CN1424321A - 三七叶皂苷的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及三七茎叶皂苷的提取方法。利用强极性大孔吸附树脂对三七叶的有效成分进行分离纯化，本发明以三七茎叶为原料，以水为提取溶剂，仅通过“吸附－脱附”一步简单工艺，即可从三七提取液中分离、纯化得到高质量三七皂苷提取物，产品中三七茎叶皂苷中各单体皂苷的含量为Rg1≥5％、Rb1≥30％和R₁≥15％。总皂苷含量≥90％。本发明皂苷损失小、工艺简单、不使用毒性有机溶剂，一次性投资成本低、易于工业化大生产。

Description

三七叶皂苷的提取方法

所属技术领域

本发明涉及中药有效成分的提取与分离，特别是三七叶皂苷的提取方法。利用强极性大孔吸附树脂对三七叶的有效成分进行分离纯化，三七叶中提取的有效成分三七叶皂苷具有化淤止血，活血定痛等功效，可用于治疗心脑血管疾病。

背景技术

三七[Panax pseudoginseng var notooginseng(Burk.)Hoo&Tweng或Panaxnotooginseng(Burk.)F.H.，又名参三七、田七、山七、金不换]分布于我国云南文山及广西壮族自治区等极小范围内。三七为五加科Araliaceae人参属Panax的多年生草本植物，是我国传统名贵中药材，使用历史近600年，栽培历史在400年以上，主产于云南，在广西、湖南和四川也有少量种植，作为一种医食同源植物，自古以来都被认为具有滋补、强壮、补血、消肿镇痛、止血散淤等功效。现代研究发现，三七的主要功能是预防和治疗心脑血管疾病，对肝病和癌症也有较好的疗效。由于对生态环境的特殊要求，现仅分布在北回归线附近我国西南部的很小一部分地区。随着市场对三七需求量的持续扩大和生态环境的恶化，三七野生资源日渐匮乏。有些地区如西藏已将三七列入“珍贵和频危植物名录”，寻找三七的代用药材亦为大势所趋。

近年的药理研究表明，三七茎叶皂苷与三七根皂苷具有相似的药理作用：安神、降压、镇痛、消炎、抗肿瘤等作用，其毒性较低，安全范围较大，因此三七叶皂苷的作用与功效日益受到瞩目。具初步调查，云南省目前种植三七5.4×10⁴m²，每年采收三七茎叶大约1500t，但仅有5％的茎叶被利用，大部分资源被丢弃，目前市场以三七茎叶为原料开发的药品七叶安神片等为三七叶皂苷的初提物，茶冲剂、化妆品、营养品等均为技术层次较低的产品，因此进一步开展对三七叶皂苷深层次开发具有深远的意义和广阔的前景。

目前从三七茎叶中提取三七皂苷普遍采用的方法有醇提法、醇提-树脂法、水提醇提-树脂法，所得浸取物(提取物)纯度不高，颜色暗黄或棕褐色。韦嘉松等以三七茎叶为原料经水煮沸、过滤、加入助沉剂、再经乙醇、甲醇、乙醚处理提取得到三七总皂苷产品(田七茎叶总皂苷的提取新工艺。广西医学院学报，1991；8(2)：148-150)；Paci等采用氧化铝层析、不同浓度的乙醇洗脱、丙酮处理得到了纯度较高的皂苷产品(Total saponinextraction from Panax Ginseng laves and flowers are extracted with alxohol and the residuepassed through alumina.GB 1378278 CH584233)。耿家玲等通过三七叶水提取、浓缩、大孔吸附树脂吸附、洗脱、组合树脂脱色、干燥得产品(三七叶甙的开发与利用.云南中医学院学报，2001；9(4)7-8)。上述的制备方法通过澄清、脱色或层析、脱色的配合，虽然得到了具有较高纯度的三七皂苷产品，但工艺较为烦琐。中药提取过程中每增加一道工序会使产品损失5％左右。因此可以说，以上技术虽然得到了较高纯度的产品，却是以产率的下降为代价的。因此如何在得到高纯度产品的同时减少三七有效成分的损失，也成为了医药厂家普遍关心的问题。

通过薄层色谱、高效液相色谱对三七叶和三七根中的皂苷成分进行了分析比较，结果见图1、2。结果表明：三七叶与三七根的主要有效成分基本一致，但是各成分在总皂苷中所占的比例有一定的变化，仅就Rg1、R1、Re、Rb1四种主要有效成分而言，三七根中以Rg1、R1成分为主，三七叶中以Rb1成分为主。不同的物质基础也就决定了它们药理作用的侧重点。所以说，三七叶在治疗某些疾病方面可以代替三七入药。

发明内容

本发明的目的是提供一种三七叶皂苷的提取方法。本发明采用水提取、大孔树脂吸附、洗脱、干燥的简单生产工艺既可得到高纯度、高产率、质量稳定，色泽好的人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1组成的复合白色三七叶皂苷产品，以其为原料制成的中药制剂，将完全满足现代化中药的要求。本发明皂苷损失小、工艺简单、不使用毒性有机溶剂，仅“吸附-脱附”一步法，一次性投资成本低、易于工业化大生产。

本发明包括下述步骤：

1)将三七叶粉碎，用水加热提取1-24h，过滤得澄清水溶液；

2)将澄清水溶液通入装有强极性大孔吸附树脂柱(ADS-3树脂，由南开大学高分子所合成)，用水洗涤，10％-95％的乙醇溶液洗脱；吸附、洗涤、解吸的流速为0.5-5个床体积/小时；

3)解吸液经减压浓缩、真空干燥，即得白色产品。

所述的树脂是强极性伯胺基吸附树脂；所述的原料重量与树脂的体积比是1∶2～10；所述的树脂柱径和柱高比为1∶1～20。

所述的强极性伯胺基吸附树脂的制备方法：

ADS-3树脂的合成：油相体系：反应单体二乙烯苯，苯乙烯，以甲苯、汽油、液蜡等为致孔剂，0.5％-1％BPO为引发剂，混均；水相体系：取4-6倍于油相的水，加入0.5％-1％分散剂(明胶或聚乙烯醇)组成的水相体系。

St-DVB白球的制备：水相升温至45℃，搅拌使分散剂完全溶解，加次甲基兰，停止搅拌；加油相于水相中，搅拌(100-300转/分)至合适粒度，然后升温至78℃-80℃，反应1-2小时，以同样的升温速度，升温至85℃反应3小时，升温至90-95℃煮球6小时；出球，热水洗涤、晾干、石油醚抽提，自然晾干。

氯球的制备：取所得白球，加入氯甲醚或二氯乙烷，溶胀12小时，冰盐浴下加入催化剂SnCl₄，反应过程中取样测氯含量至1％-20％，出球，水洗、乙醇抽提8小时左右，自然晾干。

氯球的胺化：取所得氯球用二氯乙烷或乙醇等溶剂溶胀，搅拌下加入5-50g乌洛托品，用20％NaOH调PH7-10，于40℃反应6-12小时，然后加入氨水继续反应1-2小时，再加入浓盐酸于45℃反应2-4小时，出球，用碱水、水洗至中性。即制得骨架密度为1.00-1.30，含水量为50-65％，比表面积为100-600m²/g，粒度为30-120目，平均孔径为4-40nm的ADS-3树脂。

本发明与现有技术相比具有的优点是：本发明根据三七叶所含成分的组成和三七叶皂苷的结构特点，合成带有脱色、脱盐功能吸附树脂——强极性伯胺基吸附树脂(ADS-3)，其合成方法见实施例1。仅通过“吸附-脱附”一步法简单生产工艺即得到高纯度三七叶各单体皂苷的复合产品，达到了使中药三七有效组分得到精制纯化的同时，又不影响其用于疾病预防和治疗时针对性和多靶性，良好地保留了中药特色；和传统的溶剂萃取法相比，工艺简单、工艺流程中不使用毒性和易挥发的有机溶剂，安全可靠，生产成本较低。

本发明与其它吸附树脂或层析法相比，不需要溶剂萃取或脱盐脱色树脂的配合使用，大大简化了生产工艺，提高了产率，一步即可得到色泽好、含量高、质量稳定的产品。主要有效成分含Rg1≥5％、Rb₁≥30％和三七皂苷R₁≥15％(HLPC测试)，总皂苷含量≥90％(UV测得)。

本发明提取的三七皂苷不仅可以用于预防和治疗心脑血管疾病，尤以对脑血管疾病的治疗效果最佳，而且可以用于其它出血和淤血性疾病的治疗。本发明提取的中间体可以制成口服制剂和注射剂，也可代替三七入药，为中药的的现代化开发提供了一条新的溪径。

附图说明

图1三七叶和根的薄层层析图(1.Rg1、R1、Rb1对照品；2.三七叶总皂苷；3.三七根总皂苷)。

图2三七根和叶的高效液相色谱图(1.Rg1、2.Re、3.R1、4.Rb1)，A为三七根的HLPC图、B为三七叶的HLPC图。

具体实施方式

实施例1

ADS-3树脂的合成：油相体系配制：称取反应单体二乙烯苯80g，苯乙烯20g，以150％甲苯和液蜡(1∶1)为致孔剂，1％BPO为引发剂，混均；水相体系的配置：取5倍于油相的水，加入1％明胶或聚乙烯醇组成的水相体系。实验过程如下：

步骤1：St-DVB白球的制备  水相升温至45℃，搅拌下使分散剂完全溶解，滴加6滴次甲基兰，停止搅拌。加油相于水相中，调节搅拌(250转/分)至合适粒度，然后以1℃/2min的速度升温至78℃-80℃，反应2小时，以同样的升温速度，升温至85℃反应3小时，升温至90-95℃煮球6小时。出球，热水洗涤、晾干、石油醚抽提，自然晾干。

步骤2：氯球的制备  取步骤1所得白球50g，按一定比例加入100ml氯甲醚、100ml二氯乙烷，溶胀12小时，冰盐浴下加入催化剂(SnCl₄)约20ml，反应过程中取样测氯含量至规定范围(1％-20％)，出球，水洗、乙醇抽提8小时左右，自然晾干。

步骤3：氯球的胺化取步骤2所得氯球50g，用二氯乙烷、乙醇等溶剂溶胀，搅拌下加入适量的25g乌洛托品，用20％NaOH调节PH10，于40℃反应12小时，然后加入氨水继续反应2小时，再加入足量浓盐酸于45℃反应4小时，出球，用碱水、水洗至中性。

通过以上步骤即制得骨架密度为1.00-1.30，含水量为50-70％，比表面积为100-600m²/g，粒度为30-120目，平均孔径为4-40nm的ADS-3树脂。反应式如下：

    步骤1 

    步骤2 

    步骤3 

实施例2

将20克三七叶粉碎，40℃热水提取，提取液浓缩至100ml，过滤的澄清水溶液。将得到的水溶液通入装有ADS-3树脂的树脂柱(柱径15mm，装有50ml树脂)，用100ml的水洗涤，200ml 70％的乙醇解吸。吸附、洗涤、解吸的流速为1倍床体积/小时。解吸液经减压浓缩、真空干燥、粉碎即得白色粉末状三七叶皂苷提取物1.79g，产率为8.94％。经过Waters484型高效液相色谱仪色谱分析，结果是：产品纯度为Rg₁ 6.27％、Rb₁ 32.0％和R₁ 15.6％。UV分析，总皂苷含量为91.4％。

实施例3

将20克三七叶粉碎，室温下提取，浓缩至120ml，过滤的澄清水溶液。将得到的水溶液通入装有ADS-3树脂的树脂柱(柱径15mm，装有80ml树脂)，用160ml的水洗涤，用300ml 50％的乙醇解吸。吸附、洗涤、解吸的流速为0.5倍床体积/小时。解吸液经减压浓缩、真空干燥、粉碎即得白色粉末状三七皂苷提取物1.72g，产率为8.71％。经过Waters484型高效液相色谱仪色谱分析，结果是：产品纯度为人参皂苷Rg₁ 6.89％、Rb₁ 32.8％和R₁16.1％。UV分析，总皂苷含量为94.2％。

实施例4

将20克三七叶粉碎，沸水提取，浓缩至100-120ml，浓缩液放置12小时，过滤得澄清水溶液。将得到的水溶液通入装有ADS-3树脂的树脂柱(柱径15mm，装有80ml树脂)，用160ml的水洗涤，用300ml 70％的乙醇解吸。吸附、洗涤、解吸的流速为1倍床体积/小时。解吸液经减压浓缩、真空干燥、粉碎即得白色粉末状三七皂苷提取物1.81g，产率为9.04％。经过Waters484型高效液相色谱仪色谱分析，结果是：产品纯度为Rg₁ 6.12％、Rb₁ 30.5％和R₁ 15.3％。UV分析，总皂苷含量为91.0％。

实施例5

将10kg三七叶粉碎，40℃热水提取，提取液浓缩至60L，过滤得澄清水溶液。将得到的水溶液通入装有ADS-3树脂的树脂柱(柱径500mm，装有30L树脂)，用60L的水洗涤，用120L 50％的乙醇解吸，吸附、洗涤、解吸的流速为1倍床体积/小时。解吸液经减压浓缩、真空干燥、粉碎即得白色粉末状三七叶皂苷提取物792g，产率为7.92％。经过Waters484型高效液相色谱仪色谱分析，结果是：产品纯度为人参皂苷Rg₁ 6.06％、Rb₁ 30.2％和三七皂苷R₁ 15.1％。UV分析，总皂苷含量为90.5％。

Claims (6)

1、一种三七叶皂苷的提取方法，包含人参皂苷Rg1≥5％、Rb₁≥30％和三七皂苷R₁≥15％；三七叶总皂苷含量≥90％，其特征在于它包括下述步骤：

1)将三七叶粉碎，用水提取，提取液直接或浓缩后，过滤得澄清水溶液；

2)将澄清水溶液通入装有强极性吸附树脂的树脂柱中吸附，pH2-8的水洗涤，10-95％的乙醇溶液解吸；吸附、洗涤、解吸的流速为0.5-2.5个床体积/小时；

3)解吸液经减压浓缩、真空干燥，即得白色产品。

2、根据权利要求1所述的三七叶皂苷的提取方法，其特征在于所述的树脂是强极性胺基吸附树脂。

3、根据权利要求1所述的三七叶叶皂苷的提取方法，其特征在于所用水为10℃-100℃。

4、根据权利要求1或2所述的三七皂苷的提取方法，其特征在于所述的原料重量与树脂的体积是1∶2～5。

5、根据权利要求1所述的三七皂苷的提取方法，其特征在于所述的树脂柱径和柱高比为1∶1～20。

6、权利要求2所述的强极性胺基的制备方法，其特征在于它包括下述步骤：

ADS-3树脂的合成：油相体系：反应单体二乙烯苯，苯乙烯，以甲苯、汽油或液蜡为致孔剂，0.5％-1％BPO为引发剂，混均；水相体系：取4-6倍于油相的水，加入0.5％-1％分散剂明胶或聚乙烯醇组成水相体系；

St-DVB白球的制备：水相升温至45℃，搅拌使分散剂完全溶解，加次甲基兰，停止搅拌；加油相于水相中，搅拌，100-300转/分，至合适粒度，然后升温至78℃-80℃，反应1-2小时，以同样的升温速度，升温至85℃反应3小时，升温至90-95℃煮球6小时；出球，热水洗涤、晾干、石油醚抽提，自然晾干；

氯球的制备：取所得白球，加入氯甲醚或二氯乙烷，溶胀12小时，冰盐浴下加入催化剂SnCl₄，反应过程中取样测氯含量至1％-20％，出球，水洗、乙醇抽提8小时左右，自然晾干；

氯球的胺化：取所得氯球用二氯乙烷或乙醇等溶剂溶胀，搅拌下加入5-50g乌洛托品，用20％NaOH调PH7-10，于40℃反应6-12小时，然后加入氨水继续反应1-2小时，再加入浓盐酸于45℃反应2-4小时，出球，用碱水、水洗至中性。即制得骨架密度为1.00-1.30，含水量为50-65％，比表面积为100-600m²/g，粒度为30-120目，平均孔径为4-40nm的ADS-3树脂。

Images