CN1616039A - 一种乌头冻干粉针剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种乌头冻干粉针剂，它是由川乌、草乌提取物和药用辅料制备而成。本发明还公开了其制备方法。生物碱有效部位采用酸性乙醇提取、超滤、水解、过大孔吸附树脂除杂的方法获得，含量占到了提取物的85.0％－92.0％。含量测定和药理实验结果表明，本发明的制备方法科学、合理，有效成分损失小，生产成本低，镇静止痛效果好，具有更好的实用性。

Description

一种乌头冻干粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种乌头冻干粉针剂及其制备方法。

背景技术

川乌是毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母根；草乌是毛茛科植物北乌头Aconitum kusnezoffii Reichb.的干燥块根；两者均具有祛风除湿、温经止痛之功效。由川乌和草乌为原料制成的乌头注射液，有镇静、止痛作用，在临床上用于胃癌、肝癌等晚期癌症的疼痛治疗，有着很好的疗效。乌头注射液[部颁标准十七册；(WS-11327(ZD-1372)-2002)国家中成药标准汇编(口腔 肿瘤 儿科 分册)。国家中医药管理局，2002，346]的制备方法采用乙醇冷浸，酸水煎煮，乙醇沉淀，水解，活性炭处理的方法制成。此工艺存在以下几个缺陷：1、乙醇冷浸对于脂溶性生物碱的提取效率非常低；2、水煎煮时，提取出的树脂、鞣质、淀粉等杂质量多，给后续的除杂带来困难；3、乙醇沉淀时，大量的杂质在形成、沉积的过程中，会吸附、包裹大量的生物碱，从而使得生物碱的损失很多；4、在使用活性炭处理时，活性炭对生物碱的吸附作用非常强，在除去活性炭的同时除去了大量的生物碱[丘小惠。活性碳对乌头类生物碱的吸附作用。广州中医药大学学报，1997，14(4)：268]。经过上述工艺制成的乌头注射液，最终得到的生物碱的提取率非常低。这对于原料药材来说是一种很大的浪费，在工厂的生产中无形中增加了生产成本，增加了患者的负担。而且乌头注射液中的有效成分会发生水解，给质量的控制也带来一定的困难。

注射液对稳定性要求高，在携带、储藏、运输时容易破碎，带来许多麻烦。

在资料检索中未发现有关乌头冻干粉针剂的任何报道。

发明内容

本发明的研究人员在经过多次实验的基础上，探索出了一种更好的制备方法。将药材的酸性乙醇提取液经过超滤的方法除去大分子的杂质后，再利用大孔吸附树脂进一步分离纯化。本发明的制备方法科学、合理，对生物碱的损失小。最终保留的有效成分是乌头注射液的6倍，而且制成冻干粉针剂，使其更加稳定，使用更加方便。

本发明的目的是公开一种富含活性成分、疗效好、方便使用的乌头冻干粉针制剂。

本发明的另一个目的是提供上述冻干粉针制剂的制备方法。

本发明通过以下技术方案实现。

一、制备方法

(1)原料药材重量份配比为：川乌250，草乌250；

(2)取上述重量份药材，粉碎，加4-10倍量的酸性乙醇溶液提取2-4次，每次1-2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，高速离心，离心液用超滤膜超滤，滤液煮沸1-2小时，冷却，过已处理好的非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，先用3-5倍柱体积的5％-15％乙醇溶液洗脱，弃去，再用2-5倍柱体积60％-90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物3.4-4.8重量份。

(3)将上述提取物加注射用水溶解，滤过，加入冻干赋型剂55.2-56.6重量份，加注射用水至规定量，用葡甲胺调节pH值至5.0-6.5，灌装，冷冻干燥，即得。

川乌、草乌用酸性乙醇溶液提取，既有很高的提取率，而且可以大大减少杂质的量，为后续的除杂带来方便；用合适的超滤膜超滤，生物碱可以顺利通过滤膜，而大分子的树脂、淀粉、黏液质、鞣质等杂质被截留，从而除去了大量的杂质；利用生物碱与其它非活性成分在大孔吸附树脂上保留特性的差异，利用大孔吸附树脂对其进行进一步的纯化，使得最终得到的提取物中生物碱有效部位的含量达到85.0％-92.0％。

二、含量测定分析

1、本发明乌头冻干粉针剂中生物碱的含量测定

测定方法：取本发明乌头冻干粉针剂50支，精密称定，用50ml水溶解，加浓氨试液5ml使呈碱性，以下按照乌头注射液(WS-11327(ZD-1372)-2002)[国家中成药标准汇编(口腔肿瘤儿科分册)。国家中医药管理局，2002，346]标准中含量测定项下方法进行。5批本发明乌头冻干粉针剂均由广东天之骄药物开发有限公司提供。测定结果见表1。

                    表1  制剂中生物碱含量测定结果

                                          生物碱含量^*

                   批号

                                            (mg/支)

                     1                       0.634

                     2                       0.648

                     3                       0.582

                     4                       0.623

                     5                       0.607

          注：^*表示以乌头原碱(C₂₅H₄₁NO₉)计。

乌头注射液每支含乌头原碱为标示量0.62mg的90％-110％，即0.558-0.682mg/支，本发明乌头冻干粉针剂的5批含量测定结果为0.582-0.648mg/支，在上述范围内，说明本发明乌头冻干粉针剂的工艺稳定，质量可控，剂量准确，完全符合注射剂有效性的要求。

2、本发明提取物中生物碱含量测定

测定方法：取不同批号提取物约20mg，精密称定，用50ml水溶解，加浓氨试液5ml使呈碱性，以下按照乌头注射液(WS-11327(ZD-1372)-2002)[国家中成药标准汇编(口腔 肿瘤 儿科 分册)。国家中医药管理局，2002，346]标准中含量测定项下方法进行。5批提取物均由广东天之骄药物开发有限公司提供。测定结果见表2。

                    表2  提取物中生物碱含量测定结果

                                         生物碱含量^*

                    批号

                                             (％)

                     1                       86.3

                     2                       90.1

                     3                       85.0

                     4                       87.4

                     5                       92.0

           注：^*表示以乌头原碱(C₂₅H₄₁NO₉)计。

以上提取物含量测定结果说明，用本发明的制备方法得到的提取物中有效部位生物碱的含量为85.0％-92.0％。

三、安全性评价

1、本发明乌头冻干粉针剂中乌头碱的限量检查

测定方法：按照乌头注射液(WS-11327(ZD-1372)-2002)[国家中成药标准汇编(口腔 肿瘤 儿科 分册)。国家中医药管理局，2002，346]标准中检查项下的高效液相色谱法进行。测定结果见表3。

                     表3  制剂中乌头碱限量检查结果

                    批号                  乌头碱含量

                     1

                     2            小于对照品峰面积值

                     3            -/

                     4            小于对照品峰面积值

                     5            -/

          注：-表示未检测到。

以上乌头碱含量测定结果，本发明乌头冻干粉针剂中乌头碱含量用上述高效液相色谱方法未检测到或小于对照品的峰面积值；说明本发明乌头冻干粉针剂中有毒成分乌头碱的含量小于规定的剂量。

2、异常毒性实验

将本发明乌头冻干粉针一支用1ml注射用水溶解。取体重18-20g的健康小白鼠5只，分别由腹腔注射本发明0.15ml，观察。结果：48小时内未有小白鼠死亡的现象发生。

异常毒性实验未有小白鼠出现死亡。说明本发明乌头冻干粉针剂的制备方法科学、合理，完全符合安全性要求。

四、本发明乌头冻干粉针剂和乌头碱注射液比较

用同一批川乌、草乌药材，制成本发明乌头冻干粉针剂和乌头注射液(广东天之骄药物开发有限公司提供)，进行下列比较。结果见表4。

                  表4  本发明乌头冻干粉针剂和乌头碱注射液的比较

项目                             乌头注射液                本发明乌头冻干粉针剂

药材                      川乌250g，草乌250g              川乌250g，草乌250g

制备工艺                  乙醇冷浸，酸水煎煮，乙醇沉淀，  酸性乙醇提取、超滤、水解、

                          水解，活性炭处理                过大孔吸附树脂柱

提取物中生物碱含量(％)    25％左右                        85％-92％

产品(支)                  1000                            6000

生产周期                  长                              短

制剂稳定性                    差                      好

贮藏                          密闭、遮光              无要求

生产成本                      高                      低

相同量的同一批川乌、草乌药材，制成的本发明乌头冻干粉针剂和乌头注射液，每支生物碱含量在规定的范围内的前提下，由于本发明的制备方法科学、合理，提取效率高，最终制成的乌头冻干粉针剂的数量是乌头注射液的6倍，从而大大降低了生产成本。说明本发明的制备方法更加具有实用性。

五、本发明乌头冻干粉针剂和乌头碱注射液镇痛作用比较

乌头注射液(贵州汉方制药有限公司)；本发明乌头冻干粉针剂(广东天之骄药物开发有限公司提供)。

取雌性健康昆明种小鼠50只，水温恒定在55±0.5℃，用热板法测其基础痛阈，以小鼠舔后足为指标，选其疼痛反应潜伏期在10～30s之间的30只供实验，然后按体重分层均等随机分3组，即对照组、乌头注射液组，本发明乌头冻干粉针剂组。每组10只，分别腹腔注射给药，对照组给予等容量生理盐水。各组分别于给药前及给药后30min各测痛阈一次，痛阈超过60s者以60s记。计算痛阈值，结果见表5。

                    表5  制剂镇痛作用(X±SD)

                         鼠数            痛阈值(s)

组别

                         (只)      给药前         给药后

对照组                    10    17.74±3.58    21.52±8.74

乌头注射液组              10    16.93±3.82    36.62±7.62^*

本发明乌头冻干粉针剂组    10    17.25±3.64    38.37±8.35^*

注：与对照组比较：^*P＜0.01；

本发明乌头冻干粉针剂和乌头注射液均能显著增加小鼠的痛阈值(P＜0.01)；本发明乌头冻干粉针剂和乌头注射液相比，痛阈值提高无差异。说明：本发明乌头冻干粉针剂和乌头注射液药理作用强度相似。

六、制备实施例

实施例1：

(1)原料药材为：川乌250g，草乌250g；

(2)取上述药材，粉碎，加10倍量pH5的盐酸酸化的80％乙醇溶液提取4次，每次2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以20000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液煮沸2小时，冷却，过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的5％乙醇溶液洗脱，弃去，再用5倍柱体积90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物4.80g。

(3)将上述提取物加注射用水溶解，滤过，加入聚乙烯吡咯烷酮55.2g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺调节pH值至6.5，灌装，冷冻干燥，得本发明乌头冻干粉针剂6000支。

实施例2：

(1)原料药材为：川乌250g，草乌250g；

(2)取上述药材，粉碎，加4倍量pH3的硫酸酸化的40％乙醇溶液提取2次，每次1小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以12000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液煮沸1小时，冷却，过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的15％乙醇溶液洗脱，弃去，再用2倍柱体积60％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物3.4g。

(3)将上述提取物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇和葡聚糖56.6g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺调节pH值至5.0，灌装，冷冻干燥，得本发明乌头冻干粉针剂6000支。

实施例3：

(1)原料药材为：川乌250g，草乌250g；

(2)取上述药材，粉碎，加8倍量pH4的磷酸酸化的60％乙醇溶液提取3次，每次2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以16000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为8000的超滤膜超滤，滤液煮沸1.5小时，冷却，过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积的10％乙醇溶液洗脱，弃去，再用4倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物4.2g。

(3)将上述提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡萄糖和果糖55.8g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺调节pH值至6.0，灌装，冷冻干燥，得本发明乌头冻干粉针剂6000支。

实施例4；

(1)原料药材为：川乌250g，草乌250g；

(2)取上述药材，粉碎，加6倍量pH4.5的醋酸酸化的50％乙醇溶液提取4次，每次1小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以14000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为8000的超滤膜超滤，滤液煮沸2小时，冷却，过已处理好的NKA型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的12％乙醇溶液洗脱，弃去，再用3倍柱体积70％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物3.7g。

(3)将上述提取物加注射用水溶解，滤过，加入右旋果糖和乳糖56.3g，加注射用水至6000ml，用葡甲胺调节pH值至5.5，灌装，冷冻干燥，得本发明乌头冻干粉针剂6000支。

实施例5：

(1)原料药材为：川乌2500g，草乌2500g；

(2)取上述药材，粉碎，加7倍量pH3.5的冰醋酸和盐酸酸化的70％乙醇溶液提取2次，每次2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，以18000转/分的速度离心，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液煮沸1小时，冷却，过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积的8％乙醇溶液洗脱，弃去，再用4倍柱体积75％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物45g。

(3)将上述提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和右旋果糖555g，加注射用水至60000ml，用葡甲胺调节pH值至5.8，灌装，冷冻干燥，得本发明乌头冻干粉针剂60000支。

肌肉注射，一次1-2支，一日1-2次。

Claims (9)

1、一种乌头冻干粉针剂，其特征在于它是由川乌、草乌提取物3.4-4.8重量份和药用辅料55.2-56.6重量份制备而成；其特征还在于提取物中生物碱有效部位重量百分含量为85.0％-92.0％。

2、根据权利要求1所述的冻干粉针剂，其特征在于药用辅料为冻干赋型剂，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。

3、一种乌头冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤：

(1)原料药材重量份配比为：川乌250，草乌250；

(2)取上述重量份药材，粉碎，加4-10倍量的酸性乙醇溶液提取2-4次，每次1-2小时；合并乙醇提取液，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，高速离心，离心液用超滤膜超滤，滤液煮沸1-2小时，冷却，过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用3-5倍柱体积的5％-15％乙醇溶液洗脱，弃去，再用2-5倍柱体积60％-90％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。

(3)将上述提取物加注射用水溶解，滤过，加入冻干赋型剂，加注射用水至规定量，用葡甲胺调节pH值至5.0-6.5，灌装，冷冻干燥，即得。

4、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，酸性乙醇的浓度为40％-80％。

5、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，酸性乙醇中的酸使用但不限于盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸等中的一种、两种或几种的混合物。

6、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，酸性乙醇的pH值为3-5。

7、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，高速离心速度以12000-20000转/分为宜。

8、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所用的超滤膜截留分子量为5000-10000。

9、根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂为非极性或弱极性。