CN1539968A

CN1539968A - 人肝癌相关基因laptm4b的一个等位基因及其编码产物与应用

Info

Publication number: CN1539968A
Application number: CNA031097863A
Authority: CN
Inventors: 周柔丽; 邵根泽; 张青云; 芮静安; 张页; 彭聪; 魏渲辉; 刘歆荣; 张莎; 林明
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2003-04-21
Filing date: 2003-04-21
Publication date: 2004-10-27
Anticipated expiration: 2023-04-21
Also published as: CN1328377C

Abstract

本发明公开了人肝癌相关基因LAPTM4B的一个等位基因及其编码产物与应用。该基因是下列核苷酸序列之一：1)序列表中的SEQ ID №：1；2)编码序列表中SEQ ID №：2蛋白质之氨基酸序列的多核苷酸；3)与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。本发明对LAPTM4B的基因进行分型，发现基因型LAPTM4B＊2/＊2与肝癌的易感性密切相关，从而为原发性肝癌的高危人群的筛查及筛查的准确性提供了新的更确切的标准，对易患肝癌的高风险人群的评估和预防具有重大的意义。另外，还可将LAPTM4B＊2蛋白作为药物作用的新靶点，研制以LAPTM4B＊2蛋白为靶点的新药。因而据此，有可能开发出防治肝癌的新途径，这是一项将产生重大社会效益的工程。

Description

人肝癌相关基因LAPTM4B的一个等位基因及其编码产物与应用

技术领域

本发明涉及基因工程领域中的一个等位基因及其编码产物与应用，特别是涉及人肝癌相关基因LAPTM4B的一个等位基因及其编码产物与应用。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是严重危害人类健康的疾病，据报道，全世界原发性肝癌每年的新增患者数超过100万人，其中70％集中在亚洲。我国肝癌患者约占全世界肝癌患者的40-45％，每年新增肝癌患者45万，并且呈不断上升趋势。肝癌不仅发病率高，而且隐匿、发展快、复发率和死亡率高，被称为“癌中之王”。到医院就诊的肝癌患者大多为中或晚期，若不治疗自然病程一般仅3-6个月。

肿瘤本质上是细胞的遗传性疾病。与肝癌相关的基因虽已发现很多，但肝癌发生、发展的机制仍然不甚明了。目前发现的原癌基因按其编码产物在细胞的定位及功能大体可以归为四类，一类是编码生长因子的基因，包括sis、int-2、hst、fgf-5；第二类是编码生长因子受体的基因，包括erbB、erbB-2、fms、met、ros等；第三类是编码细胞质中信号传导分子的基因，包括abl、src、ras、raf、yes、fgr、fes、lck、mos等；第四类是编码细胞增殖与凋亡调控分子的基因，包括，bcl-1、bcl-2等；第五类是编码细胞核里同DNA相结合的蛋白质(转录因子)的基因，例如myc、myb、fos、jun、B-lym、ski、ets、rel等基因。研究证实，和HCC的发生密切相关的主要有ras、src、myc、met、p53等基因。

阐明肝癌发病机制将有助于肝癌的预防、诊断和治疗。研究发现，肝癌的发病与个体的遗传易感性相关。不同遗传背景的个体对环境致癌因子的处理能力存在差异，导致个体患癌风险不同。个体的这种肿瘤遗传易感性不同之本质在于基因的多态型和多样性。

本发明的发明人克隆了一个与人肝癌相关的基因LAPTM4B(中国专利申请号：02158110.X)，发现该基因在正常肝组织低表达，而在96.88％(31/32)人肝癌组织中表达上调。上调的程度与肝癌细胞的分化程度相关：低分化者显著上调，而高分化者上调较轻。在部分配对非癌肝组织中也可见表达轻度升高。研究表明LAPTM4B在细胞的增殖、迁移和细胞外基质所启动的信号转导中，以及肝癌的发生过程中扮演极其重要的角色。

发明内容

本发明的目的是提供一个人肝癌相关基因LAPTM4B的等位基因及其编码产物。

本发明所提供的人肝癌相关基因LAPTM4B的等位基因命名为LAPTM4B*2，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中的SEQ ID №：1；

2)编码序列表中SEQ ID №：2蛋白质序列的多核苷酸；

3)与序列表中SEQ ID №：1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。

序列表中的SEQ ID №：1由2264个碱基组成，其读码框为自5’端第17到1129位碱基。其中含有两个拷贝的19bp DNA片段，19bp DNA片段的序列为gcttgg agctccagcagct。这两个拷贝的19bp DNA片段在LAPTM4B等位基因nt124-nt161。

人肝癌相关基因的等位基因LAPTM4B*2编码的蛋白LAPTM4B*2，是具有序列表中序列2氨基酸序列的蛋白质，或者是将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与序列2的氨基酸序列相同活性的由序列2衍生的蛋白质。

序列表中的序列2是由370个氨基酸残基组成的蛋白质。

为了确定LAPTM4B的不同基因型与肝癌易感性的关系，本发明对基因组DNA进行了LAPTM4B分型，将人肝癌相关基因LAPTM4B命名为LAPTM4B*1，在人群中得到的LAPTM4B的基因型别为*1/*1、*1/*2和*2/*2。研究发现基因型*2/*2的个体患肝癌的风险比非*2/*2型个体高2.89倍，表明LAPTM4B *2/*2与肝癌的易感性密切相关。因此本发明提供的人肝癌相关基因LAPTM4B的等位基因LAPTM4B*2可以作为筛查肝癌易感人群和高危人群之目标物的应用，特别是基因型为LAPTM4B*2/*2者作为筛查肝癌易感和高危人群之靶标物的准确性更大。因此，由LAPTM4B*2/*2表达的蛋白质或其抗体或者自人基因组中扩增捕获LAPTM4B的物质为活性成分的试剂可用于制备筛查肝癌高危人群的试剂。

为了确定LAPTM4B基因型与其它癌症易感性的关系，本发明对食道癌患者的LAPTM4B基因型的分布频率进行了分析，发现LAPTM4B与食道癌易感性无关。

为了确定等位基因*1和*2是否存在表达活性的差异，以及探索5’非翻译区的19bp核苷酸序列在基因表达过程中所扮演的可能角色，本发明构建了荧光素酶为报告基因的报告质粒pGL3-*1/Luc和pGL3-*2/Luc，并通过转染人肝癌BEL7402细胞分析了报告质粒的荧光素酶活性，结果表明等位基因*2中的19bp的重复片段抑制了BEL7402细胞中启动子的活性，因此，19bp的重复片段在BEL7402细胞中可能为负性调控因子。

含有SEQ ID №：1所述序列的表达载体及含有SEQ ID №：1序列的转染细胞系均属于本发明的保护范围。

本发明公开了LAPTM4B的等位基因LAPTM4B*2，对基因组DNA进行了LAPTM4B分型，并研究了不同基因型与肝癌易感性的关系以及与其它肿瘤的易感性的关系。发现了其中一个基因型LAPTM4B*2/2与肝癌的易感性密切相关，从而为原发性肝癌易感和高危人群的筛查之准确性提供了新的更确切的标准，对易患肝癌的高风险人群的评估和预防具有重大的意义。另外还可将LAPTM4B*2基因作为肝癌治疗的靶基因，例如可通过最新发展的siRNA干扰技术阻抑LAPTM4B基因的表达；以及将LAPTM4B*2蛋白作为药物作用的新靶点，研制以LAPTM4B*2蛋白为靶点的新药。因此，有可能开发出抗肝癌的新途径，是一项将产生重大社会效益的工程。

下面结合具体实施例及附图对本发明作进一步说明。

附图说明

图1为LAPTM4B等位基因的部分片段

图2为LAPTM4B的基因分型

图3等位基因^*1和^*2在BEL7402细胞系中表达活性的比较

具体实施方式

患者及其正常对照组的来源

所有57例肝癌患者年龄在35-70岁之间，平均年龄为54±6.0岁，男性患者50名，女性7名。外科组织来自外科手术。对照组B包括209名新生儿。采用新生儿出生时的脐静脉血作为样本。

所有109名食道癌患者年龄在30-70岁之间，平均年龄为55±5.4岁，男/女比例为76/33。外科组织来自外科手术。正常对照组S为116名无症状和临床检验没有患食道癌的人群。外周血样品被用来分离提取基因组DNA。

统计方法

采用x²检验和单因素ANOVA方差分析处理数据

实施例1、LAPTM4B等位基因的克隆和测序

(1)DNA的分离

根据标准的苯酚-氯仿法，从正常人、肝癌或食道癌患者的血液淋巴细胞或外科组织中提取基因组DNA。

(2)克隆和测序

根据申请号为02158110.X的中国专利中的LAPTM4B基因序列3，设计合成了两个引物(见图1A)，F₁(nt-1492--1472)：5’GCG CTCGAGGCTCCAGGTGGAAGAGTGTGC 3’(5’末端引入XhoI酶切位点，即划线部分)；R₁(nt 16-35)：5’GCG AAGCTT GGACTTGGCCATGTGACCCG 3’(5’末端引入HindIII酶切位点，即划线部分)，通过PCR法从基因组DNA中克隆LAPTM4B第一外显子的启动子及其前续部分的序列。

PCR产物用XhoI和HindIII酶切后克隆到荧光素酶载体pGL3-Basic(Promega)的多接头连接位点上，得到pGL3-LAPTM4B，并进行测序。

得到了LAPTM4B的一个新的等位基因，命名为LAPTM4B^*2，同时将原来的LAPTM4B序列命名为LAPTM4B^*1序列。LAPTM4B^*2的序列为序列表中序列1。图1(A)为LAPTM4B的启动子和第一外显子的示意图。长方形框表示第一外显子，黑色部分为编码区，白色部分为非编码区，灰色部分为19bp的DNA序列。横线表示启动子，F₁、F₂、R₁、R₂分别为四条引物。该序列以起始密码子ATG中的A编为+1。图1(B)为LAPTM4B等位基因的部分序列和色谱图。用下划线标记的是19bp的DNA序列。结果表明，LAPTM4B^*1中含有一个拷贝的19bp DNA序列，LAPTM4B^*2含有两个拷贝的19bp DNA序列，并且它们衔接在LAPTM4B^*1第一外显子的5’非编码区(nt-33--15)。

实施例2、LAPTM4B的基因分型

设计一个以PCR为基础的方法对正常人和肝癌患者血液样品中的LAPTM4B进行基因分型。根据申请号为02158110.X的中国专利申请中的LAPTM4B基因序列3中的19bp DNA序列的侧翼序列设计合成了两个引物，

F₂(nt-85--65)：5’GCCGACTAGGGGACTGGCGGA 3’；

R₂(nt 99-119)：5’CGAGAGCTCCGAGCTTCTGCC 3’。

以基因组DNA为模板扩增第一外显子的部分序列。PCR条件：96℃预变性5分钟；94℃ 30秒，68℃30秒，72℃1分钟，35个循环；72℃延伸5分钟。PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳鉴定，结果见图2。泳道1，6，12，13表示LAPTM4B^*1/^*1中的204bp的核苷酸片段，泳道5，8，9，14，15表示LAPTM4B^*2/^*2中的223bp的核苷酸片段。泳道2，3，4，7，10，11表示LAPTM4B^*1/^*2中含有204bp和223bp两个核苷酸片段。泳道M为Marker。结果表明在纯合基因对^*1/^*1或^*2/^*2中分别只有204bp或223bp DNA片段被扩增，而在杂合基因对^*1/^*2中，204bp和223bp的DNA片段同时被扩增。因此，在中国人群中LAPTM4B的基因型可分为：LAPTM4B^*1/^*1，^*1/^*2和^*2/^*2。

实施例3、肝癌患者和正常人群的LAPTM4B基因型和等位基因的分布

本发明分析了209例中国正常人群和57例肝癌患者，其基因型出现的频率比较见表1，用Hardy-Weinberg方程进行数学期望分析结果。肝癌患者和正常人群的LAPTM4B等位基因^*1和^*2的频率有显著差异，其比例分别为0.5175：0.6746和0.4825：0.3254。正常人群出现LAPTM4B等位基因^*1和^*2的频率分别为0.6746和0.3254，肝癌患者出现LAPTM4B等位基因^*1和^*2的频率分别为0.5175和0.4825。肝癌组的基因型^*1/^*1(P＝0.029)和^*2/^*2(P＝0.003)出现的频率与其对应的正常对照组相比具有显著的统计学差异。在肝癌组中，只有29.8％为基因型^*1/^*1，正常对照组中有45.93％为基因型^*1/^*1。而肝癌组中基因型^*2/^*2的频率为26.32％，与对照组的11.01％相比，其出现的频率显著增加(P＜0.01)。分析表明基因型^*2/^*2的个体患肝癌的风险比是^*2/^*2型个体的2.89倍。因此，LAPTM4B^*2/^*2等位基因与肝癌易感性相关。

如表2所示，不同基因型的患者并没有表现出肝癌级别、阶段或HBV感染的差异，83.3％患者HBV阳性。

表1 肝癌患者和正常人群的LAPTM4B基因型的分布

N(％) P值

对照组B(n＝209) 肝癌组(n＝57)

LAPTM4B基因型

^*1/^*1 96(45.93) 17(29.82) 0.029^a

^*1^*/2 90(43.06) 25(43.86) 0.914

^*2/^*2 23(11.01) 15(26.32) 0.003^b

等位基因的频率

^*1 0.6746 0.5175

^*2 0.3254 0.4825

^aOR：0.500，95％CI：0.267-0.939；^bOR：2.888，95％CI：1.390-6.003(OR患病风险，和95％CI为置信区间)。

表2用于LAPTM4B基因分型的肝癌患者的临床资料

LAPTM4B基因型

^*1/^*1 ^*1/^*2 ^*2/^*2 P值

总人数 17 25 15

男性 14 24 12

女性 3 1 3 NS

肿瘤的级别

G1 0 2 0

G2 1 4 8

G3 7 7 4

G4 9 12 3 NS

肿瘤的阶段

I 0 0 0

II 5 8 5

III 4 7 3

IV 8 10 7 NS

HBV感染

阴性 1 4 4

阳性 13 16 10

未确诊 3 5 1 NS

NS：差异无显著性

实施例4、食道癌细胞中的基因型和等位基因的频率

为了确定LAPTM4B基因型是否与其它癌症易感性相关，对来自同一地方的116例正常人群和109例食道癌患者进行了分析。如表3所示，食道癌患者的LAPTM4B基因分型与其对照人群并无显著差异。表明LAPTM4B等位基因与食道癌易感性无关。

同时，在不同地区(对照组B和对照组S来自不同地区)的正常人群中LAPTM4B等位基因和基因型之间也无显著差异，表明人群的LAPTM4B基因型的分布频率并不存在地域的差异。

表3食道癌患者和正常人群的LAPTM4B基因型的分布

N(％)

对照组B 对照组S 食道癌 P值

(n＝209) (n＝116) (n＝109)

LAPTM4B 基因型

^*1/^*1 96(45.93) 52(44.83) 49(44.95) ＞0.05

^*1/^*2 90(43.06) 49(42.24) 48(44.04) ＞0.05

^*2/^*2 23(11.01) 15(12.93) 12(11.01) ＞0.05

等位基因的频率

^*1 0.6746 0.6595 0.6697

^*2 0.3254 0.3405 0.3303

实施例5、报告质粒的构建和启动子的分析

选择LAPTM4B^*1/^*1或^*2/^*2的纯合基因对作为模板构建质粒。以LAPTM4B^*1/^*1或^*2/^*2的基因组DNA为模板，用PCR引物F₁和R₁扩增LAPTM4B第一外显子上游的5’末端侧翼序列(包括部分第一外显子序列)。为了避免由于PCR扩增引起的突变，使用了高保真的DNA聚合酶(Pfx Kit，Invitrogen)。LAPTM4B^*1/^*1和^*2/^*2的PCR产物用XhoI和HindIII酶切后，克隆到荧光素酶载体pGL3-Basic(Promega)的多接头连接位点上，得到重组质粒pGL3-^*1/Luc和pGL3-^*2/Luc，并对重组质粒进行测序，以验证没有突变体产生。重组质粒用Mini-Plasmid试剂盒(Qiagen)进行分离纯化。在24孔培养板上，按照说明书上的方法用LipofectAMINE 2000(Invitrogen)转染人肝癌细胞BEL7402。LipofectAMINE 2000复合物含有pGL-3 Basic质粒，pGL-3启动子质粒(阳性对照)或者含有无任何添加物的荧光素酶报告质粒。肝癌细胞BEL7402与转染试剂温浴6小时后，用不含有抗生素的胎牛血清为培养基进行培养。转染的细胞培养48小时后，收集细胞的溶解产物，并用POLARstar galaxy发光计(bMG Corporation)上的荧光素酶报告分析系统(Promega)分析荧光素酶的活性。

测序结果表明LAPTM4B^*2和LAPTM4B^*1的启动子相同，并没有发现LAPTM4B等位基因^*1和^*2的启动子序列存在差别。

实施例6、等位基因LAPTM4B^*2和LAPTM4B^*1翻译活性的比较

为了确定等位基因^*1和^*2是否存在表达活性的差异，以及探索5’非翻译区的19bp核苷酸序列在基因表达过程中所扮演的可能角色，将等位基因^*1和^*2的启动子和第一外显子的部分序列克隆到pGL-3 Basic载体的荧光素酶基因的上游并转染到BELT402细胞中，该细胞系是从人肝癌组织中分离出来的，其基因型为

结果如图3所示，其中1、2、3分别表示LAPTM4B的启动子和第一外显子、重组质粒pGL3-^*1/Lue和pGL3-^*2/Luc的部分片段的示意图。pGL-3-^*1/Luc中的荧光素酶活性(19910±1154)与pGL-3-^*2/Luc(16099±983)相比具有显著的统计学差异(P＝0.002)，表明等位基因^*2中的19bp的重复片段抑制了BEL7402细胞中启动子的活性，使其活性降低19％，因此，该19bp的串联重复片段在BEL7402细胞中可能为负性调控因子。

序列表

<160>2

<210>1

<211>2264

<212>DNA

<213>人属人(Homo sapiens)

<400>1

gaatctcgac ccttgaatgg agttacacga acggccagat gaaagaagga aggcccggac 60

ctccactcag ggccgactag gggactggcg gagggtgcac gctgatggat ttactcaccg 120

ggtgcttgga gctccagcag ctgcttggag ctccagcagc tggctggagc ccgcgatgac 180

gtcacggact cgggtcacat ggccgagtcc gccccgcccc ctccccgtcc ccgccgctgc 240

agccgtcgcc ttcggagcga agggtaccga cccggcagaa gctcggagct ctcggggtat 300

cgaggaggca ggcccgcggg cgcacgggcg agcgggccgg gagccggagc ggcggaggag 360

ccggcagcag cggcgcggcg ggctccaggc gaggcggtcg acgctcctga aaacttgcgc 420

gcgcgctcgc gccactgcgc ccggagcgat gaagatggtc gcgccctgga cgcggttcta 480

ctccaacagc tgctgcttgt gctgccatgt ccgcaccggc accatcctgc tcggcgtctg 540

gtatctgatc atcaatgctg tggtactgtt gattttattg agtgccctgg ctgatccgga 600

tcagtataac ttttcaagtt ctgaactggg aggtgacttt gagttcatgg atgatgccaa 660

catgtgcatt gccattgcga tttctcttct catgatcctg atatgtgcta tggctactta 720

cggagcgtac aagcaacgcg cagcctggat catcccattc ttctgttacc agatctttga 780

ctttgccctg aacatgttgg ttgcaatcac tgtgcttatt tatccaaact ccattcagga 840

atacatacgg caactgcctc ctaattttcc ctacagagat gatgtcatgt cagtgaatcc 900

tacctgtttg gtccttatta ttcttctgtt tattagcatt atcttgactt ttaagggtta 960

cttgattagc tgtgtttgga actgctaccg atacatcaat ggtaggaact cctctgatgt 1020

cctggtttat gttaccagca atgacactac ggtgctgcta cccccgtatg atgatgccac 1080

tgtgaatggt gctgccaagg agccaccgcc accttacgtg tctgcctaag ccttcaagtg 1140

ggcggagctg agggcagcag cttgactttg cagacatctg agcaatagtt ctgttatttc 1200

acttttgcca tgagcctctc tgagcttgtt tgttgctgaa atgctacttt ttaaaattta 1260

gatgttagat tgaaaactgt agttttcaac atatgctttg ctggaacact gtgatagatt 1320

aactgtagaa ttcttcctgt acgattgggg atataatggg cttcactaac cttccctagg 1380

cattgaaact tcccccaaat ctgatggacc tagaagtctg cttttgtacc tgctgggccc 1440

caaagttggg catttttctc tctgttccct ctcttttgaa aatgtaaaat aaaaccaaaa 1500

atagacaact ttttcttcag ccattccagc atagagaaca aaaccttatg gaaacaggaa 1560

tgtcaattgt gtaatcattg ttctaattag gtaaatagaa gtccttatgt atgtgttaca 1620

agaatttccc ccacaacatc ctttatgact gaagttcaat gacagtttgt gtttggtggt 1680

aaaggatttt ctccatggcc tgaattaaga ccattagaaa gcaccaggcc gtgggagcag 1740

tgaccatctg ctgactgttc ttgtggatct tgtgtccagg gacatggggt gacatgcctc 1800

gtatgtgtta gagggtggaa tggatgtgtt tggcgctgca tgggatctgg tgcccctctt 1860

ctcctggatt cacatcccca cccagggccc gcttttacta agtgttctgc cctagattgg 1920

ttcaaggagg tcatccaact gactttatcg agtggaattg ggatatattt gatatacttc 1980

tgcctaacaa catggaaaag ggttttcttt tccctgcaag ctacatccta ctgctttgaa 2040

cttccaagta tgtctagtca ccttttaaaa tgtaaacatt ttcagaaaaa tgaggattgc 2100

cttccttgta tgcgcttttt accttgacta cctgaattgc aagggatttt tatatattca 2160

tatgttacaa agtcagcaac tctcctgttg gttcattatt gaatgtgctg taaattaagt 2220

tgtttgcaat taaaacaagg tttgcccaca aaaaaaaaaa aaaa 2264

<210>2

<211>370

<212>PRT

<213>人属人(Homo sapiens)

<400>2

Met Glu Leu His Glu Arg Pro Asp Glu Arg Arg Lys Ala Arg Thr

1 5 10 15

Ser Thr Gln Gly Arg Leu Gly Asp Trp Arg Arg Val His Ala Asp

20 25 30

Gly Phe Thr His Arg Val Leu Gly Ala Pro Ala Ala Ala Trp Ser

35 40 45

Ser Ser Ser Trp Leu Glu Pro Ala Met Thr Ser Arg Thr Arg Val

50 55 60

Thr Trp Pro Ser Pro Pro Arg Pro Leu Pro Val Pro Ala Ala Ala

65 70 75

Ala Val Ala Phe Gly Ala Lys Gly Thr Asp Pro Ala Glu Ala Arg

80 85 90

Ser Ser Arg Gly Ile Glu Glu Ala Gly Pro Arg Ala His Gly Arg

95 100 105

Ala Gly Arg Glu Pro Glu Arg Arg Arg Ser Arg Gln Gln Arg Arg

110 115 120

Gly Gly Leu Gln Ala Arg Arg Ser Thr Leu Leu Lys Thr Cys Ala

125 130 135

Arg Ala Arg Ala Thr Ala Pro Gly Ala Met Lys Met Val Ala Pro

140 145 150

Trp Thr Arg Phe Tyr Ser Asn Ser Cys Cys Leu Cys Cys His Val

155 160 165

Arg Thr Gly Thr Ile Leu Leu Gly Val Trp Tyr Leu Ile Ile Asn

170 175 180

Ala Val Val Leu Leu Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ala Asp Pro Asp

185 190 195

Gln Tyr Asn Phe Ser Ser Ser Glu Leu Gly Gly Asp Phe Glu Phe

200 205 210

Met Asp Asp Ala Asn Met Cys Ile Ala Ile Ala Ile Ser Leu Leu

215 220 225

Met Ile Leu Ile Cys Ala Met Ala Thr Tyr Gly Ala Tyr Lys Gln

230 235 240

Arg Ala Ala Trp Ile Ile Pro Phe Phe Cys Tyr Gln Ile Phe Asp

245 250 255

Phe Ala Leu Asn Met Leu Val Ala Ile Thr Val Leu Ile Tyr Pro

260 265 270

Asn Ser Ile Gln Glu Tyr Ile Arg Gln Leu Pro Pro Asn Phe Pro

275 280 285

Tyr Arg Asp Asp Val Met Ser Val Asn Pro Thr Cys Leu Val Leu

290 295 300

Ile Ile Leu Leu Phe Ile Ser Ile Ile Leu Thr Phe Lys Gly Tyr

305 310 315

Leu Ile Ser Cys Val Trp Asn Cys Tyr Arg Tyr Ile Asn Gly Arg

320 325 330

Asn Ser Ser Asp Val Leu Val Tyr Val Thr Ser Asn Asp Thr Thr

335 340 345

Val Leu Leu Pro Pro Tyr Asp Asp Ala Thr Val Asn Gly Ala Ala

350 355 360

Lys Glu Pro Pro Pro Pro Tyr Val Ser Ala

365 370

Claims

1、人肝癌相关基因LAPTM4B的等位基因LAPTM4B*2，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中的SEQ ID №：1；

2)编码序列表中SEQ ID №：2蛋白质之氨基酸序列的多核苷酸；

2、根据权利要求1所述的等位基因LAPTM4B*2，其特征在于：所述基因为序列表中的SEQ ID №：1。

3、人肝癌相关基因LAPTM4B的等位基因LAPTM4B*2编码的蛋白LAPTM4B*2，是具有序列表中序列2氨基酸序列的蛋白质，或者是将序列2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与序列2的氨基酸序列相同活性的由序列2衍生的蛋白质。

4、根据权利要求3所述的蛋白质，其特征在于：它是具有序列表中序列2的氨基酸残基序列。

5、含有权利要求1所述基因的表达载体。

6、含有权利要求1所述基因的细胞系。

7、人肝癌相关基因LAPTM4B的等位基因LAPTM4B*2作为筛查肝癌易感和高危人群试剂的标的物的应用。

8、根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述应用是基因型为LAPTM4B*2/*2的基因型作为筛查肝癌易感和高危人群的试剂之标的物的应用。

9、以针对权利要求3所述蛋白质或其抗体或者自人基因组中扩增捕获LAPTM4B的物质为活性成分的试剂。

10、权利要求1所述基因和/或权利要求3所述蛋白质在制备检测肝癌及其他相关肿瘤的试剂中的应用。