CN1745300A - 用于检测c－反应蛋白和结合c－反应蛋白的成分之间的相互作用的能实施hts的方法和检测系统 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于检测C－反应蛋白(CRP)或C1q和结合CRP或C1q的成分之间的相互作用的、能实施HTS的方法和检测系统，通过此检测方法和检测系统可以确定含有CRP或C1q的溶液的浓度，和鉴定能影响CRP或C1q和与其结合的成分之间的相互作用，特别是CRP和C1q之间的相互作用的物质。

Description

用于检测C-反应蛋白和结合C-反应蛋白的成分之间的 相互作用的能实施HTS的方法和检测系统
技术领域
本发明涉及用于分别检测C-反应蛋白(CRP)及C1q和结合CRP和C1q的成分之间的相互作用的能HTS的方法和检测系统，涉及分别检测含有CRP和C1q的溶液的浓度，和涉及检测影响CRP及C1q分别和与其结合的成分的相互作用的物质
背景技术
C-反应蛋白(CRP)是感染或组织损害后血清浓度会快速并极大地增加的急性期的血浆蛋白质(Volanakis(2001)，Molecular Immunology38，189-197)。在Ca2+离子存在的情况下，CRP结合磷酸胆碱(PCh)。在病原生物体的多糖中及损坏的和坏死的细胞的细胞膜中，后者非常常见。
补体是免疫系统的一部分，并且主要参与抗体介导的免疫防御。补体的三个生理学功能是抗细菌感染，联系先天性和获得性免疫及移除免疫复合物和凋亡细胞。在经典的、替代的和甘露糖-凝集素的补体级联系统之间可以进行区分(Walport(2001)，N Engl J Med 344，1058-1066)。经典的补体级联引起细菌细胞的裂解，并且从与抗体(该抗体结合细胞表面)结合的C1q或结合PCh的CRP开始。
C-反应蛋白可以用做标记，此外还可以用做冠心病的预测因子，而冠心病是工业化国家中最常见的死亡原因(Rifai和Ridker(2001)，ClinicalChemistry 47，403-411)。
新的研究(Jialal等(2001)，Circulation103，1933-1935)推测降低CRP水平或阻断CRP介导的效应子功能，例如由于结合C1q引起的补体活化，可以用于冠心病的预防和治疗。
因此，首先，期望提供可以用简单的方法检测血浆中CRP和/或C1q浓度的方法；其次，提供可以鉴定如下物质的方法，其中所述物质以调节方式，即激活或抑制方式作用于CRP和/或C1q与其它成分的相互作用，特别是作用于CRP和C1q之间的相互作用。
例如Jiang等，(1991)，J.Immunol.146，2324-2330和Agrawal等，(2001)，J.Immunol.166，3998-4004已经描述了检测CRP结合C1q的方法。这两篇公开出版物利用了ELISA方法。这两种方法都是费时和费材料，多阶段的非均相方法。因此，为了实施该方法，最初，总是需要将反应物之一固定到固相。而且，需要多个的洗涤步骤。
Lebdue等(1998)，Ann Clin Biochem35，745-753描述了CRP的免疫浊度测定方法。为此，将样品与聚苯乙烯颗粒上加载的抗-CPR抗体温育。因为需要浊度计和必需使用相对大量的样品以实施该方法，所以该方法有严重的缺点。
发明内容
因此，本发明的目的是提供可以用简单的方式检测血浆中CRP或C1q的浓度，并允许鉴定以调节、激活或抑制方式作用于CRP或C1q与其它成分的相互作用(特别是作用于C1q和CRP之间的相互作用)的物质的方法，所述方法比先前所述方法更敏感，更节省成本，更节省材料，并可以更简单和/或更快速地实施，所以其有利地区别于现有技术。
通过检测两个成分的结合事件的方法可以达到该目的，所述成分直接或通过一个或多个成分结合CRP或C1q，该方法包括下面的步骤：
(a)首先引入含有CRP或C1q的溶液；
(b)向所述含有CRP或C1q的溶液添加至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含能在光源激发后发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，并且所述供体成分能直接或能通过来源于所述成分组的一种或多种成分结合CRP或C1q，
(c)向所述含有CRP或C1q的溶液添加至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或化合物组所发射的信号并能以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)的成分，并且所述受体成分能直接或能通过所述成分组的一种或多种成分结合CRP或C1q，
(d)利用光源激发(b)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)，
(e)检测(c)的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)所发射的电磁辐射，以检测所述的结合事件。
优选地，这里(c)发射的电磁辐射是荧光辐射。例如，(d)的光源可以是激光器或灯，例如氦灯或卤素灯。例如，利用光电倍增管可以检测(e)的电磁辐射。
优选地，本发明所用的成分是多肽或包含多肽。在本发明特别优选的实施方式中，至少一种成分是抗体，该抗体可以是单克隆或多克隆抗体。
如果使用一组成分，优选地，所述的成分能空间上相继地结合CRP或C1q，或者相互结合。所述的结合以结合级联的形式发生，其中的一个例子是抗体(第一抗体，第二抗体等)的相继结合。优选地，这里根据(b)和(c)直接结合CRP或C1q的成分在每种情况下都是结合CRP或C1q的特定结合区或特定表位的成分，且(b)的所述结合CRP或C1q的成分与(c)的结合CRP-或C1q的成分结合不同的结合位点。
在本发明方法的另一个优选的实施方式中，直接结合CRP-或C1q的成分之一是CRP-或C1q天然的结合伙伴，在CRP的情况下，其特别优选地是C1q，并且反之亦然。如果供体或受体成分直接结合CRP或C1q，那么在这种情况下，供体或受体成分相应地是包含供体或受体基团的C1q或CRP。当使用一组能形成结合级联的成分时，C1q或CRP相应地是结合CRP或C1q的第一个成分，由此供体或受体成分可以结合CRP或C1q。而该组成分的其余成分特别优选地是抗体分子。
因此，例如，当最初引入含有CRP的溶液时，在该实施方式中，优选地，供体或受体成分本身包含C1q，或者供体或受体成分可以通过C1q与CRP结合。在这种情况下，供体或受体成分可以含有抗-C1q的抗体或能结合所述抗-C1q抗体的第二抗体。因此，在每种情况下，其它成分(受体或供体成分)将包含抗-CRP的抗体或能结合抗-CRP抗体的抗体或抗后者的第三抗体。
在优选的实施方式中，(b)(供体基团)和/或(c)(受体基团)的至少一种化合物或一组化合物位于颗粒上，优选地，所述颗粒的平均直径在150nm至250nm之间，特别优选地是大约200nm。因此，供体或受体成分包含所述颗粒，在这种情况下，该颗粒可以由聚合材料制成。
本发明的方法是能实施HTS(高通量筛选，high throughput screening)的方法，并且该方法可以在均相中一步实施。
在优选的实施方式中，根据“混合和测量”原则实施本发明的方法，由此不仅相当省时而且可以获得高精确度的测量数据。
在小于利用前述非均相方法时所需时间的10％的时间内，本发明的方法即能够允许待测定的C1q与CRP结合，及鉴定影响所述结合的物质和待测定的复杂介基中CRP或C1q的浓度。
此新方法的一个特定的特征性性质是使得可以在溶液中监测两种蛋白质之间的结合，因为没有一种反应物需要被固定到固相上。而且，不需要例如通过荧光团的结合来修饰CRP或C1q，就可以直接测定从生物来源获得的蛋白质。因此，该方法具有特定的优点，即可以在蛋白质的天然状态测定它，因此排除了在固定和/或修饰所述蛋白质时将出现的变性风险。
本发明方法的另一个优点是与常规方法比较，本发明方法显著减少了样品体积。因此，可以利用小于10μl的体积，以最小化材料成本。而且，可以利用CRP或C1q浓度小于1nM，甚至小于100pM的高稀释度溶液。此外，它是非常灵敏的方法。而且，如上述，这是第一个可以高通量筛选能影响由CRP和C1q结合导致的补体活化的物质的方法。
在本发明方法的优选实施方式中，通过单线态氧，信号从(a)的至少一种化合物和一组化合物(供体基团)转移到(b)的至少一种化合物或一组化合物。
在这种情况下，优选地，供体基团包含通过激光激发后能将三线态氧转化为单线态氧的化合物，而受体基团包含能被单线态氧激发的至少一种第一化合物和能以无发射方式吸收由单线态氧可激发的基团吸收的能量并以荧光辐射形式发射该能量的第二化合物。
形成的单线态氧可以从供体基团扩散到受体基团，并且与那里存在的化学发光物质反应。该过程中所释放的能量被转移给荧光团，该荧光团最后以荧光辐射形式发射所述能量，可以用光电倍增管检测该能量。可以检测到信号的前提条件是供体和受体珠在空间上邻近，因为在水溶液中单线态氧不稳定，会发生衰变。因此选择该方法中将要使用的结合成分，以便当出现结合事件时，优选地，供体和受体基团之间的距离小于200nm，这是因为在更大的距离时，由于单线态氧的衰变时间，通过单线态氧进行有效能量转移是不可能的。
在该实施方式中，特别优选位于颗粒上的供体基团和受体基团，优选地，所述颗粒平均直径是150至250nm，特别优选地是大约200nm。这里，所述颗粒优选的应用方式是使带有供体基团的颗粒的终浓度是1-40μg/ml，带有受体基团的颗粒的终浓度是1-80μg/ml。所述颗粒的结合能力可以例如，是大约0.1nM到1nM/μg/ml颗粒。
在该方法中，特别优选使用Perkin-Elmer Life Sciences的Alpha-Screen-Beads做为颗粒。在该实施方式中，利用激光，通过以680nm波长照射来激发供体基团，并且可以在520nm和600nm之间的波长检测受体基团发射的辐射。
因此，在这种情况下，可以用首先引入带有供体和受体基团的供体和受体珠的方式进行本发明的方法。然后，本身能结合或者能通过另外的成分结合CRP或C1q的成分与所述供体和受体珠结合。如上所述，这些成分可以是C1q或CRP，或者可以是抗CRP或抗C1q的抗体，或者可以是抗所述抗CRP或抗C1q的抗体的第二抗体。
在本发明方法的另一优选的实施方式中，通过无发射能量转移，特别优选地通过荧光共振能量转移，信号从(a)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)转移到(b)的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)。
在这种情况下，可以例如用这样一种方式进行该方法，即(a)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)包含含有铕盐的化合物，并且(b)的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)可以包含别藻蓝蛋白(Grepin等，(2000)，Drug Discovery Today 5，212)。做为可替代的方案，供体和受体基团可以是适于无发射能量转移的染料。而且，可以利用本领域技术人员已知的所有适于无发射能量转移，特别是适于荧光共振能量转移的化合物(参见，例如，Pope等(1999)，Drug Discovery Today4，350)。
在该实施方式中，优选地，以这样一种方式，即使得结合后供体和受体基团之间的距离小于10nm的方式选择将要使用的结合成分，因为在更大距离时，有效的无发射能量转移是不可能的。
在本发明优选的实施方式中，本发明方法用于检测具有未知CRP或C1q含量的CRP或C1q溶液的浓度，优选地，所述溶液是血浆或血清，或者是通过适宜的生理缓冲液或水稀释的血浆或血清。例如，所述方法可以用于诊断目的，特别是用于检测生物体的炎症状态和/或用于检测心搏停止和/或中风的风险。
因此，本发明同样地涉及可以用于检测CRP或C1q和结合CRP或C1q的成分之间的结合事件的能实施HTS的诊断测定系统，其包括下面的成分：
(a)至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含在光源激发后能发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，并且所述供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合CRP或C1q，
(b)至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并能够以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物的成分，并且所述受体成分能直接或能通过该组成分的一种或多种成分结合CRP或C1q，
这里优选地，该能实施HTS的测定系统还包括下面的另外成分：
(c)在生理缓冲液或水中稀释的血液或，血清或血浆，
(d)用于激发(a)的至少一种化合物或一组化合物的光源，
(e)用于检测(b)所发射的电磁辐射的检测系统。
在本发明方法的另一个优选的实施方式中，在步骤(a)之前和/或步骤(b)之前和/或步骤(c)之前和/或步骤(d)之前添加至少一种待检测物质以观察是否所述的待检测物质影响结合事件。在该方法中，可以检测以调节、抑制或激活的方式作用于CRP或C1q和结合物的相互作用，特别是作用于CRP和C1q之间的相互作用的物质。优选地，这涉及在HTS方法中筛选待检测物质的文库以检测具有期望特性的物质。
因此，本发明同样地涉及用于检测活性物质的能进行HTS的测定系统，其中所述活性物质以调节的方式作用于CRP或C1q和结合CRP或C1q的成分之间的相互作用，所述系统包括下面的成分：
(a)至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含至少一种化合物或一组化合物的成分，该化合物或该组化合物在光源激发后能发射信号(供体基团)，并且所述供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合CRP或C1q，
(b)至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含至少一种化合物或一组化合物的成分，该化合物或该组化合物能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并以电磁辐射形式发射该信号，并且所述受体成分能直接或能通过所述该组成分的一种或多种成分结合CRP或C1q，
(C)至少一种待检测化合物。
这里优选地，能实施HTS的测定系统还包括下面的另外成分：
(d)用于激发(a)的至少一种化合物或一组化合物的光源，
(e)用于检测(b)所发射的电磁辐射的检测系统，
(f)含有CRP或C1q的溶液。
这里优选地，本发明能实施HTS的测定系统用于实施上述本发明的方法。因此，测定系统的部分和成分的具体实施方式对应于本发明方法中所使用的上述具体实施方式。
附图简述
图1是示例性实施方式中所述方法的图解。这里，所用的供体成分是抗C1q抗体，供体基团位于结合所述抗C1q抗体的颗粒上。在这种情况下，供体成分可以通过C1q结合CRP。受体成分在这种情况下是抗兔第二抗体，受体基团位于结合所述抗兔第二抗体的颗粒上。在这种情况下，受体成分可以通过来源于兔的抗CRP抗体结合CRP。
Figure A0381344200151
示例性实施方式：测定CRP与C1q结合的结合试验。
利用来源于Packard Bioscience的Alphascreen检测试剂盒进行该试验，该试剂盒包含供体和受体珠，所述供体珠包含在规定波长激发后能将三线态氧转化为单线态氧的化合物，并且所述受体珠包含单线态氧可激发的化合物，以及能以无发射能量转移的方式接受来自所激发的化合物的能量并发射荧光辐射的化合物。这里，在每种情况下，所述化合物包埋在水凝胶基质中。所用的珠子已经被制造商预先包被，即供体珠用链霉抗生物素蛋白预包被，受体珠用抗兔抗体预包被。
表1：所用材料概述
 试剂/平板 分子量或浓度 供应商，目录号
 小平板，384K，PS，白色 Greiner 784075
 C-反应蛋白，人类，来源于大肠杆菌的重组体 1mg/ml，115kd(5mer) Calbiochem 236608
 Clq，人类 1mg/ml，410kd  Calbiochem 204876
 抗-CRP，兔 3.57mg/ml，165kd  Calbiochem 235752
 AlphaScreen IgG检测试剂盒(蛋白质A)  Packard  Bioscience6760617
 AlphaScreen兔IgG检测试剂盒  Packard  BiOScience6760607
 抗-c1q，山羊 多克隆抗血清  Calbiochem 234390
 抗-链霉抗生物素蛋白 多克隆抗血清  Sigma S6390
 EZ-Link磺基-NHS-LC-生物素酰化试剂盒  Pierce 21430
 氯化钠  58.44g/mol  Merck 101540
 氯化钙(CaCl2×2H2O)  147.02g/mol  Merek 102382
 三(羟甲基)-氨基甲烷盐酸盐(Tris)  157.6g/mol  Merck 108219
 牛血清白蛋白(BSA)  Sigma P7888
 磷酸氯化胆碱  329.7g/mol  Sigma P0378
 磷酸缓冲盐水(无Mg2+和Ca2+)(PBS)  Gibco BRL 14200-067
 Slide-A-Lyzer微透析装置10,000MWCO  PierceP.69570
 二甲亚砜(DMSO)  Merck KGaA，1.02931
 乙醇  Riedelde Haen，32250
 Pluronic F-68  10％浓度的溶液  Sigma，P5556
 盐酸  1M  Merck，109057
 氢氧化钠溶液  1M  Merck，109137
 Milli-Q水
反应缓冲液的制备
在Alpha-Screen-系统中使用下面的反应缓冲液：20mM Tris-HCl，pH7.2，150mM NaCl，5mM CaCl2，1mM磷酸胆碱，0.1％BSA。通过在H2O中溶解3.15g Tris-HCl和8.77g NaCl，用1M NaOH将pH调节到7.2，加水到1升制备Tris-NaCl缓冲液母液。在室温下贮藏缓冲液。通过向50mlTris-NaCl缓冲液添加36.7mg CaCl2，12.9mg磷酸胆碱和50mg BSA制备反应缓冲液。
抗C1q抗体的生物素酰化
为了使抗C1q抗体结合链霉抗生物素蛋白包被的供体珠，首先需要生物素酰化前者。为此，在室温下，用200mlPBS透析100μl抗C1q多克隆抗血清2次，1小时。添加(Milli-Q水中的)20μl 1.5mM磺基-NHS溶液后，在室温下放置溶液30分钟，然后用PBS再次透析2次，以除去过多的生物素酰化试剂。
测定程序
通过最初引入2μl供体珠/抗-CRP溶液，然后添加2μl C1q、2μl CRP和2μl受体珠/抗-CRP进行该测定。这产生了下面的终浓度：CRP：1nM；C1q：10nM；抗-CRP：7.3nM；抗C1q：1∶1500；供体珠：20μg/ml；受体珠：40μg/ml。在阴性对照中，反应缓冲液代替CRP溶液、C1q溶液或这两种溶液。在室温下温育2小时后，利用AlphaQuest读数器读出数据。
结果
在1nM的CRP浓度和10nM的C1q浓度时测定发射的辐射的强度，结果如下(列出了光电倍增管计数)：
在缺少CRP和缺少C1q的情况下：    952
在存在CRP和缺少C1q的情况下：    1255
在缺少CRP和存在C1q的情况下：    1114
在存在CRP和存在C1q的情况下：    80376
如所能看到的，阴性对照没有提供阳性结果，而当混合含有C1q和CRP的溶液时，可以观察到强的信号。

Claims (36)

1、一种用于检测两个成分的结合事件的方法，其中所述成分可以直接或通过一个或多个成分与CRP结合，该方法包括下面的步骤：
(a)首先引入含有CRP的溶液；
(b)向所述含有CRP的溶液添加至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含在光源激发后能发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，并且所述供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合于CRP，
(c)向所述含有CRP的溶液添加至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)的成分，并且所述受体成分能直接或能通过该组成分中的一种或多种成分结合于CRP，
(d)利用光源激发(b)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)，
(e)检测(c)的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)所发射的电磁辐射，以检测所述的结合事件。
2、一种用于检测两个成分的结合事件的方法，其中，所述成分可以直接或通过一个或多个成分结合C1q，该方法包括下面的步骤：
(a)首先引入含有C1q的溶液；
(b)向所述含有C1q的溶液添加至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含在光源激发后能发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，并且所述供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合于C1q，
(c)向所述含有C1q的溶液添加至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)的成分，并且所述受体成分能直接或能通过该组成分中的一种或多种成分结合于C1q，
(d)利用光源激发(b)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)，
(e)检测(c)的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)所发射的电磁辐射，以检测所述的结合事件。
3、如权利要求1或2所述的方法，其中电磁辐射是荧光辐射。
4、如权利要求1或2所述的方法，其中(d)的光源是激光器或灯。
5、如权利要求1或2所述的方法，其中利用光电倍增管进行(e)的检测。
6、如权利要求1所述的方法，其中根据(b)和/或(c)的成分组的成分可以在空间上相继地结合CRP或互相结合。
7、如权利要求2所述的方法，其中根据(b)和/或(c)的成分组的成分可以在空间上相继地结合C1q或互相结合。
8、如权利要求1到7任一项所述的方法，其中所述成分是多肽或包含多肽。
9、如权利要求8所述的方法，其中至少一种成分是抗体。
10、如权利要求9所述的方法，其中该抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。
11、如权利要求1所述的方法，其中至少一种成分是CRP的天然结合伙伴。
12、如权利要求11所述的方法，其中CRP的天然结合伙伴是C1q。
13、如权利要求12所述的方法，其中权利要求1(a)或权利要求1(b)的成分组包含C1q和抗C1q的抗体。
14、如权利要求2所述的方法，其中至少一种成分是C1q的天然结合伙伴。
15、如权利要求14所述的方法，其中天然结合伙伴是CRP。
16、如权利要求15所述的方法，其中权利要求2(a)或权利要求2(b)的成分组包含CRP和抗CRP的抗体。
17、如权利要求1或2所述的方法，其中通过无发射能量转移，信号从(b)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)转移到(c)的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)。
18、如权利要求17所述的方法，其中无发射能量转移是荧光共振能量转移。
19、如权利要求1或2所述的方法，其中信号通过单线态氧转移。
20、如权利要求19所述的方法，其中根据权利要求1(b)或2(b)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)包含通过激光激发后能将三线态氧转化为单线态氧的化合物，并且其中根据权利要求1(b)或2(b)的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)包含至少一种单线态氧可激发的第一化合物并包含至少一种第二化合物，该第二化合物能以无发射方式吸收可由单线态氧激发的所述化合物吸收的能量并以荧光辐射形式进行发射。
21、如权利要求20所述的方法，其中供体基团和/或受体基团位于颗粒上。
22、如权利要求21所述的方法，其中颗粒平均直径大约是200nm。
23、如权利要求1到22任一项所述的方法，其用于检测具有未知CRP含量的CRP溶液的浓度。
24、如权利要求1到22任一项所述的方法，其用于检测具有未知C1q含量的C1q溶液的浓度。
25、如权利要求23或24所述的方法，其中该溶液是血清、血浆或用生理缓冲液或用水稀释的血清或血浆。
26、如权利要求25所述的方法，其是用于检测生物体的炎症状态和/或用于检测心搏停止和/或中风危险的诊断方法。
27、如前述任一权利要求所述的方法，其是可以一步实施的能进行HTS的均相方法。
28、如权利要求1所述的方法，其还包括在步骤(a)之前和/或步骤(b)之前和/或步骤(c)之前和/或步骤(d)之前添加至少一种待检测物质的额外步骤，以观察是否所述待检测物质影响CRP和结合CRP的成分之间的结合事件。
29、如权利要求2所述的方法，其包括在步骤(a)之前和/或步骤(b)之前和/或步骤(c)之前和/或步骤(d)之前添加至少一种待检测物质的额外步骤，以观察是否所述待检测物质影响C1q和结合C1q的成分之间的结合事件。
30、如权利要求28或29所述的方法，其用于检测以调节、抑制或激活方式作用于结合事件的物质。
31、用于检测CRP和结合CRP的成分之间的结合事件的能实施HTS的诊断检测系统，该系统包括下面的成分：
(a)至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含在光源激发后能发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，并且所述供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合于CRP，
(b)至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)的成分，并且所述受体成分能直接或能通过该组成分中的一种或多种成分结合于CRP。
32、用于检测C1q和结合C1q的成分之间的结合事件的能实施HTS的诊断检测系统，该系统包括下面的成分：
(a)至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含在光源激发后能发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，并且所述供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合于C1q，
(b)至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)的成分，并且所述受体成分能直接或能通过所述该组成分中的一种或多种成分结合于C1q。
33、如权利要求31或32所述的能实施HTS的检测系统，其还包括下面额外的成分：
(c)血清或血浆，或用生理缓冲液或水稀释的血清或血浆
(d)用于激发(a)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的光源，
(e)用于检测(b)所发射的电磁辐射的检测系统。
34、用于检测活性物质的能实施HTS的测定系统，其中，所述活性物质以调节的方式作用于CRP和结合CRP的成分之间的相互作用，所述系统包括下面的成分：
(a)至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含在光源激发后能发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，此外，该供体成分能接收由(a)的化合物或一组化合物所发射的信号并能以电磁辐射形式发射该信号，并且该供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合于CRP，
(b)至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)的成分，并且所述受体成分能直接或能通过该组成分中的一种或多种成分结合于CRP，
(c)至少一种待检测化合物。
35、用于检测活性物质的能实施HTS的测定系统，其中，所述活性物质以调节的方式作用于C1q和结合C1q的成分之间的相互作用，所述系统包括下面的成分：
(a)至少一种供体成分或含有至少一种供体成分的一组成分，所述供体成分是包含光源激发后能发射信号的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的成分，并且所述供体成分能接收(a)的化合物或一组化合物所发射的信号并能以电磁辐射形式发射该信号，并且所述供体成分能直接或能通过来源于该组成分的一种或多种成分结合于C1q，
(b)至少一种受体成分或含有至少一种受体成分的一组成分，所述受体成分是包含能接收(b)的化合物或一组化合物所发射的信号并以电磁辐射形式发射该信号的至少一种化合物或一组化合物(受体基团)的成分，并且所述受体成分能直接或能通过该组成分中的一种或多种成分结合于C1q，
(c)至少一种待检测化合物。
36、如权利要求34或35所述的能实施HTS的测定系统，其还包括下面额外的成分：
(d)用于激发(a)的至少一种化合物或一组化合物(供体基团)的光源，
(e)用于检测(b)所发射的电磁辐射的检测系统。
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