CN1556707A

CN1556707A - 使用选择性iNOS抑制剂的眼科疾病治疗方法

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Publication number: CN1556707A
Application number: CNA028185854A
Authority: CN
Inventors: Pt; P·T·马宁; ��ɶ��ؼ��; J·R·康纳尔
Original assignee: Pharmacia LLC
Current assignee: Pharmacia LLC
Priority date: 2001-09-24
Filing date: 2002-09-24
Publication date: 2004-12-22
Also published as: CA2455910A1; JP2005506986A; BR0212991A; EP1429777A4; WO2003026668A1; PL369338A1; KR20040039393A; ZA200402285B; IL161004A0; EP1429777A1; US20030109522A1; MXPA04002711A; AU2002327041A2

Abstract

本发明描述了用于预防和治疗眼科病症的治疗方法，包括给有此需要的受试者施用诱导型一氧化氮合酶的选择性抑制剂。

Description

使用选择性iNOS抑制剂的眼科疾病治疗方法

发明背景

本发明一般涉及使用诱导型一氧化氮合酶(iNOS)选择性抑制剂的治疗方法，更特别涉及用于预防和治疗涉及过度iNOS活性的眼科病症和疾病的新方法。

在二十世纪八十年代早期发现，由乙酰胆碱引起的血管松弛取决于血管内皮的存在。现在已知，介导这样的血管松弛的称为内皮衍生松弛因子(EDRF)的衍生自内皮的因子是一氧化氮(NO)。NO是通过一氧化氮合酶(NOS)在血管内皮中产生的自由基气体。人们知道NO作为血管舒张剂的活性已有一百多年了。此外，NO是衍生自已知的硝基血管扩张剂，包括亚硝酸戊酯和甘油三硝酸酯(Glycerytrinitrate)的活性物质。一氧化氮还是可溶性鸟苷酸环化酶的内源性刺激剂，并因此刺激环鸟苷酸(cGMP)生成。当NOS被N-一甲基精氨酸(L-NMMA)抑制时，cGMP形成被完全阻止。除了内皮依赖性松弛作用以外，已知NO还涉及多种生物活动，包括吞噬细胞的细胞毒害性和中枢神经系统中细胞与细胞之间的通讯。

与确定出EDRF是NO这一事实相一致的是，发现了NO是通过NO合酶的作用由氨基酸L-精氨酸合成的这一生化途径。有至少3种如下所述的NO合酶类型：

(i)组成型、Ca++/钙调蛋白依赖性酶，其位于内皮中，作为对受体或身体刺激的反应而释放出NO。

(ii)组成型、Ca++/钙调蛋白依赖性酶，其位于脑中，作为对受体或身体刺激的反应而释放出NO。

(iii)Ca++非依赖性酶，是130kD的蛋白，其是在血管平滑肌、巨噬细胞、内皮细胞和多种其它细胞被内毒素和细胞因子激活之后诱导产生的。一旦表达，这种诱导型一氧化氮合酶(下文中称为“iNOS”)就在长时间内连续产生NO。

因此，由一氧化氮合酶家族产生的一氧化氮具有多种生理和病生理作用(Moncada等人，Pharmacol.Rev.43：109-142，1991)。分别由这两种组成型酶释放的NO起几种生理反应的转导机制的作用。而由这种诱导型酶产生的NO是肿瘤细胞和侵袭性微生物的细胞毒害分子。诱导型NOS还与骨关节炎的炎症有关。

在CNS中，诱导型NOS似乎与特征是几种人病症的神经变性有关。更具体来说，iNOS通常不在脑中表达，但是在损伤例如病毒感染或创伤之后可在星形胶质细胞和小神经胶质细胞中诱导产生。例如，脑缺血在脑中诱导iNOS活性。在iNOS被剔除(knockout)的小鼠中，缺血诱导的脑梗塞在体积上比野生型对照中的梗塞小很多(Shareef等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.40：2884-91，1999)。诱导型NOS涉及与CNS疾病和病症例如中风、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默氏病和获得性免疫缺陷综合征有关的神经变性(Shareef等人)。

此外，NOS同工型在正常和青光眼视神经头的分布表明了iNOS涉及青光眼的神经变性(Shareef等人)。正常视神经头似乎表达两种组成型NOS((i)型和(ii)型)。(i)型存在于遍布视神经及其血管系统的很多星形胶质细胞中，并且可能在细胞间信号传递以及调节血管舒张和血流方面起作用。(ii)型位于遍布视神经头血管系统的血管内皮中，并且除了帮助调节血流以外，还具有神经保护作用。与其相反，iNOS不在视神经头中正常表达，但是似乎出现在具有实验诱导的、慢性中等程度增高的眼内压(IOP)的大鼠的视神经中(Shareef等人)。在具有慢性中等程度增高的IOP的大鼠中，氨基胍—一种iNOS抑制剂阻断视网膜神经节细胞损失(Neufeld等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA96：9944-48，1999)。此外，特征是炎症的眼色素层炎可能涉及增高的iNOS活性，该增高的活性是由细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的。

下列各出版物公开了抑制一氧化氮合成，并优选抑制诱导型一氧化氮合酶的化合物：

PCT专利申请WO 96/35677.

PCT专利申请WO 96/33175.

PCT专利申请WO 96/15120.

PCT专利申请WO 95/11014.

PCT专利申请WO 95/11231.

PCT专利申请WO 99/46240.

PCT专利申请WO 95/24382.

PCT专利申请WO 94/12165.

PCT专利申请WO 94/14780.

PCT专利申请WO 93/13055.

PCT专利申请WO 99/62875.

欧洲专利EP 0446699A1.

U.S.专利5,132,453.

U.S.专利5,684,008.

U.S.专利5,830,917.

U.S.专利5,854,251.

U.S.专利5,863,931.

U.S.专利5,919,787.

U.S.专利5,945,408.

U.S.专利5,981,511。

PCT专利申请WO 95/25717公开了一些用于抑制诱导型一氧化氮合酶的脒基衍生物。

PCT专利申请WO 99/6287公开了另外一些用于抑制诱导型一氧化氮合酶的脒基化合物。

从背景技术可知，人们在下述方面表现出的兴趣越来越大：发现用于涉及过度iNOS活性的各种眼科病症的新治疗剂和方法，以提高整个疗效，并具有最小毒性和不利副作用。虽然关于iNOS的生物化学和功能的基础发现表明其涉及包括眼科病症和视网膜疾病等在内的多种病症，但是目前用于治疗和预防这些病症的已知方法不包括使用iNOS选择性抑制剂的治疗方法。因此，发现和描述使用新的iNOS选择性抑制剂来治疗涉及过度iNOS活性的眼科以及视网膜病症的新治疗方法将是有益的。

发明概述

本发明涉及在需要治疗或预防眼科病症的受试者中治疗或预防这种疾病的方法，所述方法包括给该受试者施用眼科病症有效量的诱导型一氧化氮合酶选择性抑制剂，其中所述抑制剂选自：

式I化合物或其可药用盐，

其中：

R¹选自H、卤素和烷基，所述烷基可任选被一个或多个卤素取代；

R²选自H、卤素和烷基，所述烷基可任选被一个或多个卤素取代；

条件是：R¹或R²当中至少有一个含有卤素；

R⁷选自H和羟基；

J选自羟基、烷氧基和NR³R⁴，其中：

R³选自H、低级烷基、低级链烯基和低级炔基；

R⁴选自H和杂环，其中在所述杂环中至少有一个环单元是碳，并且有1-约4个独立地选自氧、氮和硫的杂原子，所述杂环可任选被下列基团取代：杂芳基氨基、N-芳基-N-烷基氨基、N-杂芳基氨基-N-烷基氨基、卤代烷硫基、烷酰氧基、烷氧基、杂芳烷氧基、环烷氧基、环烯氧基、羟基、氨基、硫基、硝基、低级烷基氨基、烷硫基、烷硫基烷基、芳基氨基、芳烷基氨基、芳硫基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷基磺酰氨基、烷基氨基磺酰基、酰氨基磺酰基、一烷基酰氨基磺酰基、二烷基酰氨基磺酰基、一芳基酰氨基磺酰基、芳基磺酰氨基、二芳基酰氨基磺酰基、一烷基一芳基酰氨基磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、杂芳硫基、杂芳基亚磺酰基、杂芳基磺酰基、烷酰基、链烯酰基、芳酰基、杂芳酰基、芳烷酰基、杂芳烷酰基、卤代烷酰基、烷基、链烯基、炔基、亚烷二氧基、卤代亚烷二氧基、环烷基、环烯基、低级环烷基烷基、低级环烯基烷基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基卤代烷基、羟基芳烷基、羟基烷基、羟基杂芳烷基、卤代烷氧基烷基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷氧基、芳氧基烷基、饱和杂环基、部分饱和杂环基、杂芳基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳基链烯基、杂芳基链烯基、氰基烷基、二氰基烷基、酰胺基烷基、二酰胺基烷基、氰基烷氧羰基烷基、烷氧羰基烷基、二烷氧羰基烷基、氰基环烷基、二氰基环烷基、酰胺基环烷基、二酰胺基环烷基、烷氧羰基氰基环烷基、烷氧羰基环烷基、二烷氧羰基环烷基、甲酰基烷基、酰基烷基、二烷氧基膦酰基烷基、二芳烷氧基膦酰基烷基、膦酰基烷基、二烷氧基膦酰基烷氧基、二芳烷氧基膦酰基烷氧基、膦酰基烷氧基、二烷氧基膦酰基烷基氨基、二芳烷氧基膦酰基烷基氨基、膦酰基烷基氨基、二烷氧基膦酰基烷基、二芳烷氧基膦酰基烷基、胍基、脒基和酰基氨基；

式II化合物或其可药用盐，

其中X选自-S-、-S(O)-和-S(O)₂-；

R¹²选自C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₅烷氧基-C₁烷基和C₁-C₅烷硫基-C₁烷基，其中这些基团分别可任选被一个或多个选自-OH、烷氧基和卤素的取代基取代；

R¹³和R¹⁸是这样选择的，R¹⁸选自-OR²⁴和-N(R²⁵)(R²⁶)，且R¹³选自-H、-OH、-C(O)-R²⁷、-C(O)-O-R²⁸和-C(O)-S-R²⁹；或者R¹⁸是-N(R³⁰)-，且R¹³是-C(O)-，其中R¹⁸和R¹³与它们所连接的原子一起形成环；或者R¹⁸是-O-，且R¹³是-C(R³¹)(R³²)-，其中R¹⁸和R¹³与它们所连接的原子一起形成环；如果R¹³是-C(R³¹)(R³²)-，则R¹⁴是-C(O)-O-R³³；否则R¹⁴是-H。R¹¹、R¹⁵、R¹⁶和R¹⁷独立地选自-H、卤素、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基和C₁-C₅烷氧基-C₁烷基；

R¹⁹和R²⁰独立地选自-H、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基和C₁-C₅烷氧基-C₁烷基；

R²¹选自-H、-OH、-C(O)-O-R³⁴和-C(O)-S-R³⁵，且R²²选自-H、-OH、-C(O)-O-R³⁶和-C(O)-S-R³⁷；或者R²¹是-O-，且R²²是-C(O)-，其中R²¹和R²²与它们所连接的原子一起形成环；或者R²¹是-C(O)-，且R²²是-O-，其中R²¹和R²²与它们所连接的原子一起形成环；

R²³是C₁烷基；

R²⁴选自-H和C₁-C₆烷基，其中当R²⁴是C₁-C₆烷基时，R²⁴可任选被一个或多个选自下列的基团取代：环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R²⁵选自-H、烷基和烷氧基，且R²⁶选自-H、-OH、烷基、烷氧基、-C(O)-R³⁸、-C(O)-O-R³⁹和-C(O)-S-R⁴⁰；其中当R²⁵和R²⁶独立地为烷基或烷氧基时，R²⁵和R²⁶独立地可任选被一个或多个选自下列的基团取代：环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；或者R²⁵是-H；且R²⁶选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²、R³³、R³⁴、R³⁵、R³⁶、R³⁷、R³⁸、R³⁹和R⁴⁰独立地选自-H和烷基，其中所述烷基可任选被一个或多个选自下列的基团取代：环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

其中当任何R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹、R²²、R²³、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²、R³³、R³⁴、R³⁵、R³⁶、R³⁷、R³⁸、R³⁹和R⁴⁰独立地为选自烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的基团时，则该基团可任选被一个或多个选自-OH、烷氧基和卤素的取代基取代；

式III化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴¹是H或甲基；且

R⁴²是H或甲基；

式IV化合物或其可药用盐，

式V化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴³选自氢、卤素、C₁-C₅烷基和被烷氧基或一个或多个卤素取代的C₁-C₅烷基；

R⁴⁴选自氢、卤素、C₁-C₅烷基和被烷氧基或一个或多个卤素取代的C₁-C₅烷基；

R⁴⁵是C₁-C₅烷基或被烷氧基或一个或多个卤素取代的C₁-C₅烷基；

式VI化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴⁶是C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；

式VII化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴⁷选自氢、卤素、C₁-C₅烷基和被烷氧基或一个或多个卤素取代的C₁-C₅烷基；

R⁴⁸选自氢、卤素、C₁-C₅烷基和被烷氧基或一个或多个卤素取代的C₁-C₅烷基；

R⁴⁹是C₁-C₅烷基或被烷氧基或一个或多个卤素取代的C₁-C₅烷基；

式VIII化合物或其可药用盐，

其中：

R⁵⁰是C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；

式IX化合物或其可药用盐，

其中：

R⁵⁰选自氢、卤素和C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；

R⁵¹选自氢、卤素和C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；

R⁵²是C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；

R⁵³选自氢、卤素和C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；且

R⁵⁴选自卤素和C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；

和式X化合物或其可药用盐，

其中：

R⁵⁵是C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代。

眼科病症是例如青光眼、视网膜炎、视网膜缺血或与视网膜缺血有关的病症，视网膜病性病症例如糖尿病性视网膜病、成年视网膜病或视网膜静脉阻塞性视网膜病，眼色素层炎或身体创伤。

上述方法可用于治疗和预防涉及iNOS活性增高的眼科病症，包括青光眼、视网膜炎、视网膜病和眼色素层炎。

发明详述

提供下面的详细描述是为了帮助本领域技术人员实施本发明。然而，该详细描述不应当被解释为不适当地限制本发明，因为在不背离由权利要求书限定的范围的情况下，本领域技术人员可对本文所述的示例性实施方案作出改进和改变。

在本文中引用的每一原始参考文献的内容，包括在原始参考文献中引用的参考文献的内容都全文引入本文以供参考。

本发明包括使用新的选择性iNOS抑制剂来治疗或预防眼科病症的治疗方法，包括预防和治疗青光眼、视网膜炎、视网膜病和眼色素层炎的治疗方法。所述治疗方法包括施用具有选自下文所述式I-X的式的诱导型一氧化氮合酶选择性抑制剂。

a.定义

提供下列定义来帮助理解本发明的详细描述：

单独或联合使用的术语“烷基”是指无环烷基，其是直链或支链的，优选包含1-约10个碳原子，更优选包含1-约6个碳原子。“烷基”还包括具有3-约7个碳原子，优选3-5个碳原子的环状烷基。所述烷基可任选被如下文所定义的基团取代。这样的基团的实例包括甲基、乙基、氯乙基、羟基乙基、正丙基、异丙基、正丁基、氰基丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、氨基戊基、异戊基、己基、辛基等。

术语“链烯基”是指不饱和无环烃基，其是直链或支链的，并含有至少一个双键。这样的基团含有2-约6个碳原子，优选2-约4个碳原子，更优选2-约3个碳原子。所述链烯基可任选被如下文所定义的基团取代。合适的链烯基的实例包括丙烯基、2-氯丙烯基、丁烯-1-基、异丁烯基、戊烯-1-基、2-甲基丁烯-1-基、3-甲基丁烯-1-基、己烯-1-基、3-羟基己烯-1-基、庚烯-1-基和辛烯-1-基等。

术语“炔基”是指不饱和无环烃基，其是直链或支链的，并含有一个或多个三键。这样的基团含有2-约6个碳原子，优选2-约4个碳原子，更优选2-约3个碳原子。所述炔基可任选被如下文所定义的基团取代。合适的炔基的实例包括乙炔基、丙炔基、羟基丙炔基、丁炔-1-基、丁炔-2-基、戊炔-1-基、戊炔-2-基、4-甲氧基戊炔-2-基、3-甲基丁炔-1-基、己炔-1-基、己炔-2-基、己炔-3-基、3，3-二甲基丁炔-1-基等。

术语“烷氧基”是指分别具有烷基部分的直链或支链含氧基团，所述烷基部分包含1-约6个碳原子，优选1-约3个碳原子，例如甲氧基。术语“烷氧基烷基”是指具有一个或多个烷氧基的烷基，所述烷氧基连接在烷基上以形成一烷氧基烷基和二烷氧基烷。这样的基团的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基和叔丁氧基烷基。“烷氧基”可进一步被一个或多个卤素原子，例如氟、氯或溴取代以提供“卤代烷氧基”。这样的基团的实例包括氟甲氧基、氯甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟乙氧基、氟乙氧基、四氟乙氧基、五氟乙氧基和氟丙氧基。

术语“烷硫基”是指包含连接在二价硫原子上的具有1-约6个碳原子的直链或支链烷基的基团。“低级烷硫基”的一个实例是甲硫基(CH₃-S-)。

术语“烷硫基烷基(alkylthioalky)”是指连接在烷基上的烷硫基。这样的基团的实例包括甲硫基甲基。

术语“卤素”是指卤素原子，例如氟、氯、溴或碘原子。

术语“杂环基”是指饱和或不饱和单环或多环碳环，其中有一个或多个碳原子被N、S、P或O代替。其包括例如下列结构：

或

其中Z、Z¹、Z²或Z³是C、S、P、O或N，条件是：Z、Z¹、Z²或Z³当中有一个不是碳，但是当通过双键与另一个Z原子连接时或者当与另一O或S原子连接时，其不是O或S。此外，任选的取代基应当理解为只有分别是C时才连接在Z、Z¹、Z²或Z³上。术语“杂环基”还包括全饱和环结构，例如哌嗪基、二氧杂环己烷基、四氢呋喃基、环氧乙烷基、氮杂环丙烷基、吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、噻唑烷基等。术语“杂环基”还包括部分不饱和环结构例如二氢呋喃基、吡唑啉基、咪唑啉基、吡咯啉基、苯并二氢吡喃基、二氢噻吩基等。

术语“杂芳基”是指全不饱和杂环。

在“杂环”或“杂芳基”中，与目的分子连接的点可以在杂原子上或者在环内的其它位置上。

术语“环烷基”是指单环或多环碳环，其中每个环含有3-约7个碳原子，优选3-约5个碳原子。实例包括基因例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环烯基和环庚基。术语“环烷基”还包括螺环系统，其中环烷基环具有与苯并硫杂_的7-元杂环共用的碳环原子。

术语“氧代”是指双键氧。

术语“烷氧基”是指包含与氧原子键合的烷基的基团，例如甲氧基。更优选的烷氧基是具有1-约10个碳原子的“低级烷氧基”。还更优选的烷氧基具有1-约6个碳原子。这样的基团的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基和叔丁氧基。

术语“芳基”是指全不饱和单环或多环碳环，包括但不限于取代或未取代的苯基、萘基或蒽基。

术语“任选取代的”是指所述基团上的氢可以，但不是必须被取代。因此，短语“可任选被一个或多个取代基取代”是指，如果所述基团被取代，则也可以发生一次以上的取代。在这方面，如果存在一个以上任选的取代基，则可以选择取代基，或者可以选择取代基的组合，或者可以选择一个以上的相同取代基。例如但不限于，短语“C₁-C₅烷基可任选被一个或多个卤素或烷氧基取代”应当是指，例如该甲基、乙基、丙基、丁基或戊基可在所有可被取代的位置上具有：氢、氟、氯或其它卤素，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或其它烷氧基，及其组合。非限制性实例包括：丙基、异丙基、甲氧基丙基、氟甲基、氟丙基、1-氟-甲氧基甲基等。

当用结构式和命名来描述化合物时，打算让命名与所给出的结构式一致，类似地，也打算让结构式与所给出的命名一致。

本文所用术语“受试者(subject)”是指作为治疗、观测或试验对象的动物，在一个实施方案中是哺乳动物，在一个示例性实施方案中，特别是指人。

本文所用术语“给药”和“治疗”是指任何处置、作用、施用、治疗等，其中是对受试者，尤其是人进行医疗帮助，以直接或间接改善受试者病症。

本文所用术语“治疗化合物”是指可用于预防或治疗眼科病症的化合物。

术语“联合治疗”是指施用两种或更多种治疗化合物来治疗本文所述的病症或疾病例如青光眼、视网膜炎、视网膜病、眼色素层炎以及特征是至少部分是视网膜神经变性的眼科病症。这样的给药包括以基本上同时的方式，例如在具有固定活性组分比例的单一胶囊中，或者在多个分别装有各活性组分的单独胶囊中一起施用这些治疗剂。此外，这样的给药还包括以顺序的方式使用每一类治疗剂。在每种情况下，治疗方案都将给本文所述病症或疾病的治疗提供药物联合的有益作用。

本文所用术语“治疗组合”是指两种或更多种治疗化合物以及用于提供剂型的任何可药用载体的组合，其在受试者中在所需时间产生每一种治疗化合物的有益作用，无论这些治疗化合物是基本上同时还是顺序给药。

本文所用术语“治疗有效”是指治疗化合物的量的特征，或在联合治疗中联合使用的治疗化合物的量的特征。该量或联合量能实现预防、避免、减轻或消除眼科病症的目标。

术语“眼科病症有效”是指治疗化合物的量的特征，或在联合治疗中联合使用的治疗化合物的量的特征。该量或联合量能实现预防、避免、减轻或消除眼科病症的目标。

术语“诱导型一氧化氮合酶”和“iNOS”在本文中是可互换地使用，并且是指Ca⁺²非依赖性的诱导同工型一氧化氮合酶。

术语“诱导型一氧化氮合酶选择性抑制剂”、“选择性iNOS抑制剂”和“iNOS选择性抑制剂”在本文中是可互换地使用，并且是指能够选择性地抑制Ca⁺²非依赖性的诱导同工型一氧化氮合酶的治疗化合物。选择性iNOS抑制剂定义为，与内皮NOS或神经元NOS相比，产生对iNOS的选择性抑制，这样体内给药产生效力(在啮齿动物内毒素模型中ED₅₀小于100mg/kg，但优选小于10mg/kg)，并且相对于eNOS的选择性是至少20倍，但优选100倍或更大(通过评价平均动脉血压来测定的)，相对于nNOS的选择性是至少20倍，但优选100倍或更大(通过胃肠道经过或阴茎勃起降低测定的)。

术语“前药”是指这样的化合物，其是药物前体，在施用给受试者并且吸收后，在体内经由某些过程例如代谢过程转化成活性成分。转化过程所生成的其它产物易于被身体处置。更优选的前药是涉及产生通常被安全接受的产物的转化过程的那些。

术语“眼科病症”是指眼睛的任何损伤或损害，其导致眼睛的功能被破坏，并涉及iNOS活性水平增高，这种增高的iNOS活性是由于原发损伤或损害引起的，或者是由于继发、延迟和进行性破坏机制(由于发生了原发破坏事件而由细胞引起的)造成的。这样的原发损伤或损害包括身体创伤例如粉碎性或压迫性损伤，青光眼、视网膜炎、视网膜病，包括成年视网膜病、糖尿病性视网膜病和视网膜静脉阻塞性视网膜病，眼色素层炎和视网膜缺血。继发破坏机制包括导致神经毒害分子，包括NO产生和释放的任何机制，包括细胞程序死亡，由于线粒体膜渗透性发生改变而导致的细胞能量贮藏耗尽，释放或不能再摄取过量谷氨酸，再灌注损伤，以及细胞因子活动和炎症。

术语“视网膜病性”是指无论病因是什么，导致视网膜病的损伤或损害。

在选择性iNOS抑制剂的一个例证性实例中，治疗是经由式I化合物或其可药用盐进行的，

其中：

条件是：R¹或R²当中至少有一个含有卤素；

R⁷选自H和羟基；和

J选自羟基、烷氧基和NR³R⁴，其中：

R³选自H、低级烷基、低级链烯基和低级炔基；且

R⁴选自H和杂环，其中在所述杂环中至少有一个环单元是碳，并且有1-约4个独立地选自氧、氮和硫的杂原子，所述杂环可任选被下列基团取代：杂芳基氨基、N-芳基-N-烷基氨基、N-杂芳基氨基-N-烷基氨基、卤代烷硫基、链烷酰氧基、烷氧基、杂芳烷氧基、环烷氧基、环烯氧基、羟基、氨基、硫基、硝基、低级烷基氨基、烷硫基、烷硫基烷基、芳基氨基、芳烷基氨基、芳硫基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷基磺酰氨基、烷基氨基磺酰基、酰氨基磺酰基、一烷基酰氨基磺酰基、二烷基酰氨基磺酰基、一芳基酰氨基磺酰基、芳基磺酰氨基、二芳基酰氨基磺酰基、一烷基一芳基酰氨基磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、杂芳硫基、杂芳基亚磺酰基、杂芳基磺酰基、烷酰基、链烯酰基、芳酰基、杂芳酰基、芳烷酰基、杂芳烷酰基、卤代链酰基、烷基、链烯基、炔基、亚烷二氧基、卤代亚烷二氧基、环烷基、环烯基、低级环烷基烷基、低级环烯基烷基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基卤代烷基、羟基芳烷基、羟基烷基、羟基杂芳烷基、卤代烷氧基烷基、芳基、芳烷基、芳氧基、芳烷氧基、芳氧基烷基、饱和杂环基、部分饱和杂环基、杂芳基、杂芳氧基、杂芳氧基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、芳基链烯基、杂芳基链烯基、氰基烷基、二氰基烷基、酰胺基烷基、二酰胺基烷基、氰基烷氧羰基烷基、烷氧羰基烷基、二烷氧羰基烷基、氰基环烷基、二氰基环烷基、酰胺基环烷基、二酰胺基环烷基、烷氧羰基氰基环烷基、烷氧羰基环烷基、二烷氧羰基环烷基、甲酰基烷基、酰基烷基、二烷氧基膦酰基烷基、二芳烷氧基膦酰基烷基、膦酰基烷基、二烷氧基膦酰基烷氧基、二芳烷氧基膦酰基烷氧基、膦酰基烷氧基、二烷氧基膦酰基烷基氨基、二芳烷氧基膦酰基烷基氨基、膦酰基烷基氨基、二烷氧基膦酰基烷基、二芳烷氧基膦酰基烷基、胍基、脒基和酰基氨基；

在另一个实施方案中，本发明提供了使用式II化合物或其盐的治疗：

在式II结构中，X选自-S-、-S(O)-和-S(O)₂-。X优选是-S-。R¹²选自C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₅烷氧基-C₁烷基和C₁-C₅烷硫基-C₁烷基，其中这些基团分别可任选被一个或多个选自-OH、烷氧基和卤素的取代基取代。R¹²优选为C₁-C₆烷基，所述烷基可任选被选自-OH、烷氧基和卤素的取代基取代。对于R¹³和R¹⁸，R¹⁸选自-OR²⁴和-N(R²⁵)(R²⁶)，且R¹³选自-H、-OH、-C(O)-R²⁷、-C(O)-O-R²⁸和-C(O)-S-R²⁹；或者R¹⁸是-N(R³⁰)-，且R¹³是-C(O)-，其中R¹⁸和R¹³与它们所连接的原子一起形成环；或者R¹⁸是-O-，且R¹³是-C(R³¹)(R³²)-，其中R¹⁸和R¹³与它们所连接的原子一起形成环。如果R¹³是-C(R³¹)(R³²)-，则R¹⁴是-C(O)-O-R³³；否则R¹⁴是-H。R¹¹、R¹⁵、R¹⁶和R¹⁷独立地选自-H、卤素、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基和C₁-C₅烷氧基-C₁烷基。R¹⁹和R²⁰独立地选自-H、C₁-C₆烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基和C₁-C₅烷氧基-C₁烷基。对于R²¹和R²²，R²¹选自-H、-OH、-C(O)-O-R³⁴和-C(O)-S-R³⁵，且R²²选自-H、-OH、-C(O)-O-R³⁶和-C(O)-S-R³⁷；或者R²¹是-O-，且R²²是-C(O)-，其中R²¹和R²²与它们所连接的原子一起形成环；或者R²¹是-C(O)-，且R²²是-O-，其中R²¹和R²²与它们所连接的原子一起形成环。R²³是C₁烷基。R²⁴选自-H和C₁-C₆烷基，其中当R²⁴是C₁-C₆烷基时，R²⁴可任选被一个或多个选自下列的基团取代：环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。对于R²⁵和R²⁶，R²⁵选自-H、烷基和烷氧基，且R²⁶选自-H、-OH、烷基、烷氧基、-C(O)-R³⁸、-C(O)-O-R³⁹和-C(O)-S-R⁴⁰；其中当R²⁵和R²⁶独立地为烷基或烷氧基时，R²⁵和R²⁶独立地可任选被一个或多个选自下列的基团取代：环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；或者R²⁵是-H；且R²⁶选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²、R³³、R³⁴、R³⁵、R³⁶、R³⁷、R³⁸、R³⁹和R⁴⁰独立地选自-H和烷基，其中所述烷基可任选被一个或多个选自下列的基团取代：环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。当任何R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁸、R¹⁹、R²⁰、R²¹、R²²、R²³、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R³¹、R³²、R³³、R³⁴、R³⁵、R³⁶、R³⁷、R³⁸、R³⁹和R⁴⁰独立地为选自烷基、链烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的基团时，则该基团可任选被一个或多个选自-OH、烷氧基和卤素的取代基取代。

在优选的化合物中，R¹⁸是-OH。当R¹⁸是-OH时，X优选为S。在另一个化合物中，R¹¹、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁹和R²⁰独立地选自-H和C₁-C₃烷基。优选地，R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁹、R²⁰分别是-H。R²³可以是多种不同基团，例如氟甲基或甲基。R¹¹可以是可任选被选自-OH和卤素的取代基取代的C₁-C₆烷基；R¹¹优选为可任选被卤素取代的C₁烷基；更优选地，R¹¹选自氟甲基、羟基甲基和甲基。在一个重要化合物中，R¹¹可以是甲基。或者，R¹¹可以是氟甲基。在另一个化合物中，R¹¹可以是羟基甲基。在另一个化合物中，R¹²是可任选被选自-OH、烷氧基和卤素的取代基取代的C₁-C₆烷基。在一个优选的化合物中，R¹²是可任选被卤素取代的C₁烷基。例如，R¹²可以是甲基。或者，R¹²可以是氟甲基。在另一个实例中，R¹²可以是羟基甲基。在另一个实例中，R¹²可以是甲氧基甲基。

在该示例化合物中，优选的是，R¹³、R¹⁴、R²¹和R²²分别是-H。在该化合物中，进一步优选的是，R¹¹、R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁹和R²⁰独立地选自-H和C₁-C₃烷基。优选地，R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁹、R²⁰分别是-H。在进一步的化合物中，R²³可以是例如氟甲基，或者在另一个实例中，R²³可以是甲基。在这些实例的优选化合物中，R¹²是可任选被选自-OH、烷氧基和卤素的取代基取代的C₁-C₆烷基。R¹²优选为可任选被卤素取代的C₁烷基。在一个这样的实例中，R¹²是氟甲基。在另一个实例中，R¹²是甲基。或者，R¹²可以是羟基甲基。在另一个实例中，R¹²可以是甲氧基甲基。

当R²³是甲基时，R¹¹可以是例如-H或可任选被选自-OH和卤素的取代基取代的C₁-C₆烷基。在优选的化合物中，R¹¹是-H。或者，R¹¹可以是可任选被选自-OH和卤素的取代基取代的C₁-C₆烷基。例如，R¹¹可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基异构体或己基异构体。例如，R¹¹可以是乙基。或者，R¹¹可以是可任选被选自-OH和卤素的取代基取代的C₁烷基；例如，R¹¹可以是甲基。或者，R¹¹可以是氟甲基。在另一个实例中，R¹¹可以是羟基甲基。

在另一个化合物中，R¹⁸可以是-OR²⁴。R²⁴可如上所定义。优选地，R²⁴是C₁-C₆烷基，所述烷基可任选被一个或多个选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的基团取代；R²⁴更优选为C₁-C₃烷基；R²⁴还更优选为甲基。在化合物II的另一个实例中，R¹⁸可以是-N(R²⁵)(R²⁶)，其中R²⁵和R²⁶如上所定义。在另一个化合物中，R¹⁸可以是-N(R³⁰)-，并且R¹³可以是-C(O)-，其中R¹⁸和R¹³与它们所连接的原子一起形成环。在另一个实例中，R¹⁸可以是-O-，且R¹³可以是-C(R³¹)(R³²)-，其中R¹⁸和R¹³与它们所连接的原子一起形成环。

在式II化合物中，R²¹可选自-OH、-C(O)-O-R³⁴和-C(O)-S-R³⁵。R²¹优选为-OH。在另一个实例中，当R²¹是-OH时，R²²是-H。

然而，该实施例还提供了有用的式II化合物，其中R²¹是-O-，且R²²是-C(O)-，其中R²¹和R²²与它们所连接的原子一起形成环。在另一个有用的化合物中，R²¹是-C(O)-，且R²²是-O-，其中R²¹和R²²与它们所连接的原子一起形成环。或者，R²²可选自-OH、-C(O)-O-R³⁶和-C(O)-S-R³⁷。在该实例中，R²¹优选为-H。

在可用于实施本发明的另一种选择性iNOS抑制剂中，化合物是式III化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴¹是H或甲基；且

R⁴²是H或甲基。

可用于实施本发明的另一种选择性iNOS抑制剂是式IV化合物或其可药用盐，

可用于本发明的另一示例性选择性iNOS抑制剂是式V化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴⁵是C₁-C₅烷基或被烷氧基或一个或多个卤素取代的C₁-C₅烷基。

另一示例性选择性iNOS抑制剂是式VI化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴⁶是C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代。

可用于本发明的另一示例性选择性iNOS抑制剂是式VII化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴⁹是C₁-C₅烷基或被烷氧基或一个或多个卤素取代的C¹-C₅烷基。

可用于本发明的另一示例性选择性iNOS抑制剂是式VIII化合物或其可药用盐，

其中：

R⁵⁰是C₁-C₅烷基，所述C¹-C⁵烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代。

可用于实施本发明的另一选择性iNOS抑制剂是式IX化合物或其可药用盐，

其中：

R⁵⁰选自氩、卤素和C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；

R⁵⁴选自卤素和C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代。

可用于实施本发明的另一选择性iNOS抑制剂是式X化合物或其可药用盐，

其中：

R^55W是C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代。

b.示例性实施例

给出下列合成实施例是为了举例说明，而不是限制本发明范围。当没有定义异构体时，使用合适的色谱法可获得单一异构体。

实施例A

(2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐，一水合物

EX-A-1)在0℃，将三甲基甲硅烷基氯(107.8g，1.00mol)滴加到L-谷氨酸(30.00g，0.20mol)在300mL甲醇内的冷溶液中。将所得澄清、无色溶液在室温搅拌。18小时后，通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有剩余原料。然后将该反应冷却至0℃，加入三乙胺(134g，1.33mol)，形成了白色沉淀。加入二碳酸二叔丁酯(49g，0.23mol)，将该混合物温热至室温。3小时后，除去溶剂，加入700mL乙醚。将该溶液过滤，用另外500mL乙醚洗涤滤饼。将滤液浓缩，获得了60.8g(＞95％)褐色油状物，其不用进一步纯化直接用于下一步骤。

LCMS：m/z＝298.1[M+Na]⁺.HRMS C₁₂H₂₁NO₆的计算值：276.1447[M+H]⁺，实测值：276.1462.¹HNMR(CDCl₃)？1.45(s，9H)，1.95(m，1H)，2.50(m，1H)，2.40(m，2H)，3.69(s，3H)，3.75(s，3H)，4.32(m，1H)，5.15(m，1H).

EX-A-2)在室温向得自EX-A-1的粗产物(60g，0.22mol)在300mL乙腈内的溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(5.3g，0.44mol)和二碳酸二叔丁酯(79.2g，0.36mol)。将所得混合物在室温搅拌2天，这时通过薄层色谱分析(25％乙酸乙酯的己烷)表明已消耗了大部分原料。真空除去溶剂，获得了85g红色油状物。通过快速硅胶柱色谱纯化粗产物，用1∶10乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了66.4g(81％)所需的di-Boc产物，为浅黄色固体。

LCMS：m/z＝398.2[M+Na]⁺.HRMSC₁₇H₂₉NO₈的计算值：398.1791[M+Na]⁺，实测值：398.1790.¹H NMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，2.19(M，1H)，2.41(m，2H)，2.46(M，1H)，3.66(s，3H)，3.70(s，3H)，4.91(dd，1H).

EX-A-3)在-78℃，用30分钟将DIBAL(64mL 1.0M在己烷中的溶液，63.9mmol)滴加到EX-A-2(20g，53.3mmol)在400mL无水乙醚内的冷溶液中。在-78℃再保持30分钟后，用水(12mL，666mmol)处理该溶液，让其温热至室温。将该浑浊混合物用350mL乙酸乙酯稀释，用MgSO₄干燥，并经由硅藻土(celite)垫过滤。将滤液浓缩至黄色油状物。将粗产物-18.9g黄色油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了13.8g(75％)所需的醛产物，为澄清油状物。

LCMS：m/z＝368.2[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，2.19(m，1H)，2.41(m，2H)，2.46(m，1H)，3.70(s，3H)，4.91(dd，1H)，9.8(s，1H).

EX-A-4)向2-氟膦酰基乙酸三乙酯(4.67g，19.3mmol)在20mLTHF内的冷(-78℃)溶液中加入正丁基锂(10.9mL 1.6M在己烷中的溶液，17.5mmol)。将该混合物在-78℃搅拌20分钟，形成了亮黄色溶液。然后经由注射器加入EX-A-3的产物(6.0g，17.5mmol)在5mL THF中的溶液，将所得混合物在-78℃搅拌2小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有剩余原料。在-78℃用饱和氯化铵水溶液(30mL)中止该反应，收集有机层，用乙醚(2×50mL)萃取水层。将合并的有机层用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物-8.6g黄色油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶4乙酸乙酯/己烷中洗脱，获得了6.05g(79％)所需的氟代烯烃产物，为澄清的油状物。¹H NMR和¹⁹FNMR表明分离出的产物具有约95∶5的E∶Z比例。

LCMS：m/z＝456.2[M+Na]⁺.HRMS C₂₀H₃₂NO₆F的计算值：456.2010[M+Na]⁺，实测值：456.2094.¹H NMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，2.0(m，1H)，2.25(m，1H)，2.6(m，2H)，3.7(s，3H)，4.25(m，2H)，4.9(m，1H)，5.9(dt，乙烯基1H，J＝20 Hz)，6.2(dt，乙烯基，1H，J＝30 Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-129.12(d，0.09F，J＝31Hz，9％Z-异构体)-121.6(d，0.91F，J＝20Hz，91％E-异构体).

EX-A-5)在室温向EX-A-4(805mg，1.86mmol)在20mL甲醇内的溶液中以每次200mg的方式分批加入固体NaBH₄(844mg，22.3mmol)。将该反应在室温搅拌18小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯己烷)表明已消耗了大部分原料。用20mL饱和氯化铵水溶液中止该反应，用乙酸乙酯(2×35mL)萃取。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物-700mg澄清油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了353mg(48％)所需的烯丙型醇产物，为澄清油状物，¹⁹F NMR表明其主要含有所需E-异构体。

LCMS：m/z＝414.2[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，1.95(m，1H)，2.1(m，1H)，2.2(m，1H)，2.35(t，1H)，3.7(s，3H)，4.25(m，2H)，4.8(m，1H)，5.15(dt，1H，J＝20Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-119.1(d，0.02F，J＝37Hz，2％Z-异构体)，-111.8(d，0.98F，J＝24Hz，98％E-异构体).

EX-A-6)向EX-A-5(1.37g，3.5mmol)、以聚合物为载体的三苯基膦(3mmol/g，1.86g，5.6mmol)和3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮(450mg，4.55mmol)在50mLTHF内的混合物中滴加偶氮二甲酸二甲酯(820mg，5.6mmol)。将该反应在室温搅拌1小时，这时通过薄层色谱分析(40％乙酸乙酯的己烷中)表明没有剩余原料。将该混合物经由硅藻土过滤；并将滤液浓缩。将所得黄色油状物在30mL二氯甲烷与30mL水之间分配。分离出有机层，用水(1×30mL)和盐水(1×30mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物-1.8g黄色油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了670mg(40％)所需的保护的E-烯丙型脒产物，为澄清油状物，¹⁹F NMR表明其仅含有所需的E-异构体。

LCMS：m/z＝496.2[M+]Na]⁺.¹HNMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，1.85(m，1H)，2.2(m，3H)，2.25(s，3H)，3.64(s，3H)，4.25(m，2H)，4.8(m，1H)，5.3(dt，1H，J＝20Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-110.8(q，1F，J＝20Hz).

EX-A-7)将EX-A-6的产物(670mg，1.4mmol)溶解在25mL甲醇和25mL 25％乙酸水溶液中。加入锌粉(830mg，12.7mmol)，并将该混合物在超声下搅拌8小时，这时HPLC表明仅剩余20％原料。将锌粉从反应混合物中过滤出来，将滤液在-20℃贮存12小时。将滤液温热至室温，再加入冰醋酸(7mL)和锌粉(400mg，6.1mmol)，将该混合物在室温超声处理1小时，这时HPLC分析表明含有96％产物。将该混合物经由硅藻土过滤，并将滤液浓缩，通过在YMC Combiprep柱上进行的反相HPLC柱色谱法纯化粗产物，使用20-95％A在8分钟内进行梯度洗脱(A：100％乙腈，含有0.01％三氟乙酸，B：100％H₂O，含有0.01％三氟乙酸)。将含有产物的级份合并，并浓缩，获得了344mg(45％)作为三氟乙酸盐的所需乙脒产物，¹⁹F NMR表明其仅含有所需的E-异构体。

LCMS：m/z＝432.3[M+H]⁺.¹H NMR(CD₃OD)？1.52(s，18H)，2.9(m，1H)，2.2(m，3H)，2.27(s，3H)，4.2(d，1H)，5.4(dt，乙烯基，1H，J＝20Hz).¹⁹F NMR(CD₃OD)？-110.83(m，1F，J＝20Hz).

EX-A-8)将EX-A-7产物的样本溶解在冰醋酸中。向该搅拌着的溶液中加入10当量1N HCl的二氧杂环己烷溶液。将该溶液在室温搅拌10分钟，真空除去所有溶剂，以获得所示甲酯二盐酸盐。

实施例A)将EX-A-7(344mg，1.4mmol)在6mL 6.0NHCl中的溶液回流1小时。真空除去溶剂。将所得固体溶解在水中并浓缩3次，然后在1.0N HCl中浓缩5次以除去任何剩余的TFA盐。完成后，获得了160mg(37％)所需的(2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐产物，为白色固体，m.p.51.5-56.3℃，¹⁹F NMR表明其仅含有所需的E-异构体。

LCMS：m/z＝218.1[M+H]⁺.HRMS C₉H₁₆FN₃O₂的计算值：218.1305[M+H]⁺，实测值：218.1325.¹H NMR(D₂O)？1.8(m，2H)，2.05(m，2H)，2.1(s，3H)，3.7(t，1H)，4.00(d，2H)，5.3(dt，乙烯基，1H，J＝21Hz)¹⁹F NMR(D₂O)？-109.9(m，1F，J＝20Hz).

实施例B

(2S，5E/Z)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

EX-B-1)向L-谷氨酸5-甲酯(50.00g，0.31mol)在400mL 1∶1H₂O/二氧杂环己烷内的冷(0℃)溶液中加入三乙胺(38.35g，0.38mol)，然后加入二碳酸二叔丁酯(80.00g，0.37mol)。将所得澄清、无色溶液在室温搅拌。18小时后，通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有任何剩余原料。用200mL 1.0N KHSO₄水溶液处理该反应混合物。除去有机层，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水层。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，获得了72.00g(89％)所需产物，为浅黄色油状物。

LCMS：m/z＝284.1[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？1.50(s，9H)，2.00(m，1H)，2.20(m，1H)，2.42(m，2H)，3.66(s，3H)，4.34(d，1H)，5.24(d，1H).

EX-B-2)在-10℃，向EX-B-1产物(72.60g，0.28mol)在300mLTHF内的溶液中迅速加入4-甲基吗啉(28.11g，0.28mol)和氯甲酸异丁酯(37.95g，0.28mol)。该澄清的黄色溶液立即形成了白色沉淀。4分钟后，将所得混浊黄色混合物过滤，将滤液冷却至-10℃，滴加NaBH₄(15.77g，0.42mol)在200mL H₂O中的溶液，同时保持零下温度。一旦加入所有NaBH₄，即移去冰浴，将该反应在室温搅拌1.5小时。用200mL H₂O处理该反应混合物。分离出有机层，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水层。将有机层合并，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，获得了58g(85％)所需产物，为黄色油状物。

LCMS：m/z＝270.1[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？1.42(s，9H)，1.65(m，1H)，1.85(m，2H)，2.42(t，2H)，3.66(s，3H)，4.8(d，1H).

EX-B-3)向EX-B-2(30.95g，0.13mol)在100mL苯内的溶液中加入2，2-二-甲氧基丙烷(65.00g，0.63mol)，然后加入对甲苯磺酸(2.40g，12.5mmol)和5g 3_分子筛.所得混合物回流2小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明反应完全。将该混合物冷却至室温，用乙醚(150mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物-30.5g黄色油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶10乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了15.40g(42％)所需产物，为浅黄色油状物。

LCMS：m/z＝310.1[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？1.42(s，12H)，1.56(d，3H)，1.85(m，2H)，2.38(m，2H)，3.66(s，3H)，3.7(d，1H)，3.95(m，2H).

EX-B-4)将DIBAL(6.0mL 1.0M在甲苯中的溶液)滴加到EX-B-3产物(1.00g，3.00mmol)在10mL二氯甲烷内的冷(-78℃)溶液中。30分钟后，用5mL饱和酒石酸钾钠盐(Rochelle盐)中止该反应，然后让其温热至室温。然后将该混合物经由硅藻土垫过滤，用MgSO₄干燥，再次过滤并浓缩，获得了黄色油状物。将粗产物-610mg黄色油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了550mg(71％)所需产物，为澄清油状物。

¹H NMR(CDCl₃)？1.50(s，12H)，1.58(d，3H)，2.00(m，2H)，2.5(m，2H)，3.7(d，1H)，3.95(m，2H)，9.8(s，1H).

EX-B-5)向2-氟-膦酰基乙酸三乙酯(6.70g，27.6mmol)在100mL二氯甲烷内的冷(0℃)溶液中加入1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(4.70g，31.0mmol)。将该混合物在0℃搅拌1小时，获得了橙色溶液。然后经由注射器加入EX-B-4产物(5.71g，22.2mmol)在15 mL二氯甲烷内的冰冷(0℃)溶液，将所得混合物在室温搅拌18小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有剩余原料。真空除去溶剂，将所得混合物在200mL乙酸乙酯与100mL水之间分配。收集有机层，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。将合并的有机层用1.0MKHSO₄水溶液(100mL)、水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，获得了所需的氟代烯烃产物，为黄色油状物(8.0g)。¹H NMR和¹⁹F NMR表明分离出的产物具有约70∶30的Z∶E比例。

LCMS：m/z＝368.2[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？5.9-6.0(dt，1H，J＝20Hz)，6.05-6.20(dt，1H，J＝33Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-129.89(d，0.7F，J＝38Hz，70％Z-异构体)，-122.05(d，0.3F，J＝20Hz，30％E-异构体)

该混合物不用进一步纯化直接使用。

EX-B-6)经由注射器向EX-B-5产物(8.0g，23.0mmol)在70mLTHF内的冰冷(0℃)溶液中加入LiBH₄(12.7mL 2.0M在THF中的溶液，25.0mmol)。将该反应混合物在室温搅拌18小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有剩余原料。除去THF，将所得混合物溶解在二氯甲烷中。冷却至0℃后，缓慢地加入1.0M KHSO₄水溶液以中止反应。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取该混合物。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物-8.0g澄清油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了900mg(13％)所需产物，为澄清油状物。

LCMS：m/z＝326.2[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？4.79-4.94(dm，1H)，5.10-5.25(dt，1H).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-119.82(dt，0.7F，J＝38Hz，70％Z-异构体)-111.09(dt，0.3F，J＝27Hz，30％E-异构体)

EX-B-7)向EX-B-6产物(950mg，3.1mmol)在5mL吡啶内的冰冷(0℃)溶液中加入甲磺酰氯(390mg，3.4mmol)。将该反应在0℃搅拌5分钟，然后温热至室温并搅拌3小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有剩余原料。将该反应用乙醚(10mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)和1.0M柠檬酸(20mL)洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，获得了500mg(51％)所需的烯丙型氯化物产物，为白色固体。该产物不用进一步纯化直接使用。LCMS：m/z＝344.1[M+Na]⁺。

EX-B-8)向EX-B-7产物(440mg，1.37mmol)在10mL DMF内的搅拌着的溶液中加入邻苯二甲酰亚氨基钾(290mg，1.57mmoL)。将所得混合物加热回流18小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有剩余原料。将冷却的混合物用30m水稀释，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，获得了540mg(91％)所需产物，为黄色油状物。

LCMS：m/z＝455.2[M+Na]⁺.HRMS计算值：433.2139[M+H]⁺，实测值：433.2144.¹H NMR(CDCl₃)？1.4(s，18H)，1.6(m，6H)，2.05(m，2H)，3.6-4.42(m，4H)，4.9(dt，乙烯基，1H)，5.2，(m，乙烯基，1H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-117.09(m，0.7F，J＝38Hz，70％Z-异构体)，-111.61(m，0.3F，J＝22Hz，30％E-异构体).

EX-B-9)将EX-B-8产物(600mg，1.38mmol)溶解在8mL乙酸和2mL水中。将该混合物在室温搅拌过夜，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)表明没有剩余原料。将该溶液在氮气流下浓缩，通过快速硅胶柱色谱纯化粗产物，用1∶2乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了248mg(63％)所需产物，为白色固体。

LCMS：m/z＝415.1[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？1.41(s，9H)，1.56(m，2H)，2.15(m，1H)，3.64(m，2H)，4.35(d，2H)，4.9(dt，乙烯基，1H，J＝37Hz)，7.73(m，2H)，7.86(m，2H).¹⁹F NMR(CDCl₃) ？-116.96(dt，0.8F，J＝37Hz，80％Z-异构体)，-111.09(dt，0.2F，J＝22Hz，20％E-异构体)

EX-B-10)向EX-B-9产物(237mg，0.605mmol)在6mL DMF内的搅拌着的溶液中加入吡啶重铬酸盐(1.14g，3.03mmol)。该溶液变为深橙色，将其在室温搅拌18小时，然后将其倒入20mL H₂O内。用乙酸乙酯(4×25mL)萃取该混合物。将合并的有机层用5％碳酸氢钾水溶液(3×25mL)洗涤。用1.0M KHSO₄将水层酸化至pH＝3，然后用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层浓缩，获得了235mg(95％)所需氨基酸产物。所得白色固体不用进一步纯化直接使用。LCMS：m/z＝429.1[M+Na]⁺。

EX-B-11)向EX-B-10产物(230mg，0.56mmol)在7mL乙醇内的搅拌着的溶液中加入水合肼(70mg，1.13mmol)，将所得溶液回流2小时，形成了白色沉淀。真空除去溶剂。将所得白色固体溶解在8mL水中，用冰醋酸酸化至pH＝4。然后在冰浴中冷却并过滤。将滤液浓缩，获得了136mg(87％)所需的烯丙基胺产物，为黄色晶体，其不用纯化直接用于随后的步骤。LCMS：m/z＝277.1[M+H]⁺。

EX-B-12)向EX-B-11产物(136mg，0.50mmol)在6mL DMF内的搅拌着的溶液中以1.5小时间隔分3批加入乙亚胺酸乙酯(252mg，2.04mmol)。加入完成后，将该混合物在室温搅拌过夜。过滤该粉红色溶液，用水洗涤滤饼。真空除去溶剂，使用YMC Combiprep ODS-A半制备柱通过反相HPLC纯化所得黄色油状物，使用1-50％A在7分钟内进行梯度洗脱(A：100％乙腈，含有0.05％TFA，B：100％H₂O，含有0.05％TFA)。将含有产物的级份合并，并浓缩，获得了约50mg三氟乙酸盐形式的所需乙脒产物，其用于进行下一步骤。LCMS：m/z＝318.2[M+H]⁺。

实施例B)将EX-B-12产物溶解在6.0N HCl中，在室温搅拌1小时。真空除去溶剂。将所得固体溶解在水中，浓缩3次以除去TFA盐。当¹⁹F NMR表明所有TFA都已被除去时，将产物真空干燥，获得了30mg(20％，两步的总产率)20∶80 E∶Z混合物，其中含有所需的(2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐和(2S，5Z)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐，为泡沫状澄清固体。

HRMS C₉H₁₆FN₃O₂的计算值：218.1305[M+H]⁺，实测值：218.1309.¹HNMR(D₂O)？2.01(m，2H)，2.21(s，3H)，2.24(m，2H)，3.96(t，1H)，4.00(d，2H)，5.07(dt，乙烯基，1H，J＝37Hz)，5.4(dt，乙烯基，1H，J＝37Hz).¹⁹F NMR(D₂O)？-116.8(m，0.8F，J＝37Hz，80％Z-异构体)，-109.6(m，0.2F，J＝21Hz，20％E-异构体)

实施例C

(2S，5Z)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

EX-C-1)在0℃将2-氟-膦酰基乙酸三乙酯(3.54g，14.6mmol)溶解在20mL二氯甲烷中，加入1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.4mL，16.4mmol)。将该混合物在0℃搅拌20分钟，产生了橙色溶液。然后在0℃加入EX-A-3醛产物(4.04g，11.7mmol)的溶液，将所得棕色混合物在室温搅拌过夜，这时LCMS表明没有剩余原料。除去溶剂，将残余物在水(60mL)与乙酸乙酯(120mL)之间分配。收集有机层，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。将合并的有机层用水(60mL)和10％KHSO₄水溶液(60mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物-5.7g橙色油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了3.5g(69％)所需的氟代烯烃产物，为澄清油状物。¹H NMR和¹⁹F NMR表明分离出的产物具有约70∶30的Z∶E比例。

HRMS C₂₀H₃₂O₈FN的计算值456.2010[M+Na]⁺，实测值456.2017.¹H NMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，2.0(m，1H)，2.25(m，1H)，2.6(m，2H)，3.7(s，3H)，4.25(m，2H)，4.9(m，1H)，5.9(dt，乙烯基，1H，J＝21.2Hz)，6.1(dt，乙烯基，1H，J＝32.4Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？：-129.4(d，0.7F，J＝34Hz，70％Z-异构体)-121.6(d，0.3F，J＝22Hz，30％E-异构体)

EX-C-2)在室温将EX-C-1酯产物(3.5g，8.1mmol)溶解在80mL甲醇中，然后分批加入固体NaBH₄(3g，80mmol)。将该混合物在室温搅拌18小时，这时HPLC表明反应＞90％完全。用饱和氯化铵中止该反应。用乙酸乙酯萃取产物，用Na₂SO₄干燥。将有机层蒸发，获得了3.2g粗产物，为无色油状物，通过Biotage快速柱色谱法纯化，用20％-30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了2.11g(67％)氟代烯烃产物的Z/E混合物，为澄清油状物，和0.41g(13％)所需的纯的(¹⁹FNMR表明Z∶E＝97∶3)Z-异构体产物，为澄清油状物。

HRMS计算值 C₁₈H₃₀NO₇F：414.1904[M+Na]⁺，实测值414.1911.¹H NMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，2.0(m，1H)，2.2(m，3H)，3.7(s，3H)，4.1(dd，2H，J＝17Hz)，4.8(dt，1H，J＝39Hz)，4.9(m，1H).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-119.1(dt，1F，J＝39Hz，J＝17Hz).

EX-C-3)将EX-C-2的Z-醇产物(390mg，1mmol)和3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮(130mg，1.3mmol)溶解在20mL THF中。然后将以聚合物为载体的PPH₃加到该溶液中，将该混合物轻微搅拌10分钟。滴加偶氮二甲酸二乙酯，将该混合物在室温搅拌1小时，这时LCMS分析表明形成了产物，并且不存在原料。经由硅藻土垫过滤出聚合物，用THF洗涤硅藻土垫。将滤液蒸发，获得了1.0g粗产物，通过Biotage快速柱色谱法纯化，用20％-30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了500mg产物，其中含有某些酰肼副产物。通过Biotage快速柱色谱法纯化进一步纯化该产物，用98∶2∶0.01的二氯甲烷∶甲醇∶氢氧化铵洗脱，获得了180mg(38％)所需的保护的脒产物，为澄清油状物，¹⁹F NMR表明其仅含有所需的Z-异构体。

HRMS计算值 C₂₁H₃₂N₃O₈F：491.2517[M+NH₄]⁺，实测值491.2523.¹H NMR(CDCl₃)？1.5(s，18H)，1.9(m，1H)，2.1(m，3H)，2.3(s，3H)，3.7(s，3H)，4.2(d，2H)，4.8(m，1H)，5.0(dt，1H，J＝36Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-116.5(dt，1F，J＝38Hz).

EX-C-4)将EX-C-3产物(88mg，0.19mmol)溶解在含有几滴甲醇的4mL 25％乙酸水溶液中，然后加入锌粉(109mg，1.67mmol)。将该混合物在超声下搅拌3小时。经由硅藻土垫过滤出锌，用水洗涤该滤垫，将滤液蒸发至干，获得了粗产物，通过在YMC Combiprep柱上进行的反相HPLC柱色谱法纯化，用20-80％A在8分钟内进行梯度洗脱(A：100％CAN，含有0.01％TFA，B：100％H₂O，含有0.01％TFA)。将在两个级份中的所需产物合并，将合并的级份浓缩。获得了产物，为无色油状物，是仅含所需Z-异构体(¹⁹F NMR表明)的三氟乙酸盐混合物：30％是一Boc-保护的产物：HRMS C₁₅H₂₆N₃O₄F的计算值：332.1986[M+H⁺]，实测值332.2001，70％是二-Boc-保护的产物：HRMS计算值 C₂₀H₃₄N₃O₆F：432.2510[M+H]⁺，实测值432.2503.¹H NMR的二-Boc产物

(D₂O)？1.3(s，18H)，1.8(m，1H)，2.1(m，3H)，2.1(s，3H)，3.6(s，3H)，3.9(d，2H)，4.9(dt，乙烯基，1H，J＝37Hz).¹⁹F NMR(D₂O)？-117.3(dt，1F，J＝37Hz).

实施例C)将得自EX-C-4的合并的一-和二-BOC产物溶解在30mL 6N HCl中，将该溶液回流4小时，这时LCMS分析表明反应完全。真空除去过量HCl和水。完成后，获得了9mg(40％，两步的总产率)所需的(2S，5Z)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐产物，为浅黄色、强吸湿性泡沫状物，¹⁹F NMR表明其仅含有所需的Z-异构体。

HRMS计算值

C₉H₁₆N₃O₂F：218.1305[M+H]⁺，实测值218.1320.¹H NMR(D₂O)？1.3(s，18H)，1.9(m，2H)，2.1(m，2H)，2.1(s，3H)，3.8(t，1H)，3.9(d，2H)，4.9(dt，乙烯基，1H，J＝37Hz).¹⁹F NMR(D₂O)？-117.3(dt，1F，J＝37Hz).

实施例D

(2S，5Z)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，三盐酸盐，二水合物

EX-D-1)将EX-D-2产物(3.75g，10mmol)溶解在60mL甲醇中，在室温用10小时分批加入固体NaBH₄(4g，106mmol)，这时HPLC分析表明约有84％原料被还原。用饱和氯化铵处理该反应混合物，然后用乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤，并蒸发，获得了3.2 g粗产物，为黄色油状物。

HRMS计算值 C₁₆H₂₉NO₇：348.2022[M+H]⁺，实测值：348.2034.¹H NMR(CD₃OD)？4.9(q，1H)，3.7(s，3H)，3.5(t，2H)，3.2(m，1H)，2.1(m，1H)，1.9(m，2H)，1.5(s，18H).

EX-D-2)将EX-D-1醇产物(3.2g，9.0mmol)溶解在100mL THF中，并在冰浴中冷却。加入四溴化碳(4.27g，12.9mmol)，将所得溶液在氮气氛下于0℃搅拌30分钟。加入以聚合物为载体的PPH₃，将该混合物在0℃轻微搅拌1小时，然后在室温搅拌过夜。通过经由硅藻土过滤来除去聚合物，用THF洗涤硅藻土垫。将滤液蒸发，获得了粗产物，通过Biotage快速柱色谱法纯化，用1∶3乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了2.0g(54％，2步的总产率)所需的溴代产物，为无色油状物。

HRMS计算值 C₁₆H₂₈NO₆Br：410.1178[M+H]⁺，实测值：410.1137.¹H NMR(CDCl₃)？4.9(q，1H)，3.7(s，3H)，3.4(m，2H)，2.2(m，2H)，1.9(m，2H)，1.5(s，18H).

EX-D-3)将NaOEt(21％在EtOH中的溶液，41.1mL，0.11mol)在60mL乙醇中的溶液用对甲氧基苯硫醇(14.0g，0.1mol)处理，然后加入氯氟乙酸乙酯(18.3g，0.13mol)。将该混合物在室温搅拌2小时，用250mL 1∶1己烷/乙酸乙酯稀释。将有机层用水洗涤3次，并用Na₂SO₄干燥。将干燥的有机层蒸发，获得了25g粗产物，其不用进一步纯化直接使用。

LCMS C₁₁H₁₃O₃SF：m/z＝267.10[M+Na]⁺ ¹H NMR(CDCl₃)？7.5(d，2H)，6.9(d，2H)，6.0(d，1H，J＝51.9Hz)，4.2(q，2H)，3.8(s，3H)，1.2(t，3H).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-146.2(d，1F，J＝53.6Hz).

EX-D-4)将EX-D-3粗产物(24g，0.1mol)在200mL二氯甲烷中的溶液冷却至-78℃，用在200mL二氯甲烷中的3-氯过苯甲酸(27g，0.12mol)处理。将该反应混合物缓慢地温热至室温，搅拌过夜，这时LCMS分析表明形成了产物，并且没有剩余原料。过滤出固体，用饱和碳酸氢钠和氯化铵洗涤滤液。将有机层用MgSO₄干燥，并蒸发，获得了30g橙色油状物，通过Biotage快速柱色谱法纯化用，用2∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，获得了17.5g(70％)所需的亚砜产物，为灰白色油状物。

HRMS计算值 C₁₁H₁₃O₄FS：261.0597[M+H]⁺，实测值：261.0598.¹HNMR(CDCl₃)？7.6(m，2H)，7.0(m，2H)，5.6(d，1H，J＝50Hz主要非对映体)，5.4(d，1H，J＝49Hz次要非对映体)，4.2(q，2H)，3.8(s，3H)，1.2(t，3H).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-194.3(d，1F，J＝53.6Hz主要非对映体)，-191.7(d，1F，J＝50.4Hz次要非对映体).

EX-D-5)将NaH(60％矿物油悬浮液，212mg，5.3mmol)在6mL无水DMF中的悬浮液于氮气氛下冷却至0℃，用EX-D-4亚砜产物(1.25g，4.8mmol)在2mL DMF中的溶液处理。在室温搅拌20分钟后，将该混合物冷却至5℃，一次性加入EX-D-2溴代产物(2.17g，5.3mmol)。将该反应在室温搅拌3小时，然后在95℃加热回流1小时，这时LCMS分析表明形成了产物。将该混合物倒入冰/氯化铵水溶液混合物内。用1∶1己烷/乙酸乙酯萃取产物。将有机层用Na₂SO₄干燥，并蒸发，获得了3.17g黄色油状粗产物，通过Biotage快速柱色谱法纯化，用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了1.05g(50％)所需的氟代烯烃酯产物，为无色油状物。¹⁹F NMR表明所分离出的产物含有95∶5的所需Z-异构体。

HRMS计算值 C₂₀H₃₂O₈FN：456.2010[M+Na]⁺，实测值：456.2017.

¹H NMR(CDCl₃)？1.5(s，18H)，2.0(m，1H)，2.3(m，4H)，3.7(s，3H)，4.3(m，2H)，4.9(m，1H)，6.1(dt，乙烯基，1H，J＝32.4Hz，Z-异构体)¹⁹F NMR(CDCl₃)？-129.4(d，0.95F，J＝34.8Hz，95％Z-异构体)，-121.6(d，0.05F，J＝21.6Hz，5％E-异构体)

EX-D-6)在室温将EX-D-5酯产物(1.05g，2.4mmol)溶解在甲醇中，分批加入固体NaBH₄。将该混合物在室温搅拌18小时，然后加入2mL水，将该混合物再搅拌3小时，这时HPLC分析表明反应已完成了＞95％。用饱和氯化铵中止该反应。用乙酸乙酯萃取产物，将有机层用Na₂SO₄干燥，并蒸发，获得了0.95g粗产物，为无色油状物。¹⁹F NMR表明所分离出的粗产物仅含有所需的Z-异构体。

HRMS计算值 C₁₈H₃₀NO₇F：414.1904[M+Na]⁺，实测值：414.1949.¹H NMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，2.0(m，1H)，2.2(m，3H)，3.7(s，3H)，4.1(dd，2H，J＝17Hz)，4.8(dt，1H，J＝36Hz)，4.9 (m，1H).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-119.1(dt，1F，J＝38Hz，J＝17Hz).

EX-D-7)将EX-D-6醇产物(0.95g，2.4mmol)和3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮(290mg，2.9mmol)溶解在60mL THF中。加入结合在聚合物上的三苯基膦，将该混合物轻微搅拌10分钟。然后滴加偶氮二甲酸二甲酯，将该混合物在室温搅拌1小时，这时LCMS分析表明形成了产物，并且没有剩余原料。经由硅藻土垫过滤出聚合物，用THF洗涤滤垫。将滤液蒸发，获得了残余物，将残余物在二氯甲烷与水之间分配。将有机层用水洗涤2次，用MgSO₄干燥，并蒸发，获得了1.3g粗产物，通过Biotage快速柱色谱法纯化，用20％-30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了390mg(34％，2步的总产率)所需的保护的脒产物，为无色油状物。¹⁹F NMR表明所分离出的产物仅含有所需的Z-异构体。

HRMS计算值 C₂₁H₃₂N₃O₈F：491.2517[M+NH₄]⁺，实测值：491.2523.¹H NMR(CDCl₃)？1.5(s，18H)，1.9(m，1H)，2.1(m，3H)，2.3(s，3H)，3.7(s，3H)，4.2(d，2H)，4.8(m，1H)，5.0(dt，1H，J＝36Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-116.5(dt，1F，J＝38Hz).

EX-D-8)将EX-D-7产物(390mg，0.82mmol)溶解在含有4mL甲醇的20mL 25％HOAc水溶液中，分两批加入锌粉(482mg，7.42mmol)。将该混合物在超声下搅拌3小时。经由硅藻土垫过滤出锌，用水洗涤滤垫。将滤液蒸发至干，获得了粗产物，通过反相HPLC纯化。收集含有所需产物的级份，合并，浓缩。获得了产物，为无色油状物，其是仅含有所需Z-异构体(¹⁹F NMR表明)的三氟乙酸盐混合物：30％是一-Boc保护的产物：HRMS，C₁₅H₂₆N₃O₄F的计算值：332.1986[M+H]⁺，实测值332.2001；70％是二-Boc保护的产物：

HRMS计算值 C₂₀H₃₄N₃O₆F：432.2510[M+H]⁺，432.2503.¹H NMR的二-Boc产物(D₂O)？1.3(s，18H)，1.8(M，1H)，2.1(m，3H)，2.1(s，3H)，3.6(s，3H)，3.9(d，2H)，4.9(dt，乙烯基，1H，J＝37Hz).¹⁹F NMR(D₂O)？-117.3(dt，1F，J＝37Hz).

实施例D)将EX-D-8的一-和二-Boc产物溶解在80mL 6N HCl中，将该溶液加热回流1小时，这时LCMS分析表明反应完全。真空除去过量HCl和水，获得了150mg(50％，2步的总产率)所需的(2S，5Z)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，三盐酸盐，二水合物产物，为浅黄色强吸湿性泡沫状物。

HRMS计算值 C₉H₁₆N₃O₂F：218.1305[M+H]⁺，实测值218.1290.¹H NMR(D₂O)？1.3(s，18H)，1.9(m，2H)，2.1(m，2H)，2.1(s，3H)，3.8(t，1H)，3.9(d，2H)，4.9(dt，乙烯基，1H，J＝37Hz).¹⁹F NMR(D₂O)？？-117.3(dt，1F，J＝37Hz).元素分析的计算值C₉H₁₆N₃O₂F·3HCl·2H₂O：C，29.81；H，6.39；N，11.59；实测值C，29.80；H，6.11；N，11.20.

实施例E

(2R，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐，一水合物

EX-E-1)在0℃，将三甲基甲硅烷基氯滴加到D-谷氨酸的甲醇冷溶液中。将所得澄清、无色溶液在室温搅拌，直至通过薄层色谱分析表明没有剩余原料。然后将该反应冷却至0℃，加入三乙胺，形成了白色沉淀。加入二碳酸二叔丁酯，让该混合物温热至室温。3小时后，除去溶剂，加入乙醚。将该溶液过滤，用另外的乙醚洗涤滤饼。将滤液浓缩，获得了所需的一-Boc二酯产物，其不用进一步纯化直接用于下一步骤。

EX-E-2)在室温，向EX-E-1粗产物在乙腈内的溶液中加入4-二甲基氨基吡啶和二碳酸二叔丁酯。将所得混合物在室温搅拌，直至通过薄层色谱分析表明消耗了大部分原料。真空除去溶剂，通过快速硅胶柱色谱纯化所得残余物，获得了所需的二-Boc保护的二酯产物。

EX-E-3)在-78℃，将DIBAL溶液滴加到EX-E-2的无水乙醚冷溶液中。在-78℃保持30分钟后，用水处理该溶液，让其温热至室温。将所得浑浊混合物用乙酸乙酯稀释，用MgSO₄干燥，并经由硅藻土垫过滤。将滤液浓缩，通过快速硅胶柱色谱纯化所得残余物，获得了所需的醛产物。

EX-E-4)向2-氟膦酰基乙酸三乙酯的THF冷(-78℃)溶液中加入正丁基锂。将该混合物在-78℃搅拌，产生了亮黄色溶液。然后经由注射器加入EX-E-3产物在THF中的溶液，将所得混合物在-78℃搅拌，直至通过薄层色谱分析表没有剩余原料。在-78℃用饱和氯化铵水溶液中止该反应。收集有机层，用乙醚萃取水层。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。然后通过快速硅胶柱色谱纯化粗产物，获得了所需的氟代烯烃产物。

EX-E-5)在室温向EX-E-4的甲醇溶液中分批加入固体NaBH₄。将该反应在室温搅拌，直至通过薄层色谱分析表明消耗了大部分原料。用饱和氯化铵水溶液中止该反应，用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱纯化粗产物，获得了所需的烯丙型醇产物。

EX-E-6)向EX-E-5、以聚合物为载体的三苯基膦和3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮在THF内的混合物中滴加偶氮二甲酸二甲酯。将该反应混合物在室温搅拌，直至通过薄层色谱分析表没有剩余原料。将该混合物经由硅藻土过滤，将滤液浓缩。将所得黄色油状物在二氯甲烷与水之间分配。分离出有机层，用水和盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过快速硅胶柱色谱纯化粗产物，获得了所需的保护的E-烯丙型脒产物。

EX-E-7)将EX-E-6产物溶解在甲醇和乙酸水溶液中。加入锌粉，将该混合物在超声下搅拌，直至HPLC分析表明剩余少量原料。经由硅藻土从该反应混合物中过滤出锌粉，将滤液浓缩。通过反相HPLC柱色谱法纯化粗产物。合并含有产物的级份，并浓缩，获得了所需的乙脒产物，为三氟乙酸盐。

实施例E)将EX-E-7在6.0N HCl中的溶液回流1小时。真空除去溶剂。将所得固体溶解在水中，反复从1.0N HCl中浓缩以除去任何剩余的TFA盐，获得了所需的(2R，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐产物。

实施例F

EX-F-1)在氮气氛下，用30分钟向EX-A-3产物(5.0g，11.5mmol)的THF(45ml)溶液中滴加Red-Al(5.22ml，17.4mmol)在5.6mL THF中的溶液。将内温保持在-10℃以下。5分钟后，用33.7mL 1.3M酒石酸钠钾中止该反应。将甲苯(11mL)加到该混合物中以改善分离。将有机层依次用33.7mL 1.3M酒石酸钠钾和盐水(40mL)洗涤。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。该粗产物-3.8g(84％)浅黄色油状物直接用于下一步骤。

LCMS：m/z＝414.2[M+Na]⁺.¹H MR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，1.95(m，1H)，2.1(m，1H)，2.2(m，1H)，2.35(t，1H)，3.7(s，3H)，4.25(m，2H)，4.8(m，1H)，5.15(dt，1H，J＝20Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-119.1(d，0.02F，J＝37Hz，2％Z-异构体)，-111.8(d，0.98F，J＝24Hz，98％E-异构体)

EX-F-2)在-10℃，向EX-F-1产物(50.0g，0.128mol)在500mL二氯甲烷内的溶液中加入三乙胺(18.0g，0.179mol)。缓慢地加入甲磺酰氯(17.5g，0.153mol)在50mL二氯甲烷中的溶液以把温度保持在-10℃以下。将该反应搅拌在-10℃搅拌45分钟，这时通过薄层色谱分析(50％乙酸乙酯的己烷)和LCMS表明已消耗了大部分原料。用600mL 1.0M柠檬酸中止该反应，用乙酸乙酯(2×400mL)萃取。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。该粗产物-70g黄色油状物直接用于下一步骤。LCMS：m/z＝492.2[M+Na]。

EX-F-3)在室温向EX-F-2产物(70.0g，0.128mol)在400mL二甲基甲酰胺内的溶液中加入3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮酸钾(28.7g，0.192mol)。将该反应在室温搅拌2.5小时，这时通过薄层色谱分析(30％乙酸乙酯的己烷)和LCMS表明原料已消耗完。将该反应用400mL水稀释，用乙酸乙酯(5×400mL)萃取。将有机层合并，用400mL水、400mL盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将该粗产物-70g黄色油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用1∶4乙酸乙酯/己烷洗脱，获得了38g(63％)浅黄色油状物。

EX-F-4)将EX-F-3的几次一式两份制备的产物合并，在Merk硅胶MODCOL柱上通过HPLC柱色谱法纯化，用60∶40 MtBE∶庚烷以500mL/分钟的流速进行等度洗脱。将收集到的63g产物在ChiralPak-AD柱上通过手性HPLC柱色谱法再次纯化，用10∶90 A∶B(A：100％乙醇，B：100％庚烷)以550mL/分钟的流速进行等度洗脱。将含有产物的级份合并，并浓缩，获得了41g(68％)所需的保护的L，E-烯丙型脒产物，为澄清油状物，¹⁹F NMR和手性色谱法表明其仅含有所需的L和E-异构体。

LCMS：m/z＝496.2[M+Na]⁺.[M+NH₄]⁺.HRMS计算值C₂₁H₃₂FN₃O₈：491.2507[M+NH₄]⁺，实测值：491.2517.¹HNMR(CDCl₃)？1.48(s，18H)，1.85(m，1H)，2.2(m，3H)，2.25(s，3H)，3.64(s，3H)，4.25(m，2H)，4.8(m，1H)，5.3(dt，1H，J＝20Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-110.8(q，1F，J＝20Hz).

EX-F-5)将EX-F-4产物(22.5g，0.047mol)溶解在112mL甲醇中。开始剧烈搅拌，加入225mL 40％乙酸水溶液，然后加入锌粉(11.5g，0.177mmol)。将该搅拌着的反应回流(约60℃)2.5小时，这时HPLC分析表明已消耗了大部分原料。将该反应冷却，由硅藻土从该反应混合物中过滤出锌，用另外的甲醇充分洗涤硅藻土。合并滤液和甲醇洗涤液，并浓缩。将所得油性白色固体用二氯甲烷(2×500mL)洗涤，经由硅藻土垫过滤，再用500mL二氯甲烷洗涤。合并滤液，并浓缩，获得了浅黄色油状物。通过在200mL硅胶上进行的填塞过滤来纯化粗产物-39g浅黄色油状物，用80∶19∶1甲醇∶二氯甲烷∶乙酸洗脱，获得了13g(83％)所需产物。

LCMS：m/z＝432.3[M+H]⁺.1[M+H]⁺.HRMS计算值 C₁₅H₂₆FN₃O₄：332.1986[M+H]⁺，实测值：332.1982.¹H NMR(CD₃OD)？1.42(s，9H)，1.7(m，1H)，1.9(m，1H)，2.17(m，2H)，2.22(s，3H)，3.3(m，1H)，3.7(s，3H)，4.2(d，2H)，5.1(dt，乙烯基，1H，J＝21Hz).¹⁹F NMR(CD₃OD)？-110.83(m，1F，J＝21Hz).

实施例F)将EX-F-5产物(22g，0.066mol)在750mL 6.0N HCl中的溶液回流45分钟。真空除去溶剂。将所得固体溶解在水中，并浓缩3次。通过在YMC ODS-AQ柱上进行的反相HPLC柱色谱法纯化粗产物，洗脱60分钟，其中用泵出的100％B等度洗脱30分钟，然后用0-100％A梯度洗脱10分钟，之后用100％A洗20分钟(A：100％乙腈，B：100％H₂O，含有0.0025％乙酸)。将含有产物的级份合并，并浓缩，获得了3.5g(68％)所需的二盐酸盐形式的乙脒产物，其仅含有所需的(2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐产物，为白色固体，m.p.51.5-56.3℃，¹⁹F NMR表明其仅含有所需的E异构体。

LCMS：m/z＝218.1[M+H]⁺.HRMS计算值C₉H₁₆FN₃O₂：218.1305[M+H]⁺，实测值：218.1325.¹H NMR (D₂O)？1.8(m，2H)，2.05(m，2H)，2.1(s，3H)，3.7(t，1H)，4.00(d，2H)，5.3(dt，乙烯基，1H，J＝21Hz).¹⁹F NMR(D₂O)？-109.9(m，1F，J＝20Hz).[？]₅₈₉＝+15.3(C，0.334，(H₂O)；).[？]₃₆₅＝+52.8(C，0.334，(H₂O)

实施例G

(2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-羟基亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸

EX-G-1)向EX-F-3产物(14g，30.0mmol)在100mL甲醇内的搅拌着的冷(0℃)溶液中通入5分钟HCl气体。将所得深黄色溶液搅拌30分钟，这时HPLC表明原料已完全消耗。用饱和碳酸氢钠将所得混合物中和至pH＝8，用EtOAc萃取产物。用MgSO₄将有机层干燥，浓缩，获得了所需氨基酯产物，为深黄色油状物，其直接用于下一步骤。

LCMS：m/z＝274[M+Na]⁺.¹H NMR(CDCl₃)？1.8(m，4H)，2.25(s，3H)，3.42 (bm，1H)，3.80(s，3H)，4.4(dd，2H)，5.40(dt，乙烯基，1H，J＝21 Hz).¹⁹F NMR(CDCl₃)？-110.38(m，1F，J＝21Hz).

实施例G)将EX-G-1产物(8g，30mmol)在70mL 2.5N NaOH中的溶液搅拌10分钟，这时HPLC分析表明原料已完全消耗。用12NHCl(约50mL)将所得溶液中和至pH＝7-8，并浓缩。用甲醇洗涤所得浆液，过滤以除去盐，浓缩，获得了棕色油状物。通过在YMC ODS-AQ柱上进行的反相HPLC柱色谱法纯化粗产物，洗脱60分钟，其中用泵出的100％B等度洗脱30分钟，然后用0-100％A梯度洗脱10分钟，之后用100％A洗20分钟(A：100％乙腈，B：100％)。将含有产物的级份合并，并浓缩，获得了1.0g(14％)所需产物，为白色固体。将产物从热的水与异丙醇中重结晶，通过过滤来收集，获得了纯的(2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-羟基亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，为白色固体结晶。熔点：198.00-200.00℃。

LCMS：m/z＝234.1[M+H]⁺ ¹H NMR(D₂O)？1.8(m，4H)，2.05 (m，2H)，3.6(t，1H)，3.9(d，2H)，5.2(dt，乙烯基，1H，J＝21Hz).¹⁹F NMR(D₂O)？-112.1(m，1F，J＝20Hz).).元素分析的计算值C₉H₁₆FN₃O₃：C，46.35；H，6.91；N，18.02；O，20.58.实测值：C，46.44；H，6.95；N，17.94；O，20.78.

手性分析＞97.7％：CrownPak CR(+)，用100％A以0.8mL/分钟等度洗脱(A：HClO₄水溶液，pH＝1.5)。

实施例H

(2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-N-(1H-四唑-5-基)5-庚烯酰胺，二盐酸盐

EX-H-1)将EX-F-3产物(6.1g，0.013mol)溶解在4mL甲醇中。开始剧烈搅拌，加入10mL 6N HCl。将搅拌着的反应回流(约60℃)18小时，这时HPLC分析表明已消耗了大部分原料。将该反应冷却，并浓缩，获得了3.3g(100％)橙色油状物。LCMS：m/z＝282[M+Na]⁺。

EX-H-2)将EX-H-1产物(3.3g，0.013mol)溶解在12mL1∶1 H₂O∶二氧杂环己烷中。开始搅拌，并加入三乙胺(1.95g，0.019mol)。将该反应冷却至0℃，加入二碳酸二叔丁酯(3.4g，0.016mol)。让该反应温热至室温，然后加入乙腈(4mL)以溶解固体。将该反应在室温搅拌18小时，这时HPLC分析表明已消耗了大部分原料。用1.0N KHSO₄(25mL)中止该反应，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，将有机层用MgSO₄干燥，并浓缩。通过快速色谱法纯化该粗产物-3.5g深色油状物，用4∶95∶1甲醇∶二氯甲烷∶乙酸洗脱，获得了2.4g(52％)所需产物，为浅黄色油状物。LCMS：m/z＝382[M+Na]⁺。

EX-H-3)将EX-H-2产物(2.4g，0.007mol)溶解在13mL THF中。开始搅拌，加入5-氨基四唑一水合物(0.83g，0.008mol)，然后加入1，3-二异丙基碳二亚胺(1.0g，0.008mol)。将所得混合物在室温搅拌3小时，这时HPLC表明已消耗了大部分原料。向该反应中加入12mL水，通过真空蒸馏除去THF。加入乙醇(30mL)，将该反应加热至回流。回流15分钟后，将该反应冷却至-10℃，这时从溶液中沉淀出了所需产物。通过过滤收集产物，获得了1.25g(50％)白色固体。LCMS：m/z＝449[M+Na]⁺。

EX-H-4)将EX-H-3产物(1.0g，0.0023mol)溶解在5mL甲醇中。开始剧烈搅拌，加入10mL 40％乙酸水溶液，然后加入锌粉(0.5g，0.008mol)。将搅拌着的反应回流(约60℃)1.5小时，这时HPLC分析表明已消耗了大部分原料。将该反应冷却，经由硅藻土从该反应混合物中过滤出锌，用另外的甲醇充分洗涤硅藻土。合并滤液和甲醇洗涤液，并浓缩。通过在YMC ODS-AQ柱上进行的反相HPLC柱色谱法纯化所得油性白色固体，洗脱60分钟，其中用泵出的100％B等度洗脱30分钟，然后用0-100％A梯度洗脱10分钟，之后用100％A洗20分钟(A：100％乙腈，B：100％H₂O，含有0.0025％乙酸)。将含有产物的级份合并，并浓缩，获得了0.390g(44％)所需的乙脒产物，为白色固体。LCMS：m/z＝407.3[M+Na]。

实施例H)将EX-H-4产物(0.30g，0.780mmol)溶解在5mL浓HOAc中。向其中加入1mL 4N HCl的二氧杂环己烷溶液。将该反应在室温搅拌5分钟。真空除去溶剂。将所得固体溶解在水中，并浓缩3次。HPLC表明了原料的量。将该固体溶解在1N HCl中，搅拌3小时，这时HPLC表明已消耗了大部分原料。将该溶液浓缩，获得了290mg(98％)二盐酸盐形成的所需乙脒产物。LCMS：m/z＝285.1[M+H]。

实施例I

S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二盐酸盐

实施例-I-1)(2R，4R)-甲基-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲酰基-4-甲酸酯

参见Jeanguenat和Seebach，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2291(1991)和Pattenden等人，Tetrahedron，49，2131(1993)：将(R)-半胱氨酸甲酯盐酸盐(8.58g，50mmol)、新戊醛(8.61g，100mmol)和三乙胺(5.57g，55mmol)在戊烷(800ml)中回流，同时用迪安斯榻克分水器(Dean-Stark trap)连续除去水。将该混合物过滤，并蒸发。将所得噻唑烷(9.15g，45mmol)和甲酸钠(3.37g，49.5mmol)在甲酸(68ml)中搅拌，在0-5℃用1小时滴加乙酸酐(13mL，138mmol)。让该溶液温热至室温，搅拌过夜。将溶剂蒸发，用5％碳酸氢钠水溶液中和该残余物，用乙醚萃取(3×)。将合并的有机层干燥(无水MgSO₄)，过滤，并蒸发，从己烷-乙醚中结晶，获得了本标题化合物，为白色晶体(8.65g)(总产率为80％，8∶1构象异构体混合物)。

¹H NMR(CDCl₃)？？主要构象异构体：1.04(s，9H)，3.29(d，1H)，3.31(d，1H)，3.78(s，3H)，4.75(s，1H)，4.90(t，1H)，8.36(s，1H).MS m/z(电子喷雾)232(M+H)⁺(100％)，204(10)164(24).

实施例-I-2)(2R，4R)-甲基-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲酰基-4-甲基-4-甲酸酯

在-78℃、氮气氛下，向实施例-I-1产物(2R，4R)-甲基-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲酰基-4-甲酸酯(8.65g，37.4mmol)在无水四氢呋喃(130mL)内的溶液中加入DMPU(25mL)，将该混合物搅拌5分钟。加入1M二(三甲基甲硅烷基)氨基锂的四氢呋喃溶液(37.5mL)，将该混合物搅拌30分钟。加入甲基碘(5.84g，41.1mmol)后，将该混合物在-78℃保持4小时，然后在持续搅拌下温热至室温。将溶剂真空蒸发，加入盐水和乙酸乙酯。用EtOAc将水相萃取3次，将合并的有机层用10％KHSO₄、水和盐水洗涤。然后干燥(无水MgSO₄)，过滤，减压汽提掉所有溶剂。通过硅胶色谱纯化残余油状物，用1-10％EtOAc/己烷洗脱，获得了本标题化合物(5.78g，63％，2.4∶1的构象异构体混合物)。

¹HNMR(CDCl₃)？？主要构象异构体，1.08(s，9H)，1.77(s，3H)，2.72(d，1H)，3.31(d，1H)，3.77(s，3H)，4.63(s，1H)，8.27(s，1H)；次要构象异构体，0.97(s，9H)，1.79(s，3H)，2.84(d，1H)，3.63(d，1H)，3.81(s，3H)，5.29(s，1H)，8.40(s，1H)；MS m/z(电子喷雾 )246(M+H)⁺(100％)，188(55)160(95).

在Daicel Chemical Industries Chiracel OAS柱上的保留时间是16.5分钟，10-40％IPA/己烷0-25分钟，＞95％ee。

实施例-I-3)(2R)2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐

将实施例-I-2产物(2R，4R)-甲基-2-叔丁基-1，3-噻唑啉-3-甲酰基-4-甲基-4-甲酸酯(5.7g，23.2mmol)与6N HCl(100mL)在氮气氛下剧烈搅拌，并在剧烈回流状态下保持2天。将该溶液冷却，用EtOAc洗涤，并蒸发，获得了产物(2R)2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐(3.79g，95％)，为浅黄色粉末。

¹H NMR(DMSO-d₆)？？1.48(s，3H，)2.82(t，1H)，2.96 (bs，2H)，8.48(s，3H).MSm/z(电子喷雾)136[M+H⁺].

实施例-I-4)S-[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸盐

将氢化钠(2.6g，60％矿物油悬浮液，65mmol)加到含有无氧1-甲基-2-吡咯烷酮(5mL)的烘箱干燥、真空冷却的RB烧瓶中。将该混合物冷却至-10℃，并在氮气氛下搅拌。分批加入溶解在无氧1-甲基-2-吡咯烷酮(25ml)中的实施例-I-3产物2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐(3.6g，21.0mmol)。所有H₂释放停止后，在-10℃加入在无氧1-甲基-2-吡咯烷酮(15ml)中的2-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]乙基溴(4.94g，21mmol)。然后将该反应搅拌4小时，让其温热至室温。用1N HCl中和该溶液，通过真空蒸发除去1-甲基2-吡咯烷酮。通过反相色谱法纯化，用1-20％乙腈的0.05％三氟乙酸水溶液洗脱，获得了本标题化合物(5.9g)，通过把合适的级份冷冻干燥来收集产物。

¹H MR(DMSO-d₆/D₂O)？1.31(s，9H)，1.39(s，3H)，2.55(m，2H)，2.78(d，1H)，3.04(d，1H)，3.06(t，2H).HRMS计算值C₁₁H₂₂N₂O₄S：279.1375(M+H⁺)，实测值279.1379.

实施例-I-5)S-(2-氨基乙基)-2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐

将实施例-I-4产物S-[2-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸盐(5.5g，14.0mmol)溶解在1N HCl(100mL)中，在室温于氮气氛下搅拌过夜。通过冷冻干燥除去该溶液，获得了本标题化合物S-(2-氨基乙基)-2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐，¹H NMR？(DMSO-d₆/D₂O)？1.43(s，3H)，2.72(m，2H)，2.85(d，1H)，2.95(t，2H)，3.07(d，1H).m/z[M+H⁺]179.

实施例I)将实施例-I-5产物溶解在H₂O中，用1N NaOH将pH调节至10，加入乙亚胺酸乙酯盐酸盐(ethyl acetimidatehydrochloride)(1.73g，14.0mmol)。将该反应搅拌15-30分钟，将pH增高至10，该操作反复3次。用HCl将pH调节至3，把该溶液加到洗涤过的DOWEX 50WX4-200柱上。用水和0.25M NH₄OH洗涤该柱，然后用0.5M NH₄OH洗涤。将得自0.5M NH₄OH洗涤的级份立即冷冻，合并，冷冻干燥，获得了油状物，将其溶解在1N HCl中，并蒸发，获得了本标题化合物，为白色固体(2.7g)。

¹H NMR(DMSO-d₆/D₂O)？1.17(s，3H)，2.08(s，3H)，2.52(d，1H)，2.68(m，2H)，2.94(d，1H)，3.23(t，2H).HRMS计算值C₈H₁₈N₃O₂S：220.1120[M+H⁺]，实测值220.1133.

实施例J

2-[[[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]硫基]甲基]-O-甲基-D-丝氨酸，二盐酸盐

该实施例中使用的操作和方法与实施例I相同，除了在步骤实施例-I-2中使用甲氧基甲基碘来代替甲基碘。通过这些方法获得了本标题产物，为白色固体(2.7g)。

¹H NMR(D₂O)？2.06(s，3H)，2.70(m，3H)，3.05(d，1H)，3.23(s，3H)，3.32(t，2H)，3.46(d，1H)，3.62(d，1H).HRMS计算值C₉H₂₀N₃O₃S：250.1225 [M+H⁺]，实测值250.1228.

实施例K

S-[(1R)-2-[(1-亚氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二盐酸盐

实施例-K-1)(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇

在0℃，用20分钟向(S)-1-氨基-2-丙醇(9.76g，130mmol)的无水苯(60mL)溶液中缓慢地分批加入在无水苯(120mL)中的氯甲酸苄酯(10.23g，60mmol)，同时在氮气氛下剧烈搅拌。将该混合物在0℃搅拌1小时，然后让其温热至室温，再搅拌2小时。将该混合物用水(2×)和盐水(2×)洗涤，用无水MgSO₄将有机层干燥。将所有溶剂蒸发，获得了本标题产物，为油状物。

¹H NMR(CDCl₃)？1.22(d，3H，)2.40(bs，1H)，3.07(m，1H)，3.37(m，1H))，3.94(m，1H)，5.16(s，2H)，5.27(m，1H)，7.38(m，5H).MS m/z(电子喷雾)232[M+23]⁺(100％)，166(96).

实施例-K-2)(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇甲苯磺酸酯

在0℃，用20分钟向实施例-K-1产物(S)-1-[(苄氧基羰基)氨基]-2丙醇(9.74g，46.7mmol)和三乙胺(7.27g，72mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液中缓慢地分批加入在二氯甲烷(18mL)中的甲苯磺酰氯(9.15g，48mmol)，同时在氮气氛下剧烈搅拌。让该混合物温热至室温，在氮气氛下搅拌36小时。将有机层用1N HCl、水、5％碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤，然后用无水MgSO₄干燥。将所有溶剂蒸发，获得了白色固体，让其过二氧化硅塞(silica plug)，用乙酸乙酯/己烷(1∶4)洗脱以除去过量甲苯磺酰氯，然后用乙酸乙酯/己烷(1∶3)洗脱，获得了本标题产物，为白色晶体。将其从乙酸乙酯/己烷中重结晶，获得了白色针状物(10.8g)。

¹H NMR(CDCl₃)？？1.22(d，3H，)2.39(s，3H)，3.20(m，1H)，3.43(dd，1H))，4.66(m，1H)，5.02(m，1H)，5.04(ABq，2H)，7.34(m，7H)，7.77(d，2H).MS m/z(电子喷雾)386[M+23]⁺(100％)，320(66).

在Regis Technologies Inc.Perkle Covalent(R，R)？-GEM1 HPLC柱上测定产物，使用异丙醇/己烷作为流动相，其中用10％异丙醇洗脱5分钟，然后在25分钟时间内用10-40％异丙醇洗脱，都是用UV和Laser Polarimetry检测器。主峰的保留时间：22.2分钟，＞98％ee。

实施例-K-3)S-[(1R)-2-(苄氧基羰基氨基)-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸盐

将溶解在无氧1-甲基-2-吡咯烷酮(5mL)中的实施例-I-3产物2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐(1g，6.5 mmol)加到烘箱干燥、用氮气吹扫过的RB烧瓶内，将该系统冷却至0℃。加入氢化钠(0.86g，60％于矿物油中，20.1mmol)，将该混合物在0℃搅拌15分钟。用10分钟加入实施例K-2-产物(2S)-1-[(N-苄氧基羰基)氨基]-2-丙醇甲苯磺酸酯(2.5g，7mmol)溶解在无氧1-甲基-2-吡咯烷酮(10mL)中的溶液。在0℃保持15分钟后，将该反应混合物在室温搅拌4.5小时。然后用1N HCl将该溶液酸化至pH 4，通过真空蒸发除去1-甲基-2-吡咯烷酮。通过反相色谱(用20-40％乙腈的0.05％三氟乙酸水溶液)，通过冷冻干燥收集，获得了本标题化合物(0.57g)。

¹H NMR(H₂O，400MHz)？1.0(d，3H)，1.4(s，3H)，2.6(m，2H)，2.8(m，1H)，3.1(m，2H)，3.6(s，1H)，5.0(ABq，2H)，7.3(m，5H).MS m/z(电子喷雾)：327[M+H⁺](100％)，238(20)，224(10)，和100(25).

实施例-K-4)S-[(1R)-2-氨基-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐

将实施例-K-3产物S-[(1R)-2-(苄氧基羰基氨基)-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸三氟乙酸盐(0.5g，1.14mmol)溶解在6N HCl中，回流1.5小时。然后将该混合物冷却至室温，用EtOAc萃取。将水层真空浓缩，获得了本标题产物(2R，5R)-S-(1-氨基-2-丙基)-2-甲基-半胱氨酸盐酸盐(0.29g)，其不用进一步纯化直接使用。¹H NMR(H₂O，400MHz)？1.2(m，3H)，1.4(m，3H)，2.7(m，1H)，2.8-3.2(m，2H)，3.4(m，1H)(由于旋转异构形式而有某些双重峰)。MS m/z(电子喷雾)：193[M+H⁺](61％)，176(53)，142(34)，134(100)，和102(10)。

实施例K)将实施例-K-4产物S-[(1R)-2-氨基-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸盐酸盐(0.2g，0.76mmol)溶解在2mL H₂O中，用1NNaOH将pH调节至10.0，用10分钟分四批加入乙亚胺酸乙酯盐酸盐(0.38g，3mmol)，按照需要用1N NaOH将pH调节至10.0。1小时后，用1N HCl将pH调节至3。将该溶液加到用水洗过的DOWEX50WX4-200柱上。用水和0.5N NH₄OH洗涤该柱。合并碱性级份，真空浓缩至干。用1N HCl将残余物酸化，浓缩，获得了实施例K标题产物(49mg)。

¹HNMR(H₂O，400MHz)？1.3-1.0(m，3H)，1.5(m，3H)，2.1-1.8(m，3H)，3.4-2.6(m，5H)，3.6(m，1H)(可见旋转异构体).MS m/z(电子喷雾)：234[M+H]⁺(100％)，176(10)，和134(10).

实施例L

S-[(1S)-2-[(1-亚氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二盐酸盐

本实施例使用的操作和方法与实施例K相同，除了在实施例-K-1中使用(R)-1-氨基-2-丙醇来代替(S)-1-氨基-2-丙醇，获得了本标题产物S-[(1S)-2-[(1-亚氨基乙基)氨基]-1-甲基乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，盐酸盐。¹H NMR(H₂O，400MHz)？3.6(m，1H)，3.4-2.6(m，5H)，2.1-1.8(m，3H)，1.5(m，3H)，和1.3-1.0(m，3H).HRMS计算值C₉H₁₉N₃O₂S [M+H⁺]：234.1276.

实测值：234.1286.

实施例M

S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-乙基-L-半胱氨酸，二盐酸盐

该实施例中使用的操作和方法与实施例I相同，除了在实施例-I-2中使用三氟甲磺酸乙酯来代替甲基碘。使用反相色谱法纯化，用10-40％乙腈的水溶液梯度洗脱，获得了本标题产物(产率为20％)。

¹H NMR(D₂O)？？ 0.83(t，3H)，1.80(m，2H)，2.08(s，3H)，2.68(m，1H)，2.78(m，1H)，2.83(m，1H)，3.11(m，1H)，3.36(t，2H).HRMS计算值C₉H₂₀N₃O₂S：234.1276[M+H⁺]，实测值234.1284.

实施例N

2-[[[[2-(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]硫基]甲基]-D-缬氨酸，二盐酸盐

实施例-N-1)三氟甲磺酸异丙酯

用在乙醚(200mL)中的异丙基磺(16.54g，98.5mmol)处理在氮气氛下在乙醚(300mL)内搅拌的三氟甲磺酸银(25.25g，98.3mmol)。将该混合物搅拌10分钟，然后过滤。将滤液减压蒸馏。将馏出液在常压下再次蒸馏以除去大部分乙醚，获得了本标题产物三氟甲磺酸异丙酯-乙醚的混合物(84∶16重量比)(15.64g，修正后是70％)，为无色液体。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)？1.52(d，6H)，5.21(七重峰，1H).

在本实施例中使用的操作和方法与实施例I中使用的相同，除了在实施例-I-2中使用三氟甲磺酸异丙酯来代替甲基碘。通过反相色谱法纯化本标题产物的粗产物，用10-40％乙腈的水溶液进行梯度洗脱。

¹H NMR(H₂O，400MHz)？？0.94(dd，6H)，2.04(七重峰，1H)，2.10(s，3H)，2.65，2.80(dm，2H)，2.85，3.10(dd，2H)，3.37(t，2H).HRMS计算值C₁₀H₂₂N₃O₂S：248.1433[M+H⁺]，实测值248.1450.

实施例O

S-[2-(1-亚氨基乙基氨基)乙基]-2-甲基-(D/L)-半胱氨酸，双三氟乙酸盐

实施例-O-1)S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸甲酯

将10g(50mmol)S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸样本溶解在400mL甲醇中。向该冷却的溶液中通入无水HCl 30分钟。在室温搅拌过夜后，将该溶液浓缩，获得了12.7g本标题化合物。

实施例-O-2)N-{4-氯苯基)亚甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亚甲基]氨基]乙基]-L-半胱氨酸甲酯

将12.7g(50mmol)实施例-O-1产物S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸甲酯样本溶解在乙腈中。向该溶液中加入12.2g(100mmol)无水MgSO₄、14g(100mmol)4-氯苯甲醛和100mmol三乙胺。将该混合物搅拌12小时，浓缩至小体积，用500mL乙酸乙酯稀释。将有机溶液依次用(0.1％)NaHCO₃、(2N)NaOH和盐水溶液洗涤。将有机相干燥(无水MgSO₄)，过滤并浓缩，获得了7.5g本标题化合物。[M+H⁺]＝179。

实施例-O-3)N-[4-氯苯基)亚甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亚甲基]氨基]乙基]-2-甲基-D/L-半胱氨酸甲酯

在-78℃、氮气氛下，将在无水THF中的实施例-O-2产物N-{4-氯苯基)亚甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亚甲基]氨基]乙基]-L-半胱氨酸甲酯样本(7.5g，17mmol)用17mmol二(三甲基甲硅烷基)氨基钠处理，然后加入2.4g(17mmol)甲基碘。将该溶液在-78℃保持4小时，然后在持续搅拌下温热至室温。将溶剂真空蒸发，加入盐水和乙酸乙酯。用EtOAc将水相萃取3次，将合并的有机层用10％KHSO₄、水和盐水洗涤，然后干燥(无水MgSO₄)，过滤并蒸发，获得了本标题化合物。

实施例-O-4)S-(2-氨基乙基)-2-甲基-D/L-半胱氨酸，盐酸盐

将实施例-O-3产物N-[4-氯苯基)亚甲基]-S-[2-[[(4-氯苯基)亚甲基]氨基]乙基]-2-甲基-D/L-半胱氨酸甲酯样本(4.37g，10mmol)与2N HCl一起搅拌和加热(60℃)过夜，用乙酸乙酯洗涤该溶液(3×)。将水溶液冷冻干燥，获得了本标题化合物。

实施例O)将实施例-O-4产物S-(2-氨基乙基)-2-甲基-D/L-半胱氨酸，二盐酸盐样本(2.5g，10mmol)溶解在水中，用1N NaOH将pH调节至10。然后将乙亚胺酸乙酯盐酸盐(1.24g，10.0mmol)加到该反应混合物中。将该反应搅拌10-30分钟，将pH增加至10，该操作重复3次。用HCl将pH降至4，将该溶液蒸发。通过反相HPLC纯化残余物，用含有0.05％三氟乙酸的水作为流动相，获得了实施例O标题产物。M+H＝220。

实施例P

(2R)-2-氨基-3-[[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]亚磺酰基]-2-甲基丙酸，二盐酸盐

将S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二盐酸盐(实施例I，0.2g，0.73mmol)在3mL水中的溶液搅拌，并冷却至0℃，以每批0.3mL的量分批加入3％H₂O₂(0.8mL，0.73mmol)在甲酸(0.4mL，0.73mmol)中的溶液。移去冷却浴，将该反应混合物在室温搅拌48小时。将该溶液真空浓缩，用水(10mL)稀释，再次浓缩，获得了砜粗产物。通过色谱法纯化该残余物(C-18反相，使用含有0.05％三氟乙酸的水作为流动相)，获得了纯的砜。用1M HCl(10mL)处理该砜，真空浓缩，获得了140mg盐酸盐形式的本标题化合物的两种非对映体的混合物，为无水油状物。

¹H NMR(300MHz，D₂O)？1.5(s，2H)，1.6(s，1H)，2.0(s，3H)，3.1(m，2H)，3.3(m，2H)3.6(m，2H).HRMS计算值C₈H₁₈N₃O₃S：236.1069[M+H⁺]，实测值：236.1024.

实施例Q

(2R)-2-氨基-3-[[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]磺酰基]-2-甲基丙酸，二盐酸盐

将实施例I产物S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱氨酸，二盐酸盐(0.15g，0.54mmol)在2mL水中的溶液冷却至0℃，并加入3％H₂O₂(1.6mL，1.46mmol)在甲酸(0.9mL，14.6mmol)中的溶液。移去冷却浴，将该反应混合物在室温搅拌18小时。将该溶液真空浓缩，用10mL水稀释，再次浓缩，获得了亚砜粗产物。用4mL水将该残余物稀释，用2.5N NaOH调节至pH 9。加入丙酮(5mL)，然后加入Boc₂O(0.2g)，将该反应在室温搅拌48小时。用1M HCl将该反应混合物调节至pH 6，并真空浓缩。通过色谱法纯化该残余物(C-18反相，40-50％CAN：H₂O，0.05％TFA)，获得了纯的Boc保护的产物。将该级份真空浓缩，用1M HCl(3mL)处理该残余物1小时。将该溶液浓缩，获得了30mg本标题化合物，为无水油状物。

¹H NMR(400MHz，D₂O)？4.0(d，1H)，3.7(d，1H)，3.6(t，2H)，3.5(t，2H)，2.1(s，3H)，和1.5(s，3H)ppm.HRMS计算值C₈H₁₈N₃O₄S：252.1018[M+H⁺]，实测值：252.0992.

实施例R

(2S，5Z)-2-氨基-6-甲基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例R-1)

将2-膦酰基丙酸三乙酯(6.5mg，27.1mmol)在甲苯(60mL)中的溶液用0.5M二(三甲基甲硅烷基)氨基钾(50.0mL，在甲苯中的溶液)处理，按照实施例U-4的方法(参见实施例U)将所得阴离子与实施例U-3醛产物缩合。通过色谱法纯化后获得了8g所需Z和E二酯的3∶7混合物。

(¹H)NMR(300MHz，CDCl3)6.7-6.8ppm(m，1H)，5.9ppm(m，1H)，4.9 ppm(m，1H)，4.2ppm(q，2H)，3.7ppm(s，3H)，2.5ppm(m，1H)，2.2-2.3ppm(m，2H)，2.0ppm(m，1H)，1.9ppm(s，3H)，1.8ppm(s，3H)，1.5ppm(s，18H)，1.3ppm(t，3H).

实施例R-2)

通过实施例U-5的方法，将实施例R-1的产物混合物(850mg，2.0mmol)在Et₂O(30mL)中的溶液用二异丁基氢化铝(DIBAL)还原20分钟，生成了所示E-醇与未还原的Z-酯的所需混合物粗产物。通过硅胶色谱纯化该混合物，用正己烷∶EtOAc(9∶1)-正己烷∶EtOAc(1∶1)洗脱，获得了Z-酯(530mg)与E-醇所需产物样本。

E-酯：

(¹H)NMR(300MHz，CDCl3)5.9ppm(m，1H)，4.9ppm(m，1H)，4.2ppm(q，2H)，3.7ppm(s，3H)，2.5ppm(m，1H)，2.2-2.3ppm(m，2H)，1.9ppm(s，3H)，1.5ppm(s，18H)，1.3ppm(t，3H).

E-醇：

(¹H)NMR(300MHz，CDCl3)5.35ppm(m，1H)，4.9ppm(m，1H)，3.95ppm(s，1H)，3.7ppm(s，3H)，1.8-2.2ppm(m，6H)，1.6ppm(s，3H)，1.5ppm(s，18H).

实施例R-3)

通过实施例U-5的方法，将实施例R-2的产物Z-酯(510mg，1.2mmol)在Et₂O(30mL)中的溶液用二异丁基氢化铝(DIBAL)还原2小时，生成了所示的所需Z-醇粗产物。通过硅胶色谱纯化该粗产物，用正己烷∶EtOAc(9∶1)-正己烷∶EtOAc(8∶2)洗脱，获得了340mg所需Z-醇产物。

(¹H)NMR(300MHz，CDCl₃)？5.3ppm(m，1H)，4.9ppm(m，1H)，4.2 ppm(d，1H)，4.0ppm(d，1H)，2.2ppm(m，3H)，1.95ppm(m，1H)，1.8ppm(s，3H)，1.5ppm(s，18H).

实施例R-4)

将实施例R-3醇产物(340mg，0.9mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)用三乙胺(151mg，1.5mmol)处理。向在冰浴内冷却的该溶液中加入甲磺酰氯的二氯甲烷溶液(1.5mL)。15分钟后，移去冰浴，将该反应在室温搅拌20小时。然后将该反应混合物用10％KHSO₄洗涤，用Na₂SO₄干燥，减压汽提掉所有溶剂，获得了350mg所需Z-烯丙型氯化物。

(¹H)NMR(300MHz，CDCl₃)？5.4ppm(m，1H)，4.9ppm(m，1H)，4.1ppm(d，1H)，4.0ppm(d，1H)，2.1ppm(m，3H)，1.95ppm(m，1H)，1.8ppm(s，3H)，1.5ppm(s，18H).

实施例R-5)

通过下文实施例S-2的方法将3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮在DMF中的悬浮液与实施例R-4产物的DMF溶液反应，以获得所需产物。

实施例R-6)

通过实施例U-7的方法，将实施例R-5产物与HOAc中的锌反应，以生成所需的脒。

实施例R-7)

将实施例R-6产物与4N HCl的二氧杂环己烷溶液在冰醋酸中反应，以生成所需的脒。

实施例R)

将实施例R-7产物脱保护，以生成所需的氨基酸，二盐酸盐。

实施例S

(2S，5E)-2-氨基-6-甲基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例S-1)

通过实施例R-4的方法，将实施例R-2的E-醇产物(1.3g，3.3mmol)与三乙胺(525mg，5.2mmol)和甲磺酰氯(560mg，5.2mmol)反应，获得了1.4g所需的E-烯丙型氯化物。

(¹H)NMR(400MHz，CDCl3)5.5ppm(m，1H)，4.9ppm(m，1H)，4.0ppm(s，2H)，3.7ppm(s，3H)，2.1-2.3ppm(m，3H)，1.9ppm(m，1H)，1.7ppm(s，3H)，1.5ppm(s，18H).

实施例S-2)

将3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮钾(460mg，3.35mmol)在5mLDMF中的悬浮液用实施例S-1产物的DMF(15mL)溶液处理。将该反应混合物在50℃搅拌17小时，然后再加入50mg(0.04mmol)二唑啉-5-酮盐。将该搅拌着的反应继续加热3小时，然后将其冷却至室温，用180mL水稀释。用EtOAc萃取该混合物，将萃取液用120mL正己烷稀释，用水洗涤，用Na₂SO₄干燥，减压汽提掉所有溶剂，获得了1.3g所需产物。

(¹H)NMR(400MHz，CDCl3)5.5ppm(m，1H)，4.9ppm(m，1H)，4.2ppm(s，3H)，3.7ppm(s，3H)，2.2ppm(m，3H)，1.95ppm(m，1H)，1.8ppm(s，3H)，1.5ppm(s，18H).

实施例S-3)

通过实施例U-7的方法(见下文实施例U)将实施例S-2产物(460mg，1.0mmol)与HOAc中锌反应，通过HPLC纯化后，获得了312mg所需的脒。

实施例S)

通过实施例U的方法，用2N HCl将实施例S-3产物(77mg，0.2mmol)脱保护，获得了63mg E-氨基酸，二盐酸盐。

实施例T

(2S，5Z)-2-氨基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例T-1)将二(三氟乙基)膦酰基乙酸甲酯(4.77g，15mmol)和23.7g(90mmol)18-冠-6溶解在80mL无水THF中，并冷却至-78℃。向该溶液中加入30mL(15mmol)二(三甲基甲硅烷基)氨基钾，然后加入5.1g(14.7mmol)实施例U-3的N，N-二Boc谷氨酸醛甲酯(见下文实施例U)。在-78℃搅拌30分钟后，用KHSO₄水溶液中止该反应。用EtOAc萃取该反应混合物，浓缩，获得了2.95g(49％)所需化合物。质谱M+H＝402。

实施例T-2)通过实施例U-5的方法将实施例T-1产物还原，获得了所需化合物。

实施例T-3)通过实施例U-6的方法，将实施例T-2的产物与3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮反应，获得了所需化合物。

实施例T-4)通过实施例U-7的方法，将实施例T-3的产物脱保护，获得了所需化合物。

实施例T)将实施例T-4的产物溶解在2N HCl中，加热回流。将该反应混合物冷却，浓缩，获得了0.12g所需产物。

H¹-NMR 1.8-2.0(m，2H)；2.05(s，3H)；2.15(q，2H)；3.75(d，2H)；3.9(t，1H)；5.45(m，1H)；5.6(m，1H)

实施例U

(2S，5E)-2-氨基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例U-1)将L-谷氨酸(6.0g，40.78mmol)溶解在甲醇(100mL)中。在0℃于氮气氛下向该反应化合物中加入三甲基甲硅烷基氯(22.9mL，180mmol)，并搅拌过夜。在0℃于氮气氛下向该反应化合物中加入三乙胺(37mL，256mmol)和二碳酸二叔丁酯(9.8g，44.9mmol)，并搅拌2小时。除去溶剂，用乙醚(200mL)研制该残余物。将研制的混合物过滤。将滤液蒸发，获得了油状物，通过二氧化硅色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷洗脱，获得了一-boc-L-谷氨酸二酯(10.99g，98％)。

实施例U-2)将一-boc-L-谷氨酸二酯(10.95g，39.8mmol)溶解在乙腈(130mL)中。向该反应混合物中加入4-二甲基氨基吡啶(450mg，3.68mmol)和二碳酸二叔丁酯(14.45g，66.2mmol)，并搅拌20小时。将溶剂蒸发，通过二氧化硅色谱纯化该残余物，用乙酸乙酯和己烷洗脱，获得了二-boc-L-谷氨酸二酯(14.63g，98％)。

实施例U-3)将实施例U-2产物(10.79g，28.7mmol)溶解在乙醚(200mL)中，在干冰浴中冷却至-80℃。向该反应混合物中加入二异丁基氢化铝(32.0mL，32.0mmol)，并搅拌25分钟。从干冰浴上移去该反应混合物，并加入水(7.0mL)。向该反应混合物中加入乙酸乙酯(200mL)，并搅拌20分钟。将硫酸镁(10g)加到该反应混合物中，并搅拌10分钟。将该反应混合物经由硅藻土过滤，浓缩，获得了澄清的黄色油状物(11.19g)。通过二氧化硅色谱纯化该黄色油状物，用乙酸乙酯和己烷洗脱。产物(8.61，87％)是澄清的浅黄色油状物。质谱： M+H 346，M+Na 378

(¹H)NMR(400MHz，CDCl₃)9.74ppm(s，1H)，4.85ppm(m，1H)，3.69ppm(s，3H)，2.49ppm(m，3H)，2.08ppm(m，1H)，1.48ppm(s，18H).

实施例U-4)在氮气氛下将膦酰基乙酸三乙酯(6.2mL，31.2mmol)溶解在甲苯(30mL)中，置于冰浴内以冷却至0℃。向该反应混合物中加入二(三甲基甲硅烷基)氨基钾(70mL，34.9mmol)，并搅拌90分钟。向该反应混合物中加入溶解在甲苯(20mL)中的实施例U-3产物(8.51g，24.6mmol)，并搅拌1小时。将该反应混合物温热至室温。向该反应混合物中加入硫酸氢钾(25mL，25mmol)，搅拌20分钟。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取该混合物，用硫酸镁干燥，浓缩，获得了混浊的棕黄色油状物(12.11g)。通过二氧化硅色谱纯化该油状物，用乙酸乙酯和甲苯洗脱，获得了浅黄色油状物(7.21g，70％)。质谱：

M+H416，M+NH₄ 433，-boc316，-2boc，216.

(¹H)NMR(400MHz，CDCl₃)6.88ppm(m，1H)，5.82ppm(d，1H)，4.81ppm(m，1H)，5.76ppm(s，3H)，2.50ppm(m，3H)，2.21ppm(m，1H)，1.45ppm(s，18H).

实施例U-5)将实施例U-4产物(5.0g，12.03mmol)溶解在乙醚(100mL)中，置于干冰浴内以冷却至-80℃。向该反应混合物中加入二异丁基氢化铝(21.0mL，21.0mmol)。搅拌30分钟。向该反应混合物中加入水(10mL)，移去干冰浴，搅拌60分钟。向该反应混合物中加入硫酸镁(10g)，搅拌10分钟。将该反应混合物经由硅藻土过滤，浓缩，获得了黄色油状物(5.0g)。通过二氧化硅色谱纯化该油状物，用乙酸乙酯与己烷洗脱，获得了浅黄色油状物(2.14g，47％)。质谱：

M+H374，M+NH₄ 391

(¹H)NMR(400MHz，CDCl₃)5.63ppm(m，2H)，4.88ppm(m，1H)，4.02ppm(s，2H)，3.68ppm(s，3H)，2.12ppm(m，4H)，1.47ppm(s，18H).

实施例U-6)将实施例U-5产物溶解在四氢呋喃(50mL)中。向该反应混合物中加入在聚合物上的三苯基膦(3.00g，8.84mmol)、恶二唑啉酮(720mg，7.23mmol)和偶氮二甲酸二甲酯(1.17g，3.21mmol)，在室温搅拌6小时。将该反应混合物经由硅藻土过滤，浓缩，获得了浑浊的黄色油状物(2.81g)。通过二氧化硅色谱纯化该油状物，用乙酸乙酯与己烷洗脱，获得了澄清的无色油状物(1.66g，68％)。质谱：

M+H 456，M+NH₄ 473，-boc 356，-2boc 256

(¹H)NMR(400MHz，CDCl₃)5.65 ppm(m，1H)，5.45ppm(m，1H)，4.79ppm(m，1H)，4.11ppm(d，2H)，3.68ppm(s，3H)，2.17ppm(m，4H)，1.47ppm(s，18H).

实施例U-7)将实施例U-6)产物(300mg，0.66mmol)溶解在含有金属锌的乙酸与水的溶液(10mL，25/75)中，并超声处理3小时。将该反应混合物经由硅藻土过滤，通过反相HPLC进行色谱纯化，获得了澄清的无水残余物(13mg，4％)。

(¹H)NMR(400MHz，CDCl₃)8.89ppm(m，1H)，5.68ppm(m，1H)，5.47ppm(m，1H)，3.80ppm(d，2H)，3.71ppm(s，3H)，2.18ppm(m，4H)，1.41ppm(s，18H).

实施例U)将实施例U-7产物(13.0mg，0.031mmol)溶解在2NHCl(1.22mL，2.44mmol)中，并回流1小时。将该反应混合物冷却，浓缩，获得了澄清的无色油状物(6.6mg，95％)。质谱：

M+H 200，

(¹H)NMR(400MHz，D₂O)5.65ppm(m，1H)，5.47ppm(m，1H)，3.80ppm(t，1H)，3.72ppm(d，2H)，2.0ppm(m，5H)，1.87ppm(m，2H).

实施例V：

(R，2S)-氨基六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-己酸，三水合物盐酸盐

实施例V-1)

用氮气吹扫3L三颈烧瓶，然后向其中加入环己酮(1.27mol，132mL)和500mL甲苯。将该搅拌着的混合物冷却至0℃，加入157.2g(1.1当量)叔丁醇钾。将该混合物搅拌1小时后，注意到发生了颜色和纹理的改变，然后用1小时将5-戊烯基溴(1.27mol，136mL)在100mL甲苯中的溶液滴加到该机械搅拌着的反应混合物中。让该反应混合物温热至25℃，并搅拌过夜。然后用800mL 1N KHSO₄稀释，将有机相干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发至干，获得了208.5g粗产物。通过真空蒸馏(在水泵压力下)纯化该粗产物，以47％的产率获得了本标题产物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.0-2.4(m，13H)，4.9-5.1(m，2H)，5.7-5.9(m，1H).

实施例V-2)

将实施例V-1产物(93.67g，0.563mol)与EtOH(600mL)、水(300mL)、NaOAc(101.67g，1.24mol)和NH₂OH.HCl(78.31g，1.13mol)在3L三颈烧瓶中合并。将该搅拌着的反应混合物回流16小时，然后在25℃搅拌24小时。减压除去所有溶剂，将残余物在乙醚(Et₂O，500mL)与水(200mL)之间分配。用3×200mL乙醚萃取水层。用MgSO₄将合并的有机层干燥，过滤，真空汽提，获得了本标题肟(121.3g，粗产物产率为100％)。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.2-2.6(m，13H)，4.9-5.1(m，2H)，5.7-5.9(m，1H).

实施例V-3)

用氮气吹扫3L三颈烧瓶，然后加入六甲基二硅氧烷(471.7mL，2.2mol)、甲苯(500mL)和五氧化磷(203.88g，1.4mol)。将该多相混合物回流直至获得澄清溶液(约1.5小时)。将该混合物冷却至室温后，在25℃用1小时将在200mL甲苯中的实施例V-1肟产物(102.1g，0.563mol)加到上述反应混合物中。将该反应混合物搅拌4-6小时(通过TLC检查：50％EA的己烷，I₂)，将其倒入冰水内并充分混和。向该冰浆液混合物中加入250g NaCl，通过加入固体碳酸钾将所得混合物调节至pH 5。用3×500mL乙醚(Et₂O)萃取该浆液，用MgSO₄将合并的有机级份干燥，过滤，真空汽提，获得了区域异构(regioisomeric)内酰胺的粗制混合物(84.6g)。

实施例V-4)

R-异构体 S-异构体

然后将实施例V-3产物进行色谱处理(二氧化硅：乙腈)，以纯化和分离区域异构体。从粗产物样本中以50％的收率分离出了7-戊烯基区域异构体，经过手性色谱分离后，分别以43％的收率分离出了所需的单一对映体。

R-异构体

元素分析的计算值 C₁₁H₁₉NO：C，71.99；H，10.57；N，7.63.实测值：C，71.97；H，10.58；N，7.52

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.3-1.6(m，7H)，1.75-1.9(m，2H)，1.95-2.15(m，3H)，2.4-2.5(m，2H)，3.25-3.35(m，1H)，4.95-5.05(m，2H)，5.7-5.85(m，1H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：23.166，25.169，29.601，33.209，35.475，35.624，36.783，53.600，114.976，137.923，177.703

[]²⁵＝+26.9°(CHCl₃)在365nm.

S-异构体

元素分析的计算值 C₁₁H₁₉NO：C，71.99；H，10.57；N，7.63.实测值：C，72.02；H，10.61；N，7.57

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：23.187，25.178，29.630，33.230，35.526，35.653，36.778，53.621，115.032，137.914，177.703

[]²⁵＝-25.7°(CHCl₃)在365nm.

实施例V-5)

将实施例V-4的R-异构体产物(102.1g，0.56mol)、无水THF(800mL)、DMAP(68.9g，0.56mol)、二碳酸二叔丁酯(Boc₂O，99g，0.45mol)在用氩气吹扫过的3L三颈烧瓶内合并。在30分钟内将该反应混合物温热至70℃，然后加入52.8g Boc₂O和200mL无水THF。30分钟后，再加入32g Boc₂O，将该混合物在70℃搅拌1小时。再加入36g Boc₂O，将该混合物搅拌1小时。将该反应混合物冷却至室温，在18-20℃减压汽提掉THF。过滤出沉淀，用100mL乙酸乙酯(EA)洗涤，弃去沉淀(～45g)。将EA滤液用500mL另外的EA稀释，然后用500mL 1NKHSO₄、500mL饱和碳酸氢钠水溶液和500mL盐水洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥12小时。将EA萃取液用20g DARCO处理，经由顶端盖以硫酸镁的硅藻土过滤，真空浓缩，获得了150g本标题产物，为深棕色油状物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.3-1.6(m，4H)，1.5(s，9H)，1.6-1.9(m，6H)，1.95-2.05(m，2H)，2.5-2.7(m，2H)，4.2-4.25(m，1H)，4.95-5.05(m，2H)，5.7-5.85(m，1H).

实施例V-6)

将含有溶解在3L二氯甲烷内的实施例V-5产物(150g，0.533)的3L三颈烧瓶冷却至-78℃。向该溶液中通入2.5小时O₃气流直至该反应混合物的颜色变为蓝色。然后向保持在-60℃--70℃的该溶液中通入氩气直至该溶液变为澄清和无色(～30分钟)。加入二甲基硫醚(DMS，500mL)，然后将该反应加热至回流，并让回流持续24小时。再加入100mL DMS，让回流持续12小时。再加入100mL DMS，让回流持续12小时。用旋转蒸发仪于20℃汽提掉溶剂和过量DMS。将所获得的黄色油状残余物用500mL DI水稀释，用3×300mL EA萃取。用无水MgSO₄将EA层干燥，用20g DARCO处理，经由一薄层上面盖有无水MgSO₄的硅藻土过滤，减压汽提掉所有溶剂，获得了156g本标题产物的粗产物，为橙黄色油状物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.3-1.6(m，4H)，1.5(s，9H)，1.6-1.9(m，6H)，2.45-2.75(m，4H)，4.2-4.25(m，1H)，9.75(s，1H).

实施例V-7)

向溶解在1L二氯甲烷(CH₂Cl₂)内并冷却至0℃的N-(苄氧基羰基)-α-膦酰基甘氨酸三甲酯样本(160g，0.48mol)中加入DBU(110.29g，0.72mol)在100mLCH₂Cl₂中的溶液。将该澄清的无色反应混合物在0℃-6℃搅拌1小时，然后在-5℃--1℃滴加在600mL CH₂Cl₂中的实施例V-6的Boc-醛产物(150g，0.53mol)。将该反应混合物在室温搅拌30分钟，然后在约1小时内将其缓慢地温热至10℃。将该反应混合物用1N KHSO₄(500mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)和50氯化钠水溶液(200mL)洗涤。然后用无水MgSO₄将有机层干燥，用40gDARCO处理，经由一薄层上面盖有无水MgSO₄的硅藻土过滤，浓缩，获得了258g本标题产物的粗产物，为黄色油状物。通过色谱法纯化该油状物，获得了130g(55％)纯的本标题产物。元素分析的计算值 C₂₆H₃₆N₂O₇：C，63.96；H，7.42；N，5.77.实测值：C，63.42；H，8.16；N，5.31.

¹HNMR(CDCl₃，ppm)：1.25(m，2H)，1.5(s，9H)，1.51-1.9(bm，8H)，2.25(m，2H)，2.5(m，1H)，2.65(m，1H)，3.75(s，3H)，4.12(m，1H)，5.15(s，2H)，6.3(bs，1H)，6.55(t，1H)，7.45(m，5H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：14.04，22.62，23.46，24.08，25.27，27.89，27.92，28.34，28.95，31.81，31.86，32.05，39.18，52.31，54.65，67.27，82.62，128.07，128.18，128.46，135.98，136.82，154.50，164.92，176.68.

[]²⁵＝+10.9°(CHCl₃)在365nm.

实施例V-8)

向实施例V-7产物(91.3g，0.19mol)的MeOH(1L)溶液中加入2.5g S，S-Rh-DIPAMP催化剂，然后通入氢。氢化在帕尔装置中于25℃进行1.5小时。将该反应混合物经由硅藻土过滤，然后浓缩，获得了本标题化合物的粗产物(90g，98％)，为棕色油状物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.35(m，4H)，1.5(s，9H)，1.55-1.95(m，10H)，2.4-2.7(m，2H)，3.75(s，3H)，4.2(m，1H)，4.4(m，1H)，5.1(m，2H)，5.35(d，1H)，7.35(m，5H).

实施例V-9)

向实施例V-8产物(90g)在200mL冰醋酸内的溶液中加入200mL4N HCl的二氧杂环己烷溶液。将该反应混合物在25℃搅拌20分钟，然后在40℃减压汽提掉所有溶剂，获得了红棕色油状物。将该油状产物用500mL水处理，用2×300mL二氯甲烷萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，汽提掉所有溶剂，获得了本标题产物的粗产物。通过色谱法纯化，获得了45g(62％)纯的本标题产物。元素分析的计算值 C₂₁H₃₀N₂O₅：C，64.02；H，7.68；N，7.17.实测值：C，63.10；H，7.88；N，6.60.

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.2-2.0(m，14H)，2.45(t，2H)，3.25(m，1H)，3.75(s，3H)，4.38(m，1H)，5.1(s，2H)，5.3(d，1H)，5.45(bs，1H)，7.35(m，5H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：14.09，23.11，24.89，25.41，29.53，32.33，35.52，35.79，36.68，52.26，53.51，53.55，53.60，60.26，66.86，127.97，128.05，128.40，136.18，155.85，172.85，177.80.

[]²⁵＝-9.9°(CHCl₃)在365nm.

实施例V-10)

向在用氩气吹扫过的300mL二氯甲烷内的45.0g(0.115mol)实施例V-9产物样本中加入23.0g(0.121mol)三乙基氧四氟硼酸盐。将该混合物在25℃搅拌1小时，然后加入150mL饱和碳酸氢钠水溶液。分离出二氯甲烷层，用150mL 50％氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，经由硅藻土过滤，在25℃浓缩，获得了澄清的黄色油状物，47.0g(97％)本标题产物。元素分析的计算值 C₂₃H₃₄N₂O₅：C，60.01；H，8.19；N，6.69.实测值：C，65.13；H，8.45；N，6.64.

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.2(t，3H)，1.25-1.74(m，12H)，1.75-1.95(m，2H)，2.2-2.3(m，1H)，2.4-2.5(m，1H)，3.1(m，1H)，3.7(s，3H)，3.9-4.0(m，2H)，4.35(m，1H)，5.1(s，2H)，5.25(d，1H)，7.35(m，5H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：14.23，23.38，25.01，25.21，26.10，30.24，32.16，32.77，33.92，39.15，52.22，53.91，58.05，60.19，66.92，128.11，128.33，128.48，136.27，155.83，166.29，173.11，177.64.

实施例V-11)

向在500mL甲醇内的7.0g(0.130mol)氯化铵中加入31.2g实施例V-10标题产物(45.0g，0.107mol)。将该反应在65℃回流5小时，然后减压除去所有溶剂，获得了40g(87％)粗产物，为泡沫状粘性物质。通过柱色谱法纯化该残余物，获得了37g(81％)本标题产物。

元素分析的计算值 C₂₁H₃₁N₃O₄：C，59.22；H，7.57；N，9.86；Cl，8.32.实测值：C₂₁H₃₁N₃O₄+1.2 HCl+0.5 H₂O：C，57.20；H，7.99；N，9.66；Cl，9.62.IR(Neat，max cm^-1)：2935，1716，1669.

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.2-2.0(m，13H)，2.5(t，1H)，2.95(m，1H)，3.4(bs，1H)，3.7(s，3H)，4.3(m，1H)，5.1(s，2H)，5.55(d，1H)，7.3(m，5H)，8.75(bs，1H)，8.9(bs，1H)，9.5(s，1H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：23.20，24.95，25.22，28.94，31.80，32.05，33.75，34.89，52.33，53.76，56.07，66.83，127.93，128.04，128.43，136.26，156.00，172.24，172.87.

质量(ESI)：M/Z，390.

[]²⁵＝+31.5°在365nm.

实施例V)

将实施例V-11标题产物(36.0g，0.084mol)在1L 2.3N HCl中回流3小时。冷却至室温后，用2×150mL二氯甲烷洗涤该溶液，然后真空汽提掉所有溶剂，获得了25.6g(96％)本标题氨基酸产物，为浅黄色泡沫状物。

元素分析的计算值 C₁₂H₂₃N₃O₂.2HCl：C，46.02；H，8.01；N，13.39；Cl 22.45.实测值： C₁₂H₂₃N₃O₂+2.2 HCl+0.1 H₂O：C，42.76；H，8.02；N，12.41；Cl，22.79.IR(Neat，.max，cm^-1)：2930，2861，1738，1665.

¹H NMR(CD₃OD，ppm)：1.3-2.5(m，16H)，2.6(dd，1H)，2.8(t，1H)，3.65(m，1H)，4.0(t，1H)，7.85(s，1H)，8.85(s，1H)，8.95(s，1H).

¹³C NMR(CD₃OD，ppm)：24.49，25.67，26.33，29.71，31.26，32.45，35.04，35.87，53.73，57.21，171.77，173.96.

UV，282nm，abs 0.015.

质量(M⁺¹)＝242.

[ ]²⁵＝-47.4°(MeOH)在365nm.

ee＝91％用CE测定的在＝214nm.

实施例W：

(S，2R)-氨基六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-己酸，三水合物盐酸盐

实施例W-1)

通过实施例V-5的方法，将实施例V-4的S-异构体产物(5.45g，0.030mol)转化成Boc衍生物。色谱纯化后，通过该反应获得了6.3g(75％)所需标题产物。

实施例W-2)

通过实施例V-6的方法，将实施例W-1产物(6.3g，0.025mol)臭氧化，获得了8.03g本标题醛粗产物，其不用进一步纯化直接使用。

实施例W-3)

通过实施例V-7的方法，将实施例W-2产物(8.03g，0.024mol)与N-(苄氧基羰基)-α-膦酰基甘氨酸三甲酯样本(7.9g，0.024mol)缩合，色谱纯化后，获得了4.9g(44％)所需标题产物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.25(m，2H)，1.5(s，9H)，1.51-1.9(bm，8H)，2.25(m，2H)，2.5(m，1H)，2.65(m，1H)，3.75(s，3H)，4.15-4.25(m，1H)，5.15(s，2H)，6.3-6.4(bs，1H)，6.45-6.55(t，1H)，7.3-7.4(m，5H).

实施例W-4)

通过实施例V-8的方法，在R，R-Rh-DIPAMP催化剂存在下将实施例W-3产物(4.8g，0.010mol)还原，色谱纯化后，获得了2.9g(60％)所需标题产物。

实施例W-5)

通过实施例V-9的方法，通过用HCl处理将实施例W-4产物(2.9g，0.006mol)脱保护，获得了2.3g(100％)所需标题产物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.3-2.0(m，14H)，2.45(t，2H)，3.25(m，1H)，3.75(s，3H)，4.38(m，1H)，5.1(s，2H)，5.3(d，1H)，5.45(bs，1H)，7.35(m，5H).

实施例W-6)

通过实施例V-10的方法，用三乙基氧四氟硼酸盐将实施例W-5产物(0.56g，0.0015mol)烷基化，获得了0.62g(98％)所需标题产物。

实施例W-7)

通过实施例V-11的方法，用在甲醇中的氯化铵处理实施例W-6产物(0.62g，0.0015mol)，色谱纯化后，获得了0.50g(88％)所需标题产物。

实施例W-8)

将溶解在MeOH中的实施例W-7产物(0.37g，0.0009mol)加到帕尔氢化装置中。向该溶液中加入催化量的5％Pd/C。引入氢，让该反应在室温于5psi压力下进行7小时。通过过滤除去催化剂，在减压下将所有溶剂从滤液中除去，获得了0.26g(定量)所需标题产物。

实施例W)

将溶解在2N HCl(30mL)中的实施例W-8产物的溶液在回流状态下保持2小时，然后将其冷却至室温。减压除去所有溶剂，将残余物溶解在50mL水中。通过减压汽提掉将所有溶剂从该溶液中除去，然后再溶解在12mL水中，冷冻干燥，获得了0.245g(71％)本标题化合物。

元素分析的计算值 C₁₂H₂₃N₃O₂.2.3HCl.1.9H₂O：C，40.10；H，8.16；N，11.69；Cl22.69.实测值： C₁₂H₂₃N₃O₂+2.1HCl+0.7H₂O：C，40.27；H，8.28；N，11.62；Cl，22.70.

¹H NMR(CD₃OD，ppm)：1.4-2.1(m，16H)，2.6(dd，1H)，2.8(t，1H)，3.65(m，1H)，4.0(t，1H)，7.85(s，1H)，8.45(s，1H)，8.9(s，1H).

¹³C NMR(CD₃OD，ppm)：24.46，25.64，26.31，29.69，31.24，32.54，35.00，35.83，53.75，57.20，171.85，173.93.

[ ]²⁵＝+25.7°(MeOH)在365nm.

实施例X：

(S，2S)-氨基六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-己酸，三水合物盐酸盐

实施例X-1)

向装配有高架搅拌器、半月形桨、加热套、热电偶和银真空夹套蒸馏柱(5板)的22L圆底烧瓶内加入环己酮(4500.0g，45.85mol)、丙酮二甲基缩酮(5252.6g，50.43mol)、烯丙醇(6390.87g，110.04mol)和对甲苯磺酸(PTSA)(0.256g，0.001mol)。开始搅拌(137rpm)后，以70℃的初始设置点缓慢地加热烧瓶。梯度提高加热至烧瓶的最终温度为150℃。提高反应器设置点的决定是基于蒸馏速度作出的。如果蒸馏速度减慢或停止了，则再施以加热。另外加热至150℃使得发生Claisen重排。在烧瓶温度增加至150℃以后，没有观察到任何馏出液，放下加热套，让该反应混合物冷却至130℃。然后用3滴2.5N NaOH将PTSA中和。开始真空汽提，将加热套从烧瓶中放下。使用蒸发冷却来降低烧瓶温度，将压力逐渐降至40mm Hg。当烧瓶温度已降至约100℃时，再把加热套提升至适当位置以进行加热。蒸馏除去未反应的环己酮和低沸点杂质。缓慢地提高烧瓶温度(烧瓶与蒸汽之间的最大温差为约12℃)。在109-112℃@40mm Hg分离出产物。典型产率为40-45％。将＜95％(面积(GC))的级份合并，再次蒸馏，以55％的总产率获得了本标题产物。

¹H NMR(CDCl₃，δppm)：5.8-5.6(m，1H)，4.8-5.0(m，2H)，2.5-2.4(m，1H)，2.3-2.1(m，3H)，2.1-1.2(m，7H).

¹³C NMR(CDCl₃，δppm)：212.53，136.62，116.32，50.39，42.18，33.91，33.52，28.09，25.10.GC/MS m/z＝138.

实施例X-2)

将溶解在乙酸(470g)中的羟基胺-O-磺酸(91.8g)加到装配有机械搅拌器、热电偶、冷却至0℃的冷凝器和加液漏斗的1L Bayer烧瓶内，并加热至70℃。用约40分钟将烯丙基环己酮(100g)滴加到上述溶液中，同时把温度保持在70-78℃。在加入期间，反应混合物的外观从白色浆液变为澄清的橙色溶液。加入完成后，将该反应在75℃加热和搅拌5小时。每小时取一次IPC样本。反应完全后，用旋转蒸发仪在50℃于减压条件下把乙酸汽提。然后向残余物中加入水(200mL)，用甲苯(2×300mL)萃取该溶液。将有机层合并，用水(150mL)处理，搅拌10分钟。加入氢氧化钠溶液(79.4g的50溶液)直至水层变为碱性(pH12)。通过把温度控制在40℃以下来在反应器中进行中和。然后分离各层，让甲苯层经过滤器来除去任何固体或焦油物质。然后用旋转蒸发仪在50℃于减压条件下汽提该有机溶液。在3L反应器内，将残余物置于甲苯(510mL)和庚烷(2040mL)中，并加热至60℃。获得了澄清的黄橙色溶液。在搅拌下将该溶液缓慢地冷却至5℃，本标题产物在53℃开始结晶。过滤出固体，用庚烷(50mL)洗涤，在真空下于40℃干燥过夜，获得了66.3g(60％)本标题产物，为灰白色晶体。将一部分该产物从甲苯和庚烷中重结晶，获得了本标题产物，为白色固体结晶。

¹H NMR(CDCl₃，δppm)：5.8-5.6(m，1H)，5.5(bs，1H)，4.8-5.0(m，2H)，3.4-3.3(m，1H)，2.5-2.3(m，2H)，2.3-2.1(m，2H)2.0-1.2(m，6H)

¹³C NMR(CDCl₃，δppm)：117.73，133.83，119.31，52.88，40.95，37.20，35.75，29.96，23.33.GC/MS(EI mode)＝153.

m.p.＝97-99℃.

实施例X-3)

R-异构体 S-异构体

在Chiralpac AS 20um柱上，通过手性色谱法分离实施例X-2的外消旋产物混合物，用100％乙腈洗脱。在检测器中采用220nM的波长。使用0.08g/mL乙腈的样本负载量，以90％的收率获得了分别具有＞95％ee的分离出的异构体。将一部分R-异构体从甲苯和庚烷中重结晶，获得了R-异构体标题产物，为白色固体结晶。

R-异构体：m.p.＝81-82℃。

实施例X-4)

将装配有滴液漏斗、热电偶和机械高架搅拌器的五颈平底烧瓶抽真空，用氮气吹扫3次。将实施例X-3的R-异构体产物内酰胺(100.0g，0.653mol)、DMAP(7.98g，65mmol)和N-二异丙基乙胺(Hüinigs碱，113.3g，0.876mol)溶解在甲苯(350mL)中，加入溶解在甲苯(100mL)中的二碳酸二叔丁酯(170.2g，0.78mol)。(注意：当使用2.0当量Hüinigs碱时，反应进行得更好)。将该混合物加热至65℃(注意：在反应期间观察到稳定的气体释放)。1.5小时后，再加入溶解在甲苯(50mL)中的86.25g二碳酸二叔丁酯(0.395mol)。继续加热17小时，通过HPLC进行的IPC表明转化了75。再加入在甲苯(30mL)中的42.78g二碳酸二叔丁酯(0.196mol)，将该棕色混合物加热5.5小时。冷却至室温后，用4M HCl(215mL)处理该混合物，用甲苯(2×80mL)萃取水层。将合并的有机层用NaHCO₃(170mL)和250mL水洗涤(注意：在处理期间通过在外部用冰/水冷却来控制内温)。观察到了气体释放。将有机层蒸发，获得了257.4g棕色液体。通过用SiO₂(950g)塞过滤来纯化粗产物，用甲苯/EtOAc9/1(6L)和甲苯/AcOEt1/1(0.5L)洗脱，获得了139.5g(51％)本标题产物，为黄色液体。

实施例X-5)

实施例X-6)

实施例If

向装配有挡板和六叶片气体分散轴叶轮的2-L不锈钢高压釜内加入Rh(CO)₂(acac)(0.248g，0.959mmol)、BIPHEPHOS(其结构如下所示，是按照US专利4,769,498实施例13中描述的方法制得的，2.265g，2.879mmol)、实施例X-4产物(N-(叔丁氧基羰基)-S-7-烯丙基己内酰胺(allylcaprolactam)(242.9g，0.959mol)和甲苯(965g)。

将该反应器密封，用100％一氧化碳(8×515kPa)吹扫。用100％一氧化碳将该反应器加压至308kPa(30psig)，然后加入1∶1 CO/H₂气体混合物来获得515kPa(60psig)的总压力。在剧烈机械搅拌下，将该混合物加热至50℃，同时加入1∶1 CO/H₂气体混合物以把总压力保持在约515kPa(60psig)。22小时后，将该混合物冷却至约25℃，小心地释放压力。将产物混合物真空过滤，将滤液减压蒸发，获得了267.7g浅黄色油状物。¹H NMR分析表明，原料基本上是定量转化，对实施例V-6的相应醛产物的选择性是约96％。该油状物不用进一步纯化直接用于下一实施例。

¹H NMR(CDCl₃)1.47(s，9H)，1.6-1.80(m，9H)，1.84-1.92(m，1H)，2.41-2.58(m，3H)，2.61-2.71(m，1H)，4.2(d，J＝5.2 Hz，1H)，9.74(s，1H).

实施例X-8)

实施例1g

向溶解在CH₂Cl₂中并冷却至0℃的N-(苄氧基羰基)-α-膦酰基甘氨酸三甲酯样本(901.8g，2.7mol)内加入DBU(597.7g，3.9mol)在CH₂Cl₂中的溶液。将该澄清的无色反应混合物在0℃-6℃搅拌1小时，然后在-5℃--1℃滴加在CH₂Cl₂中的实施例V-6的Boc-醛产物样本(812.0g，2.9mol)。如实施例V-7所述完成反应、后处理和纯化，获得了1550g实施例V-7的标题产物，其中含有少量CH₂Cl₂。

实施例X-9)

向实施例V-7产物(100g，0.20mol)的MeOH(1L)溶液中加入3gRR-Rh-DIPAMP催化剂。氢化在帕尔装置中于25℃进行1.5小时。将该反应混合物经由硅藻土过滤，然后浓缩，获得了实施例X-9标题产物的粗产物，为棕色油状物(100g)。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.35(m，4H)，1.5(s，9H)，1.6-1.9(m，10H)，2.5-2.8(m，2H)，3.75(s，3H)，4.25(m，1H)，4.45(m，1H)，5.1(m，2H)，5.65(d，1H)，7.35(m，5H).

实施例X-10)

向实施例V-8产物(100g)在200mL冰醋酸内的溶液中加入25mL4N HCl的二氧杂环己烷溶液。将该反应混合物在25℃搅拌20分钟，然后在40℃减压汽提掉所有溶剂，获得了105g红棕色油状物。将该油状产物用500mL水处理，用2×300mL二氯甲烷萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，汽提掉所有溶剂，获得了99.9g本标题产物，为红棕色油状物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.25-2.0(m，14H)，2.45(t，2H)，3.25(m，1H)，3.7(s，3H)，4.35(m，1H)，5.1(s，2H)，5.5(d，1H)，6.45(bs，1H)，7.35(m，5H).

ee＝95％通过手性HPLC测定的，

实施例X-11)

向在用氩气吹扫过的600mL二氯甲烷内的30.0g(0.077mol)实施例X-10产物样本中加入15.7g(0.082mol)三乙基氧四氟硼酸盐。将该混合物在25℃搅拌1小时，然后加入300mL饱和碳酸氢钠水溶液。分离出二氯甲烷层，用300mL 50％氯化钠水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，经由硅藻土过滤，在25℃浓缩，获得了澄清的黄色油状物，31.2g(～97％)本标题产物。

元素分析的计算值 C₂₃H₃₄N₂O₅：C，60.01；H，8.19；N，6.69.实测值： C₂₃H₃₄N₂O₅+0.5H₂O：C，64.66；H，8.24；N，6.59.

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.25(t，3H)，1.28-1.75(m，12H)，1.8-1.98(m，2H)，2.2-2.3(m，1H)，2.4-2.5(m，1H)，3.1(m，1H)，3.78(s，3H)，3.9-4.0(m，2H)，4.35(m，1H)，5.1(s，2H)，5.25(d，1H)，7.35(m，5H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：14.27，23.36，25.21，25.53，26.09，30.22，32.15，32.73，33.90，39.14，52.21，53.89，58.04，60.33，66.89，128.11，128.35，128.48，136.29，155.86，166.30，173.14，177.69.

IR(Neat，.max，cm^-1)：3295，2920，1739，1680.

UV，257nm， abs0.015.

[]²⁵＝+39.8°(CHCl₃)在365nm.

实施例X-12)

向在500mL甲醇内的4.2g(0.078mol)氯化铵中加入31.2g实施例X-11标题产物。将该反应在65℃回流5小时，然后减压除去所有溶剂，获得了29g(92％)粗产物，为泡沫状粘性物质。通过柱色谱法纯化该残余物，获得了23g(70％)本标题产物。

元素分析的计算值 C₂₁H₃₁N₃O₄.1HCl) C，59.28；H，7.57；N，9.89；Cl，8.39.实测值：(C₂₁H₃₁N₃O₄+1HCl+1H₂O)：C，56.73；H，7.74；N，9.40；Cl，8.06.IR(Neat，max cm^-1)：3136，30348，2935，1716，1669.

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.3-2.05(m，13H)，2.5(t，1H)，2.98(m，1H)，3.4(bs，1H)，3.75(s，3H)，4.35(m，1H)，5.1(s，2H)，5.5(d，1H)，7.35(m，5H)，8.75(s，1H)，9.0(s，1H)，9.5(s，1H).¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：23.25，25.01，25.34，29.01，31.88，32.26，33.89，35.06，52.33，53.73，56.20，66.89，127.95，128.06，128.45，136.27，155.93，172.27，172.80.UV，257nm，abs0.009.

质量(ESI)：M/Z，390.

[]²⁵＝-42.8°(MeOH)在365nm.

ee＝96％通过手性HPLC测定的

实施例X)

将实施例X-12标题产物(23g)在500mL 2N HCl中回流5小时。然后真空除去所有溶剂，将残余物再溶解在水中，用2×300mL二氯甲烷洗涤。将该水溶液真空浓缩，获得了17g(100％)本标题产物，为浅棕色吸湿性固体。

元素分析的计算值 C₁₂H₂₃N₃O₂.2HCl：C，45.86；H，8.02；N，13.37；Cl 22.56.实测值： C₁₂H₂₃N₃O₂+2.1HCl+0.7H₂O：C，43.94；H，8.65；N，12.52；Cl，22.23.IR(Neat，.max，cm^-1)：2936，1742，1669.

¹H NMR(CD₃OD，ppm)：1.3-2.1(m，16H)，2.6(dd，1H)，2.8(t，1H)，3.65(m，1H)，4.0(t，1H)，7.85(s，1H)，8.4(s，1H)，8.95(s，1H).

UV，209nm，abs 0.343.

质量(M⁺¹)＝2422.

[]²⁵＝+60.0°(MeOH)在365nm.

ee＝92％用CE测定的在＝210nm.

实施例Y

(R，2S)-氨基六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-己酸，三水合物盐酸盐

实施例Y-1)

将实施例X-3(3.0g，0.015mol)在二氯甲烷与甲醇(75/45mL)中的溶液在干冰浴中冷却至-78℃。搅拌该反应，同时以3ml/分钟的流速向该溶液中通入臭氧。当溶液保持持续的深蓝色时，除去臭氧，用氮气吹扫该反应。向该冷溶液中非常缓慢地加入硼氢化钠(2.14g，.061mol)，以将气体的释放减至最少。向该反应中缓慢地加入冰醋酸以把pH调节至3。然后用饱和碳酸氢钠中和该反应。将有机层用3×50mL盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，减压除去溶剂。让该苍白色油状物经过二氧化硅(15g)塞，获得了醇5.15g，0.026mol(64％)。C₉H₁₄N₂O₃。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)1.18-2.15(m，8H)，3.59(m，2H)，4.39(m，1H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)24.45，25.71，26.47，32.56，34.67，51.16，58.85，160.66，160.89.

实施例Y-2)

在冰浴内，在0℃，向实施例Y-1(5.15g，0.026mol)在二氯甲烷(100mL)内的溶液中加入四溴化碳(10.78g，0.033mol)。将该溶液在冰浴中冷却至0℃。然后分批加入三苯基膦(10.23g，0.39mol)以不让温度超过3℃。将该反应搅拌2小时，真空除去溶剂。通过快速色谱法纯化粗产物，以87％的产率获得了溴化物(5.9g，0.023mol)。

元素分析的计算值 C₁₀H₁₆N₂O₃：C，41.40；H，5.02；N，10.73；Br，30.60.实测值：C，41.59；H，5.07；N，10.60，Br，30.86.

¹H NMR(CDCl₃，ppm)1.50-2.60(m，9H)，2.99(dd，1H)，3.35(m，2H)，4.41(m，1H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)23.89，25.33，26.04，28.06，31.59，35.05，52.79，159.3，160.2.

实施例Y-3)

向实施例Y-2(5.71g，0.026mol)在甲苯(25mL)内的溶液中加入三苯基膦(7.17g，0.027mol)。将该反应在油浴中回流16小时。冷却后，倾析出甲苯，获得了玻璃状固体。用乙醚将该固体研制过夜，以90％的产率获得了溴化磷(10.21g，0.020mol)。

¹HNMR(CDCl₃，ppm)：1.50-2.9(m，11H)，3.58(m，1H)，4.16(m，1H)，4.41(m，1H)，7.6-8.0(m，15H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：24.43，24.97，25.50，55.08，55.27，116.9，118.1，130.4，130.6，133.5，135.1，135.2，159.4，160.

³¹P NMR(CDCl₃，ppm)26.0.

实施例Y-4)

向1N圆底烧瓶中加入在乙醇(500mL)中的N-苄氧基羰基-D-高丝氨酸内酯(97g，0.442mol)。向该反应中加入氢氧化钠溶液(1M，50mL)。通过薄层色谱监测该反应12小时，直至原料已消耗完。加入甲苯(60mL)，然后真空除去溶剂。该残余物不用进一步纯化直接使用。

实施例Y-5)

在1L圆底烧瓶内，将实施例Y-4的残余物悬浮在DMF中。向该悬浮液中加入苄基溴(76.9g，0.45mol，53.5mL)，将该混合物搅拌1小时。处理该样本，通过质谱分析样本，结果表明原料已消耗，并且没有在形成内酯。向该反应中加入1L乙酸乙酯和500mL盐水。将水层用500mL乙酸乙酯洗涤2次。合并有机层，用MgSO₄干燥，并浓缩。通过硅胶色谱纯化，获得了N-苄氧基羰基-S-高丝氨酸苄酯，为白色固体(80g)。

实施例Y-6)

向2L圆底烧瓶内加入悬浮在CH₂Cl₂(600mL)中的吡啶氯铬酸盐(187g，0.867mol)和硅胶(197g)。向该浆液中加入实施例Y-5产物(80g，0.233mol)在CH₂Cl₂(600mL)中的溶液。将该混合物搅拌4小时。薄层色谱表明原料已消耗完。向该溶液中加入1L乙醚。然后依次经由硅藻土垫和硅胶垫过滤该溶液。真空除去溶剂，通过硅胶色谱纯化所得油状物，以38％的总产率获得了醛(58.8g)。

MH⁺342.5，MH+NH₄ ⁺359.5.

¹HNMR(CDCl₃，ppm)3.15(q，2H)，4.12(m，1H)，5.15(s，2H)，5.20(s，2H)，7.31(m，10H)，9.72(s，1H).

实施例Y-7)

向3 L三颈烧瓶内加入已经用P₂O₅真空干燥的在THF(1L)中的得自实施例Y-3的磷盐(56.86g，0.11mol)。在干冰浴内将该浆液冷却至-78℃。向该冷浆液中滴加KHMDS(220mL，0.22mol)，让温度不超过-72℃。将该反应在-78℃搅拌20分钟，然后在-45℃搅拌2小时。再让温度降至-78℃，用45分钟滴加在THF(50mL)中的得自实施例Y-6的醛(15.9g，0.047mol)。将该反应在-77℃搅拌30分钟，然后温热至-50℃并保持1小时，用4小时让其温热至室温。向该反应中加入乙酸乙酯(200mL)和饱和氯化铵。收集有机层，用MgSO₄干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化该油状粗产物，以81％的产率获得了烯烃化合物(45.1g)，为浅黄色粘性油状物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)1.4-2.6(m，.10H)，2.92(d，1H)，4.17(m，1H)，4.38(m，1H)，5.05(q，2H)，5.40(m，2H)，7.3(m，10H).

¹³CNMR(CDCl₃，ppm)29.49，29.64，31.32，39.60，49.56，53.98，61.01，65.25，124.14，127.81，128.20，128.55，128.79，129.30，130.96，135.68，137.31，152.59，157.57，171.61.

实施例Y)

向20mL瓶中加入在二氧杂环己烷(50mL)和4N盐酸(250mL)内的实施例Y-7产物(19.77g，0.039mol)。将该溶液与催化量的10％Pd碳加到氢化烧瓶中。用H₂将该烧瓶加压(50psi)5小时。通过质谱监测该反应，结果表明原料已消耗。将该溶液经由硅藻土垫过滤，用水洗涤。通过冷冻干燥除去溶剂，以81％的产率获得了本标题化合物(7.52g)。

MH⁺242.2，MH+NH₄ ⁺259.2.

¹H NMR(CD₃OD ppm)1.2-2.0(m，15H)，2.42(d，1H)，2.65(dd，1H)，3.49(m，1H)，3.98(t，1H)，7.26(s)，8.05(s)，8.35(s).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)24.43，25.58，26.00，26.10，32.75，33.45，35.31，53.76，54.55，157.27，175.13.

实施例Z

(S，2S)-氨基六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-己酸，三水合物盐酸盐

实施例Z-1)

向1L三颈烧瓶内加入在THF(200mL)中的得自实施例Y-3的磷盐(21.21g，0.041mol)。在干冰浴中将该浆液冷却至-78℃。向该冷浆液中滴加KHMDS(88mL，0.044mol)，让内温不超过-72℃。将该反应在-78℃搅拌20分钟，然后在-45℃搅拌1小时。再让温度降至-78℃，用45分钟滴加在THF(50mL)中的醛(15.9g，0.047mol)(如实施例Y(4-6)所述用N-苄氧基羰基-L-高丝氨酸内酯制得的)。将该反应在-77℃搅拌30分钟，然后温热至-50℃并保持30分钟，用4小时让其温热至室温。向该反应中加入乙酸乙酯(100mL)和饱和氯化铵。收集有机层，用MgSO₄干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化该油状粗产物，以45％的产率获得了烯烃化合物(9.0g)，为浅黄色粘性油状物。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)1.4-2.6(m，10H)，2.92(d，1H)，4.17(m，1H)，4.38(m，1H)，5.05(q，2H)，5.40(m，2H)，73(m，10H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)29.49，29.64，31.32，39.60，49.56，53.98，61.01，65.25，124.14，127.81，128.20，128.55，128.79，129.30，130.96，135.68，137.31，152.59，157.57，171.71.

实施例Z)

向20mL瓶中加入在二氧杂环己烷(5mL)和4N盐酸(16mL)内的实施例Z-1产物。将该溶液与催化量的10％Pd碳加到氢化烧瓶中。用H₂将该烧瓶加压(50psi)5小时。通过质谱监测该反应，结果表明原料已消耗。将该溶液经由硅藻土垫过滤，用水洗涤。通过冷冻干燥除去溶剂，以79.4％的产率获得了本标题化合物(98.7mg)。

MH⁺242.2，MH+NH4⁺259.2.

¹H MR(CD₃OD，ppm)1.2-2.0(m，15H)，2.42(d，1H)，2.6(dd，1H)，3.49(m，1H)，3.98(t，1H).

¹³C MR(CDCl₃，ppm)24.43，25.58，26.00，26.10，32.75，33.45，35.31，53.76，54.55，157.27，175.13.

实施例AA

(2S，4Z)-2-氨基-6-[(2R)-六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-基]-4-己烯酸

实施例AA-1)

(2S，4Z)-6-[(2R)-六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-基]-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基-4-己烯酸苯基甲酯

向50mL烧瓶内加入在甲醇(25mL)中的实施例Z-1样本(1.5g，2.97mmol)。然后将60％冰醋酸溶液(16mL)加到该反应混合物中。观察到了沉淀。再加入甲醇以溶解固体(1mL)。然后向该反应中加入锌粉(0.200g)。将该反应超声处理4小时，期间将温度保持在37℃。通过TLC和MS监测该反应直至原料已消耗完，并观测到与产物相当的质量。倾析该溶液以与锌分离开，向滤液中加入30％乙腈/水水溶液(100mL)。在Water Preparatory HPLC上用52％乙腈/水纯化该反应2次[在30分钟内从20％到70％乙腈的梯度]。将所得产物冷冻干燥，以73％的产率获得了实施例AA-1的标题产物(1.01g)，为白色固体。

MH⁺464.4，MH+Na⁺486.4.

¹H NMR(CD₃OD，ppm)：1.2-2.0(m，8H)，2.42(m，2H)，2.6(m，5H)，3.49(q，1H)，4.31(t，1H)，5.15(s，2H)，5.22(s，2H)，5.43(q，1H)，5.59(q，1H)，7.25(bs，10H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：24.37，29.61，30.76，32.45，33.73，34.42，55.40，57.09，68.06，68.07，122.3，124.9，128.76，129.09，129.28，129.39，129.51，129.61，155.71，158.35，173.90.

实施例AA)

向250mL烧瓶内加入在4M HCl(100mL)中的实施例AA-1产物(1.0g，2.2mmol)。将该反应回流过夜，通过MS监测直至原料已消耗完，并观测到关于产物的质量。不用进一步后处理，在Water’s制备反相柱上用18％乙腈/水纯化该反应2次[在30分钟内从0％到30％乙腈/水]。将合并的级份冷冻干燥，以64％的产率获得了本标题产物(0.34g)，为乳色泡沫状物。

MH⁺240.3，MH+Na⁺486.4.

¹H NMR(CD₃OD，ppm)：1.2-2.0(m，6H)，2.35(m，2H)，2.45(dd，2H)，2.69(m，2H)，3.61(dt，1H)，3.98(t，1H)，5.59(m，1H)，5.65(m，1H).

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：23.65，24.66，32.51，32.84，33.1，33.25，54.10，56.1，126.80，129.33，153.33，172.52.

实施例BB

(2S，4E)-2-氨基-6-[(2R)-六氢-7-亚氨基-1H-氮杂-2-基]-4-己烯酸

实施例BB-1)

(2S，4E)-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-6-[(5R)-6，7，8，9-四氢-3-氧代-3H，5H-[1，2，4]恶二唑并[4，3-a]氮杂-5-基]-4-己烯酸，苯基甲酯

向250mL烧瓶内加入在环己烷(70mL)/苯(40mL)溶液中的实施例Z-1产物(2.0g，3.9mmol)和二硫苯(phenyl disulfide)(0.860g，3.9mmol)。向该溶液中通入氮气以除去氧系统。将该反应暴露于短波UV灯一个周末。通过正相HPLC(乙酸乙酯/己烷)评价该反应，观测到有71％反式异构体和29％顺式异构体。将该反应在UV下再进行3天，这时有84％原料转化成了反式异构体，剩余16％顺式异构体原料。通过色谱法纯化，以48％的产率获得了实施例BB-1(0.956g)。

MH⁺506.1，MH+NH4⁺523.2.

¹H NMR(CD₃OD，ppm)：1.2-2.0(m，8H)，2.42-2.6(m，6H)，2.91(dd，1H)，4.19 (m，1H)，4.31(dt，1H)，5.09(s，2H)，5.11(s，2H)，5.18(dt，1H)，5.27(m，1H)，7.25(bs，10H).

实施例BB-2)

(2S，4E)-6-[(2R)-六氢-7-氨基-1H-氮杂-2-基]-2-[[(苯基甲氧基)羰基]氨基]-4-己烯酸苯基甲酯，一盐酸盐

通过实施例AA-1的方法，用锌粉(1.5g)和60％HOAc/H₂O(40mL)将实施例BB-1产物(0.956g，1.9mmol)在MeOH(80mL)中脱保护。通过反相色谱纯化所得产物，以28％的产率获得了本标题产物(0.248g)。

实施例BB)

通过实施例AA的方法，使用HCl(2mL)、H₂O(2mL)、CH₃CN(4mL)将实施例BB-2产物(0.248g，0.53mmol)转化成本标题产物。通过反相色谱纯化该粗产物，以57％的产率获得了实施例BB标题产物(0.073g)。

MH⁺240.3，MH+Na⁺486.4.

¹H NMR(CD₃OD，ppm)1.2-2.0(m，6H)，2.35(t，2H)，2.55-2.82(m，4H)，3.68(dt，1H)，4.05(t，1H)，5.65(m，2H).

实施例CC

(E)-2-氨基-2-甲基-6-[(1-亚氨基乙基)氨基]-4-己烯酸，二盐酸盐

实施例CC-1)

将DL-丙氨酸乙酯盐酸盐(5g，32.5mmol)悬浮在甲苯(50mL)中。加入三乙胺(4.5mL，32.5mmol)，然后加入邻苯二甲酸酐(4.8g，32.5mL)。给反应烧瓶装配迪安斯塔克分水器和回流冷凝器，将该混合物加热回流过夜。收集约10mL甲苯/水。将该反应混合物冷却至室温，用氯化铵水溶液和EtOAc稀释。分离各层，用EtOAc萃取水层(3×)。将乙酸乙酯萃取液用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，以近乎定量产率获得了本标题邻苯二甲酰基-保护的氨基酯，为白色固体结晶。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：1.2(t，3H)，1.6(d，3H)，4.2(m，2H)，4.9(q，1H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)

实施例CC-2)

将邻苯二甲酰亚氨基钾(18.5g，0.1mol)加到含有1，4-丁烯二氯化物(25g，0.2mol)的250mL圆底烧瓶中，在150℃加热1.5小时。将该混合物冷却至室温，在盐水与Et₂O之间分配。将有机层用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。将残余物从热乙醇中重结晶，获得了本标题产物1-氯-4-邻苯二甲酰亚氨基丁烯(8.9g，39％)，为橙色晶体。

HRMS计算值 C₁₂H₁₀ClNO₂：m/z＝236.0478[M+H].实测值：236.0449¹H NMR (300MHz，CDCl₃，ppm4.1(d，2H)，4.3(d，2H)，5.9(m，2H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)

实施例CC-3)

将实施例CC-2产物样本(2.3g，9.8mmol)溶解在丙酮(50mL)中。加入NaI(3.2g，21mmol)，将该混合物回流过夜。冷却至室温后，加入Et₂O，将该混合物依次用硫代硫酸钠和盐水洗涤。将有机层用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，获得了本标题碘化物(2.8g，87.5％)，为浅黄色固体，其不用进一步纯化直接使用。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)：3.8(d，2H)，4.2(d，2H)，5.7(m，1H)，6.0(m，1H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)

质量(M+1)＝328

实施例CC-4)

将KHMDS(2.6g，13.3mmol)在THF(50mL)中的溶液冷却至-78℃。加入实施例CC-1产物(2.2g，8.87mmol)在THF(15mL)中的溶液，然后立即加入1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(DMPU，1.0mL，8.87mL)。将该溶液在-78℃搅拌40分钟，加入实施例CC-3产物(2.9g，8 87mmol)在THF(15mL)中的溶液。将烧瓶从冰浴中取出，在室温搅拌3小时。将该反应混合物在饱和碳酸氢钠水溶液与EtOAc之间分配。将有机层用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩，获得了所需的bis-pththalyl保护的氨基酯，为黄色固体。通过硅胶色谱纯化残余物(1∶1己烷∶EtOAc)，获得了1.4g(35％)本标题产物，为白色固体。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃，ppm 1.2(t，3H)，1.6(d， 3H)，2.8(dd，1H)，3.1(dd，1H)，4.2(m，4H)，5.6(m，1H)，5.8(m，1H)，7.6(m，4H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)

质量(M+H)＝447

实施例CC-5)

将实施例CC-4产物(0.78g，1.76mmol)溶解在甲酸(10mL，95％)与HCl(20mL，浓HCl)的混合物中，并回流3天。将该反应混合物冷却至0℃，过滤以除去邻苯二甲酸酐。真空浓缩(T＜40℃)后，获得本标题产物不饱和α-甲基赖氨酸，为白色固体(0.38g，95％)，其不用进一步纯化直接使用。

¹H NMR(300MHz，D₂O，ppm)：1.4(s，3H)，2.4(dd，1H)，2.6(dd，1H)，3.5(d，2H)，5.7(m，2H)

质量(M+H)＝317

实施例CC)

将实施例CC-5产物(0.2g，0.86mmol)溶解在H₂O(8mL)中，用2.5N NaOH调节至pH9。用1小时分4批加入乙亚胺酸乙酯-HCl(0.42g，3.4mmol)。1小时后，用10％HCl将该混合物酸化至pH4，并真空浓缩。然后让该残余物经过用水洗涤过的DOWEX 50WX4-200柱(H型，用0.5N NH₄OH洗脱)。将该残余物真空浓缩，用10％HCl酸化至pH4，并浓缩，获得了本标题产物(17mg，6％)，为油状物。

HRMS计算值 C₉H₁₇N₃O₂：m/z＝200.1399[M+H].实测值：200.1417¹H NMR(400MHz，D₂O，ppm)：1.4(s，3H)，2.1(s，3H)，2.5(dd，1H)，2.6(dd，1H)，3.8(d，2H)，5.6(m，2H)

实施例DD

(R，E)-2-氨基-2-甲基-6-[(1-亚氨基乙基)氨基]-4-己烯酸，二盐酸盐

实施例DD-1)

依据Seebach的方法制备(2S，4S)-3-苯甲酰基-2-(叔丁基)-4-甲基-1，3-恶唑烷-5-酮。Seebach，D.；Fadel，A.Helvetica Chimica Acta 1985，68，1243。

实施例DD-2)

将KHMDS(0.65g，3.24mmoL)、DMPU(0.33mL，2.7mmol)和THF(40mL)的溶液冷却至-78℃。滴加(2S，4S)-3-苯甲酰基-2-(叔丁基)-4-甲基-1，3-恶唑烷-5-酮(实施例DD-1)(0.70g，2.7mmol)在THF(10mL)中的溶液。45分钟后，加入实施例CC-3产物(0.88g，2.7mmol)在THF(10mL)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌2小时，用饱和碳酸氢钠水溶液处理。分离各层，用EtOAc萃取水层。将有机层合并，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化所得黄色油状物(9∶1、然后是4∶1己烷/乙酸乙酯)，获得了本标题保护的不饱和α-甲基-D-赖氨酸(0.26g，20％)，为无色油状物。

HRMS计算值 C₂₇H₂₈N₂O₅：m/z＝461.2076[M+H].实测值：461.2033

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，.ppm.0.9(s，9H)，1.5(s，3H)，4.3(m，2H)，5.5(m，2H)，5.6(m，2H)，6.1(m，1H)，7.5(m，5H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)

实施例DD-3)

将实施例DD-2产物(0.255mg，0.55mmol)溶解在6N HCl(6mL)和甲酸(6mL)中，加热回流24小时。将该反应混合物冷却至室温，并真空浓缩。将残余物悬浮在水中，用CH₂Cl₂洗涤。将水层浓缩，经过用水洗涤过的DOWEX 50WX4-200柱(H型，用0.5N NH₄OH洗脱)。将该残余物真空浓缩，用10％HCl酸化至pH4，并浓缩，获得了本标题不饱和D-赖氨酸(71mg，55％)，为油状物，其不用进一步纯化直接使用。

¹H NMR(400MHz，D₂O，ppm.1.4(s，3H)，2.5(dd，1H)，2.6(dd，1H)，3.4(d，2H)，5.6(m，2H)，5.7(m，2H)

实施例DD)

将实施例DD-3产物(13mg，0.056mmol)溶解在H₂O(5mL)中，用2.5N NaOH调节至pH9。用2小时分4批加入乙亚胺酸乙酯-HCl(27mg，0.2mmol)。2小时后，用10％HCl将该混合物酸化至pH4，并真空浓缩。然后让该残余物经过用水洗涤过的DOWEX 50WX4-200柱(H型，用0.5N NH₄OH洗脱)。将该残余物真空浓缩，用10％HCl酸化至pH4，并浓缩，获得了本标题产物(45mg)，为油状物。

HRMS计算值 C₉H₁₇N₃O₂：m/z＝200.1399[M+H].实测值：200.1386

¹H NMR(400MHz，D₂O，ppm)：1.4(s，3H)，2.1(s，3H)，2.5(dd，1H)，2.6(dd，1H)，3.8(d，2H)，5.6(m，2H)

实施例E

(S，E)-2-氨基-2-甲基-6-[(1-亚氨基乙基)氨基]-4-己烯酸，二盐酸盐

实施例EE-1)

依据Seebach的方法制备(2R，4R)-3-苯甲酰基-2-(叔丁基)-4-甲基-1，3-恶唑烷-5-酮。Seebach，D.；Fadel，A.Helvetica Chimica Acta 1985，68，1243。

实施例EE-2)

将实施例EE-1的(2R，4R)-3-苯甲酰基-2-(叔丁基)-4-甲基-1，3-恶唑烷-5-酮产物(2.0g，7.6mmol)在THF(50mL)中的溶液冷却至-78℃。在-78℃滴加KHMDS(0.65g，3.24mmol)在THF(25mL)中的溶液。30分钟后，加入实施例CC-3产物(2.8g，8.6mmol)在THF(25mL)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌1小时，用饱和碳酸氢钠水溶液处理。分离各层，用EtOAc萃取水层。将有机层合并，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱纯化所得橙色油状物(9∶1、然后是4∶1己烷/乙酸乙酯)，获得了本标题保护的不饱和α-甲基-L-赖氨酸(0.5 g，15％)，为白色固体。

HRMS计算值 C₂₇H₂₈N₂O₅：m/z＝461.2076[M+H].实测值：461.2043

¹H NMR(400MHz，CDCl₃，.ppm)：0.9(s，9H)，1.5(s，3H)，4.3(m，2H)，5.5(m，2H)，5.6(m，2H)，6.1(m，1H)，7.5(m，5H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)

实施例EE-3)

将实施例EE-2产物(0.5g，1mmol)溶解在12N HCl(10mL)和甲酸(5mL)中，将该混合物加热回流12小时。将该反应混合物在冰箱中冷却3小时，通过过滤除去固体。将残余物用CH₂Cl₂和EtOAc洗涤。将水层真空浓缩，获得了本标题不饱和α-甲基-L-赖氨酸(0.26g，99％)，为油状物，其不用进一步纯化直接使用。

¹H NMR(300MHz，D₂O，ppm)：1.4(s，3H)，2.5(dd，1H)，2.6(dd，1H)，3.4(d，2H)，5.7(m，2H)

实施例EE)

将实施例EE-3产物(0.13g，0.56mmol)溶解在H₂O(1mL)中，用2.5N NaOH调节至pH9。用1小时分4批加入乙亚胺酸乙酯-HCl(0.28g，2.2mmol)。1小时后，用10％HCl将该混合物酸化至pH4，并真空浓缩。然后让该残余物经过用水洗涤过的DOWEX 50WX4-200柱(用0.5N NH₄OH洗脱)。将该残余物真空浓缩，用10％HCl酸化至pH4，并浓缩，获得了本标题产物，为油状物(40mg)。

HRMS计算值 C₉H₁₇N₃O₂：m/z＝222.1218[M+Na].实测值：222.1213¹H NMR(300MHz，D₂O，ppm)：1.4(s，3H)，2.1(s，3H)，2.4(dd，1H)，2.6(dd，1H)，3.8(d，2H)，5.6(m，2H)

实施例FF

2-氨基-2-甲基-6-[(1-亚氨基乙基)氨基]-4-己炔酸，二盐酸盐

实施例FF-1)

按照描述在Tetrahedron Lett.21，4263(1980)中的方法制备N-boc-1-氨基-4-氯丁-2-炔。

实施例FF-2)

通过J.Org.Chem.，47，2663(1982)中描述的方法制备N-(二苯基亚甲基)-1-丙氨酸甲酯。

实施例FF-3)

将无水THF(1000mL)加到用氩气吹扫过的烧瓶内，加入60％NaH在矿物油中的分散液(9.04g，0.227mol)。向该混合物中加入实施例FF-2产物(30.7g，0.114mol)。然后将该反应混合物在10℃-15℃搅拌30分钟。加入碘化钾(4g)和碘(2g)，然后立即用30分钟加入实施例FF-2产物(23g，0.113mol在200mL THF中的溶液)。然后将该反应混合物在55℃搅拌直至原料消失(～2小时)。将该反应混合物冷却至室温，将溶剂蒸发。加入乙酸乙酯(500mL)，将该混合物用2×200mL去离子水小心地洗涤。将有机层用无水MgSO₄干燥，过滤并蒸发，获得了44g粗产物。通过使用20％乙酸乙酯的己烷溶液的色谱法纯化，获得了本标题保护的不饱和α-甲基赖氨酸(28g，57％)。

元素分析的计算值C₂₆H₃₀N₂O₄和0.5乙酸乙酯：C，70.42；H，7.14；N，5.91.实测值：C，70.95；H，7.73；N，6.09

IR(Neat，max，cm^-1)：2981，1714，1631

¹H NMR(CDCl₃，ppm)：1.28(s，9H)，1.4(s，3H)，2.65-2.76(m，2H)，3.15(s，3H)，3.7(bs，2H)，4.6(bs，1H)，6.95-7.4(m，10H)

¹³C NMR(CDCl₃，ppm)：24.29，28.33，28.39，33.24，51.60，53.55，127.79，127.97，128.26，128.36，128.43，128.54，128.66，130.05，130.22，132.39

质量(M+1)＝435

DSC纯度：261.95℃

实施例FF-4)

将实施例FF-3产物(16g，0.0368mol)溶解在1N HCl(300mL)中，在25℃搅拌1小时。用乙醚(2×150mL)洗涤该反应混合物，分离出水层，用炭脱色。浓缩，获得了～9g(产率为100％)脱保护的不饱和α-甲基赖氨酸酯FF-4，为白色泡沫状固体。

元素分析的计算值C₈H₁₄N₂O₂含有 2.26HCl和1.19H₂O：C，35.06；H，6.86；N，10.22；Cl，29.24.实测值：C，35.31；H，7.38；N，10.70；Cl，29.77

¹H NMR(D₂O，ppm)：1.56(s，3H)，2.8-3.0(2 dt，2H)，3.75(s，2H)，3.79(s，3H)

¹³C NMR(D₂O，ppm)：23.89，29.81，32.05，57.08，61.90，79.57，82.43，173.92

质量(M+1)＝171

DSC纯度：114.22℃

UV＝206nm，abs 0.013

[a]₂₅在甲醇中＝0在365nm

实施例FF-5)

将实施例FF-4产物(2.43g，0.01mol)溶解在去离子水(25mL)中。在25℃加入NaOH(400mg，0.01mol)在去离子水(25mL)中的溶液以将pH调节至～7.95，继续搅拌10分钟。将乙亚胺酸乙酯盐酸盐(988mg，0.008mol)加到该反应混合物中，同时加入1N NaOH以将pH调节至～8.5。加入乙亚胺酸酯后，将该反应混合物在pH 8-8.5搅拌3小时。将1N HCl加到该反应混合物中(4.1pH)。在50℃将溶剂蒸发，获得了黄色吸湿性残余粗产物(4g，产率＞100％)。通过Gilson色谱系统纯化，用0.1％AcoH/CH₃CN/H₂O。

元素分析的计算值C₁₀H₁₇N₃O₂含有2.25HCl和1.7H₂O：C，37.08；H，7.05；N，12.97；Cl，24.63.实测值：C，37.01；H，6.79；N，12.76；Cl，24.87

IR(Neat，max，cm^-1)：2953，2569，1747，1681，1631

¹H NMR(D₂O，ppm)：1.52(s，3H)，2.12(s，3H)，2.74-2.96(2dt，2H)，3.75(s，3H)，3.95(t，2H)

质量(M+1)＝212

实施例FF)

将实施例FF-5产物(100mg，0.0005mol)溶解在8N HCl(20mL)中，在回流状态下搅拌10小时。将该反应混合物冷却至室温，通过旋转蒸发仪将盐酸蒸发。把残余物溶解在去离子水(10mL)和水中，再真空浓缩，以几乎定量产率获得了本标题产物，为黄色玻璃状固体(88mg)。

元素分析的计算值C₉H₁₅N₃O₂含有2.4HCl和1.8H₂O：C，34.08；H，6.67；N，13.25；Cl，26.83.实测值：C，34.32；H，6.75；N，13.63；Cl，26.47

IR(Neat，max，cm^-1)：1738，1677，1628，1587

¹H NMR(D₂O，ppm)：1.6(s，3H)，2.24(s，3H)，2.8-3.0(2dt，2H)，4.1(s，2H)

¹³C NMR(D₂O，ppm)：21.22，24.10，29.88，34.58，80.04，80.99，128.39，168.07，176.13

质量(M+1)＝198

实施例GG

(2R/S，4Z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-4-庚烯酸，二盐酸盐

实施例GG-1)将5，6-二氢吡喃-2-酮(49.05g，0.5mol)溶解在200mL水中。加入氢氧化钾(35g，0.625mol)，将该反应混合物在室温搅拌5小时。真空除去溶剂，获得了无色玻璃状固体(65g，84％)，NMR表明其主要是本标题化合物的顺式异构体。

¹H NMR(CDCl₃)：2.7(m，2H)，3.6(t，2H)，5.8-5.85(m，1H)，5.9-5.97(m，1H).

实施例GG-2)将实施例GG-1产物溶解在100mL二甲基甲酰胺中。然后加入甲基碘(52mL，0.84mol)，产生了达到40℃的放热。将该反应混合物室温搅拌10小时，在150mL乙酸乙酯/乙醚(20/80)与冰水之间分配。分离出水层，再用100mL乙醚萃取。将有机层合并，干燥(Na₂SO₄)，过滤，汽提掉所有溶剂，获得了所需甲酯产物(40g，71％)。将该产物溶解在200mL二氯甲烷中，把该溶液冷却至0℃。加入四丁基二甲基甲硅烷基氯、三乙胺和二甲基氨基吡啶。将该反应混合物缓慢地温热至室温，在氮气氛下搅拌10小时。用100mL 1N无水硫酸氢钾溶液萃取该反应。将有机层依次用2×100mL盐水和3×150mL水洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并汽提，获得了42g(56％)本标题产物。

¹H NMR(CDCl₃)：0.02(s，6H)，0.085(s，9H)，2.8-2.85(m，2H)，3.65(s，3H)，3.66-3.7(m2H)，5.8(m，1H)，6.3(m，1H)

实施例GG-3)将实施例GG-2产物溶解在25mL甲苯中，冷却至0℃。滴加二异丁基氢化铝(1.0M的甲苯溶液，32mL，48mmol)，同时将温度保持在5--10℃。将该反应混合物在6--8℃搅拌1.5小时，然后将其冷却至-25℃。向该混合物中加入100mL 0.5N酒石酸钠钾。让该反应混合物温热至室温，搅拌1小时。形成了凝胶状沉淀，将其过滤。用2×100mL EtOAc萃取水层。将合并的有机层干燥(硫酸钠)，过滤并真空浓缩，获得了本标题产物(3.45g，66％)，为无色油状物。

¹H NMR(CDCl₃)：0.02(s，6H)，0.085(s，9H)，2.25-2.32(m，2H)，2.6(bs，1H)，3.6(t，2H)，4.08(d，2H)，5.45-5.55(m，1H)，5.7-5.75(m，1H)

实施例GG-4)将实施例GG-3产物(8g，37mmol)溶解在100mL二氯甲烷中，将该溶液冷却至0℃。然后加入甲磺酰氯，将该混合物搅拌5分钟。加入三乙胺。将温度保持在0--10℃，期间加入上述试剂。然后将该反应混合物温热至室温，并搅拌24小时。用100mL 50％碳酸氢钠水溶液萃取。将有机层用100mL饱和盐水溶液洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤，真空汽提，获得了本标题产物(8.2g，94％)。

¹H NMR(CDCl₃：0.02(s，6H)，0.085(s，9H)，2.25-2.32(m，2H)，3.6(t，2H)，4.08(d，2H)，5.6-5.7(m，2H)

实施例GG-5)将溶解在59mL四氢呋喃中的N-对氯苯基亚胺丙氨酸甲酯(8.85g，34mmol)用氩气吹扫。加入NaH(1.64g，41mmol)，这时溶液变为亮橙色，然后变为深红色。向上述阴离子溶液中加入实施例GG-4标题产物(8g，34mmol)在40mL四氢呋喃中的溶液。观察到了放热现象，温度几乎升至40℃。将该反应混合物在48--52℃保持2小时。然后将其冷却至室温，并过滤。将滤液真空汽提，获得了本标题产物(8.4g，粗产物的产率为50％)，为黄色油状物。

¹H NMR(CDCl₃)：0.02(s，6H)，0.085(s，9H)，1.45(s，3H)，1.6(s，1H)，2.2-2.25(m，2H)，2.65(d，2H)，3.55(m，2H)，3.7(s，3H)，5.45-5.55(m，2H)，7.35-7.7(m，4H)

实施例GG-6)将实施例GG-5标题产物(8.4g，18.2mmol)用125mL 1N盐酸处理，将该反应在室温搅拌1小时。用2×75mL乙酸乙酯萃取该反应混合物以后，将水层在56℃真空汽提，获得了4g本标题产物(粗产物产率为100％)。

¹H NMR(CD₃OD)：1.6(s，3H)，2.3-2.4(m，2H)，2.65-2.8(m，2H)，3.6-3.65(m，2H)，3.87(s，3H)，5.4-5.5(m，1H)，5.75-5.85(m，1H)

实施例GG-7)将实施例GG-6标题产物(1.9g，8.5mmol)溶解在15mL二氧杂环己烷与8mL水的混合物中。然后小心地加入固体碳酸氢钾以避免形成泡沫。将该反应混合物搅拌10分钟，然后分批加入叔丁氧基羰基酐，并将该反应混合物在室温搅拌24小时。将该反应混合物用100mL乙酸乙酯和50mL水稀释，然后倒入分液漏斗内。分离出有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并汽提，获得了本标题产物，为无色油状物(1.9g，粗产物产率为78％)。

¹H NMR(CDCl₃)：1.42(s，9H)，1.55(s，3H)，2.3-2.36(m，2H)，2.58-2.65(m，2H)，3.65-3.7(t，2H)，3.75(s，3H)，5.42-5.5(m，1H)，5.55-5.62(m，1H)

实施例GG-8)通过实施例GG-7的方法将另外1.9g实施例GG-6标题产物样本转化成实施例GG-7标题产物的Z/E混合物。用硅胶进一步纯化该产物，用乙酸乙酯/己烷(比例为20/80)溶剂系统，获得了次要的E-异构体以及主要的Z-异构体。

实施例GG-9)将得自实施例GG-8的Z-异构体(1.8g，6.25mmol)溶解在20mL乙腈中，将该溶液冷却至0℃。加入吡啶(0.76g，9.4mmol)，然后用10分钟分批加入二溴三苯基正膦(3.46g，8.2mmol)。将该反应混合物在氩气氛下于室温搅拌24小时。过滤出所形成的沉淀。将滤液真空浓缩，获得了2.8g油状物，用硅胶纯化，利用乙酸乙酯/己烷(比例为60/40)溶剂系统。通过NMR确定1.1g本标题产物(50％)的特征。

¹H NMR(CDCl₃)：1.44(s，9H)，1.55(s，3H)，2.6-2.65(m，4H)，3.35-3.4(m，2H)，3.75(s，3H)，5.4-5.45(m，1H)，5.55-5.6(m，1H)

实施例GG-10)将实施例GG-8标题产物(300mg，0.86mmol)溶解在25mL二甲基甲酰胺(DMF)中。加入3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮的钾盐(130mg，0.94mmol)，将该反应混合物加热至52℃，在搅拌下于该温度下保持18小时。然后冷却至室温，将DMF于60℃真空汽提。用硅胶纯化该残余物，用60/40-90/10的乙酸乙酯/己烷进行梯度洗脱，获得了300mg(95％)本标题产物。

¹H NMR(CD₃OD)：1.35(s，3H)，1.43(s，9H)，2.32(s，3H)，2.45-2.55(m，4H)，3.65-3.7(m，2H)，3.72(t，3H)，5.5-5.6(m，2H)

实施例GG-11)将实施例GG-10产物(300mg)用0.05 N盐酸处理，将该溶液搅拌30分钟。真空除去溶剂，以近乎定量产率获得了所需产物。

¹H NMR(CD₃OD)：1.6(s，3H)，2.25(s，3H)，2.45-2.55(m，2H)，2.7-2.8(m，2H)，3.3-3.4(m，5H)，5.5-5.6(m，1H)，5.7-5.8(m，1H)

实施例GG-12)将实施例GG-11标题产物(198mg，0.54mmol)溶解在50mL MeOH中。加入甲酸(40mg)，然后加入以碳酸钙为载体的钯(400mg)。在密封管中，在搅拌下将该反应混合物于65℃加热24小时。然后将其冷却至室温，并过滤。将滤液真空浓缩，通过反相HPLC纯化残余物，获得了115mg(75％)本标题产物。

¹H NMR(CD₃OD)：1.4(s，3H)，1.95(s，3H)，2.25(s，3H)，2.4-2.52(m，4H)，3.25-3.35(m，2H)，3.75(t，3H)，5.54-5.62(m，2H)

实施例GG)将实施例GG-12标题产物(75mg)溶解在15mL 2N盐酸中。将该反应混合物加热至回流，搅拌6小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂。将残余物溶解在25mL水中，用旋转蒸发仪汽提以除去过量盐酸。将残余物溶解在水中，冷冻干燥，获得了76mg(～100％)本标题产物。

元素分析的计算值 C₁₀H₁₉N₃O₂+2.2HCl+2.2H₂O：C，36.06；H，7.75；N，12.61.实测值： C₁₀H₁₉N₃O₂+2.2HCl+2.2H₂O：C，35.91；H，7.61；N，12.31

¹H NMR(CD₃OD)：1.47(s，3H)，2.32(s，3H)，2.45-2.64(m，4H)，2.58-2.65(m，2H)，3.65-3.7(t，2H)，5.55-5.65(m，2H)

实施例HH

(25，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例-HH-1)向2-氟膦酰基乙酸三乙酯(25.4g，105mmol)在100mL THF内的冷(-78℃)溶液中加入正丁基锂(63mL 1.6 M在己烷中的溶液，101mmol)。将该混合物在-78℃搅拌20分钟，产生了亮黄色溶液。然后用10分钟滴加粗制的3-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]丙醛(J.Org Chem.，1994，59，1139-1148)(20.0g，105mmol)在120mL THF中的溶液，将所得混合物在-78℃搅拌1.5小时，这时通过薄层色谱分析(5％乙酸乙酯的己烷溶液)表明没有剩余原料。在-78℃用饱和NH₄Cl水溶液(150mL)中止该反应。收集有机层，用乙醚(300mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物经由硅胶(150g)塞过滤，用己烷(2L)洗脱，获得了14.38g(52％)所需的(2E)-5-[[(1，1-二甲基乙基)二-甲基甲硅烷基]氧基]-2-氟-2-戊烯酸乙酯产物，为澄清的油状物。¹H NMR和¹⁹F NMR表明所分离出的产物具有约95∶5的E∶Z比例。

HRMS计算值 C₁₃H₂₆FO₃Si：m/z＝277.1635[M+H]⁺，实测值：277.1645.

¹H NMR(CDCl₃)0.06(s，6H)，0.94(s，9H)，1.38(t，3H)，2.74(m，2H)，3.70(m，2H)，4.31(q，2H)，6.0(dt，乙烯基，1H).

¹⁹F NMR(CDCl₃)-129.78(d，0.05 F，J＝35Hz，5％Z-异构体)-121.65(d，0.95 F，J＝23Hz，95％E-异构体)

实施例-HH-2)在室温，向实施例-HH-1产物(6.76g，24.5mmol)在100mL甲醇内的溶液中用3小时以每批1.4g的方式分批加入固体NaBH₄(4.2g，220mmol)。3.5小时后，加入水(10mL)。再用3小时以每批1.4g的方式分批加入固体NaBH₄(4.2g，220mmol)。用150mL饱和氯化铵水溶液中止该反应，用乙醚(2×250mL)萃取。将有机层合并，用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将粗产物-4.81g澄清油状物通过快速硅胶柱色谱纯化，用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了2.39g(42％)所需的(2E)-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]-2-氟-2-戊烯-1-醇产物，为澄清油状物，¹⁹F NMR表明其含有约93∶7的E∶Z比例。

HRMS计算值 C₁₁H₂₄FO₂Si：m/z＝235.1530[M+H]⁺，实测值：235.1536.

¹H NMR(CDCl₃)0.06(s，6H)，0.88(s，9H)，2.35(m，2H)，3.62(t，2H)，4.19(dd，2H)，5.2(dt，乙烯基，1H).

¹⁹F NMR(CDCl₃)-120.0(dt，0.07F，7％Z-异构体)，-109.82(q，0.93 F，J＝21Hz，93％E-异构体)

实施例-HH-3)向实施例-HH-2产物(2.25g，9.58mmol)、以聚合物为载体的三苯基膦(3mmol/g，1.86g，15mmol)和3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮(1.25g，12.5mmol)在60mL THF内的混合物中滴加偶氮二甲酸二乙酯(2.35mL，14.7mmol)。将该反应混合物在室温搅拌1小时，再加入3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮(0.30g，3.0mmol)。30分钟后，将该混合物经由硅藻土过滤，并将滤液浓缩。将所得黄色油状物用乙醚(30mL)研制，通过过滤除去固体。将滤液浓缩，用己烷(30mL)研制，并过滤。将滤液浓缩至油状物，通过快速硅胶柱色谱纯化，用15％乙酸乙酯的己烷洗脱，获得了1.83g(60％)所需的4-[(2E)-5-[[(1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基]氧基]-2-氟-2-戊烯基]-3-甲基-1，2，4-恶二唑-5(4H)-酮产物，为澄清油状物，¹⁹F NMR表明其仅含有所需的E-异构体。

HRMS计算值 C₁₄H₂₆FN₂O₃Si：m/z＝317.1697[M+H]⁺，实测值：317.1699.

¹H NMR(CDCl₃)0.04(s，6H)，0.85(s，9H)，2.28(s，3H)，2.37(m，2H)，3.64(t，2H)，4.32(d，2H)，5.4(dt，乙烯基，1H).

¹⁹F NMR(CDCl₃)-110.20(q，1F，J＝21Hz).

实施例-HH-4)将实施例-HH-3产物(1.83g，5.78mmol)在乙酸(6mL)、THF(2mL)与水(2mL)的混合物中的溶液于室温搅拌2.5小时。将所得溶液真空浓缩至油状物，将其溶解在乙醚(50mL)中。将有机层用饱和碳酸氢钠洗涤，然后用乙醚(2×50mL)和乙酸乙酯(2×50mL)萃取水层。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并并蒸发，获得了1.15g(98％)所需的4-[(2E)-2-氟-5-羟基-2-戊烯基]-3-甲基-1，2，4-恶二唑-5(4H)-酮产物，为澄清的无色油状物。

HRMS计算值 C₈H₁₂FN₂O₃：m/z＝203.0832[M+H]⁺，实测值：203.0822.

¹H NMR(CDCl₃)2.31(3H)，2.4(m，2H)，3.66(t，2H)，4.37(d，2H)，5.42(dt，乙烯基，1H).

¹⁹F NMR(CDCl₃)-110.20(q，1F，J＝21Hz).

实施例-HH-5)在0℃，向三苯基膦(238mg，0.91mmol)和咪唑(92mg)的CH₂Cl₂(2mL)溶液中加入固体碘(230mg，0.91mmol)，将该混合物搅拌5分钟。向所得黄色浆液中加入实施例-HH-4产物(0.15g，0.74mmol)的CH₂Cl₂(1.5mL)溶液。让该浆液温热至室温，并搅拌30分钟。将该反应混合物用CH₂Cl₂(10mL)稀释，用饱和Na₂S₂O₃(5mL)和盐水(5mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发，获得了油状物。将乙醚(10mL)加到该油状物中，生成了白色沉淀，通过过滤除去沉淀，将滤液浓缩至油状物。通过快速硅胶柱色谱纯化粗产物，用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了0.18g(78％)所需的4-[(2E)-2-氟-5-碘-2-戊烯基]-3-甲基-1，2，4-恶二唑-5(4H)-酮产物，为澄清油状物，其在静置下固化，mp＝58.1-58.6℃。

元素分析的计算值C₈H₁₀FIN₂O₂：C，30.79；H，3.23；N，8.98.实测值：C，30.83；H，3.11；N，8.85.

HRMS计算值 C₈H₁₁FIN₂O₂：m/z＝330.0115[M+H]⁺，实测值：330.0104.

¹H NMR(CDCl₃)2.31(s，3H)，2.75(q，2H)，3.21(t，2H)，4.31(d，2H)，5.39(dt，乙烯基，1H).¹⁹F NMR(CDCl₃)-108.21(q，1F，J＝21Hz).

实施例-HH-6)向在冰浴内的(3S，6R)-6-异丙基-3-甲基-5-苯基-3，6-二氢-2H-1，4-恶嗪-2-酮(Syntliesis，1999，4，704-717)(1.10g，4.76mmol)、LiI(0.63g，4.76mmol)和实施例-HH-5(0.85g，2.72mmol)的1-甲基-2-吡咯烷酮(12mL)溶液中加入2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，3，2-二氮磷杂(diazaphosphorine)(1.38mL，4.76mmol)。加入碱后，该黄色溶液变为橙色，将所得溶液在室温搅拌1小时。将该反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(2×30mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发，获得了黄色油状物。通过快速硅胶柱色谱纯化粗产物，用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，获得了0.64g(57％)所需的烷基化产物，为澄清油状物。

¹H NMR(C₆D₆)0.57(d，3H)，0.89(d，3H)，1.30(s，3H)，1.65(s，3H)，1.8(m，2H)，2.0(m，2H)，2.1(m，1H)，3.22(m，2H)，4.88(dt，乙烯基，1H)，5.49(d，1H)，7.1(m，3H)，7.6(m，2H).¹⁹F NMR(CDCl₃)-110.37(q，1F，J＝21Hz).

实施例-HH-7)向实施例-HH-6产物(0.13g，0.31mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入Lindlar催化剂(1.0g)。将该搅拌着的浆液在60℃加热1小时，再加入Lindlar催化剂(0.30g)。将该浆液在60℃搅拌1小时，然后冷却至室温。通过经由硅藻土过滤除去催化剂，将滤液汽提，获得了0.58g(100％)所需脱保护的脒产物，为浅黄色油状物。

MS：m/z＝374.2[M+H]⁺

¹H NMR(CD₃OD)0.77(d，3H)，1.07(d，3H)，1.58(s，3H)，2.02(s，3H)，1.8-2.2(m，5H)，3.83(d，2H)，5.20(dt，乙烯基，1H)，5.69(d，1H)，7.4(m，3H)，7.7m，2H)¹⁹F NMR(CDCl₃)-109.4(m，1F，J＝21Hz)

实施例-HH)将实施例-HH-7产物(0.58g，1.54mmol)在1.5N HCl(25mL)中的溶液用乙醚(2×20mL)洗涤，并回流1小时。将溶剂汽提掉，把氨基酸酯粗产物溶解在6N HCl(15mL)中，并加热至回流。6小时后，真空除去溶剂，通过反相HPLC纯化所得泡沫状物，在30分钟内用0-40％CH₃CN/H₂O(0.25％乙酸)进行梯度洗脱。将含有产物的级份合并，并浓缩，获得了泡沫状物。将产物溶解在1N HCl中，真空除去溶剂(2×)，获得了0.15g(29％)所需的(2S，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐产物。

HRMS计算值 C₁₀H₁₉FN₃O₂：m/z＝232.1461[M+H]⁺，实测值232.1485.

¹H NMR(D₂O)1.43(s，3H)，2.10(s，3H)，1.8-2.1(m，4H)，3.98(d，2H)5.29(dt，乙烯基，1H).¹⁹F NMR(CDCl₃)-109.97(q，1F，J＝21Hz).

实施例II

(2S，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例-II-1)在氮气氛下，向N-[(3，4-二氯苯基)-亚甲基]-丙氨酸甲酯(748.5g，2.88mol)的1-甲基-2-吡咯烷酮(7500mL)溶液中加入LiI(385.5g，2.88mol)，将所得浆液搅拌约20分钟，获得了澄清溶液。然后加入得自实施例-HH-5的固体(750g，2.40mol)，将所得溶液在冰浴中冷却至约0℃。用25分钟滴加纯净的BTPP(900g，2.88mol)，同时将内温保持在5℃以下。在5℃搅拌1.5小时后，通过HPLC测定表明反应已完全。加入7500mL甲基叔丁基醚(MTBE)，然后加入9750mL水/碎冰混合物。在该操作期间让温度升至20℃。剧烈搅拌5-10分钟后，分离各层，将水层用6000mL MTBE洗涤2次。合并MTBE层，用7500mL水洗涤2次。然后将所得MTBE溶液浓缩至约5000mL，用11625mL 1.0N HCl处理，在室温剧烈搅拌1小时。分离各层，用7500mL MTBE洗涤水层。向水层中加入约1kg氯化钠，将所得混合物搅拌直至所有盐都已溶解。加入7500mL乙酸乙酯，将所得混合物冷却至10℃，在良好搅拌下加入2025mL 6.0N氢氧化钠。所得pH应当为约9。分离各层，用氯化钠将水层饱和，再用7500mL乙酸乙酯萃取。将合并的乙酸乙酯萃取液干燥(MgSO₄)，浓缩，获得了浅色油状物。应当注意乙酸乙酯没有被完全除去。然后在搅拌下加入3000mL己烷以生成浆液，将其冷却至10℃。通过过滤收集该粒状固体，用1500mL己烷洗涤。获得了约564g(产率为82％)所需的纯的氨基酯(HPLC表明纯度＞95％)，为白色固体，m.p.82.9-83.0℃。LCMS：m/z＝288.2[M+H]⁺。手性HPLC(Chiralpak-AD正相柱，100％乙腈，210nm，1mL/分钟)：在4.71和5.36min有两个主要峰(1∶1)。

¹H NMR(CDCl₃)：1.40(s，3H)，1.7-1.8(m，2H)，2.0(brs，2H)，2.2(m，2H)，2.29(s，3H)，3.73(s，3H)，4.34(dd，2H)，5.33(dt，1H).

实施例-11-2)使用制备型手性HPLC色谱(ChiralPak-AD，正相柱，100％乙腈)分离实施例-II-1产物的单独对映体，获得了所需纯的(2S)-2-甲基氨基酯标题产物。ChiralPak-AD，正相柱，100％乙腈，210nm，1mL/分钟)：5.14分钟(99％)。

实施例-II-3)将实施例-II-2产物(2.30g，8.01mmol)在0.993MNaOH(30.0ml，29.79mmol)中的浆液于室温搅拌2小时。向所得澄清无色溶液中加入1.023M HCl(29.10mL，29.76mmol)。将所得澄清溶液浓缩直至开始形成沉淀(约30mL)。将浆液温热，获得了澄清溶液，让其在室温静置过夜。通过过滤分离沉淀。将该固体用冷水(2×10mL)、冷甲醇(2×10mL)和Et₂O(2×20mL)洗涤。将该白色固体在40℃真空干燥4小时，获得了1.04g(53％)所需的所示N-羟基产物。mp＝247.2℃。

元素分析的计算值C₁₀H₁₈FN₃O₃：C，48.57；H，7.34；N，16.99；Cl，0.O.实测值C，48.49；H，7.37；N，16.91；Cl，0.O.

HRMS计算值 C₁₀H₁₉FN₃O₃：m/z＝248.1410[M+H]⁺，实测值：248.1390.

¹H NMR(D₂O)1.35(s，3H)，1.81(s，3H)，1.7-2.0(m，4H)，3.87(d，2H) 5.29(dt，乙烯基，1H).¹⁹F NMR(CDCl₃)-112.51(q，1F，J＝21Hz).

实施例-II-4)向实施例-II-3产物在甲醇内的溶液中加入Lindlar催化剂。将该搅拌着的浆液回流2小时，然后冷却至室温。通过经由硅藻土过滤除去催化剂，将滤液汽提。将所得固体溶解在水中并浓缩，用1.0N HCl重复该操作，获得了所需的(2R，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐产物。

实施例-11-5)将73.5g(0.3mol)实施例-II-2产物溶解在300mL甲醇中，滴加到13.7g Lindlar催化剂和73.5g甲酸(1.53mol)在312mL甲醇内的预先形成的混合物中，同时将该反应温度保持在22℃-26℃。在室温搅拌约15小时后，通过¹⁹F NMR测定表明该反应已完全。和所得反应混合物经由硅藻土过滤，用125mL甲醇洗涤3次。将甲醇滤液合并，浓缩，获得了115g所需脒标题产物，为粘性油状物。

MS：m/z＝246(M+H)⁺.

¹H NMR(CD₃OD)

m，4H)2.3(s，3H)，3.9(s，3H)，4.2(d，2H)，5.4(dt，乙烯基)8.4(s，3H).

F¹⁹ NMR(CD₃OD) q，J＝21Hz)-111.7(q，J＝21Hz).

为了除去微量铅，将粗产物溶解在750mL甲醇中，加入150g硫羟树脂(Deloxan THP 11)。在室温搅拌3小时后，过滤该树脂，用500mL甲醇洗涤2次。将滤液合并，浓缩，获得了99g所需的脒标题产物，为粘性油状物。

另一方法：

将总共5.0g实施例-II-2产物(0.0174mol，1.0当量)与5.0g锌粉(0.0765mol，4.39当量)在40mL 1-丁醇和10mL乙酸中混和。在50℃搅拌5小时后，LC分析表明该反应已完全。迅速过滤出该固体。将滤液在冰水中冷却至7℃，然后在剧烈搅拌下一次性加入30mL 6NNaOH(0.180mol)。将该反应混合物从33℃冷却至20℃以后，分离出澄清的丁醇层，再用40mL 1-丁醇萃取水层。将丁醇萃取液合并，依次用30mL盐水和约10mL 6N HCl洗涤。在70℃浓缩后，形成了澄清的玻璃状物，经鉴定其是所需脒标题产物。

实施例-II)将99g实施例-II-5产物在6 NHCl中的溶液回流1小时，这时LC分析表明反应已完全。真空除去溶剂，获得了89.2玻璃状油状物，将其溶解在1466mL乙醇与7.5mL去离子水的混合物中。在室温向该搅拌着的溶液中加入THF，直至达到浊点(5.5升)。再加入30mL去离子水，将该溶液在室温搅拌过夜。将所得浆液过滤，用200mL THF洗涤，获得了65g白色固体，经鉴定其是所需标题产物。

[]_D ²⁵＝+7.2(c＝0.9，H₂O)

mp＝126-130℃.

MS：m/z＝232(M+H)⁺.

元素分析的计算值C₁₀H₂₂N₃F₁O₃Cl₂：C，37.28；H，6.88；N，13.04；C1，22.01.实测值 C，37.52，H，6.84，N，13.21，Cl，21.81.

¹H NMR(D₂O) s，3H)，1.8-2.1(m，4H)，1.9(s，3H)，4.0(d，2H)，5.3（dt，乙烯基，1H).

F¹⁹ NMR(D₂O) q，J＝21Hz)-112.1(q，J-21Hz).

实施例JJ

(2R，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例-JJ-1)使用制备型手性HPLC色谱分离实施例-II-1产物的单独对映体，获得了所需纯的(2R)-2-甲基氨基酯产物。

实施例-JJ-2)将实施例-JJ-1产物溶解在水和乙酸中。加入锌粉，将该混合物在60℃加热直至HPLC分析表明剩余少量原料。经由硅藻土将锌从该反应混合物中过滤出来，将滤液浓缩。通过反相HPLC柱色谱法纯化粗产物。合并含有产物的级份并浓缩，获得了所需的(2R)-2-甲基乙脒产物。

实施例-JJ)将实施例-JJ-2产物在2.0 NHCl中的溶液回流2小时。真空除去溶剂。将所得固体溶解在水中并浓缩，用1.0N HCl重复该操作，获得了所需的(2R，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐产物。

实施例KK

(2R/S，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

实施例-KK-1)向在冰浴内的N-[(4-氯苯基)亚甲基]-甘氨酸甲酯(0.33g，1.6mmol)、LiI(0.20g，1.0mmol)和实施例-HH-5产物样本(0.30g，0.96mmol)的1-甲基-2-吡咯烷酮(5mL)溶液中加入2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，3，2-二氮磷杂(diazaphosphorine)(0.433mL，1.5mmol)。将该溶液在室温搅拌1.5小时。将该反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，用水(2×20mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发，获得了所需的外消旋烷基化亚胺粗产物，为黄色油状物。

将粗产物溶解在乙酸乙酯(10mL)中，加入1N HCl(10mL)。将该混合物在室温搅拌2小时，分离出有机层。用碳酸氢钠固体中和水层，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发，获得了0.13g所需的外消旋氨基酯标题产物，为黄色油状物。该产物不用进一步纯化直接用于下一步骤。

LCMS：m/z＝288.2 [M+H]⁺。

实施例-KK-2)向实施例-KK-1(1.36g，4.98mmol)的CH₂Cl₂(15mL)溶液中加入4-氯苯甲醛(0.70g，5.0mmol)和MgSO₄(～5g)。在室温将浆液搅拌18小时。将浆液过滤，将滤液汽提，获得了1.98g(100％)所需的标题亚胺产物，为浅黄色油状物。产物不用进一步纯化直接用于下一步骤。

¹H NMR(C₆D₆)1.34(s，3H)，2.0(brm，4H，3.32(s，3H)，3.42(m，2H)，3.83(t，1H)，4.98(dt，乙烯基，1H).

实施例-KK-3)向实施例-KK-2产物(0.25g，0.63mmol)的CH₂Cl₂(2mL)溶液中加入甲基碘(0.200mL，3.23mmol)和O(9)-烯丙基-N-(9-蒽基甲基)-辛可尼丁溴化物(40mg，0.066mmol)。将该溶液冷却至-78℃，加入纯净的BTPP(0.289mL，0.95mmol)。将所得橙色溶液在-78℃搅拌2小时，然后让其温度升至-50℃。在-50℃保持2小时后，将该溶液用CH₂Cl₂(10rnL)稀释，用水(10mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发，获得了外消旋烷基化亚胺粗产物，为黄色油状物。

将粗产物溶解在乙酸乙酯(10mL)中，加入1N HCl(10mL)。将该混合物在室温搅拌1小时，分离出有机层。用固体碳酸氢钠将水层中和，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发，获得了0.16g所需的外消旋2-甲基氨基酯产物，为黄色油状物。产物不用进一步纯化直接用于下一步骤。LCMS：m/z＝288.2[M+H]⁺

实施例-KK-4)将实施例-KK-3外消旋粗产物溶解在水和乙酸中。加入锌粉，将该混合物在60℃加热直至HPLC分析表明剩余少量原料。经由硅藻土将锌从该反应混合物中过滤出来，将滤液浓缩。通过反相HPLC柱色谱法纯化粗产物。合并含有产物的级份并浓缩，获得了所需的乙脒产物。

实施例-KF)将实施例-KK-4外消旋产物在2.0 NHCl中的溶液回流1小时。真空除去溶剂。将所得固体溶解在水中并浓缩，用1.0N HCl重复该操作，获得了所需的本标题产物(2R/S，5E)-2-氨基-2-甲基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐。

实施例LL

(2S，5Z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

4-[(四氢吡喃基)氧基]丁炔

实施例LL-1)将4-二氢-2H-吡啶(293.2g 3.5mol)和浓HCl(1.1mL)的混合物冷却至5℃。在持续从外面冷却下，用30分钟加入3-丁炔-1-醇(231.5g，3.3mol)，让温度达到50℃。在混和下将该反应于室温保持2.5小时，然后用MTBE(1.0L)稀释。用饱和碳酸氢钠(2×150mL)洗涤所得混合物。用硫酸钠将有机相干燥，并减压浓缩，获得了500g(粗产物产率为98％)产物；GC面积％为96％。

5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-炔-1-醇

实施例LL-2)在氮气氛下，用30分钟向实施例LL-1的产物4-[(四氢吡喃基)氧基]丁炔(50.0g，0.33mol)在THF(125mL)内的溶液中加入2N EtMgCl的THF溶液(242mL，0.48mol)，让温度升至48℃。将该混合物进一步加热至66℃，在该温度下保持2小时，然后冷却至室温。加入低聚甲醛(14.5g，0.48mol)(观察到轻微放热)，将所得混合物加热至45℃。将温度控制在45至55℃之间1小时后，该混合物变为澄清。将该混合物加热至66℃，并搅拌2.5小时。将该混合物冷却至室温，用30分钟缓慢地加入饱和氯化铵(125mL)(观察到强放热)，同时将温度保持在40℃以下。通过倾析分离出液相；加入乙酸乙酯(250mL)和盐水(50mL)。分离出有机相，用盐水(2×50mL)和水(1×50mL)洗涤。用硫酸钠将有机层干燥，并减压浓缩，获得了51g浅黄色油状物(粗产物产率为85％)；GC面积％＝88％标题产物，6％原料。

5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-烯-1-醇

实施例LL-3)在氮气氛下，向500mL帕尔瓶中加入实施例LL-2的产物5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-炔-1-醇(40.2g，0.22mol)、Lindlar催化剂(2.0g)、乙醇(120mL)、己烷(120mL)和2，6-二甲基吡啶(457mg)。每次用氮气和氢气将该反应混合物吹扫5次。用氢气将帕尔瓶加压至5psi，振摇直至消耗98％理论上的氢气。将氢气从瓶中释放出来，用氮气吹扫5次。将该混合物经由Solka Floc垫过滤，用乙醇(2×50mL)洗涤催化剂。将滤液和洗涤液合并，减压浓缩，获得了40.3g(产率为99％)本标题产物，为黄色油状物(GC面积％＝96％)。

3-甲基-4-[5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-烯基]-4H-[1，2，4]恶二唑-5-酮

实施例LL-4)向实施例LL-3产物5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-烯-1-醇(11.8g，0.063mol)在甲苯(42mL)内的溶液中加入三乙胺(6.4g，0.063mol)。将该混合物冷却至-5℃，经由注射器以将反应器温度保持在10℃的速度加入甲磺酰氯(7.3g，0.63mol)。将该混合物温热至室温，搅拌2小时。将该混合物抽滤，在滤器上用甲苯(2×20mL)洗涤。将滤液和洗涤液加到3-甲基-1，2，4-恶二唑啉-5-酮的钠盐(8.6g，0.063mol)在DMF(10mL)内的混合物中。用机械搅拌器搅拌该混合物，并在45℃加热5小时。加入水(40mL)，将该混合物搅拌5分钟，然后分离各层。将甲苯层用水(3×20mL)洗涤，用MgSO₄干燥，并浓缩，获得了16.5g(97.3％)橙色粗产物(面积％GC由71％本标题产物、18％甲苯和4％杂质构成)。

4-(5-羟基-戊-2-烯基)-3-甲基-4H-[1，2，4]恶二唑-5-酮

实施例LL-5)向实施例LL-4产物3-甲基-4-[5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-烯基]-4H-[1，2，4]恶二唑-5-酮(16g，0.06mol)在甲醇(48mL)内的溶液中加入对甲苯磺酸(0.34g，2.0mmol)。将该混合物在室温搅拌4小时。加入碳酸氢钠(0.27g，3.0mmol)，用旋转蒸发仪将该混合物浓缩。将残余物用饱和碳酸氢钠(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取所得混合物。将萃取液合并，用水(2×25mL)洗涤，用MgSO₄干燥，并浓缩，获得了8.4g本标题产物的粗产物，为橙色油状物(面积％GC＝80％)。

甲磺酸5-(3-甲基-5-氧代-[1，2，4]恶二唑-4-基)-戊-3-烯基酯

实施例LL-6)向实施例LL-5产物4-(5-羟基-戊-2-烯基)-3-甲基-4H-[1，2，4]恶二唑-5-酮(8.27g，0.045mol)在二氯甲烷(33mL)内的溶液中加入三乙胺(5.0g，0.49mol)。将该混合物冷却至-5℃，以将温度保持在8℃的速度加入甲磺酰氯(5.5g，0.048mol)。移去冰浴，将该混合物搅拌3小时，将其温热至室温。加入水(15mL)，将该混合物搅拌5分钟，然后分离各层。将有机相用水(10mL)洗涤，用MgSO₄干燥，浓缩，获得了浅琥珀色残余物。将该残余物溶解在乙酸乙酯(8mL)中，并在5℃保持过夜。抽滤出沉淀固体，在滤器上用最小体积的乙酸乙酯洗涤，然后在滤器上风干，获得了6.8g(产率为58％)本标题产物。

¹H NMR(CDCl₃)δ5.76(dtt，J＝10.9，7.5，1.5Hz，1H)，δ5.59(dtt，J＝10.9，7.0，1.5Hz，1H)，δ4.31(t，J＝6.3Hz，2H)，δ4.27(dd，J＝7.0，1.5Hz，2H)，δ3.04(s，3H)，δ2.67(q，J＝6.7Hz，2H)，δ2.28(s，3H)

¹³C(CDCl₃)δ159.0，156.3，129.9，125.1，68.4，38.9，37.2，27.5，10.2.IR(cm^-1)1758，1605，1342，1320，1170.

元素分析的计算值C₉H₁₄N₂O₅S：C，41.21；H，5.38；N，10.68.实测值：C，41.15；H，5.41；N，10.51.

4-(5-碘-戊-2-烯基)-3-甲基-4H-[1，2，4]恶二唑-5-酮

实施例LL-7)向实施例LL-6产物甲磺酸5-(3-甲基-5-氧代-[1，2，4]恶二唑-4-基)-戊-3-烯酯(20.0g，0.076mol)在丙酮(160ml)内的溶液中加入碘化钠(17.15g，0.114mol)。将该混合物加热至回流，并搅拌3小时。停止外部加热，将该混合物在室温保持过夜。通过过滤除去固体，在滤器上洗涤。将滤液和洗涤液合并，并浓缩，用乙酸乙酯(120mL)萃取该多相残余物。将有机层用水(60mL)、15％硫代硫酸钠水溶液(60mL)和水(60mL)洗涤；用MgSO₄干燥，并减压浓缩，获得了22.1g(产率为98％)本标题油状产物。

2-[(3，4-二氯-亚苄基)-氨基]-丙酸甲酯

实施例LL-8)在氮气氛下，用12分钟向L-丙氨酸甲酯盐酸盐(200.0g，1.43mol)在二氯甲烷(2.1L)内的机械搅拌着的浆液中加入三乙胺(199.7mL，1.43mol)(期间加入的固体部分溶解，然后再沉淀)。10分钟后，加入3，4-二氯苯甲醛(227.5g，1.30moL)和硫酸镁(173.0g，1.43mol)(在30分钟内温度增加了6℃)。2.5小时后，将该混合物过滤。将滤液用水(1×1L)和盐水(1×500mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以92.4％的产率获得了313.3g油状产物。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃).8.25(s，1H)，7.91(d，1H)，7.58(dd，1H)，7.49(d，1H)，4.17(t，1H)，3.76(s，3H)，1.53(d，3H).元素分析的计算值：C₁₁H₁₁Cl₂NO₂：C，50.79；H，4.26；Cl，27.26；N，5.38.实测值：C，50.37；H，4.10；Cl，26.87；N，5.38.

外消旋-2-氨基-2-甲基-7-(3-甲基-5-氧代-[1，2，4]恶二唑-4-基)-庚-5-烯酸甲酯

实施例LL-9)方法1.在氮气氛下将实施例LL-7产物(114.2g，0.39mol)和实施例LL-8产物(151.5g，0.58mol)在二甲基甲酰胺(1.4L)中的溶液冷却至-8℃。然后用19分钟分3批(每批的量相等)加入碘化锂(78.1g，0.58mol)。将该混合物在-7℃搅拌20分钟，然后用36分钟加入(叔丁基亚氨基)-三(吡咯烷子基(pyr-rolidino))正膦(194.0mL，0.62)(最高温度＝-2.6℃)。10分钟后，移去冷却浴，将该溶液在室温搅拌1小时。然后将该混合物倒入冷水(1.4L)内，用乙酸乙酯(2×1.0L)萃取。将合并的有机层用水(2×400mL)和盐水洗涤。将乙酸乙酯层用1N HCl(780mL)处理，搅拌1小时。分离出水层，用乙酸乙酯(2×400mL)萃取，然后用碳酸氢钠(110g)中和。用乙酸乙酯(1×500mL)萃取该混合物。用硫酸钠将有机层干燥，过滤，浓缩，然后用甲基叔丁基醚处理，获得了结晶产物：第一批14.4g；第二批6.6g(GC纯度分别＝96.2和91.9％)。用氯化钠将水相饱和，用乙酸乙酯(4×500mL)萃取。用硫酸钠将合并的有机层干燥，过滤，浓缩，然后用甲基叔丁基醚处理，获得了结晶产物：第一批33.4g；第二批10.8g(GC纯度分别＝89.6和88.8％)。粗产物总产量为65.2g，62.4％。

方法2.在氮气氛下，向实施例LL-7产物(20.7g，0.070mol)和实施例LL-8产物(22.9g，0.088mol)在二甲基甲酰胺(207mL)内的溶液中加入碳酸铯(29.8g，0.092)。将该混合物在室温搅拌16小时，然后用水(300mL)稀释，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的乙酸乙酯层用水(3×100mL)和盐水洗涤，然后用1N HCl(184mL)处理。1小时后，分离各层，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取水层，然后用碳酸氢钠(15.5g)中和。用乙酸乙酯(1×150mL)萃取该混合物。用氯化钠将水层饱和，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用硫酸钠将合并的有机层干燥，过滤并浓缩，获得了黄色固体，11.9g，62.9％；GC纯度＝96.6％。将粗产物从温热的甲基叔丁基醚或乙酸乙酯中重结晶。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃) 5.68(m，1H)，5.36(m，1H)，4.23(d，2H)，3.73(s，3H)，2.43(s，3H)，2.18(m，2H)，1.81(m，1H)，1.69(s，br，2H)，1.66(m，1H)，(1.36，3H)

¹³C NMR(400MHz，CDCl₃)177.60，159.01，156.10，135.12，121.82，57.48，52.29，40.12，39.00，26.62，22.56，10.41

外消旋-2-氨基-2-甲基-7-(3-甲基-5-氧代-[1，2，4]恶二唑-4-基)庚-5-烯酸

实施例LL-10)将实施例LL-9产物(0.269g，1mmol)溶解在5mL2N HCl中，在氩气氛下加热至回流。回流6小时后，在室温搅拌72小时，取出等份试样，通过¹H NMR检查。其中有约6％未反应的酯原料和所需产物(通过LC-MS证实的)。真空除去含水部分，获得了0.38g浓厚的琥珀色油状物。通过反相色谱纯化，然后冷冻干燥，获得了0.23g，90.2％本标题化合物，为白色非潮解性固体。

元素分析的计算值C₁₁H₁₇N₃O₄.0.77H₂O：C，49.09；H，6.94；N，15.61.实测值：C，48.71；H，6.94；N，15.98

质谱：M+1＝256.

(2S，5Z)-2-氨基-2-甲基-7-(3-甲基-5-氧代-[1，2，4]恶二唑4-基)-庚-5-烯酸甲酯

实施例LL-11)使用具有稳态再循环部件的Novaprep 200装置，通过制备手性色谱法将本标题化合物(827.3g)与其R对映体分离开。将产物以40mg/ml的浓度溶解在无水乙醇中，负载到50×500mm预填塞的Chiral Technologies不锈钢柱上。吸附剂是20μ ChiralPak AD。流动相是乙醇/三乙胺100/0.1；流速等于125ml/分钟。每12分钟将粗产物溶液(25mL)加到柱上。使用稳态再循环技术。使用旋转蒸发仪除去溶剂。分离出最终的产物，为金色油状物，其在静置时固化；399.0g(收率为96.4％)。

¹H(400MHz，CD₃OD) 5.68(dtt，1H，J_烯烃＝10.7Hz)，5.43(dtt，1H，J_烯烃＝10.7Hz)，4.82(s，br，2H)，4.28(d，2H，J＝5.5Hz)，3.73(s，3H)，2.27(s，3H)，2.26(m，1H)，2.14(m，1H)，1.82(ddd，1H，J＝13.6，11.3，5.4Hz)，1.67(ddd，1H，J＝13.6，11.2，5.5Hz)，1.34(s，3H)

¹³C NMR(400MHz，CD₃OD)178.49，161.13，158.70，135.92，123.47，58.55，52.77，41.38，39.96，26.23，23.47，10.23

元素分析的计算值C₁₂H₁₉N₃O₄：C，53.52；H，7.11；N，15.60.实测值：C 52.35；H，7.20；N，15.60.

(2S，5Z)-7-亚氨代乙酰基氨基-2-氨基-2-甲基-庚-5-烯酸甲酯，二盐酸盐水合物

实施例LL-12)在室温，向实施例LL-11产物(114.5g，0.425mol)在甲醇(2.4L)内的溶液中加入固体二苯甲酰基-L-酒石酸(152.5g，0.425mol)和88％甲酸(147mL，3.428mol)。在氮气氛下制备Lindlar催化剂、5wt％用乙酸铅毒化的以碳酸钙为载体的钯(37.9g)在甲醇(200mL)中的浆液。然后在室温将原料溶液加到该浅灰色催化剂浆液中，然后用甲醇(200mL)洗涤。将该多相反应混合物在45℃加热1.5小时。观察到在约40℃开始稳定地释放出气体，这表明反应在进行。将该混合物在冰/水浴中冷却，然后经由Supercell HyFlo塞过滤。将该黄色溶液真空浓缩，获得了粘性油状物，将其在2N盐酸(2L)与乙酸乙酯(0.8L)之间溶解和分配。分离各层，用乙酸乙酯(0.8L)将水层洗涤1次。在高温下(＝70℃)真空除去溶剂和挥发物。该中间体产物不用进一步纯化和特征确定直接用于下一步骤。LC-MS[M+H]⁺＝228。

实施例LL)将实施例LL-12粗产物(170g)溶解在2N盐酸(1L)中。将所得橙色溶液回流过夜，然后冷却至室温。将该反应混合物浓缩至其体积的约1/3，让该酸性溶液流过固相萃取柱(25g C18二氧化硅)以除去颜色和其它杂质。真空除去(＝70℃)溶剂，获得了208g粗产物，为淡黄色树胶状物。

将该树胶状粗产物(31.3g)置于水(250mL)中，把该材料负载到填塞有酸性树脂Dowex 50WX4-400(约600g)的预处理离子交换柱上。首先用水(1L)洗涤树脂，然后用稀盐酸(1L 10/90v/v浓HCl/水)洗脱。产物被较高离子强度的稀盐酸(1.5L 20/90v/v-25/75v/v浓HCl/水)从树脂上洗脱下来。将含水溶剂真空去除(＝70℃)，将树胶状残余物置于4vol％三氟乙酸水溶液(100mL)中。真空除去(＝70℃)含水溶剂，将该操作再重复1次。然后在高度真空下将残余物干燥，获得了32.2g三氟乙酸盐形式的树胶状物。

通过反相制备色谱纯化(2S，5Z)-7-亚氨代乙酰基氨基-2-氨基-2-甲基-庚-5-烯酸，双三氟乙酸盐水合物粗产物(32.2g)。将该粗产物溶解在0.1％TFA水溶液(50ml)中，负载到填塞有吸附剂(BHK极性W/S，50，1.16kg)的2-英寸ID×1米不锈钢柱上。用0.1％TFA水溶液到25/75/0.1乙腈/水/TFA的步骤梯度以120mL/分钟的流速洗脱该产物。负载比例为36∶1w/w二氧化硅/样本。真空除去溶剂，通过用稀盐酸反复洗涤和真空除去溶剂来将该产物转化成盐酸盐。在高度真空下干燥，获得了27.4g本标题二盐酸盐水合物，为淡黄色树胶状物。

LC-MS[M+H]⁺＝214.16 Da

¹H NMR(D₂O，：1.48(s，3H)，1.8-1.9(AB，2H)，2.10(s，3H)，2.01/2.12(AB，2H)，3.78(d，2H)，几何异构体3.87(d，2H)，5.6/5.5(dt，2H，11Hz)

¹³C NMR(D₂O)：18.7，21.5，21.6，36.4，39.1，598，122.6，134.3，164.5，173.7

元素分析的计算值C₁₀H₁₉N₃O₂·2.2HCl·2H₂O：C，36.21；H，8.33；N，12.67；Cl23.51.实测值 C，36.03；H，7.72；N，12.67；Cl，23.60.

实施例MM

(2R，5Z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐

将在实施例LL-11所述的分离期间分离到的R-对映体(1.13g，4.2mmol)溶解在11mL 25％乙酸水溶液中，加热至60℃。然后以30分钟的时间间隔分4批(每批的量相同)加入锌粉(1.10g)。加热总共3小时后，取出等份试样，通过LC-MS检查，结果表明其中含有微量未反应的原料和所需产物。将该混合物冷却至室温，过滤，真空汽提，获得了2.31g融雪状白色固体。用稀热盐酸将该甲酯水解，获得了本标题化合物。通过反相色谱纯化后，冷冻干燥，获得了0.31g本标题化合物，为玻璃状固体。

元素分析的计算值C₁₀H₁₉N₃O₂·1.22HCl·1.15H₂O：C，46.13；H，8.15；N，15.09；Cl，15.53.

实测值：C，46.38；H，8.51；N，15.13；Cl，15.80

质谱：M+1＝214

c.生物学数据

使用某些或所有下列测定来证实本发明化合物的一氧化氮合酶抑制活性，和证实有用的药理性质。

用于一氧化氮合酶的瓜氨酸测定

一氧化氮合酶(NOS)活性可通过监测L-[2，3-³H]-精氨酸转化成L-[2，3-³H]-瓜氨酸来测定(Bredt和Snyder，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，87，682-685，1990和Moore等人，J.Med.Chem.，39，669-672，1996)。分别用从人组织中提取的RNA来克隆人诱导型NOS(hiNOS)、人内皮组成型NOS(hecNOS)和人神经元组成型NOS(hncNOS)。关于人诱导型NOS(hiNOS)的cDNA是从λcDNA库中分离出来的，该λcDNA库是用从溃疡性结肠炎患者的结肠样本中提取的RNA构建成的。关于人内皮组成型NOS(hecNOS)的cDNA是从λcDNA库中分离出来的，该λcDNA库是用从人脐静脉内皮细胞(HUVEC)提取的RNA构建成的，关于人神经元组成型NOS(hncNOS)的cDNA是从λcDNA库中分离出来的，该λcDNA库是用从得自尸体的人小脑提取的RNA构建成的。使用杆状病毒载体在Sf9昆虫细胞中表达重组酶(Rodi等人，The Biology of Nitric Oxide，Pt.4：Enzymology，Biochemistry andImmunology；Moncada，S.，Feelisch，M.，Busse，R.，Higgs，E.，Eds.；Portland Press Ltd.：London，1995；pp 447-450)。从可溶细胞提取物中分离出来酶活性，并通过DEAE-Sepharose色谱部分纯化。为了测定NOS活性，在或不在测试化合物存在下，将10μL酶加到40μL 50mMTris(pH 7.6)中，通过加入含有下述组分的50μL反应混合物来启动反应：50mM Tris(pH 7.6)、2.0mg/mL牛血清白蛋白、2.0mM DTT、4.0mM CaCl₂、20μM FAD、100μM四氢生物喋呤、0.4mM NADPH和60μML-精氨酸(含有0.9μCiL-[2，3-³H]-精氨酸)。L-精氨酸在该测定中的终浓度是30μM。对于hecNOS或hncNOS，以40-100nM的终浓度加入钙调蛋白。在37℃培养15分钟后，通过加入400μLDowex 50W X-8阳离子交换树脂在含有10mM EGTA、100mMHEPES、pH5.5和1mML-瓜氨酸的停止缓冲液中的悬浮液(1份树脂，3份缓冲液)来终止该反应。混和后，让树脂沉降，通过用液体闪烁计数器计数上清等份试样的悬浮液来测定L-[2，3-³H]-瓜氨酸的形成。结果列在表1中，是以化合物对于hiNOS、hecNOS和hncNOS的IC₅₀值表示。

原细胞亚硝酸盐测定

在LPS存在下以诱导NOS，可将RAW264.7细胞铺在96-孔组织培养平板上培养过夜(17小时)直至铺满。把一排3-6个孔保持不处理并用作对照来减去非特异性背景。可将培养基从每个孔中取出，将细胞用含有2mg/ml葡萄糖的Kreb-Ringers-Hepes(25mM，pH7.4)洗涤2次。然后将细胞置于冰上，与含有L-精氨酸(30μM)+/-抑制剂的50μL缓冲液一起温育1小时。通过把平板在水浴中温热至37℃并保持1小时来启动测定。细胞内iNOS产生的亚硝酸盐的量与时间呈线性关系。为了终止细胞测定，把细胞的平板置于冰上，取出含有亚硝酸盐的缓冲液，使用以前出版的用于测定亚硝酸盐的荧光法分析亚硝酸盐(T.P.Misko等人，Analytical Biochemistry，214，11-16(1993))。

人软骨外植块测定

将骨片用Dulbecco′s磷酸盐缓冲盐水(GibcoBRL)洗涤1次，用Dulbecco′s改性的Eagles培养基(GibcoBRL)缓冲液洗涤，置于不含酚红的基本必需培养基(MEM)(GibcoBRL)的培养皿中。将软骨切成重约15-45mg的小外植块，以每孔1或2个外植块的量置于含有200-500μL培养基/孔的96或48孔培养板中。培养基是具有Earle′s盐(GibcoBRL)的常规改性的基本必需培养基(Eagle)，其中不含有L-精氨酸、L-谷氨酰胺和酚红；或常规改性的无血清的Neuman和Tytell(GibcoBRL)培养基，其中不含有L-精氨酸、胰岛素、抗坏血酸、L-谷氨酰胺和酚红。这两种培养基在使用之前都补充100μML-精氨酸(Sigma)、2mML-谷氨酰胺、1X HL-1补充物(BioWhittaker)、50mg/ml抗坏血酸(Sigma)和150pg/ml重组人IL-1β(RD Systems)以诱导一氧化氮合酶。然后将化合物以10μL等份试样的量加入，将外植块在37℃、5％CO₂下培养18-24小时。然后弃去旧培养基，用含有重组人IL-1β和化合物的新鲜培养基替换，并再培养20-24小时。用荧光测定法(Misko等人，Anal.Bioclaem.，214，11-16，1993)分析上清液中的亚硝酸盐。所有样本都以一式四份的方式进行。在不含重组人IL-1β的培养基中培养未刺激的对照。IC₅₀值(表I)是通过将在6个不同抑制剂浓度下的亚硝酸盐生成抑制百分比绘图来确定的。

表I显示了某些本发明化合物的生物活性。

表I

生物活性：值代表所有实验和所有批次的平均值。

化合物的实施例序号	hiNOS IC₅₀(μM)	HecNOS IC₅₀(μM)	hncNOS IC₅₀(μM)	人软骨IC₅₀(μM)
化合物的实施例序号	hiNOS IC₅₀(μM)	HecNOS IC₅₀(μM)	hncNOS IC₅₀(μM)	人软骨IC₅₀(μM)	实施例A	0.36	68	3.6	0.1
实施例B	2.2	195	21	0.2	实施例A	0.36	68	3.6	0.1
实施例B	2.2	195	21	0.2	实施例C	12	303	105
实施例D	8.6	112	65	2.5	实施例C	12	303	105
实施例D	8.6	112	65	2.5	实施例E	＜5	279	29
实施例I	3.1	77	15	0.7	实施例E	＜5	279	29
实施例I	3.1	77	15	0.7	实施例J	4.4	302	58	8.2
实施例K	74	266	86		实施例J	4.4	302	58	8.2
实施例K	74	266	86		实施例L	197	1100	539
实施例M	3.4	78	17		实施例L	197	1100	539
实施例M	3.4	78	17		实施例N	0.9	26	6.0
实施例O	7.2	＞100	36	0.7	实施例N	0.9	26	6.0
实施例O	7.2	＞100	36	0.7	实施例P	12	＞100	181
实施例Q	12	1080	220		实施例P	12	＞100	181
实施例Q	12	1080	220		实施例S	172	1490	523
实施例T	0.9	89	8	0.1	实施例S	172	1490	523
实施例T	0.9	89	8	0.1	实施例U	20	418	150
实施例V	＜3	＞30	＞3	＜10	实施例U	20	418	150
实施例V	＜3	＞30	＞3	＜10	实施例W	＜5	＞150	＞10	＞30
实施例X	＜3	＞15	＞3	＜10	实施例W	＜5	＞150	＞10	＞30

实施例Y	＜3	＞30	＞3	＜10
实施例Y	＜3	＞30	＞3	＜10	实施例Z	＜3	＞15	＞3	＜10
实施例AA	＜3	＞5	＜3	＜3	实施例Z	＜3	＞15	＞3	＜10
实施例AA	＜3	＞5	＜3	＜3	实施例BB	＜10	＞25	＜10
实施例CC	2.9	29	9.9	0.5	实施例BB	＜10	＞25	＜10
实施例CC	2.9	29	9.9	0.5	实施例DD	10	74	31	1.8
实施例EE	1.4	18	5.8	0.5	实施例DD	10	74	31	1.8
实施例EE	1.4	18	5.8	0.5	实施例FF	16	86	45
实施例GG	34	386	122		实施例FF	16	86	45
实施例GG	34	386	122		实施例HH	0.4	37	7.6	0.4
实施例JJ	56	352	584		实施例HH	0.4	37	7.6	0.4
实施例JJ	56	352	584		实施例KK	0.57	52	13
实施例LL	0.7	31	12	0.8	实施例KK	0.57	52	13
实施例LL	0.7	31	12	0.8	实施例MM	121	1930	1480

体内测定

给大鼠腹膜内注射1-12.5mg/kg内毒素(LPS)，给它们或不给它们口服施用一氧化氮合酶抑制剂。处理5小时后可测定血浆亚硝酸盐/硝酸盐水平。结果可用于表明施用一氧化氮合酶抑制剂降低了血浆亚硝酸盐/硝酸盐水平的增加，这种增加是内毒素诱导的一氧化氮生成的可靠指标。如表II所示，实施例A((2S，5E)-2-氨基-6-氟-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸，二盐酸盐)抑制了LPS诱导的血浆亚硝酸盐/硝酸盐水平增加，所观测到的ED₅₀值＜0.1mg/kg，这表明了在体内抑制诱导型一氧化氮合酶活性的能力。

表II

在内毒素处理的大鼠中测定的化含物的ED₅₀，除非另有说明，否则所有化合物都是口服给药。

化合物	ED(mg/kg)
化合物	ED(mg/kg)	实施例A	＜0.1
实施例D	＞10	实施例A	＜0.1
实施例D	＞10	实施例G	＜0.1
实施例H	＜0.3	实施例G	＜0.1
实施例H	＜0.3	实施例V	＜3
实施例W	＞10	实施例V	＜3
实施例W	＞10	实施例X	＜5
实施例Y	＜3	实施例X	＜5
实施例Y	＜3	实施例Z	＜5
实施例AA	＜10	实施例Z	＜5
实施例AA	＜10	实施例CC	＜3
实施例EE	0.2	实施例CC	＜3
实施例EE	0.2	实施例HH	0.4
实施例KK	0.3	实施例HH	0.4
实施例KK	0.3	实施例LL	0.3

时间依赖性抑制的测定

通过在瓜氨酸酶测定组分(减去L-精氨酸)存在下，将化合物与酶在37℃预培养0-60分钟来评价化合物的人NOS同工型时间依赖性抑制。在0、10、21和60分钟取出等份试样(10μL)，并立即加到含有L-[2，3-³H]-精氨酸的瓜氨酸测定酶反应混合物中，其中L-精氨酸的终浓度为30μM，终体积为100μl。让该反应在37℃进行15分钟，通过加入停止缓冲液来终止反应，并如瓜氨酸NOS测定所述用Dowex50WX-8阳离子交换树脂进行色谱分离。抑制剂对NOS活性的％抑制是，与在没有抑制剂存在的情况下预培养相同时间的对照酶相比的抑制百分比。表III所示数据是将抑制剂与酶预培养21和60分钟后的％抑制。

表III

实施例序号	hiNOS	hecNOS	hncNOS
实施例序号	hiNOS	hecNOS	hncNOS	V	75％@2.8μM@21min76％@2.8μM@60min	11％@33μM@21min11％@33μM@60min	0％@5μM@21min0％@5μM@60min
W	34％@4.2μM@21min38％@4.2μM@60min	9％@173μM@21min0％@173μM@60min	0％@13μM@21min0％@13μM@60min	V	75％@2.8μM@21min76％@2.8μM@60min	11％@33μM@21min11％@33μM@60min	0％@5μM@21min0％@5μM@60min
W	34％@4.2μM@21min38％@4.2μM@60min	9％@173μM@21min0％@173μM@60min	0％@13μM@21min0％@13μM@60min	X	86％@2.2μM@21min85％@2.2μM@60min	18％@15μM@21min16％@15μM@60min	0％@3μM@21min0％@3μM@60min
Y	75％@2.8μM@21min76％@2.8μM@60min	11％@33μM@21min11％@33μM@60min	0％@5μM@21min0％@5μM@60min	X	86％@2.2μM@21min85％@2.2μM@60min	18％@15μM@21min16％@15μM@60min	0％@3μM@21min0％@3μM@60min
Y	75％@2.8μM@21min76％@2.8μM@60min	11％@33μM@21min11％@33μM@60min	0％@5μM@21min0％@5μM@60min	Z	86％@2.2μM@21min85％@2.2μM@60min	18％@15μM@21min16％@15μM@60min	0％@3μM@21min0％@3μM@60min
AA	96％@2.2μM@21min97％@2.2μM@60min	58％@5.7μM@21min55％@2.2μM@60min	34％@0.9μM@21min0％@0.9μM@60min	Z	86％@2.2μM@21min85％@2.2μM@60min	18％@15μM@21min16％@15μM@60min	0％@3μM@21min0％@3μM@60min

在视网膜缺血期间选择性iNOS抑制剂的神经保护作用的测定

在视网膜缺血期间抗神经细胞损伤的药理保护作用与导致缺血的人眼病症的治疗有关，包括青光眼。在插套管的大鼠视网膜中测定选择性iNOS抑制剂在缺血视网膜中的神经保护作用。用Fluoro-Gold将在受试大鼠两个视网膜中的视网膜神经节细胞逆行标记。标记后，通过给麻醉的大鼠的两只眼睛插套管，并把一只眼睛的血压提高到收缩压之上之后并保持约90分钟来诱导视网膜缺血。然后降低血压，并去掉套管。经过接下来的两周，有相当比例的视网膜神经节细胞发生变性。在缺血事件两周后，让测试组的大鼠接受每日在饮用水或食物中施用的iNOS选择性抑制剂。在缺血事件后的两周期间内，将所选大鼠杀死，收集它们的视网膜，平坦固定，使用荧光显微镜检术来分析神经节细胞损失。在收集的视网膜上进行免疫组织化学和免疫印迹测定，以分析神经节细胞损失和确定诱导型一氧化氮合酶的位置。

iNOS选择性抑制剂抗玻璃体内新血管形成的保护作用的测定

抗玻璃体内新血管形成的药理保护作用与人视网膜病例如与视网膜缺血有关的视网膜病的治疗有关。糖尿病、成年视网膜病、视网膜静脉阻塞以及产生视网膜缺血的其它疾病经常导致在正常无血管玻璃体液中形成新血管，从而造成失明。已知一氧化氮影响新血管形成，因此iNOS选择性抑制剂可用于预防和治疗玻璃体内新血管形成。

为了确定施用iNOS选择性抑制剂来抗玻璃体内新血管形成，同时促进视网膜再血管化的有效性，将对照组小鼠(对照)和测试组小鼠(测试)暴露于引起视网膜血管闭塞和毛细血管损失的高氧条件下(例如75％氧气)5天—从出生后第7天至出生后第12天。然后让对照和测试小鼠返回大气条件下，但是视网膜中的缺血期从大约出生后第12天一直持续到出生后第17天，导致iNOS表达(Sennlaub，等人，J.Clin.Invest.107：717-25，2001)。在该缺血期间，测试组以8小时的间隔接受皮下注射的溶解在水中的选择性iNOS抑制剂，而对照组接受皮下注射的0.9％NaCl溶液。在缺血期间的不同时间点，将选择的小鼠麻醉，用在磷酸盐缓冲盐水溶液中的FITC-葡聚糖灌注，将眼睛剜出。给右眼施以体外血管造影术以定量确定视网膜血管化。具体来说，将眼睛在4％低聚甲醛中固定，解剖并平坦固定，使用荧光显微镜观察和照相。扫描照片，用计算机图像分析软件测定总的表面积和不含毛细血管的面积。为了定量确定玻璃体内新血管形成，将左眼包埋在石蜡中，沿着与视神经平行的前后方向切成7μm的系列切片。用PAS和Hemalun将切片染色，计数在内限制膜的玻璃体侧上发现的血管细胞核数目。将玻璃体内新血管形成程度与视网膜中的再血管化程度进行比较，以确定用iNOS选择性抑制剂治疗导致视网膜的有利再血管化，同时不导致玻璃体内新血管形成的程度。

关于iNOS选择性抑制剂抗青光眼中一氧化氮介导的神经破坏的保护作用的测定

诱导型NOS存在于原发性开角型青光眼患者的视神经头上，并且可能与一氧化氮对视网膜神经节细胞轴突的局部破坏有关(A.H.Neufeld等人，Arch.Ophthalmol.115：497-503，1997；A.H.Neufeld，Surv.Ophthalmol.43(suppl 1)：S129-S135，1999)。为了研究本发明方法的iNOS抑制化合物来选择性地阻断iNOS的作用，按照Neufeld等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：9944-48，1999中描述的方法产生青光眼样病症。通过烧灼3条巩膜血管来在大鼠中产生慢性、单侧中等程度增加的眼内压(IOP)模拟青光眼。将眼内压增加约2倍。给实验组动物口服施用在饮用水中的选择性iNOS抑制剂6个月。对照组以与实验组相同的方案接受得自相同来源的新鲜饮用水。将每个瓶再注满来记录所消耗的总体积。每月监测一次IOP。将IOP中等程度提高6个月后，使用眼底照相机拍摄每只眼睛的视神经盘的彩色照片。在处死前一周，用Fluoro-Gold或其它合适的逆行标记物，通过在两侧上丘微注射来将视网膜神经节细胞逆行标记。1周后，将动物处死，收集视网膜，使用荧光显微镜检术来分析完整、平坦固定的视网膜的视网膜神经节细胞密度。比较在实验和对照组中的视网膜神经节细胞损失百分比，并与所记录的IOP水平改变相关联。

c.剂量、制剂和给药途径

用于本发明方法中的多种iNOS选择性抑制剂可能具有至少两个不对称碳原子，因此包括外消旋体和立体异构体，例如纯的形式或混合物形式的非对映体和对映体。这样的立体异构体可使用常规技术，通过用对映体原料进行反应，或通过分离本发明化合物的异构体来获得。异构体可包括几何异构体，例如沿着双键的顺式-异构体或反式-异构体。所有这样的异构体都在可用于本发明方法的化合物范围内。本发明方法还包括使用iNOS选择性抑制剂化合物的互变异构体、盐、溶剂化物和前药。

对于本发明方法，选择性iNOS抑制剂的合适的给药途径包括将这些化合物与受试者中的其作用位点接触，例如在哺乳动物如人的视网膜中接触的任何手段。更具体来说，合适的给药途径包括口服、静脉内、皮下、直肠、局部、颊(即舌下)、肌内和皮内给药。在示例性实施方案中，选择性iNOS抑制剂是口服给药。

为了预防或治疗眼科病症，例如青光眼、视网膜炎、视网膜病和眼色素层炎，本发明方法包括使用化合物自身形式或其可药用盐形式的iNOS选择性抑制剂。术语“可药用盐”包括常用于形成碱金属盐和形成游离酸或游离碱的加成盐的盐。盐的性质并不重要，只要其是可药用的即可。可药用盐可特别用作本发明方法的产物，因为与相应的母化合物或中性化合物相比，它们具有较高的水溶解度。这样的盐必须具有可药用阴离子或阳离子。本发明化合物的合适的可药用酸加成盐可由无机酸或有机酸制得。这样的无机酸的实例是盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。合适的有机酸包括脂族、环脂族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，其实例有甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、甲磺酸(mesylic)、水杨酸、对羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、扑酸(embonic)(双羟萘酸(pamoic))、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对氨基苯磺酸、硬脂酸、环己基氨基磺酸、藻酸、半乳糖醛酸。本发明化合物的合适的碱加成盐包括由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制得的金属盐，或由N，N’-二苄基乙二胺、胆碱、氯普鲁卡因、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(meglumine)(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制得的有机盐。在可能时，本发明化合物的合适的可药用酸加成盐包括衍生自无机酸和有机酸的那些，所述无机酸是例如盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硼酸、氟硼酸、磷酸、偏磷酸、硝酸、碳酸(包括碳酸根和碳酸氢根阴离子)、磺酸和硫酸，所述有机酸是例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、乙醇酸、异硫羰酸(isothionic)、乳酸、乳糖酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、琥珀酸、甲苯磺酸、酒石酸和三氟乙酸。对于医药用，盐酸盐是特别优选的。合适的可药用碱性盐包括铵盐，碱金属盐例如钠盐和钾盐，和碱土金属盐例如镁盐和钙盐。所有这些盐都可以按照常规方法，通过分别将合适的酸或碱与化合物的共轭碱或共轭酸反应，而由相应的本发明化合物的共轭碱或共轭酸制得。

在一个实施方案中，可用于本发明方法中的iNOS选择性抑制剂是与可药用载体一起以药物组合物的形式呈递的。载体必须在与药物组合物的其它组分相容方面是可接受的，并且必须对受试者无害。载体的适当形式包括固体或液体或二者，在一个示例性实施方案中，载体与治疗化合物一起配制成单位剂量组合物，例如含有约0.05％-约95％重量的活性化合物的片剂。在另一个实施方案中，还可以提供其它药物活性物质，包括其它本发明化合物。本发明药物组合物可通过众所周知的制药技术制得，这样的技术基本上是将组分混和。

优选的单位剂型是含有如下所述的有效量或其适当分数的一种或多种治疗化合物的那些。

iNOS选择性抑制剂的总日剂量一般为约0.001mg/kg体重/天-约2500mg/kg体重/天。对于成人，剂量范围一般为约0.005mg-约10g/天。片剂或以不连续单位提供的其它剂型可适宜地含有有效剂量或多个有效剂量的治疗化合物。例如，在本发明中使用的选择性iNOS抑制化合物可在含有5mg-500mg，典型地约10mg-约200mg的单位中提供。

对于治疗化合物的可药用盐，上述重量是指衍生自所述盐的治疗化合物的酸同等物或碱同等物的重量。

对于本文所述的方法，应当理解，实现所期望的生物作用所需的选择性iNOS抑制化合物的量取决于多种因素，包括所选的具体化合物、具体应用、给药途径、受试者的临床病症以及受试者的年龄、体重、性别和饮食。

上述各治疗化合物的日剂量是在单次剂量中施用，或者在相称的多个亚剂量中施用。亚剂量每天施用2-6次。在一个实施方案中，剂量是在能有效获得所需生物作用的持续释放剂型中施用。

依据本发明方法的口服给药可包括本领域众所周知的制剂，以通过任一多种机制将药物延长或持续递送到胃肠道内。这包括但不限于从基于小肠改变的pH的剂型中的pH敏感性释放，片剂或胶囊的缓慢侵蚀，根据制剂的物理性质在胃中保留，剂型与肠道粘膜衬里的生物粘着，或活性药物从剂型中的酶解释放。

本发明方法的口服递送可用固体、半固体或液体剂型来实现。合适的半固体和液体剂型包括例如包含在凝胶胶囊中的糖浆剂或液体。

为了实施本发明方法，适于口服给药的药物组合物可以以下列形式提供：分别含有预定量的至少一种可用于本发明方法的治疗化合物的不连续单位，例如胶囊、扁囊剂、锭剂或片剂；粉剂或粒剂；在水或非水液体中的溶液或悬浮液；或水包油或油包水乳液。

d.实施方案的实施例

下列非限制性实施例是为了举例说明适于实施本发明治疗方法的不同药物组合物。

实施例1药物组合物

可使用湿法制粒技术制备用于口服给药的组成如表IV所示的100mg片剂：

表IV

组分	重量(mg)
组分	重量(mg)	化合物A-1	25
乳糖	54	化合物A-1	25
乳糖	54	微晶纤维素	15
羟丙基甲基纤维素	3	微晶纤维素	15
羟丙基甲基纤维素	3	交联羧甲基纤维素钠(Croscarmelose Sodium)	2
硬脂酸镁	1	交联羧甲基纤维素钠(Croscarmelose Sodium)	2
硬脂酸镁	1	片剂总重量	100

实施例2药物组合物

可使用直接压片技术来制备其组成如表V所示的100mg片剂：

表V

组分	重量(mg)
组分	重量(mg)	化合物A-1	25
微晶纤维素	69.5	化合物A-1	25
微晶纤维素	69.5	胶态二氧化硅	0.5
滑石粉	2.5	胶态二氧化硅	0.5
滑石粉	2.5	交联羧甲基纤维素钠	0.5
硬脂酸镁	1	交联羧甲基纤维素钠	0.5
硬脂酸镁	1	片剂总重量	100

本文所述的实施例可通过用一般性或具体描述的治疗化合物或惰性组分替代在上述实施例中使用的那些来进行。

本文给出的解释和举例说明是为了把本发明、其原理及其实际应用介绍给本领域技术人员。本领域技术人员可以以其多种形式改动和应用本发明，来最好地适合特定应用的需求。因此，所给出的本发明的具体实施方案不是详尽性的或对本发明的限制。

Claims

1.在需要治疗或预防眼科病症的受试者中治疗或预防该疾病的方法，所述方法包括施用眼科病症有效量的化合物，其中所述化合物选自：

式I化合物或其可药用盐，

其中：

条件是：R¹或R²当中至少有一个含有卤素；

R⁷选自H和羟基；

J选自羟基、烷氧基和NR³R⁴，其中：

R³选自H、低级烷基、低级链烯基和低级炔基；

式II化合物或其可药用盐，

其中X选自-S-、-S(O)-和-S(O)₂-；

R²³是C₁烷基；

式III化合物或其可药用盐，

其中：

R⁴¹是H或甲基；且

R⁴²是H或甲基；

式IV化合物或其可药用盐，

式V化合物或其可药用盐，

其中：

式VI化合物或其可药用盐，

其中：

式VII化合物或其可药用盐，

其中：

式VIII化合物或其可药用盐，

其中：

式IX化合物或其可药用盐，

其中：

R⁵⁴选自卤素和C₁-C₅烷基，所述C₁-C₅烷基可任选被卤素或烷氧基取代，所述烷氧基可任选被一个或多个卤素取代；和

式X化合物或其可药用盐，

其中：

2.权利要求1的方法，其中所述眼科病症是青光眼。

3.权利要求1的方法，其中所述眼科病症是视网膜炎。

4.权利要求1的方法，其中所述眼科病症是与视网膜缺血有关的病症。

5.权利要求4的方法，其中所述与视网膜缺血有关的病症是视网膜病性病症。

6.权利要求5的方法，其中所述视网膜病性病症是糖尿病性视网膜病。

7.权利要求5的方法，其中所述视网膜病性病症是成年视网膜病。

8.权利要求6的方法，其中所述视网膜病性病症是视网膜静脉阻塞性视网膜病。

9.权利要求1的方法，其中所述眼科病症是眼色素层炎。