CN1701806A - 注射用脑得生冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

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CN1701806A CN 200510013330 CN200510013330A CN1701806A CN 1701806 A CN1701806 A CN 1701806A CN 200510013330 CN200510013330 CN 200510013330 CN 200510013330 A CN200510013330 A CN 200510013330A CN 1701806 A CN1701806 A CN 1701806A
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欧来良
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Abstract

本发明是一种注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，包括三七提取物、川芎提取物、红花提取物、山楂提取物和葛根提取物中的有效活性成分和辅料制成，它的重量配比是：三七有效活性成分4－20份，川芎有效活性成分1－10份，红花有效活性成分10－50份，葛根有效活性成分2－15份，山楂有效活性成分2－15份，氯化钠5－15份。采用水－醇提取工艺，既保留了传统中药煎煮工艺中的有效成分，又增加了各味中药中有效成分的溶出度；采用专用树脂吸附技术，富集了各味中药中的有效活性成分。提高了疗效，还解决了中药注射不稳定性和相关副作用。本发明具有活血化瘀，疏通经络，醒脑开窍之功效，可用于脑动脉硬化，缺血性脑中风及脑出血后遗症的治疗。

Description

注射用脑得生冻干粉针剂及其制备方法
技术领域
本发明属于中药的制药领域，具体涉及一种注射用脑得生冻干粉针制剂及其制备方法。
背景技术
注射用脑得生冻干粉针制剂是我国药典中收载的实用方剂脑得生的改进剂型，具有活血化瘀，疏通经络，醒脑开窍之功效，临床主要用于脑动脉硬化，缺血性脑中风及脑出血后遗症的治疗具有良好的效果。目前脑得生的剂型主要有片剂、丸剂、冲剂等，制备方法也是主要采用传统的生药水煎和生药粉混合的方法制备(中国药典2000版一部)，这些剂型崩解较慢，吸收不完全、生物利用度不高，疗效缓慢。
中国专利CN 1366912A公开了纳米脑得生制剂药物及其制备方法，该专利采用微波萃取方式将脑得生中的各单味药制成纳米级颗粒，按比例混合制成各种口服等制剂，一定程度上提高了制剂的生物利用度。但考虑到脑中风的防病病程(病程较急)和临床(昏迷、饮食困难等)特点，口服制剂显然不是一种理想剂型。另外，该专利的制备方法中设备要求复杂，条件苛刻。目前尚无注射用脑得生制剂的问世。
发明内容
本发明的目的在于提供一种注射用脑得生冻干粉针剂及其制备方法，本发明稳定性好、生物利用度高，是更适宜临床需求的注射用脑得生冻干粉针制剂。本发明的特征是对三七、川芎、红花、葛根、山楂(去核)分别采用醇-水提取工艺，提取物中既保留了传统中药煎煮工艺中的有效成分，又增加了各味中药中有效成分的溶出度；采用专用树脂吸附技术，富集了各味中药中的有效活性成分，除去绝大部分的非功效成分，将各提取物科学配比。
本发明注射用脑得生冻干粉针剂，它是包括以水或乙醇水溶液为溶剂的三七提取物、川芎提取物、红花提取物、山楂提取物和葛根提取物中的有效活性成分和辅料，其重量配比是：
三七有效活性成分4-20份
川芎有效活性成分1-10份
红花有效活性成分10-50份
葛根有效活性成分2-15份
山楂有效活性成分2-15份
氯化钠5-15份
优选配比为：
三七有效活性成分5-15份
川芎有效活性成分1-6份
红花有效活性成分15-30份
葛根有效活性成分4-10份
山楂有效活性成分3-10份
氯化钠6-12份
本发明注射用脑得生冻干粉针剂制备方法是经过下述步骤：将三七提取物、川芎提取物、红花提取物、山楂提取物、葛根提取物有效活性成分进行配比，混合后用水或10-80％的乙醇水溶液溶解，通过大孔吸附树脂(FL-1)柱树脂法脱鞣质。配以注射用氯化钠，用注射用水配成溶液(500-3000ml)。然后调节pH值至7-7.5，过滤、灭菌，分装于西林瓶，低温冷冻干燥，即得冻干制品。
药材的前处理，将药材三七、川芎、红花、山楂、葛根分别挑选、洗净、烘干、粉碎成颗粒。脱鞣制工艺：将上述配比后提取物溶于一定量乙醇水溶液中，通过脱鞣质树脂柱，回收乙醇，减压干燥，粉碎，即可。
所述的三七提取物的制备：称取三七，第一次加入5-10倍(三七∶乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)的30％-80％的乙醇水溶液50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的1-10倍量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂(SA-1)柱纯化，用10-80％乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
所述的川芎提取物的制备：称取一定量川芎，第一次加入5-10倍(川芎∶乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)的30％-90％的乙醇水溶液50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-90％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的1-10倍量，冷却后过滤至澄清，过吸附树脂(ME-1)柱纯化，用10-80％乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压冷冻干燥，即得。
所述的红花提取物的制备：称取红花，第一次加入5-15倍(红花∶乙醇水溶液＝1∶5-15，W/v)的水或10％-80％的乙醇水溶液25-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的水或10％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的1-10倍量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂(FL-2)柱纯化，10-80％的乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，粉碎成细粉，即得。
所述的山楂提取物的制备：称取一定量山楂，第一次加入5-10倍(山楂∶乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)的30％-80％的乙醇水溶液50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的1-10倍量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂(FL-2)柱纯化，10-80％的乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
所述的葛根提取物的制备：称取一定量葛根，第一次加入5-10倍(葛根∶乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)的30％-80％的乙醇水溶液50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的1-10倍量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂(FL-2)柱，10-80％的浓度的乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
上述的制备中所述的过吸附树脂柱的吸附速度是1-2.5BV/h(床体积/小时)，所述的解吸速度是1-2BV/h。
上述诸备工艺中所用树脂FL-1、FL-2、SA-1、ME-1均为苯乙烯骨架类型的大孔吸附树脂，由天津欧瑞生物科技有限公司研制生产。
本发明具有活血化瘀，疏通经络，醒脑开窍之功效，可用于脑动脉硬化，缺血性脑中风及脑出血后遗症的治疗。
本发明与现有技术相比：在各药材的提取精制过程中，采用水-醇提取工艺，既保留了传统中药煎煮工艺中的有效成分，又增加了各味中药中有效成分的溶出度；采用专用树脂吸附技术，富集了各味中药中的有效活性成分，除去绝大部分(色素、鞣质、脂蛋白等)的非功效成分。提高了疗效，还解决了中药注射不稳定性和相关副作用。
图附说明
图1脑得生制剂对大鼠脑梗死后行为的影响。
具体实施方式
实施例1
药材的前处理：将药材三七、川芎、红花、山楂、葛根分别挑选、洗净、烘干、粉碎成颗粒。
提取物的制备
三七提取物的制备：称取三七78g，第一次加入8倍量(W/v，重量/体积)50％的乙醇水溶液70℃提取3小时，第二次加入5倍量的50％乙醇水溶液提取1.5小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的5倍量，即每5ml相当于1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，2BV(床体积)/h的速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装SA-1树脂100ml)，50％的乙醇水溶液1BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
川芎提取物的制备：称取川芎78g，第一次加入8倍量(W/v)90％的乙醇水溶液80℃提取3小时，第二次加入5倍量90％的乙醇水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的5倍量，即相当于每5ml提取液含1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装Al-1树脂100ml)，70％的乙醇水溶液1BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压冷冻干燥，即得。
红花提取物的制备：称取红花91g，第一次加入1000ml的水溶液25℃提取3小时，第二次加入500ml水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂150ml)，45％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，粉碎成细粉，即得。
山楂提取物的制备：称取山楂157g，第一次加入7倍量(W/v，重量/体积)80％的乙醇水溶液80℃提取3小时，第二次加入4倍量80％的乙醇水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的5倍量，即相当于每5ml提取液含1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂100ml)，70％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
葛根提取物的制备：称取葛根261g，第一次加入10倍量(W/v，重量/体积)60％的乙醇水溶液80℃提取3小时，第二次加8倍量80％的乙醇水溶液提取1小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的2倍量，即相当于每2ml提取液含1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂150ml)，70％的乙醇水溶液1BV/h速度解吸过吸附树脂柱，7回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
提取物的配比
三七有效活性成分6g，川芎有效活性成分1g，红花有效活性成分15g，葛根有效活性成分5g，山楂有效活性成分4g。
脱鞣制工艺
将上述配比后提取物溶于500ml的50％乙醇水溶液中，常温，2.5BV/h流速通过脱鞣制树脂柱(柱高400mm，柱径15mm，内装FL-1树脂200ml)，1BV/h的水冲洗，以替换树脂中残存的药液，回收乙醇，减压干燥，粉碎，即可。
注射用脑得生冻干粉针制剂的制备
取上述脱鞣质后的提取物，注射用氯化钠9g，用注射用水配成溶液1000ml。然后调节pH值至7-7.5，过滤、灭菌，分装于10ml西林瓶，低温冷冻干燥，即得。
实施例2
1、药材的前处理
将药材三七、川芎、红花、山楂、葛根分别挑选、洗净、烘干、粉碎成颗粒。
2、提取物的制备
三七提取物的制备：称取三七78g，第一次加入10倍量：乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)70％的乙醇水溶液50℃提取3小时，第二次加入5倍量的70％乙醇水溶液提取1.5小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至5倍量，即每5ml相当于1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装SA-1树脂100ml)，50％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
川芎提取物的制备：称取川芎78g，第一次加入10倍量(W/v)80％的乙醇水溶液70℃提取3小时，第二次加入8倍量80％的乙醇水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至5倍量，即每5ml相当于1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装AL-1树脂100ml)，70％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，过吸附树脂柱，70％的乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压冷冻干燥，即得。
红花提取物的制备：称取红花91g，第一次加入10倍量(W/v)30％的乙醇水溶液60℃提取3小时，第二次加入8倍量30％的乙醇水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，减压蒸馏回收乙醇，加水至5倍量，即每5ml相当于1g生药，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂100ml)，70％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，粉碎成细粉，即得。
山楂提取物的制备：称取山楂157g，第一次加入10倍量(W/v)70％的乙醇水溶液70℃提取3小时，第二次加入6倍量70％的乙醇水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药5倍量，即每5ml相当于1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂100ml)，40％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
葛根提取物的制备：称取葛根261g，第一次加入12倍量(W/v)80％的乙醇水溶液70℃提取3小时，第二次加8倍量80％的乙醇水溶液，70℃提取1小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的2倍量，即每2ml相当于1g生药冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂100ml)，30％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
3、提取物的配比
三七有效活性成分6g，川芎有效活性成分2g，红花有效活性成分18g，葛根有效活性成分5g，山楂有效活性成分3g。
4、脱鞣制工艺
将上述配比后提取物溶于500ml的50％乙醇水溶液中，2.5BV/h通过脱鞣质树脂柱(柱高400mm，柱径15mm，内装FL-1树脂200ml)，200ml水以1BV/h的速度冲洗，以替换树脂中残存的药液，回收乙醇，减压干燥，粉碎，即可。
5、注射用脑得生冻干粉针制剂的制备
取上述脱鞣质后的提取物，注射用氯化钠9g，用注射用水配成溶液1000ml。然后调节pH值至7-7.5，过滤、灭菌，分装于西林瓶，低温冷冻干燥，即制成脑得生冻干粉针剂、每瓶含量活性成分为10毫克，每次用量为20-60毫克，每日使用1-2次。
取上述脱鞣质后的提取物，注射用氯化钠9g，用注射用水配成溶液1000ml。然后调节pH值至7-7.5，过滤、灭菌，分装于西林瓶，低温冷冻干燥，即得。
实施例3
1、药材的前处理
将药材三七、川芎、红花、山楂、葛根分别挑选、洗净、烘干、粉碎成颗粒。
2、提取物的制备
三七提取物的制备：称取三七78g，第一次加入8倍量(W/v)50％的乙醇水溶液70℃提取3小时，第二次加入5倍量的50％乙醇水溶液提取1.5小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至生药的5倍量，即每5ml相当于1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装SA-1树脂100ml)，30％的乙醇水溶液1BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，产率为8％。
川芎提取物的制备：称取川芎78g，第一次加入8倍量(W/v)90％的乙醇水溶液80℃提取3小时，第二次加入5倍量90％的乙醇水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至5倍量，即每5ml相当于1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装AL-1树脂100ml)，50％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压冷冻干燥，产率为2.3％。
红花提取物的制备：称取红花91g，第一次加入10倍量(W/v)的30％乙醇水溶液60℃提取3小时，第二次加入8倍量水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，回收乙醇，滤去沉淀，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂100ml)，30％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，粉碎成细粉，产率为24％。
山楂提取物的制备：称取山楂157g，第一次加入7倍量(W/v)80％的乙醇水溶液80℃提取3小时，第二次加入4倍量80％的乙醇水溶液提取2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至5倍量，即每5ml相当于1g生药，冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂100ml)，30％的乙醇水溶液1.5BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，产率为1.8％。
葛根提取物的制备：称取葛根261g，第一次加入10倍量(W/v)60％的乙醇水溶液80℃提取3小时，第二次加8倍量80％的乙醇水溶液提取1小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至2倍量，即每2ml相当于1g生药冷却后过滤至澄清，常温，以2BV/h速度过吸附树脂柱(柱高300mm，柱径15mm，内装FL-2树脂100ml)，20％的乙醇水溶液1BV/h速度解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，产率为2.2％。
3、提取物的配比
三七有效活性成分8g，川芎有效活性成分2g，红花有效活性成分20g，葛根有效活性成分6g，山楂有效活性成分4g。
4、脱鞣制工艺
将上述配比后提取物溶于5000ml的50％乙醇水溶液中，2.5BV/h流速通过脱鞣质树脂柱柱高400mm，柱径15mm，内装FL-1树脂200ml)，1BV/h的水冲洗，以替换树脂中残存的药液，回收乙醇，减压干燥，粉碎，即可。
5、注射用脑得生冻干粉针制剂的制备
取上述脱鞣质后的提取物，注射用氯化钠13.5g，用注射用水配成溶液1000ml。然后调节pH值至7-7.5，过滤、灭菌，分装于西林瓶，低温冷冻干燥，即制成脑得生冻干粉针剂、每瓶含量活性成分为20毫克，每次用量为40-80毫克，每日使用1-2次。
注射用脑得生冻干粉针剂的药效学试验
注射用脑得生冻干粉针剂依据了原有的配方组成，通过生产工艺的革新，剂型的改变，提高了活性成分的浓度，生物利用度，方便了临床应用，主治功效依然是用于防治缺血性脑中风和中风后遗症。药效学方面也表现出了很好的效果。
脑得生冻干粉针剂对大鼠局灶性脑梗死的影响
1、实验材料
试剂与药品  生理盐水；红四氮唑(分析纯)为北京市朝阳区八里庄化工厂生产系中国华东师范大学化工厂生产；10％福尔马林；水合氯醛，为北京市朝阳区八里庄化工厂生产；三氯化铁：H、E试剂均由日本サクテ精株会社生产；脑得生片(按药典方法制备)，脑得生冻干粉针剂(自制，实施例3)；
动物wister大鼠，雄性，体重230--260g，二级动物，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，许可证号：SCXK11-00--0006。
饲养环境：清洁级动物饲养室，室温22±2℃，湿度60±15％。24小时排风，自然光照明。
2、实验方法
脑栓塞动物模型制备选取健康成年雄性大鼠，体重230-260g，水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，左侧卧位固定，右侧脸部剃毛，局部以酒精棉球消毒，于亚细菌手术条件下，参照文献(Tamura A，et，al.J Cerebral blood flow Metab，1981(1)：53-57)]经眼外眦与外耳道连线间开口约1.5CM，分离颧肌，剪断颧骨，固定窗口，按Tumura等方法，颅骨底处开颅窗，暴露右侧位于嗅束及大脑下静脉之间的一段大脑中动脉，置一小块滤纸(2×3mm)敷于中动脉处，将10μl的50％的FeCL3滴于滤纸片上，30分钟后取出滤纸片，用生理盐水清洗创面，滴入青霉素钠注射液0.2ml(20万单位/ml)预防感染，逐层缝合创口，碘酒棉消毒，回笼饲养。
实验分组及给药方案将手术24小时后的大鼠按列表评定行为障碍程度，根据分数高低均匀分为7组，每组15只，其中10只进行行为与梗塞面积的观察，另外5只进行病理组织学观察。设假手术组(未阻断大脑中动脉)，空白对照组，均给予蒸馏水。脑得生片组1.2g/kg，每天定时灌胃给药一次，脑得生粉针剂组0.2g/kg，每天定时腹腔注射给药一次给药后1小时进行行为学评分。连续给药五天，观察药物作用效果。
行为测试各组大鼠MCAO术后24小时及每天给药后1小时按照“表1”评分标准进行运动、肌张力等神经功能损害程度评分。
表1 MCAO大鼠行为障碍的评分标准
  项目   表现   得分
  提鼠尾离开地面一尺，观察前肢屈曲情况   双前肢对称伸向地面手术对侧前肢出现腕屈曲手术对侧前肢出现肘屈曲手术对侧肩内旋手术对侧既有腕、肘的屈曲又有肩内旋者   01234
  将动物置于平桌面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力   双侧阻力对等且有力手术对侧推动时阻力轻度下降者手术对侧推动时阻力中度下降者手术对侧推动时阻力重度下降者   0123
  将动物两前肢置于垂直金属网上，观察两前肢的肌张力   双侧肌力对等且自动上爬。攀网不动攀网30秒后落下攀网即落下者动物有不停地向一侧转圈者   01231
梗死范围测量在末次给药1小时后，如上法麻醉，断头取脑，置生理盐水中，放入冰箱冷冻60分钟后取出，去掉嗅脑、小脑和低位脑干，将每个大脑组织切成5片，厚度约2mm，以4％红四氮唑(TTC)染色，37℃水浴20分钟后取出。10％福尔马林固定24小时后，根据重量法计算梗塞部重量占全脑组织重量的百分比，作为梗塞范围的指标。
病理检查将各组大鼠脑组织标本10％中性福尔马林固定、脱水、石蜡包埋、常规制片、HE染色，光镜下进行组织形态学观察。
实验结果
脑得生制剂对大鼠脑血栓后行为的影响：经过脑血栓术的大鼠麻醉清醒后即有偏瘫症状的出现。主要表现为不同程度的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，抵抗阻力降低，甚至有些动物出现不停向一侧转圈。从表1和图1可以看出，对照组术后1天的行为评分和术后评分无明显变化，第2天后行为有一缓和恢复趋势；图1脑得生制剂对大鼠脑梗死后行为的影响。术后给予脑得生片剂和脑得生冻干制剂的大鼠，2天后其行为变化与对照组相比有明显改善(P＜0.01)，脑得生各制剂对大鼠局灶性脑梗塞后行为的影响差别无显著性，表明本品可减轻大脑中动脉阻塞引起的脑器质性病变。假手术组的动物行为无明显改变。
表2 NDS制剂对大鼠脑中动脉阻塞后行为的影响
 组别  剂量  药前评分                                       药后评分(X±SD)
 (g/kg)  X±SD  1天  2天  3天  4天  5天
 假手术  --  0.0±0.0  0.0±0.0  0.0±0.0  0.0±0.0  0.0±0.0  0.0±0.0
 空白对照  --  7.2±1.0  7.2±1.0  7.1±1.3  6.9±1.2  6.6±1.0  6.8±0.9
 脑得生冻干粉针剂组  0.2  7.2±0.6  6.4±1.3  5.3±1.6  4.4±1.8**  4.1±1.7**  3.1±1.6**
 脑得生片组  1.2  6.9±0.9  5.8±1.2*  4.7±1.3**  3.9±0.9**  3.2±1.1**  2.9±1.4**
与空白对照组比较：*：P＜0.05，**：P＜0.01
X±SD，*：P＜0.05，**：P＜0.01 νs对照组
大鼠脑血栓形成后脑梗塞范围的观察：实验分别采用TTC染色技术检查了实验动物脑梗塞程度，由表2可以看出，血栓形成术后5天大鼠脑组织梗塞程度明显，梗塞面积占总脑面积的8.10±1.91％。给药组2个样品的大鼠脑梗塞面积也较空白对照组显著缩小，治疗组之间的差异并无统计学意义，而且服用剂量大大减少。
表2脑得生制剂对MCAO大鼠脑梗塞面积的影响(5天后)
  组别   n      服药时间(d)  剂量(g/kg)   脑梗塞面积百分比(％)
  假手术空白对照粉针剂组片剂组   10     5            ---10     5            --10     5            0.210     5            1.2   0.00±0.008.10±1.954.50±1.51**4.30±2.84**
**P＜0.01 νs对照组

Claims (10)

1、一种注射用脑得生冻干粉针剂，包括三七提取物、川芎提取物、红花提取物、山楂提取物和葛根提取物中的有效活性成分和辅料制成，其特征在于它的重量配比是：
三七有效活性成分4-20份
川芎有效活性成分1-10份
红花有效活性成分10-50份
葛根有效活性成分2-15份
山楂有效活性成分2-15份
氯化钠5-15份。
2、按照权利要求1所述的注射用脑得生冻干粉针剂，其特征在于它的重量配比是：
三七有效活性成分5-15份
川芎有效活性成分1-6份
红花有效活性成分15-30份
葛根有效活性成分4-10份
山楂有效活性成分3-10份
氯化钠6-12份。
3、权利要求1所述的注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，其特征在于它是经过下述步骤：将三七提取物、川芎提取物、红花提取物、山楂提取物、葛根提取物有效活性成分进行配比，混合后用水或10-70％的乙醇水溶液溶解，通过大孔吸附树脂柱脱鞣质，配以辅料注射用氯化钠，用注射用水配成溶液，然后调节pH值至7-7.5，过滤、灭菌，分装于西林瓶，低温冷冻干燥，即得冻干制品。
4、按照权利要求3所述的注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：
所述的三七提取物的制备：称取计量的三七，第一次加入5-10倍的30％-80％的乙醇水溶液(三七∶乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至1-10倍生药量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂柱脱鞣质，用10-80％乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
5、按照权利要求3所述的注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：
所述的川芎提取物的制备：称取计量的川芎，第一次加入5-15倍的30％-90％的乙醇水溶液(川芎∶乙醇水溶液＝1∶5-15，W/v)50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-90％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至1-10倍生药量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂柱脱鞣质，用10-80％乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压冷冻干燥，即得。
6、按照权利要求3所述的注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：
所述的红花提取物的制备：称取计量的红花，第一次加入5-15倍的水或10％-80％的乙醇水溶液(红花∶水或乙醇水溶液＝1∶5-15，W/v)25-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的水或10％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至1-10倍生药量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂柱脱鞣质，10-80％的乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，粉碎成细粉，即得。
7、按照权利要求3所述的注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：
所述的山楂提取物的制备：称取计量的山楂，第一次加入5-10倍的30％-80％的乙醇水溶液(山楂∶乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至1-10倍生药量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂柱脱鞣质，10-80％的乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
8、按照权利要求3所述的注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：
所述的葛根提取物的制备：称取计量的葛根，第一次加入5-10倍的30％-80％的乙醇水溶液(葛根∶乙醇水溶液＝1∶5-10，W/v)50-80℃提取0.5-3小时，第二次加入3-8倍的30％-80％的乙醇水溶液提取0.5-2小时，合并两次提取溶液，静置12小时，滤去沉淀，而后减压蒸馏回收乙醇，加水至1-10倍生药量，冷却后过滤至澄清，过大孔吸附树脂柱，10-80％的乙醇水溶液解吸，回收乙醇，浓缩至稠膏状，减压干燥，再粉碎成细粉，即得。
9、按照权利要求3-8任一项所述的注射用脑得生冻干粉针剂的制备方法，其特征在于：所述的过吸附树脂柱的吸附速度是1-2.5BV/h，所述的解吸速度是1-2BV/h。
10、权利要求1所述的注射用脑得生冻干粉针剂用于脑动脉硬化，缺血性脑中风及脑出血后遗症药物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN115300553A (zh) * 2018-07-18 2022-11-08 中国医学科学院药物研究所 一种药物组合物、制备方法及其在缺血性脑卒中治疗中的应用

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