CN104610233A - 具有更高蛋白激酶g抑制活性的化合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一类具有更高蛋白激酶G(PKG)抑制活性的式Ⅰ的化合物及其药学上可接受的盐，包含所述新化合物的药物组合物、以及所述新化合物在治疗疼痛、尤其是治疗慢性疼痛中应用。还公开了该化合物的制备方法及新的中间体。其中R1、R2相同或不同，选自由卤素(如，F或Cl)、C1-C6的烷氧基、C1-C6的烷基、C2-C6的烯基和C2-C6的炔基组成的组；R3为端基，选自由H、卤素、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基组成的组；n为重复单元数目，是0-15的整数。

Description

具有更高蛋白激酶G抑制活性的化合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种新的化合物及其制备方法、药物组合物和应用。具体地，本发明涉及一种具有高的蛋白激酶G(PKG)抑制活性的新化合物及其制备方法、应用以及包含所述新化合物的药物组合物。此新化合物用于治疗疼痛、尤其是用于治疗慢性疼痛。
背景技术
疼痛是中枢和外周两大神经系统沟通交流的结果。虽然中枢和外周这两大神经系统共同作用产生人们的主观体验，但它们的生理结构和功能不同。
撞击特定疼痛受体产生的疼痛刺激沿着居于背根神经节(外周神经系统部分)的初级伤害性感觉神经元传播，然后进入脊髓(中枢神经系统部分)传播，在脊髓将信号转发到二阶神经元，传播到脊髓的对侧，最后将信号传播到脑的更高级中枢，在那里感知为疼痛。
对机械、热和化学刺激产生反应的外周疼痛受体位于初级伤害性感觉神经元的神经末梢上。这些受体的激活可产生急性或慢性疼痛。急性疼痛趋于剧烈、不扩散，通常沿δ感觉神经元的薄髓鞘的轴突传播。慢性疼痛通常钝化、扩散，沿C-型伤害性感觉神经元的非髓鞘轴突传播。
在疼痛通路的不同阶段，疼痛感知可能会改变。例如，给外周受体使用局部麻醉药可消除疼痛刺激。众说周知，如类罂粟碱的药物在疼痛通路的中枢神经系统阶段起阻碍作用，而非甾体抗炎药在外周神经系统阶段起阻碍作用。非原发性脊髓损伤的慢性疼痛感知通常不仅与外周疼痛受体敏化有关，还跟二阶神经元的兴奋性改变有关，具有外周和中枢神经系统两种组件。外周和中枢两种组件分别调节“初级”和“次级”疼敏。在次级疼敏中，中枢神经系统中的二阶神经元基因表达改变，引起“中枢致敏”或“脊髓疼敏”现象。脊髓的N-甲基-D-天冬氨酸(“NMDA”)受体在此过程中起了重要作用。无外周神经系统活化的脊髓损伤也能产生脊髓疼敏，导致中枢疼痛综合征。中枢神经性疼痛与CREB转录因子的磷酸化有关。
慢性疼痛始于外周，由神经损伤(“神经性疼痛”)或感染引起，两种原因导致的疼痛是抵制有效治疗的主要临床问题。在人和哺乳动物模型中，神经损伤后的持续疼痛与初级感觉神经元的长期过度兴奋(LTH)有关，这些初级感觉神经元的轴突位于受损神经节上。由于对受损部位的疼痛感觉神经元细胞体和轴突电刺激敏化的不断增加，长期过度兴奋呈现出来。这些变化导致在静止或无伤害刺激时从感觉神经元中释放动作电位，引起中枢神经系统的高阶神经元持续激发、脊柱疼敏和持续疼痛。
美国专利文献US6476007直指中枢神经系统炎性疼敏的机理，没有考虑外周神经系统的作用。瞄准中枢神经系统的疼痛通路具有许多重大弊端。首先，脊髓中的神经元回路非常复杂，据此预测缓解疼痛的药物可能具有相反的效果。其次，血脑屏障将中枢神经系统的神经元与身体其它部分隔离，这是通常阻止大量治疗药物达到靶点的巨大障碍。第三，穿透血脑屏障的药物进入整个中枢神经系统，导致严重的毒副作用。而外周神经系统就没有这些障碍，背根神经节(DRG)的结构特性显示，可直指初级感觉神经元的特定种群进行治疗。第四，只有当来自外周的信号传至脑的高级中枢才能感知到疼痛，而背根神经节(DRG)的神经元是这些信号的入口。
活性PKG在疼痛抑制中起决定作用(见WO2006/102267)。外周神经系统受到损伤后，一氧化氮合酶(“NOS”)活性增加，导致一氧化氮(“NO”)产量增多。NO活化可溶性鸟苷环化酶(“sGC”)，从而增加环磷酸鸟苷(“cGMP”)水平，导致在C-型和A-δ型痛觉神经元的轴突中蛋白激酶G(“PKG”)活化。活性PKG然后从损伤位点沿轴突反向传播至神经元细胞体，丝裂原活化蛋白激酶-erk(“MAPKerk”)。然后，活性MAPKerk转移入细胞核，调整疼痛相关基因的表达，这些基因调节LTH的出现。因此抑制PKG可缓解疼痛，减少涉及伤害感受蛋白质的mRNA(信使RNA)水平。
因此，本领域需要能够选择性抑制外周神经系统中PKG活性的化合物。对活性酶的抑制不仅可阻止它从外周神经系统传播，还可阻断它在细胞体内的活性。美国专利申请US2008/0176920述及抑制PKG活化形式的化合物，以及它们在缓解疼痛，特别是慢性疼痛综合征中的应用。在该专利申请中提到的活性较高的化合物为化合物46。我们按照美国专利申请US2008/0176920的方法制备出了化合物46及其类似物JK-02A，并进行了药物活性研究，研究结果显示该类化合物水溶性不够好、PKG抑制活性不够高，因此我们设计了一类水溶性更好、抑制活性更高的化合物。
发明内容
鉴于美国专利申请US2008/0176920中设计的化合物46水溶性较差、PKG抑制活性不够高，本发明对化合物46进行结构改造，添加了水溶性较高的低分子聚乙二醇片段，从而使其水溶性明显增加、镇痛效果显著提高。
因此，一方面，本发明提供了一种结构如式Ⅰ的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R1、R2相同或不同，各自独立地选自由卤素、C1-C6的烷氧基、C1-C6的烷基、C2-C6的烯基和C2-C6的炔基组成的组；R3选自由H、卤素、取代或未被取代的C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C2-C6的烯基、C2-C6的炔基、芳基和杂芳基组成的组；n为0-15的整数。
该化合物提供了更高的水溶性，其对蛋白激酶G具有更高的抑制活性，从而提供了显著增加的镇痛效果。
另一方面，本发明提供了式Ⅰ的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗疼痛的药物中的应用。
另一方面，本发明还提供了一种包括式Ⅰ的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物。
再一方面，本发明提供了一种制备式Ⅰ的化合物或其药学上可接受的盐的方法。
以上被描述的和其他的特征通过下面的详细描述更加清楚。
附图说明
图1A和图1B示出各测试化合物低剂量治疗的Von Frey纤毛试验平均值。
图2A和图2B示出各测试化合物高剂量治疗的Von Frey纤毛试验平均值。
图3示出本发明的化合物JK-02H的Von Frey纤毛试验的剂量依赖性。
图4A和图4B示出各测试化合物低剂量治疗的负重试验平均值。
图5A和图5B示出各测试化合物高剂量治疗的负重试验平均值。
图6示出本发明的化合物JK-02H的负重试验的剂量依赖性。
具体实施方式
本申请的发明人发现，将US2008/0176920所公开的化合物及其类似结构的JK-02A化合物6位的—OCH2CH2CH3替换为低分子聚乙二醇片断后，化合物的水溶性提高，同时显示对蛋白激酶G具有更高的抑制活性，表明镇痛效果显著提高。本申请的发明人还合成了具有类似结构的化合物，研究结果表明这些化合物的水溶性较其母体化合物均有明显提高，这将对其药理作用的提高有正面影响。
因此，本发明提供了用于治疗疼痛的具有更高PKG抑制活性的通式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，
其中R1、R2相同或不同，各自独立地选自由卤素(如，F或Cl)、C1-C6的烷氧基、C1-C6的烷基、C2-C6的烯基和C2-C6的炔基组成的组，优选地，R1、R2各自独立地选自由卤素、C1-C6的烷氧基组成的组，更优选地，R1为F、R2为F或OCH3；R3为端基，选自由H、卤素、取代或未取代的C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C2-C6的烯基、C2-C6的炔基、芳基和杂芳基组成的组，优选地，R3选自由H、取代或未取代的C1-C6的烷基组成的组，更优选地，R3选自由H、取代或未取代的C1-C3的烷基组成的组，最优选地，R3为H、甲基或丙基；n为重复单元数目，为0-15的整数，优选地，n为1-10的整数，更优选地，n为1-6的整数。
在本发明的一个优选的实施方案中，R1为氟原子，R2为甲氧基。优选的化合物具有式Ⅱ的结构
其中R3为端基，选自由H、卤素、取代或未取代的C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C2-C6的烯基、C2-C6的炔基、芳基和杂芳基组成的组，优选地，R3选自由H、取代或未取代的C1-C6的烷基组成的组，更优选地，R3选自由H、取代或未取代的C1-C3的烷基组成的组，最优选地，R3为H、甲基或丙基。
n为重复单元数目，为0-15的整数，优选地，n为1-10的整数，更优选地，n为1-6的整数。
在本发明的另一个优选的实施方案中，R1和R2均为氟原子。优选的化合物具有式Ⅲ的结构
其中R3为端基，选自由H、卤素、取代或未取代的C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C2-C6的烯基、C2-C6的炔基、芳基和杂芳基组成的组，优选地，R3选自由H、取代或未取代的C1-C6的烷基组成的组，更优选地，R3选自由H、取代或未取代的C1-C3的烷基组成的组，最优选地，R3为H、甲基或丙基。
n为重复单元数目，为0-15的整数，优选地，n为1-10的整数，更优选地，n为1-6的整数。
具体地，本发明提供了如下优选的化合物：
这些优选化合物的水溶性较化合物46均有大幅度提高，分别为JK-02H提高5倍、JK-03M提高4倍、JK-06H提高10倍、JK-07M提高8倍、JK-02P提高3倍。在弗氏完全佐剂(CFA)催生的大鼠痛觉过敏的疗效研究中，化合物JK-02H剂量为20mg/kg和5mg/kg时较空白溶媒均显示优异的抗痛觉过敏疗效；而化合物46仅在剂量为40mg/kg时才显示抗痛觉过敏疗效，在剂量为10mg/kg时几乎没有抗痛觉过敏疗效。
本领域技术人员应理解，本专利所公开的具有手性中心的化合物可以以旋光体和外消旋体存在，一些化合物可以显示多种晶型。本发明包括所公开化合物的任何外消旋体、旋光体、多晶型或立体异构体、或其混合物。
具体地，本发明提供了如下优选的具有手性中心的化合物：
本发明的另一方面提供了式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐在治疗疼痛中的用途。
本发明的新化合物可用于治疗各种疼痛，例如慢性疼痛、神经性疼痛、急性疼痛、癌痛、类风湿性关节性疼痛、偏头痛、内脏痛等。但所列未能尽述。本发明的新化合物可用作在全身麻醉和监控麻醉护理时使用的止痛药物。常常联合使用不同性质的药物，以达到维持麻醉状态(例如记忆缺失、痛觉缺失、肌肉松弛和镇静)所需的平衡作用。联合用药包括吸入麻醉剂、安眠药、抗焦虑药、神经肌肉阻滞剂和阿片样物质。
在化合物足够碱性以形成酸盐的情况下，可以以盐的形式使用所述化合物。可接受的盐是与生理学上可接受的有机酸加成盐，如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐、以及α-甘油磷酸盐等，还可与生理学上可接受的无机酸加成盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐、以及碳酸盐等。
药学上可接受的酸加成盐可以从无机酸和有机酸制备。从无机酸获得的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。从有机酸获得的盐包括乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
本发明化合物可以以不同的剂量和不同的时间来施用，这取决于如受试者的健康、年龄、体重和性别等情况。
本发明的另一方面提供了药物组合物，其包含治疗有效量的本发明的式Ⅰ化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
所述载体应被所给药的个体耐受且能将化合物递送至受侵害区域。
本专利描述的药物组合物的制剂可通过药学领域已知的任何方法来制备。通常此制备方法包括下述步骤：将活性成分与载体或一种或多种其它助剂组合，如有必要，可将产品包装成希望的单剂量或多剂量单元。除活性成分之外，药物组合物可进一步包括一种或多种其它的药物活性物质，或该药物组合物可以与一种或多种其它的药学活性物质同时或相继使用。
药物组合物可以以无菌可注射的水性或油性悬浮液或溶液的形式制备、包装或销售。此悬浮液或溶液可根据已知技术配制，可包括除活性成分之外的其它成分，如分散剂、润湿剂或悬浮剂等。此无菌可注射的制剂可使用无毒的稀释剂或溶液(如水或1,3-丁二醇)来制备。其它可接受的稀释剂和溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液、单甘油酯或二甘油酯等。
药物组合物的控制释放或持续释放制剂可使用常规技术来制备。活性成分的控制释放可由各种诱导因素如pH、温度、酶、水或其它生理条件或化合物来刺激。
包含本发明化合物的适宜药物组合物可以通过常规的方式给药，例如口服、局部给药、非胃肠道途径给药、口腔给药、鼻腔给药、阴道给药或直肠给药或通过吸入给药。为此，本发明的化合物可以通过现有技术中已知的方法被制备成各种形式，例如片剂、胶囊剂、水溶液或油溶液、混悬液、乳液、霜剂、软膏剂、凝胶、鼻腔喷雾剂、栓剂、很细的粉末剂或吸入用气雾剂，对于非胃肠道途径给药而言(包括静脉内给药、肌肉给药或输液)，可以使用灭菌水或油溶液或混悬液或灭菌乳剂。
本发明的另一方面提供一种治疗疼痛的方法，该方法包括给予改善疼痛有效量的根据式I的任何化合物或其药学上可接受的盐，或包含改善疼痛有效量的根据式I的任何化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体的药物组合物。
使用本发明的化合物或其药学上可接受的盐的治疗方法，可以包括哺乳动物疼痛的预防治疗，所述哺乳动物可以为人类。
本发明的另一方面提供了通式Ⅰ化合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
a)按照以下方案制备4-[(2-R1-3-R2-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3)
b)按照以下方案制备1-N-叔丁氧羰基-3,4-二氨基吡咯烷(中间体10)
c)按照以下方案制备1H-吲唑-6-羧酸(中间体13)
d)按照以下方案制备通式(Ⅰ)的化合物
其中X为卤素，优选Cl或Br。
具体地，本发明制备式I的化合物或其药学上可接受的盐的方法，包括：
（1）化合物3
与化合物14
在碱的存在下发生亲核取代反应，得到化合物15，
其中，X为氯、溴、碘原子；
所用的亲核取代反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自由乙腈、丙腈、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺、1,3二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)、二甲基亚砜(DMSO)、六甲基磷酰三胺(HMPA)、四氢呋喃、二氧六环、丙酮、甲苯、二甲苯、乙醚、丙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、正己烷、环己烷、甲基环己烷和正庚烷，及任意比例的组合组成的组；
所述碱选自由碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸钙、氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钙、氢化钠、氢化钾、氢化钙、金属钠、金属钾、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾、丁基锂、苯基锂、二异丙氨基锂(LDA)、六甲基二硅胺基锂(LiHMDS)、二甲胺、二乙胺、三乙胺、二异丙基乙胺、哌啶、吡啶、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、1,5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、四丁基氢氧化铵及其组合组成的组；
（2）所述化合物15在碱的存在下进行水解反应，得到化合物16，
其中，所述水解反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自由水、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、四氢呋喃、乙腈、丙腈、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺、1,3二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)、二甲基亚砜(DMSO)、六甲基磷酰三胺(HMPA)、四氢呋喃、二氧六环和丙酮，及任意比例的组合组成的组；
所述碱选自由氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钙、氢氧化钡、氢氧化铜、三氯化铝、三氯化硼、三溴化铝、三溴化硼、氰化钠、氰化钾、碳酸铯、碳酸铜、碘化锂、硼氢化钠、氢化钠、氢化钾、氢化钙及其组合组成的组；
（3）所述化合物16与化合物10
在缩合剂的存在下发生酰胺化反应，得到化合物17
其中，所述酰胺化反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自由甲苯、二甲苯、氯苯、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙醚、丙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、正己烷、环己烷、甲基环己烷和正庚烷，及任意比例的组合组成的组；
所述缩合剂选自由N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAt)、1-羟基苯并三氮唑(HOBt)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、双(2-氧代’-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)、1H-苯并三唑-1-氧基三(1-吡咯烷基)膦六氟磷酸盐(PyBOP)、1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)、N,N'-羰基二咪唑(CDI)、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺(EDC)、N,N'-N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)及其组合组成的组；
（4）所述化合物17与化合物13
在缩合剂的存在下发生酰胺化反应，得到化合物18
其中，所述酰胺化反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自由甲苯、二甲苯、氯苯、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙醚、丙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、正己烷、环己烷、甲基环己烷和正庚烷，及任意比例的组合组成的组；
所述缩合剂选自由N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAt)、1-羟基苯并三氮唑(HOBt)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、双(2-氧代’-3-噁唑烷基)次磷酰氯(BOP-Cl)、1H-苯并三唑-1-氧基三(1-吡咯烷基)膦六氟磷酸盐(PyBOP)、1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)、N,N'-羰基二咪唑(CDI)、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺(EDC)、N,N'-N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)及其组合组成的组；
（5）所述化合物18在脱保护试剂的存在下进行脱保护反应，得到式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述脱保护反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自由甲苯、二甲苯、氯苯、乙腈、四氢呋喃、二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙醚、丙醚、异丙醚、甲基叔丁基醚、正己烷、环己烷、甲基环己烷和正庚烷，及其任意比例的组合组成的组；
所述脱保护试剂选自由三氟乙酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酰氯、三氯化铝以及三氟化硼组成的组；
其中，Boc代表叔丁氧羰基保护基。
本发明还提供制备式I化合物的新的中间体，这些中间体为式15、式16、式17或式18的化合物。
定义
当在此使用时，术语“类似物”是在结构上与另一个相似，但并不必要是异构体的化合物。
当在此使用时，术语“有效量”表示足以产生所需效应的量。
当在此使用时，术语“抑制”是指化合物减少或阻止所描述功能的能力。
当在此使用时，术语“烷基”包括直链或支链烷基基团。
当在此使用时，术语“C1-C6烷基”表示具有1个至6个碳原子的直链或支链烷基。通常C1-C6烷基包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。
当在此使用时，术语“烯基”包括至少一个双键的烯式不饱和直链或支链基团。
当在此使用时，术语“C2-C6烯基”表示具有2个至6个碳原子和至少一个双键的烯式不饱和直链或支链基团。此类基团的例子包括但不限于：1-丙烯基、2-丙烯基、1,3-丁二烯基、1-丁烯基、己烯基、戊烯基等。
当在此使用时，术语“炔基”是指包括至少一个叁键的不饱和直链或支链基团。
当在此使用时，术语“C2-C6炔基”表示具有2个至6个碳原子和至少一个叁键的不饱和直链或支链基团。此类基团的例子包括但不限于：1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基等。
当在此使用时，术语“C3-C6环烷基”表示环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
当在此使用时，术语“芳基”是指具有一个或两个芳环的单环或双环C5-C10碳环体系，包括但不限于：苯基、苄基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。
当在此使用时，术语“杂芳基”是指具有1个或2个芳环(含有1至3个杂原子)的单环或双环的碳环体系，其中所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组。杂芳环的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡啶基等。
当在此使用时，术语“杂环基”是指含有1至3个杂原子的单环或双环碳环体系，其中所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组。
通常中间体没有完全进行结构确证，通常用质谱(MS)或核磁(NMR)分析评估其纯度。
当使用时以下缩写和定义具体如下含义：
CDCl3  为氘代氯仿
DCM    为二氯甲烷
DMF    为N,N-二甲基甲酰胺
HATU   为2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
DIPEA   为N,N-二异丙基乙胺
DMSO   为二甲基亚砜
NMR    为核磁共振
现在参考下述的实施例描述本发明。提供这些实施例仅为举例说明，绝不是限制本发明。
实施例中所用的3,4-二氟苯甲醚、3-氨基-4-甲基苯甲酸、3-氟-4-甲氧基苯酚、3,4-二甲氧基苯酚、2-氟-4-甲氧基苯甲醛、间甲苯甲醚、2-丁炔酸购自百灵威科技有限公司，六甘醇、七甘醇单甲醚购自嘉兴博美生物技术有限公司，对甲酰基苯甲酸甲酯购自上海邦成化工有限公司，3-甲基-4-甲氧基苯酚购自杭州尚杰化工有限公司，其余试剂均购自国药集团化学试剂北京有限公司。
实施例
实施例1：(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(5-羟基-3-氧杂戊烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基
-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-02H)的制备
4-[(2,3-二氟-6-甲氧基苯基)羟甲基]苯甲酸甲酯
向冷却至-78℃的3,4-二氟苯甲醚(20.0g,0.139mol)的无水四氢呋喃(500mL)溶液中加入2.5M的正丁基锂(61.6mL,0.154mol)，继续搅拌2h，加入对甲酰基苯甲酸甲酯(25.2g,0.154mol)的无水四氢呋喃(500mL)溶液，反应混合物在10h内缓慢升至室温。加入蒸馏水(1.0L)淬灭反应，用乙酸乙酯(3×1.0L)提取，混合有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色固体状中间体(1A)29.4g，收率68.6%。
MASS(ESI+)m/z=165(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.78(s,3H),3.88(s,3H),4.30(d,1H),6.36(d,1H),6.71(d,1H),7.23(d,1H),7.37(d,2H),7.94(d,2H)。
4-[(2,3-二氟-6-甲氧基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯
在室温氮气保护下向氯铬酸吡啶(PCC,26.2g,121.7mmol)的二氯甲烷(500mL)溶液中加入中间体(1A)(25g，81.1mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液，反应混合物继续在室温下搅拌4h。过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色固体状中间体(2A)20.8g，收率83.7%。
MASS(ESI+)m/z=309(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.69(s,3H),3.94(s,3H),6.95(d,1H),7.35(d,1H),7.82(d,2H),8.09(d,2H)。
4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯
在-78℃下向中间体(2A)(15g,49.0mmol)的二氯甲烷(500mL)溶液中加入三溴化硼
(24.5g,97.8mmol)，混合物搅拌2h，加入蒸馏水(250mL)，分液，水层用二氯甲烷(2×250mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色固体状中间体(3A)13.6g，收率95.0%。
MASS(ESI+)m/z=307(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.99(s,3H),6.89(d,1H),7.26(d,1H),7.74(d,2H),8.18(d,2H),11.29(s,1H)。
(3R,4R)-1-N-苄基-3,4-二羟基吡咯烷-2,6-二酮
向L-(+)-酒石酸(150.1g,1.0mol)的50%甲醇水溶液(200mL)中缓慢加入苄胺(107.2g,1.0mol)。反应混合物在50℃加热搅拌至澄清，减压浓缩。向残留物中加入二甲苯(3L)，反应混合物在油浴中回流分水8h。冷却后减压浓缩，用无水乙醇(2×150mL)带去痕量的二甲苯。向残留物中加入无水乙醇(700mL)，搅拌加热至回流，并回流保温30min。冷却至室温，过滤，滤饼用无水乙醇(3×100mL)洗涤，干燥得白色针状中间体((3R,4R)-4)153.9g，收率69.6%。合并滤液和洗液，浓缩至300mL，加入活性炭(30g)，回流搅拌30min，趁热过滤，滤饼用热乙醇(100mL)洗涤。合并滤液和洗液，静止冷却结晶，过滤，又得到中间体((3R,4R)-4)33.4g(15.1%)。两次共得到中间体((3R,4R)-4)187.3g，合计收率为84.7%。
MASS(ESI+)m/z=222(M+H)+。
1H NMR(400MHz,DSO-d6):4.38(d,2H),4.53(d,1H),4.58(d,1H),6.29(d,2H),7.24(m,2H),7.27(m,1H),7.33(m,2H)。
(3S,4S)-1-N-苄基-3,4-二羟基吡咯烷
在氮气保护下，向冷却至0℃后的LiAlH4(61.2g,1.6mol)的四氢呋喃(3.6L)溶液中慢慢加入中间体((3R,4R)-4)(132.7g,0.6mol)。反应混合物回流12h，冷却至室温，在冰水浴中滴加乙酸乙酯(144mL)。剧烈搅拌下依次滴入蒸馏水(61.2mL)、5%NaOH(61.2mL)和蒸馏水(183.6mL)。过滤，滤饼用热四氢呋喃(2×1.2L)洗涤。合并滤液和洗液，减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色油状物，经乙酸乙酯重结晶后得白色固体状中间体((3S,4S)-5)82.3g，收率71.0%。
MASS(ESI+)m/z=194(M+H)+。
1H NMR(400MHz,DSO-d6):2.30(dd,2H),2.74(dd,2H),3.46(d,1H),3.57(d,1H),3.84(m,2H),4.84(br s,2H),7.20-7.35(m,5H)。
(3S,4S)-3,4-二羟基吡咯烷
将中间体((3S,4S)-5)(77.3g,0.4mol)溶于80%的乙醇水溶液(2.4L)中，加入10%Pd/C(7.0g)，室温通氢(0.07MPa)反应2d。过滤除去催化剂，滤液减压浓缩，残留物用无水乙醇(2×250mL)带除痕量水分得黄色油状中间体((3S,4S)-6)37.5g，收率90.9%。
MASS(ESI+)m/z=104(M+H)+。
1H NMR(400MHz,DSO-d6):2.60(m,2H),3.02(m,2H),3.83(m,2H),4.81(br s,3H)。
(3S,4S)-1-N-叔丁氧羰基-3,4-二羟基吡咯烷
剧烈搅拌下，向中间体((3S,4S)-6)(30.9g,0.30mol)和碳酸氢钠(218.9g,25.8mol)的50%二氧六环水溶液中滴加二碳酸二叔丁酯(98.2g,0.45mol)。反应混合物在室温下搅拌2h，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得白色固体状中间体((3S,4S)-7)51.6g，收率84.6%。
MASS(ESI+)m/z=204(M+H)+。
1H NMR(400MHz,DSO-d6):1.39(s,9H),3.11(dd,2H),3.34(dd,2H),3.86(m,2H),5.06(d,2H)。
(3S,4S)-1-N-叔丁氧羰基-3,4-二甲基磺酰氧基吡咯烷
向冷却至0℃后的中间体((3S,4S)-7)(50.8g,0.25mol)的二氯甲烷(1.6L)溶液中加入三乙胺(140mL,1.0mol)和甲基磺酰氯(58mL,0.75mol)。去除冰盐浴后，反应混合物自然升至室温，在室温继续搅拌6h。反应混合物依次用饱和氯化铵和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得白色固体状中间体((3S,4S)-8)84.7g，收率94.3%。
MASS(ESI+)m/z=360(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):1.47(s,9H),3.12(s,6H),3.71(m,2H),3.79(d,1H),3.82(d,1H),5.19(br s,2H)。
(3R,4R)-1-N-叔丁氧羰基-3,4-二叠氮基吡咯烷
向中间体((3S,4S)-8)(71.9g,0.20mol)的DMF(1.8L)溶液中加入NaN3(143.0g,2.2mol)。反应混合物在90℃下加热24h，减压蒸干，残留物用乙酸乙酯(900mL)稀释，用蒸馏水(3×180mL)洗涤。水层用乙酸乙酯(180mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(90mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得黄色油状中间体((3R,4R)-9)34.4g，收率67.9%。
MASS(ESI+)m/z=254(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):1.45(s,9H),3.34(m,2H),3.65(m,2H),3.94(m,2H)。
(3R,4R)-1-N-叔丁氧羰基-3,4-二氨基吡咯烷
将中间体((3R,4R)-9)(30.4g,0.12mol)溶于无水甲醇(500mL)中，加入10%Pd/C(12.8g，12mmol)，室温通氢(0.1MPa)反应18h。过滤除去催化剂，滤液减压浓缩得黄色油状中间体((3R,4R)-10)23.4g，收率96.9%。
MASS(ESI+)m/z=202(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):1.48(s,9H),1.64-1.99(m,4H),3.14-3.37(m,2H),3.38-3.52(m,2H),3.52-3.78(m,2H)。
3-氨基-4-甲基苯甲酸甲酯
将3-氨基-4-甲基苯甲酸(60.5g,0.40mol)溶于无水甲醇(1.5L)中，搅拌冷却至5℃。缓慢滴加氯化亚砜(103.6g,0.87mol)，滴完后回流搅拌6h。冷却至室温，反应液减压浓缩，残留物用冰水(1.2L)稀释，加5%的NaHCO3中和至pH7.5。水层用乙酸乙酯(3×600mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(2×500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得白色固体状中间体(11)62.7g，收率94.9%。
MP114-116℃
1H NMR(400MHz,CDCl3):2.19(s,3H),3.73(br s,2H),3.87(s,3H),7.09(m,1H),7.34-7.37(m,2H)。
1H-吲唑-6-羧酸甲酯
将中间体(11)(57.8g,0.35mol)溶于冰醋酸(1.5L)中，缓慢滴加NaNO2(24.2g,0.35mol)的蒸馏水(350mL)溶液。反应液在室温搅拌5h，减压浓缩，向残留物中加入蒸馏水(500mL)，用乙酸乙酯(3×1.0L)提取。有机层用蒸馏水(1.5L)和食盐水(1.5L)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得浅黄色固体状中间体(12)49.5g，收率80.8%。
MASS(ESI+)m/z=177(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.96(s,3H),7.80-7.85(m,2H),8.14(s,1H),8.27(s,1H)。
1H-吲唑-6-羧酸
将中间体(12)(44.0g,0.25mol)溶于四氢呋喃(500mL)中，加入2N LiOH水溶液(200mL,0.40mol)，反应液在50℃搅拌4h。冷却至室温，减压蒸除四氢呋喃，残留物加蒸馏水(200mL)稀释，用1N HCl酸化至pH3.5，加乙酸乙酯(3×500mL)提取，混合有机层用食盐水(500mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得浅黄色固体状中间体(13)34.7g，收率85.6%。
MASS(ESI+)m/z=163(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CD3OD):7.79-7.87(m,2H),8.14(s,1H),8.29(s,1H)。
4-[2,3-二氟-6-(5-羟基-3-氧杂戊烷-1-氧基)]苯甲酰基苯甲酸甲酯
将中间体(3A)(6.00g,20.52mmol)、2-(2-氯乙氧基)乙醇(7.67g,61.56mmol)、K2CO3(8.51g,61.56mmol)和KI(0.34g,2.05mmol)溶于DMF(125mL)中，氮气保护下回流过夜。冷却至室温，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×200mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(15-02H)5.17g，收率66.2%。
MASS(ESI+)m/z=381(M+H)+。
4-[2,3-二氟-6-(5-羟基-3-氧杂戊烷-1-氧基)]苯甲酰基苯甲酸
将中间体(15-02H)(5.00g,13.15mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入2N LiOH水溶液(42mL,21.00mmol)，反应液在50℃搅拌4h。冷却至室温，减压蒸除四氢呋喃，残留物加蒸馏水(40mL)稀释，用1N HCl酸化至pH3.5，加乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得浅黄色固体状中间体(16-02H)4.28g，收率88.9%。
MASS(ESI+)m/z=367(M+H)+。
(3R,4R)-3-氨基-4-{4-[2,3-二氟-6-(5-羟基-3-氧杂戊烷-1-氧基)苯甲酰基]}苯甲酰氨基吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(16-02H)(4.00g,10.92mmol)、中间体((3R,4R)-10)(4.40g,21.84mmol)和DIPEA(2.82g,21.84mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(4.57g,12.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(17-02H)3.87g，收率64.5%。
MASS(ESI+)m/z=550(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(5-羟基-3-氧杂戊烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6- 甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(17-02H)(3.50g,6.37mmol)、中间体(13)(1.14g,7.01mmol)和DIPEA(2.47g,19.11mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(2.67g,7.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(18-02H)3.76g，收率85.1%。
MASS(ESI+)m/z=694(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(5-羟基-3-氧杂戊烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6- 甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐
向冷却至0℃的中间体(18-02H)(3.50g,5.05mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液中加入4mol/L的氯化氢乙酸乙酯溶液(100mL)，反应混合物在室温搅拌2h。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，真空减压干燥得浅黄色固体状产品(JK-02H)2.75g，收率86.4%。
MASS(ESI+)m/z=594(M+H)+。
实施例2：(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-03M)的制备
2,5,8-三氧杂十烷基-10-对甲苯磺酸酯
冰盐浴冷却下向三甘醇单甲醚(49.2g,0.30mol)和吡啶(35.5g,0.45mol)的混合溶液中滴加对甲苯磺酰氯(85.7g,0.45mol)的二氯甲烷(125mL)溶液，控制滴加速度，使反应溶液低于20℃，室温搅拌过夜。加入蒸馏水(100mL)，用6N的NaOH溶液将反应液pH调至4.0，分液，有机层用蒸馏水(2×50mL)洗涤。向有机层中加入蒸馏水(100mL)，用6N的HCl溶液将pH调至1.5，分液，有机层用蒸馏水(2×50mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂得浅黄色油状物74.4g，收率78.0%。
1H NMR(400MHz,CDCl3):2.46(s,3H),3.38(s,3H),3.54(t,2H),3.62(m,6H),3.70(t,2H),4.17(t,2H),7.35(d,2H),7.81(d,2H)。
10-溴-2,5,8-三氧杂癸烷
冰盐浴冷却下向4-甲基苯磺酸-2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙酯(39.8g,0.13mol)的DMF(40mL)溶液中缓慢加入溴化锂(16.3g,0.19mol)，控制加入速度，使反应溶液低于20℃，室温剧烈搅拌过夜。加入乙酸乙酯(125mL)，搅拌1h后过滤，滤液用蒸馏水(2×100mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物减压蒸馏得浅黄色油状物26.8g，收率90.8%。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.34(s,3H),3.42(t,2H),3.49-3.53(m,2H),3.59-3.66(m,6H),3.77(t,2H)。
4-{[2,3-二氟-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸甲酯
将中间体(3A)(6.00g,20.52mmol)、10-溴-2,5,8-三氧杂十烷(13.98g,61.56mmol)、K2CO3(8.51g,61.56mmol)和KI(0.34g,2.05mmol)溶于DMF(125mL)中，氮气保护下回流过夜。冷却至室温，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×200mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(15-03M)6.24g，收率69.4%。
MASS(ESI+)m/z=439(M+H)+。
4-{[2,3-二氟-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸
将中间体(15-03M)(6.00g,13.69mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入2N LiOH水溶液(44mL,22.00mmol)，反应液在50℃搅拌4h。冷却至室温，减压蒸除四氢呋喃，残留物加蒸馏水(40mL)稀释，用1N HCl酸化至pH3.5，加乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得浅黄色固体状中间体(16-03M)5.32g，收率91.6%。
MASS(ESI+)m/z=425(M+H)+。
(3R,4R)-3-氨基-4-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基吡咯烷 -1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(16-03M)(4.63g,10.92mmol)、中间体((3R,4R)-10)(4.40g,21.84mmol)和DIPEA(2.82g,21.84mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(4.57g,12.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(17-03M)4.88g，收率73.5%。
MASS(ESI+)m/z=608(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6- 甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(17-03M)(3.87g,6.37mmol)、中间体(13)(1.14g,7.01mmol)和DIPEA(2.47g,19.11mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(2.67g,7.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(18-03M)4.27g，收率89.2%。
MASS(ESI+)m/z=752(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6- 甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐
向冷却至0℃的中间体(18-03M)(4.00g,5.32mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液中加入4mol/L的氯化氢乙酸乙酯溶液(100mL)，反应混合物在室温搅拌2h。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，真空减压干燥得浅黄色固体状产品(JK-03M)3.07g，收率83.9%。
MASS(ESI+)m/z=652(M+H)+。
实施例3：(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-06H)的制备
17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基-1-对甲苯磺酸酯
冰盐浴冷却下向六甘醇(127.0g,0.45mol)和吡啶(35.5g,0.45mol)的混合溶液中滴加对甲苯磺酰氯(85.7g,0.45mol)的二氯甲烷(125mL)溶液，控制滴加速度，使反应溶液低于20℃，室温搅拌过夜。加入蒸馏水(100mL)，用6N的NaOH溶液将反应液pH调至4.0，分液，有机层用蒸馏水(2×50mL)洗涤。向有机层中加入蒸馏水(100mL)，用6N的HCl溶液将pH调至1.5，分液，有机层用蒸馏水(2×50mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残留物经硅胶柱分离得浅黄色油状物75.4g，收率38.4%。
1H NMR(400MHz,CDCl3):2.37(s,3H),2.90(s,1H),3.50-3.62(m,22H),4.08(t,2H),7.27(d,2H),7.72(d,2H)。
17-溴-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-醇
冰盐浴冷却下向17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基-1-对甲苯磺酸酯(56.7g,0.13mol)的DMF(40mL)溶液中缓慢加入溴化锂(16.3g,0.19mol)，控制加入速度，使反应溶液低于20℃，室温剧烈搅拌过夜。加入乙酸乙酯(125mL)，搅拌1h后过滤，滤液用蒸馏水(2×100mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得浅黄色油状物34.2g，收率76.2%。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.15(s,1H),3.39(t,2H),3.53-3.66(m,20H),3.73(t,2H)。
4-{[2,3-二氟-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸甲酯
将中间体(3A)(6.00g,20.52mmol)、17-溴-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-醇(21.25g,61.56mmol)、K2CO3(8.51g,61.56mmol)和KI(0.34g,2.05mmol)溶于DMF(125mL)中，氮气保护下回流过夜。冷却至室温，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×200mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(15-06H)7.16g，收率62.7%。
MASS(ESI+)m/z=557(M+H)+。
4-{[2,3-二氟-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸
将中间体(15-06H)(7.00g,12.58mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入2N LiOH水溶液(40mL,20.00mmol)，反应液在50℃搅拌4h。冷却至室温，减压蒸除四氢呋喃，残留物加蒸馏水(40mL)稀释，用1N HCl酸化至pH3.5，加乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得浅黄色固体状中间体(16-06H)5.95g，收率87.2%。
MASS(ESI+)m/z=543(M+H)+。
(3R,4R)-3-氨基-4-{4-[2,3-二氟-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯 甲酰氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(16-06H)(5.92g,10.92mmol)、中间体((3R,4R)-10)(4.40g,21.84mmol)和DIPEA(2.82g,21.84mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(4.57g,12.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(17-06H)4.86g，收率61.3%。
MASS(ESI+)m/z=726(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨 基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(17-06H)(4.62g,6.37mmol)、中间体(13)(1.14g,7.01mmol)和DIPEA(2.47g,19.11mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(2.67g,7.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(18-02H)4.53g，收率81.8%。
MASS(ESI+)m/z=870(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨 基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐
向冷却至0℃的中间体(18-06H)(4.50g,5.17mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液中加入4mol/L的氯化氢乙酸乙酯溶液(100mL)，反应混合物在室温搅拌2h。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，真空减压干燥得浅黄色固体状产品(JK-06H)3.32g，收率79.6%。
MASS(ESI+)m/z=770(M+H)+。
实施例4：(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-07M)的制备
22-氯-2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷
在氮气保护下向七甘醇单甲醚(24.5g,72.0mmol)和吡啶(5.70g,72.0mmol)的CHCl3(60mL)溶液中缓慢滴入氯化亚砜(10.95g,92.0mmol)的CHCl3(15mL)溶液，反应液回流搅拌3h。加入蒸馏水(300mL)，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得黄色油状物23.6g，收率91.3%。产品无须纯化，直接用于下步反应。
4-{[2,3-二氟-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸甲酯
将中间体(3A)(6.00g,20.52mmol)、22-氯-2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷(22.09g,61.56mmol)、K2CO3(8.51g,61.56mmol)和KI(0.34g,2.05mmol)溶于DMF(125mL)中，氮气保护下回流过夜。冷却至室温，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×200mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(15-07M)7.45g，收率59.1%。
MASS(ESI+)m/z=615(M+H)+。
4-{[2,3-二氟-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸
将中间体(15-07M)(7.00g,11.39mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入2N LiOH水溶液(36mL,18.00mmol)，反应液在50℃搅拌4h。冷却至室温，减压蒸除四氢呋喃，残留物加蒸馏水(40mL)稀释，用1N HCl酸化至pH3.5，加乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得浅黄色固体状中间体(16-07M)6.14g，收率89.8%。
MASS(ESI+)m/z=601(M+H)+。
(3R,4R)-3-氨基-4-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-氧基)]苯甲酰基}苯 甲酰氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(16-07M)(6.56g,10.92mmol)、中间体((3R,4R)-10)(4.40g,21.84mmol)和DIPEA(2.82g,21.84mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(4.57g,12.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(17-07M)5.93g，收率69.3%。
MASS(ESI+)m/z=784(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨 基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(17-07M)(4.99g,6.37mmol)、中间体(13)(1.14g,7.01mmol)和DIPEA(2.47g,19.11mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(2.67g,7.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(18-07M)5.17g，收率87.4%。
MASS(ESI+)m/z=928(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨 基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐
向冷却至0℃的中间体(18-07M)(4.69g,5.05mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液中加入4mol/L的氯化氢乙酸乙酯溶液(100mL)，反应混合物在室温搅拌2h。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，真空减压干燥得浅黄色固体状产品(JK-07M)3.61g，收率82.7%。
MASS(ESI+)m/z=828(M+H)+。
实施例5：(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(4,7-二氧杂壬烷-9-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-02P)的制备
3,6-二氧杂壬烷-1-醇
在冰水浴冷却下向二甘醇(424.5g,4.0mol)的四氢呋喃(2.5L)溶液中加入NaH(60%,25.0g,0.63mol)，随后滴入1-溴丙烷(24.6g,0.20mol)，混合物回流12h。减压蒸除溶剂，向残余物中加入蒸馏水(2.5L)，用乙酸乙酯(3×2.0L)，混合有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂得无色油状物23.2g，收率78.3%。产品无须纯化，直接用于下步反应。
3,6-二氧杂壬烷基-1-对甲苯磺酸酯
冰盐浴冷却下向3,6-二氧杂壬烷-1-醇(44.5g,0.30mol)和吡啶(35.5g,0.45mol)的混合溶液中滴加对甲苯磺酰氯(85.7g,0.45mol)的二氯甲烷(125mL)溶液，控制滴加速度，使反应溶液低于20℃，室温搅拌过夜。加入蒸馏水(100mL)，用6N的NaOH溶液将反应液pH调至4.0，分液，有机层用蒸馏水(2×50mL)洗涤。向有机层中加入蒸馏水(100mL)，用6N的HCl溶液将pH调至1.5，分液，有机层用蒸馏水(2×50mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂得浅黄色油状物61.5g，收率67.8%。
1H NMR(400MHz,CDCl3):0.93(s,3H),1.59(m,2H),2.45(s,3H),3.45(m,2H),3.51(t,2H),3.57(m,2H),3.67-3.73(m,2H),4.16(t,2H),7.34(d,2H),7.80(d,2H)。
1-溴-3,6-二氧杂壬烷
冰盐浴冷却下向3,6-二氧杂壬烷基-1-对甲苯磺酸酯(39.3g,0.13mol)的DMF(40mL)溶液中缓慢加入溴化锂(16.3g,0.19mol)，控制加入速度，使反应溶液低于20℃，室温剧烈搅拌过夜。加入乙酸乙酯(125mL)，搅拌1h后过滤，滤液用蒸馏水(2×100mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得无色油状物24.3g，收率88.5%。
1H NMR(400MHz,CDCl3):0.92(t,3H),1.61(m,2H),3.43(m,2H),3.47(m,2H),3.59(m,2H),3.67(m,2H),3.82(t,2H)。
4-{[2,3-二氟-6-(3,6-二氧杂壬烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸甲酯
将中间体(3A)(6.00g,20.52mmol)、1-溴-3,6-二氧杂壬烷(13.00g,61.56mmol)、K2CO3(8.51g,61.56mmol)和KI(0.34g,2.05mmol)溶于DMF(125mL)中，氮气保护下回流过夜。冷却至室温，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×200mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(15-02P)5.92g，收率68.3%。
MASS(ESI+)m/z=423(M+H)+。
4-{[2,3-二氟-6-(3,6-二氧杂壬烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酸
将中间体(15-02P)(5.00g,11.84mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，加入2N LiOH水溶液(38mL,19.00mmol)，反应液在50℃搅拌4h。冷却至室温，减压蒸除四氢呋喃，残留物加蒸馏水(40mL)稀释，用1N HCl酸化至pH3.5，加乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得浅黄色固体状中间体(16-02P)4.49g，收率92.8%。
MASS(ESI+)m/z=409(M+H)+。
(3R,4R)-3-氨基-4-{4-[2,3-二氟-6-(3,6-二氧杂壬烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基吡咯烷-1- 甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(16-02P)(4.46g,10.92mmol)、中间体((3R,4R)-10)(4.40g,21.84mmol)和DIPEA(2.82g,21.84mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(4.57g,12.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(17-02P)4.76g，收率73.7%。
MASS(ESI+)m/z=592(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(3,6-二氧杂壬烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲 酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向冷却至0℃的中间体(17-02P)(3.77g,6.37mmol)、中间体(13)(1.14g,7.01mmol)和DIPEA(2.47g,19.11mmol)的DMF(50mL)溶液中加入HATU(2.67g,7.01mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入蒸馏水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，混合有机层用饱和食盐水(150mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离纯化得浅黄色固体状中间体(18-02H)4.13g，收率88.1%。
MASS(ESI+)m/z=736(M+H)+。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二氟-6-(3,6-二氧杂壬烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲 酰氨基)吡咯烷盐酸盐
向冷却至0℃的中间体(18-02P)(3.50g,4.76mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液中加入4mol/L的氯化氢乙酸乙酯溶液(100mL)，反应混合物在室温搅拌2h。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，真空减压干燥得浅黄色固体状产品(JK-02H)2.86g，收率89.4%。
MASS(ESI+)m/z=636(M+H)+。
实施例6：(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-甲氧基-6-(5-羟基-3-氧杂戊烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-M02H)的制备
1-甲氧基-2-氟-4-苄氧基苯
将3-氟-4-甲氧基苯酚(7.5g,52.8mmol)和碳酸铯(34.5g,105.8mmol)溶于乙腈(400mL)中，搅拌下缓慢滴入溴化苄(18.1g,105.8mmol)。反应混合物回流搅拌5h，减压浓缩。残余物溶于乙醚(2.0L)中，加入蒸馏水(3×300mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色油状物10.8g，收率88.1%。
MASS(ESI+)m/z=233(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.76(s,3H),5.01(s,2H),6.83(d,1H),6.91(d,1H),7.03(s,1H),7.31(m,1H),7.37(m,2H),7.42(m,2H)。
4-[(2-氟-3-甲氧基-6-苄氧基苯基)羟甲基]苯甲酸甲酯
采用实施例1的方法，用1-甲氧基-2-氟-4-苄氧基苯代替1,2-二氟-4-甲氧基苯作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=397(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.76(s,3H),3.88(s,3H),4.29(d,1H),5.01(s,2H),6.36(d,1H),6.83(d,1H),6.91(d,1H),7.31(m,1H),7.37(m,2H),7.42(m,2H),7.47(d,2H),7.95(d,2H)。
4-[(2-氟-3-甲氧基-6-苄氧基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯
采用实施例1的方法，用4-[(2-氟-3-甲氧基-6-苄氧基苯基)羟甲基]苯甲酸甲酯(中间体1B)代替4-[(2,3-二氟-6-甲氧基苯基)羟甲基]苯甲酸甲酯(中间体1A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=395(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.76(s,3H),3.94(s,3H),5.01(s,2H),6.93(d,1H),7.27(d,1H),7.31(m,1H),7.37(m,2H),7.42(m,2H),7.82(d,2H),8.09(d,2H)。
4-[(2-氟-3-甲氧基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯
将中间体2B(15.0g,38.0mmol)和20%Pd(OH)2/C(3.0g)溶于THF-MeOH(1:1,250mL)中，用氢气置换空气三次，通氢反应4h。过滤，滤液减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色固体状中间体3B10.6g，收率91.7%。
MASS(ESI+)m/z=305(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.78(s,3H),3.98(s,3H),6.89(d,1H),7.25(d,1H),7.74(d,2H),8.17(d,2H),11.30(s,1H)。
采用实施例1的方法，用4-[(2-氟-3-甲氧基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3B)代替4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=606(M+H)+。
实施例7：(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-甲氧基-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-M03M)的制备
采用实施例2的方法，用4-[(2-氟-3-甲氧基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3B)代替4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=664(M+H)+。
实施例8：(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-甲氧基-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-M06H)的制备
采用实施例3的方法，用4-[(2-氟-3-甲氧基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3B)代替4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=782(M+H)+。
实施例9：(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-甲氧基-6-(2,5,8,11,14,17,20-七氧杂二十二烷-22-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-M07M)的制备
采用实施例4的方法，用4-[(2-氟-3-甲氧基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3B)代替4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=840(M+H)+。
实施例10：(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-甲氧基-6-(4,7-二氧杂壬烷-9-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-M02P)的制备
采用实施例5的方法，用4-[(2-氟-3-甲氧基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3B)代替4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=648(M+H)+。
实施例11：(3R,4R)-3-{4-[2,3-二甲氧基-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-MM06H)的制备
4-[(2,3-二甲氧基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯
采用实施例6的方法，用3,4-二甲氧基苯酚代替3-氟-4-甲氧基苯酚作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=317(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.79(s,6H),3.98(s,3H),6.36(d,1H),6.72(d,1H),7.74(d,2H),8.17(d,2H),11.29(s,1H)。
(3R,4R)-3-{4-[2,3-二甲氧基-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲 酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐
采用实施例9的方法，用3,4-二甲氧基苯酚代替3-氟-4-甲氧基苯酚作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=794(M+H)+。
实施例12：(3R,4R)-3-{4-[2,3-二甲氧基-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-MM06H)的制备
采用实施例6的方法，用3-甲基-4-甲氧基苯酚代替3-氟-4-甲氧基苯酚作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=602(M+H)+。
实施例13：(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-乙烯基-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-E03M)的制备
2-氟-4-甲氧基苯乙烯
向甲基三苯基溴化膦(35.7g,0.10mol)的四氢呋喃(850mL)溶液中滴入正丁基锂(2.5M的四氢呋喃溶液,40mL)，滴完后继续搅拌15min，得到黄色溶液。分批加入2-氟-4-甲氧基苯甲醛(15.4g,0.10mol)，溶液颜色逐渐变浅。加完后继续搅拌2h，加入饱和氯化铵溶液，反应混合物用二氯甲烷提取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色油状物11.8g，收率77.5%。
MASS(ESI+)m/z=153(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.79(s,3H),5.24(dd,1H),5.58(dd,1H),6.84(dd,1H),6.98(dd,1H),7.09(d,1H),7.47(d,1H)。
4-[(2-氟-3-乙烯基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3D)
采用实施例1的方法，用2-氟-4-甲氧基苯乙烯代替1,2-二氟-4-甲氧基苯作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=301(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):3.98(s,3H),5.24(dd,1H),5.58(dd,1H),6.78(d,1H),6.98(dd,1H),7.40(d,1H),7.73(d,2H),8.15(d,2H),11.29(s,1H)。
(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-乙烯基-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H- 吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-E03M)
采用实施例2的方法，用4-[(2-氟-3-乙烯基-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3D)代替4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=660(M+H)+。
实施例14：(3R,4R)-3-{4-[2-氟-3-乙烯基-6-(2,5,8-三氧杂癸烷-10-氧基)]苯甲酰基}苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-E03M)的制备
2-甲基-4-甲氧基碘化苯
将间甲苯甲醚(24.4g,0.20mol)溶于乙腈(800mL)中，加入N-碘代丁二酰亚胺(67.5g,0.30mol)。将反应液升温至82℃，保温搅拌2h。减压蒸除溶剂，加入乙醚(800mL)，依次用亚硫酸氢钠水溶液和蒸馏水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色油状物43.2g，收率87.1%。
MASS(ESI+)m/z=249(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):2.39(s,3H),3.77(s,3H),6.47(dd,1H),6.81(d,1H),7.65(d,1H)。
1-[2-甲基-4-甲氧基]苯基-1-丙炔
将2-甲基-4-甲氧基碘化苯(24.8g,0.10mol)、2-丁炔酸(11.7g,0.14mol)、碘化亚铜(0.38g,2.0mmol)、三苯基膦(1.05g,4.0mmol)和碳酸钾(41.5g,0.30mol)溶于二甲基亚砜(1.0L)中，充氮气保护。将反应液升温至100℃，保温搅拌24h。冷却至室温，用蒸馏水(3.0L)稀释，加乙酸乙酯提取(3×1.0L)，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物经硅胶柱分离得淡黄色油状物13.1g，收率81.8%。
MASS(ESI+)m/z=161(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):2.05(s,3H),2.34(s,3H),3.82(s,3H),6.84(dd,1H),6.98(d,1H),7.35(d,1H)。
4-{[2-甲基-3-(1-丙炔基)-6-羟基]苯甲酰基}苯甲酸甲酯(中间体3E)
采用实施例1的方法，用1-[2-甲基-4-甲氧基]苯基-1-丙炔代替1,2-二氟-4-甲氧基苯作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=309(M+H)+。
1H NMR(400MHz,CDCl3):2.05(s,3H),2.34(s,3H),3.98(s,3H),6.78(d,1H),7.40(d,1H),7.73(d,2H),8.15(d,2H),11.30(s,1H)。
(3R,4R)-3-{4-[2-甲基-3-(1-丙炔基)-6-(17-羟基-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1-氧基)]苯甲酰基} 苯甲酰氨基-4-(1H-吲唑-6-甲酰氨基)吡咯烷盐酸盐(JK-PM06H)
采用实施例3的方法，用4-{[2-甲基-3-(1-丙炔基)-6-羟基]苯甲酰基}苯甲酸甲酯(中间体3E)代替4-[(2,3-二氟-6-羟基)苯甲酰基]苯甲酸甲酯(中间体3A)作为原料合成标题化合物。
MASS(ESI+)m/z=786(M+H)+。
实施例15：化合物的水溶解度实验
在室温条件下，在10mL具玻璃磨口塞的量筒中加入约0.1g的待测样品(固体物质必须研磨成粉末)，逐渐增加水的体积，在每次加入0.5mL水后，搅拌混合10min，用肉眼检查是否存在有样品不溶。如果加水10mL后，样品或样品中某些部分仍不溶时，试验在100mL量筒中继续进行。各化合物在室温下的溶解度如下表1所示：
表1实验化合物的溶解度
编号 46 JK-02A JK-02H JK-03M JK-06H JK-07M JK-02P
加水量（mL） 66.5 71.5 13.5 16.5 6.5 8.5 22.5
溶解度(mg/mL) 1.5 1.4 7.4 6.1 15.4 11.8 4.4
编号 JK-M02H JK-M03M JK-M06H JK-M07M JK-M02P
加水量（mL） 12.5 16.0 6.0 7.5 22.0
溶解度(mg/mL) 8.0 6.3 16.7 13.3 4.5
从表1数据可以看出，增加低分子聚乙二醇片段后的化合物水溶性较原化合物有较大幅度提高，有些化合物提高了近10倍。
实施例16：化合物JK-02H、化合物46以及JK-02A对弗氏完全佐剂(CFA)催生的大鼠痛觉过敏的疗效研究
1.研究设计
化合物46、JK-02A的制备参照美国专利申请US2008/0176920，化合物JK-02H的制备参照实施例1。对同批动物进行单剂量给药后再洗脱的重复疗效研究。动物14天的生存研究包括两个阶段：在注射CFA后第7天进行单次低剂量治疗评估，第14天进行单次高剂量治疗评估。
1.1动物
1.1.1种属：SD大鼠
1.1.2提供者：北京维通利华实验动物技术有限公司
1.1.3总数量：40只，8只用于最大耐受量(MTD)试验，32只用于疗效研究
1.1.4性别：雌性
1.1.5鼠龄：5-7周，7天适应期后为6-8周
1.1.6体重：150-170g，研究开始时为180-200g
1.2分组和治疗
在注射CFA后第7天，根据大鼠体重、Von Frey纤毛试验基准值和负重试验基准值，使用计算机产生的随机程序将大鼠进行随机分组。在CFA注射后第7天和第14天，对动物分别进行相应的单剂量治疗(空白溶媒和三种试验药品)，评估试验药品的疗效。在第7天进行单次低剂量给药后和第14天进行单次高剂量给药后，对所有试验动物分别进行低剂量和高剂量痛觉过敏疗效评估。研究分组情况、每组动物数量和治疗模式见表2。
表2分组和治疗
1.3CFA注射
1.3.1试剂：4mg/kg CFA
1.3.2途径：左后足底注射
1.3.3体积：50μL/只
1.3.4频率：在第0天上午9:00单次注射
1.4配药过程
1.4.1空白溶媒：10%的羟丙基β环糊精
1.4.1.1途径：静脉注射
1.4.1.2体积：4mL/kg
1.4.1.3频率：分别在第7天和第14天上午9:00进行单次注射
1.4.1.4配制方法：将1.0g羟丙基β环糊精溶于5mL生理盐水中，涡旋振荡并超声，直至获得均匀溶液，加生理盐水定容至10mL。最后，将溶液过0.22μm滤膜。所有过程都在超净工作台内完成。
1.4.2试验药品：化合物46
1.4.2.1途径：静脉注射
1.4.2.2体积：4mL/kg
1.4.2.3频率：分别在第7天和第14天上午9:00进行单次注射
1.4.2.4配制方法：将25.0mg化合物46溶于5mL含20%羟丙基β环糊精的生理盐水中，涡旋振荡并超声，直至获得均匀溶液，加生理盐水定容至10mL，得到浓度为2.5mg/mL(10mg/kg)的溶液。最后，将溶液过0.22μm滤膜。所有过程都在超净工作台内完成。
1.4.3试验药品：化合物JK-02A
1.4.3.1途径：静脉注射
1.4.3.2体积：4mL/kg
1.4.3.3频率：分别在第7天和第14天上午9:00进行单次注射
1.4.2.4配制方法：将25.0mg化合物46溶于5mL含20%羟丙基β环糊精的生理盐水中，涡旋振荡并超声，直至获得均匀溶液，加生理盐水定容至10mL，得到浓度为2.5mg/mL(10mg/kg)的溶液。最后，将溶液过0.22μm滤膜。所有过程都在超净工作台内完成。
1.4.4试验药品：化合物JK-02H
1.4.4.1途径：静脉注射
1.4.4.2体积：4mL/kg
1.4.4.3频率：分别在第7天和第14天上午9:00进行单次注射
1.4.4.4配制方法：将12.5mg化合物JK-02H溶于5mL含20%羟丙基β环糊精的生理盐水中，涡旋振荡并超声，直至获得均匀溶液，加生理盐水定容至10mL。得到浓度为1.25mg/mL(5mg/kg)的溶液。最后，将溶液过0.22μm滤膜。所有过程都在超净工作台内完成。
表3给药方法
2.测量参数和试验方法
在CFA注射后第7天和第14天测量机械性痛觉过敏和负重，随后给予对照或试验药品。在第7天和第14天对所有研究动物分别在三个时间点和四个时间点进行Von Frey纤毛和负重试验。第14天之所以增加一个时间点，是因为观察到高剂量受试药在当天第3个时间点仍然具有较强的镇痛作用。
2.1Von Frey纤毛试验
在研究前和研究中通过测量所有试验动物组的Von Frey纤毛(Bioseb,France)阀值来测量左足的机械性痛觉过敏。纤毛垂直于足底表面不断增加拉力。取重复2-3次刺激(以g为单位)的平均值来评估足撤回的阀值。
在第7天进行三次Von Frey纤毛试验，包括治疗前、给药后15min和2h共三个时间点。在一周的洗脱期过后，即在CFA注射后的第14天，在单次高剂量给药后再进行四次Von Frey纤毛试验，包括治疗前、给药后15min、2h和5h共四个时间点。
2.2负重试验
大鼠的体重不均衡地分配在注射CFA足和对侧足上，由重量平衡变化仪(Bio-medical,USA)来测量。通过嵌入地板的测力板记录后足承载的重负荷，以此来测量箱体内动物的负重情况。在10秒内测量注射CFA足和对侧足的平均负重(以g为单位)。本实验测试的时间间隔与Von Frey纤毛试验的间隔一致。
2.3统计分析
所有结果均以平均值±标准偏差表示。本实验用one-way ANOVA进行各组间的数据分析，随后再进行多重比较，p＜0.05认为具有显著性差异。
3.研究结果
动物个体的Von Frey纤毛试验基准和承重试验基准列在附录I中。
3.1Von Frey纤毛试验
低剂量治疗的Von Frey纤毛试验组平均值见表4和图1。
高剂量治疗的Von Frey纤毛试验组平均值见表5和图2。
动物个体的Von Frey纤毛试验值汇总在附录II中。JK-02H的Von Frey纤毛试验的剂量依赖性见图3。
表4低剂量的Von Frey纤毛试验(平均值±标准偏差)
注释：“*”与溶媒组比较p＜0.05
“**”与溶媒组比较p＜0.01
表5高剂量组的Von Frey纤毛试验(平均值±标准偏差)
注释：“*”与溶媒组比较p＜0.05
“**”与溶媒组比较p＜0.01
3.2负重试验
低剂量治疗的负重试验组平均值见表6和图4。
高剂量治疗的负重试验组平均值见表7和图5。
动物个体的负重试验值汇总在附录III中。
JK-02H的负重试验的剂量依赖性见图6。
表6低剂量的负重试验数据(平均值±标准偏差)
注释：“*”与溶媒组比较p＜0.05
“**”与溶媒组比较p＜0.01
表7高剂量的负重试验数据(平均值±标准偏差)
注释：“*”与溶媒组比较p＜0.05
“**”与溶媒组比较p＜0.01
4.结论
单次注射化合物46、化合物JK-02A和化合物JK-02H后，分别以Von Frey纤毛和负重试验评估其治疗大鼠CFA催生的痛觉过敏的疗效。结果表明，化合物JK-02H在高剂量(20mg/kg)和低剂量(5mg/kg)时与溶媒组比较，均显示出明显的抗痛觉过敏疗效；而化合物46和化合物JK-02A仅在高剂量(40mg/kg)时具有抗痛觉过敏疗效，在低剂量(10mg/kg)时药效则不明显。另外，化合物JK-02H在高剂量延长测试时间至5h，仍有非常明显的疗效，提示化合物JK-02H可能有较长的半衰期。
附录I动物个体的Von Frey纤毛试验基准和承重试验基准
附录II动物个体的Von Frey纤毛试验值
附录III动物个体的承重试验值

Claims (22)

1.一种式Ⅰ的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，R1、R2相同或不同，各自独立地选自由卤素、C1-C6的烷氧基、C1-C6的烷基、C2-C6的烯基和C2-C6的炔基组成的组；R3选自由H、卤素、取代或未被取代的C1-C6的烷基、C3-C6的环烷基、C2-C6的烯基、C2-C6的炔基、芳基和杂芳基组成的组；n为0-15的整数。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1、R2各自独立地选自由卤素、C1-C6的烷氧基组成的组。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为F，R2为F或OCH3。
4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式Ⅱ的结构：
5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式Ⅲ的结构：
6.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自由H、取代或未被取代的C1-C6的烷基组成的组。
7.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3选自由H、取代或未被取代的C1-C3的烷基组成的组。
8.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为H、甲基或丙基。
9.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1-10的整数。
10.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1-6的整数。
11.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自由
组成的组。
12.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自由：
组成的组。
13.权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述药学上可接受的盐选自由盐酸盐、硫酸盐、酒石酸盐和柠檬酸盐组成的组。
14.权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗疼痛的药物中的应用。
15.一种药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体。
16.一种制备权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括：
（1）化合物3
与化合物14
在碱的存在下发生亲核取代反应，得到化合物15
其中，X为氯、溴、碘原子；
（2）所述化合物15在碱的存在下进行水解反应，得到化合物16
（3）所述化合物16与化合物10
在缩合剂的存在下发生酰胺化反应，得到化合物17
（4）所述化合物17与化合物13
在缩合剂的存在下发生酰胺化反应，得到化合物18
（5）所述化合物18在脱保护试剂的存在下进行脱保护反应，得到权利要求1-13中任一项的化合物或其药学上可接受的盐；
其中，Boc代表叔丁氧羰基保护基。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，在所述步骤（1）中，所述碱选自由碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸钙、氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钙、氢化钠、氢化钾、氢化钙、金属钠、金属钾、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾、丁基锂、苯基锂、二异丙氨基锂、六甲基二硅胺基锂、二甲胺、二乙胺、三乙胺、二异丙基乙胺、哌啶、吡啶、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、1,5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯、四丁基氢氧化铵及其组合组成的组。
18.根据权利要求16所述的方法，其中，在所述步骤（2）中，所述碱选自由氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钙、氢氧化钡、氢氧化铜、三氯化铝、三氯化硼、三溴化铝、三溴化硼、氰化钠、氰化钾、碳酸铯、碳酸铜、碘化锂、硼氢化钠、氢化钠、氢化钾、氢化钙及其组合组成的组。
19.根据权利要求16所述的方法，其中，在所述步骤（3）中，所述缩合剂选自由N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-羟基苯并三氮唑、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、双(2-氧代’-3-噁唑烷基)次磷酰氯、1H-苯并三唑-1-氧基三(1-吡咯烷基)膦六氟磷酸盐、1,3-二环己基碳二亚胺、N,N'-羰基二咪唑、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺、N,N'-N,N'-二异丙基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶及其组合组成的组。
20.根据权利要求16所述的方法，其中，在所述步骤（4）中，所述缩合剂选自由N-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、1-羟基苯并三氮唑、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、双(2-氧代’-3-噁唑烷基)次磷酰氯、1H-苯并三唑-1-氧基三(1-吡咯烷基)膦六氟磷酸盐、1,3-二环己基碳二亚胺、N,N'-羰基二咪唑、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺、N,N'-N,N'-二异丙基碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶及其组合组成的组。
21.根据权利要求16所述的方法，其中，在所述步骤（5）中，所述脱保护试剂选自由三氟乙酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酰氯、三氯化铝以及三氟化硼组成的组。
22.通式15、16、17或18的化合物，
其中，R1，R2，R3和n与权利要求1-13中的R1，R2，R3和n具有相同的定义。
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