CN1418207A

CN1418207A - 基因表达调节失常矫正剂

Info

Publication number: CN1418207A
Application number: CN01806550A
Authority: CN
Inventors: 榎龙嗣; 山下周作; 西村香织; 佐川裕章; 加藤郁之进
Original assignee: Takara Bio Inc
Current assignee: Takara Shuzo Co Ltd; Takara Bio Inc
Priority date: 2000-01-13
Filing date: 2001-01-11
Publication date: 2003-05-14
Also published as: EP1254902A4; KR20030016216A; US20030158250A1; EP1254902A1; AU2001225484A1; WO2001051480A1

Abstract

本发明提供以特定化合物作为有效成分为特征的基因表达调节失常矫正剂，提供特定基因表达调节失常需要进行矫正的疾病的治疗剂或预防剂，以及以将上述化合物用于哺乳动物为特征的基因表达调节失常的矫正方法。

Description

基因表达调节失常矫正剂

技术领域

本发明涉及来自天然物质的生理活性物质的利用，以及以该生理活性物质作为有效成分的药物。

背景技术

白介素是对与免疫反应有关系的细胞间相互作用起着媒介作用的多肽类物质，已知存在白介素1～18，它们各个都对维持生物体的恒定性有贡献。有关的白介素构成了对免疫、炎症反应的控制作用、抗肿瘤作用等起着媒介作用的细胞因子中的一类分子。

白介素中的白介素6(IL-6)作为诱导B细胞的最终分化的分化因子，其cDNA已被克隆。此后逐渐阐明了IL-6不仅与免疫应答有关，而且与造血系统、神经系统的细胞分化和急性反应也有关。另外IL-6与各种免疫异常和炎性疾病、淋巴系肿瘤的发生也有密切关系。

IL-6诱导B细胞产生抗体，虽然IL-6可诱导产生IgM、IgG、IgA各类免疫球蛋白，但与白介素4不同，它不参与类别转换。IL-6也起着B细胞和浆细胞增殖因子的增殖因子作用。再有，IL-6与T细胞系有关，使T细胞增殖。另外IL-6也与造血系统有关，与白介素3协调作用，通过缩短G0期使造血干细胞增殖。另外促进巨核细胞成熟、诱导血小板增加。

另外IL-6也参与生物体对细菌或病毒感染、恶性肿瘤等作出迅速反应的的急性反应。IL-6也与神经系统有关，在神经胚细胞瘤和星形母细胞瘤等从神经系统分泌、神经系统的分化诱导中也有作用[用语文献「细胞因子和增殖因子」、「实验医学」别册、p28-29、(1995年)、羊土公司]。

另外已知白介素10(IL-10)是抑制范围广泛的细胞因子合成的一类细胞因子，是由II型辅助细胞产生的，通过抑制抗原提示细胞间接地抑制由Th1细胞产生的细胞因子。因此，如果IL-10的生产过量，由于抑制干扰素γ等的产生，会使免疫力下降。

另外，作为具有白血球趋向化因子群的趋化因子与过敏性炎症和自我免疫疾病有密切关系。趋化因子按照它们的氨基酸序列中的半胱氨酸的位置大致可分为CXC趋化因子和CC趋化因子2个家族。作为前者如巨噬细胞炎症蛋白2-β(MIP2β)、巨噬细胞炎症蛋白2-α(MIP2α)、生长调节蛋白1(Gro1)等，作为后者如巨噬细胞炎症蛋白1-α(MIP1α)、RANTES[RANTES(调节激活、正常T细胞表达和分泌)]、巨噬细胞炎症蛋白1-β(MIP1β)、肝和激活作用调节性趋化因子(LARC)、由巨噬细胞衍生的趋化因子(MDC)等。

另外已知肿瘤坏死因子α(TNFα)直接引起慢性风湿性关节炎等自我免疫疾病和炎性疾病中炎症。

由此看来，细胞因子本来对生物体的恒定性的维持很重要，但其生产过度时，也会变成引起与免疫、炎症反应有关的各种疾病的发病原因。

另外除了上述那样细胞因子的作用以外，已知花生四烯酸代谢也与生物体内组织的炎症和疼痛的起因有密切关系，所以人们认为与花生四烯酸代谢有关的前列腺素G/H合成酶-2(COX2)等作用的调节在与上述疾病的关系中也很重要。

另外，活性氧也与炎症疾病有很大关系。活性氧大致分为自由基和非自由基活性氧。在自由基系统活性氧中包括羟基自由基、羟过氧自由基、过氧自由基、烷氧自由基、二氧化氮、一氧化氮、チイル基、超氧化物。非自由基系统活性氧中包括单线态氧、过氧化氢、脂质氢过氧化物、次亚氯酸、臭氧、过氧亚硝酸。无论哪种活性氧都与多种疾病，即各种炎性疾病、糖尿病、癌、动脉硬化、神经疾病、局部缺血再灌注障碍等有关。

在生物体内不断地通过一些途径生成低浓度的活性氧。这些活性氧有从生理上线粒体等电子传递系统漏出的超氧化物和过氧化氢、通过铜和铁等过渡金属催化的羟自由基、通过嗜中性细胞和单核细胞等生成的为防止感染的次亚氯酸、由于精氨酸分解生成的NO等，无论哪一种都是不可避免的。对于这些活性氧的生成，生物体具有作为消除活性氧系统的酶、低分子混合物，维持生成和消除的平衡。然而有时不知道生成系统由于什么原因被活化，而相反活性氧的消除系统没有被活化，当活性氧生成系统相对于消除系统占优势时，生物体就要受到氧化的伤害。这样的状态称之为氧化应激。而且不仅当生物体内平衡瓦解时，而且由于大气和食品等生物体外的原因，生物体经常被暴露于氧化应激中，即便在日常生活中也不能避免氧化应激。

血红素加氧酶(HO)是与胆红素的产生有关的生物体内的酶。已知在HO中存在着血红素加氧酶-1(HO1)和血红素加氧酶-2(HO2)两种同功酶。而在上述胆红素中存在着作为脂肪酸抗氧化作用、脂质自由基净化作用、伴随着嗜中性细胞吞噬作用大量产生的氧自由基引起的磷脂、中性脂肪、胆固醇的过氧化氢产生的抑制作用、与动脉硬化发病有密切关系的LDL(Low density lipoprotein)生成的抑制作用、单线态氧的净化作用等抗氧化物质的活性，作为内源性抗氧化物质在生物体内起着重要的作用。各种自由基不仅作用于脂质，也作用于蛋白质、核酸等各种各样的生物体物质，成了引起慢性疾病、癌症的主要原因，但胆红素可以使这样的各种自由基减少[「卟啉-血红素的生命科学-遗传病和癌症工学应用的展开-」、「现代医学」增刊27、(1995)、东京化学同人]。就是说，HO活性低、HO基因的表达低下妨碍对生物体的氧化应激的适应。因此，可以认为HO的产生诱导对生物体内的抗氧化作用、抗炎症作用有贡献。

另外有报道说作为细胞因子一种的上述RANTES增强嗜酸性细胞的活性氧产生，可以期待通过抑制RANTES产生，会收到与HO的生成诱导同样的效果。

已经证实在处于应激负荷状态和向疾病转移的状态中，生物体内恒定性维持功能发生了变化。虽然在生物体内的恒定性维持中涉及到各种作用、上述那样各种生物体内分子的复合作用，但从根本上讲在生物体内存在着基因表达状态的恶性变化(表达调节失常)。然而在诸如受到应激的状态和在避免应激状态的过程中在基因水平由调节引起的基因表达的调节的详细情况还不清楚，因此有关通过基因水平的调节避免基因表达调节失常的手段还没有发现。

发明概述

生物体恒定性的维持与白介素类和在消除活性氧中起作用的生物体内酶等有关，各个白介素或生物体内酶的产生异常会引起更多的疾病。

本发明的目的在于提供对干扰素和生物体内酶等各种生物体内因子的产生进行调节、对生物体恒定性的维持和恢复有用的药物组合物。

如果对本发明进行概述的话，本发明的第一个发明涉及到基因表达调节失常矫正剂，其特征是：含有从下式(I)、(II)表示的化合物以及它们的盐类选择出至少一种化合物作为有效成分。

(式中，X和Y为H或CH₂OH、而当X为CH₂OH时，Y为H，当X为H时，Y为CH₂OH)

(式中，R为从含有SH基化合物除去一个SH的残基)

在本发明的第一个发明中，作为通过该基因表达调节失常矫正剂可以矫正表达调节失常的基因有诸如从以下31种基因群中选择出来的一种以上的基因，这31种基因是：白介素-6[interleukin-6(Genbank Accession号：M14584)]基因、白介素-10[interleukin-10(Genbank Accession号：M57627)]基因、血红素加氧酶-1[hemeoxygenase-1(Genbank Accession号：NM002133)]基因、前列腺素G/H合成酶-2[prostaglandin G/H synthase-2(GenbankAccession号：AL033533)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-1-α[macrophage inflammatory protein-1-α(Genbank Accession号：M23452)]基因、RANTES[RANTES(Genbank Accession号：NM002985)]基因、白介素-1α[interleukin-1α(Genbank Accession号：X02851)]基因、白介素-1β[interleukin-1β(Genbank Accession号：K02770)]基因、肿瘤坏死因子α[tumor necrosis factorα(Genbank Accession号：M10988)]基因、白介素-7受体[interleukin-7 receptor(Genbank Accession号：M29696)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-1-β[macrophage inflammatory protein-1-β(Genbank Accession号：J04130)]基因、肝和激活作用调节性趋化因子[liver and activation-regulatedchemokine(Genbank Accession号：D86955)]基因、巨噬细胞衍生的趋化因子[macrophage-derived chemokine(GenbankAccession号：U83171)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-2-β[macrophage inflammatory protein-2-β(Genbank Accession号：M36821)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-2-α[macrophage inflammatory protein-2-α(Genbank Accession号：M36820)]基因、生长调节蛋白-1[growth regulated protein-1(Genbank Accession号：J03561)]基因、基质金属蛋白酶-9[matrix metalloproteinase-9(GenbankAccession号：J05070)]基因、移动抑制因子相关蛋白-8[migration inhibitory factor-relatedprotein-8(Genbank Accession号：X06234)]基因、溶菌酶[lyzozyme(Genbank Accession号：M21119)]基因、GABA(A)受体相关蛋白[GABA(A)receptor-associatedprotein(Genbank Accession号：NM007278)]基因、干扰素诱导17-kDa/15-kDa蛋白[interferon-induced 17-kDa/15-kDa protein(Genbank Accession号：M13755)]基因、干扰素诱导蛋白p78[interferon-inducible protein p78(GenbankAccession号：M33882)]基因、SCO同系物-2[SCO(cytochrome oxidase deficient，yeast)homolog-2(Genbank Accession号：AL021683)]基因、转酮酶[transketolase(Genbank Accession号：L12711)]基因、腺苷A2a受体[adenosine A2a receptor(Genbank Accession号：S46950)]基因、CD37抗原[CD37 antigen(Genbank Accession号：X14046)]基因、备解素P因子[properdin P factor，complement(Genbank Accession号：M83652)]基因、G-蛋白信号传递的调节蛋白-2[regulator of G-proteinsignaling-2(Genbank Accession号：L13463)]基因、Nef-相关因子-1[Nef-associated factor-1(Genbank Accession号：AJ011896)]基因、骨髓白血病细胞分化蛋白-1[myeloid leukemia celldifferentiation protein-1(Genbank Accession号：L08246)]基因、和信号肽酶复合物[signal peptidase complex(18kDa)(GenbankAccession号：AF061737)]基因。

本发明的第二个发明涉及到对从上述31种基因中选择出1个以上的基因的表达调节失常需要矫正的疾病的治疗药或预防药，其特征是含有从式(I)表示的化合物、式(II)表示的化合物以及它们的盐中选择的化合物作为有效成分。有关的治疗药或预防药特别适用于需要矫正表达调节失常的疾病是炎性疾病的场合。而作为治疗药或预防药的一种模式如白介素-6产生抑制剂、白介素-10产生抑制剂、血红素加氧酶产生抑制剂、前列腺素G/H合成酶-2产生抑制剂、巨噬细胞炎症蛋白-1-α产生抑制剂、RANTES产生抑制剂、肿瘤坏死因子α产生抑制剂等，特别是这里具体例举的各种生物体内因子产生抑制剂或产生诱导剂更适用。

而在本说明书中，「诱导」的意思中包含与投药前相比，投药使生物体内的目的物质的量增加的「增强」意思。

本发明的第3个发明涉及到基因表达调节失常的矫正方法，其特征是将从式(I)表示的化合物、式(II)表示的化合物以及它们的盐中选择出来的至少一种化合物投药给哺乳动物。利用本发明的第3个发明作为可以对基因表达调节失常进行矫正的基因如至少从上述31种基因群中选择出来的一种以上的基因。附图的简单说明

第1图是表示在各种培养条件下对细胞进行培养时培养上清中的IL-6的浓度的图。

第2图是表示在各种培养条件下对细胞进行培养时培养上清中的IL-10的浓度的图。

第3图是表示来自COX2 mRNA的cDNA经PCR扩增结果的琼脂糖凝胶电泳图。

第4图是表示来自MIP1α mRNA的cDNA经PCR扩增结果的琼脂糖凝胶电泳图。

第5图是表示来自RANTEs mRNA的cDNA经PCR扩增结果的琼脂糖凝胶电泳图。

第6图是表示在添加和不添加DGE的各种培养条件下对细胞进行培养时培养上清中的TNFα的浓度的图。

第7图是表示在添加和不添加琼脂二糖的各种培养条件下对细胞进行培养时培养上清中的TNFα的浓度的图。实施发明的最好方式

在本发明中作为有效成分使用从上述式(I)表示的化合物、式(II)表示的化合物以及它们的盐中选择出来的至少一种化合物。另外象下面叙述的那样作为前药可以发挥作用的该化合物的衍生物也可以使用。因此本发明中涉及到的有效成分中只要可以获得本发明所期望的效果，也包括上述式(I)和式(II)的衍生物和它们的盐。

本发明使用的用式(I)表示的化合物可以通过将还原末端含有3，6-脱水半乳糖的化合物，例如琼脂二糖、κ-角叉藻二糖等维持在中性到碱性的条件下制备。另外也可以将结构中含有3，6-脱水半乳糖的化合物进行不足pH7的酸水解和/或酶分解，然后将得到的酸分解物和/或酶分解物维持在中性到碱性的条件下制备。作为结构中含有3，6-脱水半乳糖的化合物如琼脂二糖、琼脂四糖、琼脂六糖、琼脂八糖、κ-角叉藻二糖等。

维持还原末端含有3，6-脱水半乳糖的化合物，例如琼脂二糖、κ-角叉藻二糖等处于pH7以上的中性到碱性的条件下，将从这些化合物选择出的至少一种以上化合物溶解或悬浮之后进行反应的反应液的组成没有特别限定，但最好是用水(例如蒸馏水、离子交换水、自来水等)作为溶剂，对碱的种类也没有特别限定，例如可以使用使氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氨等无机盐、Tris、乙胺、三乙胺等有机碱溶解后的试剂。碱的浓度没有特别限定，最好使用0.0001～5N浓度、更理想的是使用0.001～1N浓度。另外反应温度也没有特别限定，设定在0～200℃比较好，设定在20～130℃更好。而反应时间也没有特别限定，最好设定在数秒～数日。碱的种类和浓度、反应温度和反应时间以及溶解或悬浮于反应液成为原料的上述化合物的量可以根据该化合物的种类和作为目标的用式(I)表示的化合物的生成量适当地进行选择。一般来说，pH7以上比较好，选择高浓度碱、高温，式(I)表示的化合物的生成要比选择低浓度碱、低温条件时快。

例如通过制备琼脂二糖或κ-角叉藻二糖的pH11.5的溶液，于37℃维持5分钟就可生成式(I)表示的化合物。

含有生成的式(I)表示的化合物的碱溶液根据目的，可以用于中和，也可以调到不足pH7作为酸性溶液使用。

结构中含有3，6-脱水半乳糖的化合物可供不足pH7的酸水解或酶解，而通过象上述那样维持在中性到碱性条件下，可以获得式(I)表示的化合物时，作为酸水解最好使用诸如0.001～5N浓度的盐酸、硫酸、硝酸等无机酸、柠檬酸、甲酸、醋酸、乳酸、抗坏血酸等有机酸，以水作为溶剂制备反应液，将适量的作为原料的化合物溶解或悬浮于反应液中进行反应，反应温度优选是0～200℃，反应时间优选是数秒～数日。而进行酶解时，与酸水解中所用的反应液和反应条件同样，例如，作为酶可以适量使用α-琼脂糖酶，如国际公开第00/50578号专利记载的α-琼脂糖酶，在该酶表现出活性的条件下进行反应。

作为反应液中含有的本发明式(I)表示的化合物的纯化手段可以使用化学方法、物理方法等众所周知的纯化手段，可以将凝胶过滤、利用分子量分级膜的分级法、溶剂萃取法、离子交换树脂等各种层析等纯化方法组合进行纯化。

例如，从琼脂二糖的中性到碱性条件下的处理物中纯化X为CH₂OH，而Y为H的式(I)表示的化合物，从κ-角叉藻二糖的中性到碱性条件下的处理物中纯化X为H，而Y为CH₂OH的式(I)表示的化合物。

本发明中使用的用式(II)表示的化合物可以通过式(I)表示的化合物和含有SH基的化合物反应生成。

使用的含有SH基的化合物只要是至少含有一个SH基的化合物即可，并没有特别限定。式(II)中的R表示通过含有SH基的化合物和式(I)表示的化合物的反应，除去式(I)与该含有SH基的化合物结合中消耗的一个SH基后剩下的残基。因此当含有SH基的化合物含有2个以上SH基时，R代表的残基中应当存在一个以上的SH基。有关的含有SH基化合物的例子如巯基甲烷、巯基丁烷、巯基乙醇、含有SH基氨基酸、含有SH基氨基酸的衍生物等。

作为含有SH基的氨基酸例子如半胱氨酸、高半胱氨酸等。而作为含有SH基氨基酸的衍生物如上述氨基酸的衍生物、如半胱氨酸衍生物、含有半胱氨酸的肽、含有半胱氨酸衍生物的肽等。作为半胱氨酸衍生物如半胱氨酸的酰胺化合物、乙酰化合物、酯化合物等。作为含有半胱氨酸的肽只要肽中组成成分有半胱氨酸就可以，并没有特别限定。作为含有该半胱氨酸的肽包括从寡肽，包括如谷胱甘肽那样的低分子到蛋白质那样的多肽高分子物质。而含有胱氨酸或高胱氨酸的肽在可变成反应中含有半胱氨酸或高半胱氨酸的肽的条件下，例如通过组合还原处理也可以作为本发明中含有半胱氨酸或高半胱氨酸的肽使用。作为含有半胱氨酸衍生物的肽如在上述含有半胱氨酸的肽中，半胱氨酸是由半胱氨酸衍生物构成的物质。

作为含有半胱氨酸的肽也包括含有糖质、脂质等含有半胱氨酸的肽。即使是上述各种物质的盐、酸酐、酯等也可以。

在制造以式(II)表示的化合物时的式(I)表示的化合物与含有SH基化合物的反应只要是在众所周知的反应条件下进行就可以，只要是含有SH基的化合物具有反应性的条件就可以，并没有特别限定。例如，在水、PBS等溶液中，使式(I)表示的化合物与含有半胱氨酸或谷胱甘肽等含有SH基的化合物反应，反应温度优选是0～100℃，更理想的温度是30～50℃，而反应时间优选是1小时～1周，更理想的是放置1夜。

作为使式(I)表示的化合物与含有上述SH基的化合物反应生成式(II)表示的化合物的纯化、分离手段可以使用化学方法、物理方法等众所周知的纯化手段。例如，可以组合使用作为上述式(I)表示的化合物的纯化手段例举的各种手段。

而式(I)表示的化合物在生物体内，例如与含有SH基的化合物(半胱氨酸、谷胱甘肽等)反应，从代谢上也可以转换为本发明中使用的式(II)表示的化合物。

作为上述式(I)表示的化合物或式(II)表示的化合物的盐最好是医药上容许的盐，可以通过众所周知的方法进行转换。例如与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸等反应得到的无机盐、与甲酸、醋酸、草酸、丙二酸、琥珀酸等有机酸反应得到的盐，或与碘代甲烷等烷基卤化物、苄基卤化物等反应得到的铵盐等。

上述式(I)或式(II)表示的化合物的光学异构体、酮-烯醇互变异构体、几何异构体等各种异构体都可以在本发明中使用，无论是分离的各个单个异构体，还是其混合物都可以。

本发明中使用的上述式(I)或式(II)表示的化合物是例如有可能生成酯等在体内容易水解，可发挥所预期效果的衍生物(前药)。有关前药的制备根据众所周知的方法进行。

另外上述异构体和衍生物即使是它们的盐也可以。

在本发明中作为有效成分使用的上述式(I)表示的化合物或式(II)表示的化合物以及它们的盐是以抑制癌细胞(HL-60细胞)增殖的活性作为指标进行探索、发现的结果。因此，该有效成分可以认为是具有诱发细胞程序死亡的活性、抑制癌活性作用的成分。具体来说，该有效成分具有各种生物体内因子的产生调节作用、编码该因子的基因的表达调节作用，例如IL-6产生抑制作用、IL-10产生抑制作用、HO产生诱导作用、COX2产生抑制作用、MIP1α产生抑制作用、RANTES产生抑制作用、TNFα产生抑制作用等生理活性。其中作为生理活性这里例举的各种作用都很显著。推测这样的生理活性表现是通过成为产生抑制或产生诱导的对象的各种生物体内因子的基因转录活化抑制或诱导和/或来自各种细胞的产生抑制或诱导起作用的。而其作用对生物体恒定性的维持和恢复有用，也不用特别担心其副作用。有关的生理活性就像后面实施例所阐明的那样。另外已经确认各种生物体内因子的产生抑制作用并不是由细胞毒性所引起的作用。

根据本发明可以提供，根据上述有效成分的活性对本说明书中例举的那样的各种生物体内因子的基因表达调节失常进行矫正的含有上述有效成分的基因表达调节失常矫正剂，另外还提供含有上述有效成分的需要对生物体内因子基因表达调节失常进行矫正的疾病的治疗药或预防药物。作为有关的治疗药或预防药物，例如需要IL-6产生抑制的疾病、需要IL-10产生抑制的疾病、需要HO产生诱导的疾病、需要COX2产生抑制的疾病、需要MIP1α产生抑制的疾病、需要RANTES产生抑制的疾病、需要TNFα产生抑制的疾病等的治疗剂或预防剂。另外作为有关的治疗剂或预防剂可以作为IL-6产生抑制剂、IL-10产生抑制剂、HO产生诱导剂、COX2产生抑制剂、MIP1α产生抑制剂、RANTES产生抑制剂、TNFα产生抑制剂使用，这里具体例举的治疗剂或预防剂比较好用。因此，本发明也包括上述有效成分在IL-6产生抑制剂、IL-10产生抑制剂、HO产生诱导剂、COX2产生抑制剂、MIP1α产生抑制剂、RANTES产生抑制剂或TNFα产生抑制剂制造中的使用。而在本说明书中，所谓「对基因表达调节失常进行矫正」，虽然并没有特别限定，但就由于疾病和种种外部主要原因其表达状态脱离正常水平的基因来说是指使该基因的表达转向生物体恒定性恢复的方向。例如，包括对由于疾病表达量上升，使病情恶化的基因的表达量进行抑制，为使疾病康复诱导表达的基因其表达量要维持和增强。就是说，所谓本发明的基因表达调节失常矫正剂(suppressor forunbalance of gene expressions)是抑制由于疾病和各种外部主要原因引起的基因表达状态失常(unbalance of gene expressions)的抑制因子(suppressor)。所以本发明的基因表达调节失常矫正剂可以用于调节失常的基因表达状态的改善或预防。换言之，本发明的基因表达调节失常矫正剂是在基因表达水平上对生物体的恒定性维持有贡献的物质，也可以称之为基因表达异常的调节剂(modulator ofgene expressions disorder)。

在表现出自身免疫疾病那样症状的前房黏液瘤患者中，由肿瘤细胞产生出大量的IL-6。而由于多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞的增殖可被抗IL-6抗体抑制，所以IL-6作为骨髓瘤细胞的自身增殖因子的可能性很大。另外，原发性肾小球肾炎患者的尿中也含有IL-6，IL-6起着肾小球膜细胞增殖因子的作用。这里例举的疾病无论那一种都可以认为IL-6的异常产生是其中的一个原因，因此本发明的基因表达调节失常矫正剂对有关疾病是有用的，而且对于对IL-6基因表达调节失常需要矫正的疾病，使用本发明的治疗剂或预防剂，通过抑制IL-6的产生可以预防或治疗有关的疾病。

IL-10产生过度时，抑制干扰素γ的产生，结果抑制免疫。因此，本发明的基因表达调节失常矫正剂对于IL-10的产生过度作为一个原因免疫被抑制的疾病，例如需要对干扰素γ基因表达调节失常进行矫正的疾病(例如，哮喘、花粉症、特应性皮炎等过敏性疾病)是有用的，而对于对IL-10基因表达调节失常需要矫正的疾病，使用本发明的治疗剂或预防剂，通过抑制IL-10的产生可以预防或治疗有关的疾病。

在HO中存在着33kDa的HO1和36kDa的HO2的两种同功酶。HO2具有多附带了由HO1的N末端一侧的20个氨基酸组成的氨基酸序列的结构。其余部分的同源性为40～50％，高级结构很相似。两者在C末端都存在疏水区，通过该部分与微粒体膜结合。如果对微粒体膜进行胰蛋白酶处理，由于可以得到具有分解血红素活性的可溶性级分，所以可以认为含有活性中心的大的结构域从细胞质一侧突出。

HO1是诱导酶，在各种细胞中会被作为底物的血红素、重金属离子、某些有机化合物、过氧化氢、或热休克、UV照射、局部缺血那样的化学的、物理的因素显著地诱导。HO2是组成酶，出现在各个组织中，特别是在脑和精巢中活性最高。

HO可以将血红素分解成胆绿素、CO、铁，胆绿素进一步通过还原酶作用生成胆红素。该胆红素可以使各种自由基减少。就是说，通过诱导HO，可以诱导具有抗氧化活性的胆红素的产生，可以治疗或预防由于自由基产生引起的各种疾病(例如各种炎性疾病、糖尿病、癌、动脉硬化、神经疾病、局部缺血再灌注障碍等)。即本发明的基因表达调节失常矫正剂对有关的疾病是有用的，而对于对HO基因的表达调节失常需要进行矫正的疾病，使用本发明的治疗剂或预防剂，通过诱导HO的产生可以预防或治疗有关的疾病。

花生四烯酸代谢与生物体内组织的炎症和疼痛的发生有密切关系。COX2参与花生四烯酸代谢，通过COX2的作用，来自膜磷脂的花生四烯酸被代谢为前列腺素、前列腺环素、血栓烷三种物质。即利用本发明的基因表达调节失常矫正剂通过抑制COX2的产生，可以表现出镇痛、抗炎作用。而对于对COX2基因表达调节失常需要进行矫正的疾病，使用本发明的治疗剂或预防剂，通过抑制COX2的产生可以预防或治疗生物体内组织的炎症和疼痛的发生。

所谓趋化因子是具有特定白血球趋化性的细胞因子，与过敏性炎症、自身免疫疾病有密切关系。趋化因子就像上述那样分为CXC趋化因子和CC趋化因子两个亚家族。趋化因子是由92～99个氨基酸组成，含有可分别结合成二硫键的4个半胱氨酸残基。CXC趋化因子中开始的2个半胱氨酸之间插入了一个其它氨基酸，而CC趋化因子没有其它氨基酸插入。CXC趋化因子主要对嗜中性细胞表现出趋化作用，而CC趋化因子对淋巴细胞、单核细胞、嗜碱性细胞、嗜酸性细胞表现出趋化作用。

RANTES属于CC趋化因子，特别对嗜酸性细胞表现出很强的趋化作用。RANTES是由T细胞、B细胞、单核细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞、血小板、呼吸道上皮细胞以及嗜酸性细胞本身产生的。RANTES不仅对嗜酸性细胞表现出很强的趋化作用，而且与脱粒也有关系。RANTES有选择地使记忆T细胞从辅助细胞(CD⁴⁺)T细胞迁移，是在过敏性炎症中起关键作用的细胞因子。实际上有报道说哮喘时RANTES上升，而在过敏性结膜炎中、泪液中存在RANTES。另外也有报道说RANTES可增强嗜酸性细胞活性氧的产生。因此通过抑制RANTES的产生，预料可以预防或治疗RANTES细胞作用作为一个病因的哮喘、过敏性炎性疾病(例如过敏性结膜炎、过敏性皮炎、过敏性胃肠炎、变应性脉管炎、变应性脊髓炎、变应性肉芽肿性血管炎、变应性脑脊髓炎、过敏性鼻炎、变应性膀胱炎等)。另外由于抑制由嗜酸性细胞引起的活性氧的产生，所以在生物体内表现出抗氧化效果、抗炎症效果。因此本发明的基因表达调节失常矫正剂对RANTES的作用作为一个病因的上述疾病，例如对于作为HO产生诱导有效例举的疾病是有用的，而对于对RANTES的基因表达调节失常需要进行矫正的疾病，使用本发明的治疗剂或预防剂，通过抑制RANTES的产生可以预防或治疗有关的疾病。

MIP1α也与RANTES一样都是CC趋化因子，具有CC趋化因子的特征。然而，有报道说MIP1α的趋化作用比RANTES低，例如在支气管哮喘患者中表现出不同的特征，RANTES从发作初期上升，而MIP1α在治疗后病情进一步恶化前上升。因此通过抑制MIP1α的产生有可能阻止哮喘和上述例举的那样的过敏性炎性疾病的恶化。本发明的基因表达调节失常矫正剂特别对阻止有关疾病的恶化有用，而对于对MIP1α基因表达调节失常需要进行矫正的疾病，使用本发明的治疗剂或预防剂，通过抑制MIP1α的产生可以预防或治疗有关疾病的恶化。

作为在本发明中使用的有效成分之一的下面叙述实施例中记载的琼脂寡糖、DGE由于可以对RANTES和MIP1α两种基因的表达调节失常进行矫正，所以认为有预防、治疗过敏性炎性疾病以及阻止治疗中病体恶化的效果。

另一种细胞因子TNFα在慢性风湿性关节炎等自身免疫疾病和炎性疾病中直接引起与这些疾病相关的炎症。

TNFα虽然是作为在肿瘤部位诱导出血性坏死的因子发现的，但现在认为是与以炎症作为基本的生物体防御和免疫机制有广泛关系的细胞因子，TNFα产生调节机制的破坏会给宿主带来各种各样的不利问题。就是说TNFα过度或无调节地产生与包括下列的许多疾病有关[Molecular Medicine、第33卷、第1010～1020页、第1182～1189页(1996)]，这些疾病是：慢性风湿性关节炎、风湿性脊髓炎、变形性关节炎、痛风性关节炎、败血病、败血性休克、内毒素休克、革兰氏阴性菌败血病、中毒性休克综合症、脑型疟疾、慢性肺炎、移植片对宿主反应、同种移植排斥反应、由流感那样的传染病等引起的发热和肌肉疼痛、感染或恶性肿瘤的二次恶病质、人获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的二次恶病质、AIDS、与AIDS有关的综合症、疤痕瘤形成、溃疡性大肠炎、多发性硬化症、自身免疫糖尿病和全身性红斑狼疮等自身免疫疾病。

因此本发明的基因表达调节失常矫正剂对上述例举的那样的通过TNFα介导的或恶化的疾病有用，而对于对TNFα基因表达调节失常需要进行矫正的疾病，使用本发明的治疗剂或预防剂，通过抑制TNFα的产生可以预防或治疗这样的疾病。例如通过使用本发明的基因表达调节失常矫正剂，可以改善炎症、风湿病、特别是慢性风湿性关节炎的症状、作为炎症标志的C反应蛋白质(CRP值)、类风湿因子(rheumatoidfactor：RF)值、红血球沉降速度(血沉)值骤减，步行困难等复杂症状也有显著改善。

另外在本发明中使用的上述有效成分具有对生物体的恒定性维持重要的其它各种生物体内因子的基因表达调节失常进行矫正的作用。

生物受到来自生活环境的变化等外部原因、来自病毒、细菌感染等内部原因的各种各样的应激。作为应激如处于高温、低温环境、饥饿状态、暴露于化学物质等。例如作为化学物质如十四烷酰基佛波醇醋酸酯(TPA)、脂多糖(LPS)、植物血细胞凝集素(PHA)、Okadicacid等。其中，TPA和LPS用于人体会引起炎症，利用这样的作用可以用于以人工制造炎症模型为目的的用途中。

受到上述那样应激的结果使得生物体内各种各样基因的表达发生变化。其中既有诱导或增强表达、对生物体带来坏影响的基因群(A群)，也有通过抑制表达给正常生活的生命活动带来支撑的基因群(B群)。受到应激，上述各种基因群的表达调节的失常状态如果继续下去，就会导致各种各样疾病的发生。因此使受到应激时基因表达的变动恢复到正常时的状态就会治疗和预防各种各样疾病。

就是说，通过本发明的基因表达调节失常矫正剂可以使包括上述细胞因子类和各种酶类、任何应激产生的表达调节失常的那样的各种生物体内因子的基因表达调节失常状态恢复到通常状态(保持恒定性的健康状态)。

例如，作为本发明的有效成分可以使用的后面叙述的实施例中记载的DGE作为可以将基因表达调节失常矫正到正常状态的基因，具体如表1和表2所示。

表1基因名称(缩写) Genebank Accession号● 细胞因子和细胞因子受体

白介素-6(IL-6) M14584

白介素-1α(IL-1α) X02851

白介素-1β(IL-1β) K02770

肿瘤坏死因子α(TNFα) M10988

白介素-7受体(IL-7r) M29696● CC趋化因子

巨噬细胞炎症蛋白-1-β(MIP1β) J04130

肝和激活作用调节性趋化因子(LARC) D86955

巨噬细胞衍生的趋化因子(MDC) U83171● CXC趋化因子

巨噬细胞炎症蛋白--2-β(MIP2β) M36821

巨噬细胞炎症蛋白--2-α(MIP2α) M36820

生长调节蛋白-1(Gro1) J03561

表2基因名称(缩写) Genebank Accession号● 其它基因

基质金属蛋白酶-9(MMP-9) J05070

移动抑制因子相关蛋白-8(MRP8) X06234

溶菌酶(Lyz) M21119

GABA(A)受体相关蛋白(GABArp) NM007278

干扰素诱导17-kDa/15-kDa蛋白 M13755

(IFNp15/p17)

干扰素诱导蛋白p78(IFNp78) M33882

SCO(cytochrome oxidase deficient， AL021683

yeast)同系物-2(SCO2)

转酮酶(TK) L12711

腺苷A2a受体(ADORA2A) S46950

CD37抗原(CD37) X14046

备解素P因子(PFC) M83652

G-蛋白信号传递的调节蛋白-2(RGS2) L13463

Nef-相关因子-1(NAF1) AJ011896

骨髓白血病细胞分化蛋白-1(MCL1) L08246

信号肽酶复合物(18kDa)(SPC18) AF061737

特别根据本发明可以通过提供含有上述有效成分的适用于对从前面表1和表2例举的各种生物体内因子的基因中选择出的1种以上的基因的表达调节失常需要进行矫正的炎性疾病的治药物或预防药物。

本发明的基因表达调节失常的矫正剂无论是上述有效成分本身，还是含有上述有效成分的组合物都可以。例如可以通过就该有效成分和其它具有同样使用用途的成分等按照常规方法进行混合制造。在相关矫正剂中该有效成分的含有量考虑到投药方法等，最好是按照后面提到的投药量范围给出该有效成分的量，并没有特别限定。另外本发明的治疗剂或预防剂是含有上述有效成分的药物，可以将该有效成分与众所周知的医药用载体组合进行制剂。一般来说，就读有效成分与药学上容许的液体或固体状载体配合，根据需要加入溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等制成片剂、粒剂、散剂、细粉剂、胶囊等固形剂，通常的液体制剂、悬浮剂、乳剂等液体制剂。另外可以作成在使用前添加适当载体成为液体状的干燥品。

本发明的治疗剂或预防剂可以通过口服制剂或注射制剂、点滴用制剂等非口服制剂或外用制剂任一种制剂投药。

医药用载体可以根据上述投药方式和制剂类型进行选择。由固体组合物组成的口服制剂可以作成片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、细粉剂、粒剂等，例如可以利用淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐等。另外在制备口服制剂时，也可以配合粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂、着色剂、香料等。例如作成片剂或丸剂时，根据需要也可以用蔗糖、明胶、羧丙基纤维素等糖衣或胃溶性或肠溶性物质的膜包被。在制造由液体组合物组成的口服制剂时可以作成制药学上容许的乳浊剂、溶液制剂、悬浮剂、糖浆等，例如，可以用纯化水、乙醇等作为载体。另外根据需要也可以添加象湿润剂、悬浮剂那样的辅助剂、增甜剂、风味剂、防腐剂等。

在制造非口服制剂时，根据常规方法将本发明的上述有效成分溶解或悬浮于作为稀释剂的注射用蒸馏水、生理盐水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等，根据需要通过添加杀菌剂、稳定剂、渗透调节剂、无痛化剂等制备。另外也可以制造固体组合物、使用前溶解于无菌水或无菌的注射用溶剂中使用。

作为外用制剂包括经皮投药用的或经粘膜(口腔内、鼻腔内)投药用的固体乃至半固体状、半固体或液体状的制剂。另外也包括栓剂。例如乳剂、洗剂等悬浮剂、外用酊剂、经粘膜投药用液体制剂等液体状制剂、油性软膏、亲水性软膏等软膏制剂、膜制剂、贴剂、泥敷剂等经皮给药或经粘膜投药用的粘结剂。

以上各种制剂可以分别利用众所周知的医药用载体等，根据合适的常规方法制造。而相关制剂中有效成分的含量与上述基因表达调节失常矫正剂的情形一样。

例如，上述基因表达调节失常矫正剂的投药可以根据适合各自制剂形态的投药途径实施。投药方法也没有特别限定，可以通过内用、外用和注射方式投药。注射制剂例如可以通过静脉内、肌肉内、皮下、皮内等投药，外用制剂也包括栓剂等。

另外，投药量可以根据制剂形态、投药方法、使用目的、和哺乳动物(例如患者)的年龄、体重症状适当地设定，没有一定标准，但上述有效成分的投药量成人最好是每天10μg～200mg/kg。在以制剂投药时，有效成分的投药量如果能在上述理想范围内就可以。但是，由于该投药量随着各种条件有所变动，有时投药量比上述投药量少也可能就足够了，或者有时超过上述范围也是需要的。投药可以在所需要的投药量范围内采取1日一次，或1日数次。而作为经口服投药的方法如上述基因表达调节失常矫正剂等可以直接经口投药，或将上述有效成分任意添加到饮食中，经日常摄入也可以获得本发明所期望的效果。

而作为本发明的一种模式提供将上述有效成分用于哺乳动物的基因表达调节失常的矫正方法。特别是更适合于用于矫正上述例举的各种生物体内因子的基因、最好是从上述31种基因群中选择出来的至少1种基因表达调节失常需要进行矫正的基因。这样的方法例如对认为有必要对有关基因表达调节失常进行矫正的，或对有这样必要的哺乳动物将上述有效成分以本发明基因表达调节失常矫正剂投药来实施，通过投药出现所期望的生物体内因子的产生诱导或产生抑制，使生物体内的恒定性恢复。有效成分的投药方法、投药量可以根据上述基因表达调节失常矫正剂等实施。在相关的方法中上述矫正剂等适合用作各种因子的产生诱导剂或产生抑制剂。

另外作为本发明的一种模式也提供各种生物体内因子、例如与细胞因子类和酶有关的疾病的治疗剂或预防剂的筛选方法。相关的筛选方法例如是通过对于编码上述例举的各种生物体内因子的基因、最好是从上述31种基因群中选择出来的至少1种基因经处理使其表达量发生变化，研究被检测物质能否对上述基因的表达量变化进行矫正来实施的。

而在本发明中使用的上述有效成分中无论那一种即使经口一次投药100mg/kg也没有发现死亡的例子。实施例

以下给出实施例对本发明进行更具体说明，但本发明不限定于这些实施例。

制造例1 L-甘油基-1，5-环氧-1αβ，6-二羟基-顺-己-3-烯-2-酮(DGE)and D-甘油基-1，5-环氧-1αβ，6-二羟基-顺-己-3-烯-2-酮(κ-DGE)的制备

市售的琼脂(Agar Noble)2.5g悬浮于50ml的0.1N HCI中，于100℃下加热13分钟，进行溶解。冷却到室温，用NaOH将pH调至12，然后进行中和处理。

对中和处理物进行以下正相HPLC，得到各个峰的级分，减压干燥后溶解在水中。使用HL-60细胞对各个级分的癌细胞增殖抑制活性进行测定，确认在保留时间为4.05分～4.16分的级分中存在癌细胞增殖抑制活性。

然后大量提取4.05～4.16分钟的级分，进行结构解析，确认该级分是L-甘油基-1，5-环氧-1αβ，6-二羟基-顺-己-3-烯-2-酮(L-glycero-1，5-epoxy-1αβ，6-dihydroxy-cis-hexa-3-en-2-one：DGE)。以下给出了常规HPLC的条件：

柱子：PALPAK TypeS(4.6mm×250mm、宝酒造公司生产)

移动相A：90％乙腈水溶液

移动相B：50％乙腈水溶液

流速：1ml/分

洗脱：移动相A(10分钟)→从移动相A到移动相B的直线梯度洗脱(40分钟)→移动相B(10分钟)

检测：195nm的吸光度

柱温：40℃

同样κ-角叉藻二糖的碱处理根据上述琼脂情形处理，从得到的碱处理物中同样可以纯化D-甘油基-1，5-环氧-1αβ，6-二羟基-顺-己-3-烯-2-酮(κ-DGE)。

κ-角叉藻二糖制备如下。即将κ-角叉聚糖(carrageenan)(Sigma公司生产、C-1263)2.5g悬浮于50ml的0.1N HCI中，于100℃下加热16分钟，进行溶解。冷却到室温，用NaOH将pH调至中性附近，然后用Cosmonise Filter S(ナカライテスク社制)进行过滤，用下常规HPLC进行分离，收集保留时间为27.8分的κ-角叉藻二糖，减压干燥后，制备κ-角叉藻二糖。以下给出了常规HPLC的条件：

柱子：PALPAK TypeS(4.6mm×250mm、宝酒造公司生产)

移动相A：90％乙腈水溶液

移动相B：50％乙腈水溶液

流速：1ml/分

洗脱：移动相A(10分钟)→从移动相A到移动相B的直线梯度洗脱(40分钟)→从移动相B(10分钟)

检测：195nm的吸光度

柱温：40℃

制造例2 5-L-谷光甘肽-S-基-2-羟基-3，7-二氧杂双环[2.2.2]辛-1-醇(DGE-GSH)的制备

将DGE和还原型谷胱甘肽(GSH：nakalaitesque公司生产)分别溶解于PBS中，使终浓度为20mM，于37℃下反应过夜。将该反应液100μl用正相柱PAL-PAK TypeS进行分级。流速1ml/分，0～10分钟用90％乙腈水溶液洗，10～50分钟用90％乙腈水溶液到50％乙腈水溶液梯度进行洗脱，于检测波长195nm下进行正相层析，每1.5分钟收集一次级分。对各个级分进行浓缩干燥后，再溶解于50μl的蒸馏水中，使用HL-60细胞对各个级分的癌细胞增殖抑制活性进行测定。结果确认级分30～40附近的级分能够抑制细胞增殖。将同样制备的活性级分50μl进行反相层析(TSKgel ODS-80Ts(5μm)/东洋曹达公司生产、4.6mm×250mm)分级。于流速1ml/分钟，0～15分钟用含有0.1％TFA的蒸馏水洗，15～30分钟用从含有0.1％TFA的蒸馏水到含有0.1％TFA的50％乙腈水溶液的直线梯度洗，30～45分钟用含有0.1％TFA的50％乙腈水溶液洗脱，检测波长215nm的条件下进行层析，每1.5分钟收集一次级分。对各个级分进行浓缩干燥后，再溶解于50μl的蒸馏水中，使用HL-60细胞对各个级分的癌细胞增殖抑制活性进行测定。结果确认级分保留时间在4～9分钟附近的级分有抑制细胞增殖活性。

将上述正相的层析反复进行10次，获得读活性级分，浓缩干燥后，再溶解于1ml的蒸馏水中通过正相层析制备纯化级分。然后将该正相层析得到的纯化级分进行上述的反相层析，得到活性级分，浓缩干燥。结果从20mM DGE和20mM的谷胱甘肽的1ml反应液可以得到5mg的活性化合物。对该化合物的结构进行确定，确认该化合物就是5-L-谷胱甘肽-S-基-2-羟基-3，7-二氧杂双环[2.2.2]辛-1-醇(DGE-GSH)。

实施例1

向ddy小鼠(日本SLC；雌性，7周令)的腹腔内注入4ml含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基(Bio Whittaker，12-702F)，充分培养后，抽取腹腔细胞。将腹腔细胞悬浮于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基，使腹腔细胞终浓度为10⁶个/ml，加到48孔微滴板中，每孔500μl，于5％二氧化碳、37℃条件下培养2小时，然后除去培养上清，得到贴壁细胞，作为巨噬细胞使用。向各个孔各加入500μl含有10％胎牛血清、不含苯基红，含有2mM L-谷氨酰胺的Dulbecco改进的Eagle培养基(Bio Whittaker公司制造，12-917F)。向各个孔分别添加5μl的2mM和1mM DGE水溶液(终浓度分别为20μm和10μm)，5μl的10μg/ml的12-邻-十四烷酰基佛波醇13-乙酸酯(TPA；Gibco公司生产，13139-019)，再培养14小时，回收培养上清。培养上清中的白介素-6(IL-6)的含量用酶免疫夹心分析仪(ELISA；Matched antibody Pair SamplePak mouse IL-6，Endogen生产)进行测定。另外作为阴性对照，设定不添加DGE和TPA水溶液的组(对照)，作为阳性对照只添加TPA水溶液的组(对照+TPA)。而测定全都进行2次。

结果可以确认在添加DGE的组中抑制TPA诱导IL-6产生，该抑制依赖于DGE的浓度。结果如图1所示。即，图1是表示在各种培养条件下培养细胞时的培养上清中的IL-6的浓度的图，横轴表示培养条件，纵轴表示IL-6浓度(ng/ml)。

另外对κ-DGE、DGE-GSH也进行同样的实验，确认了IL-6产生抑制作用。

实施例2

将RAW264.7细胞(ATCC TIB 71)悬浮于含有10％胎牛血清(Gibco公司生产)的Dulbecco改进的Eagle培养基(Bio Whittaker公司制造，12-604F)，使细胞终浓度为3×10⁵个/ml，加到48孔微滴板中，每孔0.5ml，于5％二氧化碳、37℃条件下培养过夜。然后向各个孔分别添加5μl的2mM DGE水溶液(终浓度20μm)，培养5小时后，添加5μl的100μg/ml的脂多糖(LPS；Sigma公司生产，L-2012)，再培养18小时后，回收培养上清。培养上清中的白介素-10(IL-10)的含量用酶免疫夹心分析仪进行测定。另外作为阴性对照，设定不添加DGE和LPS水溶液的组(对照)，作为阳性对照只添加LPS水溶液的组(对照+LPS)。而测定全都进行2次。

结果可以确认在添加DGE的组中抑制LPS诱导IL-10产生，该抑制依赖于DGE的浓度。结果如图2所示。即，图2是表示在各种培养条件下培养细胞时的培养上清中的IL-10的浓度的图，横轴表示培养条件，纵轴表示IL-10浓度(pg/ml)。

另外对κ-DGE、DGE-GSH也进行同样的实验，确认了IL-10产生抑制作用。

实施例3

将RAW264.7细胞(ATCC TIB 71)悬浮于含有10％胎牛血清(Gibco公司生产)的Dulbecco改进的Eagle培养基(Bio Whittaker公司制造，12-604F)，使细胞终浓度为3×10⁵个/ml，加到6孔微滴板中，每孔5ml，于5％二氧化碳、37℃条件下培养过夜。然后向各个孔分别添加50μl的4mM、2mM或1mM的DGE水溶液(终浓度分别为40μm、20μm、10μm)，培养15小时。作为HO1诱导的阳性对照，设定添加5μl的3mM 15-去氧-Δ12，14-前列腺素J2(CaymanChemical，18570)二甲基亚砜溶液组，作为阴性对照设定添加水的组(在二甲基亚砜溶液中没有看到HO1的产生诱导作用)。使用刮刀将细胞从培养板上剥离下来，回收细胞，悬浮于含有0.05mM胃蛋白酶抑制剂A(Sigma公司生产，P5318)、0.2mM亮抑蛋白酶肽(Sigma公司生产，L2884)、1mM苯甲基磺酰氟(nakalai tesque，273-27)、10mM乙二胺四乙酸二钠、0.1％Triton X-100的0.1M Tris-HCl缓冲液(pH7.5)，冻融-次后，将离心分离得到的上清作为蛋白质级分。蛋白质级分中的蛋白质含量利用Micro BCA蛋白分析试剂(宝酒造公司销售Pierce公司制造，P7411)测定。将得到的蛋白质级分样品与含有等量的4％十二烷基硫酸钠(SDS)、2％2-巯基乙醇、0.001％溴酚兰、20％甘油的0.125M的Tris-HCl缓冲液(pH6.8)混合，于100℃处理5分钟，向12.5％SDS-聚丙烯酰胺凝胶加入相当于蛋白质量10μg的样品，在20mA的恒电流下进行电泳。电泳后凝胶于含有48mMTris、39mM甘氨酸、20％甲醇、0.0375SDS的印迹缓冲液中，用电转移印迹槽半-驱动印迹装置(BioRad公司生产)按照附带的程序于15V恒电压下向PVDF膜(Millipore公司生产、IPVHDDD 10)转移25分钟。转移后的PVDF膜于Block Ace(大日本制药公司生产、UK-B25)溶液中于4℃下封闭过夜。封闭后的膜用含有0.1％Tween20的磷酸缓冲盐水慢慢地振荡下洗3次，共15分钟。然后在含有200ng/ml抗HO1抗体(N-19；Santa Cruz公司生产，sc-7696)的10％Block Ace、含有0.1％Tween20的磷酸缓冲盐水慢慢地振荡下于室温反应1小时，然后用含有0.1％Tween20的磷酸缓冲盐水慢慢地振荡下洗3次，共15分钟。接下来在含有0.1％过氧化物酶标记的兔抗山羊IgG(H+L)抗体(Zymed公司生产、61-1620)的10％Block Ace、含有0.1％Tween20的磷酸缓冲盐水慢慢地振荡下于室温反应1小时，然后用含有0.1％Tween20的磷酸缓冲盐水慢慢地振荡下洗5次，共15分钟。然后用蛋白质印迹化学发光试剂Plus(第一化学公司销售，NEN LifeScience Product公司生产、NEL1103)，按照附带的程序对PVDF膜进行染色，对X光片(Kodak，CAT165 1454)进行感光。感光后的膜通过FPM800(富士胶卷公司生产)显像。

结果在添加DGE的组中可以看到来自HO1蛋白质的带。而带的强度依赖于DGE的浓度。其结果如表3所示。表中HO1蛋白质带的强度用+表示。就是说、表3中完全没有看到带的都用-表示，而+-、+、++的顺序表示带强度逐渐增强。

表3样品 HO1蛋白质带的强度水(阴性对照) -终浓度40μM DGE ++终浓度20μM DGE +终浓度10μM DGE +-15-去氧-Δ12，14-前列腺素J2 ++(阳性对照)

另外对κ-DGE、DGE-GSH也进行同样的实验，确认了HO产生诱导作用。实施例4(1)PBMC的分离和保存

从健康人志愿者采集400ml血。将采集的血用PBS(-)稀释2倍，铺在Ficoll-paque(Pharmacia公司生产)上，于500×g离心20分钟。用移液管将中间层的末梢血单核细胞(PBMC)回收，用RPMI1640培养基(Bio Whittaker公司生产)洗净。采集的PBMC悬浮于由90％FCS(JRHbioscience公司生产)/10％二甲基亚砜组成的保存液，保存在液氮中。实验时将这些保存的PBMC于37℃水浴中迅速融解，用含有10μg/ml Dnase(Calbiochem公司生产)的RPMI1640培养基洗净后，通过台昐蓝染色法算出活细胞数共实验用。(2)单核细胞的分离

将PBMC悬浮于含有5％人AB型血清、0.1mM非必需氨基酸、1mM丙酮酸钠、2mM L-谷氨酰胺(Bio Whittaker公司生产)、10mMHEPES(nakalai tesque公司生产)、1％链霉素-青霉素(Gibco BRL公司生产)的RPMI1640培养基(以下简称为5HR PMI培养物)，终浓度为4×10⁶cells/ml，然后铺在6孔细胞培养板(Falcon公司生产)中，每孔3ml，于37℃、5％CO₂条件下于湿式孵育箱内孵育1.5小时。1.5小时后将非贴壁细胞吸引除去，用RPMI1640培养基将各个孔洗净，加2ml的5HRPMI培养基，得到单核细胞。(3)RNA的制备

对于上述得到的单核细胞向各个孔添加8μl的10mM DGE水溶液或作为对照添加8μl的水，于37℃、5％CO₂条件下于湿式孵育箱内孵育5小时。然后向各个孔添加2μl的1μg/ml LPS水溶液或2μl的25mM TPA二甲基亚砜溶液，或者什么物质也不加再培养4小时后，使用RNeasy Mini Kit(QIAGEN公司生产，74104)，根据说明书从各个细胞制备RNA。将对细胞只添加水或只添加DGE水溶液的组作为阴性对照，另外将对细胞添加水和LPS水溶液或TPA溶液的组作为阳性对照。(4)cDNA的合成

使用循环变温加热器(GeneAmp PCR System 9600，AppliedBiosystems)将含有上述制备的RNA 0.5μg和10mMTris-HCl(pH8.3)、50mM KCl、5mMMgCl₂、1mMdNTP混合液、150pmol Random6mers、60U的核糖核酸酶抑制剂(宝酒造公司生产2310A)、15U逆转录酶XL(AMV)(宝酒造公司生产，2620A)的总液量为60μl的混合液于30℃保温10分钟，然后继续于42℃保温1小时后，为使酶失活于99℃加热5分钟，制备cDNA。(5)引物的合成

根据COX2的mRNA的碱基序列[GenBank Accessionn号：ALo33533]，设计PCR反应用的寡核苷酸引物，通过DNA合成仪(Applied Biosystems公司生产)合成。即分别合成寡核苷酸引物CX1(序列表中序列1所示；以下同样)、CX2(序列2)。根据MIP1α的mRNA的碱基序列[GenBank Accessionn号：M23452]，分别合成寡核苷酸引物MP1(序列3)、MP2(序列4)。根据RANTES的mRNA的碱基序列[GenBank Accessionn号：NM002985]，分别合成寡核苷酸引物RS1(序列5)、RS2(序列6)。另外作为内部标准根据人β-肌动蛋白的mRNA的碱基序列[GenBank Accessionn号：M10277]，分别合成寡核苷酸引物AC1(序列7)、AC2(序列8)。(6)以cDNA为模板通过PCR法扩增DNA片段

在含有各5pmol合成的寡核苷酸引物CX1、CX2或MP1、MP2或RS1、RS2和作为内部标准β-肌动蛋白的寡核苷酸引物AC1、AC2与上述制备的cDNA溶液2.5μl、10×Ex Taq缓冲液(宝酒造公司生产)2.5μl、0.625U TakaRa Ex Taq聚合酶(宝酒造公司生产，RR001A)、0.2mM dNTP混合液的总液量为25μl的反应系统中，使用循环变温加热器，按照于94℃下2分钟一个循环，然后进行每一循环为95℃30秒、59℃30秒、73℃30秒的30个循环，最后于72℃5分钟的一个循环的程序进行反应。反应后的样品在分析之前一直冷冻保存在-20℃。

对各个PCR反应液10μl通过2.0％琼脂糖凝胶电泳进行分析。结果可以看到在单独添加LPS的组中来自COX2、MIP1α、RANTES的各个mRNA带的扩增。即，这些基因被LPS诱导已被证实。与此相反，在添加DGE和TPA的组中看不到无论来自COX2、MIP1α、RANTES的任一个mRNA带的扩增。即表明无论由DGE，还是由LPS引起的基因诱导被抑制了。另外，单独添加TPA的组中，确认了来自COX2、MIP1α的各mRNA的带的增幅。即，确认了这些基因通过TPA诱导。与此相对，添加了DGE和TPA的组中，确认了来自于COX2、MIP1α的任一个来自于mRNA的带的扩增。即确认了由DGE、由TPA引起的这些基因的诱导被抑制。其结果如图3～5所示。即图3表示来自COX2的、图4表示来自MIP1α的、图5表示来自RANTES的各个mRNA的cDNA经PCR扩增的反应液通过电泳分析的结果。图3～5中的各个带分别表示：带1表示100bp DNA ladder marker，带2表示对照(水)，带3表示添加DGE组，带4表示添加LPS组，带5表示添加DGE和LPS组，带6表示添加TPA组，带7表示添加DGE和TPA组。

实施例5(1)单核细胞的分离

象实施例4-(1)那样分离PBMC。将PBMC悬浮于含有5％人AB型血清、0.1mM非必需氨基酸、1mM丙酮酸钠、2mML-谷氨酰胺(BioWhittaker公司生产)、10mM HEPES(nakalai tesque公司生产)、1％链霉素-青霉素(Gibco BRL公司生产)的RPMI1640培养基(以下简称5HRPMI培养基)，终浓度为2×10⁶cell/ml，然后铺在24孔细胞培养板(Falcon公司生产)中，每孔1ml，于37℃、5％CO₂条件下于湿式孵育箱内孵育1.5小时。1.5小时后将非贴壁细胞吸引除去，用RPMI1640培养基将各个孔洗净，加1ml的5HRPMI培养基，得到单核细胞。(2)TNFα ELISA

对于上述得到的单核细胞，向各个孔分别添加10μl的1mM、2mM、或4mM DGE水溶液(终浓度分别为10μM、20μM、40μM)，或5mM、10mM、或20mM琼脂二糖水溶液(终浓度分别为50μM、100μM、200μM)或作为对照添加10μl水(即DGE和琼脂二糖的浓度为0μM)，于37℃、5％CO₂条件下于湿式孵育箱内孵育5小时。然后向各个孔添加5μl的200ng/ml LPS水溶液再培养4小时，回收上清。培养上清中的TNFα含量用酶免疫夹心分析仪(ELISA；Human TNFα，ELISAKik，Endogen公司生产，EH2-TNFA)进行测定。对于细胞，将只添加水或只添加DGE水溶液(终浓度40μM)、或琼脂二糖的水溶液(终浓度200μM)的组作为阴性对照，另外对于细胞将添加水和LPS水溶液的组作为阳性对照。而测定全都进行2次。结果可以确认在添加DGE或琼脂二糖的组中LPS刺激TNFα产生的抑制，该抑制依赖于DGE或琼脂二糖的浓度。这些结果如图6、7所示。即，图6是表示在添加或不添加DGE的各种培养条件下培养细胞时的培养上清中的TNFα的浓度图，图7是表示在添加或不添加琼脂二糖的各种培养条件下对细胞进行培养时的培养上清中的TNFα的浓度的图。在图6、图7中横轴表示培养条件，纵轴表示TNFα浓度(pg/ml)。

实施例6(1)引物的合成

根据下表给出的各个基因的mRNA的碱基序列设计PCR反应用的寡核苷酸引物，象上述那样进行合成。表4、5给出了本实施例中评价的各个基因、GeneBank Accession号、寡核苷酸引物名称、序列表中该引物的序列号。作为内部标准根据人β-肌动蛋白的mRNA的碱基序列(GenBank Accessionn号：M10277)，合成序列表中序列号61表示的寡核苷酸引物AC3。

表4基因名称(缩写) Genebank 引物名称(序列号)

Accession号● 细胞因子和细胞因子受体

白介素-6(IL-6) M14584 IL6-F(序列号9)

IL6-R(序列号10)

白介素-1α(IL-1α) X02851 IL1α-F(序列号11)

IL1α-R(序列号12)

白介素-1β(IL-1β) K02770 IL1β-F(序列号13)

IL1β-R(序列号14)

肿瘤坏死因子α(TNFα) M10988 TNF-F(序列号15)

TNF-R(序列号16)

白介素-7受体(IL-7r) M29696 IL7r-F(序列号17)

IL7r-R(序列号18)● CC趋化因子

巨噬细胞炎症蛋白-1- J04130 MIP1β-F(序列号19)

β(MIP1β) MIP1β-R(序列号20)

肝和激活作用调节性趋 D86955 LARC-F(序列号21)

化因子(LARC) LARC-R(序列号22)

巨噬细胞衍生的趋化因 U83171 MDC-F(序列号23)

子(MDC) MDC-R(序列号24)● CXC趋化因子

巨噬细胞炎症蛋白-2-β M36821 MIP2β-F(序列号25)

(MIP2β) MIP2β-R(序列号26)

巨噬细胞炎症蛋白-2-α M36820 MIP2α-F(序列号27)

(MIP2α) MIP2α-R(序列号28)

生长调节蛋白-1(Gro1) J03561 Gro1-F(序列号29)

Gro1-R(序列号30)

表5基因名称(缩写) Genebank 引物名称(序列号)

Accession号● 其它基因

基质金属蛋白酶-9(MMP-9) J05070 MMP9-F(序列号31)

MMP9-R(序列号32)

移动抑制因子相关蛋白- X06234 MRP8-F(序列号33)

8(MRP8) MRP8-R(序列号34)

溶菌酶(Lyz) M21119 Lyz-F(序列号35)

Lyz-R(序列号36)

GABA(A)受体相关蛋白 NM007278 GABArp-F(序列号37)

(GABArp) GABArp-R(序列号38)

干扰素诱导17-kDa/15-kDa M13755 IFNp15/p17-F(序列号39)

蛋白(IFNp15/p17) IFNp15/p17-R(序列号40)

干扰素诱导蛋白 M33882 IFNp78-F(序列号41)

p78(IFNp78) IFNp78-R(序列号42)

SCO(cytochrome oxidase AL021683 SCO2-F(序列号43)

deficient，yeast)同系物- SCO2-R(序列号44)

2(SCO2)

转酮酶(TK) L12711 TK-F(序列号45)

TK-R(序列号46)

腺苷A2a受体(ADORA2A) S46950 ADORA2A-F(序列号47)

ADORA2A-R(序列号48)

CD37抗原(CD37) X14046 CD37-F(序列号49)

CD37-R(序列号50)

备解素P因子(PFC) M83652 PFC-F(序列号51)

PFC-R(序列号52)

G-蛋白信号传递的调节蛋 L13463 RGS2-F(序列号53)

白-2(RGS2) RGS2-R(序列号54)

Nef-相关因子-1(NAF1) AJ011896 NAF1-F(序列号55)

NAF1-R(序列号56)

骨髓白血病细胞分化蛋白- L08246 MCL1-F(序列号57)

1(MCL1) MCL1-R(序列号58)

信号肽酶复合物 AF061737 SPC18-F(序列号59)

(18kDa)(SPC18) SPC18-R(序列号60)(2)以cDNA为模板通过PCR法扩增DNA片段

使用上述给出的各个合成的寡核苷酸引物和作为内部标准实施例4-(5)合成的1-β-肌动蛋白的寡核苷酸引物AC1、AC2或上述的AC3以及用与实施例4-(4)同样方法合成的cDNA溶液，用与实施例4-(6)同样的方法进行PCR反应。PCR的循环数象下表表示的那样进行30循环或35循环。反应后的样品在分析之前一直冷冻保存在-20℃。

对各个PCR反应液5μl通过3.0％琼脂糖凝胶电泳进行分析。结果如表6、7所示。但表中各个基因的表达量(通过来自各个基因的mRNA的cDNA的PCR扩增的程度进行评价)用从表达量少开始依次为-、+/-，+，++，+++5个阶段表示。而表中的Con.表示对照(添加水组)，DGE表示添加DGE组，LPS表示添加LPS组，L+D表示添加DGE和LPS组，TPA表示添加TPA组，T+D表示添加DGE和TPA组。

表6

基因 Con. DGE LPS L+D TPA T+D 循环数· 细胞因子和细胞因子受体

IL-6 - - +++ - + - 30

IL-1α +/- - +++ +/- + - 30

IL-1β + + +++ + ++ + 30

TNFα +/- - ++ +/- + +/- 30

IL-7r +/- - ++ - - - 30· CC趋化因子

MIP1β + +/- +++ +/- ++ +/- 30

LARC +/- +/- +++ + ++ + 30

MDC - - + - - - 30· CXC趋化因子

MIP2β + + ++ + ++ + 30

MIP2α +/- +/- + +/- + +/- 35

Gro1 + + +++ + ++ + 30

表7

基因名称

Con. DGE LPS L+D TPA T+D 循环数

(缩写)· 其它基因

MMP-9 - - - - + - 30

MRP8 + + +/- + +/- + 30

Lyz + + +/- + +/- + 30

GABArp + + +/- + + + 30

IFNp15/p17 + + +++ +/- + +/- 30

IFNp78 + +/- ++ - + +/- 30

SCO2 + + - + + + 30

TK +/- +/- +/- + - + 30

ADORA2A + +/- +++ - + - 35

CD37 +/- +/- - + +/- +/- 35

PFC + + - + + + 35

RGS2 +/- +/- - +/- +/- +/- 35

NAF1 + - ++ +/- +/- - 30

MCL1 + + +/- + + + 30

SPC18 + + +/- + + + 30

从以上结果可知DGE起着对于当将由LPS或TPA造成的应激性刺激加到细胞上时，由于该刺激表达量增大的基因会使其表达量减少，而对于表达量减少的基因会使其表达量增大的作用。即确认DGE在使生物体的恒定性恢复的方向上起作用。序列表说明

序列号1和2是根据人COX2的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号3和4是根据人MIP1α的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号5和6是根据人RANTES的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号7和8是根据人β-肌动蛋白的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号9和10是根据人IL-6的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号11和12是根据人IL-1α的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号13和14是根据人IL-1β的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号15和16是根据人TNFα的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号17和18是根据人IL-7r的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号19和20是根据人MIP1β的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号21和22是根据人LARC的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号23和24是根据人MDC的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号25和26是根据人MIP2β的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号27和28是根据人MIP2α的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号29和30是根据人Gro1的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号31和32是根据人MMP-9的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号33和34是根据人MRP8的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号35和36是根据人Lyz的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号37和38是根据人GABArp的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号39和40是根据人IFNp15/p17的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号41和42是根据人IFNp78的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号43和44是根据人SCO2的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号45和46是根据人TK的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号47和48是根据人ADORA2A的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号49和50是根据人CD37的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号51和52是根据人PFC的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号53和54是根据人RGS2的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号55和56是根据人NAF1的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号57和58是根据人MCL1的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号59和60是根据人SPC18的mRNA的碱基序列设计的引物序列。

序列号61是根据人β-肌动蛋白的mRNA的碱基序列设计的引物序列。产业上利用的可能性

就像以上记载的那样，本发明提供对生物体恒定性维持所必需的，例如白介素类的产生调节、生物体内酶的产生调节有用的基因表达调节失常矫正剂，另外提供含有矫正剂的对各种生物体内的基因表达调节失常需要进行矫正的疾病的治疗剂或预防剂，可以治疗或预防由于该因子的产生异常引起的疾病。

另外本发明提供生物体内的基因表达调节失常的矫正方法。该方法使用上述矫正剂等，由这些因子进行所期望的因子的产生诱导或产生抑制，使生物体内的恒定性恢复。在相关的方法中，上述矫正剂比较适合用作各种因子的产生诱导剂或产生抑制剂。另外作为本发明的一种模式也提供各种生物体内因子、例如与细胞因子类和酶有关的疾病的治疗剂或预防剂的筛选方法。

序列表<110>宝酒造株式会社(Takara Shuzo Co.，Ltd.)<120>治疗剂<130>01-011-PCT<150>JP 2000-4989<151>2000-01-13<150>JP 2000-303711<151>2000-10-03<160>61<210>1<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人前列腺素G/H合成酶-2的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>1acggtgaaac tctggct 17<210>2<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人前列腺素G/H合成酶-2的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>2ggatgctcct gtttaag 17<210>3<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-1-(的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>3acattccgtc acctgctcag 20<210>4<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-1-(的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>4ggtcgctgac atatttctgg 20<210>5<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人RANTES的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>5ctccacaggt accatgaagg 20<210>6<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人RANTES的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>6gtaagttcag gttcaaggac 20<210>7<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人β-肌动蛋白的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>7tggccgtacc actggcatcg 20<210>8<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人β-肌动蛋白的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>8tccttctgca tcctgtcggc aa 22<210>9<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-6的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>9ccactcacct cttcagaacg 20<210>10<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-6的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>10gatgagttgt catgtcctgc 20<210>11<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-1α的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>11gctgcatgga tcaatctgtg 20<210>12<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-1α的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>12tcttcatctt gggcagtcac 20<210>13<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-1β的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>13tggcagaagt acctaagctc 20<210>14<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-1β的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>14catatggacc agacatcacc 20<210>15<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人肿瘤坏死因子α的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>15aaaggacacc atgagcactg 20<210>16<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人肿瘤坏死因子α的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>16cgagaagatg atctgactgc 20<210>17<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-7受体的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>17tggagaaagt ggctatgctc 20<210>18<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人白介素-7受体的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>18ggcggtaagc tacatcatgc 20<210>19<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-1-β的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>19gaagcttctg agttctgcag 20<210>20<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-1-β的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>20ttcctgtctc tgagcagctc 20<210>21<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人肝和调节激活的趋化因子的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>21aagagtttgc tcctggctgc 20<210>22<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人肝和调节激活的趋化因子的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>22ttggatttgc gcacacagac 20<210>23<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞衍生的趋化因子的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>23acagactgca ctcctggttg 20<210>24<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞衍生的趋化因子的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>24aggctcttca ttggctcagc 20<210>25<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-2-β的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>25cgtggtcact gaactgcgc 19<210>26<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-2-β的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>26acttctctcc tgtcagttgg 20<210>27<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-2-α的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>27tgctgctcct gctcctgg 18<210>28<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人巨噬细胞炎症蛋白-2-α的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>28ctgcccattc ttgagtgtgg 20<210>29<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人生长调节蛋白-1的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>29aacatccaaa gtgtgaacgt g 21<210>30<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人生长调节蛋白-1的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>30ctctgcagct gtgtctctc 19<210>31<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人基质金属蛋白酶-9的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>31cttctccaga agcaactgtc 20<210>32<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人基质金属蛋白酶-9的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>32accacaactc gtcatcgtcg 20<210>33<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人移动抑制因子相关蛋白-8的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>33tcatcgacgt ctaccacaag 20<210>34<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人移动抑制因子相关蛋白-8的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>34accagaatga ggaactcctg 20<210>35<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人溶菌酶的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>35tgtcctcctt tctgttacgg 20<210>36<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人溶菌酶的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>36tgacaggcat taactgctcc 20<210>37<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人GABA(A)受体相关蛋白的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>37aagaagagca tccgttcgag 20<210>38<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人GABA(A)受体相关蛋白的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>38tggtgttcct ggtacagctg 20<210>39<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人干扰素诱导17-kDa/15-kDa蛋白的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>39catgtcggtg tcagagctg 19<210>40<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人干扰素诱导17-kDa/15-kDa蛋白的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>40ctcacttgct gcttcaggtg 20<210>41<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人干扰素诱导蛋白p78的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>41gtggctgaga acaacctgtg 20<210>42<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人干扰素诱导蛋白p78的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>42agtcagatcc gggacatctc 20<210>43<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人SCO同系物-2的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>43gcagcagcaa aagcgaacag 20<210>44<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人SCO同系物-2的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>44gatgaagaca ggctgcactg 20<210>45<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人转酮酶的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>45cctacgtatc agctccatcc 20<210>46<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人转酮酶的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>46catacagagc cctctgacag 20<210>47<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人腺苷A2a受体的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>47tgtggctcaa cagcaacctg 20<210>48<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人腺苷A2a受体的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>48gaccacatcc tcaaagagac 20<210>49<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人CD37抗原的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>49gcctcatcaa gtacttcctc 20<210>50<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人CD37抗原的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>50atgaggactt ggaaccagtc 20<210>51<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人备解素P因子的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>51ctaccagaaa cgtagtggtg 20<210>52<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人备解素P因子的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>52gtgtctcctt aggttcgtgg 20<210>53<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人G-蛋白信号调节因子-2的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>53ttggctgttc aacacgactg 20<210>54<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人G-蛋白信号调节因子-2的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>54ggcagttgta aagcagccac 20<210>55<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人Nef-相关因子-1的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>55agcagaattc accagagagc 20<210>56<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人Nef-相关因子-1的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>56ttccatcttc ggtgagcctg 20<210>57<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人骨髓白血病细胞分化蛋白-1的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>57gcatgcttcg gaaactggac 20<210>58<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人骨髓白血病细胞分化蛋白-1的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>58gaagttacag cttggagtcc 20<210>59<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人信号肽酶复合物(18kDa)的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>59gattgtagtg gtgctcagtg 20<210>60<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人信号肽酶复合物(18kDa)的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>60tggcatcttc ccaggaacag 20<210>61<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据人β-肌动蛋白的mRNA的核苷酸序列设计的引物。<400>61caagagatgg ccacggctgc t 21

Claims

1.基因表达调节失常矫正剂，其特征是：含有从下式(I)、(II)表示的化合物以及它们的盐中选择出的至少一种化合物作为有效成分，

式中，X和Y为H或CH₂OH，其中当X为CH₂OH时，Y为H，当X为H时，Y为CH₂OH，式中，R为从含有SH基化合物除去一个SH基的残基。

2.权利要求1记载的基因表达调节失常矫正剂，其特征是可以对从以下31种基因群中选择出来的一种以上的基因的表达调节失常进行矫正，这31种基因是：白介素-6[interleukin-6(Genbank Accession号：M14584)]基因、白介素-10[interleukin-10(Genbank Accession号：M57627)]基因、血红素加氧酶-1[hemeoxygenase-1(Genbank Accession号：NM002133)]基因、前列腺素G/H合成酶-2[prostaglandin G/H synthase-2(GenbankAccession号：AL033533)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-1-α[macrophage inflammatory protein-1-α(Genbank Accession号：M23452)]基因、RANTES[RANTES(Genbank Accession号：NM002985)]基因、白介素-1α[interleukin-1α(Genbank Accession号：X02851)]基因、白介素-1β[interleukin-1β(Genbank Accession号：K02770)]基因、肿瘤坏死因子α[tumor necrosis factorα(Genbank Accession号：M10988)]基因、白介素-7受体[interleukin-7 receptor(Genbank Accession号：M29696)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-1-β[macrophage inflammatory protein-1-β(Genbank Accession号：J04130)]基因、肝和激活作用调节性趋化因子[liver and activation-regulatedchemokine(Genbank Accession号：D86955)]基因、巨噬细胞衍生的趋化因子[macrophage-derived chemokine(GenbankAccession号：U83171)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-2-β[macrophage inflammatory protein-2-β(Genbank Accession号：M36821)]基因、巨噬细胞炎症蛋白-2-α[macrophage inflammatory protein-2-α(Genbank Accession号：M36820)]基因、生长调节蛋白-1[growth regulated protein-1(Genbank Accession号：J03561)]基因、基质金属蛋白酶-9[matrix metalloproteinase-9(GenbankAccession号：J05070)]基因、移动抑制因子相关蛋白-8[migration inhibitory factor-relatedprotein-8(Genbank Accession号：X06234)]基因、溶菌酶[lyzozyme(Genbank Accession号：M21119)]基因、GABA(A)受体相关蛋白[GABA(A)receptor-associatedprotein(Genbank Accession号：NM007278)]基因、干扰素诱导17-kDa/15-kDa蛋白[interferon-induced 17-kDa/15-kDa protein(Genbank Accession号：M13755)]基因、干扰素诱导蛋白p78[interferon-induced protein p78(GenbankAccession号：M33882)]基因、SCO同系物-2[SCO(cytochrome oxidase deficient，yeast)homolog-2(Genbank Accession号：AL021683)]基因、转酮酶[transketolase(Genbank Accession号：L12711)]基因、腺苷A2a受体[adenosine A2a receptor(genbank Accession号：S46950)]基因、CD37抗原[CD37 antigen(Genbank Accession号：X14046)]基因、备解素P因子[properdin P factor，complement(Genbank Accession号：M83652)]基因、G-蛋白信号传递的调节蛋白-2[regulator of G-proteinsignaling-2(Genbank Accession号：L13463)]基因、Nef-相关因子-1[Nef-associated factor-1(Genbank Accession号：AJ011896)]基因、骨髓白血病细胞分化蛋白-1[myeloid leukemia celldifferentiation protein-1(Genbank Accession号：L08246)]基因和信号肽酶复合物[signal peptidase complex(18kDa)(GenbankAccession号：AF061737)]基因。

3.对从权利要求2记载的基因群中选择出1个以上的基因表达调节失常需要进行矫正的疾病的治疗药或预防药，其特征是含有从下式(I)、(II)表示的化合物以及它们的盐中选择出至少一种化合物作为有效成分，

4.权利要求3记载的治疗药或预防药，其中的疾病是炎性疾病。

5.权利要求3或4记载的治疗药或预防药，其是白介素-6产生抑制剂、白介素-10产生抑制剂、血红素加氧酶产生诱导剂、前列腺素G/H合成酶-2产生抑制剂、巨噬细胞炎症蛋白-1-α产生抑制剂、RANTES产生抑制剂或肿瘤坏死因子α产生抑制剂。

6.基因表达调节失常的矫正方法，其特征是：投给哺乳动物以化合物，该化合物是从下式(I)、(II)表示的化合物以及它们的盐中选择出的至少一种化合物，式中，X和Y为H或CH₂OH，其中当X为CH₂OH时，Y为H，当X为H时，Y为CH₂OH，

式中，R为从含有SH基化合物除去一个SH基的残基。

7.权利要求6记载的基因表达调节失常的矫正方法，该方法可对从权利要求2记载的基因群选择出的一种以上的基因的表达调节失常进行矫正。