CN1672731A - 一种用于肺部给药的干扰素粉雾剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于肺部给药的干扰素粉雾剂及其制备方法，其中以0.0002％－0.8％干扰素、配以相应的药用辅料组成干扰素的液相组合物，采用适当方法，特别是喷雾干燥法，制成稳定高效的干扰素粉雾剂。本发明中所采用的活性保护剂，保证了干扰素的活性在干燥过程中几乎没有受到破坏，起到了很好的稳定性作用。本发明的干扰素粉雾剂组成中不含人血白蛋白和吸收促进剂，避免了人血清白蛋白带来血液病污染的问题，同时也防止了因长期使用吸收促进剂对肺部产生的损害。

Description

一种用于肺部给药的干扰素粉雾剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种高效干扰素粉雾剂配方及其制备方法。尤其是可经过口腔或鼻腔吸入后在鼻腔、口腔、气管和肺部吸收而发挥药效的干扰素粉雾剂配方及其制备方法。

背景技术

干扰素(interferon，INF)是动物细胞在诱生剂的刺激作用下产生的一种高活性多功能的细胞因子，具有很强的抗病毒活性，而且一种干扰素能够抑制多种病毒的增殖，在医学上是一类广谱的抗病毒药物。干扰素可治疗肝炎、流行性感冒等常见病毒性疾病，也有抗癌细胞增殖的作用，并已应用于乳腺癌、骨髓癌等多种癌症的治疗。

由于蛋白多肽类药物极易失活，所以绝大多数为注射给药，例如干扰素α-2b治疗肝炎，每周注射给药3-5次，因而具有以下难以克服的缺点：患者适应性差、针头感染的危险性、高昂的费用等；加之干扰素的水溶液中常使用人血清白蛋白(HSA)作为稳定剂，因而不免有污染和传播疾病的潜在危险；患者注射后常伴有发热、寒颤、肌肉痛等副作用，也可能与注射给药有关，因此干扰素的临床应用极大地受到了限制。

鉴于蛋白类药物的胃肠道给药迟迟未能突破技术上的障碍，肺部给药则是比较理想的替代给药途径。肺部给药具有下列优点：1、肺部的酶比消化道少得多，主要是一些肺表面活性物质；2、吸收面积高达140m²；3、血流量大，达到5000mL/min；4、肺泡为单层细胞，其表面是一层半透膜，肺泡壁比毛细血管壁还要薄，厚度小于0.1μm，通透性好，蛋白大分子易于透过；5、绕过了肝脏的首过效应；6、患者顺应性好，特别适用于需进行长期治疗的病人；7、药物吸收迅速，给药后起效快；8、药物吸收后直接进入体循环，达到全身治疗的目的；9、起局部治疗作用时，给药剂量明显降低，毒副作用小。

肺部吸入给药的剂型常见的有气雾剂、粉雾剂和喷雾剂。但喷雾剂中作为动力源的氟氯烷类抛射剂可破坏大气的臭氧层，对环境构成极大的威胁；气雾剂须采用超声波雾化吸入器，把干扰素溶于生理盐水中，雾化吸入，由于设备价格昂贵，操作复杂，临床使用受到了限制。中国专利CN1073119C批准授权了美国吸入治疗系统公司申请的“干扰素干粉配方的方法及组合物”发明专利，该发明的干粉配方中采用人血清白蛋白作为干扰素溶液的稳定剂来制备粉雾剂，因而不免有污染和传播疾病的潜在危险。目前，越来越多的生物制品在可能的条件下，尽量不使用人血清白蛋白作为保护剂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种含有干扰素的粉雾剂，经肺部给药，从而为患者提供注射给药外的另一种给药途径。本发明的另一个目的是提供一种治疗支气管及肺部局部疾病的干扰素制剂。

本发明的再一个目的是提供一种不含抛射剂的可吸入给药的干扰素经肺给药制剂，从而避免使用氟氯烷烃类对环境造成的破坏和抛射剂对口腔及呼吸道产生的刺激性。

本发明的另一个目的是提供一种不含吸收促进剂的干扰素粉雾剂。这就防止了因长期使用吸收促进剂对肺部产生损害。

本发明还有一个目的是提供一种不含人血清白蛋白(HSA)的干扰素吸入制剂。人血清白蛋白的来源如果控制不好容易造成血液病的传播，因而从根本上杜绝了此类疾病的发生。

本发明还有一个目的就是公开了用于肺部给药的干扰素粉雾剂的制备方法，经大量的实验研究，制备出了粒径适中、密度小、雾化性能好，而且不易吸湿的干扰素粉雾剂。

众所周知，良好的粉体学性质对干粉吸入剂的成败和质量保证具有重要意义，其中最为重要的是颗粒的表面形态、粉末的粒径及粒径分布、流动性、堆密度、敲密度、雾化性能、吸湿性和荷电性。粒径对沉积部位有着直接影响：小于0.5μm时，随气流呼出；1-5μm时，沉积于肺泡；4-7μm时，沉积于气道；大于7μm时，沉积于口咽部。因此粒径最好是控制在2-4μm的范围内，不应超过0.5-6μm的范围。颗粒表面形态和粉末密度与细粉在气体中飞行时的顺应性直接相关，密度越小，越容易随着气体飞行流动。粉末的流动性对于药物含量的均一性和药粉的填装也产生影响。粉雾剂由于药粉粒径小、比表面积大，极易吸潮而聚集成块，用药时不易分散从而影响到疗效。

根据粉雾剂的以上特点，需要对药粉的粒径、密度、雾化性能和吸湿性加以重点考虑。

本发明要解决的技术难题主要有以下几个方面：(1).在不加入人血清白蛋白作为保护剂的情况下，保持干扰素在与一定辅料制成固态粉末过程中的稳定性。(2).选择与干扰素配伍的载体，使得到的干扰素粉末粒径适中、密度小、雾化性能好，而且不易吸湿。具有较好的粉体学性质。

为解决上述任务，本发明采用的技术方案是：一种用于肺部给药的干扰素粉雾剂，其特征在于由下列物质按重量百分比组成：

干扰素        0.0002％-0.8％；

稀释剂        70％-97.9％；

活性保护剂    0.01％-5％；

分散性助剂    0％-25％；

保持pH值4-9范围的缓冲盐体系。

其中干扰素粉雾剂组成中不含人血白蛋白和吸收促进剂。所述干扰素包括重组人干扰素α-2a、重组人干扰素α-2b、重组干扰素β及重组干扰素γ。主要是指重组人干扰素α-2a、重组人干扰素α-2b。

缓冲剂如枸橼酸-枸橼酸钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、枸橼酸-磷酸氢二钠、抗坏血酸-抗坏血酸钠等缓冲体系，优选的是含枸橼酸或枸橼酸钠的pH调节剂。缓冲体系的适当选择对于缓解肺部的刺激性和提高干扰素的稳定性都有不可忽视的作用。

赖氨酸、2-羟丙基-β-环糊精、大豆卵磷脂、羟丙基甲基纤维素都是很有用的活性保护剂，它们可以使IFN在干燥过程中保持较高的活性。

有用的稀释剂主要指的是一些碳水化合物，如D-甘露糖、山梨糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、糊精、甘露醇、木糖醇等。优选的碳水化合物是乳糖和甘露醇。适宜的稀释剂还包括氨基酸，如甘氨酸、亮氨酸、苏氨酸等。他们主要是起到一种稀释剂的作用，作为干扰素的赋型剂。另外，他们对干扰素粉雾剂的粉体学也产生影响。

适宜的分散性助剂包括酪氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸等，优选的是亮氨酸。分散性助剂能提高粉末的分散性和随气体流动的顺应性，从而增加粉末的可吸入部分，使之有更多的量沉积于肺部。

一种用于肺部给药的干扰素粉雾剂的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

按一定配比将干扰素、缓冲盐、稀释剂、活性保护剂、分散性助剂混合，配制成固含量为0.03-9％的干扰素液相组合物。然后如下操作：

将液相组合物通过适当方法挥去水分使成干燥固体，然后气流粉碎成平均粒径小于10μm大小适宜的颗粒；或将液相组合物通过适当方法挥去水分使成干燥固体，然后用球磨机研磨成平均粒径小于10μm大小适宜的颗粒；或将液相组合物采用喷雾干燥，制得平均粒径小于10μm的颗粒。

本发明中所谓“液相组合物”或“液相组成“指的是一种以水为主要分散介质的、比较均匀的、能自由流动的体系，可以是溶液、混悬液、乳状液，也可以指别的以水为主要介质的胶体分散体系。所谓挥去水分的“适当方法”包括喷雾干燥、冷冻干燥、旋转蒸发、真空干燥等，也可以是自然放干。所谓“干“是指含水量按重量计低于10％，通常为5％以下，更好的是3％以下，最好是低于1.5％。

这种高效价的干扰素粉雾剂经历了液相组成的干燥过程。在干燥过程中，干扰素分散于一种缓冲盐液相体系，干扰素的浓度按重量计浓度为0.0002％-0.8％，较好为0.0002％-0.2％，优选为0.002％-0.1％的溶液。

该液相组成是一种缓冲体系，其pH值控制在4-9之间，优选的是5-8，最好pH值在6-7.3之间。所加入缓冲盐体系的量，以调节液相组成pH的范围来确定。该液相组成还含有一种能保持干扰素在干燥过程中稳定的活性保护剂，如赖氨酸、2-羟丙基-β-环糊精、大豆卵磷脂、羟丙基甲基纤维素等，其浓度按重量计为0.01％-5％，较好为0.01％-1％，优选的是0.03％-0.3％。

该液相组成还含有一种稀释剂，如D-甘露糖、山梨糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖、糊精、甘露醇、木糖醇等。优选的碳水化合物是乳糖和甘露醇。适宜的稀释剂还包括氨基酸，如甘氨酸、亮氨酸、苏氨酸等。其浓度按重量计为70％-97.9％。

该液相组成中，根据需要可以加入或不加入分散性助剂，如酪氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸等，优选的是亮氨酸，其浓度为0％-25％，优选的是0％-15％。

该液相组成中还可含有其他物质，如存在于干扰素原料中的盐或防腐剂等。将上述固含量为0.03％-9％的液相组成制成干燥物。

采用喷雾干燥时对喷雾方法和雾化器的喷嘴没有特殊的限制。建议使用能够产生微粒直径适于鼻腔、口咽部或肺部给药的干燥粉末的喷嘴。

对用于使溶液雾化的气体和干燥喷雾物质的气体都没有特殊的限制，建议使用空气或别的惰性气体如氮气。用于干燥喷雾物质的气体，其入口温度或出口温度应控制到不使干扰素失活的温度。进口气体的温度范围约为60℃-180℃，优选的是约70℃-140℃。出口气体的温度约为30℃-140℃，优选的是30℃-80℃。鉴于干扰素在55℃开始灭活，约70℃时几乎全部灭活，用喷雾干燥法制得的活性保留在70％以上、甚至90％以上是非常令人惊奇的。

干燥粉末在吸入器中应能易于分散，随后可供病人吸入到达肺部，也就是说该粉是能被吸入的。因而微粒的粒径应小于10微米，较好的是小于5微米。通常粒径分布约为0.1-5微米，最好是约为2-4微米。

干燥粉末的敲击密度通常为1.5g/cm3以下，较好的是0.8g/cm3以下，更好的是0.6g/cm3以下。敲击密度越小，则大粒径的微粒越容易进入肺泡部位。比如敲击密度小于0.3g/cm3时，粒径为9微米以上的粉末也有可能进入肺泡。

干燥粉末的含水量应能使微粒在吸入过程中易于分散形成粉雾。水分通常为8％以下，较好为5％以下，进一步还可以达到3％以下，最好是低于1.5％。

微粒的表面可以是光滑的，也可以是粗糙的；微粒的形状可以是球状，也可以是长方体或别的形状。但是大多数喷雾干燥粉末的微粒都是表面光滑的球状。

通过将溶液中的填充剂减少到最少用量来制备高效价的干扰素粉末，以减少高剂量给药的用药次数是可以达到的。

本发明的干扰素可与适于吸入给药或肺部给药的药物载体或赋形剂结合。这些载体可在喷雾干燥前与干扰素结合。即将载体加到原料溶液中，形成均一的溶液、乳剂或混悬液，经喷雾干燥形成均匀粉末。此时的载体一方面起到赋形剂或稀释剂的作用；另一方面也可用于提高干扰素粉雾剂的稳定性；还可用于增加粉末的分散性；还可以用于提高粉末的抗湿性。

另一种也可以是将干扰素与载体分别制成干粉形式后再混合。载体微粒的大小是可以选择的，以用于增加干扰素粉末的操作性能。比如可以将干扰素喷干粉与粒径为0.5-10微米的载体混合，用来提高粉末的流动性或分散性。这种粒径与干扰素喷干粉末大小相似，乳糖、甘露醇、亮氨酸、甚至微粉硅胶、滑石粉和硬脂酸镁都是可以选用的，优选的载体是乳糖和亮氨酸。但是更常用的载体微粒大小为25-200微米，优选的是25-100微米，此时载体主要是用来稀释药物或者加快制造和粉末填充的过程。这种粒径比干扰素喷干粉大得多的载体物质，优选的是大小为上述范围的结晶乳糖。

干扰素与一定的载体干燥形成的粉末，可以单独装填于吸入装置、也可以与别的载体粉末混合后再一起装填于吸入装置。这种吸入装置的剂量容器可以是明胶胶囊或羟丙基甲基纤维素胶囊或塑料胶囊，也可以使用铝箔塑料薄片制成的囊泡。这种吸入器既可以是单剂量的也可以是多剂量的。

本发明的粉雾剂具有如下的优点：1、以呼吸触发给药装置，不需要患者将装置的触发与吸气协调起来，方便了用药，特别适合儿童及老人患者；2、不含推进剂，因而不涉及环境危害问题；3、粉雾剂比液体喷雾剂具有较高的化学稳定性和微生物稳定性；4、不含防腐剂及酒精等溶剂，对病变粘膜无刺激性；5、给药剂量大，尤其适用于多肽和蛋白类药物的给药。

附图说明：

图1卵磷脂为保护剂时喷雾干燥得的电镜扫描图；

图22-羟丙基-β-环糊精(HPCD)为保护剂时喷雾干燥得的电镜扫描图；

图3赖氨酸为保护剂时喷雾干燥得的电镜扫描图；

图4羟丙基甲基纤维素为保护剂时喷雾干燥得的电镜扫描图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的描述，但这些实施例并非对本发明的限制。

实施例1-5主要是说明几种稳定剂对干扰素在喷雾干燥中的活性保护作用；实施例6-8主要阐述填充剂以及分散性助剂对喷雾干燥粉末吸湿性的影响；实施例9-11主要例析了干扰素粉雾剂的沉积性能；实施例12-13主要介绍了不同于喷雾干燥的干燥方法和粉碎方法。

实施例1

本实施例阐述一种加入卵磷脂作为活性保护剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、大豆卵磷脂1.34mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升乳状液含干扰素α-2b约4万国际单位，测得溶液pH值为7.05。所得乳状液用Buchi minispray dryer B-191进行喷雾干燥(下同，不再提及)，喷雾条件如下：

溶液温度         6℃-8℃

进口温度         110℃

出口温度         70℃-80℃

喷嘴空气流速     500l/h

喷液速度         1.8ml/min

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

喷雾干燥粉末形态：见图1。由图可见，微粒呈球形，粒径不太均匀，从0.6微米到16微米不等；粒子表面不光滑，有许多凹陷的小坑；颗粒中空。

用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为108％。表明大豆卵磷脂对干扰素具有很好的稳定作用。

实施例2

本实施例阐述一种加入HPCD作为活性保护剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.076mg/ml、枸橼酸钠1.8mg/ml、磷酸氢二钠0.76mg/ml、HPCD 0.67mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干扰素α-2a约20万国际单位，测得溶液pH值为6.92。

喷雾条件如下：

溶液温度        4℃-6℃

进口温度        110℃

出口温度        60℃-70℃

喷嘴氮气流速    570l/h

喷液速度        2.1ml/min

喷枪冷凝系统    开

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

喷雾干燥粉末形态：见图2。由图可见，微粒呈球形，粒径不太均匀，从0.4微米到10微米不等；粒子表面比较光滑，仅有不明显的凹陷；颗粒也是中空的。

用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为128％。表明HPCD对干扰素具有很好的稳定作用。

实施例3

本实施例阐述一种以赖氨酸作为稳定剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、赖氨酸0.67mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升乳状液含干扰素α-2a约4万国际单位，测得溶液pH值为6.81。

喷雾条件如下：

溶液温度         7℃-9℃

进口温度         110℃

出口温度         60℃-70℃

喷嘴空气流速     500l/h

喷液速度         1.8ml/min

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

喷雾干燥粉末形态：见图3。由图可见，微粒呈球形，粒径比较均匀，从0.8微米到12微米不等；粒子表面比较光滑，仅有不明显的凹陷；颗粒也是中空的。

用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为120％。表明赖氨酸对干扰素具有很好的稳定作用。

实施例4

本实施例阐述一种以羟丙基甲基纤维素为活性保护剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、羟丙基甲基纤维素1.33mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干扰素α-2b约4万国际单位。

喷雾条件如下：

溶液温度        6℃-8℃

进口温度        110℃

出口温度        70℃-80℃

喷嘴空气流速    500l/h

喷液速度        1.8ml/min

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为116％。表明羟丙基甲基纤维素对干扰素具有很好的稳定作用。

喷雾干燥粉末形态：见图4。由图可见，微粒形状很不规则，粒径比较均匀，从0.3微米到4微米不等；粒子表面有许多深度凹坑和塌陷。

实施例5

本实施例阐述一种以十二烷基硫酸钠为稳定剂制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.38mg/ml、磷酸氢二钠3.8mg/ml、十二烷基硫酸钠0.13mg/ml、乳糖66.7mg/ml、每毫升溶液含干扰素α-2b约8万国际单位。

喷雾条件如下：

溶液温度       6℃-8℃

进口温度       110℃

出口温度       70℃-80℃

喷嘴空气流速   500l/h

喷液速度       1.8ml/min

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

用细胞病变抑制法测定干扰素的活性。采用Hep-2/VSV系统检测干扰素的生物学活性，由标准品计算出样品的效价。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为95％。表明十二烷基硫酸钠对干扰素具有很好的稳定作用。实施例1-5所述的喷雾干燥粉末都具有较强的吸湿性，这大大限制了粉雾剂的应用。因而考虑用另一种填充剂甘露醇替代乳糖，对比二者的吸湿性能。

实施例6

本实施例主要阐述以乳糖为填充剂时喷雾干燥粉末的吸湿性

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.09mg/ml、枸橼酸钠1.8mg/ml、乳糖14mg/ml。每毫升乳状液含干扰素α-2α约10万国际单位。

喷雾条件如下：

溶液温度       6℃-8℃

进口温度       110℃

出口温度       70℃-80℃

喷嘴空气流速   800l/h

喷液速度       2.4ml/min

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

粒径及形态观察：用普通光学显微镜对喷雾干燥粉末的粒径和形态进行观察。具体操作是取约1毫克粉末，均匀分散于载玻片上，使微粒之间少有重叠或接触。放大倍数为目镜10倍，物镜100倍。结果表明微粒是大小基本均匀的卵圆形，平均粒径约1.1微米。

吸湿性试验：精密称取约0.3克样品，平铺于一敞口玻璃瓶底部，于相对湿度75％条件下放置，并于24小时、72小时后取出观察粉末外观，精密称重，算出吸湿百分比。结果为24小时后吸湿量为6.1％，72小时后为11.8％。样品性状：结块，摇之不散，重重敲击也不能从瓶底掉下。

堆密度与敲击密度的测定：堆密度和敲击密度的测定：称取大约3克的样品，小心倒入10毫升量筒中，使无明显孔隙，读取体积，用质量除以体积就得到堆密度；再用粉体物性测定仪测定敲击密度，具体地说从振动幅度为3厘米、使之敲击约1000下，待体积无明显减少时读取敲击体积，用质量除以敲击体积就得到敲击密度。测得堆密度为0.26mg/cm3、敲击密度为0.49mg/ml。

实施例7

本实施例主要阐述以甘露醇为填充剂时喷雾干燥粉末的吸湿性

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.09mg/ml、枸橼酸钠1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml。每毫升溶液含干扰素α-2b约10万国际单位。

喷雾条件如下：

溶液温度        6℃-8℃

进口温度        100℃

出口温度        65℃-75℃

喷嘴空气流速    800l/h

喷液速度        4.5ml/min

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

粒径及形态观察：方法同实施例6，结果表明得到的微粒比实施例6的粉末大小更均匀，而且形态更加圆整，平均粒径约1.2微米。

吸湿性试验：方法同实施例6，结果为24小时后吸湿量为2.8％，72小时后为1.7％。样品性状：结块，摇之不散，轻轻磕之成块状掉下，捻之成粉状。

堆密度与敲击密度的测定：方法同实施例6，测得堆密度为0.21mg/cm3、敲击密度为0.40mg/ml。

取适当将实施例6和实施例7的样品进行差热分析，发现乳糖在喷雾干燥后没有明显的吸热峰，表明干燥乳糖基本上以无定形存在；而甘露醇在喷雾干燥前后的吸热峰变化不大，表明喷雾干燥的甘露醇基本上仍然以结晶为主。这就有可能解释了实施例7的样品比实施例6的样品具有更好抗湿性的原因。

实施例8

本实施例主要阐述以甘露醇为填充剂、以亮氨酸为分散性助剂的喷雾干燥粉末的吸湿性

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.09mg/ml、枸橼酸钠1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml、L-亮氨酸1.01mg/ml。每毫升乳状液含干扰素α-2b约80万国际单位。

喷雾条件如下：

溶液温度       6℃-8℃

进口温度       100℃

出口温度       65℃-75℃

喷嘴空气流速   800l/h

喷液速度       4.5ml/min

一旦溶液喷完，降低进口温度，使出口温度维持在60℃-70℃左右约10分钟，对干扰素喷雾干燥粉末进行二次干燥，进一步降低含水量。

粒径及形态观察：方法同实施例6，结果表明得到的微粒大小均匀，而且形态圆整，平均粒径约1.1微米。

吸湿性试验：方法同实施例6，结果为24小时后吸湿量为2.6％，72小时后为1.4％。样品性状：结块，摇之不散，但轻轻磕之即成松散的粉末，比不加分散性助剂时更易分散。

堆密度与敲击密度的测定：方法同实施例7，测得堆密度为0.22mg/cm3、敲击密度为0.42mg/ml。喷雾干燥粉末在囊壳中的粘连：方法同实施例6，求得粉末残留于胶囊的量为3.9％。

实施例9

本实施例阐述一种以赖氨酸为保护剂，制备高活性的、并具有较高的体外沉积率的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.09mg/ml、枸橼酸钠1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml、L-亮氨酸1.01mg/ml、赖氨酸0.36mg/ml，每毫升溶液含干扰素α-2a约100万国际单位。

喷雾条件如下：

溶液温度       6℃-8℃

进口温度       100℃

出口温度       65℃-75℃

喷嘴空气流速   800l/h

喷液速度       4.5ml/min

效价测定：鉴于细胞病变抑制法测定干扰素的活性影响因素较多，测定结果偏差加大，而且检测周期长，因而利用夹心法ELISA测定干扰素的效价。选用两种单克隆抗体，一种作为包被抗体，另一种单克隆抗体标记辣根过氧化物酶作为结合物，催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线，再通过标准曲线求出待检样品的含量或者效价。该法周期短，重复性好，适于大批量样品的检测。喷雾干燥后，干扰素的活性与喷雾干燥前比为93.6％，表明在喷雾干燥过程中干扰素的活性是能保持的。

粒径及形态观察：方法同实施例6，结果表明微粒是大小基本均匀的球形，聚集并不严重，平均粒径1.4微米。

堆密度和敲击密度的测定：方法同实施例6，结果堆密度为0.341g/cm3；敲击密度为0.720g/cm3。

沉积实验：将喷雾干燥粉末直接装入明胶胶囊(粉末)，也可以与25-100微米的乳糖载体适量混合后再装入明胶胶囊(载体-明胶)或者羟丙基甲基纤维素胶囊(载体-羟丙基甲基纤维素)，按中国药典2000年版二部附录X H进行沉积测定。用空白接受液清洗一级沉积瓶、模拟喉部以及模拟颈部的内表面，合并接受液，定容；用空白接受液清洗导入下部锥形瓶的导管的内、外壁，洗液与下层接受液合并，定容；打开试验用过的胶囊，用滴管吸取接受液冲洗胶囊囊壳的内外壁，定容。按照上述效价测定法进行测定，沉积结果见表1。

表1.赖氨酸为保护剂时沉积结果：

	粉末	载体-明胶	载体-羟丙基甲基纤维素
				一级沉积	22.2％	44.6％	44.2％
二级沉积	64.7％	46.3％	52.5％
				囊壳残留	13.1％	9.1％	3.2％

加速试验：将喷雾干燥粉末与25-100微米的乳糖载体适量混合后再装入明胶胶囊，置40℃、75％ RH环境中，48小时后取出，观察粉末性状的变化，结果粉末结成一块，但是轻轻挤压则散。按沉积实验操作测定分散性，结果一级沉积为63.0％，二级沉积为29.6％，囊壳残留为7.3％。

实施例10

本实施例阐述一种以HPCD为保护剂，制备高活性的、并具有较高的体外沉积率的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.09mg/ml、枸橼酸钠1.8mg/ml、甘露醇14mg/ml、L-亮氨酸1.01mg/ml、HPCD 0.4mg/ml，每毫升溶液含干扰素α-2b约100万国际单位。

按实施例9进行喷雾干燥、效价测定、粒径及形态观察、堆密度和敲击密度的测定、沉积实验和加速试验。干扰素的活性与喷雾干燥前比为98.0％，表明HPCD也是一种高效的稳定剂。微粒形态多为圆形，大小比较均一，聚集不是太严重。沉积结果见表2。

表2.HPCD为保护剂时沉积结果：

	粉末	载体-明胶	载体-羟丙基甲基纤维素
				一级沉积	36.8％	50.7％	44.2％
二级沉积	51.0％	40.5％	54.0％
				囊壳残留	12.1％	8.7％	3.8％

加速试验结果，粉末性状由可流动的粉末变为结成一块，但是轻轻挤压则散。按沉积实验测定分散性，结果一级沉积为70.5％，二级沉积为23.6％，囊壳残留为5.8％。

实施例11

本实施例阐述一种以大豆卵磷脂为稳定剂，制备高活性的干扰素喷雾干燥粉末方法。

用作喷雾干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.09mg/ml、枸橼酸钠1.8mg/ml、乳糖14mg/ml。每毫升乳状液含干扰素α-2α约10万国际单位。

按实施例9进行喷雾干燥、效价测定、粒径及形态观察。干扰素的活性与喷雾干燥前比为98.7％，表明在喷雾干燥过程中干扰素的活性几乎没有受到破坏。形态多为椭圆形，少数极不规则，粒径大小相差较大，聚集较为严重。平均粒径为1.1微米

将喷雾干燥粉末与25-100微米的乳糖载体适量混合后再装入明胶胶囊，

按按实施例9进行沉积实验，结果见表3。

表3.大豆卵磷脂为保护剂时的沉积结果：

	装入胶囊后的沉积
		一级沉积	67.1％
二级沉积	14.4％
		囊壳残留	18.5％

由沉积结果可知，喷雾干燥粉末的粒径及粒径分布、微粒的形态以及微粒间的聚集性，都极大地影响着粉末的沉积性能。

实施例12

本实施例阐述一种以旋转蒸发干燥、以气流粉碎法进行粉碎，用以制备高活性的干扰素粉末方法。

用作旋转蒸发干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.38mg/ml、磷酸二氢钠2.59mg/ml、乳糖142mg/ml、大豆卵磷脂0.043mg/ml，每毫升溶液含干扰素α-2b约31万国际单位。

将上述液相体系在40℃、真空度进行减压旋转蒸发，除去水分，得到干燥固体，然后气流粉碎。

干扰素的活性保留为处理前的108.7％，表明在旋转蒸发或气流粉碎过程中干扰素的活性几乎没有受到破坏。形态基本为圆形，少数极不规则，粒径大小比较均匀，聚集较为严重。平均粒径为5.1微米。

将气流粉碎后的干燥粉末与25-100微米的乳糖载体适量混合后再装入明胶胶囊，按实施例9进行沉积实验，结果见表4。

表4.气流粉碎粉末的沉积结果：

	装入胶囊后的沉积
		一级沉积	46.1％
二级沉积	25.2％
		囊壳残留	28.7％

实施例13

本实施例阐述一种以旋转蒸发法干燥、以球磨机进行粉碎，用以制备较高活性的干扰素粉末方法。

用作旋转蒸发干燥的液相，其组成是：枸橼酸0.38mg/ml、磷酸二氢钠2.59mg/ml、乳糖142mg/ml、HPCD 0.043mg/ml，每毫升溶液含干扰素α-2b约40万国际单位。

将上述液相体系在40℃、真空度进行减压旋转蒸发，除去水分，得到干燥固体，然后用球磨机粉碎。

干扰素的活性保留为处理前的78.9％，表明在旋转蒸发或球磨粉碎过程中干扰素的活性几乎没有受到破坏。形态基本不太规则，粒径大小比较悬殊，聚集较为严重。平均粒径为10.1微米。

将粉碎后的干燥粉末与25-100微米的乳糖载体适量混合后再装入明胶胶囊，按实施例9进行沉积实验，结果见表5。

表5.气流粉碎粉末的沉积结果

	装入胶囊后的沉积
		一级沉积	76.1％
二级沉积	15.2％
		囊壳残留	8.7％

尽管本发明结合它的专门的实施例已做了详细的描述，但是很明显对本技术领域的熟练人来说仍能做出各种各样的变化和改进，都不会偏离本发明的精神实质和保护范围。

Claims (9)

1、一种用于肺部给药的干扰素粉雾剂，其特征在于由下列物质按重量百分比组成：

干扰素          0.0002％-0.8％；

稀释剂          70％-97.9％；

活性保护剂      0.01％-5％；

分散性助剂      0％-25％；

保持pH值4-9范围的缓冲盐体系。

2、如权利要求1所述干扰素粉雾剂，其特征在于干扰素粉雾剂的组成中不含人血白蛋白和吸收促进剂。

3、如权利要求1所述干扰素粉雾剂，其中，所述干扰素是重组人干扰素α-2a、重组人干扰素α-2b、重组干扰素β及重组干扰素γ。

4、如权利要求3所述干扰素粉雾剂，其中，干扰素是指重组人干扰素α-2a、重组人干扰素α-2b。

5、如权利要求1所述干扰素粉雾剂，其中，活性保护剂是赖氨酸、2-羟丙基-β-环糊精、大豆卵磷脂。

6、如权利要求1所述干扰素粉雾剂，其中，稀释剂是甘露醇、木糖醇、乳糖、海藻糖、棉籽糖、亮氨酸、苏氨酸、甘氨酸。

7、如权利要求1所述干扰素粉雾剂，其中，缓冲盐体系为枸橼酸-枸橼酸钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、枸橼酸-磷酸氢二钠、磷酸二氢钠-枸橼酸钠、抗坏血酸-抗坏血酸钠。

8、如权利要求1所述干扰素粉雾剂，其中，分散性助剂包括酪氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸。

9、一种用于肺部给药的干扰素粉雾剂的制备方法，其特征在于，按一定配比将干扰素、缓冲盐、稀释剂、活性保护剂、分散性助剂混合，配制成固含量为0.03-9％的干扰素液相组合物。然后如下操作：

(1)、将液相组合物通过适当方法挥去水分使成干燥固体，然后气流粉碎成平均粒径小于10μm大小适宜的颗粒；或

(2)、将液相组合物通过适当方法挥去水分使成干燥固体，然后用球磨机研磨成平均粒径小于10μm大小适宜的颗粒；或

(3)、将液相组合物采用喷雾干燥，制得平均粒径小于10μm的颗粒。

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