CN1686534A - 以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成分的组合药物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及两种以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成分的组合药物，它们含有共同的活性物质促肾上腺皮质激素、胸腺肽及免疫核糖核酸；并且提供了上述组合药物水针剂及冻干针剂的制备方法；本发明的组合药物不仅能长期保持其活性，而且对治疗关节炎、病毒性感冒等疾病作用显著，对预防癌症、预防注射疼痛等也十分有效。

Description

以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成份的 组合药物及其制备方法和用途

技术领域：

本发明涉及一种药物，尤其是涉及一种以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成份的组合药物及其制备方法、质量检测方法和其在制备治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、病毒性感冒、肝炎等疾病的药物中的应用。

背景技术：

目前用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎的药物是阿司匹林等非甾体抗炎药、糖皮质激素等。但是糖皮质激素剂量较大时易导致人体免疫抑制、蛋白质份解及对肾上腺皮质的负反馈作用；阿司匹林等非甾体抗炎药又会加强糖皮质激素的致溃疡作用。目前现有的垂体前叶肾上腺皮质提取物注射液虽无上述副作用，但注射疼痛病人会拒绝使用。而本发明药物取自动物体内，无毒性，无上述副作用，不仅能治疗炎症，更重要的是能提高人体免疫功能，根治炎症。

发明内容：

本发明的目的在于，解决现有技术的不足，提供两种以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成份的组合药物。

本发明的另一个目的是提供上述组合药物水针剂及冻干针剂的制备方法。

本发明还涉及上述组合药物在制备治疗风湿、预防及缓解病毒性感冒、关节炎、肿瘤及肝炎辅助用药的药物中的应用。

本发明的上述目的可以通过下面的技术方案来实现：

本发明的以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成份的组合药物之一种是由以下原料按重量配比制成的：

①促肾上腺皮质激素  8mg-12mg

②免疫核糖核酸      4mg-20mg

③胸腺肽            8mg-50mg

④还原型谷胱甘肽    0.5mg-1.0mg

  无菌注射用水      2000mg-5000mg

该组合药物的水针剂的制备方法包括如下步骤：

(1)制备促肾上腺皮质激素：

①原料处理：将合格猪脑垂体及猪肾上腺皮质取出，去除结缔组织，投入分析纯丙酮中，浸泡后脱去水份，至垂体及猪肾上腺皮质变硬为止；将垂体中腺垂体、神经垂体分开，分别贮于丙酮中备用；取出腺垂体及肾上腺皮质，其中肾上腺皮质占二者总重的1/4至1/2，置于室温下真空干燥，磨粉，过80目筛，得水份含量低于5％的腺垂体干粉；

②提取：将腺垂体干粉1Kg，加入预热到50℃的0.5mol/L乙酸20L中搅拌，缓慢滴加50％的柠檬酸液直至调PH值为2.0-2.4，在胶体磨中磨至粒子直径为0.5-1.5μm，加入100g胃蛋白酶，加热至40-45℃，保温20min，再加热到75℃维持20min，使酶失活后，渐冷至20℃以下，用50％的柠檬酸液调PH值值为2.0-2.4，加入针剂用活性炭100g-150g助滤，用0.45μm膜滤2次，将2次滤液合并，用10％氢氧化钠液调PH值为3.1-3.4，用6L冷冻离心机于4000转/分离心30分钟，离心温度为0-2℃，上层清液用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为1000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为8000的超滤膜超滤；超滤液冷冻干燥成水份≤3％的促肾上腺皮质激素干品备用；

(2)制备胸腺肽：

①原料处理：用去离子水浸泡经冷冻的小牛胸腺，化冻后剔除结缔组织及膜和残肉，并用去离子水反复清洗，甩净水，将10Kg胸腺用10Kg注射用水混合在绞肉机内绞碎，在10℃以下于胶体磨中磨碎匀浆2-3次，直至粒子直径为0.5-1.5μm，将磨碎的匀浆液用50％柠檬酸液调PH值为1.5-2.0，加入胃蛋白酶800g，升温至40-50℃，保温20-30min后，再升至75℃维持20min使酶失活后，迅速降至室温，装入带盖不锈钢桶内在无菌室内于-28℃冷冻24小时，取出后室温缓化8小时，重新在-28℃速冻24小时，再在室温缓化8小时后，加热至60-70℃，再迅速降至30℃以下，放入6L冷冻离心机中于0-2℃、4000-8000转/分离心35分钟，取上清液，离心上清液先经截留分子量为100000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为8000的超滤膜进行精滤，精滤液冷冻干燥成水份≤3％的胸腺肽干品备用；

(3)制备免疫核糖核酸：

①原料处理：选择1周岁的羊，检查无传染病、布氏杆菌和包囊虫之后，将2-3mg/ml死的或过期失效的卡介苗加费时佐剂制成油包水状乳化剂，于羊淋巴结内注射，每只羊注射1ml，12-14天后屠杀，取肝、脾、心、肺和肾，作提取免疫核糖核酸的原料，用生理盐水洗净，绞成碎块，按体积比1∶1∶1∶1加入1-2倍量体积0.1mol/L氯化钠、0.05mol/L柠檬酸三钠、0.001％聚乙烯硫酸酯、0.1％PH值为9的TritonX-100(TritonX-100为表面活性剂，国外商品名)，用胶体磨匀浆2-3次，磨成直径为0.5-1.5μm粒子，于0-2℃、3500转/分离心20min，取上层清液，在离心清液中加入等体积0.2mol/L的三乙醇胺、10g/L十二烷基硫酸钠、0.002mol/L PH值为9的乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀后加等体积90％苯酚、等体积氯仿，于室温下振荡30min，3500转/分离心20min，提取清液，再加入等量氯仿振摇，至中间层界面无明显蛋白层为止，得到除去蛋白的提取液，上清液加入1/10体积的200g/L乙酸钾和两倍体积、冷至-20℃的无水乙醇，于0℃放置1小时，离心，得白色沉淀，将沉淀溶解于含有0.001mol/L的乙二胺四乙酸二钠至0.01mol/L的乙酸钠中，加入等体积2.5mol/L磷酸氢二钾，于不断搅拌下再加等体积的乙二醇甲醚，0℃放置半小时，离心，得到除去糖原的提取液，清液在0℃不断搅拌下，加入等体积0.2mol/L乙酸钠液和1/4体积10g/L溴化十六烷基三甲基胺，0℃放置半小时，离心，取沉淀，用0.1mol/L含0.001mol/L乙二胺四乙二酸二钠的乙酸钠液、70％乙醇反复洗涤，至无泡沫为止，将沉淀溶解于0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠，先用截留分子量为8000的中空纤维柱超滤，再用0.22μm膜除菌过滤，测定含量，无菌罐装，冷冻干燥，得水份≤3％的免疫核糖核酸干燥品；

(4)按上文所述的①～④的编号顺序将各种原料在灭菌注射用水中溶解完全，用8％盐酸调PH值为2.5-3.0后，用0.22μm膜滤除菌，无菌罐装，用7ml亚林瓶每瓶灌装3-4ml，并用丁基胶塞进行半加塞，送入干燥箱中在真空压力为40Pa-1.5Pa下冷冻干燥，使其残留水份≤2％，按多肽为垂体前叶与肾上腺皮质提取物标示量的95％-120％、免疫核糖核酸为标示量的95％-120％的质量标准检测合格后、包装进库。

该水针剂的制备过程中起始和终点PH值均为2.5-3.0。

本发明的以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成份的另一种组合药物是由以下原料按重量配比制成的：

①促肾上腺皮质激素    8mg-12mg

②免疫核糖核酸        4mg-20mg

③胸腺肽              8mg-50mg

④还原型谷胱甘肽      0.5mg-2.0mg

⑤低分子右旋糖酐-40   2mg-4mg

⑥甘露醇        7mg-9mg

无菌注射用水    3000mg-4000mg。

该组合药物的冻干针剂的制备方法包括如下步骤：

(1)制备促肾上腺皮质激素：

①原料处理：将合格猪脑垂体及猪肾上腺皮质取出，去除结缔组织，投入分析纯丙酮中，浸泡后脱去水份，至垂体及猪肾上腺皮质变硬为止；将垂体中腺垂体、神经垂体分开，分别贮于丙酮中备用；取出腺垂体及肾上腺皮质，其中肾上腺皮质占二者总重的1/4至1/2，置于室温下真空干燥，磨粉，过80目筛，得水份含量低于5％的腺垂体干粉；

②提取：将腺垂体干粉1Kg，加入预热到50℃的0.5mol/L乙酸20L中搅拌，缓慢滴加50％的柠檬酸液直至调PH值为2.0-2.4，在胶体磨中磨至粒子直径为0.5-1.5μm，加入100g胃蛋白酶，加热至40-45℃，保温20min，再加热到75℃维持20min，使酶失活后，渐冷至20℃以下，用50％的柠檬酸液调PH值为2.0-2.4，加入针剂用活性炭100g-150g助滤，用0.45μm膜滤2次，将2次滤液合并，用10％氢氧化钠液调PH值为3.1-3.4，用6L冷冻离心机于4000转/分离心30分钟，离心温度为0-2℃，上层清液用截留分子量为100000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为8000的超滤膜超滤；超滤液冷冻干燥成水份≤3％的促肾上腺皮质激素干品备用；

(2)制备胸腺肽：

①原料处理：用去离子水浸泡经冷冻的小牛胸腺，化冻后剔除结缔组织及膜和残肉，并用去离子水反复清洗，甩净水，将10Kg胸腺用10Kg注射用水混合在绞肉机内绞碎，在10℃以下于胶体磨中磨碎匀浆2-3次，直至粒子直径为0.5-1.5μm，将磨碎的匀浆液用50％柠檬酸液调PH值为1.5-2.0，加入胃蛋白酶800g，升温至40-50℃，保温20-30min后，再升至75℃维持20min使酶失活后，迅速降至室温，装入带盖不锈钢桶内在无菌室内于-28℃冷冻24小时，取出后室温缓化8小时，重新在-28℃速冻24小时，再在室温缓化8小时后，加热至60-70℃，再迅速降至30℃以下，放入6L冷冻离心机中于0-2℃、4000-8000转/分离心35分钟，取上清液，离心上清液先经截留分子量为100000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为8000的超滤膜进行精滤，精滤液冷冻干燥成水份≤3％的胸腺肽干品备用；

(3)制备免疫核糖核酸：

①原料处理：选择1周岁的羊，检查无传染病、布氏杆菌和包囊虫之后，将2-3mg/ml死的或过期失效的卡介苗加费时佐剂制成油包水状乳化剂，于羊淋巴结内注射，每只羊注射1ml，12-14天后屠杀，取肝、脾、心、肺和肾，作提取免疫核糖核酸的原料，用生理盐水洗净，绞成碎块，按体积比1∶1∶1∶1加入1-2倍量体积0.1mol/L氯化钠、0.05mol/L柠檬酸三钠、0.001％聚乙烯硫酸酯、0.1％PH值为9的TritonX-100，用胶体磨匀浆2-3次，磨成直径为0.5-1.5μml粒子，于0-2℃、3500转/分离心20min，取上层清液，在离心清液中加入等体积0.2mol/L的三乙醇胺、10g/L十二烷基硫酸钠、0.002mol/L PH值为9的乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀后加等体积90％苯酚、等体积氯仿，于室温下振荡30min，3500转/分离心20min，提取清液，再加入等量氯仿振摇，至中间层界面无明显蛋白层为止，得到除去蛋白的提取液，上清液加入1/10体积的200g/L乙酸钾和两倍体积、冷至-20℃的无水乙醇，于0℃放置1小时，离心，得白色沉淀，将沉淀溶解于含有0.001mol/L的乙二胺四乙酸二钠至0.01mol/L的乙酸钠中，加入等体积2.5mol/L磷酸氢二钾，于不断搅拌下再加等体积的乙二醇甲醚，0℃放置半小时，离心，得到除去糖原的提取液，清液在0℃不断搅拌下，加入等体积0.2mol/L乙酸钠液和1/4体积10g/L溴化十六烷基三甲基胺，0℃放置半小时，离心，取沉淀，用0.1mol/L含0.001mol/L乙二胺四乙二酸二钠的乙酸钠液、70％乙醇反复洗涤，至无泡沫为止，将沉淀溶解于0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠，先用8000K中空纤维柱超滤，再除菌过滤，测定含量，无菌罐装，冷冻干燥，得水份≤3％的免疫核糖核酸干燥品；

(4)按上文所述的①～⑥的编号顺序将各种原料在灭菌注射用水中溶解完全，用8％盐酸调PH值为2.5-3.0后，用0.22μm膜滤除菌，无菌罐装，用7ml亚林瓶每瓶灌装3-4ml，并用丁基胶塞进行半加塞，送入干燥箱中在真空压力为40Pa-1.5Pa下冷冻干燥，使其残留水份≤2％，按多肽为垂体前叶与肾上腺皮质提取物标示量的95％-120％、免疫核糖核酸为标示量的95％-120％的质量标准检测合格后、包装进库。

该水针剂的制备过程中起始和终点PH值均为2.5-3.0。

促肾上腺皮质激素、胸腺肽、免疫核糖核酸易受光氧化，易受热以及放置时间延长而致使其活性降低，若在它们溶液中加入还原型的谷胱甘肽，则可以长期保持它们活性不变(见表一)。

表一：活性保持对比表

	室温40W紫外灯照24h	121℃加热30min	常温密闭暗处放置1年
				8mg/ml浓度促肾上腺皮质激素液	活性降低20％以上	活性降低25％	活性降低10％
8mg/ml浓度促肾上腺皮质激素液中加入0.5mg/ml谷胱甘肽液	活性降低10％	活性降低15％	活性降低25％
				4mg/ml免疫核糖核酸溶液	活性降低15％	活性降低10％	活性降低10％
4mg/ml免疫核糖核酸液中加入0.5mg/ml谷胱甘肽液	活性降低8％	活性降低6％	活性降低2％
				12mg/ml胸腺肽溶液	活性降低16％	活性降低20％	活性降低12％
12mg/ml胸腺肽液中加入0.5mg/ml谷胱甘肽液	活性降低10％	活性降低8％	活性降低3％

本品水针剂的性状为微黄色澄明液体，冻干针剂的性状为白色块状或粉末状。

本发明的组合药物不仅能长期保持其活性，而且对治疗关节炎、病毒性感冒等疾病作用显著，对预防癌症、预防注射疼痛等也十分有效(见表二)。

表二：临床应用对比试验

	关节炎有效率(共30例)	治疗病毒性感冒缓解率(共60例)	恶心、呕吐(共30例)	注射疼痛(共60例)
					阿司匹林赖氨酸盐静脉滴注每日2次每次0.9g	87％	78％	21％	轻度19％

垂体前叶肾上腺皮质提取物注射液每日2次每次16mg	89％	------	无	65％
					本发明药物水针剂肌注每日2次每次含活性物质总量20mg	92.5％	95％	无	轻度8％
本发明药物水针剂肌注每日1次每次含活性物质总量45mg	93％	95％	无	轻度8.5％
					本发明药物水针剂肌注每日1次每次含活性物质总量82mg	94％	95％	无	轻度9％
本发明药物冻干针剂肌注每日2次每次含活性物质总量20mg	96％	97％	无	轻度6％
					本发明药物冻干针剂静脉滴注每日1次每次含活性物质总量45mg	96.5％	97％	无	轻度7％
本发明药物冻干针剂静脉滴注每日1次每次含活性物质总量82mg	97％	98％	无	轻度9.5％

制剂质量检测方法

本品为猪脑垂体前叶与肾上腺皮质提取物加上小牛胸腺提取的胸腺肽、免疫羊的肝、脾、心、肺、肾中提取的免疫核糖核酸组成的无菌水溶液针剂或冻干针剂。含多肽应为垂体前叶与肾上腺皮质提取物标示量的95％-120％；含免疫核糖核酸应为标示量的95％-120％。

鉴别

1.多肽鉴别

(1)取本品2ml，加双缩脲试剂(取硫酸铜0.75g和酒石酸钾钠3g，加水250ml使其溶解，在搅拌下加入10％氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml)4ml，放置，应显紫色或紫红色。

(2)取本品，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录VI H)测定，在268nm波长处有最大吸收。

2.免疫核糖核酸鉴别

取本品加水制成每1ml中含100μg免疫核糖核酸的溶液，取适量，加等体积的3，5-二羟基甲苯试液(取三氯化铁和3，5-二羟基甲苯各0.1g，加盐酸100ml溶解)，混匀，置沸水浴中加热10分钟，即显黄绿色。

检查

PH：应为2.5-3.0(中国药典2000年版二部附录VI H)

吸收度：(1)多肽：精密量取本品2ml，置100ml瓶中，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录VI H)测定，在268nm波长处，吸收度为0.288以上。

(2)免疫核糖核酸：取本品3支，分别加0.9％氯化钠液制成每支每毫升中含20μg核糖核酸液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录VI A)测定，在(260±2)nm波长处应有最大吸收，260nm与280nm波长处吸收度比值不得小于2.0。

精氨酸与赖氨酸：

照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录V D)测定，用适宜的氨基酸分析仪测定，每1ml含精氨酸应为0.20-0.30mg，赖氨酸应为0.40-0.60mg。

脱氧核糖核酸对照品溶液的制备：

称取DNA对照品适量，用0.005mol/L氢氧化钠溶液制成每1ml中含0.1mg的溶液。

供试品溶液的制备：取本品，用0.005mol/L氢氧化钠溶液制成每1ml中含核糖核酸1.00mg的溶液。

测定法：精密量取DNA对照品溶液和供试品溶液各2ml，分别置具塞试管中，各加二苯胺试液(取二苯胺1g，加冰醋酸100ml及高氯酸10ml，溶解，临用前加入1.6％的乙醛溶液1ml)4.0ml，置60℃水溶液中加热50分钟，迅速冷却，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV A)，在600nm的波长处测定吸收度，供试品的溶液吸收度应不大于对照品溶液的吸收度。

免疫核糖核酸的活力测定：Hanks液，称取氯化钠16g，磷酸氢二钠0.304g，磷酸二氢钾0.136g，氯化钾0.8g，葡萄糖2g，加水溶解成为200ml，灭菌，4℃存放，临用前稀释10倍，用10％碳酸氢钠溶液调节PH为7.2-7.4。抗原溶液用Hanks液将乙肝抗原配成每1ml中含有5-10μg的溶液，冷冻保存。

小鼠脾细胞悬液制备：采集新鲜的健康小鼠脾，放在Hanks液中，轻压挤出淋巴细胞经纱布过滤除去粗块，将滤液轻轻加在装有4ml淋巴细胞分离液的离心管上层，使界面平整，以每分钟2000转离心15分钟后，吸收界面的白细胞层，再用Hanks液洗2次，用细胞计数板计数，用培养液制成每1ml中含(1×10¹)～(2×10²)个白细胞的溶液待用。

测定法：在24孔培养板中进行，供试品孔及对照品孔各做3孔，将供试品用Hanks液制成每1ml中含有核糖核酸1mg的溶液，作为供试品溶液，每孔各加150μl，对照孔中加Hanks液150μl，然后每孔加入小鼠脾细胞悬液150μl，再加抗原液150μl，将培养板于87℃保温2小时，使细胞在培养板底部黏附。取出细胞培养板，用恒温振荡培养箱在一定强度下摇5min，将未黏附细胞摇起，吸出上清夜，每孔再加入Hanks液450μl，按上法洗一次，将洗液与上清夜合并混匀，在415nm的波长处测定每孔的吸收度值作为黏附后细胞的吸收度值。另取供试品溶液150μl，加Hanks液450μl及小鼠脾细胞悬液150μl，再加抗原溶液150μl混匀，在415nm的波长处测定吸收度值作为黏附前细胞的吸收度值，另用Hanks液150μl代替供试品溶液10μl，同法操作，作为对照黏附前细胞的吸收度值。

按下式计算：

只有对照黏附率≥40％，吸收度值在0.1-0.4之间本试验结果有效。供试品的黏附抑制率不得小于30％。

多肽的活性测定：取本品适量，照T细胞活性测定法一脱E受体法测定，供试品的E玫瑰花结百分率与对照管E玫瑰花结的百分率之差不得低于10.0％。

此测定法国家药委员会有专门的测定规定。

胸腺肽a₁：在高分子量物质项下记录的色谱 图中，按面积归一法计算，供试品中对应于胸腺肽a₁保留时间的峰的含量不得低于1.0％。

高分子量物质：照高效液相色谱法测定(中国药典2000年版二部附录V D)。

色谱条件与系统适用性试验：用凝胶色谱柱(如TSK GEL2000SWX17.8mm×300mm，5μm)；次三氟醋酸一乙腈一水(0.05∶10∶90)为流动相；流速为每分钟0.7ml；检测波长为214nm。理论塔板数按核糖核酸酶A计算应不得低于5000，分离度按相邻峰高与峰谷之比计算均不得小于3.0。

标准曲线的制备：分别取核糖酸酶A(分子量13700)、胰岛素(分子量5808)、胸腺肽a₁(分子量3108)、生长激素释放抑制因子(分子量1521)适量，用流动相制成每1ml中的各含1mg的溶液作为分子量标准溶液。分别取分子量标准溶液20ml注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样，其保留时间相对偏差不得大于2.0％。以各峰的保留时间为横坐标，分子量对数为纵坐标作标准曲线，进行线性回归，系数不得小于0.99。

测定法：取供试品适量，加流动相制成每1ml中含多肽1mg的溶液，取20μg注入液相色谱仪，记录色谱图，以面积归一化法计算，供试品中分子量大于10000道尔顿的组分不得超过5.0％。

过敏试验：取本品，加氯化钠注射液，制成每1ml中含有1mg免疫核糖核酸的溶液，作为致敏液及供试品液。依国家药典委员会专门规定检查，应符合规定。

异常毒性：取本品，加氯化钠注射液制成每1ml含免疫核糖酸0.5mg的溶液，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI C)，按腹腔注射法给药，应符合规定。

热原：取本品，用氯化钠注射液制成每1mt中含1mg免疫核糖核酸的溶液，依法检查(中国药典2000年版二部附录XI D)，剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定。

其他：应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版二部附录I B)。

[含量测定]：

免疫核糖核酸含量测定：

取本品3支，分别加0.9％氯化钠溶液制成每1ml中含20μg核糖核酸的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV A)，在260nm的波长处测定吸收度，按核糖核酸的吸收度系数E^1％ _1cm为220计算，使含量不得低于标示量的90％。如有1支不符合规定，另取3支，结果均应符合规定。

多肽含量测定：取本品适量，加水制成每1ml中含多肽0.15mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取1ml，照福林酚法测定。

福林酚法国家药典委员会有专门规定。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步的说明，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

制备本发明3种活性物质：促肾上腺皮质激素、胸腺肽及免疫核糖核酸：

实施例1

促肾上腺皮质激素(ACTH)的制备：

(1)原料处理

将合格猪脑垂体及猪肾上腺皮质取出，迅速去除结缔组织(筋膜)，迅速投入分析纯丙酮中，浸泡脱水3次，每次约24小时，至垂体及猪肾上腺皮质变硬为止。将垂体中腺垂体、神经垂体分开，分别贮于丙酮中备用。本法使用腺垂体，取出腺垂体及肾上腺皮质(其中肾上腺皮质占二者总重的1/4-1/2)，置于室温下真空干燥，磨粉，过80目筛，得腺垂体干粉，水份含量应低于5％。

(2)提取：

将腺垂体干粉1Kg(包括肾上腺皮质占重量比例1/4-1/2)，加入预热到50℃的0.5mol/L乙酸20L，搅拌，缓慢滴加50％柠檬酸液直至调PH值为2.0-2.4，在胶体磨中磨至粒子直径为1μm左右加入100g胃蛋白酶，加热使温度达40-45℃，保温20min，再加热到75℃维持20min，使酶失活后，渐冷20℃以下，用50％柠檬酸液(柠檬酸为分析纯)调PH值为2.0-2.4，加入针剂用活性炭100g-150g助滤，用0.45μm膜滤。将2次滤液合并，用10％氢氧化钠(分析纯)液调PH为3.1-3.4。用6L冷冻离心机于4000转/分离心30分钟(离心温度为0-2℃)，上层清夜用100K中空纤维超滤柱超滤，滤液再用10K中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为8000的超滤膜超滤，超滤液冷冻干燥成干品备用(水份≤3％)。

实施例2

胸腺肽的制备：

用纯化水(去离子水)浸泡经冷冻的小牛胸腺(重量比2∶1)，化冻后剔除结缔组织及膜和残肉，并用纯化水反复清洗4次，甩净水，将10Kg胸腺用10Kg注射用水混合在绞肉机内绞碎，在10℃以下于胶体磨中磨碎匀浆2-3次，直至粒子大小1μm左右，将磨碎的匀浆液用50％柠檬酸液调PH值为1.5-2.0，加入胃蛋白酶800g，升温至40-50℃，保温20-30min后，再升至75℃维持20min使酶失活后，迅速降至室温，用316不锈钢桶(带盖)在无菌室内于-28℃冷冻24小时，取出后室温缓化8小时，重新在-28℃速冻24小时，再在室温缓化8小时后，加热至60-70℃，再迅速降至30℃以下，放入6L冷冻离心机中于0-2℃、4000-8000转/分离心35分钟，取上清夜。

离心上清夜先经截留分子量为100000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为8000的超滤膜进行精滤，精滤液冷冻干燥成干品备用(水份≤3％)。

实施例3

免疫核糖核酸(iRNA)的制备：

选择一年龄的羊，检查有无传染病、布氏杆菌和包囊虫之后，将2-3mg/ml死的或过期失效的卡介苗加费时佐剂(羊毛脂1份，液体石蜡1份，混合，高压灭菌，4℃保存备用)制成油包水状乳化剂，于羊淋巴结内注射，每只羊注射1ml，12-14天后屠杀，取肝、脾、心、肺和肾，作提取iRNA的原料，用生理盐水洗净，用绞肉机绞成碎块，加入1-2倍量体积0.1mol/L氯化钠-0.05mol/L柠檬酸三钠、0.001％聚乙烯硫酸酯(PVS)、0.1％TritonX-100(PH7)，用胶体磨匀浆2-3次，磨成1μm左右粒子，于0-2℃、3500转/分离心20min，取上层清夜。

在离心清夜中加入等体积0.2mol/L的三乙醇胺、10g/L(1％)十二烷基硫酸钠(SDS)、0.002mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA)(PH9)，搅拌均匀后加等体积90％苯酚(含0.2％8-羟基喹啉)、等体积氯仿，于室温下振荡30min，3500转/分离心20min，得提取清夜，再加入等量氯仿振摇，反复2-3次，至中间层界面无明显蛋白层为止，离心除去蛋白，收集清夜，得到除去蛋白的提取液。

上清夜加入1/10体积的200g/L(20％)乙酸钾和两倍体积、冷至-20℃得无水乙醇，于0℃放置1小时，离心，得白色沉淀，将沉淀溶解于含有0.001mol/L得乙二胺四乙酸二钠至0.01mol/L得乙酸钠中，加入等体积2.5mol/L磷酸氢二钾，于不断搅拌下再加等体积的乙二醇甲醚，0℃放置半小时，离心，得到除去糖原的提取液。

清夜在0℃不断搅拌下，加入等体积0.2mol/L乙酸钠液和1/4体积10g/L(1％)溴化十六烷基三甲基胺(CTAB)，0℃放置半小时，离心，取沉淀，用0.1mol/L乙酸钠液(含0.001mol/L乙二胺四乙二酸二钠)、70％乙醇反复洗涤5次，至无泡沫为止。

将沉淀溶解于0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠(含0.14mol/L氯化钠)。先用8000K中空纤维柱超滤，再除菌过滤(用0.22μm膜滤)，测定含量，无菌罐装，冷冻干燥，得iRNA干燥品(水份≤3％)。

制备本发明水针剂：

实施例1

按重量比备好原料如下：

①促肾上腺皮质激素   8mg×1000

②免疫核糖核酸       4mg×1000

③胸腺肽             8mg×1000

④还原型谷胱甘肽     0.5mg×1000

无菌注射用水         2000mg×1000

(起始和终点PH均为2.5-3.0)

分装1000支(每支含3种活性成份总量为20mg)

生产操作：

1.将8000mg促肾上腺皮质激素溶解在1600mlPH为2.5-3.0的无菌注射用水中，搅拌溶解完全，再加入(搅拌下)免疫核糖核酸4000mg，搅拌溶解完全；再加入(搅拌下)胸腺肽8000mg，溶解完全；再加入还原型谷胱甘肽500mg，搅拌溶解完全；再加入PH为2.5-3.0无菌注射用水至总量为2000ml，用8％盐酸液重调PH为2.5-3.0；

2.将药液用0.22μm膜滤除菌；

3.在无菌(100级)条件下，用经过灭菌除热原的2.0ml西林瓶灌装，每支装量2.0ml，并用经过灭菌除热原的丁基胶塞密封；

4.按质量标准检测合格后、包装进库。

实施例2

按重量比备好原料如下

①促肾上腺皮质激素   10mg×1000

②免疫核糖核酸       15mg×1000

③胸腺肽             20mg×1000

④还原型谷胱甘肽     0.75mg×1000

无菌注射用水         5000mg×1000

(起始和终点PH均为2.5-3.0)

分装1000支(每支含3种活性成份总量为45mg)

生产操作步骤与实施例1相同，但本实施例每支灌装量为5.0ml。

实施例3

按重量比备好原料如下

①促肾上腺皮质激素   12mg×1000

②免疫核糖核酸       20mg×1000

③胸腺肽             50mg×1000

④还原型谷胱甘肽     1.0mg×1000

无菌注射用水         5000mg×1000

(起始和终点PH均为2.5-3.0)

分装1000支(每支含3种活性成份总量为82mg)

生产操作步骤与实施例1相同，但本实施例每支灌装量为5.0ml

制备本发明冻干针剂

实施例1

按重量比备好原料如下

①促肾上腺皮质激素    8mg×1000

②免疫核糖核酸        4mg×1000

③胸腺肽              8mg×1000

④还原型谷胱甘肽      0.5mg×1000

⑤低分子右旋糖酐-40   2mg×1000

⑥甘露醇         7mg×1000

无菌注射用水     3000mg×1000

(起始和终点PH均为2.5-3.0)

分装1000支(每支含3种活性成份总量为20mg)

生产操作：

1.将8000mg促肾上腺皮质激素在搅拌下，加入1600ml的无菌注射用水中，无菌注射用水预先调PH为2.5-3.0(用8％盐酸调PH值)，搅拌溶解完全；再加入(搅拌下)免疫核糖核酸4000mg，搅拌溶解完全；再加入(搅拌下)胸腺肽8000mg，溶解完全；再加入还原型谷胱甘肽500mg，搅拌溶解完全；再加入2000mg低分子右旋糖酐-40，在搅拌下溶解完全；再加入7000mg甘露醇，在搅拌下溶解完全；再用8％盐酸液调药液PH为2.5-3.0；

2.将药液用0.22μm膜滤除菌；

3.在无菌(100级)条件下，用经过灭菌除热原的7.0ml西林瓶灌装，每支装量3.0ml，并用经过灭菌除热原的丁基胶塞进行半加塞；

4.将灌装并加塞的药瓶送入冷冻干燥箱中在-40℃～+40℃、真空压力为40Pa-1.5Pa下冷冻干燥，使其残留水份≤2％，轧盖；

5.按质量标准检测合格后、包装进库。

实施例2

按重量比备好原料如下

①促肾上腺皮质激素   10mg×1000

②免疫核糖核酸       15mg×1000

③胸腺肽             20mg×1000

④还原型谷胱甘肽     1.5mg×1000

⑤低分子右旋糖酐-40  3mg×1000

⑥甘露醇             8mg×1000

无菌注射用水         3000mg×1000

(起始和终点PH均为2.5-3.0)

分装1000支(每支含3种活性成份总量为45mg)

生产操作步骤与实施例1相同。

实施例3

按重量比备好原料如下：

①促肾上腺皮质激素   12mg×1000

②免疫核糖核酸       20mg×1000

③胸腺肽            50mg×1000

④还原型谷胱甘肽    2.0mg×1000

⑤低分子右旋糖酐-40 4mg×1000

⑥甘露醇            9mg×1000

无菌注射用水        4000mg×1000

(起始和终点PH均为2.5-3.0)

分装1000支(每支含3种活性成份总量为82mg)

生产操作步骤与实施例1相同，但本实施例每支灌装量为4.0ml。

Claims (7)

1.一种以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成分的组合药物，其特征在于它是由以下原料按重量配比制成的：

①促肾上腺皮质激素    8mg-12mg

②免疫核糖核酸        4mg-20mg

③胸腺肽              8mg-50mg

④还原型谷胱甘肽      0.5mg-1.0mg

无菌注射用水          2000mg-5000mg。

2.如权利要求1所述的组合药物的水针剂的制备方法，其特征在于依次包括下列步骤：

(1)制备促肾上腺皮质激素：

①原料处理：将合格猪脑垂体及猪肾上腺皮质取出，去除结缔组织，投入分析纯丙酮中，浸泡后脱去水份，至垂体及猪肾上腺皮质变硬为止；将垂体中腺垂体、神经垂体分开，分别贮于丙酮中备用；取出腺垂体及肾上腺皮质，其中肾上腺皮质占二者总重的1/4至1/2，置于室温下真空干燥，磨粉，过80目筛，得水份含量低于5％的腺垂体干粉；

②提取：将腺垂体干粉1Kg，加入预热到50℃的0.5mol/L乙酸20L中搅拌，缓慢滴加50％的柠檬酸液直至调PH值为2.0-2.4，在胶体磨中磨至粒子直径为0.5-1.5μm，加入100g胃蛋白酶，加热至40-45℃，保温20min，再加热到75℃维持20min，使酶失活后，渐冷至20℃以下，用50％的柠檬酸液调PH值为2.0-2.4，加入针剂用活性炭100g-150g助滤，用0.45μm膜滤2次，将2次滤液合并，用10％氢氧化钠液调PH值为3.1-3.4，用6L冷冻离心机于4000转/分离心30分钟，离心温度为0-2℃，上层清液用截留分子量为100000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为8000的超滤膜超滤；超滤液冷冻干燥成水份≤3％的促肾上腺皮质激素干品备用；

(2)制备胸腺肽：

①原料处理：用去离子水浸泡经冷冻的小牛胸腺，化冻后剔除结缔组织及膜和残肉，并用去离子水反复清洗，甩净水，将10Kg胸腺用10Kg注射用水混合在绞肉机内绞碎，在10℃以下于胶体磨中磨碎匀浆2-3次，直至粒子直径为0.5-1.5μm，将磨碎的匀浆液用50％柠檬酸液调PH值为1.5

(1)制备促肾上腺皮质激素：

①原料处理：将合格猪脑垂体及猪肾上腺皮质取出，去除结缔组织，投入分析纯丙酮中，浸泡后脱去水份，至垂体及猪肾上腺皮质变硬为止；将垂体中腺垂体、神经垂体分开，分别贮于丙酮中备用；取出腺垂体及肾上腺皮质，其中肾上腺皮质占二者总重的1/4至1/2，置于室温下真空干燥，磨粉，过80目筛，得水份含量低于5％的腺垂体干粉；

②提取：将腺垂体干粉1Kg，加入预热到50℃的0.5mol/L乙酸20L中搅拌，缓慢滴加50％的柠檬酸液直至调PH值为2.0-2.4，在胶体磨中磨至粒子直径为0.5-1.5μm，加入100g胃蛋白酶，加热至40-45℃，保温20min，再加热到75℃维持20min，使酶失活后，渐冷至20℃以下，用50％的柠檬酸液调PH值值为2.0-2.4，加入针剂用活性炭100g-150g助滤，用0.45μm膜滤2次，将2次滤液合并，用10％氢氧化钠液调PH值为3.1-3.4，用6L冷冻离心机于4000转/分离心30分钟，离心温度为0-2℃，上层清液用截留分子量为100000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，滤液再用截留分子量为8000的超滤膜超滤；超滤液冷冻干燥成水份≤3％的促肾上腺皮质激素干品备用；

(2)制备胸腺肽：

①原料处理：用去离子水浸泡经冷冻的小牛胸腺，化冻后剔除结缔组织及膜和残肉，并用去离子水反复清洗，甩净水，将10Kg胸腺用10Kg注射用水混合在绞肉机内绞碎，在10℃以下于胶体磨中磨碎匀浆2-3次，直至粒子直径为0.5-1.5μm，将磨碎的匀浆液用50％柠檬酸液调PH值为1.5-2.0，加入胃蛋白酶800g，升温至40-50℃，保温20-30min后，再升至75℃维持20min使酶失活后，迅速降至室温，装入带盖不锈钢桶内在无菌室内于-28℃冷冻24小时，取出后室温缓化8小时，重新在-28℃速冻24小时，再在室温缓化8小时后，加热至60-70℃，再迅速降至30℃以下，放入6L冷冻离心机中于0-2℃、4000-8000转/分离心35分钟，取上清液，离心上清液先经截留分子量为100000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为10000的中空纤维超滤柱超滤，再用截留分子量为8000的超滤膜进行精滤，精滤液冷冻干燥成水份≤3％的胸腺肽干品备用；

(3)制备免疫核糖核酸：

①原料处理：选择1周岁的羊，检查无传染病、布氏杆菌和包囊虫之后，将2-3mg/ml死的或过期失效的卡介苗加费时佐剂制成油包水状乳化剂，于羊淋巴结内注射，每只羊注射1ml，12-14天后屠杀，取肝、脾、心、中在真空压力为40Pa-1.5Pa下冷冻干燥，使其残留水份≤2％，按多肽为垂体前叶与肾上腺皮质提取物标示量的95％-120％、免疫核糖核酸为标示量的95％-120％的质量标准检测合格后、包装进库。

3.如权利要求2所述的组合药物的水针剂的制备方法，其特征在于在制备过程中起始和终点PH值均为2.5-3.0。

4.一种以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成分的组合药物，其特征在于它是由以下原料按重量配比制成的：

①促肾上腺皮质激素    8mg-12mg

②免疫核糖核酸        4mg-20mg

③胸腺肽              8mg-50mg

④还原型谷胱甘肽      0.5mg-2.0mg

⑤低分子右旋糖酐-40   2mg-4mg

⑥甘露醇              7mg-9mg

无菌注射用水          3000mg-4000mg。

5.如权利要求4所述的组合药物的冻干针剂的制备方法，其特征在于依次包括下列步骤：

(1)按权利要求2所述步骤(1)～(3)的方法分别制备促肾上腺皮质激素、胸腺肽、免疫核糖核酸；

(2)按权利要求4中所述编号①～⑥的顺序将各种原料在灭菌注射用水中溶解完全，用8％盐酸调PH值为2.5-3.0后，用0.22μm膜滤除菌，无菌罐装，用7ml亚林瓶每瓶灌装3-4ml，并用丁基胶塞进行半加塞，送入干燥箱中在真空压力为40Pa-1.5Pa下冷冻干燥，使其残留水份≤2％，按多肽为垂体前叶与肾上腺皮质提取物标示量的95％-120％、免疫核糖核酸为标示量的95％-120％的质量标准检测合格后、包装进库。

6.如权利要求5所述的组合药物的冻干针剂的制备方法，其特征在于在制备过程中起始和终点PH值均为2.5-3.0。

7.权利要求1或4所述的组合药物在制备治疗风湿、预防及缓解病毒性感冒、关节炎、肿瘤及肝炎辅助用药的药物中的应用。