CN1563989A - 一种检测小分子化合物的方法及其专用生物芯片 - Google Patents

一种检测小分子化合物的方法及其专用生物芯片 Download PDF

Info

Publication number
CN1563989A
CN1563989A CN200410029590.7A CN200410029590A CN1563989A CN 1563989 A CN1563989 A CN 1563989A CN 200410029590 A CN200410029590 A CN 200410029590A CN 1563989 A CN1563989 A CN 1563989A
Authority
CN
China
Prior art keywords
micromolecular compound
biochip
detection
micromolecular
conjugate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200410029590.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN100357738C (zh
Inventor
孙义民
邢婉丽
王国青
杜宏武
张�荣
陆媛
王艳
程京
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tsinghua University
CapitalBio Corp
Original Assignee
BOAO BIOCHIP Co Ltd BEIJING
Tsinghua University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BOAO BIOCHIP Co Ltd BEIJING, Tsinghua University filed Critical BOAO BIOCHIP Co Ltd BEIJING
Priority to CNB2004100295907A priority Critical patent/CN100357738C/zh
Publication of CN1563989A publication Critical patent/CN1563989A/zh
Priority to JP2007504239A priority patent/JP2007530925A/ja
Priority to EP05732959A priority patent/EP1728079A4/en
Priority to PCT/CN2005/000387 priority patent/WO2005093419A1/en
Priority to US10/593,908 priority patent/US20090137411A1/en
Application granted granted Critical
Publication of CN100357738C publication Critical patent/CN100357738C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00277—Apparatus
    • B01J2219/00351—Means for dispensing and evacuation of reagents
    • B01J2219/00387—Applications using probes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/0061—The surface being organic
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/00612—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports the surface being inorganic
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/00614—Delimitation of the attachment areas
    • B01J2219/00621—Delimitation of the attachment areas by physical means, e.g. trenches, raised areas
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00605—Making arrays on substantially continuous surfaces the compounds being directly bound or immobilised to solid supports
    • B01J2219/00623—Immobilisation or binding
    • B01J2219/00626—Covalent
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
    • B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
    • B01J2219/00659—Two-dimensional arrays
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
    • B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
    • B01J2219/0072—Organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B60/00—Apparatus specially adapted for use in combinatorial chemistry or with libraries
    • C40B60/14—Apparatus specially adapted for use in combinatorial chemistry or with libraries for creating libraries

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种检测小分子化合物的方法及其专用生物芯片，涉及化合物检测领域。本发明提供的生物芯片，包括固相基质和固定在基质上的小分子化合物与载体蛋白的偶联物，利用该生物芯片检测小分子化合物的方法，包括如下步骤：1)用封闭液封阻生物芯片上的非点样区域；2)在生物芯片上的点样区域内加入待测样品或其制备液及小分子化合物特异配体的混合液，进行反应；3)通过检测小分子化合物的特异配体，确定小分子化合物是否存在及其含量。本发明将生物芯片技术和免疫分析有机结合，具有多样本、多项目、样品用量小、检测结果可靠的特点，可广泛用于小分子化合物的定性、定量或半定量检测。

Description

一种检测小分子化合物的方法及其专用生物芯片
技术领域
本发明涉及化合物检测方法及其专用设备，特别是涉及一种检测小分子化合物的方法及其专用生物芯片。
背景技术
生物芯片技术是90年代中期以来影响最深远的重大科技进展之一，是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的高度交叉的新技术。生物芯片是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有序地固化于支持物(如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体)的表面，组成密集分子排列，然后与待测生物样品中靶分子反应，通过特定的仪器，如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机对反应后信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。根据芯片上固定的探针的不同，生物芯片可以分为基因芯片、蛋白芯片、细胞芯片和组织芯片等，近年来发展起来的芯片实验室也是生物芯片的一个重要分支。
目前，小分子化合物的检测主要有两种方法，即理化分析方法和免疫分析方法。理化分析方法主要包括波谱法、色谱法及其联用技术，其中以色谱法最为常用，如高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、薄层色谱(TLC)等。免疫分析方法包括放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)等，其中以酶联免疫法最为常用。
色谱分离体系通常包括被分离组分、固定相和流动相三部分，其原理是根据不同组分在两相之间分配系数的差异，当两相作相对运动时，组分在两相中反复进行分配，随着流动相的流动，达到分离检测的目的。色谱分离法具有分离效能高、选择性好、定性和定量能力强等优点，但也存在明显的不足之处，如样品制备过程复杂，仪器价格昂贵，耗时长等。
小分子化合物的免疫分析是免疫学、分析化学、合成化学相结合的一项技术。ELISA是免疫分析的经典代表，小分子化合物的ELISA检测主要有两种方式：一为包被小分子化合物的抗体，通过酶标小分子完成样品检测；另一为包被载体偶联的小分子抗原，通过酶标抗体完成样品检测。其优点是分析速度快，灵敏度高，检测成本低，缺点是分析效率低，信息量小，只能完成单指标检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测小分子化合物的方法及其专用生物芯片。
本发明所提供的检测小分子化合物的生物芯片，包括固相基质和固定在基质上的小分子化合物与载体蛋白的偶联物。
常用的载体蛋白为人血清白蛋白(HAS)、牛血清白蛋白(BSA)、匙孔血蓝蛋白(KLH)或卵清蛋白(OVA)；固相基质可以是陶瓷、玻璃、石英、多孔硅、尼龙膜、塑料、聚苯乙烯、硝酸纤维膜、金属中的一种。
为了使检测更加方便可靠，在进行上述生物芯片设计和制备时，还可以同时固定一些参照物，参照物一般包括空白对照、阴性对照、样品制备参照、芯片固定化学参照和数据归一化参照。
本发明所提供的检测小分子化合物的生物芯片，按如下步骤制备：
1)将小分子化合物与载体蛋白偶联；
2)用自动点样装置将小分子化合物与载体蛋白偶联物分配到经化学修饰的固相基质上；
3)干燥得到生物芯片。
上述过程中，小分子化合物和载体蛋白的偶联物按常规方法制备。
本发明所提供的检测小分子化合物的方法，需要使用上述生物芯片，其具体过程如下：
1)用封闭液封阻生物芯片上的非点样区域，所述生物芯片包括固相基质和固定在基质上的小分子化合物与载体蛋白的偶联物；
2)在生物芯片上的点样区域内加入待测样品或其制备液及小分子化合物特异配体的混合液，进行反应；
3)通过检测小分子化合物的特异配体，确定小分子化合物是否存在及其含量。
上述步骤2)中所用到的小分子化合物的特异配体通常为小分子化合物的抗体或能与小分子化合物特异结合的高分子聚合物；所述步骤3)中检测小分子化合物的特异配体，是通过小分子化合物特异配体上的偶联物或与小分子化合物特异配体相结合的抗体上的偶联物完成检测，实际应用中，所述偶联物一般选择荧光分子、酶或生物素等。
本发明是生物芯片技术和免疫分析法的有机结合，主要特点有：(1)多样本：由于采用了微点样技术，使一张芯片可以同时检测多个样品；(2)多项目：一次反应可以对检测样品中的多个项目进行逐一分析；(3)检测结果可靠：通过参照物的设计，基本完成对整个检测流程进行逐步监控，有效地保证了检测结果的可靠性；(4)样品用量极小：每份样品或其制备液只需要十几微升。总之，本发明秉承了生物芯片通量高、信息量大和免疫分析法操作简单、分析速度快、灵敏度高、检测成本低的优势，克服了色谱法仪器价格昂贵，耗时长和ELISA检测分析效率低的缺点。通过本发明，用户可以根据实际需要完成样品中小分子化合物的定性、半定量或定量检测，本发明一般适用于检测分子量为1-10000道尔顿的小分子化合物。
附图说明
图1为阴性样品检测照片，该阴性样品中恩诺沙星、磺胺和链霉素三种兽药的残留量均低于国家规定的最高残留限量。
图2为恩诺沙星阳性样品检测照片，该样品中恩诺沙星的残留量高于国家规定的最高残留限量，而磺胺和链霉素的残留量低于国家规定的最高残留限量。
图3为磺胺阳性样品检测照片，该样品中磺胺的残留量高于国家规定的最高残留限量，而恩诺沙星和链霉素的残留量低于国家规定的最高残留限量。
图4为链霉素阳性样品检测照片，该样品中链霉素的残留量高于国家规定的最高残留限量，而恩诺沙星和磺胺的残留量低于国家规定的最高残留限量。
检测结果呈阳性的兽药用白框注明，其余样品点为其它兽药样品以及为保证检测结果可靠性而设计的参照点。
具体实施方式
实施例1、用于兽药残留检测的生物芯片的制备
生物芯片的制备过程如下：
1、用点样缓冲液(40％甘油、60％PBS)将恩诺沙星与BSA的偶联物、磺胺与OVA的偶联物和链霉素与OVA的偶联物及阴性对照、样品制备参照、芯片固定化学参照和数据归一化参照以1.0毫克/毫升的蛋白浓度配制成点样液，并转移到点样用384孔板中。
上述三种兽药小分子与载体蛋白的偶联方法如下：
恩诺沙星偶联物合成方法：1)准确称取1200毫克盐酸恩诺沙星溶于1.0毫升纯水中，加入2摩尔/升氢氧化钠溶液调整PH值到6.0，并放入4度冰箱预冷30分钟。然后加入DCC和NHS溶液反应0.5小时。2)称取1.0克BSA溶于0.2摩尔/升的磷酸盐缓冲液中，然后逐渐加入步骤1)的反应液中4度放置过夜。3)将制备好的全抗原溶液装入透析袋中，用磷酸盐缓冲液透析5天，其中换液次数不少于12次。然后分装保存在-20度。
磺胺偶联物合成方法：1)准确称取500毫克磺胺溶在50微升DMF中，加入50％戊二醛进行活化并放入4度冰箱反应50分钟。然后加入碳酸钠溶液继续反应1小时，测量PH值为8-9。2)称取1.0克OVA溶于0.2摩尔/升的磷酸盐缓冲液中，然后逐渐加入步骤1)的反应液中4度放置过夜。3)将制备好的全抗原溶液装入透析袋中，用磷酸盐缓冲液透析5天，其中换液次数不少于12次。然后分装保存在-20度。
链霉素偶联物合成方法：1)准确称取500毫克硫酸链霉素溶于500微升纯水中，加入2.0克羧甲基羟胺溶解后在室温反应3小时。然后加入碳酸钠溶液继续反应1小时，检测PH值在7.5后加入600毫克DCC反应2小时。2)称取1.0克OVA溶于0.2摩尔/升的磷酸盐缓冲液中，然后逐渐加入步骤1)的反应液中4度放置过夜。3)将制备好的全抗原溶液装入透析袋中，用磷酸盐缓冲液透析5天，其中换液次数不少于12次。然后分装保存在-20度。
2、通过自动点样装置将准备好的点样液按照一定的点阵排布方式分配到玻片上。每张芯片包含10(5行×2列)个阵列，每个阵列包含36(6行×6列)个样品点，点间距为400微米。每个阵列形成一个独立的反应腔；
3、将点好的芯片进行真空干燥；
4、将芯片进行真空封装，4℃保存。
通过上述方法制备的生物芯片可以同时对样品中的恩诺沙星、磺胺和链霉素进行定性、半定量或定量分析。
实施例2、通过生物芯片进行兽药残留检测
1、芯片封闭：取上述制备好的生物芯片，用10％封闭用正常羊血清溶液37℃封闭30分钟；
2、芯片的清洗和干燥：取出芯片放在清洗盒内，用PBST溶液(含0.5％的Tween-20)摇床振荡清洗5分钟，然后放在离心机内，1000rpm离心1分钟，甩干芯片；
3、一抗反应：取等体积的待测样品(或其制备液)和恩诺沙星、磺胺、链霉素的抗体混合液(每种抗体的浓度为1微克/毫升)加入到微量离心管中，混合均匀，然后吸取20微升加到芯片的反应腔内，37℃反应30分钟；
4、二抗反应：用步骤2所述的方法清洗和干燥芯片，然后加入20微升荧光标记的羊抗小鼠IgG(浓度为1微克/毫升)，37℃反应30分钟；
5、芯片扫描和数据处理：用步骤2所述的方法清洗和干燥芯片，然后进行芯片的扫描和数据处理，结果见图1-4。
结果说明：由于本方法的原理是竞争性免疫分析，所以芯片样品点信号越弱，表明样品中该兽药的残留量越高。
通过本发明所述的小分子化合物芯片检测系统，可以达到的技术指标与国家规定的最高残留限量(MRL)的对比如下：
灵敏度(ng/g) 线性范围(ng/g)   MRL(ng/g)
    恩诺沙星     1     1～50     100
    磺胺     0.5     0.5-20     25
    链霉素     5     5-200     200
注：上表中MRL的数值取各种样品类型允许的最高残留限量中的最小值。
因为本系统的灵敏度远远高于国家规定的最高残留限量，所以进行实际样品的检测时，需要对样品制备液进行稀释后检测。
对图1-4中各兽药小分子的含量说明如下：
恩诺沙星(ng/g)   磺胺(ng/g)   链霉素(ng/g)
    图1     0     0     0
    图2     200     0     0
    图3     0     50     0
    图4     0     0     400

Claims (11)

1、一种检测小分子化合物的生物芯片，包括固相基质和固定在基质上的小分子化合物与载体蛋白的偶联物。
2、根据权利要求1所述的检测小分子化合物的生物芯片，其特征在于：所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白或卵清蛋白。
3、根据权利要求1所述的检测小分子化合物的生物芯片，其特征在于：所述小分子化合物的分子量为1-10000道尔顿。
4、根据权利要求1所述的检测小分子化合物的生物芯片，其特征在于：所述生物芯片上还固定有空白对照、阴性对照、样品制备参照、芯片固定化学参照和数据归一化参照。
5、根据权利要求1所述的检测小分子化合物的生物芯片，其特征在于：所述固相基质选自经化学修饰的陶瓷、玻璃、石英、多孔硅、尼龙膜、塑料、聚苯乙烯、硝酸纤维膜、金属之一种。
6、根据权利要求1至5任一所述的检测小分子化合物的生物芯片，其特征在于：所述生物芯片按如下步骤制备：
1)将小分子化合物与载体蛋白偶联；
2)用自动点样装置将小分子化合物与载体蛋白偶联物分配到经化学修饰的固相基质上；
3)干燥得到生物芯片。
7、一种检测小分子化合物的方法，包括如下步骤：
1)用封闭液封阻生物芯片上的非点样区域，所述生物芯片包括固相基质和固定在基质上的小分子化合物与载体蛋白的偶联物；
2)在生物芯片上的点样区域内加入待测样品或其制备液及小分子化合物特异配体的混合液，进行反应；
3)通过检测小分子化合物的特异配体，确定小分子化合物是否存在及其含量。
8、根据权利要求7所述的检测小分子化合物的方法，其特征在于：步骤2)中所述的小分子化合物的特异配体为小分子化合物的抗体或能与小分子化合物特异结合的高分子聚合物。
9、根据权利要求7所述的检测小分子化合物的方法，其特征在于：步骤3)中检测小分子化合物的特异配体，是通过结合在小分子化合物特异配体上的偶联物完成检测。
10、根据权利要求7所述的检测小分子化合物的方法，其特征在于：步骤3)中检测小分子化合物的特异配体，是通过与小分子化合物特异配体特异结合的抗体上的偶联物完成检测。
11、根据权利要求9和10所述的检测小分子化合物的方法，其特征在于：所述偶联物为荧光分子、酶或生物素。
CNB2004100295907A 2004-03-26 2004-03-26 一种检测小分子化合物的方法 Expired - Fee Related CN100357738C (zh)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2004100295907A CN100357738C (zh) 2004-03-26 2004-03-26 一种检测小分子化合物的方法
JP2007504239A JP2007530925A (ja) 2004-03-26 2005-03-28 低分子化合物を検出するための方法およびバイオチップ
EP05732959A EP1728079A4 (en) 2004-03-26 2005-03-28 METHODS AND DNA CHIPS FOR THE DETECTION OF SMALL MOLECULAR COMPOUNDS
PCT/CN2005/000387 WO2005093419A1 (en) 2004-03-26 2005-03-28 Methods and biochips for detecting small molecule compounds
US10/593,908 US20090137411A1 (en) 2004-03-26 2005-03-28 Methods and biochips for detecting small molecule compounds

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2004100295907A CN100357738C (zh) 2004-03-26 2004-03-26 一种检测小分子化合物的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1563989A true CN1563989A (zh) 2005-01-12
CN100357738C CN100357738C (zh) 2007-12-26

Family

ID=34480952

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2004100295907A Expired - Fee Related CN100357738C (zh) 2004-03-26 2004-03-26 一种检测小分子化合物的方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20090137411A1 (zh)
EP (1) EP1728079A4 (zh)
JP (1) JP2007530925A (zh)
CN (1) CN100357738C (zh)
WO (1) WO2005093419A1 (zh)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1945331B (zh) * 2006-10-20 2011-06-08 邹明强 同步检测多种小分子化合物的试剂的制备及其使用方法
CN102338806A (zh) * 2010-07-23 2012-02-01 南京英诺华科技有限公司 一种新型随机任选式多项目全自动免疫分析系统
CN102426237A (zh) * 2011-09-07 2012-04-25 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 检测脑炎类病毒的ELISA-Array方法及其专用试剂盒
CN104508465A (zh) * 2012-08-10 2015-04-08 浜松光子学株式会社 表面增强拉曼散射单元
CN105137064A (zh) * 2015-07-24 2015-12-09 中国人民大学 一种小分子有机物修饰生物传感元件的方法
US9588049B2 (en) 2012-08-10 2017-03-07 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced Raman scattering unit, and method for using same
US9863884B2 (en) 2012-08-10 2018-01-09 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced Raman scattering element, and method for producing same
US9863883B2 (en) 2012-08-10 2018-01-09 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced raman scattering element
CN108163802A (zh) * 2017-12-06 2018-06-15 李瑞萱 一种抗原检测材料及其制备方法和应用
CN109613269A (zh) * 2019-01-10 2019-04-12 江苏三联生物工程有限公司 一种用于牛奶中兽药残留检测的蛋白芯片及其制备方法

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9267894B2 (en) 2012-08-10 2016-02-23 Hamamatsu Photonics K.K. Method for making surface enhanced Raman scattering device
WO2007098755A1 (en) * 2006-03-01 2007-09-07 Toxispot A/S A method for obtaining a microarray and an assay
JP5240945B2 (ja) * 2006-11-28 2013-07-17 ピクター リミテッド アッセイ膜およびその使用法
WO2010122990A1 (ja) * 2009-04-20 2010-10-28 ユニバーサル・バイオ・リサーチ株式会社 生体関連物質測定用チューブおよび定量システム
US10132755B2 (en) 2012-08-10 2018-11-20 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced Raman scattering element, and method for manufacturing surface-enhanced Raman scattering element
JP6058313B2 (ja) 2012-08-10 2017-01-11 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
JP5908370B2 (ja) 2012-08-10 2016-04-26 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
JP6080648B2 (ja) * 2013-03-29 2017-02-15 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
JP6023509B2 (ja) 2012-08-10 2016-11-09 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
JP5921381B2 (ja) 2012-08-10 2016-05-24 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
JP5945192B2 (ja) 2012-08-10 2016-07-05 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
JP5921380B2 (ja) 2012-08-10 2016-05-24 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
JP6055234B2 (ja) 2012-08-10 2016-12-27 浜松ホトニクス株式会社 表面増強ラマン散乱ユニット
CN107655860A (zh) * 2013-01-25 2018-02-02 惠普发展公司，有限责任合伙企业 化学传感装置
JP2016509675A (ja) * 2013-01-25 2016-03-31 ヒューレット−パッカード デベロップメント カンパニー エル．ピー．Ｈｅｗｌｅｔｔ‐Ｐａｃｋａｒｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｌ．Ｐ． 化学的な検知器
CN108743529A (zh) * 2018-06-09 2018-11-06 江苏海尔滋生物科技有限公司 呋喃西林微球生物胶体液及其制备方法
CN109374706B (zh) * 2018-11-16 2020-06-30 肇庆学院 一种用立方Ia3d结构介孔碳CMK-8直接电化学传感器检测痕量卡巴氧的方法
US20220163528A1 (en) 2020-07-29 2022-05-26 Pictor Limited IMMUNOASSAY FOR SARS-CoV-2 ANTIBODIES

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE195022T1 (de) * 1987-04-27 2000-08-15 Unilever Nv Spezifische bindungstestverfahren
US5120643A (en) * 1987-07-13 1992-06-09 Abbott Laboratories Process for immunochromatography with colloidal particles
US4956302A (en) * 1987-09-11 1990-09-11 Abbott Laboratories Lateral flow chromatographic binding assay device
US5275785A (en) * 1987-10-30 1994-01-04 Unilever Patent Holdings B.V. Test device for detecting an analyte in a liquid sample
AU2684488A (en) * 1988-06-27 1990-01-04 Carter-Wallace, Inc. Test device and method for colored particle immunoassay
US6352862B1 (en) * 1989-02-17 2002-03-05 Unilever Patent Holdings B.V. Analytical test device for imuno assays and methods of using same
US5075078A (en) * 1989-10-05 1991-12-24 Abbott Laboratories Self-performing immunochromatographic device
US5648274A (en) * 1991-05-29 1997-07-15 Smithkline Diagnostics, Inc. Competitive immunoassay device
DK0653639T3 (da) * 1993-11-12 2000-07-24 Unilever Nv Analyseindretninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
BE1008235A5 (nl) * 1994-03-25 1996-02-20 Univ Gent Analysemethode geschikt om beta-agonisten en beta-antagonisten op te sporen.
GB9419267D0 (en) * 1994-09-23 1994-11-09 Unilever Plc Assay devices
GB9505425D0 (en) * 1995-03-17 1995-05-03 Unilever Plc Assay devices
US5976895A (en) * 1996-03-11 1999-11-02 American Biomedica Corporation Device for the collection, testing and shipment of body fluid samples
DE69624920T2 (de) * 1996-09-27 2003-09-18 Inverness Medical Switzerland Testreagentien und Testvorrichtungen
GB2322192B (en) * 1997-02-14 2001-01-31 Unilever Plc Assay devices
US6406921B1 (en) * 1998-07-14 2002-06-18 Zyomyx, Incorporated Protein arrays for high-throughput screening
US6197599B1 (en) * 1998-07-30 2001-03-06 Guorong Chin Method to detect proteins
US6306610B1 (en) * 1998-09-18 2001-10-23 Massachusetts Institute Of Technology Biological applications of quantum dots
US6232068B1 (en) * 1999-01-22 2001-05-15 Rosetta Inpharmatics, Inc. Monitoring of gene expression by detecting hybridization to nucleic acid arrays using anti-heteronucleic acid antibodies
US6303316B1 (en) * 1999-07-02 2001-10-16 Conceptual Mind Works, Inc. Organic semiconductor recognition complex and system
US6627459B1 (en) * 2000-04-19 2003-09-30 Applied Biotech, Inc. Immunoassay controls
DE20111308U1 (de) * 2000-07-12 2001-12-20 Roboscreen Ges Fuer Molekulare Verschlussvorrichtung für Mehrfach-Reaktionsräume
US20020102617A1 (en) * 2000-08-03 2002-08-01 Macbeath Gavin Protein microarrays
WO2002012893A2 (en) * 2000-08-03 2002-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Microarrays of functional biomolecules, and uses therefor
US20020115198A1 (en) * 2000-09-20 2002-08-22 Nerenberg Michael I. Microfabricated ultrasound array for use as resonant sensors
JP2002214230A (ja) * 2001-01-24 2002-07-31 Shionogi & Co Ltd モルヒネの免疫学的測定方法
IL142246A0 (en) * 2001-03-26 2002-03-10 Applied Research Systems Method and kit for quantitation of polypeptides
US6989276B2 (en) * 2001-05-10 2006-01-24 Battelle Energy Alliance, Llc Rapid classification of biological components
US7442512B2 (en) * 2001-11-30 2008-10-28 Chemocentryx, Inc. Compositions and methods for detecting and treating diseases and conditions related to chemokine receptors
JP2003194812A (ja) * 2001-12-27 2003-07-09 Mitsubishi Heavy Ind Ltd マイクロアレイ及びこれを用いた測定方法
CN1194101C (zh) * 2002-02-01 2005-03-23 先进基因股份有限公司 供制造生物芯片用的塑料载片
AU2003239048B2 (en) * 2002-06-19 2009-03-12 Biosensor Applications International Ab Coated metal surface on solid support useful in analyte detection by displacement
CN1553186A (zh) * 2003-06-02 2004-12-08 中国医学科学院药物研究所 一种兴奋剂快速检测生物芯片及其检测方法

Cited By (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1945331B (zh) * 2006-10-20 2011-06-08 邹明强 同步检测多种小分子化合物的试剂的制备及其使用方法
CN102338806A (zh) * 2010-07-23 2012-02-01 南京英诺华科技有限公司 一种新型随机任选式多项目全自动免疫分析系统
CN102338806B (zh) * 2010-07-23 2013-09-04 江苏英诺华医疗技术有限公司 一种随机任选式多项目全自动免疫分析系统
CN102426237A (zh) * 2011-09-07 2012-04-25 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 检测脑炎类病毒的ELISA-Array方法及其专用试剂盒
CN102426237B (zh) * 2011-09-07 2014-06-04 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 检测脑炎类病毒的ELISA-Array方法及其专用试剂盒
US9658166B2 (en) 2012-08-10 2017-05-23 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced raman scattering unit, and method for using same
US9588049B2 (en) 2012-08-10 2017-03-07 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced Raman scattering unit, and method for using same
CN104508465A (zh) * 2012-08-10 2015-04-08 浜松光子学株式会社 表面增强拉曼散射单元
US9863884B2 (en) 2012-08-10 2018-01-09 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced Raman scattering element, and method for producing same
US9863883B2 (en) 2012-08-10 2018-01-09 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced raman scattering element
CN104520694B (zh) * 2012-08-10 2018-05-15 浜松光子学株式会社 表面增强拉曼散射单元及其使用方法
US10184895B2 (en) 2012-08-10 2019-01-22 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced raman scattering unit, and method for using same
US10551322B2 (en) 2012-08-10 2020-02-04 Hamamatsu Photonics K.K. Surface-enhanced Raman scattering unit including integrally formed handling board
CN105137064A (zh) * 2015-07-24 2015-12-09 中国人民大学 一种小分子有机物修饰生物传感元件的方法
CN108163802A (zh) * 2017-12-06 2018-06-15 李瑞萱 一种抗原检测材料及其制备方法和应用
CN109613269A (zh) * 2019-01-10 2019-04-12 江苏三联生物工程有限公司 一种用于牛奶中兽药残留检测的蛋白芯片及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP1728079A4 (en) 2008-05-14
CN100357738C (zh) 2007-12-26
EP1728079A1 (en) 2006-12-06
WO2005093419A1 (en) 2005-10-06
JP2007530925A (ja) 2007-11-01
US20090137411A1 (en) 2009-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100357738C (zh) 一种检测小分子化合物的方法
AU680270B2 (en) Method for non-competitive binding assays
FI76888C (fi) Nya medel och foerpackningar foer immunologiska analyser.
US4948726A (en) Enzyme immunoassay based on membrane separation of antigen-antibody complexes
CN1700009A (zh) 用单一捕获剂定量检测特异性分析物的方法及其试剂盒
US20070048795A1 (en) Immunoaffinity separation and analysis compositions and methods
Rennard et al. Enzyme linked immunoassay (ELISA) for connective tissue proteins: type I collagen
Schroeder et al. Immunochemiluminometric assay for hepatitis B surface antigen.
US6087088A (en) Binding assays using more than one label for determining analyte in the presence of interfering factors
US20080138831A1 (en) Immunological assay and chip
JPH063449B2 (ja) 不均質免疫学的測定試験に用いるための安定な固定化ハプテン試薬及びその製造方法並びに用途
Shilova et al. High molecular weight neoglycoconjugates for solid phase assays
CN1217193C (zh) 心肌肌钙蛋白鲁米诺化学发光免疫分析检测方法
US7846713B2 (en) Calibrating microarrays
US8501496B2 (en) Immunoassay cuvettes
US20060008793A1 (en) Protein chips detecting system which can simultaneously detect multi target
EP1239285A1 (en) Improved homogeneous immunoassay method
EP0460097A4 (en) Method and diagnostic test kit for detection of anti-cardiolipin
ES2557942T3 (es) Método de examen de una diana biológica para determinar interacciones débiles usando cromatografía de afinidad débil
CN86105930A (zh) 受体抗体夹层检测法
CA1301646C (en) Method for diagnostic immunoassay by solid phase separation
US20220221465A1 (en) Support for fluorescence polarization immunoassay, fluorescence polarization immunoassay kit and fluorescence polarization immunoassay
WO1999041611A1 (en) Assaying of antibodies directed against one or more antigens of helicobacter pylori in biological liquids by a heterogeneous immunologic method of the reverse type
AU7255594A (en) Water soluble polymers for use in immunoassays and dna hybridization assays
JP2709296B2 (ja) 免疫学的分析方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C56 Change in the name or address of the patentee

Owner name: CAPITALBIO CORPORATION CO., LTD.

Free format text: FORMER NAME: CAPITALBIO CORPORATION

CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 102206 Beijing City, Changping District Life Science Park Road No. 18

Patentee after: CAPITALBIO CORPORATION

Patentee after: Tsinghua University

Address before: 102206 Beijing City, Changping District Life Science Park Road No. 18

Patentee before: Capitalbio Corporation

Patentee before: Tsinghua University

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20071226

Termination date: 20210326

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee