CN1642561A - 含有生物活性物质的组合物及其制备和处理方法 - Google Patents

含有生物活性物质的组合物及其制备和处理方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1642561A
CN1642561A CNA038065045A CN03806504A CN1642561A CN 1642561 A CN1642561 A CN 1642561A CN A038065045 A CNA038065045 A CN A038065045A CN 03806504 A CN03806504 A CN 03806504A CN 1642561 A CN1642561 A CN 1642561A
Authority
CN
China
Prior art keywords
colostrum
biologically active
mixture
active substance
fragments
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA038065045A
Other languages
English (en)
Other versions
CN100571715C (zh
Inventor
格兰特·托马斯·罗林
戈特弗里德·利希蒂
罗伊·迈克尔·罗宾斯-布朗
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Immuron Ltd
Original Assignee
Anadis Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AUPS1278A external-priority patent/AUPS127802A0/en
Priority claimed from AUPS2551A external-priority patent/AUPS255102A0/en
Application filed by Anadis Ltd filed Critical Anadis Ltd
Publication of CN1642561A publication Critical patent/CN1642561A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100571715C publication Critical patent/CN100571715C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/20—Milk; Whey; Colostrum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/46—Ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. skin, bone, milk, cotton fibre, eggshell, oxgall or plant extracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种提高在不利环境中给药的不稳定生物活性物质的存活力的方法，该方法包括形成生物活性物质和哺乳动物初乳的混合物，也包括一种不稳定生物活性物质的药用组合物，该组合物包含生物活性物质和哺乳动物初乳的混合物。

Description

含有生物活性物质的组合物及其制备和处理方法
技术领域
本发明涉及含有生物活性物质的组合物及其使用方法。
背景技术
生物活性物质，可能具有强烈的生理效应，往往对于不利的环境，例如哺乳动物胃的环境、高温环境或高湿度环境，非常敏感。这往往限制了它们的使用，也即意味着，它们不便于口服使用，也不便于存储，也不便于在暖和的生产线上实施。
生物活性物质可以选自由以下物质组成的群组：生长促进剂、抗肿瘤制剂、口服疫苗、吸入剂、活的微生物(例如原生生物，诸如乳酸菌)、肽、多肽、核苷酸、聚核苷酸、核苷、蛋白质、糖蛋白、糖和碳水化合物复合物、抗感染剂、抗菌剂、消毒剂、杀菌剂、抗抑郁剂、心理活性剂、基因改造的生物体和感染性制剂，所述基因改造的生物体和感染性制剂用作其它生物活性物质的载体，例如细菌载体(包括大肠杆菌、沙门氏菌、弧菌、乳酸菌、杆菌、分枝杆菌、志贺氏菌)、病毒载体(包括腺病毒、痘病毒、杆状病毒、疱疹病毒、肠道病毒、副粘病毒和正粘病毒)、植物载体(包括烟草、土豆、香蕉)、酵母载体、免疫球蛋白或亲和纯化免疫球蛋白，包括抗疾病和疾病致病剂(例如，幽门螺旋杆菌、大肠杆菌、杆菌、致病的耶尔森氏菌和过敏原)的抗体和含有上述任何生物活性物质的片断、衍生物和复合物。
对生物活性物质的功能有害的不利环境例如：高酸环境或高碱环境、含有蛋白水解酶的环境、会发生脱水的环境、高湿度的环境、高温环境、高压导致变性的环境例如压片机，和含有DNA酶的环境。
一个特殊的损害生物活性物质功能的不利环境是哺乳动物的胃环境，它含有高酸性条件，高温、高湿度、高浓度的蛋白水解酶和碳水化合物消化酶。
本发明的一个特殊的应用就是保护生物活性制剂，它们的生物功能在哺乳动物的胃环境中会受到损害。
现有技术中已经知道有许多用于在哺乳动物胃环境中保持生物功能的方法。这些方法包括：肠衣包裹、缓冲液保护、福尔马林稳定、添加抑制分泌的药物、将生物活性物质与膳食相结合以及改变奶牛的免疫化学反应以使其将生物活性物质分泌到初乳中。
Feichel OL和Lippold BC(《国际药理学杂志》，2001年3月23日，216(1-2)：165-169)建议使用肠衣包裹，包括甲羟基乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素醋酸琥珀酸酯，以提供包衣来保护哺乳动物胃中活性物质的含量。
Tacket C等(《新英格兰药物杂志》，1986年5月12日，1240-1243)使用碳酸氢钠缓冲液以降低人体胃中的蛋白水解作用。
Paliwal R和London E(《生物化学》，1996年2月20日，35(7)：2374-2379)描述了使用福尔马林处理以稳定白喉类毒素的结构。
Asad M等(《生命科学》，2001年11月21日，70(1)：17-24)分别使用后叶催产素和雷替尼丁来降低哺乳动物胃酸的分泌，以提高胃溃疡治愈率。
McClead和Gregory(《感染与免疫》44：474-478)已经证明：奶牛分泌在初乳中的特定的蛋白质在胃环境中的稳定性比那些通过替代的方式生产的同等级蛋白所预期的更高。Abbot在美国专利5260037中使用了这个保持生物活性功能的原理，他在收获牛初乳之前，先对奶牛进行了免疫处理。免疫处理使得特定的抗体(如直接抗幽门螺旋杆菌)分泌到了牛初乳(这被称为超免疫初乳)中。
国际专利申请PCT/AU94/00562中也指出：在高压环境下，例如压片机，超免疫牛初乳在生物功能方面是稳定的。以下的文献也指导了超免疫牛初乳的使用：
·Mitra等，Acta Paediatrica，84：996-101，1995.Hyper immune cow colostrums reducesdiarrhea due to rotavirus：a double blind，controlled clinical study.
·Nord等，AIDS，4，581-584，1990，Treatment with bovine hyperimmune colostrums ofcryptosporidial diarrhea in AIDS patients.
·Tacket等，New England Journal of Medicine.Ma7 12，1988.Protection by milkimmunoglobulin concentrate against oral challenge with enterotoxigenic E.coli.
·Tacket等，American Journal of Tropical Medical Hygiene.47(3)，276-283.1992.Efficacy of Bovine milk immunoglobulin concentrate in preventing illness after Shigella flexerichallenge.
在上述现有技术中，超免疫初乳是生物活性物质的来源，接下来的操作(如果有)包括除去不需要的组分，如水、脂肪、细胞物质、细菌和乳糖。然而其中没有提及添加初乳或初乳提取物或初乳组分以增强对处于不利环境中的生物活性物质的功能的保护。
与保持哺乳动物胃环境中的生物活性物质功能的方法相关的问题如下：
使用肠衣包裹的方法不适合用于那些在胃中作用的药物的给药。这特别限制了通过口服疫苗和/或使用以被动免疫方式直接针对幽门螺旋杆菌的抗体控制幽门螺旋杆菌感染(导致胃炎的主要原因)。
如果生物活性物质功能的丧失是由于酶(例如，肽酶、淀粉酶)的作用而造成的，则使用缓冲液以降低哺乳动物胃中的蛋白水解作用的方法是不适合的。这些酶往往与蛋白疗法和活体生物疗法中功能的丧失相关。而且，常规的缓冲液如碳酸氢钠的使用是不利的。
如果交联反应会破坏底物的结构和功能，则使用福尔马林处理(或其它的交联处理)来保持处于不利环境下的生物活性功能往往是没有效果的。因为这个原因这种技术很少使用，除非为了保存表面抗原以刺激免疫反应(例如，Petre等，Developmental BiologicalStandards，1996；87：125-134所讨论的白喉毒素)。
使用刺激奶牛向牛初乳中分泌生物活性物质的方法具有许多局限性。
有些生物活性物质由奶牛分泌到初乳中是非常困难，甚至是不可能的。
生物活性物质的量不稳定，而这在质量控制期间是不能接受的。
特定生物活性物质的最大量也是很低的，典型的是初乳中免疫球蛋白小于5％。一个疗程的药片中可接受的最大体积为每片0.5立方厘米(每天2至3片是可接受的)。特定抗体的低浓度严重限制了疗法的选择。
而且，被免疫的用以生产初乳的奶牛也生产供人们食用的牛奶，这给调节和食物安全性的问题带来了困难。
此外，初乳只能每年一次从奶牛产犊中收获，这对于后勤和生产成本造成了困难，特别是对于生物活性组分由奶牛向初乳中分泌的情况。
发明内容
我们惊奇地发现，通过将不稳定的生物活性物质与哺乳动物的初乳或其组分在体外(身体之外)进行混合可以保持生物活性物质的功能。哺乳动物初乳可以是加工形式的哺乳动物初乳。
相应地，本发明公开了一种药用的不稳定生物活性物质的组合物，该组合物包含不稳定生物活性物质和哺乳动物初乳的混合物。
不稳定生物活性物质是一种在其使用环境中功能容易损伤的生物活性物质，特别是在不利的环境下，例如哺乳动物的胃和瘤胃、高温环境或高湿环境。
另一方面，本发明提供了一种使用不稳定生物活性物质(例如在哺乳动物胃或其它不利条件下功能容易损伤的生物活性物质)的方法，包括制备生物活性物质和哺乳动物初乳的混合物的方法，以及在生物活性物质通常不稳定的环境，例如胃环境或其它不利环境中使用该混合物的方法。
优选的，该组合物是口服的。
本发明进一步提供了一种使用不稳定生物活性物质的方法，包括将治疗物质与哺乳动物初乳或其组分进行混合，所述不稳定生物活性物质在哺乳动物胃或其它不利环境中，以及在治疗或预防疾病的可吸收的药物的生产中功能容易受到损伤。
尽管许多工人已经注意到，上述组合物比奶牛分泌到初乳中的物质的预期的稳定性更高，但是，并没有人建议可以将初乳或加工的初乳加入到生物活性物质中，以保护它们在胃或瘤胃或其它不利环境中的功能。
优选的，所述生物活性物质是一种能够使生物体的生理或药理参数发生可测量的变化的物质。
在一个特别优选的实施例中，所述生物活性物质是一种抗生素。相应地，本发明提供了一种抗生素组合物，包括一种抗生素、哺乳动物初乳和选择性的赋型剂。
另一方面，本发明提供了一种原生生物的组合物，包括原生菌如乳酸菌，和哺乳动物初乳。
本发明优选的使用一种生物活性物质，其在37℃条件下，在含有0.32％的猪胃蛋白酶溶液的0.03M的NaCl溶液(使用HCl调节pH至1.2)中培养60分钟后显示，功能至少降低20％。
优选的，哺乳动物初乳是母牛分娩后的头4天内收获的牛初乳；更优选的，是母牛分娩后的头2天内收获的牛初乳；更优选是母牛分娩后的第一天收获的牛初乳，最优选的，是母牛分娩后第一次挤奶所收获牛初乳。
这里所使用的术语“初乳”包括初乳、加工的初乳(例如经过加工部分或全部去除一种或多种脂肪、细胞碎片、乳糖和酪蛋白的初乳)、经干燥的初乳或加工的初乳，比如经过冷冻干燥、喷雾干燥或其它现有技术已知的方法干燥的初乳或加工的初乳。初乳通常取自分娩后五天内的哺乳动物例如奶牛。
哺乳动物初乳优选的是经过脱脂工艺加工的，更优选的，是经过脱脂和脱除细胞碎片工艺加工的，更优选的，是经过脱脂、脱除细胞碎片和脱除盐分、糖类、其它低分子量物质和部分水的工艺加工的。
初乳和/或生物活性物质可以是干燥的形式。组合物可以是在干燥过程之前、之中或之后进行彻底地混合。
优选的，生物活性物质和哺乳动物初乳是相互混合的，且混合物是水相混合物，可以进行干燥，优选的是采用冻干法。
在一个优选的实施例中，生物活性物质和初乳提取物的混合物予以冻干，并且至少一半重量的冻干物为所添加的初乳或加工的初乳。在另一个优选的实施例中，至少四分之三重量的冻干物为初乳或加工的初乳。
优选的，从奶牛身上收集的牛初乳含有至少4％(重量百分比)的总蛋白，更优选的是5％；更优选的是至少8％；更优选的是至少10％。
优选的，从奶牛身上收集的初乳中，IgG占总蛋白的比例至少为10％，更优选的为20％。
优选的，所述生物活性物质选自以下物质组成的群组：生长促进剂、抗肿瘤制剂、口服疫苗、吸入剂、活的微生物(例如原生生物，诸如乳酸菌)、肽、多肽、核苷酸、聚核苷酸、核苷、蛋白质、糖蛋白、糖和碳水化合物复合物、抗感染剂、抗菌剂、消毒剂、杀菌剂、抗抑郁剂、心理活性剂、基因改造的生物体和感染性制剂，所述基因改造的生物体和感染性制剂用作其它生物活性物质的载体，例如细菌载体(包括大肠杆菌、沙门氏菌、弧菌、乳酸菌、杆菌、分枝杆菌、志贺氏菌)、病毒载体(包括腺病毒、痘病毒、杆状病毒、疱疹病毒、肠道病毒、副粘病毒和正粘病毒)、植物载体(包括烟草、土豆、香蕉)、酵母载体、免疫球蛋白或亲和纯化免疫球蛋白，包括抗疾病和疾病致病剂(例如，幽门螺旋杆菌、大肠杆菌、杆菌、致病的耶尔森氏菌和过敏原)的抗体和含有上述任何生物活性物质的片断、衍生物和复合物。
特别优选的，所述生物活性物包括单克隆或多克隆免疫球蛋白，或嵌合单克隆抗体，或人源的单克隆抗体，或具有免疫活性片断的树枝状体，或免疫活性片断例如F(ab)和F(ab)2片断，重组免疫活性片断，或亲和纯化的免疫球蛋白，或它们的免疫活性片断。这些免疫球蛋白或它们的片断可以结合致病生物体，这致病生物体包括幽门杆菌、肠产毒性大肠杆菌、鼠疫杆菌、肠道病毒71。
本发明的组合物中的初乳和生物活性物质的比例取决于活性物质的性质，以及其对胃环境的敏感程度。典型的初乳与活性物质的重量比是大于0.5∶1，更好的是大于2∶1，更好的是大于5∶1。所加入的初乳组分的上限受到治疗物质能够方便地给药的实际限量的限制。
本发明的组合物的给药形式可以是如胶囊、粉末压片的片剂、喷剂、糖浆、液体或其它现有技术已知的形式。组合物可以进一步包括适合于肠胃使用的载体或赋型剂。载体和赋型剂的例子包括：硅土、滑石、二氧化钛、矾土、淀粉、高岭土、粉末状的纤维素、微晶纤维素、支链淀粉N、蔗糖、乳糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、羟基丙基纤维素、甲基纤维素、羟基乙基纤维素、羧甲基纤维素、柠檬酸、碳酸氢钠、硬脂酸镁、虫胶、醋酸纤维素、醋酸十六烷酯、枸橼酸三乙酯、聚乙二醇。
在另一个特定的优选实施例中，生物活性物质包括免疫原性蛋白质、糖蛋白或疫苗组分或表达疫苗组分的生物体。疫苗可以是针对致病生物体，例如幽门螺杆菌、肠产毒性大肠杆菌、鼠疫杆菌。
在一个特别的优选的实施例中，生物活性物质选自以下群组：
(a)抗致病性生物体幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌(ETEC)、细小核糖核酸病毒，特别是肠道病毒、轮状病毒、炭疽和鼠疫杆菌的抗体或其片断；
(b)抗幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌、炭疽、鼠疫杆菌所分泌的毒素的抗体或其片断和抗蓖麻毒的抗体；和
(c)抗幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌、细小核糖核酸病毒，特别是肠道病毒、轮状病毒、炭疽和鼠疫杆菌的口服疫苗和吸入疫苗。
在一个特定的优选实施例中，本发明提供了一种治疗或预防病人的胃肠疾病的方法，包括对病人使用一种组合物，该组合物包括(a)直接作用于选自幽门螺杆菌和大肠杆菌的致病微生物的疫苗和(b)哺乳动物初乳。通常使用足够量的初乳以提高疫苗在胃环境中的活性。
在另一个特定的优选实施例中，本发明提供了一种治疗或预防病人的胃溃疡或幽门螺杆菌感染的方法，包括对病人使用一种组合物，该组合物包括一种直接作用于幽门螺杆菌的结合蛋白并进一步包括哺乳动物初乳。
在一个优选实施例中，免疫球蛋白或其片断源于鸡蛋，优选的是以灭活的对抗病原的疫苗免疫的母鸡的鸡蛋。
本发明对于在胃中起作用的生物活性药物的给药特别有用。例如对于抗幽门螺旋杆菌感染的药物。然而，当置于模拟胃液或其它不利环境中时，即使是吸入喷剂形式的用于控制呼吸道病原体的生物活性物质，也会丧失活性。初乳或加工初乳可以保护它们以免功能丧失，当生物活性物质以吸入喷剂给药时，这种保护效果预期是有利的。
本发明对于保护生物活性物质防止酶作用引起的蛋白水解和低pH条件引起的蛋白水解是有用的。
在过去的十年中，原生生物领域发展迅速。原生生物包括有益菌，它们可以彻底驱除胃肠道中的有害菌。有益菌的消化不良抑制了乳酸菌的存在。并且在澳大利亚，双歧杆菌是重要的用于市售原生生物的细菌。这些细菌生产的乳酸抑制了在酸性条件下不能迅速繁殖有害菌。乳酸菌也可以用来生产特定的抗生素。例如嗜酸乳酸菌生产嗜酸菌素，保加利亚乳酸菌生产保加利亚菌素。双歧杆菌也可以用作原生生物体。据报道，原生生物能够帮助消化，协助肠的清洁，促进肠的经常性运动，破坏霉菌、病毒和寄生虫，并平衡肠道的pH。
原生生物用于治疗和预防由于胃肠道中酸的积累和内毒素的产生而引发酸肠综合症也是有效的。
口服原生生物将导致严重的活性丧失，因为原生生物要经历胃中苛刻的条件。我们发现，如果按照本发明的方法服用，原生生物的活性能够保持在更高的水平。
原生生物可以含有赋型剂和佐剂，可以是片剂、粉末、胶囊或液体形式。本发明进一步提供了一种治疗和预防胃肠功能紊乱的方法，包括使用一种由生物活性物质如乳酸菌和哺乳动物初乳组成的组合物。
细菌的剂量依赖于病人的情况和功能紊乱的性质，但是，典型的是每天最少105CFU乳酸菌。
本发明对于保持非交联生物活性物质的功能是有效的。
本发明提供了治疗药物的配方，其在以下各个方面显著优于超免疫初乳：
 生物活性物质的数量可以控制在严格的限制内。
 生物活性物质是独立于初乳制备的，生物活性物质的量不再受制于奶牛免疫活性物质生产的变化。从质量控制的观点来看，这是非常有利的。
 与超免疫初乳可能产生的量相比，在给定体积内可产生的生物活性物质的量能够提高的倍数大于4。例如，从鸟类的蛋，特别是免疫母鸡的蛋黄，中得到的超免疫免疫球蛋白可以被亲和纯化，并得到F(ab)2片断。这显著的扩展了治疗的选择。
 本发明可以允许生产治疗药而无需破坏供人们食用的奶制品的完整性。例如生物活性物质可以在实验室制备，而初乳则在正常奶牛身上收获。
 牛初乳提取物是药用物品管理局名列上的物品，在澳大利亚作为补充药品使用，因此以口服治疗方式使用初乳非常方便。
以下结合具体实施例对本发明进行描述。应该明白，这些实施例是用于说明本发明，并非用于限制本发明的范围。
附图说明
许多所讨论的实施例参考附图中所示的结果，其中：
图1为实施例1中初乳保护的脲酶活性的示意图。
图2为实施例3中初乳保护的抗体活性的示意图。
图3为实施例4中初乳保护的植物乳酸菌存活示意图。
图4为实施例6中初乳保护的红霉素活性的示意图。
图5为实施例7中初乳保护的干酪乳酸菌的存活示意图。
图6为实施例8中初乳保护的霍乱毒素活性的示意图。
图7为实施例9中初乳保护的植物乳酸菌的示意图。
具体实施方式
实施例1  以胃环境中初乳保护的酶的活性作为生物活性蛋白保护的例子
介绍：
使用脲酶研究了在胃环境中，牛初乳作为生物活性蛋白活性的保护剂所起的作用。为了研究初乳的保护特性，分别在有牛初乳和无牛初乳存在的条件下比较了模拟胃液对脲酶活性的作用。
材料和方法：
试剂
脲酶：以Sigma公司的III型刀豆脲酶(Cat No U-1500)作为酶的来源。将冻干的脲酶(标示的酶活为16u/mg；在pH7.0和25℃条件下，1u每分钟从尿素释放1.0μmol的氨)溶解于MilliQ水至浓度为0.3u/μl(约21mg/ml)，冰冻保存备用。
模拟胃液(SGF)：(根据Hilger等2001的方法修改)。在0.03M的NaCl溶液中制备0.32％的Sigma公司的猪胃蛋白酶(Cat No P-7012源自胃粘膜)溶液，以HCl调节pH至1.2。
初乳：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛，以MilliQ水重新配成300mg/ml贮备。见实施例2关于牛初乳提取物的制备方法。
以模拟胃液(SGF)处理脲酶
通过将等分的脲酶溶液与等体积的重新配制的初乳或MilliQ水混合，制备培养混合物一式四份。同时制备对照的初乳和水的混合物(一式两份)。
培养混合物1-4：100μl脲酶+100μlMilliQ水
培养混合物5-8：100μl脲酶+100μl初乳
培养混合物9-10：100μl初乳+100μlMilliQ水
混合物在37℃的水浴中预热5分钟，然后向1，2，5，6和9号试管中加入50μl SGF。向3，4，7，8和10号试管中加入50μl 0.03M的NaCl以启动模拟实验。样品在37℃培养15分钟，然后向每个试管中加入0.25体积冷冻的160mM Na2CO3终止反应。然后试管在Eppendorf离心机5417C中以20,800g的离心力离心3分钟，然后冰冻保存。上清液用于脲酶的活性测定。
脲酶测定
脲酶活性的测定使用耦合酶测定法以提高灵敏度(对1966年的Kaltwasser和Schlegel方法的修改)。在这个反应中，脲酶催化尿素的水解：
                     
通过氨产物与谷氨酸脱氢酶的耦合反应进行测定：
       
这个反应伴随着NADH氧化为NAD的反应。
最终的1ml测试体积中含有在50mM的Tris-HCl缓冲液(pH8.0)中终浓度为1.6mM的α-酮戊二酸(Beohringer Mannheim公司，Cat No.127 205)，1.5mM NADH(Sigma公司，CatNo.G-4387)、10mM尿素(BeohringerMannheim公司、CatNo.100 164)和1mM的硫化钠(Sigma公司，CatNo.S-4766)。这些试剂在路径长度为1cm的聚苯乙烯池(Sarstedt公司，Cat No.67.742)中混合，接着在室温下于Beckman DU70记录分光光度计中平衡数分钟。在加入样品前，使用上述混合物将分光光度计调零。
从每一培养混合物中取10μl上清液样品加入到测试混合物中开始测试。在室温下于340nm波长每10秒钟记录一次反应率，直至4分钟。反应率通过曲线的线性部分(通常为反应1-2分钟以后)计算，脲酶活性以每毫克蛋白每分钟水解的尿素的微摩尔数表示。
结果
混合物 样品 处理方法     脲酶活性(μmoles尿素/min/mg酶)
    平均值     标准差
    1-2 脲酶+水 SGF     0.027     0.022
    3-4 脲酶+水 模拟实验     0.158     0.021
    5-6 脲酶+初乳 SGF     0.138     0.018
    7-8 脲酶+初乳 模拟实验     0.173     0.014
              背景脲酶活性
            (吸光值340nm/min)
    9 初乳+水 SGF                   0.021
    10 初乳+水 模拟实验                   0.019
由上表的结果以及图1所示，将模拟胃液加入至稀释后的脲酶溶液中，导致了酶的不可逆的变性，随之而来的是活性的丧失。加入模拟胃液后所剩余的酶活性与对照的单独的初乳(没有脲酶)中的酶活性相当。注：“模拟实验”处理是在实验的处理中使用生理盐水而不是人工胃液。
相比之下，向脲酶溶液中加入初乳为脲酶提供了保护，使之免受胃蛋白酶和酸的作用。在初乳存在的条件下，受保护的脲酶保留了约80％的模拟实验处理的脲酶/初乳混合物的活性。使用这种酶模式，牛初乳被证明能够在模拟胃环境中为蛋白活性提供保护。
参考文献：
Hilger C，Grigioni F，De Beaufort，Michel G，Freilinger J and Hentges F(2001).Differential binding of IgGand IgA antibodies to antigenic determinants of bovine serum albumin，Clin Exp Immunol，123：389-394.Kaltwasser H and Schelgel HG(1966).NADH-dependent coupled enzyme assay for urease and otherammonia-producing systems.Analytical Biochem，16：132-138.Scott DR，Weeks D，Hong C，Postius S，Melchers K and Sachs S(1998).The role of internal urease in acidresistance of Helicobacter pylori.Gastroenterology，114：58-70.
实施例2：加工的牛初乳粉末的制备方法
以下的流程图显示了获得初乳以及将其转化为加工的形式的原理。
最优选的未加工初乳是牛奶场的奶牛在产犊以后第一次挤奶所收获的初乳。初乳在农场以4℃保存，然后保存于-20℃长途运输或直接送至牛奶加工。
初乳粗品被加热至约37℃，然后使用旋转牛奶脱脂器除去脂肪。得到的液体进行巴氏消毒或用7-10微米的陶瓷过滤系统进行微滤(除去细菌和碎片)。然后将液体进行超滤(例如使用Abcor 10m2超滤设备)以除去大部分的水、乳糖和电解质，留下高蛋白的浓缩物。得到的高蛋白浓缩物进行进一步的加工，优选的为冻干(冷冻干燥)或喷雾干燥。
通过上述方法得到具有以下特性的加工的牛初乳粉末。以下所描述的产品属于澳大利亚药用物品管理局所列的适用于包含在药用物品内的物质。
表观：散粒，浅黄色粉末。
性质：在水中可分散，受潮后有淡淡的牛奶味。
湿度：范围在2-5％m/m  AS 2300.1.1(1988)
脂肪：范围在1-4％m/m  AS 2300.1.3(1988)
灰分(在550℃条件下)： 不大于8％m/m AS 2300.1.5(1988)
总氮含量(TN)：用于报告**    AS 2300.1.2(1991)
非蛋白的氮含量(NPN)：用于报告**  AS 2300.1.2.2(1988)
纯粹蛋白质：不少于60％m/m(TN-NPN)％×6.38
蛋白质：不少于60％m/m  AS 2300.1.2(1991)
乳糖(一水合物)：不大于15％m/m
          依据酶解和氧化进行的紫外测定(Boehringer Mannheim)
总免疫球蛋白：不少于20％m/m
                          放射性免疫扩散测定
(m/m代表组合物的总质量中组分的质量)
微生物限制：符合TGA的指导方针
残留物：重金属  农业和兽用化学品
符合奶制品的ANZFA食品标准规则。如没有可适用的食品标准，则使用用于重金属的BP试验(2ppm，以铅计算)和用于杀虫剂残留的BP要求。
**用于计算纯粹蛋白质的值
‘AS’指的是澳大利亚标准组织系列的‘澳大利亚标准’的文献—在此处指的是用于奶制品质量和组分测试的标准化的方法。
实施例3：酸/胃蛋白酶处理过程中初乳对抗体活性的保护
使用抗体模型研究了牛初乳作为保护剂对处于胃环境中的蛋白质活性的作用。为了研究初乳的保护特性，比较了在牛初乳存在和不存在的条件下，模拟胃液对流感病毒特异性单克隆抗体的生物活性的影响。
材料和方法：
试剂：
流感病毒和特异性单克隆抗体：本研究中所使用的A型流感病毒是Mem71H-BelN(H3N3)。所使用的抗体是Mem71H-BelN特异性IgG2a单克隆(Mab 36/2)，以1∶10稀释于磷酸盐缓冲液。
模拟胃液(SGF)：(根据2001年Hilger等人的方法修改)在0.03M的NaCl溶液中制备0.32％的Sigma公司的猪胃蛋白酶(Cat No P-7012源自胃粘膜)溶液，以HCl调节pH至1.2。
初乳：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛，以MilliQ水重新配成300mg/ml贮备。
用模拟胃液处理单克隆抗体36/2
将等分试样的抗体以磷酸缓冲液1∶10稀释，然后与等体积的重新配制的初乳或MilliQ水进行混合以制备培养混合物。同时制备对照的初乳和水的混合物。
培养混合物1-2：100μl Mab 36/2+100μl MilliQ水
培养混合物3-4：100μl Mab 36/2+100μl 初乳
培养混合物5-6：100μl 初乳+100μl MilliQ 水
混合物在37℃的水浴中预热5分钟，然后向1，3和5号试管中加入50μl的SGF。向2，4和6号试管中加入50μl 0.03M的NaCl以启动模拟实验。所有样品在37℃培养15分钟，然后向每个试管中加入0.25体积冷冻的160mM的Na2CO3以终止反应。然后试管在Eppendorf离心机5415D中以16,100g的离心力离心3分钟，冰冻保存。上清液抗体活性的测定。
血细胞凝集抑制测试
以血细胞凝集抑制(HI)测试对抗体的活性进行测定。血细胞凝集滴定和HI测试以96孔U型底的微孔板(SarstedtGroup公司，SA，澳大利亚)和1％(v/v)小鸡红血球按照标准程序进行。血细胞凝集测试是用来测定用于HI测定的病毒的血细胞凝集单位(HAU)的数量。每个培养混合物用PBS以1∶3.2进行稀释，这将使得Mab 36/2的起始的浓度为1∶100。在微孔板上，以一式双孔的方式，对培养混合物进行连续的双倍稀释，每孔的最终体积为25μl。然后每孔中加入浓度为4HAU的等体积的病毒，在室温下将抗体和病毒培养30分钟。30分钟后，在每孔中加入25μl的小鸡红血球(1 ％v/v，于PBS中)，并培养30分钟。HI滴定浓度作为相应的抑制4HAU的病毒的最高抗体滴定浓度。测试以一式两孔重复两次。
结果
 样品     处理方法         HI滴定浓度
    平均值     标准差
 Mab 36/2+水     SGF     200     0
 Mab 36/2+水     模拟实验     1200     462
 Mab 36/2+初乳     SGF     9600     3695
 Mab 36/2+初乳     模拟实验     8000     3200
 Mab 36/2(1/100稀释)     不处理     800     0
       背景初乳活性
 初乳+水     SGF     250     100
 初乳+水     模拟实验     350     300
如上表的结果和图2所示，以模拟胃液处理Mab 36/2，处理后抗体的血细胞凝集抑制活性降低了6倍。
相比之下，在制备的抗体中加入初乳可以保护抗体免受胃蛋白酶和酸的作用。在初乳存在的情况下，被保护的抗体显示活性没有降低。
使用这个抗体模型，牛初乳被证明能够保护模拟胃环境中的抗体的活性。
参考文献
Hilger C，Grigioni F，De Beaufort C，Michel G，Freilinger J and Hentges F(200 1).Differential binding of IgGand IgA antibodies to antigenic determinants of bovine serum albumin Clin Exp Immunol，123：387-394.Deliyannis G Jackson D，Dyer w，Bates J，Coulter A，Harling-McNabb L，Brow L，(1998).Immunopotentiation of humoral and cellular responses to inactivated influenza vaccines by twodifferent-adjuvants with potential for human use.vaccine，16：2058-2068.Anders EM，Hartley C，Jackson D(1990).Bovine and mouse serum βinhibitors of influenza A viruses aremannose-binding lectins.Proc Natl Acad USA，87：4485-4489.
实施例4：在酸/胃蛋白酶处理过程中，初乳对植物乳酸杆菌存活力的保护
介绍
使用乳酸杆菌的活菌平板计数分析，研究了在胃环境中牛初乳对细菌存活的保护作用。为了研究初乳的保护特性，在牛初乳存在和不存在的条件下比较了模拟胃液对植物乳酸杆菌的影响。
材料和方法
试剂
植物乳酸杆菌：本研究所使用的植物乳酸杆菌菌株是在原生生物中所使用的菌株，该菌株取至于维多利亚派克维尔的皇家儿童医院微生物研究室的培养收集物，并根据16S测序(对核糖体亚基的DNA测序)进行分类。该菌株在马血琼脂(HBA)平板上，在37℃条件下于二氧化碳培养箱中培养48至72小时。从HBA平板上挑取至少2个菌落制备乳酸杆菌接种体，并接种2ml生理盐水以达到与0.5McFarland标准相同的浊度。然后在所有的处理中使用这个接种体。
模拟胃液(SGF)：(根据2001年Hilger等人的方法修改)在0.03M的NaCl溶液中制备0.32％的Sigma公司的猪胃蛋白酶(Cat No P-7012源自胃粘膜)溶液，以HCl调节pH至1.2。
初乳：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛并经过辐射处理。以MilliQ水重新配成300mg/ml贮备。
使用模拟胃液处理乳酸杆菌
将等分试样的植物乳酸杆菌接种体与等体积的重新配制的初乳或MilliQ水进行混合制备培养混合物。同时制备对照的初乳和水的混合物。
培养混合物1-2：100μl植物乳酸杆菌+100μl MilliQ水
培养混合物3-4：100μl植物乳酸杆菌+100μl 初乳
培养混合物5-6：100μl初乳+100μl MilliQ水
混合物在37℃的水浴中预热5分钟，然后向1，3和5试管中加入50μl的SGF。向2，4和6号试管中加入50μl 0.03M的NaCl启动模拟实验。所有样品在37℃培养15分钟，向每个试管中加入0.25体积的冷冻的160mM的Na2CO3终止反应。
乳酸杆菌活菌平板计数
使用活菌平板计数技术测定处理后的乳酸杆菌的存活情况。处理后立即在生理盐水中制备10倍稀释的培养混合物。每种稀释物取100μl涂布在一式双份的平板上。平板培养48小时，计算每个平板上菌落的数量。将稀释系数乘以稀释后悬浮液的cfu/ml的数目，计算培养混合物中每毫升的菌落形成单位(cfu)的数目。测试以双份重复两次。
结果
样品     处理方法      平板计数(log10cfu/ml)
    平均值     标准差
乳酸杆菌+水     SGF     3.99     0.36
乳酸杆菌+水     模拟实验     6.99     0.24
乳酸杆菌+初乳     SGF     7.01     0.19
乳酸杆菌+初乳     模拟实验     6.96     0.27
        背景初乳活性
初乳+水     SGF     0     0
初乳+水     模拟实验     0     0
如上表的结果和图3所示，以模拟胃液处理乳酸杆菌的接种体，处理后乳酸杆菌的存活率降低了1000倍。
相比之下，在乳酸杆菌的接种体中加入初乳能够保护细菌免受胃蛋白酶和酸的作用。在初乳存在的情况下，被保护的乳酸杆菌存活率没有降低。使用这种活菌平板计数技术，牛初乳被证明能够保护模拟胃环境中原生生物的存活率。
参考文献
Hilger C，Grigioni F，De Beaufort C，Michel G，Freilinger J and Hentges F(2001).Differential binding of IgGand IgA antibodies to antigenic determinants of bovine serum albumin Clin Exp Immunol，123：387-394.Miles A，Misra S(1938).The estimation ofthe bactericidal power of the blood.J Hyg，38：732-749.
实施例6：在酸/胃蛋白酶处理过程中，初乳对红霉素活性的保护
介绍
使用抗生素模型研究了牛初乳对处于胃环境中的生物活性分子的活性的保护作用。为了研究初乳的保护特性，在牛初乳存在和不存在的条件下，比较了模拟胃液对红霉素活性的影响。
材料和方法
试剂
红霉素：使用Boehringer Mannheim公司的红霉素(C37H57NO13)作为抗生素的来源，以95％的乙醇溶解红霉素，配成1mg/ml的贮存溶液，于4℃贮存。对于本研究，以MilliQ水稀释红霉素贮存溶液至100μg/ml，冰冻保存直至使用。
模拟胃液(SGF)：(根据2001年Hilger等人的方法修改)在0.03M的NaCl溶液中制备0.32％的Sigma公司的猪胃蛋白酶(Cat No P-7012源自胃粘膜)溶液，以HCl调节pH至1.2。
初乳：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛，以MilliQ水重新配成300mg/ml贮备。
以模拟胃液处理红霉素
将等分试样的红霉素与等体积的重新配制的初乳或MilliQ水进行混合制备培养混合物。同时制备对照的初乳和水的混合物。
培养混合物1-2：100μl红霉素+100μl MilliQ 水
培养混合物3-4：100μl红霉素+100μl 初乳
培养混合物5-6：100μl初乳+100μl MilliQ 水
混合物在37℃的水浴中预热5分钟，然后向1，3和5号试管中加入50μl的SGF。向2，4和6号试管中加入50μl 0.03M的NaCl启动模拟实验。所有样品在37℃孵育15分钟，然后向每个试管中加入0.25体积冷冻的160mM的Na2CO3终止反应。试管在Eppendorf离心机5415D中以16,100g的离心力离心3分钟，冰冻保存。上清液用于红霉素活性的测定。
红霉素的敏感性测定
使用枯草芽孢杆菌的圆片扩散敏感性实验对红霉素的活性进行测定。从在马血琼脂上(HBA)培养过夜的培养物上挑取至少2个菌落以制备枯草芽孢杆菌(ATCC 6633)的接种体，并接种2ml生理盐水以达到与0.5McFarland标准相同的浊度。使用灭菌的接种针对需要测试的HBA平板进行划线接种，将接种针蘸入标准溶液中，然后在整个平板的表面上在三个方向上均匀地划线，以获得均匀的接种。在使用圆片之前，将平板干燥3至5分钟。
每次处理是以MilliQ水1∶2连续稀释，每个稀释6次。从每一稀释液取20μl加在一式双份的空白敏感性圆片上(英国汉普郡Oxoid公司产品)。在置于一式双份的平板上之前，这些圆片至少干燥30分钟。对应于单个处理的六次稀释，每个平板含有六片平均分隔的圆片。将未处理的红霉素以MilliQ水稀释至与处理样品相同的浓度以作为对照，用以获得标准曲线。平板在37℃培养16-18小时。
培养16-18小时后，通过测定圆片周围出现的抑菌圈的直径以测定枯草芽孢杆菌对红霉素的敏感度。这些抑菌圈是由于圆片中的抗生素扩散进入周围的琼脂中而产生。依据作为对照的未处理的连续稀释的红霉素的抑菌圈的直径，绘制标准曲线。依据测试样品抑菌圈的直径可以获得处理后的红霉素相对未处理的红霉素的残留活性的百分比。测试一式双份重复三次。
结果
样品     处理方法             红霉素活性
    (相对于未处理的对照组的％)
    平均值     标准差
红霉素+水     SGF     8     3
红霉素+水     模拟实验     114     14
红霉素+初乳     SGF     140     20
红霉素+初乳     模拟实验     123     9
红霉素+水     未处理     100     0
          背景初乳活性
              (％)
初乳+水     SGF                0
初乳+水     模拟实验                0
如上表的结果和图4所示，向100μg/ml的红霉素溶液中加入模拟胃液，导致红霉素的活性降低92％。
相比之下，向红霉素溶液中添加初乳可以保护红霉素免受胃蛋白酶和酸的作用。在初乳存在的条件下，被保护的红霉素保留了100％活性，与未处理的空白对照(见图1和图2)相比，其实际上提高了红霉素的活性。这提高了的活性也可以从模拟实验的红霉素溶液和初乳得到证明。单独的初乳显示没有背景抗生素活性，所以加入初乳带来的增强的活性不能解释为初乳中背景红霉素的活性。使用这种抗生素模型，牛初乳被证明出可以在模拟胃环境中保护抗生素的活性。
参考文献
Hilger C，Grigioni F，De Beaufort C，Michel G，Freilinger J and Hentges F(2001).Differential binding of IgGand IgA antibodies to antigenic determinants of bovine serum albumin Clin Exp Immunol，123：387-394.Barry AL and Thornsberry C(1991).Susceptibility of tests：diffusion test procedures.In Balos A，Hauser WU，Herman KL，Isenberg HD，and Shadomy HJ.Manual of Clinical Microbiology 5th Edition，American Societyfor Microbiology，Washington，pp1177-1125.
The British Society for Antimicrobial Chemotherapy(1991)A Guide to Sensitivity Testing.The BritishSociety for Antimicrobial Chemothreapy，San Diego.
实施例7：初乳对处于酸/胃蛋白酶处理过程中的养乐多代田菌存活的保护
介绍
通过使用乳酸菌活菌平板计数测试，研究了牛初乳对于处于胃环境中的原生生物存活力的保护作用。为了研究初乳的保护作用，在牛初乳存在和不存在的条件下，比较了模拟胃液对于从Yakult发酵液中分离的养乐多代田菌的影响。
材料和方法
试剂
养乐多代田菌：本研究所使用的养乐多代田菌是从原生生物产品-Yakult中分离得到的。将该菌株在马血琼脂(HBA)平板上，于37℃条件二氧化碳培养箱中培养48至72小时。从HBA培养板上挑取至少2个菌落制备乳酸菌接种体，并接种2ml生理盐水以达到与0.5McFarland标准相同的浊度。然后这个接种体用于所有处理。
模拟胃液(SGF)：(根据2001年Hilger等人的方法修改)在0.03M的NaCl溶液中制备0.32％的Sigma公司的猪胃蛋白酶(CatNo P-7012源自胃粘膜)溶液，以HCl调节pH至1.2。
初乳：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛，以MilliQ水重新配成300mg/ml贮备。
以模拟胃液处理乳酸菌
将等分试样的养乐多代田菌与等体积的重新配制的初乳或MilliQ水进行混合制备培养混合物。同时制备对照的初乳和水的混合物。
培养混合物1-2：100μl乳酸菌+100μl MilliQ 水
培养混合物3-4：100μl乳酸菌+100μl 初乳
培养混合物5-6：100μl初乳+100μl MilliQ 水
混合物在37℃的水浴中预热5分钟，然后向1，3和5号试管中加入50μl的SGF。向2，4和6号试管中加入50μl 0.03M的NaCl启动模拟实验。所有样品在37℃培养15分钟，然后向每个试管中加入0.25体积冷冻的160mM的Na2CO3终止反应。
乳酸菌活菌平板计数
使用活菌平板计数技术测定处理后的乳酸菌的存活情况。处理后立即在生理盐水中制备10倍稀释的培养混合物。每种稀释物取100μl涂布在一式双份的平板上。平板培养48小时，计算每个平板上菌落的数量。将稀释系数乘以稀释后悬浮液的cfu/ml的数目，计算培养混合物中每毫升的菌落形成单位(cfu)的数目。测试以双份重复两次。
结果
样品     处理方法    平板计数(log10cfu/ml)
    平均值     标准差
乳酸杆菌+水     SGF     1.46     2.06
乳酸杆菌+水     模拟实验     7.43     0.09
乳酸杆菌+初乳     SGF     7.01     0.18
乳酸杆菌+初乳     模拟实验     6.97     0.03
       背景初乳活性
初乳+水     SGF     0     0
初乳+水     模拟实验     0     0
如上表的结果和图5所示，以模拟胃液处理干酪乳酸菌的接种体，处理后乳酸菌的存活率至少降低了10000倍。
相比之下，在乳酸菌的接种体中加入初乳可以保护原生细菌免受胰蛋白酶和酸的作用。在初乳存在的情况下，被保护的乳酸菌存活率显示没有降低。使用这种活菌平板计数技术，牛初乳被证明能够保护模拟胃环境中的原生生物的存活力。
参考文献
Hilger C，Grigioni F，De Beaufort C，Michel G，Freilinger J and Hentges F(2001).Differential binding of IgGand IgA antibodies to antigenic determinants ofbovine serum albumin Clin Exp Immunol，123：387-394.Miles A，Misra S(1938).The estimation ofthe bactericidal power ofthe blood.J Hyg，38：732-749.
实施例8：酸/胃蛋白酶处理过程中，初乳对霍乱毒素活性的保护
介绍
通过使用黏膜辅剂，研究了牛初乳对于处于胃环境中的辅剂活性的保护作用。为了研究初乳的保护作用，在牛初乳存在和不存在的条件下，比较了模拟胃液对于霍乱毒素的活性的影响。
材料与方法
试剂
霍乱毒素和Y1肾上腺细胞：以Sigma公司的霍乱弧菌的霍乱毒素(Cat No C-8052)作为辅剂的来源。以MilliQ水将霍乱毒素稀释至3.12μg/ml，冰冻保存直至使用。将Y1鼠肾上腺细胞以每孔2×104个细胞的浓度接种在96孔微孔板中，孔中的培养基为添加了10％胎牛血清(FCS)和庆大霉素的DMEM培养基。
模拟胃液(SGF)：(根据2001年Hilger等人的方法修改)在0.03M的NaCl溶液中制备0.32％的Sigma公司的猪胃蛋白酶(Cat No P-7012源自胃粘膜)溶液，以HCl调节pH至1.2。
初乳：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛，以MilliQ水重新配成300mg/ml贮备。
以模拟胃液处理霍乱毒素
将等分试样的3.12μg/ml的霍乱毒素贮存液与等体积的重新配制的初乳或MilliQ水进行混合制备培养混合物。同时制备对照的初乳与水的混合物。
培养混合物1-2：100μl霍乱毒素+100μl MilliQ 水
培养混合物3-4：100μl霍乱毒素+100μl 初乳
培养混合物5-6：100μl 初乳+100μl MilliQ 水
混合物在37℃的水浴中预热5分钟，然后向1，3和5号试管中加入50μl的SGF。向2，4和6号试管中加入50μl 0.03M的NaCl启动模拟实验。所有样品在37℃培养15分钟，然后向每个试管中加入0.25体积冷冻的160mM的Na2CO3终止反应。试管在Eppendorf离心机5415D中以16,100g的离心力离心3分钟，冰冻保存。上清液过滤除菌后用于霍乱毒素的活性测定。
Y1肾上腺细胞的生物学测定
使用Y1肾上腺细胞生物学测定法测定霍乱毒素的活性。Y1鼠肾上腺细胞以2×104个细胞的浓度接种在96孔微孔板中。48小时后，细胞用PBS冲洗三次。生长培养基以含有1％FCS和庆大霉素(100μl)的DMEM培养基替代，其中含有经过处理的试管的一式双份的样品，样品在最初的1∶10稀释后，连续地被2倍稀释。霍乱毒素使得Y1肾上腺细胞从通常的伸展形态转变为更圆的形态。这些变化是浓度依赖型的。细胞培养18小时后，用相差显微镜检查典型的细胞成圆。测试的终点是最高稀释的样品，其显示的细胞成圆率超过50％。测试以两份重复两次。以同样的微孔板对起始浓度为10ng/ml的霍乱毒素的两倍稀释液进行测试，所得到的结果用于检查测定的灵敏度。
结果
样品     处理方法       毒性滴定(log2)
    平均值     标准差
霍乱毒素+水     SGF     0     0
霍乱毒素+水     模拟实验     8     0
霍乱毒素+初乳     SGF     8     0
霍乱毒素+初乳     模拟实验     7.5     0.71
霍乱毒素(10ng/ml)     不处理     8     0
       背景初乳活性
初乳+水     SGF     2.5     0.71
初乳+水     模拟实验     3     0
如上表的结果和图6所示，以模拟胃液处理霍乱毒素导致霍乱毒素的生物活性完全丧失。
相比之下，向霍乱毒素中添加初乳可以保护霍乱毒素免受胃蛋白酶和酸的作用。在初乳存在的情况下，被保护的霍乱毒素没有显示活性的降低。使用这种霍乱毒素测定，牛初乳被证明能够在模拟胃环境中为黏膜辅剂提供保护。
参考文献
Hilger C，Grigioni F，De Beaufort C，Michel G，Freilinger J and Hentges F(2001).Differential binding of IgGand IgA antibodies to antigenic determinants of bovine serum albumin Clin Exp Immunol，123：387-394.Taushek M，Gorrell R，Strugnell R，Robins-Browne R(2002).Identification of a protein secretorypathway forthe secretion of het-labile enterotoxin by an enterotoxigenic strain of Escherichia coli.Proc Natl Acad SciUSA，99：7066-7071.
实施例9：小鼠体内模型中初乳对植物乳酸杆菌的保护
介绍
使用小鼠体内模型研究了在胃环境中牛初乳对原生生物存活力的保护。为了研究初乳的保护作用，对小鼠喂食含有初乳的植物乳酸杆菌和不含有初乳的植物乳酸杆菌，或作为阳性对照，喂食碳酸氢钠。
材料与方法
试剂
植物乳酸杆菌：本研究中使用的植物乳酸杆菌菌株是实施例4的菌株。该菌株在牛血琼脂(HBA)平板上，于37℃、二氧化碳培养箱中培养48至72小时。从至少两块平板上收获汇合菌苔制备乳酸杆菌接种体，并接种50ml的生理盐水以达到与McFarland 4标准相同的浊度。将细菌造粒，弃去上清液。然后，细菌颗粒在2.5ml的生理盐水中重新悬浮。将接种体以1∶1的比例与生物保护物、碳酸氢钠或生理盐水混合以使细菌终浓度为1×109cfu/ml。
初乳提取物(也被称为生物保护物)：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛并经紫外线照射。以MilliQ水重新配成20，40和100mg/ml的样品。
碳酸氢钠：用MilliQ水将碳酸氢钠也重新配成浓度为20，40和100mg/ml。
以乳酸杆菌感染小鼠
在对小鼠接种乳酸杆菌之前，对小鼠禁食3小时以使小鼠的胃为空。以填喂法对小鼠接种100μl制备的样品，接种量约为1×108cfu乳酸杆菌(每个样品中乳酸杆菌的实际数量通过活菌平板计数法进行测定)。共7组小鼠，每组3只，对小鼠给予以下样品：
乳酸杆菌+生理盐水
乳酸杆菌+20mg/ml生物保护物
乳酸杆菌+40mg/ml生物保护物
乳酸杆菌+100mg/ml生物保护物
乳酸杆菌+20mg/ml碳酸氢钠
乳酸杆菌+40mg/ml碳酸氢钠
乳酸杆菌+100mg/ml碳酸氢钠
由于实验的原因，小鼠被禁食但是允许随意进食经高压灭菌的水。乳酸杆菌体内保护作用的测定通过计算3小时后对殖根在大肠的植物乳酸杆菌的数量来实现。在无菌条件下，割取小鼠的大肠(盲肠和结肠)转入2ml无菌生理盐水中。样品被称量并被匀化，然后在生理盐水中十倍稀释。从每一稀释液取100μl涂布于乳酸杆菌的选择性培养基上(含有10μg/ml万古霉素和12.5μg/ml多粘菌素B的马血琼脂)。平板于5％二氧化碳条件下培养48小时，计算每个平板上的菌落数。由于植物乳酸杆菌的白色不透明的外观，因而很容易将植物乳酸杆菌从小鼠的通常细菌群落中常见的其它的乳酸杆菌之中分辨出。计算每克肠体的菌落形成单元(cfu)的数目。
结果
如图7所示，在生物保护物和碳酸氢钠共同存在的条件下，植物乳酸杆菌的存活率增加了。更高的生物保护物或碳酸氢钠的浓度可以提高存活率，因而具有更好的保护作用。
实施例10：潮湿环境中初乳对植物乳酸杆菌存活的保护
介绍
使用乳酸杆菌活菌平板计数法研究了在不同的湿度条件下，牛初乳提取物对原生生物存活力的保护作用。为了研究初乳提取物的保护特性，比较了在3种恒定湿度的环境中贮存14天后的植物乳酸杆菌的存活率。
材料与方法
试剂
植物乳酸杆菌：本研究中使用的植物乳酸杆菌菌株是实施例4的菌株。该菌株在牛血琼脂(HBA)平板上，于37℃、二氧化碳培养箱中培养48至72小时。从HBA平板上挑取至少2个菌落制备乳酸杆菌接种体，并接种2ml生理盐水以达到与0.5 McFarland标准相同的浊度。然后接种体在所有处理中使用。
冻干培养基：本实验所使用的冻干培养基(FDM)是衍生于Conrad等的方法(2002)。使用40％w/v的α，α-海藻糖二水合物(Sigma公司)和5.7％w/v的十水四硼酸钠(Sigma)于无菌的0.6mM磷酸钾中配制2×浓缩的FDM，pH7.2。开始时，使用固体柠檬酸(Sigma)调节FDM的pH到6.5，接着使用氢氧化铵(Sigma，29.5％)调节pH至8.5。然后用0.22μm的膜将这2×浓缩的FDM过滤除菌。
初乳：脱脂、冻干的牛初乳提取物(Anadis公司的“Gastran”Batch G01)来源于非免疫的奶牛，重新配制成在2×浓缩的FDM中40mg/ml贮存。
样品制备：冷冻干燥前，制备以下混合物的每种四份的等分样品：
(a)植物乳酸杆菌+2×FDM(0.5ml+0.5ml)
(b)植物乳酸杆菌+2×FDM中的40mg/ml初乳(0.5ml+0.5ml)
将样品混合后于室温下培养1小时，然后使用干冰冷冻。然后样品冻干过夜。
不同湿度下植物乳酸杆菌的稳定性
使用含有不同溶液的密闭的盒子建立三种恒定湿度的容器。LiCl(Sigma)饱和溶液维持相对湿度(RH)在11.3％(水活度aw＝0.113)。80％w/w的丙三醇水溶液(BDH Analar)产生50％相对湿度(aw＝0.50)和KCl饱和溶液(BDH Analar)维持85％相对湿度(aw＝0.85)(参考Forney & Brandl 1992和Merck Index)。干燥后，使用研钵和杵轻柔地将每个样品碾成细粉。每个容器中两个样品(植物乳酸杆菌+FDM和植物乳酸杆菌+FDM中的初乳)，于敞开的广口瓶中，20℃培养14天。每个混合物的对照样品于20℃贮于闭口瓶中。
乳酸杆菌的活菌平板计数
使用活菌平板计数技术测定在不同的相对湿度下培养后的乳酸杆菌的存活情况。在含有0.05％的表面活性剂吐温-20的生理盐水中制备10倍稀释的培养混合物。从每一稀释液取100μl涂布在两块平板上。平板培养48小时后计算每块平板的菌落数。通过将稀释悬浮液的cfu/ml数目与稀释系数相乘，得到每毫升培养混合物的菌落形成单元(cfu)数目。这些计数的结果表示为占对照样品的百分数。
结果
    相对湿度 试样     植物乳酸杆菌的存活率
    11.3％ 植物乳酸杆菌+FDM+初乳     100％
    11.3％ 植物乳酸杆菌+FDM     99.3％
    50％ 植物乳酸杆菌+FDM+初乳     61.3％
    50％ 植物乳酸杆菌+FDM     36.7％
    85％ 植物乳酸杆菌+FDM+初乳     18.1％
    85％ 植物乳酸杆菌+FDM     8.5％
在暴露于培养基和高湿条件下，牛初乳提取物提高了被冻干的原生生物，植物乳酸杆菌，的存活率。
参考文献
Conrad PB，Miller DP，Cielenski PR and de Pablo JJ(2000).Stabilization and Preservation of Lactobacillusacidophilus in Saccharide Matrices.Cryobiology 4l：17-24.
Fornery CF and Brandl DG(1992).Control of Humidity in Small Controlled-environment Chambers usingGlycerol-Water Solutions.HortTechnology Jan/Mar 2(1)：52-54.
Merck Index：Misc-98”saturated Solutions”and Misc-103“Constant Humidity Solutions”.
最后，容易理解，在不脱离本发明此处所描述的要义的基础上，各种其它的变形和/或替换是可能的。

Claims (30)

1、一种提高在不利环境中给药的不稳定生物活性物质的存活能力的方法，其特征在于，该方法包括制成生物活性物质和哺乳动物初乳的混合物。
2、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质在37℃条件下、在含有0.32％的猪胃蛋白酶的0.03M的NaCl溶液中，以HCl调节pH至1.2，培养60分钟后，其功能至少损失20％。
3、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合物是通过胃肠道或呼吸道给药。
4、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合物是通过口服使用。
5、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的生物活性物质选自以下物质组成的群组：生长促进剂、抗肿瘤制剂、口服疫苗、吸入剂、活的微生物(例如原生生物，诸如乳酸菌)、肽、多肽、核苷酸、聚核苷酸、核苷、蛋白质、糖蛋白、糖和碳水化合物复合物、抗感染剂、抗菌剂、消毒剂、杀菌剂、抗抑郁剂、心理活性剂、基因改造的生物体和感染性制剂，所述基因改造的生物体和感染性制剂用作其它生物活性物质的载体，例如细菌载体(包括大肠杆菌、沙门氏菌、弧菌、乳酸菌、杆菌、分枝杆菌、志贺氏菌)、病毒载体(包括腺病毒、痘病毒、杆状病毒、疱疹病毒、肠道病毒、副粘病毒和正粘病毒)、植物载体(包括烟草、土豆、香蕉)、酵母载体、免疫球蛋白或亲和纯化免疫球蛋白，包括抗疾病和疾病致病剂(例如，幽门螺旋杆菌、大肠杆菌、杆菌、致病的耶尔森氏菌和过敏原)的抗体和含有上述任何生物活性物质的片断、衍生物和复合物。
6、特别优选的，所述的生物活性物质含有一种或多种免疫球蛋白、单克隆或多克隆抗体、嵌合抗体、人源单克隆抗体和具有免疫活性片断的树枝状体或免疫活性片断。
7、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质含有选自以下群组的免疫活性片断：F(ab)和F(ab)2片断、重组免疫活性片断、亲和纯化的免疫球蛋白和亲和纯化的免疫球蛋白的免疫活性片断和它们的混合物。
8、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质至少包括一种原生生物。
9、如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质包括一种或多种乳酸杆菌和双歧杆菌。
10、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质选自以下物质组成的群组：
(a)抗致病性生物体幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌(ETEC)、细小核糖核酸病毒，特别是肠道病毒、轮状病毒、炭疽和鼠疫杆菌的抗体或其片断；
(b)抗幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌、炭疽、鼠疫杆菌所分泌的毒素的抗体或其片断和抗蓖麻毒的抗体；和
(c)抗幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌、细小核糖核酸病毒，特别是肠道病毒、轮状病毒、炭疽和鼠疫杆菌的口服疫苗和吸入疫苗。
11、如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质选自抗幽门螺旋杆菌或肠道病毒71的口服疫苗或抗体或抗体片断。
12、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质包括源于初乳或鸟蛋的多克隆抗体或其片断。
13、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物活性物质包括酸不稳定的抗体。
14、一种治疗或预防病人胃肠疾病的方法，包括让病人口服一种组合物，该组合物包括(a)直接作用于选自幽门螺旋杆菌和大肠菌群的致病微生物的疫苗和(b)哺乳动物初乳组成的混合物。
15、如权利要求1所述的组合物，其特征在于，其中初乳与活性物质的重量比大于0.5∶1。
16、如权利要求15所述的组合物，其特征在于，所述重量比大于2∶1。
17、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合物置于组合物中使用，所述组合物包括一种或多种载体或适于口服或吸入使用的赋型剂。
18、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的初乳包括取自于分娩后不超过2天的牛的初乳。
19、如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述的牛初乳包括分娩后第一天所获得的牛初乳。
20、如权利要求1所述的方法，其特征在于，制成初乳和生物活性物质的液体混合物，然后将液体混合物干燥为固体形式。
21、如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物初乳是干燥的。
22、如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述免疫球蛋白占所收集的初乳中总蛋白含量的比例不少于10％。
23、一种用于不稳定生物活性物质给药的组合物，该组合物包括一种由生物活性物质和哺乳动物初乳组成的混合物。
24、如权利要求23所述的组合物，其特征在于，所述的生物活性物质选自以下物质组成的群组：生长促进剂、抗肿瘤制剂、口服疫苗、吸入剂、活的微生物(例如原生生物，诸如乳酸菌)、肽、多肽、核苷酸、聚核苷酸、核苷、蛋白质、糖蛋白、糖和碳水化合物复合物、抗感染剂、抗菌剂、消毒剂、杀菌剂、抗抑郁剂、心理活性剂、基因改造的生物体和感染性制剂，所述基因改造的生物体和感染性制剂用作其它生物活性物质的载体，例如细菌载体(包括大肠杆菌、沙门氏菌、弧菌、乳酸菌、杆菌、分枝杆菌、志贺氏菌)、病毒载体(包括腺病毒、痘病毒、杆状病毒、疱疹病毒、肠道病毒、副粘病毒和正粘病毒)、植物载体(包括烟草、土豆、香蕉)、酵母载体、免疫球蛋白或亲和纯化免疫球蛋白，包括抗疾病和疾病致病剂(例如，幽门螺旋杆菌、大肠杆菌、杆菌、致病的耶尔森氏菌和过敏原)的抗体和含有上述任何生物活性物质的片断、衍生物和复合物。
25、如权利要求23所述的组合物，其特征在于，所述生物活性物质选自以下物质组成的群组：
(a)抗致病性生物体幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌(ETEC)、细小核糖核酸病毒，特别是肠道病毒、轮状病毒、炭疽和鼠疫杆菌的抗体或其片断；
(b)抗幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌、炭疽、鼠疫杆菌所分泌的毒素的抗体或其片断和抗蓖麻毒的抗体；和
(c)抗幽门螺旋杆菌、肠毒性大肠杆菌、细小核糖核酸病毒，特别是肠道病毒、轮状病毒、炭疽和鼠疫杆菌的口服疫苗和吸入疫苗。
26、如权利要求23所述的组合物，其特征在于，所述的生物活性物质选自抗生素、原生生物、免疫球蛋白、免疫球蛋白的片断和它们的混合物。
27、如权利要求23所述的组合物，其特征在于，其中初乳与生物活性物质的重量比大于2∶1。
28、如权利要求23所述的组合物，其特征在于，所述哺乳动物初乳包括取自分娩后不超过2天的牛的初乳。
29、如权利要求23所述的组合物，其特征在于，所述混合物通过对最初的生物活性物质和哺乳动物初乳的混合物进行干燥制成。
30、哺乳动物初乳用于制备治病或预防疾病的药物的用途，其特征在于，将牛初乳与用于治疗疾病的不稳定生物活性物质进行混合，以更完整地保存生物活性物质的活性。
CNB038065045A 2002-03-21 2003-03-21 含有生物活性物质的组合物及其制备和处理方法 Expired - Fee Related CN100571715C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPS1278 2002-03-21
AUPS1278A AUPS127802A0 (en) 2002-03-21 2002-03-21 Composition containing bioactive materials and method of preparation and treatment
AUPS2551 2002-05-24
AUPS2551A AUPS255102A0 (en) 2002-05-24 2002-05-24 Composition containing bioactive materials and method of preparation and treatment

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1642561A true CN1642561A (zh) 2005-07-20
CN100571715C CN100571715C (zh) 2009-12-23

Family

ID=28455351

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB038065045A Expired - Fee Related CN100571715C (zh) 2002-03-21 2003-03-21 含有生物活性物质的组合物及其制备和处理方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20050175597A1 (zh)
EP (1) EP1485111A4 (zh)
KR (2) KR20040106298A (zh)
CN (1) CN100571715C (zh)
NZ (1) NZ535195A (zh)
TW (1) TW200402303A (zh)
WO (1) WO2003080082A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105012950A (zh) * 2010-11-23 2015-11-04 潘瑟里克公司 用于在广谱、未分化或混合临床应用中治疗的组合物和方法

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003901008A0 (en) 2003-03-04 2003-03-20 Anadis Ltd Composition for the treatment and prevention of bacterial infections
US20080114212A1 (en) 2006-10-10 2008-05-15 General Electric Company Detecting surgical phases and/or interventions
US20070207187A1 (en) * 2004-09-29 2007-09-06 Mizuo Yajima Functional Composition Or Food Comprising Whey Protein, Antibody Derived From Milk Or Antibody
US20090169566A1 (en) * 2004-11-22 2009-07-02 Anadis Ltd. Bioactive compositions
US7956031B2 (en) 2005-05-31 2011-06-07 Naidu Lp Metallo-lactoferrin-coenzyme compositions for trigger and release of bioenergy
WO2007068058A1 (en) * 2005-12-16 2007-06-21 Igscience Pty Ltd Hyper immune bovine colostrum gastrointestinal vaccine
US8021659B2 (en) 2006-04-28 2011-09-20 Naidu Lp Coenzyme Q10, lactoferrin and angiogenin compositions and uses thereof
NZ575918A (en) 2006-08-31 2012-03-30 A C N 135 493 391 Pty Ltd As Trustee For Conca Unit Trust Treatment and/or prevention of non-infectious medical conditions using antibody-containing milk or egg products
CA2684103A1 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 Immuron Limited Delivery of flu antibodies to surfaces in contact with air
EP2268669B1 (en) 2008-03-13 2017-10-18 Immuron Limited Bovine Colostrum comprising anti-insulin antibodies for treating Metabolic Disorder diseases.
WO2009149191A2 (en) 2008-06-03 2009-12-10 University Of Rochester Methods of treating inflammatory intestinal disease and managing symptoms thereof
CA2748449A1 (en) * 2008-12-27 2010-07-15 Pawan Saharan Mammalian colostrum derived nanopeptides for broadspectrum viral and recurrent infections with a method of isolation thereof
CA2760096C (en) 2009-04-27 2018-10-30 Immuron Limited Anti-lps enriched immunoglobulin preparation for use in treatment and/or prophylaxis of a pathologic disorder.
US9943597B2 (en) 2010-08-17 2018-04-17 Immuron Limited Anti-LPS enriched immunoglobulin preparation for use in treatment and/or prophylaxis of a pathologic disorder
CN102190725A (zh) * 2011-03-03 2011-09-21 华兰生物工程股份有限公司 抗手足口病人免疫球蛋白及其制备、使用方法和应用
CN103656633A (zh) * 2012-09-10 2014-03-26 刘占良 一种食品级乳酸菌活载体a组轮状病毒疫苗及其制备方法
NZ713233A (en) 2013-04-19 2020-10-30 Immuron Ltd Methods and compositions for the treatment and/or prophylaxis of clostridium difficile associated disease
WO2015063693A1 (en) 2013-10-30 2015-05-07 Hadasit Medical Research Services And Development Limited Anti-lps enriched immunoglobulin for use in treatment and/or prophylaxis of fibrosis
US10385094B2 (en) 2017-07-26 2019-08-20 Dustin Kjelden Colostrum solid extraction process
US10933097B1 (en) 2020-03-05 2021-03-02 King Saud University Method of treating a bacterial infection using colostrum

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3911108A (en) * 1973-02-14 1975-10-07 Diamond Shamrock Corp Process of producing bovine milk products containing specific antibodies
US4298597A (en) * 1979-09-04 1981-11-03 University Of Saskatchewan Vaccine for diarrhea caused by E. coli
US4377569A (en) * 1980-01-21 1983-03-22 Plymate Robert R Method of treating animals to resist infectious diseases
US4443549A (en) * 1981-10-19 1984-04-17 Molecular Genetics, Inc. Production of monoclonal antibodies against bacterial adhesins
DE3432718C1 (de) * 1984-09-06 1986-05-22 Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt Verfahren zur Herstellung einer Loesung von Milch- und/oder Kolostralimmunglobulinen
SU1704744A1 (ru) * 1990-01-05 1992-01-15 Горский Сельскохозяйственный Институт Способ получени кормового продукта дл молодн ка сельскохоз йственных животных
US5889038A (en) * 1996-03-20 1999-03-30 Children's Hospital Methods and products for treating diarrhea and scours: use of clotrimazole and related aromatic compounds
WO1999026628A1 (en) * 1997-11-20 1999-06-03 Children's Medical Center Corporation Use of substituted 11-phenyl-dibenzazepine compounds for the treatment or prevention of sickle cell disease, inflammatory diseases characterized by abnormal cell proliferation, diarrhea and scour
AUPP327198A0 (en) * 1998-04-30 1998-05-21 Northfield Laboratories Pty Ltd A food composition and method of using same
US6258383B1 (en) * 1998-08-14 2001-07-10 Lactoferrin Products Company Dietary supplement combining colostrum and lactoferrin in a mucosal delivery format
JP4627579B2 (ja) * 2000-05-31 2011-02-09 英一 百溪 Ｍ細胞取り込み制御によるヨーネ病感染の予防方法
KR20020021908A (ko) * 2000-09-18 2002-03-23 허강칠 초유를 이용한 건강보조식품
WO2002047612A2 (en) * 2000-10-27 2002-06-20 Mannatech, Inc. Dietary supplement compositions
WO2002040051A1 (en) * 2000-11-15 2002-05-23 Fonterra Co-Operative Group Limited Colostrum-based composition

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105012950A (zh) * 2010-11-23 2015-11-04 潘瑟里克公司 用于在广谱、未分化或混合临床应用中治疗的组合物和方法
US10611828B2 (en) 2010-11-23 2020-04-07 Pantheryx, Inc. Compositions and methods for treatment in broad-spectrum, undifferentiated or mixed clinical applications

Also Published As

Publication number Publication date
NZ535195A (en) 2006-11-30
KR20100137015A (ko) 2010-12-29
CN100571715C (zh) 2009-12-23
EP1485111A4 (en) 2009-08-19
KR20040106298A (ko) 2004-12-17
TW200402303A (en) 2004-02-16
WO2003080082A1 (en) 2003-10-02
US20050175597A1 (en) 2005-08-11
EP1485111A1 (en) 2004-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1642561A (zh) 含有生物活性物质的组合物及其制备和处理方法
CN1094972C (zh) 人类来源的乳酸杆菌菌株、它们的组合物及其应用
CN1701116A (zh) 益生细菌:发酵乳杆菌
CN1639317A (zh) 益生菌唾液乳杆菌菌株
CN1561387A (zh) 益生菌双歧杆菌菌株
CN1556853A (zh) 益生菌干酪乳杆菌菌株
CN1764476A (zh) 用于治疗和预防肠道细菌感染的方法及组合物
CN1304313A (zh) 含乳酸菌的组合物、药物和食物
CN1342196A (zh) 用于治疗炎性疾病的双歧杆菌
CN1849388A (zh) 能够刺激粘膜免疫性的乳酸菌
CN1222610C (zh) 新颖的抗幽门螺杆菌和大肠杆菌o157:h7的类干酪乳杆菌类干酪亚种菌株的抗细菌剂
CN101056972A (zh) 用于预防和/或治疗龋齿的手段和方法
CN1639318A (zh) 抗微生物组合物
CN1602199A (zh) 用于治疗包含免疫失调的疾病的革兰氏阳性菌制剂
CN1965665A (zh) IgY抗体免疫奶或奶粉的制备方法
CN1643139A (zh) 抗菌剂
CN1901924A (zh) 用于抑制细菌定居的方法
CN1679504A (zh) 人溶菌酶在制备治疗痤疮的化妆品中的应用
CN1720262A (zh) 轮状病毒蛋白、衍生的蛋白和肽在调节组织通透性中的应用
CN1557485A (zh) 基因重组人溶菌酶在消除病原微生物感染炎症上的应用
CN116286439A (zh) 一株婴幼儿肠道来源的两歧双歧杆菌及应用
CN1112356A (zh) 新型的减毒铜绿假单胞菌菌株
RU2396968C2 (ru) Средство для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта и способ его получения
CN1700929A (zh) 含有禽吸收障碍综合征相关病毒的疫苗及其给药方法
CN1167567A (zh) 杀菌、抗菌和抑菌组合物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20091223

Termination date: 20110321