CN1524867A - 一种葛根总黄酮的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及葛根总黄酮的提取方法。本发明采用水提—壳聚糖除杂—大孔树脂纯化的方法获得葛根总黄酮，黄酮含量大于60％，较现有提取方法简便，乙醇用量少，提取物纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及中药有效成分的提取，具体涉及葛根总黄酮的提取方法。
背景技术
葛根为豆科植物，始载于《神农本草经》，被列为中品。目前，在我国为药食两用的植物。它具有解肌退热、生津止渴、透发麻疹、升阳止泻的功能。葛根的品种较多，分布在亚洲温热带的有30余种。我国约有10多种，根据淀粉含量的多少，可分为柴葛和粉葛两大类，各包含若干品种。明代《本草纲目》载：“葛有野生、有家种，其蔓延长”；1977年版至2000年版《中国药典》(一部)载：“葛根为豆科野葛P.ueraria Lobata(Wind.)Ohwi或甘葛藤P.thornsoniiBenth.的干燥根。
现代研究表明葛根具有增加脑和冠脉流量等功能，可用于心脑血管等疾病的治疗。其主要成分为葛根总黄酮，包括葛根素、葛根大豆苷、大豆苷元等。
以水或乙醇直接提取的葛根总黄酮纯度低，一般在30％-50％左右。
中国医学科学院70年代以碱性醋酸铅沉淀法制备葛根总黄酮，这是黄酮经典的纯化方法，但该法易引起重金属污染，制药行业不宜使用。
专利《葛根有效成分提取物及制备方法和用途》(ZL91110602.2)提取葛根异黄酮的工艺是将原料葛根煎煮—过滤—浓缩—酒沉—得原桨—原浆稀释或喷雾干燥制得有效成份提取液(或粉)。其目的在于为人们提供一种可作为防癌的药物，也存在有效成份含量低的问题。
《西北药学杂志》，1999.14(4)“大孔树脂分离葛根总黄酮研究”中报道了用大孔树脂纯化葛根总黄酮的方法，但葛根原料(饮片或粗粉)需用乙醇或甲醇提取，此工艺耗醇量大，生产成本高。且大生产时，乙醇回流提取需要防火、防爆。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种减少乙醇用量，提高生产安全性的制备高纯度葛根总黄酮的方法。
本发明公开的葛根总黄酮的提取方法是以豆科野葛P.uerariaLobata(Wind.)Ohwi饮片为原料，以水为溶剂煎煮提取，壳聚糖去除蛋白质、鞣质等杂质，提取浓缩液经大孔树脂吸附、洗脱纯化，获得黄酮含量大于60％的葛根总黄酮提取物。
具体提取步骤包括：
取葛根饮片，用水浸泡煎煮2-3次，合并提取液，浓缩，加入含壳聚糖的澄清剂，过滤，滤液浓缩，过大孔树脂柱纯化，用洗脱剂洗脱，洗脱液浓缩、干燥即得葛根总黄酮。
制得的葛根总黄酮经紫外分光光度法(UV)测定纯度大于60％，高效液相色谱(HPLC法)测试表明总黄酮中含葛根素大于20％，此外还含有葛根大豆苷、大豆苷元等黄酮类成分。
本发明所述除杂的澄清剂为壳聚糖，或含壳聚糖的澄清剂组合物。所述的壳聚糖为食品级，其分子量在20万以上，脱乙酰度大于80％；使用时用1％的醋酸配成浓度为0.5-1.5％w/w的溶液。
本发明中加壳聚糖溶液后的葛根提取液可以采用离心或过滤的方法去除沉淀；
本发明所述大孔树脂是指苯乙烯型树脂，选自AB-8或D-101型；
本发明所采用洗脱剂选自70-90％乙醇溶液；
本发明中的乙醇洗脱液回收乙醇后可采取减压干燥、喷雾干燥或其它干燥方法。
本发明提取方法以水为药材提取溶剂，大大减少了乙醇用量，降低了成本，工艺稳定，产品纯度高。
本发明采用水提—壳聚糖除杂—大孔树脂纯化的方法，不局限于葛根总黄酮的提取纯化，亦可用于其他总黄酮或总皂甙等植物有效部位的提取纯化。
附图说明
图1实施例1葛根提取物(总黄酮)HPLC指纹图谱
色谱峰：10-葛根素 11-3’-甲氧基葛根素
14-大豆苷 22-大豆苷元
具体实施方式
实施例1
取葛根(野葛)饮片1000g，第一次加水10L，浸泡30min，煎煮1hr；滤过；药渣加水8L，煎煮30mim；滤过，合并滤液。浓缩至6L，加1％的壳聚糖溶液900ml，放置过夜。离心，滤液浓缩至500ml，上D-101大孔树脂柱，柱高径比为1∶5，树脂用量2L(按湿法装柱树脂体积算)。用4L去离子水洗脱去除水溶液杂质，再用4L 70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后减压干燥，得葛根总黄酮75g。得率7.5％，总黄酮含量78％。
实施例2
取葛根(野葛)饮片1500g，第一次加水15L，浸泡30min，煎煮1hr；滤过；药渣加水12L，煎煮30min；滤过，合并滤液。浓缩至9L，加1％的壳聚糖溶液1450ml，放置过夜。离心，滤液浓缩至375ml，上AB-8大孔树脂柱，柱高径比为1∶5，树脂用量3L(按湿法装柱树脂体积算)。用6L去离子水洗脱去除水溶液杂质，再用6L 70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后减压干燥，得葛根总黄酮105g。得率7.0％，总黄酮含量80％。
实施例3葛根总黄酮含量测定
1.总黄酮含量测定
用紫外分光光度法进行含量测定。以葛根素为对照品，250nm测吸光度。实例1中葛根素的含量为：78.5％；实例2中葛根素的含量为：80.3％。
2.总黄酮中葛根素含量测定(HPLC)
(1)色谱条件
色谱柱：C18柱；检测波长：250nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min；
流动相：甲醇∶水(25∶75)
(2)按以上色谱条件测定，实例1中葛根素的含量为：35.1％；实例2中葛根素的含量为：36.2％。
3.总黄酮图谱鉴别(HPLC)
(1)色谱条件
色谱柱：C18柱；检测波长：250nm；柱温：室温；流速：1.0ml/min；
流动相：甲醇∶水梯度洗脱。
(2)如色谱图所示(图1)，本方法提取的总黄酮中含有葛根素、大豆苷、大豆苷元、3’-甲氧基葛根素等一系列总黄酮。
Claims (6)
1、一种葛根总黄酮的提取方法，其特征在于该方法以豆科野葛饮片为原料，以水为溶剂煎煮提取，提取液加入澄清剂去除杂质，过滤，滤液浓缩经大孔树脂吸附、洗脱剂洗脱纯化获得黄酮提取物，提取物的黄酮含量大于60％。
2、根据权利要求1所述的葛根总黄酮的提取方法，其特征在于用该方法获得黄酮提取物总黄酮中含葛根素大于20％，并含有葛根大豆苷、大豆苷元等黄酮类成分。
3、根据权利要求1所述的葛根总黄酮的提取方法，其特征在于其中所述的澄清剂为壳聚糖或含壳聚糖的澄清剂组合物。
4、根据权利要求2所述的葛根总黄酮的提取方法，其特征在于其中所述的所述的壳聚糖为食品级，其分子量在20万以上，脱乙酰度大于80％；使用时用1％的醋酸配成浓度为0.5-1.5％w/w的溶液。
5、根据权利要求1所述的葛根总黄酮的提取方法，其特征在于其中所述的大孔树脂是指苯乙烯型树脂，选自AB-8或D-101型。
6、根据权利要求1所述的葛根总黄酮的提取方法，其特征在于其中所述的洗脱剂选自70-90％乙醇溶液。
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Assignee: Shanghai Guanshengyuan Huatuo Winery Co.,Ltd. Assignor: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine Contract fulfillment period: 2006.12.1 to 2011.11.30 Contract record no.: 2008310000020 Denomination of invention: Method for extracting kudzuvine root total flavone Granted publication date: 20060412 License type: Exclusive license Record date: 20080909 |
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