CN1634831A - 应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法 - Google Patents
应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1634831A CN1634831A CN 200410036087 CN200410036087A CN1634831A CN 1634831 A CN1634831 A CN 1634831A CN 200410036087 CN200410036087 CN 200410036087 CN 200410036087 A CN200410036087 A CN 200410036087A CN 1634831 A CN1634831 A CN 1634831A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- honokiol
- magnolol
- phase
- high speed
- separation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Abstract
一种应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法，它包括：分离溶剂系统由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成，其体积比为1∶0.4∶1－1.2∶0.4－0.6，将上述溶剂体系置于分液漏斗中充分振摇后静置分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，取一定量的厚朴提取物溶解于3－10ml上相和3－10ml下相的混合溶液中。首先将固定相用泵以9ml/min的流速灌满色谱分离柱，然后将柱的首端与六通进样阀相接。开启速度控制器，当转速达到800r/min时，开始以2ml/min的流速泵入流动相，待流动相开始流出色谱柱时，收集分离物。用高效液相色谱法测定各试管溶液中各成分，将不同成分分别收集、浓缩、干燥。分离得到的和厚朴酚与厚朴酚的纯度都在95％以上。
Description
技术领域：本发明涉及逆流色谱制备分离方法，具体地说是关于应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法。
背景技术：厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.)为木兰科乔木植物，厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮是我国的传统中药材，具有行气、燥湿、消积、平喘等功效，主要用于治疗湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳[1]。其主要的活性成分为和厚朴酚与厚朴酚[2]。另据报导，和厚朴酚在生物体系中具有很强的抗氧化活性，能够保护老鼠肝脏免受过氧化伤害，研究发现和厚朴酚的抗氧化活性比维生素E高1000倍之多。和厚朴酚能够抑制血小板的凝结和改善局部缺血老鼠的脑梗塞。在细胞培养过程中，和厚朴酚抑制人鳞状肺癌细胞CH27、人纤维瘤HT-1080、人的淋巴细胞4B、人白血病HL-60细胞系的生长并诱导其程序性死亡[3，4]。近来的研究发现和厚朴酚对裸鼠的血管肉瘤有很好抑制的作用，和厚朴酚是γ-氨基丁酸受体的激活剂，产生强烈的抗焦虑活性，提高自由活动的小鼠海马趾乙酰胆碱的释放，当脑神经皮层细胞在无血清、补充B27的介质中培养时，添加和厚朴酚后，促进了神经突的生长[5]。此外，在补充N2的无血清培养基中，添加了和厚朴酚后，能显著提高神经元的生长。其神经营养活性在10μM时与40ng/mL的bFGF的作用相同。
由于其重要的生物活性，急需要大量的纯品进行深入的研究，然而传统的从植物材料中分离纯化和厚朴酚方法十分的烦琐，需要在硅胶柱、聚酰胺柱上进行多步的色谱分离[2]。高速逆流色谱技术(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)不同于传统的柱色谱需使用固体填料，而是应用两相互不混溶的溶剂系统在支撑管内高速行星运动的方式下进行天然产物的分离纯化，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离的优点。它已被用于多种天然产物的分离与分析，见中国专利CN1445223A、CN1136210C等。目前，尚未见利用HSCCC从植物材料中分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的报道。但是如何快速、高效从厚朴的粗提物中分离并纯化和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)化合物是大家比较关心的一个课题。
发明内容：本发明的目的是提供一种从厚朴粗提物中分离纯化和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)的方法，该方法工艺简便，效率高，产品纯度大于95％。
为实现上述目的，本发明采取以下设计方案：
1、分离溶剂系统的选择 根据各种溶剂的极性、粘性、比重、溶解度等因素，设计一系列溶剂系统，然后按溶剂系统的比例，配制20ml溶剂，分别吸取上、下相各1ml，加入样品1mg，充分振摇，静置分层，分取上、下层溶液，用高效液相色谱(HPLC)法测定上、下层所含和厚朴酚与厚朴酚的浓度，即可求得二者在该溶剂系统中的分配系数K，K＝Cs/Cm，Cs表示溶质在上相的质量浓度，Cm表示溶质在下相的质量浓度。选取K值在0.5-1.5范围内的溶剂系统作为分离制备系统，本发明所述的溶剂体系是正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水，其用量体积比为1∶0.4∶1-1.2∶0.4-0.6。如图1所示，A(和厚朴酚)的保留时间范围为30-100分钟，B(厚朴酚)的保留时间范围为90-200分钟。
2、将上述溶剂体系配置于分液漏斗中充分振摇后静置12h，分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，取100mg厚朴提取物溶解于3ml上相和3ml下相的混合物中。首先将固定相用泵以9ml/min的流速灌满色谱分离柱，然后将柱的首端与六通进样阀相接。开启速度控制器，使高速逆流色谱仪螺旋管柱按顺时针方向旋转，当达到800r/min时，开始以2ml/min的流速泵入流动相，并通过六通进样阀进样。待流动相开始流出色谱柱时，即可调节自动部分收集器，按每管4ml收集。样品分离结束后，用高效液相色谱(HPLC)法测定各试管溶液中各成分，将不同的成分分别收集、浓缩、干燥。
3、HPLC分析及HSCCC峰的鉴定 利用高效液相色谱(HPLC)分析提取物及HSCCC的分离物。高效液相色谱条件：岛津Shim packVP-ODS柱(4.6mm×250mm)，紫外检测波长288nm，柱温：25℃，流速：1.0ml/min，进样量：10μl，流动相：己腈∶水＝55∶45。
HSCCC峰的鉴定：应用Agilent 5973N质谱仪和Varian 300MHz核磁共振波谱仪分别进行MS，1H-NMR和13C-NMR谱的测定。
4、连续制备分离 采用文献[6]的方法，用超临界CO2萃取出粗提物，首先经过石油醚重结晶后得到和厚朴酚与厚朴酚的粗晶体，再利用本发明所述的分离溶剂系统，进行多次进样制备(如图3所示，图上的(2)是指第二次进样，图上的(3)是指第三次进样)。通过多次进样，连续制备，大大缩短了制备的时间，提高了制备量。
附图说明：
图1为进样量为100mmg厚朴粗提物的高速逆流色谱(HSCCC)的色谱图A：和厚朴酚B：厚朴酚
图2为进样量为600mmg厚朴粗提物的高速逆流色谱(HSCCC)的色谱图A：和厚朴酚B：厚朴酚
图3多次进样分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的制备型高速逆流色谱的(HSCCC)色谱图(2)：是指第二次进样，(3)：是指第三次进样
实例1：采用半制备型高速逆流色谱仪 溶剂选用正己烷，乙酸乙酯，甲醇，水体系从厚朴的粗提物中分离制备和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)单体 首先以1∶0.4∶1.2∶0.6的体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后将上下两相分开，取上相为固定相，下相为流动相，取100mg厚朴提取物溶解于3ml上相和3ml下相的混合物中待用。采用北京新技术应用研究所生产的GS10A2半制备型高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测仪和纪录仪、多层缠绕聚四氟乙烯的柱，容量为230ml。首先将固定相用泵灌满色谱分离柱，然后将柱的首端与六通进样阀相接。开启速度控制器，使高速逆流色谱仪螺旋管柱按顺时针方向旋转，当达到800r/min时，开始以2ml/min的流速泵入流动相，并通过六通进样阀进样。然后根据检测器紫外谱图接收目标成分，室温在18-30℃时，纯度都在98％以上(见图1)。
利用HPLC-PAD分析HSCCC的分离物。高效液相色谱条件：岛津Shim pack VP-ODS柱(4.6mm×250mm)，紫外检测波长288nm，柱温：25℃，流速：1.0ml/min，进样量：10μl，流动相：己腈∶水＝55∶45。
实例2：用半制备型高速逆流色谱仪 溶剂选用正己烷，乙酸乙酯，甲醇，水体系从厚朴的粗提物中分离制备和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)单体，首先以1∶0.4∶1∶0.4的体积比将上述溶剂体系配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后将上下两相分开，取上相为固定相，下相为流动相，取600mg厚朴提取物溶解于8ml上相和8ml下相的混合物中待用。采用北京新技术应用研究所生产的GS10A2半制备型高速逆流色谱仪，并配有柱塞泵、进样阀、紫外检测器和纪录仪、多层缠绕聚四氟乙烯的柱容量为230ml。首先将固定相用泵灌满色谱分离柱，然后将柱的首端与六通进样阀相接。开启速度控制器，使高速逆流色谱仪螺旋管柱按顺时针方向旋转，当达到800r/min时，开始以2ml/min的流速泵入流动相，并通过六通进样阀进样。然后根据检测器紫外谱图接收目标成分，旋转蒸发后，冷冻干燥。得到和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)单体纯度都在97％以上(见图2)。HPLC检测条件同实例1。
优点和效果
用本方法制备的和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)的纯度高。本方法适用于以各种含有和厚朴酚与厚朴酚的天然产物、天然产物的提取物为原料制备高纯度的和厚朴酚与厚朴酚。适用于各种型号的逆流色谱仪分离制备和厚朴酚与厚朴酚。本发明率先提出了一种可进行近克量级制备和厚朴酚与厚朴酚的工艺，本工艺具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点。
参考文献
[1]雷载权，中药学.上海 上海科技出版社，1995.p298.
[2]郭信芳，陈昌彪，李弘弢.用聚酰胺分离厚朴中厚朴酚及和厚朴酚，中草药，1995，(4)：214.
[3]S.E.Yang，M.T.Hsieh，T.H.Tsai，S.L.Hsu.Down-modulation of Bcl-XL，releaseof cytochrome c and sequential activation of caspases during honokiol-inducedapoptosis in human squamous lung cancer CH27 cells.Biochem Pharmacol.，63(2002)：1641-1651
[4]H.Nagase，K.Ikeda，Y.Sakai.Inhibitory effect of magnolol and honokiol fromMagnolia obovata on human fibrosarcoma HT-1080.Invasiveness in vitro.PlantaMed.，67(2001)：705-708
[5]Y.Fukuyama，K.Nakade，Y.Minoshima，R.Yokoyama，H.Zhai，Y.Mitsumoto.Neurotrophic activity of honokiol on the cultures of fetal rat cortical neurons.BioorgMed Chem Lett.，12(2002)：1163-1166
[6]张忠义，黄昌全，张忠义，黄昌全，葛发欢.超临界CO2萃取厚朴酚的研究，广东药学 1999，9(3)：20
Claims (3)
1、一种应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)的方法，其特征在于：分离溶剂系统由正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水组成，其用量体积比为1∶0.4∶1-1.2∶0.4-0.6，将上述溶剂体系配置于分液漏斗中充分振摇后静置分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，取100mg厚朴提取物溶解于3ml上相和3ml下相的混合物中，使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使其主机转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进样，根据检测器谱图接收目标成份。
2、根据权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)的方法，其特征在于：在进样量为600mmg厚朴粗提物的高速逆流色谱(HSCCC)的色谱图中，和厚朴酚的保留时间范围为为30-90分钟，厚朴酚的保留时间范围为90-150分钟。
3、根据权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚(honokiol)与厚朴酚(magnolol)的方法，其特征在于：采用文献[6]的方法，用超临界CO2萃取出粗提物，首先经过石油醚重结晶后得到和厚朴酚与厚朴酚粗晶体的混合物，再利用本发明所述的分离溶剂系统，进行多次进样，连续制备。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2004100360874A CN100480222C (zh) | 2004-11-18 | 2004-11-18 | 应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2004100360874A CN100480222C (zh) | 2004-11-18 | 2004-11-18 | 应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1634831A true CN1634831A (zh) | 2005-07-06 |
| CN100480222C CN100480222C (zh) | 2009-04-22 |
Family
ID=34845766
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2004100360874A Expired - Fee Related CN100480222C (zh) | 2004-11-18 | 2004-11-18 | 应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100480222C (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101735021A (zh) * | 2008-11-26 | 2010-06-16 | 湖南农业大学 | 以hp-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法 |
| CN101857531A (zh) * | 2010-06-14 | 2010-10-13 | 江西海富生物工程有限公司 | 从厚朴中提取厚朴酚及和厚朴酚的方法 |
| CN101445430B (zh) * | 2008-12-30 | 2011-08-31 | 浙江工业大学 | 一种厚朴酚与和厚朴酚的分离方法 |
| CN102351659A (zh) * | 2011-10-22 | 2012-02-15 | 恩施清江生物工程有限公司 | 一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法 |
| CN102898285A (zh) * | 2011-07-26 | 2013-01-30 | 北川安特天然药业有限公司 | 厚朴酚超临界萃取方法 |
| CN109942380A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-06-28 | 香港同盛实业有限公司 | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备大麻二酚的方法 |
| CN113917051A (zh) * | 2021-09-02 | 2022-01-11 | 四川大学华西医院 | 一种生物样品的预处理方法 |
-
2004
- 2004-11-18 CN CNB2004100360874A patent/CN100480222C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101735021A (zh) * | 2008-11-26 | 2010-06-16 | 湖南农业大学 | 以hp-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法 |
| CN101735021B (zh) * | 2008-11-26 | 2013-03-06 | 湖南农业大学 | 以hp-20大孔树脂分离纯化厚朴酚与和厚朴酚的方法 |
| CN101445430B (zh) * | 2008-12-30 | 2011-08-31 | 浙江工业大学 | 一种厚朴酚与和厚朴酚的分离方法 |
| CN101857531A (zh) * | 2010-06-14 | 2010-10-13 | 江西海富生物工程有限公司 | 从厚朴中提取厚朴酚及和厚朴酚的方法 |
| CN101857531B (zh) * | 2010-06-14 | 2012-04-25 | 江西海富生物工程有限公司 | 从厚朴中提取厚朴酚及和厚朴酚的方法 |
| CN102898285A (zh) * | 2011-07-26 | 2013-01-30 | 北川安特天然药业有限公司 | 厚朴酚超临界萃取方法 |
| CN102351659A (zh) * | 2011-10-22 | 2012-02-15 | 恩施清江生物工程有限公司 | 一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法 |
| CN102351659B (zh) * | 2011-10-22 | 2013-10-02 | 恩施清江生物工程有限公司 | 一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法 |
| CN109942380A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-06-28 | 香港同盛实业有限公司 | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备大麻二酚的方法 |
| CN109942380B (zh) * | 2018-12-14 | 2022-03-22 | 云南芙雅生物科技有限公司 | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备大麻二酚的方法 |
| CN113917051A (zh) * | 2021-09-02 | 2022-01-11 | 四川大学华西医院 | 一种生物样品的预处理方法 |
| CN113917051B (zh) * | 2021-09-02 | 2023-12-29 | 四川大学华西医院 | 一种生物样品的预处理方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN100480222C (zh) | 2009-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106866602B (zh) | 一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法 | |
| CN101709059B (zh) | 五味子单体成分的分离制备方法 | |
| CN101525357A (zh) | 一种从中药中分离制备五没食子酰基葡萄糖的方法 | |
| CN100420682C (zh) | 丹酚酸b的分离制备方法 | |
| CN101560229A (zh) | 一种何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法 | |
| CN104031013A (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸b和迷迭香酸的方法 | |
| CN105859803B (zh) | 一种没食子酰基葡萄糖的制备方法 | |
| CN100480222C (zh) | 应用高速逆流色谱分离纯化和厚朴酚与厚朴酚的方法 | |
| CN104892687A (zh) | 高速逆流色谱分离纯化十大功劳叶中单体化合物的方法 | |
| CN104530145A (zh) | 一种从柿子中提取高纯度柿单宁的方法 | |
| CN102702283B (zh) | 一种快速分离制备高纯度脱氧土大黄苷和土大黄苷的方法 | |
| CN105294722B (zh) | 一种高纯度光甘草定单体的制备方法 | |
| CN102219685B (zh) | 一种丹参丹酚酸a的制备方法 | |
| CN1634875A (zh) | 白花败酱草中几种高纯度药用物质的快速制备方法 | |
| CN101717417B (zh) | 一种肉苁蓉中松果菊苷的分离制备方法 | |
| CN105385716B (zh) | 一种采用逆流色谱技术分离大蒜中含硫化合物的方法 | |
| CN100500689C (zh) | 酸枣仁皂苷a和b的分离制备方法 | |
| CN101200433B (zh) | 高纯度辣椒碱单体的制备方法 | |
| CN101323605B (zh) | 异苯并呋喃酮类化合物的制备方法 | |
| CN102532147B (zh) | 高纯度白鲜碱单体的制备方法 | |
| CN102464586A (zh) | 一种丹酚酸a的制备方法 | |
| CN108084241B (zh) | 从羊栖菜中分离制备岩藻甾醇的方法 | |
| CN109369382B (zh) | 一种银杏酸类成分的制备方法 | |
| CN105693714B (zh) | pH‑区带精制逆流色谱分离功劳木中生物碱类化合物的方法 | |
| CN111718356B (zh) | 一种分离制备墨旱莲单体的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20090422 Termination date: 20141118 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |