CN1482128A - 7-酯化和7,20-双酯化的喜树碱衍生物及其制法和其药物组合物与用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及新的7－酯化和7，20－双酯化的喜树碱衍生物，其制备方法，含有它们的药物组合物，及其作为药物，尤其是作为抗肿瘤药物的用途。
Description
技术领域
本发明涉及新的7-酯化和7，20-双酯化的喜树碱衍生物，其制备方法，含有它们的药物组合物，及其作为药物，尤其是作为抗肿瘤药物的用途。
背景技术
喜树碱(Camptothecin，CPT)是从垬桐科旱莲植物喜树(Camptotheca acuminata)中分离得到的一种生物碱。实验证明喜树碱对许多实体瘤有抗癌活性，它主要作用于DNA拓扑异构酶I(Topo I，一种在许多癌细胞中高表达的酶)，是最经典的Topo I的特异性抑制剂。目前Topo I成为设计新型抗癌药物的最热门靶点之一。美国国立癌症研究所(NCI)药物机制分析电脑网络系统已将Topo I抑制剂列为重点研究的六大类抗肿瘤药物之一。除美国和日本外，法国，德国，意大利和韩国也在进行喜树碱衍生物的研究工作。喜树碱类似物是一个在喜树碱的9，10，11位有各种取代基的化合物，它们的制备可参阅文献，以公知的方法合成。下面给出部分文献的名称作为参考：美国专利4604463，1986-8-5号美国专利6291676，2001-11-18号美国专利5932588，1999-8-3号美国专利5646159，1997-7-8号美国专利4399282，1983-8-16号J Med Chem，2001，44(10)：1594-1602.J Med Chem，2001，44(20)：3264-3274.J Med Chem，2000，43(21)：3963-3969.J Med Chem，2000，43(21)：3970-3980.J Med Chem，2000，43(11)：2285-2289.J Med Chem，1998，41(13)：2308-2318.J Med Chem，1998，38(3)：395-401.J Med Chem，1993，36(18)：2689-2700.J Med Chem，1989，32(3)：715-720.J Med Chem，1986，29(11)：2358-2363.J Med Chem，1980，23(5)：554-560.Chem Pharm Bull，1991，39(6)：1446-1454.Chem Pharm Bull，1991，39(12)：3183-3188.Chem Pharm Bull，1991，39(10)：2574-2580.Bioorg Med Chem Lett，2000，10：369-371.Bioorg Med Chem Lett，1998，8：415-418.Bioorg Med Chem Lett，1999，9：3203-3206.Bioorg Med Chem Lett，1998，8：1797-1800.Anti-Cancer Drug Design，1998，13：145-157.Jpn J Cancer Res，1995，86：776-782.
鉴于喜树碱的严重毒性(骨髓抑制，出血性膀胱炎及腹泻)限制了它在癌症治疗中的应用。天然喜树碱难溶于水，脂溶性也很差。为了增加喜树碱的水溶性，70年代的临床试验曾评价了喜树碱钠盐的抗肿瘤活性，不足的是它的钠盐形式对人体产生严重的毒性，且抗癌活性低，因此中断了II期临床。八十年代拓朴异构酶I的发现再一次引起肿瘤学家对喜树碱的兴趣.1989年，研究发现喜树碱半合成衍生物对裸鼠异种移植肿瘤拥有非凡的抗肿瘤活性。研究表明，CPT通过与Topo I-DNA二元可裂解复合物(cleavable complex)可逆结合，形成CPT-DNA-Topo I三元复合物，从而稳定了可裂解复合物，形成“路障”，致使复制叉(replication fork)不能进行下去，从而导致肿瘤细胞死亡。然而喜树碱在人体中的抗肿瘤活性却很低，这是因为喜树碱在体内存在着关闭的内酯形式和开环的羧酸盐形式之间的平衡，而开环形式取决于pH值和动物种类。特别是人血清白蛋白(HSA)优先与喜树碱的开环形式结合，形成稳定的复合物，使平衡向开环形式位移，使得体内具有抗肿瘤活性的内酯含量太低。
喜树碱的分子中含有四个六元环和一个五元环，E环是一个α-羟基内酯且有一个手性中心(20S构型)。喜树碱分子中也存在一个分子内氢键，使得E环羰基的活性很高，在亲核试剂的进攻下，很容易开环。构效关系研究显示：对抗肿瘤活性来说，喜树碱的羟基内酯环E是最关键的结构特征，试验证明在裸鼠中，关闭内酯形式的喜树碱活性远远优于开环形式的喜树碱钠盐，因此喜树碱内酯环在体内的稳定性是影响抗肿瘤活性的重要因素。我们认为喜树碱的严重毒性(小鼠最大耐受剂量MTD 12mg/kg)主要是因为当药物进入人体内后喜树碱的开环形式与HSA紧密结合，使喜树碱在体内的平衡从关闭内酯形式向开环形式位移，喜树碱很快开环(半衰期小于半小时)。研究还发现，喜树碱的A，B环上的取代基特别是7，10-双取代可干扰开环形式与HSA的结合，增加内酯环在体内的稳定性。另外文献报道喜树碱的20-羟基烷基酯和芳氧乙酸酯前药能够降低毒性，增加内酯的稳定性，从而改进喜树碱的抗肿瘤活性。
目前国外的两个喜树碱水溶性衍生物伊利替康(Irinotecan)和拓扑替康(Topotecan)与母体化合物喜树碱相比疗效确切，抗瘤谱广，已在临床上广泛应用。另有多个衍生物如9-硝基喜树碱，DX-8951f，GG-211，Bay38-3441，BN80915和CKD-602正在进行II/III临床研究。而国内仅有喜树碱，10-羟基喜树碱，伊利替康和拓扑替康上市。由于喜树碱和10-羟基喜树碱是未经修饰的天然产物，毒性较大，抗肿瘤活性低，限制了它们在临床的应用；再者病人长期使用这些药物易产生耐药性，迫切需要寻找高效低毒的抗肿瘤药物。
本发明化合物除对癌细胞具有细胞毒活性外，对耐药癌细胞也有细胞毒活性；对正常细胞毒性小，而对肿瘤细胞毒性大。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种新的7-酯化和7，20-双酯化的喜树碱衍生物。
本发明的另一目的在于提供一种新的7-酯化和7，20-双酯化的喜树碱衍生物的制备方法。
本发明的另一目的在于提供一种新的7-酯化和7，20-双酯化的喜树碱衍生物及其组合物作为抗肿瘤药物的应用。
本发明一方面涉及药物组合物，其包括作为活性成份的通式(I)的化合物及其异构体及制药领域中常用的载体。
本发明再一方面涉及的是通式(I)化合物或含有它的药物组合物的抗肿瘤用途。
具体讲，本发明一方面涉及如通式(I)所示的化合物
R9选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，CH2NR12R13，其中R12和R13分别是氢、1-6碳原子烷基、芳基取代烷基、羟基取代低级烷基、氨基取代低级烷基、单或双取代氨基低级烷基、环氨基，CH2R14，其中R14为低级烷氧基、氰基，NR15R16，其中R15，R16分别是低级烷基、芳基、二烷氨烷基、氨基低级烷基、羟基低级烷基；
R10选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，氨基取代低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，氨基低级烷基，羟基低级烷基，[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰氧基；
R9能和R10成环；
R11选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基；
R10能和R11成环。该通式中R’任意的选自H、COR，R任意的选自
R1选自氢，单取代或多取代的卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷羰氧基，低级烷羰氨基；
n＝1-5，
R2选自氢，单取代或多取代低级烷基，卤素，低级烷氧基，羟基，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷羰氧基，低级烷羰氨基；
n＝1-5R3选自氢，低级烷基，卤素。
根据本发明，本发明包括但不显定于如通式(Ia)所示的化合物
其中，
R9选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，CH2NR12R13，其中R12和R13分别是氢、1-6碳原子烷基、芳基取代烷基、羟基取代低级烷基、氨基取代低级烷基、单或双取代氨基低级烷基、环氨基，CH2R14，其中R14为低级烷氧基、氰基，NR15R16，其中R15，R16分别是低级烷基、芳基、二烷氨烷基、氨基低级烷基、羟基低级烷基；
R10选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，氨基取代低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，氨基低级烷基，羟基低级烷基，[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰氧基；
R9能和R10成环；
R11选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基；
R10能和R11成环；其中，R”任意的选自
X＝O、S，Y＝C、N，n＝1-5，
R1选自氢，单取代或多取代的卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷羰氧基，低级烷羰氨基；
R2选自氢，单取代或多取代低级烷基，卤素，低级烷氧基，羟基，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷羰氧基，低级烷羰氨基；
R3选自氢，低级烷基，卤素。
在本发明中，术语“卤素″是指氟、氯、溴、碘。术语“低级烷基”“低级烷”是1-6碳原子的直链或支链的烷基。
根据本发明，本发明化合物可以异构体的形式存在，而且通常所述的“本发明化合物”包括该化合物的异构体。
本发明化合物可存在双键的顺反异构体，不对称中心具有S构型或R构型，本发明包括所有可能的立体异构体以及两种或多种异构体的混合物。如果存在顺/反异构体，本发明涉及顺式形式和反式形式以及这些形式的混合物，如果需要单一异物体可根据常规方法分离或通过立体选择合成制备。
根据本发明的实施方案，所述的本发明化合物还包括其药效学上可接受的盐、盐的水合物、酯或前体药物。
根据本发明还涉及制备本发明化合物的方法，用7位羟甲基、20位羟基的喜树碱或它的类似物和相应的羧酸或酰卤反应而制备的。缩合反应在合适的缩合剂、催化剂存在的条件下发生。优选的缩合试剂是包括1，3二环己基碳二亚胺(DCC)、二吡啶碳酸酯(2-DPC)、1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)、1，3-二异丙基碳酰亚胺(DIPC)、4-吡咯烷基吡啶。更优选的缩合剂是1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)。优选的催化剂是三级胺。优选的三级胺选自4-二甲氨基吡啶(DMAP)，4-吡咯烷基吡啶。更优选的三级胺选自4-二甲氨基吡啶(DMAP)。反应的温度在0℃-60℃之间，优选的温度是20℃-30℃，更优选的温度是室温。反应在适宜的溶剂下进行，优选的溶剂是无水的非质子性溶剂，更优选的是卤代烷、DMF、四氢呋喃(THF)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等。最优选的是二氯甲烷，DMF。在二氯甲烷为溶剂的条件下缩合制备的是7，20-双酯化的喜树碱衍生物，在DMF为溶剂的条件下制备的是7-酯化的喜树碱衍生物。
本发明因此还涉及含有作为活性成份的本发明化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-95重量％的本发明化合物。
本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明化合物本发明化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。
本发明化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。
例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。
例如，将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数等，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围从1-1000mg/m2，尤其是10-100mg/m2。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药这受限于给药医生的临床经验以及包括运用化疗、放疗手段的给药方案。
从体外抗肿瘤活性筛选来看，本发明化合物表现良好的抗肿瘤活性。本发明化合物的半数抑制浓度均小于伊立替康，说明其活性优于伊立替康。本发明的个别优选的化合物对KB、A2780、Bel7402的半数抑制浓度和喜树碱相当，对KB/VCR、EC-304的半数抑制浓度小于喜树碱。本发明的个别优选的化合物对KB、A2780、HCT-8、Bel7402的半数抑制浓度小于喜树碱，对A549的半数抑制浓度和喜树碱相当。试验表明本发明化合物的体内毒性(最大耐受剂量大于60mg/kg)，小于喜树碱、拓扑替康。因此可作为抗肿瘤药物用于动物，优选用于哺乳动物，特别是人。
具体实施方式
下面的实施例用来进一步说明本发明，但是这并不意味着对本发明的任何限制。实施例1 7-羟甲基喜树碱
在配有温度计和搅拌的100mL三口圆底烧瓶中加入15mL甲醇和12.5mL水，在冰浴冷却下加入6.5mL浓硫酸，然后加入500mg(1.43mmol)喜树碱和400mg(1.43mmol)硫酸亚铁七水合物，混合物搅拌5分钟后，控制温度在5C以下，缓慢滴加0.24mL(0.21mmol)30％的过氧化氢，溶液颜色逐渐变深，反应物在室温搅拌10小时后，倒入200mL水中，水相放置过夜，过滤，固体水洗，干燥得到黄色固体500mg，粗品用DMF-乙酸乙酯重结晶得到345mg 7-羟甲基喜树碱，产率：63.7％，mp 274-276℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.17(t，2H，Ar-H)，7.84(t，1H，Ar-H)，7.69(t，1H，Ar-H)，7.33(s，1H，Ar-H)，6.49(s，1H，20-OH)，5.79(m，1H，7-OH)，5.41d(d，4H，H17，7-CH2)，5.26(d，2H，H5)，1.86(m，2H，18-CH2)，0.87(t，3H，19-CH3)。实施例2 20-O-(4-氟苯氧乙酰基)-7-(4-氟苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-010904
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.028mmol)7-羟甲基喜树碱，13.5mg(0.075mmol)4-氟苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到12mg 20-O-(4-氟苯氧乙酰基)-7-(4-氟苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：67.8％，mp 180-183℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.33(d，1H，Ar-H)，8.12(d，1H，Ar-H)，7.92(t，1H，Ar-H)，7.74(t，1H，Ar-H)，7.20(s，1H，Ar-H)，7.04-6.82(m，8H，Ar-H)，5.87(s，2H，7-CH2)，5.72(d，1H，H17)，5.48(d，1H，H17)，5.47(s，2H，H5)，4.85(d，2H，20-OCH2CO)，4.61(s，2H，7-OCH2CO)，2.26(m，2H，18-CH2)，1.02(t，3H，19-CH3)。实施例3 20-O-(4-氯苯氧乙酰基)-7-(4-氯苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-010903
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.028mmol)7-羟甲基喜树碱，18mg(0.096mmol)4-氯苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到12mg 20-O-(4-氯苯氧乙酰基)-7-(4-氯苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：91.4％，mp 195-197℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.35(d，1H，Ar-H)，8.12(d，1H，Ar-H)，7.95(t，1H，Ar-H)，7.75(t，1H，Ar-H)，7.20(s，1H，Ar-H)，7.40-6.82(m，9H，Ar-H)，5.86(s，2H，7-CH2)，5.72(d，1H，H1 7)，5.49(s，2H，H5)，5.48(d，1H，H17)，4.85(d，2H，20-OCH2CO)，4.74(s，2H，7-OCH2CO)，2.26(m，2H，18-CH2)，1.02(t，3H，19-CH3)。实施例4 20-O-(4-溴苯氧乙酰基)-7-(4-溴苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-010905
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，17mg(0.073mmol)4-溴苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到9mg 20-O-(4-溴苯氧乙酰基)-7-(4-溴苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：43.0％，mp 205-207℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.32(d，1H，Ar-H)，8.06(d，1H，Ar-H)，7.92(t，1H，Ar-H)，7.69(t，1H，Ar-H)，7.37(d，2H，Ar-H)，7.28(d，2H，Ar-H)，7.20(s，1H，Ar-H)，6.84(d，2H，Ar-H)，6.75(d，2H，Ar-H)，5.83(s，2H，7-CH2)，5.69(d，1H，H17)，5.46(s，2H，H5)，5.40(d，1H，H17)，4.85(d，2H，20-OCH2CO)，4.71(s，2H，7-OCH2CO)，2.21(m，2H，18-CH2)，0.97(t，3H，19-CH3)。实施例5 20-O-(4-碘苯氧乙酰基)-7-(4-碘苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-011106
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，17mg(0.073mmol)4-碘苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到9mg 20-O-(4-碘苯氧乙酰基)-7-(4-碘苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：38.6％，mp 220-222℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.29(d，1H，Ar-H)，8.03(d，1H，Ar-H)，7.89(t，1H，Ar-H)，7.67(t，1H，Ar-H)，7.56(d，2H，Ar-H)，7.42(d，2H，Ar-H)，7.19(s，1H，Ar-H)，6.72(d，2H，Ar-H)，6.62(d，2H，Ar-H)，5.79(s，2H，7-CH2)，5.67(d，1H，H17)，5.45(s，2H，H5)，5.44(d，1H，H17)，4.81(d，2H，20-OCH2CO)，4.68(s，2H，7-OCH2CO)，2.20(m，2H，18-CH2)，0.98(t，3H，19-CH3)。实施例6 20-O-苯氧乙酰基-7-苯氧乙酰氧甲基喜树碱-010906
在10mL圆底烧瓶中加入12mg(0.031mmol)7-羟甲基喜树碱，16mg(0.10mmol)苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到8mg20-O-苯氧乙酰基-7-苯氧乙酰氧甲基喜树碱，产率：40.0％，mp203-206℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.31(d，1H，Ar-H)，8.11(d，1H，Ar-H)，7.90(t，1H，Ar-H)，7.71-(t，1H，Ar-H)，7.32-7.18(m，5H，Ar-H)，6.98-6.85(m，6H，Ar-H)，5.84(s，2H，7-CH2)，5.69(d，1H，H17)，5.46(s，2H，H5)，5.44(d，1H，H17)，4.86(d，2H，20-OCH2CO)，4.73(s，2H，7-OCH2CO)，2.22(m，2H，18-CH2)，0.99(t，3H，19-CH3)。实施例7 20-O-(4-甲氧基苯氧乙酰基)-7-(4-甲氧基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-010907
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，17mg(0.078mmol)4-甲氧基苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到15mg 20-O-(4-甲氧基苯氧乙酰基)-7-(4-甲氧基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：83.3％，mp 202-204℃(分解)。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.26(d，1H，Ar-H)，8.08(d，1H，Ar-H)，7.86(t，1H，Ar-H)，7.69(t，1H，Ar-H)，7.20(s，1H，Ar-H)，6.89-6.69(m，8H，Ar-H)，5.81(s，2H，7-CH2)，5.67(d，1H，H17)，5.45(s，2H，H5)，5.43(d，1H，H17)，4.78(d，2H，20-OCH2CO)，4.67(s，2H，7-OCH2CO)，3.71(s，3H，OCH3)，3.62(s，3H，OCH3)，2.26(m，2H，18-CH2)，0.97(t，3H，19-CH3)。实施例8 20-O-(4-硝基苯氧乙酰基)-7-(4-硝基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-010910
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，15mg(0.078mmol)4-硝基苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到11mg 20-O-(4-硝基苯氧乙酰基)-7-(4-硝基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：58％，mp 180-182℃(分解)。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.26(d，1H，Ar-H)，8.14(d，2H，Ar-H)，8.06(m，3H，Ar-H)，7.86(t，1H，Ar-H)，7.69(t，1H，Ar-H)，7.16(s，1H，Ar-H)，6.99(d，2H，Ar-H)，6.91(d，2H，Ar-H)，5.84(s，2H，7-CH2)，5.67(d，1H，H17)，5.45(s，2H，H5)，5.43(d，1H，H17)，4.97(d，2H，20-OCH2CO)，4.81(s，2H，7-OCH2CO)，2.21(m，2H，18-CH2)，0.98(t，3H，19-CH3)。实施例9 20-O-(2-硝基苯氧乙酰基)-7-(2-硝基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-011010
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，15mg(0.078mmol)2-硝基苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到11mg 20-O-(2-硝基苯氧乙酰基)-7-(2-硝基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：58％，mp 188-190℃。1NMR(CDCl3，300MHz)：δ8.27(d，1H，Ar-H)，8.09(d，2H，Ar-H)，7.83(m，2H，Ar-H)，7.70(t，1H，Ar-H)，7.55(t，1H，Ar-H)，7.32(t，1H，Ar-H)，7.29(s，1H，Ar-H)，7.08(m，4H，Ar-H)，6.81(d，1H，Ar-H)，5.80(s，2H，7-CH2)，5.66(d，1H，H17)，5.44(s，2H，H5)，5.42(d，1H，H17)，5.03(q，2H，20-OCH2CO)，4.83(s，2H，7-OCH2CO)，2.21(m，2H，18-CH2)，0.98(t，3H，19-CH3)。实施例10 20-O-(4-异丙基苯氧乙酰基)-7-(4-异丙基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-010913
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，15mg(0.077mmol)4-异丙基苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂∶氯仿-甲醇97∶3)得到9.0mg 20-O-(4-异丙基苯氧乙酰基)-7-(4-异丙基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：47.4％，mp 193-195℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.28(d，1H，Ar-H)，8.09(d，2H，Ar-H)，7.86(t，1H，Ar-H)，7.69(t，1H，Ar-H)，7.29(s，1H，Ar-H)，7.07(t，4H，Ar-H)，6.83(q，4H，Ar-H)，5.84(s，2H，7-CH2)，5.66(d，1H，H17)，5.49(s，2H，H5)，5.44(d，1H，H17)，4.85(t，2H，20-OCH2CO)，4.70(s，2H，7-OCH2CO)，2.79(m，2H，Ar-CH)，2.21(m，2H，18-CH2)，1.80(d，6H，CH3)，1.09(q，6H，CH3)，0.98(t，3H，19-CH3)。实施例11 20-O-(2，4-二甲基苯氧乙酰基)-7-(2，4-二甲基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-010911
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，18mg(0.10mmol)4-二甲基苯苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到9.0mg 20-O-(2，4-二甲基苯氧乙酰基)-7-(2，4-二甲基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：47.4％，mp 105-107℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.28(d，1H，Ar-H)，8.10(d，2H，Ar-H)，7.86(t，1H，Ar-H)，7.68(t，1H，Ar-H)，7.29(s，1H，Ar-H)，6.91(m，3H，Ar-H)，6.68(t，2H，Ar-H)，6.43(d，1H，Ar-H)，5.78(s，2H，7-CH2)，5.66(d，1H，H17)，5.43(d，1H，H17)，5.44(s，2H，H5)，4.80(d，2H，20-OCH2CO)，4.68(s，2H，7-OCH2CO)，2.14(m，14H，18-CH2和Ar-CH3)，0.99(t，3H，19-CH3)。实施例12 20-O-(2-碘-5-甲基吡啶基-3-氧乙酰基)-7-(2-碘-5-甲基吡啶基-3-氧乙酰氧甲基)喜树碱-011008
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，19mg(0.077mmol)2-碘-5-甲基吡啶基-3-氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到10mg 20-O-(2-碘-5-甲基吡啶基-3-氧乙酰基)-7-(2-碘-5-甲基吡啶基-3-氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：47.6％，mp 120-122℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.28(d，1H，Ar-H)，8.07(d，2H，Ar-H)，7.86(t，1H，Ar-H)，7.26(s，1H，Ar-H)，7.02(q，2H，Py-H)，6.73(d，1H，Py-H)，6.65(d，1H，Py-H)，5.73(s，2H，7-CH2)，5.67(d，1H，H17)，，5.47(s，2H，H5)，5.42(d，1H，H17)，4.90(q，2H，20-OCH2CO)，4.73(s，2H，7-OCH2CO)，2.44(s，3H，Py-CH3)，2.41(s，3H，Py-CH3)，2.21(m，2H，CH2)，0.99(t，3H，19-CH3)。实施例13 20-O-苯氧丙酰基-7-苯氧丙酰氧甲基喜树碱-011012
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mm0l)7-羟甲基喜树碱，14mg(0.078mmol)苯氧丙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到4.0mg20-O-苯氧丙酰基-7-苯氧丙酰氧甲基喜树碱碱，产率：22.2％，mp60-62℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.29(t，1H，Ar-H)，8.16(t，1H，Ar-H)，7.83(q，1H，Ar-H)，7.68(t，1H，Ar-H)，7.40(s，1H，Ar-H)，7.25-6.73(m，10H，Ar-H)，5.76(s，2H，7-CH2)，5.67(d，1H，H17)，5.47(d，1H，H17)，5.41(m，2H，H5)，4.24(t，4H，Ar-OCH2)，2.90(t，4H，CH2CO)，2.20(m，18-CH2)，0.98(t，3H，19-CH3)。实施例14 7-(3-氟-4-氰基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-011113
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，13mg(0.065mmol)3-氟-4-氰基苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和2mL DMF。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到7.0mg 7-(3-氟-4-氰基苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：48.6％，mp160-162℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.26(d，1H，Ar-H)，8.01(d，2H，Ar-H)，7.86(t，1H，Ar-H)，7.68(m，2H，Ar-H)，7.55(q，1H，Ar-H)，7.42(t，3H，Ar-H)，6.75(m，2H，Ar-H和20-OH)，5.85(s，2H，7-CH2)，5.72(d，1H，H17)，5.47(s，2H，H5)，5.34(d，1H，H17)，4.76(d，2H，7-OCH2CO)，1.90(m，2H，18-CH2)，1.04(t，3H，19-CH3)。实施例15 7-(3-氯-4-溴苯氧乙酰氧甲基)喜树碱-011112
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，17mg(0.065mmol)3-氯-4-溴苯氧乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和2mL DMF。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到10.0mg 7-(3-氯-4-溴苯氧乙酰氧甲基)喜树碱，产率：61.7％，mp235-238℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.25(d，1H，Ar-H)，8.02(d，2H，Ar-H)，7.85(t，1H，Ar-H)，7.67(m，2H，Ar-H)，7.33(d，1H，Ar-H)，6.92(d，1H，Ar-H)，6.62(d，2H，Ar-H)，5.79(s，2H，7-CH2)，5.74(d，1H，H17)，5.47(s，2H，H5)，5.35(d，1H，H17)，4.68(d，2H，7-OCH2CO)，1.90(m，2H，18-CH2)，1.02(t，3H，19-CH3)。实施例16 7-(胸腺嘧啶-1-乙酰氧甲基)喜树碱-020130
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，17mg(0.065mmol)胸腺嘧啶-1-乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和2mL DMF。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇95∶5)得到9.0mg 7-(胸腺嘧啶-1-乙酰氧甲基)喜树碱，产率：63.8％，mp198-200℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.29(d，1H，Ar-H)，8.08(d，2H，Ar-H)，7.87(t，1H，Ar-H)，7.73(t，1H，Ar-H)，7.67(s，1H，Ar-H)，6.91(s，1H，thymine-H)，5.84(s，2H，7-CH2)，5.73(d，1H，H17)，5.47(s，2H，H5)，5.34(d，1H，H17)，4.53(s，2H，7-NCH2CO)，1.92(s，3H，thymine-CH3)，1.82(m，2H，18-CH2)，1.04(t，3H，19-CH3)。实施例17 20-O-(3，4，5-三甲氧基苯乙酰基)-7-(3，4，5-三甲氧基苯乙酰氧甲基)喜树碱-020603
在10mL圆底烧瓶中加入10mg(0.026mmol)7-羟甲基喜树碱，18mg(0.078mmol)3，4，5-三甲氧基苯乙酸，30mg(0.15mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，2mg(0.019mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和3mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到9.0mg 20-O-(3，4，5-三甲氧基苯乙酰基)-7-(3，4，5-三甲氧基苯乙酰氧甲基)喜树碱，产率：68.4％，mp 98-100℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.30(d，1H，Ar-H)，8.06(d，2H，Ar-H)，7.86(t，1H，Ar-H)，7.68(t，1H，Ar-H)，7.18(s，1H，Ar-H)，6.52(s，2H，Ar-H)，6.38(s，2H，Ar-H)，6.43(d，1H，Ar-H)，5.71(s，2H，7-CH2)，5.65(d，1H，H17)，5.44(q，2H，H5)，5.40(d，1H，H17)，3.85-3.64(m，22H，OCH3，ArCH2CO)，2.20(m，2H，18-CH2)，0.99(t，3H，19-CH3)。实施例18 20-O-(N-特丁氧羰基甘氨酰基)-7-(N-特丁氧羰基甘氨酰氧甲基)喜树碱-011015
在10mL圆底烧瓶中加入30mg(0.079mmol)7-羟甲基喜树碱，42mg(0.237mmol)N-特丁氧羰基甘氨酸，50mg(0.26mmol)1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)，5mg(0.05mmol)4-二甲胺基吡啶(DMAP)和5mL二氯甲烷。反应混和物在室温条件下搅拌12小时后，用20mL氯仿稀释，氯仿层分别用水(15mL)，饱和碳酸氢钠溶液(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤除去硫酸镁后，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析分离(洗脱剂：氯仿-甲醇97∶3)得到22mg 20-O-(N-特丁氧羰基甘氨酰基)-7-(N-特丁氧羰基甘氨酰氧甲基)喜树碱，产率：40.7％，mp 116-118℃。1HNMR(CDCl3，300MHz)：δ8.27(d，1H，Ar-H)，8.12(d，2H，Ar-H)，7.85(t，1H，Ar-H)，7.73(t，1H，Ar-H)，7.30(s，1H，Ar-H)，5.76(s，2H，7-CH2)，5.66(d，1H，H17)，5.44(d，2H，H5)，5.42(d，1H，H17)，5.03(bs，2H，CONH)，3.99(m，4H，NHCH2CO)，2.19(m，2H，18-CH2)，1.41(s，18H，C(CH3)3)，0.98(t，3H，19-CH3)。药理实验
实验例1 MTT法人癌细胞杀伤试验
药品及试剂：DMSO分析纯；RPMI1640为GIBCO产品；小牛血清为北京军区兽医防治中心产品。
仪器：BIORAD550型酶标仪。
MTT法测定：收集生长良好的肿瘤细胞，用含10％小牛血清的RPMI1640培养基配制成1×10-4/mL细胞悬液，于96孔培养板内接种，每空100μL(含1000个肿瘤细胞)，置37℃，5％CO2温箱内培养24小时后加药，实验设空白对照及溶剂对照，受试样品设4个浓度，每浓度3个平行孔，置37℃，5％CO2温箱内培养4天。弃去培养液，每孔加入MTT溶液(0.4mg/mL，RPMI1640配制)100μL，37℃孵育4小时。弃去上清液，每孔加入MTT溶液150μL，溶解颗粒，轻度振荡后，用550型酶标仪在检测波长540nm，参考波长450nm下测定OD值。
结果计算：以药物的不同浓度及对细胞的抑制率作图可得到剂量反应曲线，从中求出半数抑制浓度(IC50)。
本发明衍生物对人肿瘤细胞株的抗肿瘤活性结果见表1.表1.本发明衍生物对人肿瘤细胞株的抗肿瘤活性结果
| 化合物 | IC50(μmol/L) | ||||||||
| KB | KB/VCR | A2780 | A549 | A549/Taxol | HCT-8 | Bel7402 | EC-304 | ||
| 喜树碱 | 0.009 | 0.009 | 0.007 | 0.008 | 0.009 | 0.007 | 0.007 | 0.033 | |
| 伊立替康 | ＞1.0 | ＞1.0 | ＞1.0 | ＞1.0 | ＞1.0 | ＞1.0 | ＞1.0 | ＞1.0 | |
| 1 | 010903 | 0.071 | 0.072 | 0.068 | 0.290 | 0.076 | 0.068 | 0.054 | 0.549 |
| 2 | 010904 | 0.072 | ＞1.0 | 0.058 | 0.293 | ＞1.0 | 0.052 | 0.026 | 0.337 |
| 3 | 010905 | 0.068 | 0.084 | 0.058 | 0.258 | 0.080 | 0.055 | 0.056 | 0.437 |
| 4 | 010906 | 0.019 | 0.066 | 0.046 | 0.094 | 0.071 | 0.044 | 0.031 | 0.100 |
| 5 | 010907 | 0.310 | 0.267 | 0.071 | 0.348 | ND | 0.076 | 0.084 | 0.237 |
| 6 | 010910 | 0.280 | 0.256 | 0.053 | 0.456 | ND | 0.007 | 0.009 | 0.369 |
| 7 | 010913 | 0.067 | 0.058 | 0.036 | 0.126 | ND | 0.059 | 0.065 | 0.046 |
| 8 | 011008 | 0.065 | 0.009 | 0.040 | ND | ND | 0.034 | 0.043 | 0.043 |
| 9 | 011010 | 0.009 | 0.006 | 0.007 | ND | ND | 0.008 | 0.007 | 0.008 |
| 10 | 011012 | 0.057 | 0.073 | 0.071 | ND | ND | 0.055 | 0.059 | 0.069 |
| 11 | 011015 | 0.069 | 0.059 | 0.066 | ND | ND | 0.057 | 0.063 | 0.046 |
| 12 | 010911 | 0.074 | 0.068 | 0.064 | ND | ND | 0.058 | 0.067 | 0.055 |
| 13 | 011106 | 0.064 | 0.400 | ND | 0.039 | 0.077 | 0.081 | 0.086 | |
| 14 | 011112 | 0.076 | 0.473 | 0.070 | 0.084 | ND | 0.068 | 0.075 | ND |
| 15 | 011113 | ＜0.001 | 0.437 | ＜0.001 | 0.008 | ND | ＜0.001 | ＜0.001 | ND |
| 16 | 020130 | 0.009 | 0.596 | 0.073 | 0.073 | ND | 0.027 | 0.050 | ND |
| 17 | 020603 | 0.078 | 0.947 | 0.068 | 0.098 | ND | 0.076 | 0.082 | ND |
KB：人口腔癌细胞；KB/VCR：人耐药口腔癌细胞；A2780：人卵巢癌细胞；A549：人肺腺癌细胞；A549/Taxol：对taxol耐药的人肺腺癌细胞；HCT-8：人结肠癌细胞；Bel7402：人肝癌细胞；EC-304：人血管内皮正常细胞。：ND：未试验
从体外抗肿瘤活性筛选来看，本发明化合物的半数抑制浓度均小于伊立替康，说明其活性优于伊立替康。化合物011010对KB、A2780、Bel7402的半数抑制浓度和喜树碱相当，对EC-304的半数抑制浓度小于喜树碱，说明其体外毒性小于喜树碱。化合物011113对KB、A2780、HCT-8、Bel7402的半数抑制浓度小于喜树碱，对A549的半数抑制浓度和喜树碱相当。实验例2 喜树碱衍生物在小鼠体内毒性试验
动物：ICR小鼠，雄性，18-22g，购自维通利华实验动物技术有限责任公司。
表2喜树碱衍生物在小鼠体内毒性试验结果(ip)
| 化合物 | 最大耐受剂量(MTD，mg/kg) |
| 喜树碱 | 12 |
| 拓扑替康 | ＜15 |
| 010903 | ＞60 |
| 011010 | ＞60 |
| 010905 | ＞60 |
本发明化合物010903、011010、010905的体内毒性试验的结果表明其最大耐受剂量大于60mg/kg，表明其毒性小于喜树碱、拓扑替康。
Claims (11)
1、如通式(I)所示的化合物
R9选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，CH2NR12R13，其中R12和R13分别是氢、1-6碳原子烷基、芳基取代烷基、羟基取代低级烷基、氨基取代低级烷基、单或双取代氨基低级烷基、环氨基，CH2R14，其中R14为低级烷氧基、氰基，NR15R16，其中R15，R16分别是低级烷基、芳基、二烷氨烷基、氨基低级烷基、羟基低级烷基；
R10选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，氨基取代低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，氨基低级烷基，羟基低级烷基，[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰氧基；
R9能和R10成环；
R11选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基；
R10能和R11成环；其特征在于，R’任意的选自H、COR，R任意的选自
其中n＝1-5，R2选自氢，单取代或多取代低级烷基，卤素，低级烷氧基，羟基，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，低级烷氧羰基，低级烷羰氧基，低级烷羰氨基；
其中n＝1-5，R3选自氢，低级烷基，卤素。
2根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物包括以下通式(Ia)所示的化合物：
其中，
R9选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，CH2NR12R13，其中R12和R13分别是氢、1-6碳原子烷基、芳基取代烷基、羟基取代低级烷基、氨基取代低级烷基、单或双取代氨基低级烷基、环氨基，CH2R14，其中R14为低级烷氧基、氰基，NR15R16，其中R15，R16分别是低级烷基、芳基、二烷氨烷基、氨基低级烷基、羟基低级烷基；
R10选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，氨基取代低级烷氧基，羟基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基，氨基低级烷基，羟基低级烷基，[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]羰氧基；
R9能和R10成环；
R11选自氢，卤素，低级烷基，低级烷氧基，RCOO，氰基，醛基，硝基，氨基，卤代低级烷基，羧基，低级烷氧羰基，低级烷氧羰氨基；
R10能和R11成环；R”任意的选自
3、根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物还包括其药效学上可接受的盐、盐的水合物、酯或前体药物。
4、制备如权利要求1-3的任一所述的化合物的方法，其特征在于，7-羟甲基、20位羟基的喜树碱或其类似物和相应的羧酸或酰卤缩合反应，制备相应的化合物。
5、根据权利要求4的制备方法，其特征在于，所述的缩合反应所用的缩合试剂包括1，3二环己基碳二亚胺(DCC)、二吡啶碳酸酯(2-DPC)、1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)、1，3-二异丙基碳酰亚胺(DIPC)、4-吡咯烷基吡啶。
6、根据权利要求4的制备方法，其特征在于，所述的缩合反应所用的催化剂是三级胺。
7、根据权利要求6的制备方法，其特征在于，所述的三级胺包括4-二甲氨基吡啶(DMAP)，4-吡咯烷基吡啶。
8、根据权利要求4的制备方法，其特征在于，所述的缩合反应所用的有机溶剂是二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺。
9、一种药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如权利要求1-3所述的任一化合物，以及药效学上可接受的载体。
10、根据权利要求9的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物可以是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。
11、如权利要求1-3任一化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20081217 |