黄酮含量，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩等方法，测定波长为400～600nm中某一波长，一般采用标准曲线法或对照品法测定，常用对照品为芦丁、木樨草素及其苷。对于含量测定也可以可见紫外光分光光度法测定本品中的总香豆素含量，样品。

2：以高效液相色谱法测定本品中的腺苷及木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷含量，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩等方法，测定波长为200～600nm中某一波长，一般采用标准曲线法或对照品法测定。

3：采用液相色谱法测定本品中的木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，样品前处理为直接取样，使用C18类型填料的色谱柱，以乙腈、0.4％磷酸溶液在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长为48nm。

与现有技术相比，本发明选取的指标成分是产品的重要有效活性成分，对控制药品质量是十分必要的，作为含量控制的指标很理想。本申请人为了要从源头抓起产品质量，在固定中药材品种、产地和采收期的前提下，制定中药材、有效部位或中间体、注射剂的指纹图谱。

为证明利用本发明提供的质量控制方法能更好地控制一种苦碟子注射液的产品质量，得到的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；

实验例1不同产地和采收期药材测定结果

批次            木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷含量(％)

030501                0.131

030502                0.130

030503                0.169

030510                0.085

030511                0.141

030512                0.115

030601                0.213

030602                0.165

030603                0.221

030604                0.152

上述研究结果表明重视药材产地及采收期，对于保证和提高药材质量具有重要意义，对于控制成品疗效至关重要。

实验例2指纹图谱的研究

1、流动相的选择研究过程中分别考察了(1)乙腈-水(梯度洗脱)(2)A为0.4％磷酸，B为乙腈(梯度洗脱)二种流动相系统。结果显示流动相(1)条件下，峰拖尾严重，出峰不完全；流动相(2)条件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而被选用。

2、检测波长的确定

分别考察了在不同波段典型波长300、325、348、356下的色谱峰情况，结果显示，在348nm下色谱峰较多，峰形较好，故最终选用348nm作为检测波长。

3、指纹图谱的建立及分析

按上述色谱条件，分别对10批苦碟子注射液进行测定，考察10批样品液相色谱的一致性。从图谱看，9min以前有2个小峰，在制剂、原料的各批数据中差异很大，占全谱量很小，故在色谱峰处理上，对9min以前的区域不进行积分和计算。考察10批样品的色谱图，找出其相对稳定的共有峰，以木犀草素峰为参照峰(6号峰)，其他峰以阿拉伯数字按顺序标定，苦碟子注射液共标定8个峰。以参照峰的相对保留时间和相对峰面积比值为1，计算各共有指纹峰的相对保留时间和占总峰面积5％以上的峰面积的比值。以相对保留时间的平均值，作为各自标准指纹图谱的相对保留时间，以平均值的±10％作为相对保留时间允许变动范围。

根据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的规定，本指纹图谱中，只有1号，6号，7号峰单峰面积占总峰面积的百分比可能超过20％，三者占总峰面积之和的百分比超过80％。6号峰以10批样品相对峰面积比值的平均值作为标准指纹图谱的比值，以平均值的±25％确定其允许范围，为0.23-0.37。

4、相关性分析

苦碟子注射液及其原料苦碟子药材二者指纹图谱的峰形和整体特征相关性较好。

5、指纹图谱的相似度分析

运用药典会提供的指纹图谱相似度评价软件，将各指纹图谱及其积分数据经软件计算处理，结果苦碟子注射液10批样品的指纹图谱均具有较好的相似度，相似度均大于0.9。

6、指纹图谱及各项技术参数

根据10批苦碟子注射液HPLC谱给出的相关参数，比较供试品谱图，其中8个峰是各批样品所共有的，因此确定这8个峰为共有指纹峰。在共有指纹峰中，只有1号、6号和7号峰的峰面积大于总峰面积的10％，故只考虑这三个峰的峰面积比值，其余各共有峰均按其相对保留时间定性。

苦碟子注射液指纹图谱技术参数：共有峰的峰号(相对保留时间)：

1(9.719)，2(10.281)，3(10.846)，4(18.368)，5(23.302)，6(24.240)，7(24.413)，8(29.545)。

结果显示，药材、成品间有良好的相关性，本申请人研究的苦碟子注射液指纹图谱能很好的控制产品质量。

(四)具体的实施方式：

本发明的实施例1：一种苦碟子注射液的质量控制方法，主要包括性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定项目。

1、性状：该中药注射液为浅棕黄色至棕黄色的澄明液体。

2、鉴别：对于腺苷的鉴别：采用薄层色谱法，使用硅胶GF₂₅₄薄层板，点样量为5ul，以腺苷作为对照品，直接取样，展开剂为氯仿、醋酸乙酯、异丙醇、氨水、水按照常规比例配制而成，检视条件为紫外下检视的方法。

3、检查：包括pH值、装量差异、澄明度、无菌、不溶性微粒、蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钙盐、硫酸盐、钾离子、重金属、砷盐、农药残留等全部项目或部分项目，具体检测方法与当时现行版的中国药典附录收载的保持一致，钾离子、重金属、砷盐的检测方法还包括以微波消解法处理样品，进而采用原子吸收法、等离子发射光谱或电感耦合等离子质谱法进行测定的方法；药品中的技术要求为：(1)pH值在2～10之间；(2)重金属不得过百万分之二十：(3)砷盐不得过百万分之二；(4)有机氯农药残留总量不得过百万分之一；(5)硫酸盐按中国药典附录检查与标准硫酸钾溶液1ml制成的对照液比较，不得更浓(0.005％)；(6)钙盐取本品2ml，加草酸铵试液1ml，摇匀，放置10分钟，不得出现浑浊。

4、指纹图谱：采用高效液相色谱法，样品前处理包括直接取样，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙腈、0.4％磷酸溶液在合适比例条件下为流动相，以梯度洗脱的方法分离，检测波长在348nm范围内，以木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作为特征指纹峰或内标物峰。指纹图谱和洗脱梯度如下：

         苦碟子注射液指纹图谱梯度洗脱表

时间梯度	乙腈A(％)	0.4％磷酸溶液B(％)
			0分钟	10	90
40分钟	31	69
			40.01分钟	10	90
45分钟	10	90

5、含量测定：

方法1：以可见紫外分光光度法测定本品中的总黄酮含量，样品前处理包括直接取样：以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，测定波长为505nm，采用标准曲线法或对照品法测定，常用对照品为芦丁或木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，每10ml含总黄酮不得少于4.0mg。

方法2：对于含量测定：也可以以液相法测定本品中的腺苷含量，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙腈、水、0.4％磷酸中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相测定波长为260nm，采用标准曲线法或对照品法测定，每10ml含总黄酮不得少于0.025mg。

方法3：以高效液相色谱法测定本品中的木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙腈、0.4％磷酸中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以木樨草素苷作为对照品，检测波长在348nm范围内，每10ml含木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷不得少于0.60mg。

Claims (10)

1、一种苦碟子注射液的质量控制方法，主要包括性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定项目，其特征在于：它是将苦碟子对照药材、总黄酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜内酯、总香豆素、三萜皂苷作为该中药注射液的质量控制的检测指标。

2、按照权利要求1所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：腺苷、木樨草素及其苷、总黄酮、苦碟子对照药材作为该中药注射液的鉴别方法、含量测定方法和指纹图谱研究的检测指标。

3、按照权利要求1所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：该中药注射液为浅棕黄色至棕黄色的澄明液体。

4、按照权利要求1或2所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：对于苦碟子的鉴别方法：采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30ul之间某一体积，以苦碟子对照药材、腺苷作为对照品，样品前处理包括直接取样或以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，展开剂可以为氯仿或丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的至少一种按照常规一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以2～30％硫酸乙醇、或喷以1～10％茚三酮乙醇等溶液显色的方法。

5、按照权利要求1或2所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：对于苦碟子的鉴别方法：采用高效液相色谱法，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的至少一种品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以苦碟子对照药材、腺苷、木樨草素苷作为对照品，检测波长在200～500nm范围内。

6、按照权利要求1、2或3所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：对于检查包括pH值、装量差异、澄明度、无菌、不溶性微粒、蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子、重金属、砷盐、农药残留、钙盐、硫酸盐等全部项目或部分项目，具体检测方法与现行版的中国药典附录收载的保持一致，钾离子、重金属、砷盐的检测方法还包括以微波消解法处理样品，进而采用原子吸收法、等离子发射光谱或电感耦合等离子质谱法进行测定的方法；苦碟子注射液中的技术要求为：(1)pH值在2～10之间，(2)重金属不超过百万分之二十，(3)砷盐不超过百万分之二，(4)有机氯农药残留总量不超过百万分之一。

7、按照权利要求1或2所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：对于指纹图谱：采用高效液相色谱法，样品前处理包括直接取样：以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、乙腈、水、0.1～10％的冰醋酸、庚烷磺酸钠、二甲基甲烷、0.4％磷酸中的至少一种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，以梯度或等度洗脱的方法分离，检测波长在200～600nm范围内，以总黄酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜内酯、总香豆素、三萜皂苷中全部或部分成分作为特征指纹峰或内标物峰。

8、按照权利要求1或2所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：对于含量测定以可见紫外分光光度法测定本品中的总黄酮含量，样品前处理包括直接取样或以醋酸乙酯、氯仿、二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，测定波长为400～600nm中某一波长，采用标准曲线法或对照品法测定，常用对照品为芦丁、木樨草素及其苷；对于含量测定也可以以可见紫外分光光度法测定本品中的总香豆素含量，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，测定波长为400～600nm中某一波长，采用标准曲线法或对照品法测定。

9、按照权利要求1或2所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：对于腺苷的鉴别：采用薄层色谱法，使用硅胶GF₂₅₄薄层板，点样量为5ul，以腺苷作为对照品，直接取样，展开剂为氯仿、醋酸乙酯、异丙醇、氨水、水按照常规比例配制而成，检视条件为紫外下检视的方法。

10、按照权利要求1或2所述的苦碟子注射液的质量控制方法，其特征在于：对于指纹图谱采用液相色谱法，样品前处理为直接取样，使用C18类型填料的色谱柱，以0.4％磷酸溶液，或乙睛为流动相，以梯度洗脱的方法分离，检测波长为348nm，以木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作为特征指纹峰或内标物峰。