CN1692907A - 治疗高血脂症的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，其特征是含有有效量的阿昔莫司(Acipimox)和普伐他汀(Pravastatin)钠(以游离酸计)重量比为5～40∶1，优选重量比为5～10∶1，进一步优选重量比为7.5∶1。其降脂作用明显优于相同剂量的单方，表明两药合用有协同作用，同时又无明显的毒性作用。上述组合物对预防治疗高血脂伴不稳定型心绞痛取得了意外的显著效果，明显优于相同剂量的单方，协同作用明显。是冠心病患者的理想选择。

Description

治疗高血脂症的组合物

所属技术领域

本发明涉及治疗高血脂症的新的组合物，特别是含有阿昔莫司和普伐他汀钠及药用辅料的组合物。

背景技术

随着医药科学的不断发展，人们认识到胆固醇、脂肪等含量过高是发生心血管疾病的基本病因，高血脂是发生冠心病及高血压的主要危险因素。因此，人们开始把血脂调节药的开发作为防治心血管疾病的重点。自20世纪80年代末起，降血脂药物大量推出，其中他汀类药物受到人们好评，其临床疗效之佳是其它各类调节血脂药物所不能相比的。十多年来，几个国际大规模冠心病防治试验的完成，证实他汀类药物可以降低冠心病的发病率和死亡率，而且能使已经形成的动脉粥样硬化斑块发展减缓，甚至减退，从而打破了冠心病不可逆转的传统观念，由“他汀”引发的一场血脂革命正在全球兴起。目前，医药界对调脂药在防治心血管疾病方面的作用充满信心，调脂疗法将成为21世纪预防心血管疾病的主要方法。

普伐他汀(Pravastatin)是国内外进行了广泛研究并已在多国上市的羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，它可通过抑制肝脏中胆固醇合成的限速酶HMG-CoA的活性，使胆固醇的合成减少，它还可使低密度脂蛋白受体合成增加，增强肝脏对低密度脂蛋白的摄取，结果使血胆固醇和低密度脂蛋白水平降低，中度降低血清甘油三酯水平和增高血清高密度脂蛋白水平，由此可有效预防动脉粥样硬化和冠心病。普伐他汀是一种研究最为广泛的他汀类药物，已进行了三项具有划时代意义的临床研究：西方苏格兰冠心病预防研究(WOSCOPS)；胆固醇与心血管事件(CARE)的研究；长程普伐他汀在缺血性疾病中的疗效研究(LIPID)，以及其他多项研究。基于上述研究的安全性数据，FDA允许本品减少有关肝功能方面的检测。而其他的他汀类药物必须进行多项肝功能检测。普伐他汀是目前他汀类药物中仅有的可用于胆固醇水平较高的或有冠心病的病人进行心脏病、中风一级和二级预防的药物，此新制剂的开发为临床医生提供了一种使用高剂量他汀类药物进行治疗的选择。基于高剂量的安全性和疗效研究结果，美国FDA日前批准了Bristol-Myers Squibb公司的高剂量(80mg)普伐他汀(pravastatin)制剂(Pravachol)。因而普伐他汀是一个长期应用安全性好，不良反应极其轻微的强效降血脂药物，它在降低血脂和预防治疗冠心病和动脉粥样硬化方面具有极其广泛的应用前景。

阿昔莫司(Acipimox)是一种人工合成的烟酸衍生物，它完全不同于HMG-CoA还原酶抑制剂降低血脂的作用机理，通过抑制脂肪组织的分解，减少游离脂肪酸自脂肪组织释放，从而降低甘油三酯(TG)在肝脏中的合成，并通过抑制极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的合成，使血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的浓度下降。本品还可抑制肝脏脂肪酶的活性，减少高密度脂蛋白(HDL)的分解。该药口服吸收迅速，药后2小时内血药浓度即达峰值，半衰期为2小时。该药不与血浆蛋白结合，不被代谢，主要以原形经尿排出。在临床上，阿昔莫司可有效治疗高甘油三酯症(IV型)、高胆固醇血症(IIa型)及高甘油三酯合并高胆固醇血症(IIb型)，是一种安全、有效、耐受性好的调血脂药。

目前，该领域的研究趋势是将两种不同作用机制的调血脂药制成复方制剂，从而使降脂作用更加全面，同时还可发挥协同作用，增强疗效，减少毒副作用。

普伐他汀是目前他汀类药物中仅有的可用于胆固醇水平较高的或有冠心病的病人进行心脏病、中风一级和二级预防的药物；阿昔莫司可通过抑制脂肪组织的分解，显著降低血中游离脂肪酸的水平，改善心肌能量代谢，降低缺血心肌的耗氧量，因而，我们对普伐他汀和阿昔莫司两者伍用对不稳定型心绞痛伴高血脂患者的临床预防疗效进行了研究。

美国专利US5260305A公开了HMG-CoA还原酶抑制剂普伐他汀和烟酸及其衍生物的组合物，具体公开了规格为普伐他汀5mg、10mg、20mg、40mg和阿昔莫司750mg的组合物的制备，但没有公开其有益效果及最佳配比的药理实验数据。中国专利申请CN1425374A公开了阿昔莫司和洛伐他汀组合物，公开的比例是阿昔莫司和洛伐他汀的重量比为25～50∶1，优选的比例是25∶1或37.5∶1，但没有公开阿昔莫司和普伐他汀复方的最佳配比及相应药理实验数据。

中国专利申请CN01820935.1A公开了普伐他汀和烟酸肌醇酯以2∶400的重量比对Beagle犬进行的联合给药降低血中胆固醇含量的效果，但没有公开普伐他汀与烟酸肌醇酯的最佳配比方面的药理实验数据以及普伐他汀与阿昔莫司联合用药的效果和相应的药理实验数据。

发明目的

本发明的目的是通过一系列科学的筛选实验，提供一种新的治疗高脂血症的药物组合物，其优点是作用全面和增强、毒副作用低和使用方便；通过临床试验，提供一种新的有效预防冠心病的药物组合物的特定制剂。本药物含有特定比例的阿昔莫司和普伐他汀钠，由于两药作用机制不同，组成组合物后降脂作用将更加全面，并且两药合用有协同作用，其降脂作用明显优于相同剂量的单方；而对于冠心病患者而言，两药合用可协同性的减少心绞痛的发作次数，减少由心肌缺血引起的梗死面积；此外，通过合理选择组合物中普伐他汀钠的用量，使组合物在有效降低血脂水平的同时又无明显的毒副作用，同时本组合物一日只需用药一次，用药方便，这将大大提高患者的顺应性。

发明内容

本发明的组合物由阿昔莫司和普伐他汀钠以及药用辅料组成，其中阿昔莫司和普伐他汀钠的重量比为5～40∶1(普伐他汀的重量以游离酸计，下同)，优选的比例是5～10∶1，进一步优选的比例的是7.5∶1。该组合物的药物制剂的剂型，包括片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸等固体制剂，可以按照本领域公知的一般制剂方法制备，阿昔莫司含量相当于在将组合物给药时约200～750mg的日剂量，普伐他汀钠含量相当于10～160mg的日剂量，其中优选普伐他汀钠含量相当于20～60mg的日剂量。

根据动物实验筛选所得到的最佳组合物比例，根据两种药物作用的机理，创造性地将其用于临床高血脂伴不稳定型心绞痛患者的预防治疗，通过临床试验发现，阿昔莫司和普伐他汀钠缓释制剂对临床高血脂不稳定型心绞痛患者有着协同性的预防治疗效果。普伐他汀钠和阿昔莫司均为降血脂药物，普伐他汀钠可以用于高胆固醇血症患者的一、二级预防，但普伐他汀钠和阿昔莫司合用对于高血脂伴不稳定型心绞痛患者的协同性疗效则不为人所知，其缓释制剂的效果最佳。

本发明的组合物在制成固体制剂，如片剂或胶囊时，为达到持久的治疗效果，优选地将有效量的阿昔莫司制成缓释部分，再与有效量的普伐他汀钠共同制成缓释制剂，如缓释片、缓释胶囊等。相应地，可药用的辅料包括稀释剂，如淀粉、乳糖、甘露醇、预胶化淀粉、糊精、微晶纤维素；崩解剂，如羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠；缓释剂，如乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素-4M、羟丙基甲基纤维素-15M；优特奇RS-100、RL100、RS30D、RL30D、NE30D，以及苏丽丝(Surelease，乙基纤维素的水分散体)粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮，交联聚乙烯吡咯烷酮，润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等。

同Kos Pharmaceuticals公司研制开发的缓释烟酸和洛伐他汀组成的复方制剂相比，本发明药物组合物用阿昔莫司代替烟酸，阿昔莫司适用范围与烟酸相似，但是与烟酸相比具有如下优点：①无初效反应，半衰期较长；②抗脂肪分解作用的持续时间较长，效能较强，无非酯化脂肪酸的反跳现象；③能明显改善葡萄糖耐受性，能降低空腹血糖15％左右，不与口服降糖药发生交互作用，故能用于糖尿病患者；④不引起尿酸代谢变化，可用于高尿酸血症患者；⑤出现肝脏转氨酶高者极少；⑥服药后有面部潮红及皮肤搔痒症状者仅6％左右，明显少于服烟酸治疗者，且多数在服药几天后逐渐自行减轻或消失，一般不影响患者继续治疗。另外，用普伐他汀取代洛伐他汀，可以极大地减小后者带来的不良反应如肝毒性和肌毒性。

本发明的组合物通过药理方面的研究工作，表明当采用本发明的组合物，尤其是采用优选的配比时，与单独应用有效量的阿昔莫司或普伐他汀钠相比，本发明的组合物给出令人吃惊的更好效果，同时毒性没有增加，因而安全剂量范围大，疗效持续时间长，综合效果好，使用方便。本发明的组合物可以每日1～2次给药，优选为每日1次。

本发明中普伐他汀可以为任何一种可以药用的盐，即合适的普伐他汀生理可接受的盐，包括衍生自无机的和有机的碱所形成的盐，为钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、锌盐、铁盐；也可以为任何一种普伐他汀可以药用的酯，即合适的普伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、杂环醇所形成的酯，为甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。

具体实施方式

现通过如下实例进一步说明本发明的内容，但本发明的应用范围不限于下列实例。

实例1

a、阿昔莫司                           200g

   空白丸芯                           250g

   7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)         200g

制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，喷枪压力(CYL)3bar，雾化压力(CAP1)0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。

b、普伐他汀钠(其重量以游离酸计，下)   10g

   空白丸芯                           30g

   7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)         30g

制备工艺：将普伐他汀钠过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵6％，转盘转速160rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。

c、将a和b制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与普伐他汀钠的重量分别为200mg和5mg进行填充，即可。

实例2

a、阿昔莫司                           200g

   乳糖                               30g

   羧甲基淀粉钠                    30g

   微晶纤维素                      18g

   6％PVP的无水乙醇溶液            100g

   硬脂酸镁                        2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、普伐他汀钠                      20g

   羟丙基纤维素                    15g

   预胶化淀粉                      10g

   6％PVP的无水乙醇溶液            30g

   山榆酸甘油酯                    1g

制备工艺：普伐他汀钠过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛，称取处方量的普伐他汀钠和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。

实例3

a、阿昔莫司                        200g

   乳糖                            30g

   羧甲基淀粉钠                    30g

   微晶纤维素                      18g

   6％PVP的无水乙醇溶液            100g

   硬脂酸镁                        2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、普伐他汀钠                      40g

   羟丙基纤维素                    30g

   预胶化淀粉                      20g

   6％PVP的无水乙醇溶液            50g

   山榆酸甘油酯                    2g

制备工艺：普伐他汀钠过100目筛，羟丙基纤维素、预胶化淀粉过80目筛，称取处方量的普伐他汀钠和羟丙基纤维素、预胶化淀粉混合均匀，加入6％PVP的无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压片即得双层片。

实例4

a、阿昔莫司                        300g

   羟丙基甲基纤维素-4M             40g

   微晶纤维素                      30g

   8％PVP的无水乙醇溶液            150g

   硬酯酸镁                        2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和羟丙基纤维素-4M、微晶纤维素混合均匀，加入8％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、普伐他汀钠                      40g

   乳糖                            20g

   羧甲基纤维素钠                  30g

   6％PVP的95％乙醇溶液            50g

   硬酯酸镁                        2g

制备工艺：普伐他汀钠过100目筛，羧甲基纤维素钠、乳糖过80目筛，称取处方量的普伐他汀钠和羧甲基纤维素钠、乳糖混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。

实例5

a、阿昔莫司                            300g

   空白丸芯                            250g

   7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)          200g

制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。

b、a中制得的含阿昔莫司小丸

   Surelease                           90g

   滑石粉                              1g

   纯水                                50g

制备工艺：将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入转盘，开造粒包衣机，入风压力1.0bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：1.5bar，蠕泵5％，转盘转速180rpm，喷入Surelease的纯水溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。

c、按照实例5中b的要求制得普伐他汀钠小丸，与本例b中制得的阿昔莫司小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与普伐他汀钠的重量分别为300mg和10mg进行填充，即可。

实例6

a、阿昔莫司                            300g

   空白丸芯                            300g

   7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)          200g

制备工艺：将阿昔莫司过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒，下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速145rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，50℃烘干，出料。

b、a中制得的含阿昔莫司小丸

   乙基纤维素                     40g

   硬脂酸                         70g

   聚乙二醇-6000                  6g

   滑石粉                         12g

   95％乙醇                       1000g

制备工艺：将a中制得的含阿昔莫司小丸倒入下料斗中。开造粒包衣机，入风温度30℃，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL3bar，CAP1 1.0bar，蠕泵6％，转盘转速175rpm，喷入乙基纤维素、硬脂酸和聚乙二醇-6000的95％乙醇溶液。包衣结束，50℃烘干，出料。

c、普伐他汀钠                     10g

   空白丸芯                       30g

   7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)     30g

制备工艺：将普伐他汀钠过120目筛，处方量称取，倒入下料斗中，开造粒包衣机，入风压力0.5bar，入风温度30℃，CYL：3bar，CAP1：0.8bar，倒入空白丸芯，造粒。下料速度4rpm，蠕泵12％，转盘转速120rpm，喷入7％PVP溶液(溶剂为90％乙醇)。造粒结束，45℃烘干，出料。

d、将b与c制得的小丸采用硬胶囊药物填充机按照每两粒胶囊中含阿昔莫司与普伐他汀钠的重量分别为300mg和5mg进行填充，即可。

实例7

a、阿昔莫司                       400g

    甘露醇                        10g

    乳糖                          40g

    微晶纤维素                    20g

    6％PVP的95％乙醇溶液          120g

   硬酯酸镁                        2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，甘露醇、乳糖、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和甘露醇、乳糖、微晶纤维素混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

b、普伐他汀钠                      10g

   预胶化淀粉                      50g

   甘露醇                          50g

   乳糖                            40g

   6％PVP的95％乙醇溶液            100g

   微粉硅胶                        5g

制备工艺：普伐他汀钠过100目筛，预胶化淀粉、甘露醇、乳糖过80目筛，称取处方量的普伐他汀钠和预胶化淀粉、甘露醇、乳糖混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。

实例8

a、阿昔莫司                        400g

   乳糖                            30g

   羟丙基甲基纤维素-15M            20g

   8％PVP的95％乙醇溶液            150g

   山榆酸甘油酯                    2g

制备工艺：阿昔莫司过100目筛，乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M过80目筛，称取处方量的阿昔莫司和乳糖、羟丙基甲基纤维素-15M混合均匀，加入8％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的山榆酸甘油酯。

b、普伐他汀钠                      20g

   羟丙基纤维素                    25g

   糊精                              20g

   6％PVP的95％乙醇溶液              50g

   滑石粉                            2g

制备工艺：普伐他汀钠过100目筛，羟丙基纤维素、糊精过80目筛，称取处方量的普伐他汀钠和羟丙基纤维素、糊精混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的滑石粉。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。

实例9阿昔莫司和普伐他汀钠复方治疗大鼠高血脂症的复方筛选

摘要：

本试验的目的在于通过筛选来确定毒性低、作用强、使用方便的阿昔莫司和普伐他汀钠复方制剂的组成。采用高脂饲料诱发大鼠高脂血症模型，给模型大鼠连续灌服阿昔莫司(100～400mg/kg)和(或)普伐他汀钠(5～60mg/kg)14天。结果发现，阿昔莫司和普伐他汀钠伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显的治疗作用，降脂效果与两种药物的剂量相关，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg联合用药组效果显著，可显著降低大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平，显著升高高密度脂蛋白胆固醇水平，并对上述指标均表现出协同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg联合用药组效果最显著，优选阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组成的复方。在本实验剂量范围内，联合用药组对与肝毒性和肌毒性相关的血清酶活性无明显影响。

1 试验目的

通过筛选确定阿昔莫司和普伐他汀钠复方制剂的组成，以达到复方制剂毒副作用低、作用全面、效果增强、使用方便之目的。

2 受试药物

2.1 烟酸衍生物

药品名称：阿昔莫司(Acipimox)

批    号：0301002

纯    度：大于99.7％

生产单位：鲁南制药股份有限公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期1年半。

配制方法：临用前用1％羧甲基纤维素钠(CMC)混匀，配成试验所需浓度。

2.2 他汀类药物

药品名称：普伐他汀(pravastatin)钠

批    号：030202

纯    度：大于99.0％

生产单位：百时美施贵宝公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期2年。

配制方法：临用前用1％CMC混匀，配成试验所需浓度。

3 动物

3.1 品系和来源

Wistar大鼠，军事医学科学院医学实验动物中心繁殖，实验动物质量许可证号为医动字D01-3039。

3.2 体重和性别

年龄9周～10周，体重180-220g，雄性。

3.3 饲养条件

动物实验室空气定时排风、光照良好，常温。每笼饲养5只动物，饲以本公司实验动物中心专门为大鼠配制的膨化饲料，自由饮水。动物实验条件合格证号为医动字D01-2051。试验开始前，观察动物进食、活动及粪便等1周，选择健康动物进入试验。

4 大鼠高脂血症模型制备^[1]

大鼠高脂血症模型采用高脂饲料致高脂血症法。高脂饲料配方如下：基础饲料86.3％、胆固醇3％、猪油10％、甲基硫氧嘧啶0.2％、猪胆盐0.5％，保证各成分混合均匀。连续2周。给药期间隔天给予高脂饲料。

5 阿昔莫司和普伐他汀钠对正常大鼠血脂水平的影响

5.1 剂量设置依据

临床上阿昔莫司的剂量为250mg/次(按人体重60kg计算，上述剂量为4.2mg/kg)，2～3次/日，每日量最大不超过1200mg^[2]。按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为50mg/kg/day。再结合文献报道^[3]，将本试验中阿昔莫司的剂量设定为100、200、300、400mg/kg。

临床上普伐他汀的剂量为20mg/次(按人体重60kg计算，上述剂量为0.34mg/kg)，1次/日，按体表面积为单位的剂量等效原则推算，上述人常用剂量换算成大鼠剂量约为1.70mg/kg。文献报道，在高脂饲料导致的兔高脂血症模型上普伐他汀10mg/kg能使血清中胆固醇水平显著降低，并显著改善高胆固醇喂养兔的血管内皮功能失调^[4]。将本试验中普伐他汀钠的剂量设定为5、10、20、30和60mg/kg。

5.2 组别设置

依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，将正常动物随机分为：(1)正常对照组；(2)阿昔莫司100mg/kg组；(3)阿昔莫司200mg/kg组；(4)阿昔莫司300mg/kg组；(5)阿昔莫司400mg/kg组；(6)普伐他汀钠5.0mg/kg组；(7)普伐他汀钠10mg/kg组；(8)普伐他汀钠20mg/kg组；(9)普伐他汀钠40mg/kg组；(10)普伐他汀钠60mg/kg组；(11)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠10mg/kg组；(12)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组；(14)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠10mg/kg组；(15)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组；(16)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组；(17)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀钠10mg/kg组；(18)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组。每组10只。

5.3 给药

临床拟用的给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃4天。灌胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。

5.4 检测指标

血清化学指标包括总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-L)。其中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)检测试剂采用北京中生生物工程高技术公司产品，用SABA/18全自动生化分析仪测定；其余试剂采用日本罗氏试剂公司产品，用日立7020自动生化分析仪测定。测定方法参照试剂说明书取血样前禁食16小时。

6 阿昔莫司和普伐他汀钠对高脂血症大鼠血脂水平的影响

6.1 剂量设置依据

同5.1正常大鼠实验。

6.2 组别设置

依据上述剂量设置，按血清总胆固醇水平均衡原则，将模型大鼠随机分为：(1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)阿昔莫司100mg/kg组；(4)阿昔莫司200mg/kg组；(5)阿昔莫司300mg/kg组；(6)阿昔莫司400mg/kg组；(7)普伐他汀钠5.0mg/kg组；(8)普伐他汀钠10mg/kg组；(9)普伐他汀钠20mg/kg组；(10)普伐他汀钠40mg/kg组；(11)普伐他汀钠60mg/kg组；(12)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠10mg/kg组；(13)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组；(14)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组；(15)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠10mg/kg组；(16)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组；(17)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组；(18)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀钠10mg/kg组；(19)阿昔莫司400mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组。每组10只。

6.3 给药

临床拟用的给药途径为口服，故本试验采用灌胃法给药，连续灌胃14天。灌胃均在动物进食后进行。每天1次。给药体积为0.3ml/100g体重。

6.4 检测指标

同5.4正常大鼠实验。

7 阿昔莫司和普伐他汀钠复方不同组分相互影响试验

7.1 组别设置

从疗效较显著的阿昔莫司和普伐他汀钠剂量组中，确定阿昔莫司和普伐他汀钠复方的剂量：(1)正常对照组；(2)模型对照组；(3)阿昔莫司200mg/kg；(4)阿昔莫司300mg/kg；(5)普伐他汀钠20mg/kg；(6)普伐他汀钠40mg/kg；(7)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组复方组；(8)阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组复方组；(9)阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg组复方组。每组10只。分组前测定血清总胆固醇水平，按均衡原则随机分组。每组10只。

7.2 给药和检测指标

同前述5.3和5.4。

8 试验结果

8.1 阿昔莫司和普伐他汀钠对正常大鼠血脂水平的影响

正常大鼠给药4天后，阿昔莫司、普伐他汀钠和联合用药组的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均有所降低，高密度脂蛋白胆固醇水平升高，给药后血清甘油三酯略有下降，但无统计学差异，见表1。

                        表1  阿昔莫司和普伐他汀钠及复方对正常大鼠血脂的影响

组别	血清总胆固醇(mmol/L)	血清甘油三酯(mmol/L)	低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)	高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)
					正常对照组阿昔莫司100mg/kg阿昔莫司200mg/kg阿昔莫司300mg/kg阿昔莫司400mg/kg普伐他汀钠5mg/kg普伐他汀钠10mg/kg普伐他汀钠20mg/kg普伐他汀钠40mg/kg普伐他汀钠60mg/kg阿200+普10mg/kg阿200+普20mg/kg	1.67±0.221.50±0.301.54±0.281.43±0.20*1.45±0.21*1.52±0.281.48±0.231.43±0.25*1.45±0.20*1.41±0.24*1.44±0.391.39±0.23**	0.68±0.250.65±0.290.63±0.240.60±0.390.58±0.280.69±0.200.60±0.270.61±0.300.65±0.280.56±0.260.66±0.210.55±0.27	0.30±0.160.26±0.150.24±0.170.21±0.130.26±0.140.28±0.130.26±0.170.22±0.150.23±0.090.22±0.100.24±0.140.23±0.10	0.90±0.140.97±0.150.93±0.181.08±0.211.11±0.17*0.90±0.110.96±0.130.98±0.121.06±0.151.03±0.191.03±0.161.10±0.19*

阿200+普40mg/kg阿300+普10mg/kg阿300+普20mg/kg阿300+普40mg/kg阿400+普10mg/kg阿400+普20mg/kg

1 36±0.25**1.43±0.21*1.42±0.31*1.32±0.23**1.48±0.291.44±0.35

0.52±0.260.56±0.190.53±0.330.57±0.250.61±0.330.58±0.36

0.18±0.07*0.20±0.080.18±0.100.16±0.09*0.24±0.160.22±0.13

1.17±0.26*1.03±0.221.05±0.251.16±0.21*1.11±0.17*1.17±0.23*

注：与正常对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

8.2 阿昔莫司和普伐他汀钠对模型大鼠血脂水平的影响

大鼠饲以高脂饲料14天后分组给药。阿昔莫司的剂量范围为100～400mg/kg，普伐他汀钠的剂量范围为5.0～60mg/kg，组成联合用药组。给药14天后，与模型对照组比较，阿昔莫司和普伐他汀钠各剂量组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有不同程度的下降，高密度脂蛋白胆固醇水平均有所升高，见表2。

与模型对照组相比，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg三个联合用药组大鼠的血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著降低，高密度脂蛋白胆固醇水平均显著升高。与相同剂量的阿昔莫司或普伐他汀钠单方组比较，上述三个联合用药组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著降低，高密度脂蛋白胆固醇水平均显著升高，并对上述指标均表现出协同作用。其中以阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg联合用药组效果最为显著。

                         表2  阿昔莫司和普伐他汀钠及复方对模型大鼠血脂的影响

组别	血清总胆固醇(mmol/L)	血清甘油三酯(mmol/L)	低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)	高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)
					正常对照组模型对照组阿昔莫司100mg/kg阿昔莫司200mg/kg阿昔莫司300mg/kg阿昔莫司400mg/kg普伐他汀钠5.0mg/kg普伐他汀钠10mg/kg普伐他汀钠20mg/kg普伐他汀钠40mg/kg普伐他汀钠60mg/kg	1.56±0.2611.76±2.00###11.31±1.6210.33±0.75*9.45±1.59**8.56±0.79***11.64±2.0410.13±1.06*8.79±1.69**7.90±0.99***7.91±0.96***	0.44±0.092.16±0.62###2.27±0.872.02±1.141.69±0.71*1.53±0.39**2.25±0.462.17±0.451.79±0.52*1.61±0.29**1.28±0.68**	0.14±0.088.13±1.06###7.87±1.367.10±0.51*7.06±0.72*6.70±1.38*7.97±1.327.64±0.446.79±0.57**6.69±0.75**6.71±0.50**	1.03±0.143.64±0.65###3.40±0.693.57±0.673.81±0.523.91±0.71*3.31±0.443.45±0.593.49±0.633.69±0.573.96±0.52*

阿200+普10mg/kg阿200+普20mg/kg阿200+普40mg/kg阿300+普10mg/kg阿300+普20mg/kg阿300+普40mg/kg阿400+普10mg/kg阿400+普20mg/kg

9.10±0.81*6.30±0.67***5.33±1.43***8.35±1.29***6.13±0.61***4.20±1.51***7.18±0.87***6.57±0.67***

2.03±0.591.50±0.34***1.19±0.27***1.62±0.39*1.48±0.22**0.96±0.28***1.62±0.29**1.58±0.67*

7.11±0.79*5.62±0.75***5.30±0.64***6.87±0.56*5.82±0.46***5.33±1.30***6.75±1.16*5.70±0.54***

3.53±0.533.97±0.63*3.93±0.65*3.64±0.643.92±0.534.38±0.73**3.58±0.633.87±0.41*

注：与正常对照组比较，###P＜0.001；与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

8.3 阿昔莫司和普伐他汀钠对高血脂模型大鼠血清酶活性的影响

本实验通过测定用药14天后高血脂模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶的水平，来评价阿昔莫司和普伐他汀钠及复方对模型大鼠肝脏功能和骨骼肌组织的影响。结果表明，与模型对照组相比，阿昔莫司各剂量(100～400mg/kg)组模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶水平均无显著差异(P＞0.05)；普伐他汀钠各剂量(5.0～60mg/kg)组模型大鼠血清中上述指标亦未见显著差异(P＞0.05)，普伐他汀钠和阿昔莫司各联合用药组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和血清肌酸激酶均无明显变化(P＞0.05)，见表3。

表3  阿昔莫司和普伐他汀钠及复方对模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶和肌酸

                            激酶的影响

组别	丙氨酸氨基转移酶(nmol.s-1/L)	肌酸激酶(U/L)
			正常对照组高血脂模型组阿昔莫司100mg/kg阿昔莫司200mg/kg阿昔莫司300mg/kg阿昔莫司400mg/kg普伐他汀钠5.0mg/kg普伐他汀钠10mg/kg普伐他汀钠20mg/kg普伐他汀钠40mg/kg普伐他汀钠60mg/kg阿200+普10mg/kg阿200+普20mg/kg阿200+普40mg/kg阿300+普10mg/kg阿300+普20mg/kg	615.6±115.2659.3±134.6628.7±108.7654.4±96.5658.3±125.6655.3±137.9639.7±131.1598.8±132.3604.5±114.9646.4±115.8662.5±141.4648.6±108.5638.3±127.2640.3±134.8645.6±120.1646.0±125.2	355.2±224.6337.9±125.8352.4±102.6335.7±113.4335.1±123.7360.7±126.9354.8±110.2367.7±130.7369.4±104.6372.3±108.9366.5±123.5366.1±118.7363.2±121.1362.3±122.3369.5±125.5370.1±117.2

阿300+普40mg/kg阿400+普10mg/kg阿400+普20mg/kg

610.1±112.6629.7±137.1643.5±130.4

360.9±122.3358.5±103.8361.2±116.4

8.4 阿昔莫司和普伐他汀钠复方中不同组分相互影响试验

高血脂模型大鼠连续给药14天后，与相同剂量的单方相比，阿昔莫司和普伐他汀钠联合用药组均能明显降低模型大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平以及明显升高高密度脂蛋白胆固醇水平，见表4。

综合分析，与模型对照组相比，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg联合用药组效果显著，可显著降低大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平，显著升高高密度脂蛋白胆固醇水平。与相同剂量的阿昔莫司或普伐他汀钠单方组比较，上述三个联合用药组血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著降低，高密度脂蛋白胆固醇水平均显著升高，三个联合用药组对上述指标均表现出协同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg联合用药组效果最显著，因此优选阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组成的复方。

                                    表4  阿昔莫司和普伐他汀钠复方中不同组分治疗大鼠高脂血症的效果

组别	血清总胆固醇(mmol/L)	血清甘油三酯(mmol/L)	低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)	高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)
					正常对照组模型对照组阿昔莫司200mg/kg阿昔莫司300mg/kg普伐他汀钠20mg/kg普伐他汀钠40mg/kg阿200+普20mg/kg阿200+普40mg/kg阿300+普40mg/kg	1.86±0.4111.50±2.44###9.42±1.59*8.64±1.39**8.79±1.10**7.65±1.38**5.63±1.33***，！！！，@@@4.37±1.46***，！！！，&&&3.25±1.32***，^^^，&&&	0.68±0.212.30±0.60###1.90±0.581.64±0.66*1.69±0.61*1.39±0.59**1.07±0.35***，！！，@0.79±0.23***，！！！，&0.55±0.19***，^^^，&&&	0.31±0.098.45±1.65###7.03±0.61*6.64±1.78*6.76±0.39*6.70±0.67**5.09±1.38***，！！，@@4.88±0.64***，！！！，&&&4.62±1.43***，^^，&&	1.06±0.252.03±0.64###3.35±0.373.39±0.68*3.58±0.72*3.59±0.51**4.35±0.40***，！！！，@4.32±0.65***，！！！，&4.59±0.50***，^^^，&&

注：与正常对照组比较，###P＜0.001，##P＜0.01，#P＜0.05

    与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

    与阿昔莫司200mg/kg组比较，！！！P＜0.001，！！P＜0.01

    与普伐他汀钠20mg/kg组比较，@P＜0.05 ，@@P＜0.01，@@@P＜0.001

    与阿昔莫司300mg/kg组比较，^^^P＜0.001

与普伐他汀钠40mg/kg组比较，&&&P＜0.001，&P＜0.05

9 结论

阿昔莫司和普伐他汀钠伍用对高脂饲料所致的大鼠高脂血症有明显的治疗作用，降脂效果与两种药物的剂量相关，阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠20mg/kg、阿昔莫司200mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg及阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg联合用药组效果显著，可显著降低大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平，显著升高高密度脂蛋白胆固醇水平，并对上述指标均表现出协同作用。其中阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg联合用药组效果最显著，优选阿昔莫司300mg/kg和普伐他汀钠40mg/kg组成的复方。在本实验剂量范围内，联合用药组对血清酶活性无明显影响，初步表明对肝和横纹肌无明显的毒性作用。此外，目前阿昔莫司单方的临床用法为3次/日，本实验证明，阿昔莫司1次/日仍有显著的降血脂作用，且毒性小，这为阿昔莫司和普伐他汀钠组成复方后一日仅用药1次提供了可靠的实验依据，这必将大大方便患者服用，提高患者的顺应性。

实例10.不同释放时间的阿昔莫司和普伐他汀钠复方对临床高血脂患者不稳定型心绞痛预防治疗效果

1 试验目的

将动物试验筛选所确定的阿昔莫司和普伐他汀钠复方制剂(重量比为7.5∶1)，用于高血脂伴不稳定型心绞痛患者，以观察其预防治疗效果。

2 受试药物

2.1 药品名称：阿昔莫司(Acipimox)

批    号：0301002

纯    度：大于99.7％

生产单位：鲁南制药股份有限公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期1年半。

2.2 药品名称：普伐他汀(pravastatin)钠

批    号：030202

纯    度：大于99.0％

生产单位：百时美施贵宝公司

2.3 药品名称：阿昔莫司(Acipimox)普伐他汀(pravastatin)钠普通片，每片含阿昔莫司220mg，普伐他汀钠30mg。

批    号：0304002

生产单位：鲁南制药股份有限公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期1年半。

2.4 药品名称：阿昔莫司(Acipimox)普伐他汀(pravastatin)钠缓释片，每片含阿昔莫司220mg，普伐他汀钠30mg。

批    号：0305001

生产单位：鲁南制药股份有限公司

保存条件：阴凉干燥处保存，有效期1年半。

3 受试患者选择

临床确诊的各型高血脂伴不稳定型心绞痛的患者。

4.给药方案

将所有受试患者按照心肌缺血事件发生频率和心肌梗死面积均衡的原则，随机分为安慰剂对照组、阿昔莫司组、普伐他汀钠组、阿昔莫司普伐他汀普通片组和阿昔莫司普伐他汀缓释片组。剂量设置依据，根据动物实验所得到的普伐他汀钠和阿昔莫司组合物的最佳比例以及两种药物临床的常用剂量，将给药剂量设定为，普伐他汀钠30mg，阿昔莫司220mg，每晚顿服。

5.检测指标

心绞痛发作频率，血清乳酸脱氢酶(LDH)活性。

6.试验结果

高血脂伴不稳定型心绞痛的患者在用药前的一周内测定心绞痛的发作频率和血清乳酸脱氢酶的活性，随机分组后，给予相应的药物治疗，在给药后的第16周再次测定心绞痛的发作频率和血清乳酸脱氢酶活性。结果如下：

组别	心绞痛发作频率次/周	血清LDHU·L-1
			安慰剂对照组阿昔莫司组	5.7±2.84.6±2.3	253.4±45.7200.6±51.6*

普伐他汀钠组阿+普普通片组阿+普缓释片组

3.0±1.9*2.1±1.0**#0.8±1.5***###&&

215.2±43.3148.9±54.1**&106.7±44.9***###&&

注：^*与安慰剂组相比较，P＜0.05，^***与安慰剂组相比较，P＜0.001

    #与阿昔莫司组相比较，P＜0.05，###与阿昔莫司组相比较，P＜0.001

    &与普伐他汀组相比较，P＜0.05，&&与普伐他汀钠组相比较，P＜0.01

7.结论

阿昔莫司220mg和普伐他汀钠30mg伍用对临床高血脂伴不稳定型心绞痛患者具有协同性的预防治疗效果。而其中缓释片的效果最为理想。

参考文献

[1]徐叔云，卞如濂，陈修主编.药理学实验方法学(第三版)，人民卫生出版社出版，2002年1月，1201-1202

[2]OLBETAM(acipimox)说明书(Pharmacia，New Zealand)

[3]Al-Shurbaji A，et al.The effect of Acipimox on triacylglycerol metabolism inrat.Scand J Clin Lab Invest，1990，50(2)：203-208

[4]张彤，徐成斌等，普伐他汀和西立伐他汀对高胆固醇喂养兔的血管内皮功能的影响，中国病理生理杂志，2000；16(12)：1324-1326

Claims (13)

1.一种治疗高血脂症组合物，其特征在于所述的组合物包括：

a)第一个活性成分，它是阿昔莫司(Acipimox)；

b)第二个活性成分，它选自普伐他汀(Pravastatin)、或其可药用的盐、酯或溶剂化物；

c)一种或多种其它可药用的活性成分或者非活性成分。

2.按照权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的普伐他汀可以药用的盐为合适的普伐他汀生理可接受的盐，包括衍生自无机的和有机的碱所形成的盐，为钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、锌盐、铁盐。

3.按照权利要求1所述的组合物，其特征在于所述的普伐他汀可以药用的酯为合适的普伐他汀生理可接受的酯，包括衍生自脂肪醇、芳香醇、杂环醇所形成的酯，为甲酯、乙酯、烯丙酯、苯酯。

4.按照权利要求1～2所述的组合物，其特征是第二个活性成分为普伐他汀钠。

5.按照权利要求1所述的组合物，其特征是阿昔莫司和普伐他汀钠(以游离酸计，下同)的重量比是(5～40)∶1。

6.按照权利要求1所述的组合物，其特征是阿昔莫司和普伐他汀钠的重量比是：(5～10)∶1。

7.按照权利要求1所述的组合物，其特征是阿昔莫司和普伐他汀钠的重量比是：7.5∶1

8.按照权利要求1～7所述的组合物制成的医疗用制剂。

9.按照权利要求8所述的医疗用制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸。

10.按照权利要求1～9所述的组合物，用于制备治疗冠心病的药物。

11.按照权利要求1～9所述的组合物，添加其它活性成分用于制备冠心病的药物。

12.按照权利要求1～9所述的组合物，用于制备治疗高血脂伴不稳定型心绞痛的药物。

13.按照权利要求1～9所述的组合物，添加其它活性成分用于制备高血脂伴不稳定型心绞痛的药物。