CN1660124A - 龙胆苦苷在制备抑制乙型肝炎病毒药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

有效成分龙胆苦苷在制备抑制乙型肝炎病毒药物中的应用。有效成分龙胆苦苷是从我国常用中药秦艽中提取分离得到的一种化合物,有效成分龙胆苦苷在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内和胃肠外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合,该药用制剂可以是固体形式如片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂,也可以是液体形式如注射剂、乳剂等。龙胆苦苷制备成注射剂经药效试验表明,鸭乙型肝炎病毒感染鸭在感染后第7天,肌肉注射龙胆苦苷药物治疗,200 mg/kg组一天2次、给药10天对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著,统计学处理结果有非常显著和显著性差异,抑制作用(P<0.01-0.05),三批实验的抑制效果可重复。

Description

龙胆苦苷在制备抑制乙型肝炎病毒药物中的应用
技术领域
本发明涉及龙胆苦苷在机体中抑制乙型肝炎病毒的新用途。
背景技术
病毒性疾病的治疗一直是困绕医学界的难题。人类虽然在十九世纪战胜了因细菌引起的传染病,但因病毒感染引起的疾病如爱滋病、非典型肺炎、流行性感冒、乙型肝炎、脑膜炎、心肌炎、带状疱疹等,至今没有良方,一直处在探索之中。
较为突出的是乙型肝炎,我国是世界上第一肝炎大国,病毒携带者约为2亿人,发病者约1.2亿,住院治疗病人约为4千万人,引起医学界的广泛关注。
对乙型肝炎的治疗分为抑制病毒,保肝利胆和降酶三个方面。抑制病毒的西药主要有拉米夫定,保肝利胆的西药主要有贺普丁,降酶的西药主要有联苯双酯。
对乙型肝炎的治疗中药采用综合治疗,主要有龙胆泻肝丸、茵栀黄注射液、茵陈蒿汤等药物。
目前对乙型肝炎的治疗,西药虽然具有一定的效果,但毒副作用大,复发率高等缺点。中药治疗,效果缓慢,服药一个月甚至几个月后才能感到是否有效,服药周期很长,有的患者服药长达几年,长期服药对胃的刺激很大,许多患者饮食下降,身体消瘦,疗效难以肯定。当前医药界以及临床上迫切需要解决的技术问题是提供一种治疗乙型肝炎无毒副作用、疗效显著的药物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述治疗乙型肝炎药物的缺点,为用龙胆苦苷制备的药物提供一种新用途。
解决上述技术问题所采用的技术方案是:有效成分龙胆苦苷在制备抑制乙型肝炎病毒药物中的应用。
龙胆苦苷是从我国常用中药秦艽中提取分离得到的一种化合物,龙胆苦苷的制备工艺如下:
取秦艽,用5~20倍量水煎煮3次,每次15分钟,合并煎煮液,离心取上清夜;水煎液上D101大孔树脂柱,每克树脂上0.8mL药液,大孔树脂用2~6倍量的水洗脱,弃取水洗液,大孔树脂再用3~10倍30%的乙醇洗脱,回收洗脱液中的乙醇,减压抽干,得残留物,将残留物水溶解后再按上述方法上大孔树脂,30%乙醇洗脱,回收洗脱液后的残留物溶于2~5倍量的95%乙醇中,过滤,回收乙醇并抽干,再用95%乙醇溶解,再抽干,最后溶于浓乙醇中,放置,析出结晶,过滤,得龙胆苦苷纯品。
有效成分用龙胆苦苷制备抑制乙型肝炎病毒的药物以常规药用制剂的形式来使用;所述的常规药物用制剂含作为活性成分在制剂中与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内和胃肠外给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合,该药用制剂可以是固体形式如片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂,也可以是液体形式如注射剂、乳剂等。
上述制剂中可含有辅助物质、稳定剂、润湿剂和其它常用的添加剂,如乳糖、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸镁、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、橄榄油、可可脂、乙二醇、抗坏血酸、甘露醇等。
上述的制剂可按照各种制剂常规的制备工艺制成。
药用有效成分龙胆苦苷制备成注射剂经中国医学科学院医药生物技术研究所进行了药效试验,药效试验表明,鸭乙型肝炎病毒感染鸭在感染后第7天,肌肉注射龙胆苦苷药物治疗,200mg/kg组一天2次、给药10天对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著,统计学处理结果有非常显著和显著性差异,抑制作用(P<0.01-0.05),三批实验的抑制效果可重复。100mg/kg组,肌肉注射,一天2次,给药10天,也有一定的治疗效果。50mg/kg组抑制DHBV-DNA作用不明显。阳性药拉米夫定(3TC),50mg/kg,1天2次,给药5、10天(T5、T10)及停药后第3天(P3)与给药前(T0)的OD值比较,配对分析,鸭血清DHBV-DNA水平明显下降,有非常显著性差异(P<0.01-0.05)。给药后对鸭血清DHBV-DNA抑制率与病毒对照组,成组分析给药第5、10天(T5、T10),有显著性和非常显著性差异(P<0.05-0.01)。
具体实施方式
下面发明人给出了用龙胆苦苷制备抑制乙型肝炎病毒药物的实施例。
实施例1
药用制剂龙胆苦苷制备成片剂,以生产片剂产品1000片为例所用原料和辅料及其重量配比如下:
龙胆苦苷               200g
淀    粉               100g
其制备工艺按制剂学片剂的常规工艺进行,每片重0.3g,每片含龙胆苦苷200mg。
用法用量:口服,每次1片,一日1次,小儿酌减,30天为一个疗程。
实施例2
药用制剂龙胆苦苷制备成胶囊剂,以生产胶囊剂产品1000粒为例所用原料和辅料及其重量配比如下:
龙胆苦苷               200g
淀    粉               100g
其制备工艺按制剂学胶囊剂的常规工艺进行,每粒重0.3g,每粒含龙胆苦苷200mg。
用法用量:口服,每次1粒,一日1次,小儿酌减。30天为一个疗程。
实施例3
药用制剂龙胆苦苷制备成颗粒剂,以生产颗粒剂产品1000g为例所用原料和辅料及其重量配比如下:
龙胆苦苷               200g
蔗    糖               400g
糊    精               400g
制备工艺按制剂学颗粒剂的常规工艺进行,每袋重1g,1g含龙胆苦苷200mg。
用法用量:口服,每次1袋,一日1次,小儿酌减。30天为一个疗程。
实施例4
药用制剂龙胆苦苷制备成糖浆剂,以生产糖浆剂1000mL为例所用原料和辅料及其重量配比如下:
龙胆苦苷               20g
蔗    糖               600g
蒸馏水                 加至1000mL
其制备工艺按制剂学糖浆剂的常规工艺进行,每瓶10mL,1mL含龙胆苦苷20mg。
用法用量:口服,每次1瓶,一日1次,小儿酌减。30天为一个疗程。
实施例5
药用制剂龙胆苦苷制备成注射剂,以生产注射剂产品1000支为例所用原料和辅料及其重量配比如下:
龙胆苦苷               200g
注射用甘露醇           20g
制备工艺按制剂学注射剂的常规工艺进行,每支重0.22g,含龙胆苦苷200mg。
用法用量:静脉滴注,每次1支,溶解在250mL注射用葡萄糖注射液中,一日1次,小儿酌减。30天为一个疗程。
为了验证龙胆苦苷抑制乙型肝炎病毒的有益效果,申请人委托陕西省生物医药重点实验室制备的龙胆苦苷注射剂(试验时用药品商品名称秦龙苦素)委托中国医学科学院生物技术研究所进行了药效试验,各种试验情况如下:
1、实验药物
龙胆苦苷注射剂,为白色粉末,生理盐水配制。批号:0040304。
阳性药物拉米夫为葛兰素威康制药公司,用生理盐水配制。批号:B008923。
2、病毒
鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)强阳性鸭血清,采自上海麻鸭,-70℃保存。
3、实验动物
1日龄北京鸭,购自北京前进种鸭饲养场。
4、实验试剂
32p-dCTP购自北京福瑞生物技术工程公司;缺口翻译药盒购自普洛麦格公司(Promega Co);Sephadex G-50,Ficoll PVP购自瑞典Pharmacia公司;SDS西德Merck公司产品;鱼精DNA、牛血清白蛋白为中国科学院生物物理所产品;硝酸纤维素膜0.45um Amersham公司产品。
5、实验方法
(1)鸭乙型肝炎病毒感染
1日龄北京鸭,经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性鸭血清,每只0.2mL,在感染后7天取血,分离血清,-70℃保存待检。
(2)药物治疗试验
DHBV感染雏鸭7天后随机分组进行药物治疗试验,每组6只,给药组分3个剂量组,分别为50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg组,肌肉注射,1天2次,共注射10天。设病毒对照组(DHBV),以生理盐水代替药物。阳性药用拉米夫定,口服给药50mg/kg,1天2次,共服10天。在感染后第7天即用药前(T0),用药第5天(T5),用药第10天(T10)和停药后第3天(P3),自鸭腿胫静脉取血,分离血清,-70℃保存待检。
(3)检测方法
取上述待检鸭血清,每批同时点膜,测定鸭血清中DHBV-DNA水平的动态。按缺口翻译试剂盒说明方法,用32p标记DHBV-DNA探针,作鸭血清斑点杂交,放射自显影膜片斑点,在酶标检测仪测定OD值(滤片光片为490nm),计算血清DHBV-DNA密度,以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值。
(4)药效计算
a、计算每组鸭不同时间血清DNA OD值的平均值(X±SD),并将每组鸭用药后不同时间(T5、T10)停药后第3天(P3)血清DHBV-DNA水平与同组给药前(T0)OD值比较,采用配对t试验,计算t1、P1值。分析差异的显著性,判断药物对病毒感染的抑制效果。
b、计算每组鸭用药后不同时间(T5、T10)和停药第3天(P3)血清DHBV-DNA的抑制%,并作图,比较各组鸭血清DHBV-DNA抑制率的动态。
c、将给药治疗组不同时间DHBV-DNA抑制率分别与病毒对照组相同时间DHBV-DNA抑制率比较,采用成组t检验,作统计学处理,计算t2、P2值,分析差异的显著性,判断药效。
(5)试验结果
a、1日龄北京鸭感染DHBV后,血清DHBV-DNA动态
DHBV-DNA感染鸭肌肉注射生理盐水后斑点杂交结果见表1。实验感染鸭90只血清DHBV-DNA全部阳性。病毒对照组18只雏鸭感染后第7天血清DHBV-DNA全部阳性,实验全程21天内血清DHBV-DNA水平感染后基本平稳。全程不同时间血清DHBV-DNA有自然波动。
B、阳性药拉米夫定对DHBV感染鸭血清DHBV-DNA的影响
DHBV感染鸭6只口服给阳性药拉米夫定50mg/kg,1天2次,10天,结果见表1、表2。给药第5天、10天(T5、T10)及停药后(P3)与给药前(T0)的OD值比较,配对分析,鸭血清DHBV-DNA水平明显下降,有非常显著性和显著性意义(P<0.01,0.05)。给药后对鸭血清DHBV-DNA抑制率与病毒对照组,成组分析给药第5,10天(T5,T10),有显著性和非常显著性差异(P<0.05,0.01)。
C、龙胆苦苷注射剂在DHBV感染鸭体内对鸭血清DHBV-DNA的影响
实验结果表明:
第一批实验选用3个剂量组,见表1,2,图1。分别为50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg组,在给药前(T0)与给药后第5天(T5)、10天(T10)及停药后第3天(P3),取鸭血,分离血清,检测DHBV-DNA OD值,作自身比较。计算抑制%,并与病毒对照组抑制%作成组对比作统计处理。结果表明:50mg/kg组,在停药后第3天(P3),与给药前比较,配对分析,有非常显著性意义,(P<0.01)。与病毒对照组成组对比作统计处理,在给药后第5、10天及停药后第3天(P3),无统计学意义。100mg/kg组在给药后第10天,检测DHBV-DNA OD值,与给药前比较,配对分析,有显著性意义,(P<0.05)。成组对比,给药后第5天,检测DHBV-DNA OD值,与病毒对照组对比作统计处理,有显著意义,(P<0.05)。200mg/kg组在给药后第5、10天(T5、10),鸭血清DHBV-DNA水平与给药前比较,配对分析,有显著意义,(P<0.05)。与病毒对照组成组对比作统计处理,给药后第5、10天抑制率有非常显著性和显著性意义(P<0.01,0.05)。
第二批实验见表1、2、图2。3个剂量,分别为50mg/k、100mg/k和200mg/k组,在给药前(T0)与给药后第5、10天及停药后第3天(P3),检测DHBV-DNA OD值,作自身比较计算抑制%,并与病毒对照组作成组对比统计处理,病毒对照组,在第10天DHBV-DNA有所下降。50mg/kg组,在给药后第5、10天及停药后第3天(P3),与给药前比较,配对分析,无统计学意义。与病毒对照组成组对比作统计处理,也无统计学意义。100mg/kg组,给药后第5、10天,检测DHBV-DNA OD值,作自身比较,配对分析,有显著性和非常显著性意义,(P<0.05,0.01)。与病毒对照组成组对比作统计处理,给药后第5、10天及停药后第3天(P3),无统计学意义。200mg/kg组给药第10天,与给药前比较,配对分析,有非常显著性差异,(P<0.01)。成组对比作统计处理,给药第10天,有显著性差异,(P<0.05)。
第三批实验见表1、2,图3。3个剂量,分别为50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg组,在给药后第5、10天及停药后第3天(P3)与给药前(T0)比较计算抑制%和配对分析,并与病毒对照组作成组对比统计处理,50mg/kg组,给药第5、10天及停药后第3天与给药前和病毒对照组比较,作用不显著无效。100mg/kg组给药第10天及停药后第3天(P3),与给药前,配对分析,有显著性差异,(P<0.05)。成组对比,给药后第5、10天及停药后第3天(P3),无统计学意义。200mg/kg组,配对分析,给药第10天及停药后第3天(P3),与给药前比较,有非常显著性和显著性意义,(P<0.01,0.05)。成组对比,给药第10天,有非常显著性意义,(P<0.01)。
        表1  龙胆苦苷治疗组与病毒感染对照组鸭血清DHBV-DNA值比较
实验  组别  剂量   鸭数                 鸭血清DHBV-DNA OD490值(X±SD)批次        mg/kg  (只)     T0           T5           T10          P3bid×10
 I  生理盐水        6  0.738±0.06  0.884±0.13   0.802±0.17   0.720±0.11龙胆苦苷50      6  0.801±0.08  0.770±0.08   0.735±0.11   0.664±0.09**100     6  0.655±0.11  0.636±0.08   0.566±0.05*  0.586±0.14200     6  0.733±0.19  0.566±0.05*  0.508±0.03*  0.738±0.08拉米夫定50      6  0.679±0.12  0.503±0.04*  0.492±0.05*  0.669±0.04
II  生理盐水        6  0.961±0.14  0.846±0.12   0.833±0.13*  0.820±0.08龙胆苦苷50      6  0.788±0.18  0.749±0.08   0.697±0.12   0.729±0.10100     6  0.717±0.09  0.614±0.04*  0.577±0.06** 0.658±0.10200     6  0.727±0.06  0.679±0.08   0.530±0.05** 0.718±0.06拉米夫定50      6  0.740±0.07  0.527±0.03** 0.532±0.07** 0.749±0.13
III 生理盐水        6  0.894±0.23  0.869±0.13   0.934±0.16   0.861±0.25龙胆苦苷50      6  0.898±0.10  0.868±0.23   0.903±0.17   0.883±0.21100     6  1.048±0.24  0.889±0.15   0.787±0.13*  0.760±0.13*200     6  1.068±0.13  1.021±0.15   0.583±0.09** 0.886±0.14*拉米夫定50      6  0.912±0.20  0.528±0.10** 0.503±0.05** 0.799±0.14*
统计处理:t1、p1;给药组不同时间(T5、T10、P3)鸭血清DHBV-DNA OD值与感染前(T0)OD值比较(配对t检验)。*p1<0.05,**p1<0.01.
表2龙胆苦苷治疗组与病毒感染对照组鸭血清DHBV-DNA水平抑制率的比较
实验批次    药物             剂量mg/kg            bid×10    鸭数(只)                     抑制率(%)
    T5      T10   P3
  I 病毒对照龙胆苦苷 5010020050     66666   -20.263.152.12*19.77**24.25**     -9.268.1012.3827.72*25.15*   2.4717.279.78-4.45拉米夫定-0.90
  II 病毒对照龙胆苦苷拉米夫定 5010020050     66666   11.161.2113.616.1528.44**     12.935.6418.9926.70*27.31   13.051.516.130.87-1.13
  III 病毒对照龙胆苦苷拉米夫定 5010020050     66666   -1.394.1111.913.5241.06*     -9.01-1.3120.3345.06**43.14**   -0.071.3822.4416.5311.40
统计处理:t2、p2:给药组不同时间(T5、T10、P3)鸭血清DHBV-DNA水平与感染前(T0)比较的抑制%与病毒对照组抑制%比较(成组t检验)。*p2<0.05,**p2<0.01。
(6)结论
龙胆苦苷注射剂在鸭乙型肝炎病毒感染鸭体内进行治疗实验。实验结果表明:鸭乙型肝炎病毒感染鸭在感染后第7天肌肉注射龙胆苦苷注射剂药物治疗,200mg/kg组一天2次10天对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制效果显著,统计学处理结果有非常显著和显著性差异,抑制作用(P<0.01-0.05),三批实验的抑制效果可重复。100mg/kg组,肌肉注射,一天2次10天。也有一定的治疗效果。50mg/kg组抑制DHBV-DNA作用不明显。阳性药拉米夫定(3TC),50mg/kg,1天2次,10天。给药5、10天(T5、T10)及停药后第3天(P3)与给药前(T0)的OD值比较,配对分析,鸭血清DHBV-DNA水平明显下降,有非常显著性和显著性意义(P<0.01,0.05)。给药后对鸭血清DHBV-DNA抑制率与病毒对照组,成组分析给药第5、10天(T5、T10),有显著性和非常显著性差异(P<0.05,0.01)。
含有效成分龙胆苦苷药物的功能:抗乙型肝炎病毒。
含有效成分龙胆苦苷药物主治:乙型肝炎。
含有效成分龙胆苦苷药物的规格:片剂每片重0.3g,每片含龙胆苦苷200mg;颗粒剂每袋重1g,每克含龙胆苦苷200mg;胶囊剂每粒重0.3g,每粒含龙胆苦苷200mg;糖浆剂每瓶10mL,每毫升含龙胆苦苷20mg;注射剂每支重0.22g,每支含龙胆苦苷200mg。
含有效成分龙胆苦苷药物的用法用量:口服药物每日服一次,每次口服片剂1片或胶囊剂1粒或颗粒剂1袋或糖浆剂1支,小儿酌减;注射剂,静脉滴注,每次1支,溶解在250mL注射用葡萄糖注射液中,一日1次,小儿酌减。
含有效成分龙胆苦苷药物的储藏:密封阴凉干燥处储藏。
含有效成分龙胆苦苷药物的有效期:两年。

Claims (1)

1、有效成分龙胆苦苷在制备抑制乙型肝炎病毒药物中的应用。
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