CN1597741A - 未变性天然鱼胶原的制备方法 - Google Patents
未变性天然鱼胶原的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1597741A CN1597741A CN 200410040486 CN200410040486A CN1597741A CN 1597741 A CN1597741 A CN 1597741A CN 200410040486 CN200410040486 CN 200410040486 CN 200410040486 A CN200410040486 A CN 200410040486A CN 1597741 A CN1597741 A CN 1597741A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sex change
- collagen
- natural
- ether
- glue
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种未变性天然鱼胶原的制备方法。其特点是选取富含胶原蛋白的冷冻海产鱼皮或新鲜河鱼皮100重量份，用醚2－5重量份或与水以任意比例混合的非离子表面活性剂5－10重量份溶液中浸泡5－24小时，过滤，用0.1－4M EDTA溶液500－700重量份中搅拌处理24－48小时。过滤后的沉渣100重量份，加入蛋白酶10－20重量份，用酸调节pH＝2－4，于温度4－6℃搅拌1－3天，离心过滤得到的胶原溶液中加入0.5－5MNaCl盐析、反复处理3－5次，膜透析处理3次，得到浓度为0.5－2％的高纯度未变性天然鱼胶原蛋白液。用差热仪测得变性温度河鱼天然胶原为20－28℃、海产鱼天然胶原12－25℃，电泳法测得其含有α链、β链和γ链的分子量分别为10万、20万和30万。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种未变性天然鱼胶原的制备方法，属于生物医用材料的制备领域。
二、背景技术
胶原蛋白或称胶原，是一种纤维状蛋白质，是重要的动物蛋白之一。胶原广泛地存在于各类动物体内，从脊椎动物到鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类等动物的皮肤、腱、软骨、各种内脏器官、血管壁以及食道等处都有胶原。脊椎动物体内所有蛋白质中胶原占据了总量的30％，是主要的结构蛋白质，皮肤含有胶原50％以上。
未变性天然胶原(即生物活性胶原)，是一种生物大分子，分子量约为30万。其结构仍然保持在动物体内时的天然结构，即胶原的三股螺旋结构，这种天然胶原蛋白被看作是生物体的一个组成部分而不被认为是外来物质。天然胶原有利于细胞的存活和生长、能促进血小板凝结、低抗原性和良好的生物相容性等功能，在烧伤、创伤、眼角膜疾病、美容、矫形、硬组织修复方面已得到广泛应用。Chi H.Lee，Anuj Singla andYugyung Lee，Biochemical applications of collagen，International Journal of Pharmaceutics，2001，221：1-22.由于未变性天然胶原还具有优良的保湿性能和促进表皮细胞生长繁殖，所以可有效地增强皮肤弹性、减少皱纹，所以也用于高档化妆品中。Chvapil，M.andEckmayer，Z.，Role of proteins in cosmetics，International Journal of Cosmetic Science，1985，7：41-49。
未变性天然胶原的广泛应用必然对胶原的需求量和质量的要求越来越高。目前国内所使用的未变性天然胶原主要来自于猪和牛等屠宰动物的皮肤或跟腱中，但由于全球一体化趋势等因素，使疯牛病和口蹄疫等动物传染性疾病在全球普遍流行，并且目前尚无有效的治疗方法。于是探求更高质量和更高安全性的天然胶原的来源就显得非常重要。而从人体如胎盘中提取的胶原虽安全，但数量有限。相对于猪、牛等陆生动物胶原蛋白，水产动物胶原蛋白在使用安全性方面显示其优势。Yuko Ushiki，ShunjiHattori and Shinkichi Irie，Safety aspect of collagen as a raw material for biomedicalapplication，Fragrance Journal，1997，7：42-47。
世界上海域辽阔，海岸线长，海洋渔业资源丰富，种类繁多。仅鱿鱼的捕获量，每年世界总量就达250万吨以上，中国每年鱿鱼的捕获量也有近25万吨。海洋生物的多样性、多量性都决定了海洋生物在胶原方面的利用，且鱼类，特别是海洋鱼类受环境污染小，可以得到最天然安全的天然胶原。中国是一个水产大国，无论海产鱼还是河鱼都相对丰富。几条大江贯串了整个中国，河鱼是内陆地区的主要食物之一，尽管也受到环境方面的一些影响，但随着科学养鱼的发展，各种鱼类数量日益增多。因此，鱼胶原提取用原材料是相当可观的。
目前从鱼类提取的鱼胶原蛋白主要用于(1)啤酒、葡萄酒等生产过程中的澄清剂；Roger B.Boulton，Vernon L.Singleton，Linda F.Bisson，Ralph E.Kunkee著，赵光鳌，尹卓容，张继民，杨明，李记明译，《葡萄酒酿造学——原理及应用》，中国轻工业出版社，2001，P276-277。(2)美容饮料。秦玉青，刘承初，鱿鱼皮胶原蛋白的测定与回收，《上海水产大学学报》，2002，11(2)：138-144。这些鱼胶原蛋白主要成分是水解胶原蛋白，而水解胶原蛋白是已经发生变性了的胶原蛋白，它不具有生物活性，不属于未变性天然胶原的范畴。
由于鱼生长在水中，鱼生活的环境决定了鱼胶原的变性温度低于陆生动物猪、牛等胶原的变性温度。一般从猪、牛的组织提取的未变性天然胶原变性温度为38-44℃，而河鱼天然胶原的变性温度为20-28℃，海产鱼类天然胶原的变性温度更低，一般只有12-25℃(因鱼的种类不同而不同)。由于鱼类胶原变性温度低，现有从猪、牛等陆生动物组织提取未变性天然胶原的制备技术并不适宜制备未变性天然鱼胶原。
三、发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种未变性天然鱼胶原的制备方法，其特点是用有机溶剂和非离子表面活性剂脱脂，EDTA溶液除钙，于低温和酸性条件下用蛋白酶提取获得未变性天然鱼胶原。
本发明的目的由以下技术措施实现，其中所述原料份数除特殊说明外，均为重量份数。
未变性天然鱼胶原的制备方法：
1、原料的预处理
选用富含胶原的冷冻海产鱼皮或新鲜河鱼皮，去鳞、去肉，切成0.2-2cm的小块100重量份，用醚2-5重量份，浸泡5-24小时或与水以任意比例混合的非离子表面活性剂5-10重量份浸泡5-24小时，过滤，加入0.1-4M EDTA溶液500-700重量份浸泡24-48小时，搅拌，过滤。所有操作的温度为4-6℃。所得沉渣作为以下提取原料备用。
2、未变性天然鱼胶原的提取
预处理后的鱼皮碎块100重量份，蛋白酶10-20重量份，用酸调节pH＝2-4，在4-6℃低温下处理1-3天，获得未变性天然鱼胶原蛋白液。
3、提取物的纯化
将上述胶原蛋白液用16000-20000rpm高速离心机分离，除去滤渣，上清液中加入0.5-5M NaCl盐析，所得沉淀经离心分离后用0.1-2M乙酸溶解，如此反复盐析操作3-5次，再经膜透析处理3次，获得浓度为0.5-2％的未变性天然鱼胶原纯溶液。
脱脂剂为乙醚、石油醚、乙二醇乙醚或者脂肪酸聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚非离子表面活性剂脱脂中的至少一种。
蛋白酶为胃蛋白酶、537蛋白酶或者真菌复合酶中的任一种。
制得的天然鱼胶原用差式扫描量热计进行测试，得到的未变性天然鱼胶原测试结果详见图1所示。结果表明：河鱼胶原变性温度为20-28℃，海产鱼胶原变性温度为12-25℃。分子量测试采用SDS-PAGE凝胶电泳法，详见图2所示。结果表明：其α链、β链、γ链分子量分别为10万、20万和30万。这种具有生物活性的未变性天然鱼胶原可代替猪、牛天然胶原用于组织工程、外科手术用止血纤维等生物医学领域，也可用于高级美容化妆品、保健品。
四、附图说明
图1为鱼胶原的DSC热变性温度测试图。
图2为鱼胶原的SDS-PAGE电泳分离图。
五、具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是本实施例用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述本发明的内容，作出一些非本质的改进和调整。
实施例1：将宰杀后的新鲜草鱼，取皮，除去鳞片，刮去多余的肉类组织，用高纯水洗净后，切成0.2-2cm的小碎块，取小碎块100g，加入乙醚2g、石油醚3g混合液中浸泡24小时，在0.5M EDTA溶液700g中搅拌24小时。用酸调节pH至2-4，加入胃蛋白酶12g，于温度为4-6℃，搅拌48小时。离心除去未溶解部分，上清液中加入1MNaCl盐析，用2M乙酸溶解沉淀，盐析反复处理3次。得到澄清的浓度为1-2％的粘稠状未变性天然鱼胶原溶液500g。
实施例2：取已经水洗干净的冷冻鱿鱼皮，用高纯水洗净后，切成0.2-2cm的小碎块，取100g，放入乙二醇乙醚3g、脂肪酸聚氧乙烯醚2g、烷基酚聚氧乙烯醚3g中浸泡24小时，在1M EDTA溶液600g中搅拌24小时，用酸调节pH至2.5-3.5，加入537蛋白酶10g，于温度4-6℃下搅拌48小时，经离心分离除去未溶解部分，上层清液中加入3M NaCl盐析、用0.5M乙酸溶解，盐析反复处理4次，得到浓度为0.5-1.0％未变性天然鱼胶原约400g。
实施例3：取冷冻三文鱼皮，用刀尽量刮去下层肉类组织，并去尽鳞片，水洗干净，切成碎状小块。取100g，加入乙二醇乙醚4g、脂肪酸聚氧乙烯醚3g、烷基酚聚氧乙烯醚3g的复配物非离子表面活性剂配成的500ml水溶液中浸泡48小时。过滤后在含有2M EDTA的溶液500g中搅拌40小时，过滤，用酸调节pH值2-3.5，加入真菌类复合蛋白酶15g，于温度4-6℃下搅拌72小时，经离心分离除去未溶解部分，上层清液加入5M NaCl盐析，1M乙酸溶解，盐析反复处理5次，得到浓度为0.5-1％的未变性天然鱼胶原液450g。
Claims (3)
1.未变性天然鱼胶原的制备方法，其特征在于：
(1)原料的预处理
选用富含胶原的冷冻海产鱼皮或新鲜河鱼皮，去鳞、去肉，切成0.2-2cm的小块100重量份，用醚2-5重量份，浸泡5-24小时或与水以任意比例混合的非离子表面活性剂5-10重量份浸泡5-24小时，过滤，加入0.1-4M EDTA溶液500-700重量份浸泡24-48小时，搅拌，过滤，所有操作的温度为4-6℃，所得沉渣作为以下提取原料备用。
(2)未变性天然鱼胶原的提取
将上述已预处理的原料100重量份，蛋白酶10-20重量份，用酸调节pH＝2-4，于温度4-6℃下缓慢搅拌1-3天，得到未变性天然鱼胶原蛋白液。
(3)提取物的纯化
将上述鱼胶原蛋白液，用16000-20000rpm高速离心机分离，除去滤渣，上层清液加入0.5-5M NaCl盐析，所得沉淀经离心分离后用0.1-2M乙酸溶解，如此反复盐析处理3-5次，再经膜透析处理3次，获得浓度为0.5-2％的高纯度未变性天然鱼胶原溶液。
2.如权利要求书1所述未变性天然鱼胶原的制备方法，其特征在于醚为乙醚和石油醚脱脂或者乙二醇乙醚、脂肪酸聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚非离子表面活性剂脱脂中的至少一种。
3.如权利要求书1所述未变性天然鱼胶原的制备方法，其特征在于蛋白酶为胃蛋白酶、537酸性蛋白酶或真菌复合酶中的任一种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410040486 CN1269877C (zh) | 2004-08-19 | 2004-08-19 | 未变性天然鱼胶原的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410040486 CN1269877C (zh) | 2004-08-19 | 2004-08-19 | 未变性天然鱼胶原的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1597741A true CN1597741A (zh) | 2005-03-23 |
| CN1269877C CN1269877C (zh) | 2006-08-16 |
Family
ID=34664680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200410040486 Expired - Fee Related CN1269877C (zh) | 2004-08-19 | 2004-08-19 | 未变性天然鱼胶原的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1269877C (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100345867C (zh) * | 2005-10-11 | 2007-10-31 | 大连轻工业学院 | 一种酸溶性鱼皮胶原蛋白及其制备方法 |
| CN101186786B (zh) * | 2006-11-06 | 2010-06-09 | 四川大学 | 一种从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法 |
| CN101642263B (zh) * | 2008-08-07 | 2012-01-18 | 关德智 | 一种鱼胶的生产工艺 |
| CN106032546A (zh) * | 2015-03-18 | 2016-10-19 | 上海市水产研究所 | 从鱼鳞中提取医用材料基胶原蛋白的方法 |
| CN106893329A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-06-27 | 四川大学 | 一种利用鱼加工下脚料皮制备天然胶原膜的方法 |
| CN109232908A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-01-18 | 陕西科技大学 | 一种从浸酸皮中提取未变性天然胶原的方法 |
| CN114106148A (zh) * | 2020-08-31 | 2022-03-01 | 中国海洋大学 | 一种鱼皮源医用级非变性胶原及其制备方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102154425B (zh) * | 2011-03-18 | 2013-05-01 | 北京华达杰瑞生物技术有限公司 | 非变性ⅱ型胶原蛋白生产方法 |
-
2004
- 2004-08-19 CN CN 200410040486 patent/CN1269877C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100345867C (zh) * | 2005-10-11 | 2007-10-31 | 大连轻工业学院 | 一种酸溶性鱼皮胶原蛋白及其制备方法 |
| CN101186786B (zh) * | 2006-11-06 | 2010-06-09 | 四川大学 | 一种从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法 |
| CN101642263B (zh) * | 2008-08-07 | 2012-01-18 | 关德智 | 一种鱼胶的生产工艺 |
| CN106032546A (zh) * | 2015-03-18 | 2016-10-19 | 上海市水产研究所 | 从鱼鳞中提取医用材料基胶原蛋白的方法 |
| CN106893329A (zh) * | 2017-03-22 | 2017-06-27 | 四川大学 | 一种利用鱼加工下脚料皮制备天然胶原膜的方法 |
| CN106893329B (zh) * | 2017-03-22 | 2019-02-19 | 四川大学 | 一种利用鱼加工下脚料皮制备天然胶原膜的方法 |
| CN109232908A (zh) * | 2018-09-21 | 2019-01-18 | 陕西科技大学 | 一种从浸酸皮中提取未变性天然胶原的方法 |
| CN114106148A (zh) * | 2020-08-31 | 2022-03-01 | 中国海洋大学 | 一种鱼皮源医用级非变性胶原及其制备方法 |
| CN114106148B (zh) * | 2020-08-31 | 2023-12-01 | 中国海洋大学 | 一种鱼皮源医用级非变性胶原及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1269877C (zh) | 2006-08-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Irwandi et al. | Extraction and characterization of gelatin from different marine fish species in Malaysia | |
| CN100347192C (zh) | 胶原蛋白及其制备方法 | |
| CN101628938B (zh) | 大分子胶原蛋白提取工艺 | |
| CN102676619B (zh) | 一种海洋鱼类鱼皮的综合利用工艺 | |
| CN107236777A (zh) | 从鲫鱼鱼皮中提取胶原蛋白的方法 | |
| CN102702346B (zh) | 一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法及所得到的产品 | |
| US7396912B2 (en) | Collagen production method | |
| CN103320485A (zh) | 一种医用级生物材料用鱼皮胶原的制备方法 | |
| CN1269877C (zh) | 未变性天然鱼胶原的制备方法 | |
| CN110272485B (zh) | 超声酸预处理辅助酸酶法提取白鲢鱼鱼皮胶原蛋白的方法 | |
| Wu et al. | Extraction and properties of acid-soluble collagen and pepsin-soluble collagen from silver carp (Hypophthalmichthys molitrix) scales: Prerequisite information for fishery processing waste reuse | |
| CN102276716A (zh) | 一种从牛蛙皮中提取未变性天然胶原的方法 | |
| KR101760890B1 (ko) | 콜라겐 제조방법 | |
| CN103554248A (zh) | 一种从淡水珍珠蚌肉中提取胶原蛋白的工艺方法 | |
| KR100679712B1 (ko) | 불가사리로부터 콜라겐을 제조하는 방법 | |
| JP6090823B2 (ja) | コラーゲンの抽出方法、及びコラーゲンの製造方法 | |
| CN106632665A (zh) | 一种利用乳酸提取淡水鱼皮胶原蛋白的方法 | |
| CN105481978B (zh) | 一种高纯度胶原蛋白的制备方法 | |
| CN1333082C (zh) | 一种碱溶胀－酸酶解高效提取胶原的方法 | |
| CN101245104A (zh) | 一种海洋头足类动物皮胶原蛋白及其制备方法 | |
| CN1292075C (zh) | 水溶性未变性天然胶原的制备方法 | |
| CN107815480A (zh) | 用鲶鱼鱼内脏蛋白酶提取鱼皮胶原蛋白的方法 | |
| CN105255981B (zh) | 一种非变性海蜇胶原蛋白的制备方法 | |
| CN114456256A (zh) | 一种牛跟腱胶原蛋白的提取方法 | |
| CN101157723B (zh) | 贝类外套膜胶原蛋白及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20060816 Termination date: 20100819 |