CN1426308A - Adamts－1蛋白质的使用和聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的筛选方法 - Google Patents

Abstract

本发明介绍了ADAMTS－1蛋白质或其功能等价变体的新用途，即，以ADAMTS－1蛋白质或其功能等价变体为有效成分，作为用于治疗和预防软骨重塑异常引发的疾病的医药组合物，用于软骨重塑异常的正常化的医药组合物、以及用于聚集蛋白聚糖分解的医药组合物，同时阐述了用于治疗和预防聚集蛋白聚糖酶活性低下或者亢进引发的疾病的聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的筛选方法。ADAMTS－1蛋白质或其功能等价修饰体用于制造软骨重塑异常引起的疾病的治疗和预防用医药品、软骨重塑异常的正常化用医药品，或者聚集蛋白聚糖分解用医药品。

Description

ADAMTS-1蛋白质的使用和聚集蛋白 聚糖酶活性调节剂的筛选方法

技术领域

本发明涉及制造用于治疗和预防软骨重塑异常引发疾病的医药品时ADAMTS-1蛋白质的使用以及聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的筛选方法。

背景技术

ADAMTS-1( a  disintegrin  and  metalloproterinase withthrombo spondin type lmotifs)蛋白质是ADAM型的具有金属蛋白酶活性、血小板反应素1型基序的ADAMTS家族发现最早的蛋白质。

ADAM家族即具有单链蛇毒多肽结构域和金属蛋白酶结构域的蛋白质群，其核酸和氨基酸序列与蛇毒的单链蛇毒多肽以及金属蛋白酶的核酸和氨基酸序列非常相似(J.Cell Biol.，131，275-278，1995；Cell，90，589-592，1997；Immunol.Today，278，278-284，1999)。发现ADAM家族时，认为单链蛇毒多肽结构对细胞间的相互作用起着非常重要的作用(Nature，356，248-252，1992；Nature，377，652-656，1995)，根据后来的研究，确认ADAM家族的细胞膜结合型金属蛋白酶活性具有切断像肿瘤坏死因子α(TNFα)的前体和果蝇(Drosophila)6蛋白质那样的、存在于细胞表面的各种蛋白质，并将它们从细胞表面放出的活性(Nature，385，729-733，1997；Nature，385，733-736，1997；Science，283，91-94，1999)。

ADAMTS-1蛋白质为属于ADAM家族的蛋白质，具有一个reprolysin型的间质蛋白金属酶(MMP)结构域，三个血小板反应素(TSP)1型基序结构。从在体外能够引起恶性肿瘤的大肠致癌菌株colon26中离析得到了ADAMTS-1基因(J.Biol.Chem.，272，556-562，1997；Genomics，46，466-471，1997)。ADAMTS-1蛋白的TSP1型基序与肝素结合，ADAMTS-1蛋白质则进入细胞外基质并存在其中(J.Biol.Chem.，273，13912-13917，1998)。认为MMP结构域具有蛋白质分解酶活性(J.Biol.Chem.，274，18821-18826，1999)。本发明者根据以前的研究，确认ADAMTS-1蛋白质是细胞外基质结合型金属蛋白酶，能够结合细胞外基质中的硫酸化葡糖胺多糖。

进一步得知在人的关节软骨和关节炎组织中检测到了ADAMTS-1基因的表达(J.Biol.Chem.，274，23443-23450，1999；Biochem.Biophys.Res.Comm.，260，318-322，1999)。

聚集蛋白聚糖是存在于关节软骨的细胞外基质中的主要的蛋白多糖，其核心蛋白质被硫酸软骨素和硫酸角质素葡糖胺多糖所修饰。通过这种修饰向软骨组织中提供水分，赋予柔软性。(FASEB J.，6，861-870，1992；Trend.Cell Biol.，5，458-465，1995)。

聚集蛋白聚糖有多个结构域，即由N末端的球状结构域(G1和G2)、葡糖胺结合区域、以及C末端球状结构结构域(G3)组成(J.Biol.Chem.，262，17757-17767，1987)。这些聚集蛋白聚糖作为各自独立的单体通过G1结构域与透明质酸结合。以聚集蛋白聚糖聚集体的形式留在软骨间质中。

已知关节炎导致软骨破坏时，聚集蛋白聚糖的球状结构域中的2个特定部位被切断造成软骨组织损失大量的聚集蛋白聚糖。发生上述切断的部位是第341位的天冬酰胺残基和第342位苯丙氨酸残基之间(Asn341-phe342)、第373位谷氨酸残基和第374位丙氨酸残基之间(Glu373-Ala374)，称切断后者Glu373-Ala374键的酶为聚集蛋白聚糖酶(J.Biol.Chem.，266，8683-8685，1991；Biochim.J.，284，589-593，1992；J.Biol.Chem.，274，23443-23450，1999；J.Biochem.，126，449-455，1999)。

在软骨和软骨细胞培养液中(J.Biol.Chem.，266，8683-8685，1991；Biochim.J.，284，589-593，1992；Arch.Biochem.Biophys.，322，22-30，1995；J.Biol.Chem.，270，2550-2556，1995)以及各种关节炎患者的关节滑液中检测出切断Glu373-Ala374键而产生的分解物(J.Clin.Invst.，89，1512-1516，1992；Arthritis Rheum.，9，1214-1222，1993；J.Clin.Invst.，100，93-106，1997)。这样一来认为聚集蛋白聚糖酶在关节炎的软骨破坏中起到重要的作用，已知当聚集蛋白聚糖酶的活性亢进时能够引起各种关节炎疾病(例如：慢性关节风湿痛、变形性关节症、干癣性关节炎、全身性硬化症、全身性红斑、以及关节损伤)。另外，聚集蛋白聚糖酶活性的亢进，能够引起脑梗塞时的组织损伤。

另外，已知聚集蛋白聚糖酶的活性低下，能够引起软骨的重塑(即、软骨的破坏和再生)异常。软骨的重塑异常导致的疾病已知有，例如软骨形成不全症或者肥大性骨关节炎症。

在这种状况下，本发明者在深入研究人ADAMTS-1蛋白质在生物体内的功能的过程中，新发现ADAMTS-1蛋白质具有聚集蛋白聚糖酶活性。

利用本发明者发现的ADAMTS-1蛋白质聚集蛋白聚糖酶活性，可以使软骨的重塑异常正常化以及治疗或预防由于软骨的重塑异常引起的疾病。此外，使用ADAMTS-1蛋白质可以筛选能够调节(促进或者阻碍)聚集蛋白聚糖酶活性的化合物。通过此筛选得到的聚集蛋白聚糖酶活性调节剂中，聚集蛋白聚糖酶活性促进剂可以用于治疗或者预防聚集蛋白聚糖酶活性低下引发的疾病，例如软骨重塑异常导致的疾病。此外，聚集蛋白聚糖酶活性抑制剂可用于聚集蛋白聚糖酶活性亢进引起的疾病的治疗或者预防。例如软骨破坏引起的疾病。本发明是基于此发现完成的。

因此，本发明提供ADAMTS-1蛋白质的新用途，提供软骨重塑异常引发疾病的治疗和预防用医药组合物、软骨重塑异常的正常化用医药组合物以及聚集蛋白聚糖分解用医药组合物，并且提供能够筛选用于治疗或者预防由于聚集蛋白聚糖酶的活性低下或者亢进导致疾病的聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的方法。

发明概述

本发明关于在软骨重塑异常引发疾病的治疗或者预防用医药品的制造时，ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的使用。

此外，本发明涉及在软骨重塑异常的正常化用医药品的制造时，ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的使用。

此外，本发明涉及在聚集蛋白聚糖分解用医药品的制造时，ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的使用。

此外，本发明涉及软骨重塑异常引起疾病的治疗和预防用医药组合物，其中含有ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体和可药用的载体或者稀释剂。

此外，本发明涉及软骨重塑异常正常化用医药组合物，其中含有ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体和可药用的载体或者稀释剂。

此外，本发明涉及聚集蛋白聚糖分解用医药组合物，其中含有ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体和可药用的载体或者稀释剂。

此外，本发明还涉及进行聚集蛋白聚糖酶活性调节剂筛选的方法，其为在试验化合物存在以及试验化合物不存在的各种情况下，使ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体与聚集蛋白聚糖接触，比较上述条件下由聚集蛋白聚糖分解反应所产生变化的差异。

本说明书中的“聚集蛋白聚糖”指的是存在于关节软骨细胞外基质中、由N末端的2个球形结构域(G1以及G2)、葡糖胺结合区域以及C末端的球状结构域(G3)组成的核心蛋白质和由修饰此核心蛋白质的硫酸软骨素以及硫酸角质素葡糖胺组成的蛋白多糖。

此外，本说明书中的“聚集蛋白聚糖酶活性”指的是分解聚集蛋白聚糖的活性，例如，切断人聚集蛋白聚糖核心蛋白质的第373位的谷氨酸残基和第374位的丙氨酸残基间(Glu373-Ala374)的键的活性。

图的简单说明

图1所示的是重组ADAMTS-1蛋白质含有组分和对照用组分与聚集蛋白聚糖反应的反应物的电泳照片。

实施发明的最佳状态

以下对本发明进行详细说明。

本发明中，(1)在软骨重塑异常引起的疾病的治疗或者预防用医药品的制造方面、(2)在软骨重塑异常的正常化用医药品的制造方面、以及(3)在聚集蛋白聚糖分解用医药品的制造方面使用ADAMTS-1蛋白质及其功能等价变体。

在本说明书中的“ADAMTS-1蛋白质”指的是特开平11-46781号公报上报道的人ADAMTS-1蛋白质，以及相当于此人ADAMTS-1蛋白质的、存在于各种动物中的蛋白质，例如小鼠ADAMTS-1蛋白质(J.Biol.Chem.，272，556-562，1997)。即是指包括人的各种动物的天然型ADAMTS-1蛋白质。上述ADAMTS-1蛋白质由727个氨基酸残基组成，上述特开平11-46781号公报公布了此氨基酸序列。

此外，在本发明书中的“ADAMTS-1蛋白质的功能等价变体”指的是具有在天然型ADAMTS-1蛋白质的氨基酸序列中1个或者1个以上(优选1个或数个)氨基酸缺失、置换和/或添加所得的氨基酸序列，并且和上述天然型ADAMTS-1蛋白质具有相同活性的蛋白质。这里，“和天然型ADAMTS-1蛋白质具有相同活性”指的是如上述特开平11-46781号公报所公布的那样，影响造血功能的活性，例如造成白血球以及血小板的数量低下、同时使红血球的数量增加的活性。

在本发明中使用的ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的形状，只要能够维持其聚集蛋白聚糖酶活性即可，没有特殊的限制，例如可以是天然型ADAMTS-1蛋白质本身，也可以是使ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体与融合用伴侣(例如蛋白质或者多肽)融合的融合蛋白质。

上述融合用伴侣可举出，例如纯化用蛋白质或者多肽[例如谷胱甘肽S转酶(GST)或者组氨酸六肽]、检测用的蛋白质或者多肽[例如β半乳糖苷酶α肽(LacZ)]、以及表达用蛋白质或者多肽(例如：信号肽序列)。

在本发明中使用的ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体，具有聚集蛋白聚糖酶活性，即具有分解聚集蛋白聚糖的活性。因此，ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体不仅能够用于制造聚集蛋白聚糖分解用医药品，还可以用于制造聚集蛋白聚糖酶活性低下引发异常(例如软骨重塑异常)的正常化用医药品，以及用于制造上述异常引起疾病(例如软骨形成不全症或肥大性骨关节症)的治疗或者预防用医药品。

在本发明(1)软骨重塑异常引发的疾病的治疗或者预防用医药组合物、(2)软骨重塑异常正常化用医药组合物、以及(3)聚集蛋白聚糖分解用医药组合物(以下，总称为本发明医药组合物)中，以ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体作为有效成分、含有药剂学上或者兽医学上允许的常规的载体或者稀释剂。

给药剂型没有特殊限制，例如可举出散剂、细粒剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浊液、乳剂、糖浆、提取物浸膏或者丸剂等经口剂，或者注射剂、外用液剂、软膏剂、栓剂、局部给药的膏、或者点眼药等非经口剂。

这些经口剂使用例如明胶、藻朊酸钠、淀粉、玉米淀粉、白糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、羧甲基纤维素、糊精、聚乙烯吡咯烷酮、结晶纤维素、大豆卵磷脂、蔗糖、脂肪酸酯、滑石、硬脂酸镁、聚乙二醇、硅酸镁、硅酸酐、以及合成硅酸铝等赋形剂、结合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、流动性促进剂、稀释剂、保存剂、着色剂、香料、矫味剂、稳定剂、保湿剂、防腐剂以及防氧化剂等，按照常规方法进行制备。

非经口剂的给药方法有，例如注射、(皮下、静脉内等)以及直肠给药等。其中最优选采用注射剂。

例如在制备注射剂时，以上述的ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体为有效成分以外，可以任意使用生理盐水或者林格液等的水溶性溶剂、植物油或者脂肪酸酯等非水溶性溶剂、葡萄糖或者氯化钠等的等渗溶剂、溶解辅助剂、稳定剂、防腐剂、悬浊化剂以及乳化剂等。

此外，本发明医药组合物，也可以采用使用缓释性聚合物等的缓释性制剂的方法进行给药。例如将本发明医药组合物放入乙烯乙酸乙烯酯聚合物片中，将此片通过外科手术移植到需要治疗或者预防的组织中去。

本发明医药组合物并不限定于此，可以含有AMTS-1蛋白质或其功能等价变体0.01～99重量％、优选0.1～80重量％的量。

使用本发明医药组合物时的给药量，根据疾病的种类、患者的年龄、性别、体重、症状的程度以及给药方法等恰当决定，可以采用经口给药或者非经口给药。

此外，形态不限于医药品，可以是各种形态，例如可以是作为功能性食品和健康食品以及饲料等的饮食物形式。

本发明的筛选聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的方法中，使用ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体和聚集蛋白聚糖酶的底物聚集蛋白聚糖。在试验化合物不存在的情况下以及试验化合物存在的各条件下，使ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体与聚集蛋白聚糖相接触，比较在上述各种条件下聚集蛋白聚糖分解反应所引起变化的差异。上述“聚集蛋白聚糖分解反应所引起变化的差异”可以举出例如减少或者增加聚集蛋白聚糖分解产物的量。

能用于本发明筛选方法中的聚集蛋白聚糖，并不限于人聚集蛋白聚糖，可以使用人以外的物种[例如，哺乳类(例如，牛、鼠或者兔子)]的聚集蛋白聚糖。

此外，可用于本发明筛选方法中的ADAMTS-1蛋白质也不限于人ADAMTS-1蛋白质，可以使用人以外的物种[例如，哺乳类(例如，牛、小鼠或者兔子)]的ADAMTS-1蛋白质。

并且，在本发明的筛选方法中，上述聚集蛋白聚糖和上述ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的组合也没有特殊的限制，例如可以用同种来源的聚集蛋白聚糖以及ADAMTS-1蛋白质，也可以用异种来源的聚集蛋白聚糖以及ADAMTS-1蛋白质。

因为ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体在聚集蛋白聚糖的核心蛋白质的第373位的谷氨酸残基与第374位丙氨酸残基之间的键处切断，作为上述聚集蛋白聚糖分解产物，生成具有硫酸软骨素的约100kd的多肽。作为比较聚集蛋白聚糖分解产物的量的方法，可以采用众所周知的蛋白质分析方法，例如可以采用Western blot法。

ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体与聚集蛋白聚糖的接触，只要是在确保ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的聚集蛋白聚糖酶活性的条件下实施即可，没有特殊的限制，例如后述的实施例1(2)所记载的可以在聚集蛋白聚糖酶反应用缓冲液中进行。

在上述比较中，当在试验化合物存在的条件下聚集蛋白聚糖分解产物的量比在试验化合物不存在(即，对照)时的聚集蛋白聚糖分解产物的量少时，可以判定上述化合物对聚集蛋白聚糖酶活性具有抑制作用。对聚集蛋白聚糖酶活性具有抑制作用的试验化合物(即聚集蛋白聚糖酶活性抑制剂)可以作为聚集蛋白聚糖酶活性亢进引发的疾病例如软骨破坏引发的疾病(例如慢性关节风湿痛、变形性关节症、干癣性关节炎、全身性硬化症、全身性红斑以及关节损伤)的治疗或者预防剂的有效成分来使用。

另一方面，当在试验化合物存在的条件下聚集蛋白聚糖分解产物的量比在实验化合物不存在(对照)的聚集蛋白聚糖分解产物的量多时，可以判定上述化合物对聚集蛋白聚糖酶活性具有促进作用。对聚集蛋白聚糖酶活性具有促进作用的试验化合物(即聚集蛋白聚糖酶活性促进剂)，可以用作聚集蛋白聚糖酶活性低下引发的疾病例如软骨重塑异常引发的疾病(例如软骨形成不全症或者肥大性骨关节症)的治疗或者预防剂的有效成分。

本发明中用于聚集蛋白聚糖酶活性调节剂筛选方法的试验化合物没有特殊的限制，天然化合物或者合成化合物均可。此外，用于本发明筛选方法中的状态也没有特殊的限制，可以采用纯化状态之外，也可以采用未纯化的状态例如发酵产物或者细胞或组织提取液的形式。

实施例

以下，根据实施例，对本发明进行具体说明，但本发明并不限于此。实施例1(1)重组人ADAMTS-1蛋白质的制备使用由序列表的序列号1所示的碱基序列：g t g g c g g c c g c g g c t c c a a t g c a g c g a g c t g t g组成的正向引物和由序列表的序列号为2所示的碱基序列：c a c t c t a g a c t c c a g c c t t c t t g c t t t c c c t g组成的反向引物以及人脾脏cDNA库(Marath on-Ready cDNA；Clonetec Lab.，Inc.；美国加利福尼亚州Palo Alto)，按照常规方法，根据聚合酶链反应(PCR)离析编码人ADAMTS-1蛋白质的基因(大约3kbp的cDNA)。分析得到的cDNA的碱基序列，结果和在特开平11-46781号公报上记载的人ADAMTS-1基因的碱基序列一致。

接着，用限制性内切酶Xbal和限制性内切酶Notl切断上述cDNA的末端后，进行琼脂糖凝胶电泳。从凝胶中回收约3kbp的DNA，连接到动物细胞表达用载体pcDNA 3.1/V5-His(InvitrogenCorporation；美国加利福尼亚州Carlsbad)的Xbal/Not1位点，构建ADAMTS-1表达载体。并且，通过此ADAMTS-1表达载体表达的蛋白质是在ADAMTS-1蛋白质的C末端添加有6个组氨酸(His)残基的重组ADAMTS-1蛋白质(以下，简称“重组ADAMTS-1蛋白质”)。

将所得到的ADAMTS-1表达载体，用转化试剂(Iipofectamin；Life Technologies Inc.，美国马里兰州Gaithetrsburg)、按照附带的操作流程手册、导入到动物细胞株HEK293中。自导入8小时后，用含有肝素(5μg/mL)的无血清的ダルベツコ改变イ-グル培养基(DMEM)(日水，日本东京)洗涤细胞，再培养2天。重组ADAMTS-1蛋白质的C末端存在6个组氨酸(His)残基，所以用镍络合柱(AmershamPharmacia Biotech；瑞典，乌普萨拉)按照附带的操作手册，可以纯化上述重组ADAMTS-1蛋白质(即，得到含有重组ADAMTS-1蛋白质的组分)。

此外，为了在后述的“聚集蛋白聚糖活性评价”中作对照，除了代替将ADAMTS-1表达载体导入动物细胞，而将上述载体pcDNA3.1/V5-His(不含有编码重组ADAMTS-1蛋白质的基因)导入的动物细胞以外，其它重复上述培养和纯化步骤，得到与上述重组ADAMTS-1蛋白质含有组分相当的对照组分。(2)聚集蛋白聚糖酶活性评价

按照众所周知的方法(Hardingham方法；Biochem.J.177，237-247，1979)制备用于聚集蛋白聚糖酶活性评价的聚集蛋白聚糖。即，从牛鼻软骨组织中，用盐酸胍4mol/L抽提后，用氯化铯浓度梯度超离心法进行纯化。

10μg聚集蛋白聚糖和上述实施例1(1)制备的重组ADAMTS-1蛋白质含有组分(重组ADAMTS-1蛋白质的量为0.5μg)或对照组分放置在100μL聚集蛋白聚糖反应用缓冲液中[Tris-HCl-20mmol/L(pH7.6)，NaCl-150mmol/L，CaCl₂5mmol/L，NaN₃0.01％]，37℃下反应12小时。

反应结束后，进一步添加软骨素酶ABC(生化学工业；日本东京)(0.05U/蛋白多糖10μg)和角质素酶(生化学工业)(0.05U/蛋白多糖10μg)，放置在200μL糖链分解反应液中[Tris-HCl-50mmol/L(pH8.0)，醋酸钠30mmol/L，四乙酸乙二胺(EDTA)10mmol/L，苯甲基磺酰氟(PMSF)5mmol/L，胃泌素(ペプスタチン)A0.36mmol/L，N-乙基马来酸酐缩亚胺10mmol/L)]，37℃下反应3小时以分解糖链。

进行了两阶段反应的反应液放置在laemmli样品缓冲液[Tris-HCl-60mmol/L(pH6.8)，十二烷基硫酸钠(SDS)2％，巯基乙醇5％，甘油10％]在100℃下处理5分钟后，进行浓度梯度聚丙烯酰氨凝胶电泳(凝胶浓度梯度＝2～15％)。

按照常规方法，将凝胶中的蛋白质转印到硝酸纤维素膜后，此膜放置在封闭溶液(Block ACE；大日本制药；日本，大阪)中、37℃下处理1晚。

Western blot法用抗硫酸4-软骨素抗体作为一抗(2-B-6抗体；能够识别性地结合聚集蛋白聚糖的核心蛋白质)，来自以辣根过氧化物酶(HRP)结合羊的、抗小鼠IgG多克隆抗体(AmershamPharmacia Biotech)作为二抗，使用ケミルミネツセン(ECL体系；Amersham Pharmacia Biotech)作为检测系统。

Western blot法的结果如图1所示。在图1中，泳道1是使用对照用组分时的结果，泳道2是使用重组ADAMTS-1蛋白质含有组分时的结果。此外，在图1中，泳道1的左侧沿着上下方向排成一列的各横线表示的是分子量标记用的蛋白质的位置，上述各横线左侧的各数字表示的是所用的分子量标记用的蛋白质各自的分子量(单位＝kd)。

在泳道2大约100kd的位置出现的条带(用箭头标志的条带)是被重组ADAMTS-1蛋白质分解的聚集蛋白聚糖的核心蛋白质。虽然没有标示数字，不过在聚集蛋白聚糖酶反应用缓冲液中聚集蛋白聚糖与各组分反应时，如添加络合试剂EDTA(已知为了表现聚集蛋白聚糖酶活性，Ca离子是必须的)，则检测不到上述的大约100kd的条带。从此结果可以断定ADAMTS-1蛋白质具有聚集蛋白聚糖酶活性。制备实施例1

将上述实施例1(1)中制备的重组ADAMTS-1蛋白质含有组分溶解到生理盐水中、并使ADAMTS-1蛋白质的量为25mg/mL，然后将得到的重组ADAMTS-1蛋白质溶液转移到安瓿管中，进行封管制备本发明医药组合物。

生产上应用的可能性

在本发明中的ADAMTS-1蛋白质或其功能等价的变体可用于(1)软骨的重塑异常引发疾病的治疗或者预防用医药品、(2)软骨重塑异常的正常化用医药品，或者(3)聚集蛋白聚糖分解用医药品。

此外，如果根据本发明的筛选聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的方法，能够选择出聚集蛋白聚糖酶活性促进剂或者聚集蛋白聚糖酶活性抑制剂。上述的聚集蛋白聚糖酶活性促进剂可以用作治疗或者预防由于聚集蛋白聚糖酶活性低下造成的异常(例如软骨重塑异常)引发的疾病(例如软骨形成不全症或者肥大性骨关节症)的药物的有效成分。此外，上述的聚集蛋白聚糖酶活性的抑制剂可以作为治疗或者预防由于聚集蛋白聚糖酶活性亢进造成的疾病例如软骨破坏引发的疾病(例如慢性关节风湿痛、变形性关节症、干癣性关节炎、全身性硬化症、全身性红斑以及关节损伤)的药物的有效成分。序列表说明

序列表序列号1的序列所记载的碱基序列是人工合成的正向引物序列。

序列表序列号2的序列所记载的碱基序列是人工合成的反向引物序列。

以上，对本发明以特定的状态进行了说明，该领域中的从业人员自己的修饰和改良也包括在本发明中。

序  列  表<110>吴羽化学工业株式会社。<120>ADAMTS-1蛋白质的使用和聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的筛选方法<130>KRH-649<140>JP2000-122650<141>2000-04-24<160>2<210>1<211>33<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Description of Artificial Sequence：an artificially synthesizedforward primer sequence<400>1gtggcggccg cggctccaat gcagcgagct gtg                                  33<210>2<211>32<212>DNA<213>Artificial Sequence<220><223>Description of Artificial Sequence：an artificially synthesizedreverse primer sequence<400>2cactctagac tccagccttc ttgctttccc tg                                   32

Claims (7)

1.ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的应用，其用于制造软骨重塑异常引发疾病的治疗或预防用医药品。

2.ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体的应用，软骨重塑异常的正常化用医药品。

3.ADAMTS-1蛋白质及其功能等价变体的应用，聚集蛋白聚糖分解用医药品。

4.起因于软骨重塑异常的疾病的治疗或预防用医药组合物，其含有ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体和药剂学上允许的载体或者稀释剂。

5.软骨重塑异常正常化用医药组合物，其含有ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体和药剂学上允许的载体或者稀释剂。

6.聚集蛋白聚糖分解用医药组合物，其含有ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体和药剂学上允许的载体或者稀释剂。

7.筛选聚集蛋白聚糖酶活性调节剂的方法，其为在试验化合物不存在以及试验化合物存在的各种条件下，使ADAMTS-1蛋白质或其功能等价变体与聚集蛋白聚糖接触，比较上述各个条件下聚集蛋白聚糖分解反应变化的差异。