CN1413732A - 口蹄疫病毒抗原稀释技术 - Google Patents
口蹄疫病毒抗原稀释技术 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1413732A CN1413732A CN 02124644 CN02124644A CN1413732A CN 1413732 A CN1413732 A CN 1413732A CN 02124644 CN02124644 CN 02124644 CN 02124644 A CN02124644 A CN 02124644A CN 1413732 A CN1413732 A CN 1413732A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- foot
- grams
- mouth disease
- virus antigen
- disease virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
一种口蹄疫病毒抗原稀释技术,其稀释剂是由氯化钠、磷酸氢二钠、氯化钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、葡萄糖、氯化钙等按一定比例配制而成的10倍浓缩液,使用时应用双蒸水进行10倍稀释,无菌检验阴性后方可使用。该稀释剂可对浓缩病毒抗原进行任意倍数的稀释,稀释前须用7.5%NaHCO3将稀释剂的pH值调至7.6。该稀释技术是在国家攀登计划和中国农业科学院兰州兽医研究所所长基金的资助下,对口蹄疫病毒抗原进行深入研究而确立的。它是一种符合我国国情的简便、廉价、可靠的有效方法,不影响口蹄疫病毒毒力、毒价和有效抗原含量,能满足口蹄疫疫苗工业化大生产的要求,为口蹄疫疫苗/抗原库的建立和应用提供不可或缺的重要技术支撑。
Description
(一)技术领域
本发明属于兽医生物制品稀释技术领域,具体说是一种口蹄疫病毒抗原稀释技术。
(二)背景技术
口蹄疫是世界上最重要的动物疫病之一,被国际兽疫局(OIE)列为A类疫病之首,素有“政治经济病”之称,世界各国极为重视,是广泛研究和防制的重点。为了有效控制和预防口蹄疫,国际上一些消灭或正在控制口蹄疫的国家已建立了区域联防或自己国家的口蹄疫疫苗/抗原库。我国虽然于二十世纪80年代末研制成功了猪、牛口蹄疫O型灭活疫苗并用于实际防疫,但其质量和数量远远不能满足实际防疫的需要,也尚未建立自己国家的疫苗/抗原库。
口蹄疫病毒属小RNA病毒科,不仅极易变异,而且免疫原性弱。而疫苗的免疫效力与其所含的有效抗原-140s颗粒(完整口蹄疫病毒颗粒)直接相关。因此,为避免疫苗中抗原不足引致的免疫失败,提高疫苗效力,减少接种剂量及建立疫苗/抗原库,研究建立一种适合于疫苗工业化生产的口蹄疫病毒抗原浓缩、保存、稀释技术是当前生产急需解决的问题。
口蹄疫病毒抗原稀释技术是口蹄疫疫苗工业化大生产和建立疫苗/抗原库的关键技术之一。迄今,国内尚无这方面的专门技术,在相关研究中一般用0.5%水解乳蛋白液对口蹄疫病毒抗原进行稀释,这种方法虽然简单,也不影响口蹄疫病毒的感染性和140s抗原含量,但相对而言成本昂贵,无法满足口蹄疫疫苗工业化大生产的要求,也不符合我国国情。国际上已建立口蹄疫区域联防或自己国家的疫苗/抗原库的国家如加拿大、墨西哥、美国、澳大利亚、新西兰、爱尔兰、英国、挪威、瑞典、荷兰、芬兰、德国、法国、意大利、泰国、粮农组织亚泰区域动物生产与保健委员会等在口蹄疫疫苗/抗原库的建立和应用中,对保存的病毒抗原主要用磷酸盐缓冲液(PBS)进行稀释,但经实验证实,PBS会降低口蹄疫病毒的感染性滴度,从而影响疫苗免疫效力,同时对实验动物—乳鼠有一定毒性作用。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一种既不影响口蹄疫病毒毒力、毒价和有效抗原含量,又简便、廉价、可靠的口蹄疫病毒抗原稀释技术,它可有效解决口蹄疫疫苗工业化生产和构建疫苗/抗原库急需解决的技术难题。为实现上述目的,本发明采取的技术措施是:用研究确定的稀释技术对浓缩口蹄疫病毒抗原进行任意倍数地稀释,以满足口蹄疫疫苗工业化大生产和构建疫苗/抗原库的要求。即本发明提供的口蹄疫病毒抗原稀释技术包括:
一种口蹄疫病毒抗原稀释剂,它由下列组分制成:
氯化钠(NaCl) 68.00~90.00克
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 0~1.25克
磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O) 0~1.40克
氯化钾(KCl) 2.00~4.20克
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0~0.6克
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0~2.0克
葡萄糖 5.00~10.00克
氯化钙(CaCl2) 0~2.50克
以上药品均为分析纯。
一种上述口蹄疫病毒抗原稀释剂的配制方法,配制时,先将氯化钙倒入50ml双蒸水中,置4℃冰箱单独溶解,用双蒸水在容量瓶中依顺序逐一溶解其它试剂,再将已溶解好的氯化钙溶液缓慢倾入容量瓶内,最后用双蒸水定容至1000毫升,4℃冰箱保存;以上为10倍浓缩液,用时应用双蒸水进行10倍稀释,充分混匀后10~12磅高压灭菌15min,无菌检验阴性后方可使用。
一种使用上述稀释剂对浓缩口蹄疫病毒抗原进行稀释的方法,该稀释剂可对浓缩病毒抗原进行任意倍数的稀释,稀释前须用7.5%NaHCO3将稀释剂的pH值调至7.6。
本发明提供的上述口蹄疫病毒抗原稀释技术,是在国家攀登计划和中国农业科学院兰州兽医研究所所长基金的资助下,对口蹄疫病毒抗原进行深入研究而确立的,是一种符合我国国情的简便、廉价、可靠的有效方法,可降低口蹄疫疫苗生产成本和劳动强度,提高疫苗效力,不影响口蹄疫病毒毒力、毒价和有效抗原含量,能满足口蹄疫疫苗工业化大生产的要求,为口蹄疫疫苗/抗原库的建立和应用提供不可或缺的重要技术支撑。
(四)具体实施方式:
实施例1:
①稀释剂的配制
a.配方
氯化钠(NaCl) 80.00克
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 1.25克
氯化钾(KCl) 4.00克
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.60克
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 2.00克
葡萄糖 10.00克
氯化钙(CaCl2) 1.40克
b.配制方法:配制时,应先将氯化钙倒入50ml双蒸水中,置4℃冰箱单独溶解,用双蒸水在容量瓶中依顺序逐一溶解其它试剂,再将已溶解好的氯化钙溶液缓慢倾入容量瓶内,最后用双蒸水定容至1000毫升,4℃冰箱保存;以上为10倍浓缩液,用时应用双蒸水进行10倍稀释,充分混匀后10~12磅高压灭菌15min,无菌检验阴性后方可使用。
②浓缩口蹄疫病毒抗原的稀释方法:该稀释剂可对浓缩病毒抗原进行任意倍数的稀释。稀释前须用7.5%NaHCO3将稀释剂的pH值调至7.6。
③效果分析:通过15L转瓶BHK-21细胞按500ml/瓶的接毒量制备的牛源、猪源浓缩口蹄疫病毒抗原用稀释剂进行1∶1稀释,使其与普通毒(即按1000ml/瓶接毒量制备的病毒)浓度相当,然后将其与普通毒在不同温度下放置不同时间后,测定TCID50,结果见下表。表明:研究确定的稀释剂对口蹄疫病毒的感染性和活力均无明显影响。用该稀释剂稀释的病毒液制造了4批共计1000万毫升牛O型口蹄疫灭活疫苗,经检验和使用证明不仅无任何不良反应,而且免疫效果良好;本稀释剂配制方法简单,所用药品价格低廉,稀释方法也简单可靠,若将15L转瓶细胞的接毒量由现在的2500ml/瓶改为800ml/瓶,在疫苗乳化时用该稀释剂予以稀释,可节省大量的人力、物力和财力。
表 不同稀释剂稀释病毒的log10TCID50
病毒来源 不同处理病毒的log10TCID50
及制备 30℃24hr 30℃7d 4℃21d -18℃420d
牛源稀释毒 7.33 3.50 7.33 6.83
牛源普通毒 7.50 3.33 7.50 6.83
猪源稀释毒 7.50 3.50 7.50 6.83
猪源普通毒 7.50 3.50 7.50 7.50
实施例2:
①稀释剂的配制
a.配方
氯化钠(NaCl) 68.00克
氯化钾(KCl) 4.00克
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 2.00克
磷酸二氢(NaH2PO4·H2O) 1.40克
葡萄糖 10.00克
氯化钙(CaCl2) 2.00克
b.配制方法(同实施例1)
②浓缩口蹄疫病毒抗原的稀释方法:(同实施例1)
③效果分析:用15L转瓶BHK-21细胞按500ml/瓶的接毒量制备的病毒用稀释剂等量稀释后与1000ml/瓶接毒量制备的病毒比较,其对敏感细胞的半数感染量均为10-7.8。表明:研究确定的稀释剂对口蹄疫病毒的感染性和活力均无明显影响。
Claims (4)
1、一种口蹄疫病毒抗原稀释剂,其特征在于它由下列组分制成:
氯化钠(NaCl) 68.00~90.00克
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 0~1.25克
磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O) 0~1.40克
氯化钾(KCl) 2.00~4.20克
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0~0.6克
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0~2.0克
葡萄糖 5.00~10.00克
氯化钙(CaCl2) 0~2.50克
以上药品均为分析纯。
2、根据权利要求1所述的口蹄疫病毒抗原稀释剂,其特征在于上述配方的优选值为:
氯化钠(NaCl) 80.00克
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 1.25克
氯化钾(KCl) 4.00克
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.60克
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 2.00克
葡萄糖 10.00克
氯化钙(CaCl2) 1.40克
3、一种上述口蹄疫病毒抗原稀释剂的配制方法,其特征在于:先将氯化钙倒入50ml双蒸水中,置4℃冰箱单独溶解,用双蒸水在容量瓶中依顺序逐一溶解其它试剂,再将已溶解好的氯化钙溶液缓慢倾入容量瓶内,最后用双蒸水定容至1000毫升,4℃冰箱保存;以上为10倍浓缩液,用时应用双蒸水进行10倍稀释,充分混匀后10~12磅高压灭菌15min,无菌检验阴性后方可使用。
4、一种使用上述稀释剂对浓缩口蹄疫病毒抗原进行稀释的方法,其特征在于该稀释剂可对浓缩病毒抗原进行任意倍数的稀释,稀释前须用7.5%NaHCO3将稀释剂的pH值调至7.6。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 02124644 CN1225283C (zh) | 2002-06-19 | 2002-06-19 | 口蹄疫病毒抗原稀释技术 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 02124644 CN1225283C (zh) | 2002-06-19 | 2002-06-19 | 口蹄疫病毒抗原稀释技术 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1413732A true CN1413732A (zh) | 2003-04-30 |
CN1225283C CN1225283C (zh) | 2005-11-02 |
Family
ID=4745422
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 02124644 Expired - Lifetime CN1225283C (zh) | 2002-06-19 | 2002-06-19 | 口蹄疫病毒抗原稀释技术 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1225283C (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106109414A (zh) * | 2016-07-28 | 2016-11-16 | 金宇保灵生物药品有限公司 | 一种口蹄疫疫苗稀释液及其制备方法与应用 |
CN109464662A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-03-15 | 中牧实业股份有限公司 | 一种疫苗抗原稀释剂 |
CN114904006A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-08-16 | 中农威特生物科技股份有限公司 | 一种口蹄疫抗原热稳定性保护剂及其制备方法和应用 |
CN115960842A (zh) * | 2022-11-26 | 2023-04-14 | 哈尔滨维科生物技术有限公司 | 一种提高重组禽流感病毒感染鸡胚能力的方法 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102011009102A1 (de) * | 2011-01-21 | 2012-07-26 | Audi Ag | Batterie mit einer Mehrzahl von Batteriezellen |
-
2002
- 2002-06-19 CN CN 02124644 patent/CN1225283C/zh not_active Expired - Lifetime
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106109414A (zh) * | 2016-07-28 | 2016-11-16 | 金宇保灵生物药品有限公司 | 一种口蹄疫疫苗稀释液及其制备方法与应用 |
CN106109414B (zh) * | 2016-07-28 | 2019-07-16 | 金宇保灵生物药品有限公司 | 一种口蹄疫疫苗稀释液及其制备方法与应用 |
CN109464662A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-03-15 | 中牧实业股份有限公司 | 一种疫苗抗原稀释剂 |
CN114904006A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-08-16 | 中农威特生物科技股份有限公司 | 一种口蹄疫抗原热稳定性保护剂及其制备方法和应用 |
CN114904006B (zh) * | 2022-05-27 | 2023-10-17 | 中农威特生物科技股份有限公司 | 一种口蹄疫抗原热稳定性保护剂及其制备方法和应用 |
CN115960842A (zh) * | 2022-11-26 | 2023-04-14 | 哈尔滨维科生物技术有限公司 | 一种提高重组禽流感病毒感染鸡胚能力的方法 |
CN115960842B (zh) * | 2022-11-26 | 2023-09-01 | 哈尔滨维科生物技术有限公司 | 一种提高重组禽流感病毒感染鸡胚能力的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1225283C (zh) | 2005-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1225283C (zh) | 口蹄疫病毒抗原稀释技术 | |
CN101095950B (zh) | 一种稳定的人用狂犬病疫苗冻干制剂及其制备 | |
Marchant et al. | The Thyroid Accumulation, Oxidation and Metabolic Fate of 35S—Methimazole in the Rat | |
CN109046267A (zh) | 一种柠檬酸接枝壳聚糖小球的制备方法及其应用 | |
Cline et al. | Red blood cell life span using DFP32 as a cohort label | |
Flynn et al. | In vitro activity of readily available household materials against HIV-1: is bleach enough? | |
Porter et al. | The effect of the isomers of α-chlorohydrin and racemic β-chlorolactate on the rat kidney | |
CN1739505A (zh) | 一种左旋奥硝唑注射制剂 | |
CN1231263C (zh) | 口蹄疫病毒抗原保存技术 | |
CN105111513A (zh) | 一种基于改性天然高分子的复合膜及其应用 | |
US20230076197A1 (en) | Application of hypericum japonicum thumb extract in the preparation of a drgu against the blue-ear disease | |
CN111956661A (zh) | 二氧化氯在防治非洲猪瘟中的应用 | |
CN101708332A (zh) | 兔三联灭活疫苗及其制备方法和应用 | |
CN1460857A (zh) | 牛病毒性腹泻病毒抗体间接elisa检测方法 | |
CN103575884A (zh) | 胶体金法丙型肝炎病毒(hcv)快速诊断试剂盒 | |
Bernstein | Rates of glycolysis in human red cells in relation to energy requirements for cation transport | |
Kahlenberg | Lack of stereospecificity of glucose binding to human erythrocyte membrane protein upon reduction with sodium borohydride | |
Moskovitz et al. | Effect of diclofenac sodium (Voltaren) on spermatogenesis of infertile oligospermic patients | |
CN106176634A (zh) | 一种猪传染性胃肠炎‑流行性腹泻二联弱毒疫苗脂质体稀释液冻干制品及其制备方法 | |
Peixoto et al. | Effects of HgCl2 on porphobilinogen‐synthase (EC 4.2. 1.24) activity and on mercury levels in rats exposed during different precocious periods of postnatal life | |
CN103157104B (zh) | 猪瘟疫苗的硫代硫酸钠稀释液 | |
CN1681523A (zh) | 降低胆固醇的组合物和方法 | |
CN1487297A (zh) | 一种人与动物旋毛虫病的检测方法及试剂盒 | |
Murdoch et al. | Effects of bicarbonate on the respiration and glycolytic activity of boar spermatozoa | |
CN1723913A (zh) | 一种辅酶a舌下含片的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20051102 |
|
CX01 | Expiry of patent term |