具体实施方式
下面通过下述实施例更加详细地说明本发明,但是,下述实施例并不可理解为是对本发明的限制。
实施例1 中间体(R)-2,3-缩异丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)的制备
1、制备1,2-5,6-双(二氧异丙叉)甘露醇(2)
40g(0.293mol)氯化锌、250mL丙酮加入37.5g(0.206mol)甘露醇(1),室温搅拌20-24h,将45g(0.325mol)碳酸钾溶于45mL热水中,滴加入反应瓶中,搅拌15-20分钟,过滤,50ml×3水洗涤,滤液加入约15mL浓氨水,浓缩得白色固体,加入少量水,用二氯甲烷萃取3次,无水硫酸钠干燥,直接用于下一步反应。如蒸干二氯甲烷层可得51.75g白色膏状固体,收率97-98%(文献收率87%)。
1H NMR(CDCl3):δ3.68(dd,H-1,H-6),3.27(m,4H,H-2,H-3,H-4,H-5)
2、制备(S)-2,3-缩异丙叉甘油醛(3)
51.75g(0.197mol)1,2-5,6-双(二氧异丙叉)甘露醇(2)的二氯甲烷液加入50g(0.233mol)研细的高碘酸钠,室温搅拌,滴加2mL饱和碳酸氢钠液,搅拌反应24h。过滤,室温浓缩,得50.11g淡黄色油状固体。收率92%(文献收率为91%)。
1HNMR(CDCl3):δ4.20-4.05(m,1H,CH),3.88-3.76(m,1H,CH2O),3.73-3.53(m,1H,CH2O),1.50-1.33(m,6H,2CH3)
3、制备(S)-2,3-缩异丙叉甘油醇(4)
50.11(0.385mol)(S)-2,3-缩异丙叉甘油醛(3)溶于200mL甲醇中,加入25g(0.462mol)硼氢化钾,室温搅拌过夜,反应24h,浓缩蒸干,加入5mL氨水,30ml水,加入二氯甲烷搅拌,分出二氯甲烷,水层用二氯甲烷50mL×3洗涤,合并二氯甲烷,无水硫酸钠干燥,浓缩蒸干,得45.79g淡黄色油状物,收率90%(文献收率91%)。
1H NMR(CDCl3):δ4.20-4.05(m,1H,CH),4.02-3.97(t,J=5Hz,2H CH2OH),3.88-3.76(m,1H,1fromCH2O),3.73-3.53(m,1H,1from CH2O),1.50-1.34(m,6H,2CH3)
4、制备(R)-2,3-缩异丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)
19g(0.142mol)(S)-2,3-缩异丙叉甘油醇(4)溶于100mL二氯甲烷中,冰盐浴冷却,在氮气保护下滴加30mL三乙胺,再滴入16.454g(o.142mol)甲烷磺酰氯溶于30mL二氯甲烷的溶液,冰盐浴冷却下搅拌1.5h后,去冰盐浴,室温搅拌4h,加入40mL水,分出二氯甲烷,水层用二氯甲烷萃取,合并二氯甲烷,分别用水、饱和碳酸氢钠液、饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,减压浓缩得28.76g淡黄色油状物,收率91%(文献收率为93%)。通过柱层析(展开剂为石油醚∶乙酸乙酯=2∶1)可得纯白色油状物。[α]D 20-4.21(C=5.5,MeOH)[lit[α]D 20-4.34(C=5.21,MeOH)]
1H NMR(CDCl3)::δ4.40-3.67(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),3.14(s,3H,SO2CH3),1.50-1.23(m,6H,2CH3)
实施例2 中间体苯甲酰胞嘧啶(6)的制备
3g(0.027mol)胞嘧啶加入300ml吡啶,再滴加37.5mL苯甲酰氯,室温搅拌,约半小时滴完,滴毕,搅拌45分钟,滴加入2N盐酸,室温搅拌2h,抽滤,固体用5%氢氧化钠溶解,再滴入2N盐酸,冰箱放置过夜,抽滤,真空干燥,得5.8g白色固体,mp>300℃(文献mp>300℃),收率95%(文献收率为89%)。
1H NMR(d6-DMSO):δ11.17(s,1H,NH),11.27(s,1H,NH),8.18(d,J=7Hz,1H,H-6),7.96(d,J=7Hz,2H,2×BzH),7.85(d,J=6Hz,1H,H-5),7.76-7.46(m,3H,3×BzH)
实施例3 中间体(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油
醇]-胞嘧啶(11)的制备
1、(S)-N1-[2,3-O-缩异丙叉-2,3-(二羟基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(7)的制备
方法1:研细的苯甲酰胞嘧啶(6)6g(0.0276mol)及5.4g(0.0390mol)研细的碳酸钾,加入无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)120mL,油浴加热至90℃,缓慢滴加5.2g(0.0267mol)(R)-2,3-缩异丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)溶于50mLDMF的溶液,约1h滴完,反应完全,抽滤,DMF洗涤沉淀,滤液减压浓缩,所得固体中加入300mL二氯甲烷,搅拌约2h,过滤,用二氯甲烷洗涤沉淀,滤液减压浓缩,得淡黄色油状物,柱层析分离得白色固体3.2g,收率33%(文献收率为34%)。Mp:194-196℃(文献Mp:195-197℃)
方法2:6g(0.0276mol)研细的苯甲酰胞嘧啶(6)和5.4g(0.0390)碳酸钾加入120mlDMF,滴加5.2g(0.0267mo1)(R)-2,3-缩异丙叉甘油醇甲烷磺酰酯(5)的DMF液,微波反应10分钟,抽滤,DMF洗涤沉淀,滤液减压浓缩,所得固体中加入300ml二氯甲烷,搅拌约2h,过滤,用二氯甲烷洗涤沉淀,滤液减压浓缩,得淡黄色油状物,柱层析分离得白色固体3g,收率33%。
1H NMR(d6-DMSO):δ7.98-7.95(d,J=6Hz,1H,H-6),7.83-7.76(d,J=14Hz,1H,H-5),7.67-7.26(m,5H,5×BzH),4.51-4.45(m,1H,H-2’),4.21-4.08(m,2H,H-1’andH-3’),3.88-3.84(dd,J=7,14Hz,1H,H-1’),3.82-3.00(m,1H,H-3’),1.43(m,3H,CH3),1.34(m,3H,CH3)
2、(S)-N1-[(2,3-二羟基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(8)的制备
3g(9.11mmol)(S)-N1-[2,3-O-缩异丙叉-2,3-(二羟基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(7)加入20ml甲醇,滴加3mL浓盐酸,搅拌2h,冰箱放置过夜,过滤,滤渣用冷甲醇洗,得白色固体,真空干燥,得2.57g白色固体,收率为92%。Mp:190-192℃(文献Mp:193-195℃)
1H NMR(d6-DMSO):δ11.17(s,1H,NH),11.27(s,1H,NH),8.18(d,J=7Hz,1H,H-6),7.96(d,J=7Hz,2H,2×BzH),7.85(d,J=6Hz,1H,H-5),7.46-7.76(m,3H,3×BzH),4.67-4.58(m,1H,H-2’),4.20-4.08(m,2H,H-1’and H-3’),3.91-3.84(dd,J=7,14Hz,1H,H-1’),3.29-3.27(dd,J=6,9Hz,1H,H-3’)
3、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-羟基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(9)的制备
1g(3.4mmol)(S)-N1-[(2,3-二羟基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(8)、1.059g(3.8mmol)三苯基氯甲烷、21mg(0.16mmol)DMAP加入30mL吡啶,回流反应5h,减压蒸除吡啶,加入40mL碳酸氢钠饱合液,二氯甲烷萃取,二氯甲烷层分别用饱和碳酸氢钠液,饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,浓缩,得粘稠淡黄色油状物,加入石油醚,搅拌3h,过滤,得2g类白色固体。收率为84%(文献收率为82%)。Mp:123-126℃(文献Mp:122-123℃)
1H NMR(d6-DMSO):δ11.17(s,1H,NH),11.27(s,1H,NH),8.18(d,J=7Hz,1H,H-6),7.96(d,J=7Hz,2H,2×BzH),7.85(d,J=6Hz,1H,H-5),7.46-7.76(m,19H,3×BzH,15×TrH),4.67-4.58(m,1H,H-2’),4.38-4.08(m,2H,H-1’andH-3’),3.91-3.84(dd,J=7,14Hz,1H,H-1’),3.70-3.63(dd,J=6,9Hz,1H,H-3’)
4、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(10)的制备
1.13g(2.01mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-羟基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(9)加入30mLDMF和15mL石油醚,冰盐浴冷却,氮气保护下加入18mg(0.75mmol)氢化钠,保温反应2h,再加入0.95g(2.9mmol)二乙基[(对甲苯磺酸)甲基]磷酸酯(14),室温搅拌反应2天,加入水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压浓缩,得1.63g黄色油状物,直接用于下一步反应。
1H NMR(d6-DMSO)::δ7.80-7.75(d,J=4Hz,1H,H-6),7.37-7.31(d,J=2Hz,1H,H-5),7.30-7.20(m,20H,5×BzH,15×TrH),4.20-4.05(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),2.93-2.88(d,J-10,2H,OCH2P),2.44(s,4H,4×CH2),1.37-1.24(m,6H,2×CH3)
5、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11)的制备
1.63g(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-苯甲酰胞嘧啶(10)加入100mL甲醇,通入氨气至饱和,室温搅拌8h,减压蒸干,得1.38g黄色油状物,直接用于下一步反应。
1H NMR(d6-DMSO):δ11.17(s,1H,NH),7.99-7.77(d,J=4Hz,1H,H-6),7.76-7.75(d,J=2Hz,1H,H-5),7.37-7.20(m,15H,15×TrH),4.20-4.05(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),2.93-2.88(d,J-10,2H,OCH2P),2.44(s,4H,4×CH2),1.37-1.24(m,6H,CH3)
实施例4 羰基二咪唑CDI(15)的制备
12g(0.176mol)咪唑溶于60mL二氯甲烷,滴别5g(0.0168mol)三光气溶于25mL二氯甲烷的溶液,冰盐浴冷却下搅拌1h,室温搅拌2h,过滤,用二氯甲烷洗滤饼,二氯甲烷层减压浓缩至20mL,加入100mL石油醚,冰箱放置放置过夜,有大量白色固体生成,过滤,得8.05g白色固体。Mp:113-116℃(文献116-200℃),收率80%(文献收率为82%)。
实施例5 环西多福韦-亮氨酸(I-1)的制备
1、BoC-亮氨酸(12A)的制备
2g(0.0152mol)亮氨酸溶于10.1mL水中,加入728mg(0.0182mol)氢氧化钠的25%溶液,滴加3.32g(0.0152mol)叔丁氧甲酸酐的20.2mL四氢呋喃液,加热至41℃,保温反应8h,浓缩蒸干,加入3.51g(0.0183mol)柠檬酸和少量水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得3.24g白色固体,收率92%,Mp:82-83℃(文献82-85℃)。
2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-亮氨酸胞嘧啶(13A)的制备
2g(8.65mmol)Boc-亮氨酸(12A)及506mg(8.65mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF,冰盐冷却下搅拌2h,加入1.504g(2.37mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11),加热至80℃,反应24h,加入水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得2.28g淡黄色液状物。所得粗品直接用于下一步反应。
1H NMR(CDCl3):δ7.81-7.76(d,J=4,1H,H-6),7.63-7.50(m,15H,3×BzH),7.33-7.32(d,J=8,1H,H-5),5.29(d,J=8,1H,H-1’),4.88-4.67(t,J=6.14,1H,H-2’),4.62-4.58(d,J=4,16,2H,H-3’),3.37-3.06(m,4H,H-3”,H-4”,H-5”),3.06(s,2H,CH2P),2.93(m,4H,2×CH2),1.07-0.83(m,16H,CH3)
3、西多福韦-亮氨酸(16A)的制备
2g(2.48mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-亮氨酸胞嘧啶(13A)加入50mL乙腈,氮气保护下加入5.21g(31.38mmol)碘化钾,加热至60℃,滴加4mL(31.38mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液,保温反应2天,减压浓缩,加入50mL水,室温搅拌2h,用二氯甲烷洗水层至淡黄色,水液减压浓缩,得0.70g淡黄色固体。两步总收率为72%。[α]D 20-102.3(H2O)
1H NMR(d6-DMSO):δ7.34-7.12(d,J=8Hz,1H,H-6),7.31-7.28(d,J=6Hz,1H,NH),6.98(s,2H,NH2),5.64-5.53(m,1H,H-5),4.29-3.60(m,7H,H-1’,H-2’,H-3’,OCH2P),2.51-2.50(d,J=2Hz,1H,H-3”),2.33-2.30(dd,J=2Hz,2Hz,2H,H-4”),2.29(s,1H,H-5”),1.31-1.28(d,J=6Hz,3H,3×CH3),1.23-1.13(d,J=10Hz,3H,3×CH3)
MS(m/e):393(M++1)
IR(Vmax:cm-1,KBr):3342,1655,1432
4、环西多福韦-亮氨酸(I-1)的制备
1g(2.54mmol)(16A)加入10mLDMF、6mL三乙胺,室温搅拌2h,加入0.45g(2.77mmol)羰基二咪唑,室温反应24h,减压蒸去DMF,加入水,用二氯甲烷洗水层,水液减压浓缩,得白色固体,甲醇-乙醚重结晶得0.677g白色固体(I-1),收率71%。
1H NMR(CDCl3):δ7.50-7.48(d,J=4Hz,1H,H-6),7.13-7.11(d,J=4Hz,1H,H-5),3.43-3.34(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’,OCH2P),3.32-3.15(m,2H,H-2”),2.50(1H,H-1”),2.28(1H,H-3”),1.09-1.06(t,6H,2CH3)
MS(m/e):375(M++1),315,279
IR(Vmax:cm-1,KBr):3450,1643,1452,1161
实施例6 环西多福韦-异亮氨酸(I-2)的制备
1、BoC-异亮氨酸(12B)的制备
2g(0.0152mol)异亮氨酸溶于10.1mL水中,加入728mg(0.0182mol)氢氧化钠的25%溶液,滴加3.32g(0.0152mol)叔丁氧甲酸酐的20.2mL四氢呋喃液,加热至41℃,保温反应8h,浓缩蒸干,加入3.51g(0.0183mol)柠檬酸和少量水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得2.95g白色固体。收率为83%,Mp:56-58℃(文献58-20℃)。
2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-异亮氨酸胞嘧啶(13B)
2g(8.65mmol)Boc-异亮氨酸(12B)及506mg(8.65mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF,冰盐冷却下搅拌2h,加入1.405g(2.37mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11),加热至80℃,反应24h,加水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得2.43g淡黄色液状物。产品直接用于下一步反应。
1H NMR(CDCl3)::δ7.81-7.76(d,J=4,1H,H-6),7.63-7.55(m,15H,3×BzH),7.37-7.32(d,J=8,1H,H-5),5.29(d,J=8Hz,1H,H-1’),4.88-4.67(t,J=6,14Hz,1H,H-2’),4.62-4.58(d,J=4,16Hz,2H,H-3’),3.25-3.06(m,4H,H-3”,H-4”,H-5”),2.95(s,2H,CH2P),2.83-2.56(m,4H,2×CH2),1.15-0.93(m,16H,CH3)
3、西多福韦-异亮氨酸(16B)的制备
2g(2.48mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-异亮氨酸胞嘧啶(13B)加入50mL乙腈,氮气保护下加入5.21g(31.38mmol)碘化钾,加热至60℃,滴加4mL(31.38mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液,反应保温反应2天,减压浓缩,加入50mL水,室温搅拌2h,用二氯甲烷洗水层至淡黄色,水液减压浓缩,得0.62g淡黄色固体。两步总收率为:67%.[α]D 20-121.3(H2O)
1H NMR(d6-DMSO):δ11.93(s,1H,NH),7.60(s,1H,H-6),7.07(s,1H,H-5),6.80(s,1H,NH),4.27-3.25(m,7H,H-1’,H-2’,H-3’,OCH2P),3.14-3.10(d,1H,J=8Hz,H-3”),2.90-2.68(m,3H,H-4”,H-5”),1.31-1.27(d,J=10Hz,3H,CH3),1.15-0.99(dd,J=4Hz,6Hz,3H,CH3)
MS(m/e):392(M+),323,167
IR(Vmax:cm-1,KBr):3440,1644,1462,1161
4、环西多福韦-异亮氨酸(I-2)的合成
1g(2.54mmol)(16B)加入10mLDMF、6mL三乙胺,室温搅拌2h,加入0.45g(2.77mmol)羰基二咪唑,室温反应24h,减压蒸去DMF,加入水,用二氯甲烷洗水层,水液减压浓缩,得白色固体,甲醇-乙醚重结晶得0.699g白色固体(I-2),收率76%。
1H NMR(d6-DMSO):δ7.81-7.76(d,J=10Hz,1H,H-6),7.63(s,1H,H-5),3.73-3.26(m,7H,H-1’,H-2’,H-3’,OCH2P),3.07-3.02(d,1H,J=10Hz,H-3”),3.01-2.86(dd,2H,H-5”),2.86-2.34(t,1H,H-4”),1.01-0.975(t,6H,2×CH3)
实施例7 环西多福韦-丙氨酸(I-3)的制备
1、BoC-丙氨酸(12C)的制备
2g(0.0224mol)丙氨酸溶于15mL水中,加入1.076g(0.0269mol)氢氧化钠的25%溶液,滴加4.9g(0.0225mol)叔丁氧甲酸酐的30mL四氢呋喃液,加热至41℃,保温反应8h,浓缩蒸干,加入5.176g(0.0269mol)柠檬酸和少量水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得3.905g白色固体,收率92%,Mp:79-81℃(文献80-82℃)
2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-丙氨酸胞嘧啶(13C)
2g(10.5mmol)Boc-丙氨酸(12C)及1.419g(10.5mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF,冰盐冷却下搅拌2h,加入4.30g(3.20mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11),加热至80℃,反应24h,加入水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得2.48g淡黄色液状物。粗品直接用于下一步反应。
1H NMR(CDCl3)::δ7.77-7.75(d,J=4,1H,H-6),7.68-7.57(m,15H,3×BzH),7.35-7.31(d,J=8,1H,H-5),4.96-4.02(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),3.45(s,2H,CH2P),2.93-2.76(m,4H,CH2),2.85(m,1H,CH),1.34(m,9H,CH3)
3、西多福韦-丙氨酸(16C)的制备
2g(2.61mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-丙氨酸胞嘧啶(13C)加入34mL乙腈,氮气保护下加入4.81g(28.9mmol)碘化钾,加热至60℃,滴加4mL(28.9mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液,反应保温反应2天,减压浓缩,加入50mL水,室温搅拌2h,用二氯甲烷洗水层至淡黄色,水液减压浓缩,得0.283g淡黄色固体。两步总收率为78%。
1H NMR(CDCl3):δ7.81-7.76(d,J=4Hz,1H,H-6),7.37-7.33(d,J=8Hz,1H,H-5),4.20-4.06(m,5H,H-1’,2×H-2’,H-3’),2.44(s,2H,OCH2P),2.15(s,1H,CH),1.42-1.26(m,3H,CH3)
MS(m/e):352(M++1),269,127
IR(Vmax:cm-1,KBr):3464,1620,1462,1192
4、环西多福韦-丙氨酸(I-3)的合成
1g(2.85mmol)(16C)加入10mLDMF、6mL三乙胺,室温搅拌2h,加入0.55g(3.39mmol)羰基二咪唑,室温反应24h,减压蒸去DMF,加入水,用二氯甲烷洗水层,水液减压浓缩,得白色固体,甲醇-乙醚重结晶得0.654g白色固体(I-3),收率69%。[α]D 20-103.4(H2O)
1H NMR(CDCl3):δ7.93(1H,H-6),7.67(1H,H-5),3.68-3.17(m,5H,H-1’,2×H-2’,H-3’),2.89-2.66(m,2H,OCH2P),2.51(s,1H,CH”),1.01-0.97(t,3H,CH3)
MS(m/e):331(M+-1),302
IR(Vmax:cm-1,KBr):3441,1630,1397,1187
实施例8 环西多福韦-甘氨酸(I-4)的制备
1、BoC-甘氨酸(12D)的制备
2g(0.0266mol)甘氨酸溶于18mL水中,加入1.27g(0.0317mol)氢氧化钠的25%溶液,滴加5.814g(0.0266mol)叔丁氧甲酸酐的30mL四氢呋喃液,加热至41℃,保温反应8h,浓缩蒸干,加入5.8144g(0.0302mol)柠檬酸和少量水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得4.128g白色固体,收率88.5%,mp:85-86℃(文献87-88℃)
2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-甘氨酸胞嘧啶(13D)
2g(11.4mmol)Boc-甘氨酸(12D)及2.281g(11.4mmol)羰基二咪唑加入50mLDMF,冰盐冷却下搅拌2h,加入6.914g(3.81mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11),加热至80℃,反应24h,加入水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得2.77g淡黄色液状物。粗品直接用于下一步反应。
1H NMR(CDCl3)::δ7.92(d,J=4Hz,1H,H-6),7.77-7.59(m,15H,3×BzH),7.42(d,J=8Hz,1H,H-5),4.63-4.32(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),3.52(s,2H,CH2P),2.87-2.63(m,4H,2×CH2),2.13(s,2H,CH2)1.07-0.83(m,6H,CH3)
3、西多福韦-甘氨酸(16D)的制备
2g(2.66mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-甘氨酸胞嘧啶(13D)加入50mL乙腈,氮气保护下加入5.0g(34.27mmol)碘化钾,加热至60℃,滴加3.77ml(34.73mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液,反应保温反应2天,冷却至室温,减压浓缩,加入34mL水,室温搅拌2h,用二氯甲烷洗水层至淡黄色,水液减压浓缩,得0.67g淡黄色固体。两步总收率为75%。
1H NMR(CDCl3):δ7.81-7.76(d,J=4Hz,1H,H-6),737-7.32(d,J=8Hz,1H,H-5),4.20-4.06(m,5H,H-1’,2×H-2’,H-3’),2.35(s,2H,OCH2P),2.15(s,2H,CH2)
MS(m/e):339,323,208,197,181
IR(Vmax:cm-1,KBr):3520,1648,1462,1161
4、环西多福韦-甘氨酸(I-4)的合成
1g(2.927mmol)(16D)加入10mLDMF、6ml三乙胺,室温搅拌2h,加入0.70g(3.233mmol)羰基二咪唑,室温反应24h,减压蒸去DMF,加入水,用二氯甲烷洗水层,水液减压浓缩,得白色固体,甲醇-乙醚重结晶得0.54g白色固体(I-4),收率61%.[α]D 20-112.4(H2O)
1H NMR(CDCl3):δ8.47(S,1H,NH),7.49-7.47(d,J=4Hz,1H,H-6),7.12-7.10(d,J=4Hz,1H,H-5),3.95-2.91(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),2.52-2.28(2H,CH2),2.28(s,2H,CH2)
13CNMR(CDCl3):161.47C-4(2),78.20C-2’,59.12C-2,45.38C-4,35.31C-6,30.15C-5,26.22C-3’,13.13C-4(3),7.77C-4(4)
MS(m/e):316(M+-1),279,253
IR(Vmax:cm-1,KBr):3450,1642,1387,1179
实施例9 环西多福韦-缬氨酸(I-5)的制备
1、BoC-缬氨酸(12E)的制备
2g(0.0171mol)亮氨酸溶于11.4mL水中,加入820mg(0.0205mol)氢氧化钠的25%溶液,滴加3.728g(0.0171mol)叔丁氧甲酸酐的22.8ml四氢呋喃液,加热至41℃Boc-亮氨酸(15),保温反应8h,浓缩蒸干,加入3.94g(0.0205mol)柠檬酸和少量水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得3.154g白色固体,收率为84-85%,Mp:77-79℃(文献78-79℃)
2、(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-缬氨酸胞嘧啶(13E)
2g(9.21mmol)Boc-缬氨酸(12E)及1.245g(9.21mmol)羰基二咪唑加入50mlDMF,冰盐冷却下搅拌2h,加入3.773g(3.068mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-胞嘧啶(11),加热至80℃,反应24h,加入水,乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯层分别用水、饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,减压蒸干,得2.39g淡黄色液状物。产品直接用于下一步反应。
1H NMR(CDCl3):δ7.72-7.70(d,J=4Hz,1H,H-6),7.53-7.42(m,15H,3×BzH),7.21(d,J=8Hz,1H,H-5),4.20-3.76(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),3.27(s,2H,CH2P),2.76-2.57(m,4H,2×CH2),2.43-2.31(m,2H,2CH),1.07-0.83(m,12H,4CH3)
3、西多福韦-缬氨酸(16E)的制备
2g(2.55mmol)(S)-N1-[(3-三苯甲氧基-2-乙基磷酸甲氧基)甘油醇]-N4-Boc-缬氨酸胞嘧啶(13E)加入50mL乙腈,氮气保护下加入3.939g(23.72mmol)碘化钾,加热至60℃,滴加3mL(23.72mmol)三甲基氯硅烷的乙腈液,反应保温反应2天,减压浓缩,加入50mL水,室温搅拌2h,用二氯甲烷洗水层至淡黄色,水液减压浓缩,得0.220g淡黄色固体。两步总收率为78%。
1H NMR(CDCl3):δ8.05-7.95(d,J=10Hz,1H,H-6),7.54(s,1H,H-5),3.36-2.87(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),1.73-1.17(m,4H,OCH2P,CH,CHNH2),1.17-0.87(m,6H,6×CH3)
4、环西多福韦-缬氨酸(I-5)的合成
1g(2.64mmol)(16E)加入10mLDMF、6ml三乙胺,室温搅拌2h,加入0.433g(2.67mmol)羰基二咪唑,室温反应24h,减压蒸去DMF,加入水,用二氯甲烷洗水层,水液减压浓缩,得白色固体,甲醇-乙醚重结晶得0.654g(I-5),收率58%。
1H NMR(d6-DMSO):δ8.05-7.95(d,J=10Hz,1H,H-6),7.54(s,1H,H-5),3.36-2.87(m,5H,H-1’,H-2’,H-3’),1.73-1.17(m,4H,OCH2P,CH,CHNH2),1.17-0.875(m,6H,6×CH3)
MS(m/e):360,321,301
实施例10 体外酶水解实验
肝匀浆实验
1、实验目的:
对前药的首要要求是前药可在体内释放出原药,于是设计肝匀浆实验以测定前药是否能在肝脏酶内释放出原药西多福韦及其大致释放时间。
2、实验材料:
试验动物:成年雄性健康小白鼠,体重约30g,由四川大学华西实验动物中心提供。
试验药品:所有目标化合物均称取约10mg溶于蒸馏水中,即用。
仪器:肝匀浆器,离心机
3、实验方法:
取成年雄性小白鼠一只,称重,取出其肝脏,称重约1.2g,平分为两份,一份加入西多福韦标准对照,另一部分加前药样品。将样品取约10mg溶于3ml蒸馏水中,与肝脏混合匀浆,约30分钟,加入离心管中,离心2分钟,取上层清液,加入两倍于其量的甲醇,有沉淀生成,离心2分钟,取上层清液,与标准品对照点板,薄层展开(展开剂:正丁醇∶水∶冰醋酸=12∶10∶1),用碘显色,照像。
4、实验结果:
表1 系列目标化合物和西多福韦薄层展开的Rf值
|
对照 |
肝匀浆15分 |
肝匀浆30分 |
西多福韦 |
Rf=0.6 |
Rf=0.6 |
Rf=0.6 |
I-1 |
Rf=0.4 |
Rf=0.6Rf=0.4 |
Rf=0.6 |
I-2 |
Rf=0.4 |
Rf=0.6Rf=0.4 |
Rf=0.6 |
I-3 |
Rf=0.4 |
Rf=0.6Rf=0.4 |
Rf=0.6 |
I-4 |
Rf=0.4 |
Rf=0.6Rf=0.4 |
Rf=0.6 |
I-5 |
Rf=0.4 |
Rf=0.6Rf=0.4 |
Rf=0.6 |
实验结果表明,该系列5个化合物在体外酶的作用下30分种内都可完全断开释放出原药,达到本发明的目的。
实施例11 测定口服生物利用度
将相当于25亳克/公斤西多福韦和目标化合物用管饲法喂给Long Evans老鼠。延续24小时和48小时收集超滤后剂量的尿,用反相高压液体色层分离法分析。西多福韦和目标化合物的口服生物利用度以尿中排出的西多福韦剂量的百分数表示。
目标化合物的尿回收度(剂量百分数%)
西多福韦 25
I-1 63
I-2 50
I-3 55
I-4 60
I-5 57