CN1401079A - 鉴别产生lgG的细胞与不产生lgG的细胞的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了一种用于区分产生IgG细胞和不产生IgG细胞的新方法,这种方法是通过用流式细胞术区分荧光标记的包胶化的产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞。

Description

鉴别产生IgG的细胞与不产生IgG的细胞的方法
本发明涉及一种新的鉴别产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞的方法,所述的方法通过用流式细胞术鉴别荧光标记的包胶化的产生IgG和不产生IgG的细胞。
在人类医学的诊断和治疗目的中越来越广泛地使用免疫球蛋白G(IgG)(Scheinberg,D.A.和Chapman,P.B.,Birch,J.R.和Lennox,E.S.编辑,1995,Wiley,45-105)。
使用细胞包胶化从而区分产生IgG细胞和不产生IgG的细胞的鉴别方法是已知的(Gray,F.等人,1995,J.Imm.Meth.,182,155-163;Kenney,J.S.等人,1995,Bio/Tech 13,787-790),而且这些方法可以从如One Cell SystemInc.(Cambridge,MA)购置的。然而,所述的这些方法有一些缺陷,即它们对于鉴别高产细胞系没有足够的分辨率。
本发明的目的是提供一种改良的方法,其具有较高的分辨率,可以鉴别高水平的高产量细胞系。
权利要求1所述的新方法实现了这一目的。
在本发明中,如下将产生IgG的细胞与不产生IgG的细胞区分开:
a)将产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞包埋于基质中,该基质含有针对产生的IgG的捕捉剂;
b)在产生IgG的时间段中培育所述的基质;
c)荧光标记所述的产生的IgG;
d)用流式细胞术鉴别荧光标记的、包胶化的产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞;
其中所述的捕捉剂是蛋白质A和/或蛋白质G。
图1显示了包胶化的细胞产生的IgG捕捉的流程图。
图2显示了与抗体相比用蛋白质A作为捕捉剂对IgG的捕捉
图3显示了蛋白质A的工作浓度。
图4显示了培养物中非产生性GS-NS0细胞的百分比与流式细胞术估计的百分比之间的比较。
细胞
按IgG的表达和分泌的效率,将用于本发明的细胞定义为产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞。不产生IgG的细胞可产生和分泌少量的IgG(至多为约0.1-0.2μg/ml)或根本不表达或分泌IgG。产生IgG的细胞可表达和分泌约0.2μg/ml以上的IgG。用于鉴别产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞的优选细胞是哺乳动物的细胞。
本发明可以使用各种哺乳动物细胞。可以使用的哺乳动物细胞的实例为浆细胞瘤(plastocytoma)、骨髓瘤、杂交瘤、中国仓鼠卵巢(CHO)、纤维肉瘤或鼠源性或人源性淋巴母细胞瘤样细胞(lymphoblastoid)。本发明优选使用的哺乳动物细胞是鼠骨髓瘤细胞。鼠骨髓瘤细胞的实例是NS0和用谷氨酰胺-合成酶转染的NS0(GS-NS0)。特别有用的是GS-NS0。
IgG
由本发明使用的细胞产生的IgG可以是人、猪、豚鼠、牛、山羊、绵羊、猴、马、小鼠、大鼠或仓鼠的IgG。也可以产生人源化的嵌合IgG。优选产生人IgG。另外,细胞也可以产生IgG的片段,如Fc-、Fab-、(Fab)2-片段。
包埋化
可用如WO82/02561所述的标准方法或One Cell Systms Inc提供的流程将产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞包埋化。
通常,将细胞加入含有包胶化(encapsulation)基质(如可从One CellSystem Inc.,购得的CelBioGelTM包胶化基质)的液化凝胶。包胶化基质通常由琼脂糖构成。可以将基质生物素化。特别优选的是生物素化的琼脂糖基质。
加入到液化凝胶的细胞的优选数量在105到108细胞/ml之间,优选的为5×105到107细胞/ml之间。
用乳化基质和微滴形成剂(如CellSys 101TM微滴形成剂)可以进一步处理在液化的包胶化基质中的细胞,从而产生凝胶微滴(GMD),每个GMD含有至少一个细胞,所述的乳化基质通常由油(宜为矿物油)构成,如CelMixTM乳化基质。可以从One Cell Systems Inc.购得CelMixTM乳化基质和CellSys 101TM微滴形成剂。
在产生GMD之前或之后,可以将捕捉剂蛋白质A和/或蛋白质G结合于基质。较佳地,在产生GMD之后结合蛋白质A和/或蛋白质G。结合的发生通常是首先将基质与接头一起培育,随后与蛋白质A和/或蛋白质G一起培育。当基质是生物素化的时,优选的接头是亲和素,如链霉亲和素。优选使用的是链霉亲和素。可以将蛋白质A和/或蛋白质G生物素化,从而当接头是亲和素时可以结合于该接头。较佳地,使用生物素化的蛋白质A和/或蛋白质G,尤其是生物素化的蛋白质A。一般加入基质或GMD中的蛋白质A和/或蛋白质G的量为0.001到5mg/ml之间,宜为0.01到0.1mg/ml之间。
产生IgG的培育
产生IgG的培育时间取决于细胞的具体的IgG的产率以及所用的细胞类型。当使用鼠骨髓瘤细胞时,培育时间通常为1到15分钟之间,较佳地为3到12分钟。
培育温度还取决于细胞的具体的IgG的产率以及所用的细胞类型。当使用鼠骨髓瘤细胞时,培育在2℃到15℃之间,较佳地2℃到8℃之间的温度进行。一般在培育过程中加入对照IgG,以确认捕捉剂的结合。
标记和用流式细胞术筛选
任何识别产物IgG而且偶联于荧光化合物的物质都可用作荧光标记物。通常,可以使用缀合于荧光化合物且对产物IgG是特异性的抗体,或缀合于荧光化合物且对产物IgG特异性的抗原。较佳地,使用缀合于荧光化合物且对产物IgG特异性的抗体。对产物IgG特异性的抗体可以是选自A、D、E、G或M类的免疫球蛋白的免疫球蛋白,而且该抗体应衍生自与表达和分泌IgG的细胞无关的宿主细胞。较佳地,对产生的IgG特异性的抗体也是IgG。当表达和分泌产物IgG的细胞是鼠细胞时,标记抗体抗原是如从山羊衍生的IgG。
荧光化合物的实例为藻红蛋白、异硫氰酸荧光素、得克萨斯红、罗丹明或花青染料。可以将缀合于藻红蛋白且对产物IgG特异性的IgG用作优选荧光标记物。含有荧光化合物且对产物IgG特异性的IgG是可以购得的。
当将对IgG特异性的抗体用作标记物时,宜在标记前将封阻剂加至包胶化的细胞中,从而防止分泌的其它产物发生结合并减少非特异性结合。可以将胎牛血清或脱脂乳溶液(如Marvel)用作优选的封阻血清。
按One Cell System Inc.提供的流程选择进行常规流式细胞术条件,以鉴别产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞。通常,用线性正向散射(FSc)和对数侧向散射(SSc)曲线上显现的散射特性来检测空GMD和含有至少一个细胞的GMD。首先测试阴性对照(无捕捉剂),调节FSc和SSc直到在FSc/SSc图的中央附近出现占有群体。调节临界鉴别器以减少空GMD的出现。单占有亚群体被选通(gated),并在适合荧光染料的检测PMT(光电倍增管)(设为对数状态)上的分析荧光值。调节荧光检测PMT,使群体位于荧光频率分布图的第一对数十进位(first log decade)。然后测试阳性和待测样品,通常每份样品收集10,000个值。由流式细胞术进行的鉴别可以是分析性或制备性的。任选地,在流式细胞术之前可以将GMD染色,从而通过将细胞与染色化合物(如碘化丙锭)接触而筛选活细胞。
在产生IgG的细胞和不产生IgG细胞的群体中得到的产生IgG的细胞的检测极限,通常为总细胞数量的95和99.99%之间,较佳地为总细胞数量的99到99.5%之间。
本发明的另一主题是含有作为IgG捕捉剂的生物素化的蛋白质A和/或蛋白质G的生物素化的琼脂糖基质,其中用亲和素接头将生物素化的蛋白质A和/或蛋白质G连接于基质。较佳地,基质含有蛋白质A作为IgG捕捉剂,且亲和素接头是链霉亲和素。
实施例
实施例1
细胞和基质的制备
在无菌闪烁管中将15ml CelMixTM 200cs乳化基质平衡至37℃。在200×g离心10分钟得到106个活GS-NS0细胞。将这些细胞重悬浮于100μl磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。在400μl液化的CelBioGelTM中加入25μl无菌过滤处理过的Pluronic acid,并在37℃平衡凝胶3分钟。将重悬浮的细胞加入CelBioGelTM中,轻微混合,并在37℃培育3分钟。用1ml移液管将此CelBioGelTM细胞混合物以螺旋方式(从底部到顶部)逐滴加至试管中温热的乳化基质油中,以避免加入气泡。用CellSys 101TM微滴形成剂乳化此混合物,其在室温以2100rpm离心1分钟,在冰浴中以2100rpm离心1分钟和在冰浴中以1100rpm离心10分钟从而产生25μm微滴。将包胶化的混合物分配到2个15ml的锥形管中,小心地用5ml PBS覆盖。在600g离心此溶液10分钟,从而可以看见GMD沉淀。用移液管除去油相,抽出上清液,混合这两支管中的沉淀物,并加入2ml PBS。将每份10ml PBS加入15ml锥形管中,并用GMD覆盖。在400×g离心此混合物(如果需要,重复该步骤)。除去上清液,将细胞重悬浮于合适的溶液中。
A.链霉亲和素桥接
将GMD沉淀物重悬浮于2.3ml冷DMEM培养液中,评估10μl等份的%占有率。将0.3ml用作“未染色”的阴性对照。80μl 1mg/ml的链霉亲和素用2ml冷L15细胞培养基(Biowhittaker)稀释,并加到2ml GMD中,用旋转仪在室温培育15分钟。用10ml冷PBS洗涤此混合物(在400×g离心5分钟,2次)。
B.生物素化的捕捉IgG的结合
将GMD悬浮于2.3ml L15培养基(0.3ml用作“未捕捉”的阴性对照)。用2ml冷L15稀释80μl 1.0mg/ml生物素化的蛋白质A捕捉剂(Pierce)。将稀释的捕捉剂加入2ml GMD中,用旋转仪在室温培育此溶液15分钟,用冷PBS洗涤(在400×g离心5分钟,2次),并重悬浮于3.3ml冷L15中(0.3ml用作阳性对照)。
C.包胶化细胞的分泌培育
将GMD加入25ml冷L15中,4℃在T75烧瓶中平衡,并在4℃培育10分钟。用0.8ml L15稀释6μl对照IgG(Chromepure公司的人IgG)。在各对照中加入0.4ml稀释的对照IgG,室温用旋转仪培育此溶液15-30分钟。培育结束后,用冷PBS/2%胎牛血清(FBS)洗涤所有样品(在400×g离心5分钟)二次。将分泌样品重悬浮于2ml冷L15+5%FBS中,将对照悬浮于1ml冷L15+5%FBS中。
D.用检测抗体染色
用2ml冷L15+5%FBS稀释40μl(用于样品)和4μl(用于对照)0.5mg/ml山羊抗人IgG-抗-(f(ab’)2-R-藻红蛋白(R-PE)检测抗体。将40μl制备物加入GMD,并将4μl制备物中的1μl加入各对照。室温(暗处)旋转此混合物15分钟。用10ml冷PBS/2%FBS洗涤2次。(在400×g离心5分钟)并将各样品重悬浮于2.0mlPBS中,用于流式细胞术。
E.流式细胞术分析包胶化的细胞
所用的装置是Coulter EPICS ELITE细胞分选仪,其配有488nm氩离子激光器(预先用Flowcheck荧光球校准)。用线性正向散射(FSc)和对数侧向散射(SSc)曲线上呈现的散射特性来检测空的GMD和被占有的GMD。首先测试阴性对照(无捕捉剂),调节FSc和SSc直到在FSc/SSc图的中央附近出现占有群体。调节临界鉴别器以减少空GMD的出现。单占有亚群体被选通,并在适合荧光染料的检测PMT(光电倍增管)(设定为对数状态)上分析荧光值。调节荧光检测PMT,使群体位于荧光频率分布图的第一对数十进位(first log decade)。然后检测阳性和测试样品,通常每份样品收集10,000个值。
实施例2
比较分别用蛋白质A和抗体作为捕捉剂时对产物嵌合IgG的捕捉情况
将产物嵌合IgG的不同稀释液与含有生物素化的蛋白质A捕捉剂或生物素化的山羊抗-人IgG Fcγ片段特异性抗体捕捉剂的空GMD接触。在所有产物浓度下,与抗体作为捕捉剂相比,掺入蛋白质A的GMD具有高得多的荧光值(见图2)。
实施例3
测定蛋白质A的工作浓度
将GS-NS0细胞系用作产生IgG产物的包胶化的测试细胞。将不含生物素化的蛋白质A的包胶化的细胞用作阴性对照。用掺加的人IgG包胶化的细胞作为Fc阳性对照。使用1mg蛋白质A/ml PBS的原液(见图3)。

Claims (8)

1.一种鉴别产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞的方法,其特征在于,所述的方法包括如下步骤:
a)将产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞包埋于基质中,该基质含有针对产生的IgG的捕捉剂;
b)在产生IgG的时间段中培育所述的基质;
c)荧光标记所述的产生的IgG;
d)用流式细胞术鉴别荧光标记的、包胶化的产生IgG的细胞和不产生IgG的细胞;
其中所述的捕捉剂是蛋白质A和/或蛋白质G。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的不产生IgG的细胞和产生IgG的细胞是哺乳动物细胞。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的哺乳动物细胞是鼠骨髓瘤细胞。
4.如权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于,其中产生的IgG是人IgG。
5.如权利要求1-4任一所述的方法,其特征在于,所述的蛋白质A和/或蛋白质G是生物素化的。
6.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的产生IgG的时间过程为1-15分钟之间。
7.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的培育是在2℃到15℃之间的温度进行的。
8.一种生物素化的琼脂糖基质,其特征在于,含有用作IgG捕捉剂的生物素化的蛋白质A和/或蛋白质G,此生物素化的蛋白质A和/或蛋白质G通过亲和素接头结合于基质。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104508122A (zh) * 2012-06-20 2015-04-08 赛璐拉有限公司 用于处理细胞群体的材料和方法

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0118337D0 (en) * 2001-07-27 2001-09-19 Lonza Biologics Plc Method for selecting antibody expressing cells
US10285901B2 (en) * 2008-11-06 2019-05-14 Health E Vibrations, Llc Vibrating massage roller
JP5660035B2 (ja) * 2009-04-28 2015-01-28 コニカミノルタ株式会社 融合タンパク質含有集合体、その製造方法及び該集合体を用いたアッセイ法
JP6422075B2 (ja) * 2014-09-24 2018-11-14 太陽誘電株式会社 組成物及び組成物を利用したモーター蛋白デバイス
CN105504042A (zh) * 2016-02-04 2016-04-20 北京艺妙神州医疗科技有限公司 检测car-t细胞的捕获探针、该细胞含量的检测方法及应用
EP3571509B1 (en) * 2017-01-18 2023-05-10 Sartorius BioAnalytical Instruments, Inc. Methods and reagents for determining immunoglobulin gamma (igg) antibody isotype concentration from biological samples

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2322552C2 (de) * 1972-11-06 1986-08-28 Pharmacia AB, Uppsala Verfahren zum Abtrennen von Protein A aus Staphylococcus aureus aus einer Flüssigkeit
US4522918A (en) * 1981-12-15 1985-06-11 Jeffery Schlom Process for producing monoclonal antibodies reactive with human breast cancer
JPH03503845A (ja) * 1988-04-22 1991-08-29 マサチユセツツ・インスチチユート・オブ・テクノロジー 微小滴を形成しそして使用する方法
WO1990004609A1 (en) * 1988-10-17 1990-05-03 Sepracor, Inc. Process for the covalent surface modification of hydrophobic polymers and articles made therefrom
US5780029A (en) * 1989-11-14 1998-07-14 New York Medical College Antidiotypic monoclonal antibodies for treatment of melanoma
US5217872A (en) * 1990-02-27 1993-06-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method for detection of borrelia burgdorferi antigens
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104508122A (zh) * 2012-06-20 2015-04-08 赛璐拉有限公司 用于处理细胞群体的材料和方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20030013141A1 (en) 2003-01-16
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AU2001240576A1 (en) 2001-08-14
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WO2001057527A3 (en) 2002-04-18
ATE286254T1 (de) 2005-01-15
ES2234817T3 (es) 2005-07-01
CZ299627B6 (cs) 2008-09-24
KR100523198B1 (ko) 2005-10-24
CZ20022510A3 (cs) 2003-01-15
GB0002539D0 (en) 2000-03-29
CA2396017C (en) 2006-04-11
KR20020086891A (ko) 2002-11-20

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