CZ299627B6 - Zpusob rozlišení bunek, které produkují IgG, od bunek, které neprodukují IgG a zarízení k provádenízpusobu - Google Patents

Zpusob rozlišení bunek, které produkují IgG, od bunek, které neprodukují IgG a zarízení k provádenízpusobu Download PDF

Info

Publication number
CZ299627B6
CZ299627B6 CZ20022510A CZ20022510A CZ299627B6 CZ 299627 B6 CZ299627 B6 CZ 299627B6 CZ 20022510 A CZ20022510 A CZ 20022510A CZ 20022510 A CZ20022510 A CZ 20022510A CZ 299627 B6 CZ299627 B6 CZ 299627B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
igg
cells
protein
producing cells
matrix
Prior art date
Application number
CZ20022510A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ20022510A3 (cs
Inventor
Birch@John
Metcalfe@Hilary
Knight@Adrian
Vernon@Alison
Original Assignee
Lonza Group Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lonza Group Ag filed Critical Lonza Group Ag
Publication of CZ20022510A3 publication Critical patent/CZ20022510A3/cs
Publication of CZ299627B6 publication Critical patent/CZ299627B6/cs

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966Animal cells
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854Immunoglobulins

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Zpusob spocívá v tom, že bunky, které produkují IgG a bunky, které neprodukují IgG, jsou zapouzdreny v matrici, která obsahuje cinidlo zachycující produkovaný IgG, tato matrice se inkubuje po takovoudobu, behem níž se muže produkovat IgG, produkovaný IgG se fluorescentne oznací a bunky, které produkují fluorescentne oznacený IgG, a bunky, které neprodukují IgG, se rozliší prutokovou cytometrií, pricemž zachycujícím cinidlem je protein A a/nebo protein G. Zarízení pro provádení zpusobu obsahujebiotinylovanou agarosovou matrici obsahující biotinylovaný protein A a/nebo protein G jako cinidlo zachycující protilátky, pricemž protein A a/nebo Gje navázán na matrici avidinovým linkerem.

Description

Oblast techniky
Předložený vynález se týká nového způsobu rozlišení buněk, které produkují IgG, od buněk, které neprodukují IgG, rozlišením zapouzdřených buněk, které produkují fluorescentně označený IgG, a buněk, které neprodukuj í IgG, a to použitím průtokové cytometrie.
Dosavadní stav techniky
Imunoglobulin G (IgG) je ve stále se zvyšující míře, používán pro diagnostické a terapeutické účely v humánní medicíně (Scheinberg D. A. a Chapman P. B. v Birch J. R. a Lennox E. S., red., 1995, Wiley, 45 až 105).
Způsoby identifikace, které používají zapouzdřené buňky, aby se umožnilo rozlišení buněk, které produkují IgG, od buněk, které neprodukují IgG, jsou dobře známy (Gray F. a spol.: 1 Imm.
Meth. 1995, 182, 155 až 163; Kenney J. S. a spol.: Bio/Tech 1995, 13, 787 až 790) a jsou dobře komerčně dostupné např. od One Cell Systems lne. (Cambridge, Ma., USA). Popsané způsoby však mají některé nevýhody v tom, že neposkytují dostatečné rozdělení pro identifikaci vysokoprodukčních buněčných linií.
WO 98/10566 popisuje způsob vytvoření a použití mikrokapiček (GMD), do kterých se protein A může přidat jako značená molekula.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu je získat zlepšený způsob, který poskytuje větší rozdělení a který umožní identifikovat vysoké hladiny vysokoprodukčních buněčných linií.
Tohoto předmětu bylo dosaženo novým způsobem podle nároku 1.
Podle vynálezu se buňky, které produkují IgG, rozlišují,od buněk, které neprodukují IgG, přičemž
a) buňky, které produkují IgG, a buňky, které neprodukují IgG, jsou zapouzdřeny v matricí, která obsahuje činidlo zachycující produkovaný IgG,
b) uvedená matrice se inkubuje pro takovou dobu, během níž se může produkovat IgG,
c) uvedený produkovaný IgG se fluorescentně označí a
d) buňky, které produkují fluorescentně označený zapouzdřený IgG, a buňky, které neprodukují IgG, se rozliší průtokovou cytometrií, přičemž zachycujícím činidlem je protein A a/nebo protein G.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 ukazuje schematické zachycení produkovaného IgG zapouzdřenou buňkou.
Obrázek 2 ukazuje zachycení IgG použitím proteinu A při srovnání s protilátkou jako zachycujícím činidlem.
Obrázek 3 ukazuje pracovní koncentrace proteinu A.
-1 CZ 299627 B6
Obrázek 4 ukazuje srovnání procenta neprodukujících GS-NSO v kultuře s procentem získaným průtokovou cytometrií.
Buňky
Podle účinnosti exprese a sekrece IgG jsou buňky používané v předloženém vynálezu definovány jako buňky, které produkují IgG, a buňky, které neprodukují IgG. Buňky, které neprodukují IgG, mohou exprimovat a sekretovat malá množství IgG až do asi 0,1 až 0,2 pg/ml nebo nemusí exprimovat a sekretovat vůbec žádný IgG. Buňky, které produkují IgG, mohou exprimovat a sekretovat IgG v množstvích nad 0,2 pg/ml. Výhodnými buňkami, které mohou být rozlišeny na ío buňky, které produkují IgG, a buňky, které neprodukují IgG, jsou savčí buňky.
Každá savčí buňka se může použít podle předloženého vynálezu. Příklady savčích buněk, které se mohou použít, jsou buňky plastocytomu, myelomu, hybridomů, vaječníků čínského křečka (CHO) a fibrosarkomu nebo lymfoblastoidní buňky myšího nebo lidského původu. Výhodnými savčími buňkami používanými v předloženém vynálezu jsou myší myelomové buňky. Příklady myších myelomových buněk jsou NSO a NSO transfektované gluthamin-synthetasou (GSNSO). Zvláště užitečné jsou GS-NSO.
TgG
IgG, který se může produkovat buňkami použitými v předloženém vynálezu, může být lidský, prasečí, morčí, hovězí, kozí, ovčí, opičí, koňský, myší, krysí nebo křečkový IgG. Stejně tak může být produkován humanizovaný a chimemí IgG. S výhodou se produkuje lidský IgG. Dále pak buňky mohou produkovat také fragmenty IgG, jako jsou Fc-, Fab- a (Fab)2- fragmenty.
Zapouzdření (uzavření do tobolek)
Zapouzdření buněk, které produkují IgG, a buněk, které neprodukují IgG, se může provádět použitím např. standardních způsobů, jak je popsáno ve spisu WO 82/02561, nebo podle protokolů poskytnutých One Cell Systems Inc.
Obvykle se buňky přidávají ke zkapalněnému gelu obsahujícímu zapouzdřující matrici, jako je zapouzdřující matrice CelBioGel™ obchodně vyráběná One Cell System Inc. Zapouzdřující matrice obvykle sestává zagarosy. Matrice může být biotinylovaná. Zvláště výhodné jsou biotinylované agarosové matrice.
Výhodný počet buněk, kteiý se bude přidávat ke zkapalněnému gelu, je mezi 105 a 108 buněk/ml, zvláště mezi 5.105 a 107 buněk/ml.
Buňky ve zkapalněné zapouzdřující matrici se mohou dále zpracovat tak, že se generují gelové mikrokuličky (GMD) obsahující alespoň jednu buňku na GMD použitím emulzní matrice, která obvykle sestává z oleje, s výhodou z minerálního oleje, jako je emulzní matrice CelMix™ a výrobního zařízení pro mikrokuličky, jako výrobní zařízení mikrokuliček CellSys 101™. Emulzní matrice CelMix™ a výrobní zařízení mikrokuliček CellSys 101™ jsou komerčně vyráběny One Cell Systems Inc.
Zachycující reakční činidlo protein A a/nebo protein B může být navázáno na matrici před nebo po generaci GMD. S výhodou se protein A a/nebo protein B naváže po tom, co se generují GMD. K navázání obvykle dochází nejdříve inkubací matrice s linkerem, po které následuje inkubace proteinem A a/nebo proteinem G. V případě, že matrice je biotinylovaná, výhodným linkerem je avidin, jako je streptavidin. Zvláště se používá streptavidin.
Protein A a/nebo protein G může být biotinylován, aby byl schopen navázat se na linker v tom případě, kdy linkerem je avidin. S výhodou se používá biotinylovaný protein A a/nebo protein G, zvláště se používá biotinylovaný protein A. Obvyklým množstvím proteinu A a/nebo proteinu G,
-2CZ 299627 B6 které se přidává k matrici nebo ke GMD, je množství mezi 0,001 a 5 mg/ml, s výhodou mezi 0,01 a 0,1 mg/ml.
Inkubace pro produkci IgG
Inkubační doba, během které se může produkovat IgG, závisí na specifické IgG produktivitě buňky stejně jako na druhu použité buňky. V případě, že se používá myší myelomová buňka, je tato doba obvykle mezi 1 a 15 minutami, zvláště mezi 3 a 12 minutami.
Inkubační teplota rovněž závisí na specifické IgG produktivitě buňky stejně jako na druhu ío použité buňky. V případě, že se používá myší myelomová buňka, se inkubace provádí při teplotě mezi 2 a 15 °C, s výhodou mezi 2 a 8 °C. Obvykle se během inkubace přidává kontrolní IgG, aby se vyhodnotilo navázání vychytávajícího činidla.
Označování a selekce průtokovou cytometrií
Jako fluorescenční značka se může použít cokoliv, co může rozpoznávat produkt IgG a co se konjuguje s fluorescenční sloučeninou. Obvykle se mohou použít protilátky, které se konjugují s fluorescenční sloučeninou a kteréjsou specifické pro produkt IgG, nebo antigeny, kteréjsou konjugovány s fluorescenční sloučeninou a kteréjsou specifické pro produkt IgG. S výhodou se používají protilátky, které jsou konjugovány s fluorescenční sloučeninou a které jsou specifické pro produkt IgG. Protilátkami specifickými pro produkt IgG mohou být imunoglobuliny vybrané z imunoglobulinových skupin A, D, E, G nebo M a měly by pocházet z takových hostitelských buněk, které nejsou příbuzné s buňkou, která exprimuje a sekretuje produkt IgG. Protilátka specifická pro produkovaný IgG s výhodou rovněž znamená IgG. V případě, že buňkou, která exprimuje a sekretuje produkt IgG, je myší buňka, značící protilátkou může být např. IgG pocházející z kozy.
Příklady fluorescenčních sloučenin jsou fykoerythrín, fluoresceinisothiokyanát, texaská červeň, rhodamin nebo cyaninová barviva. Jako výhodná fluorescenční značka se používá IgG, který je konjugován s fykoerythrinem a který je specifický pro produkt IgG. IgG, které obsahují fluores30 cenění sloučeninu a kteréjsou specifické pro produkt IgG, jsou komerčně dostupné.
V případě, že se jako značka používá protilátka specifická pro produkt IgG, s výhodou se k zapouzdřeným buňkám před označením přidává blokátor, aby se předešlo tomu, aby se další sekretovaný produkt navázal a stejně tak proto, aby se snížilo nespecifické navázání. Jako výhod35 né sérum blokátoru se zvláště používá plodové telecí sérum nebo roztok sbíraného mléka (např. Maervel).
Obvyklé podmínky pro průtokovou cytometrií, aby se odlišily buňky, které produkují IgG, od buněk, které neprodukují IgG, se vyberou podle protokolu poskytnutého One Cell Systems lne. Obvykle se detekují prázdné GMD a GMD, které obsahují alespoň jednu buňku, rozptylovými vlastnostmi na grafu lineárního předního rozptylu (FSc) a logaritmického postranního rozptylu (SSc). Jako první se provede negativní kontrola (bez zachycujícího činidla) a FSc a SSc se upraví tak, aby se naplněná populace objevila přibližné ve středu grafu FSC/SSc. Prahový diskriminátor se upraví tak, aby se snížilo objevení prázdných GMD. Jediná naplněná sub-populace se ohraničí a analyzuje se na fluorescenci použitím logaritmického nastavení na detekci PMT (trubice foto45 násobiče) příslušného pro fluorchromon. Fluorescenční detekce PMT se upraví tak, aby populace ležela v první logaritmické dekádě fluorescenčního histogramu. Provede se analýza positivních a testovacích vzorků, obvykle se provede 10 000 případů na vzorek. Rozlišení průtokovou cytometrií se může provést analyticky nebo preparativně. Popřípadě se GMD může před průtokovou cytometrií obarvit, aby se vybraly životaschopné buňky tak, že se tyto buňky vystaví působení vybarvovací sloučeniny, jako je propidiumjodid.
Získané dosažené detekční limity pro buňky, které produkují IgG, v populaci buněk, které produkují IgG, a buněk, které neprodukují IgG, jsou obvykle mezi 95 a 99,99 %, s výhodou mezi 99 a 99,5 % z celkového počtu buněk.
-3CZ 299627 B6
Dalším předmětem předloženého vynálezu je biotinylovaná agarosová matrice obsahující biotinylovaný protein A a/nebo protein G jako zachycující činidlo pro IgG, přičemž biotinylovaný protein A a/nebo protein G je navázán avidinovým linkerem na matrici. Matrice s výhodou obsahuje jako zachycující činidlo pro IgG protein A a jako avidinový linker streptavidin.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava buněk a matrice ml emulzní matrice CelMix™ 200cs se ekvilibruje ve sterilní skleněné scintilační ampulce na 37 °C. Odstřeďováním při 200 xg po dobu 10 minut se získá 106 životaschopných buněk GS15 NSO. Buňky se resuspendují ve 100 μΐ fosforečnanem pufrovaném solném roztoku (PBS). Ke 400 μΐ zkapalněného CelBioGel™ se přidá 25 μΐ kyseliny pluronové (sterilní, zfiltrovaná) a tento gel se ekvilibruje 3 minuty na 37 °C. K CelBioGel™ se přidají resuspendované buňky a směs se mírně míchá a inkubuje 3 minuty při 37 °C. Buněčná směs CelBioGel™ se přikape spirálním způsobem (ode dne k vršku) k zahřívanému oleji emulzní matrice v ampulce použitím špičky
1 ml pipety, při čemž se zamezí přidávání bublinek vzduchu. Tato směs se emulguje zařízením pro výrobu mikrokapiček, které produkuje 25pm mikrokapičky odstřeďováním 1 minutu při 2100 otáčkách za minutu, 1 minutu při 2100 otáčkách za minutu v ledové lázni a 10 minut při 1100 otáčkách za minutu v ledové lázni. Zapouzdřující směs se rozdělí do 15ml konických zkumavek a emulze se pečlivě převrství 5 ml PBS. Tento roztok se odstřeďuje 10 minut při 600 x g tak, aby peleta GMD byla viditelná. Olejová fáze se odstraní pipetou, supematant se odpipetuje a pelety ze dvou zkumavek se spojí a přidají se 2 ml PBS. 10 ml PBS se rozdělí na podíly do 15ml konických zkumavek a převrství se GMD. Tato směs se odstřeďuje 5 minut při 400 x g (tento stupeň se v případě potřeby zopakuje). Supematant se odstraní a buňky se resuspendují v příslušném roztoku.
A. Streptavidinový můstek
GMD pelety se resuspendují ve 2,3 ml chladného DMEM média. 10μ1 podíl se vyhodnotí na % zaplnění. 0,3 ml se uchová pro „neobarvenou“ negativní kontrolu. 80 μΐ 1 mg/ml streptavidinu se zředí 2 ml chladného kultivačního média s L15 buňkami (Biowhittaker) a přidá se ke 2 ml GMD.
Směs se inkubuje v rotátoru 15 minut při teplotě místnosti. Tato směs se promyje 10 ml studeného PBS (dvakrát se odstřeďuje po dobu 5 minut při 400 x g).
B. Biotinylové zachycení IgG navázání
GMD se resuspendují ve 2,3 ml LI 5 (0,3 ml se uschová jako negativní kontroly „bez zachycují40 čího činidla“). 80 μΐ 1,0 mg/ml biotinylovaného proteinu jako zachycujícího reakčního činidla (Pierce) se zředí 2 ml studeného LI 5. Zředěné zachycující činidlo se přidá ke 2 ml GMD a tento roztok se inkubuje na rotátoru 15 minut za teploty místnosti, promyje se studeným PBS (dvakrát se odstřeďuje po dobu 5 minut při 400 x g) a resuspenduje se ve 3,3 ml studeného LI 5 (0,3 ml se uschová pro positivní kontroly).
C. Sekrece inkubace zapouzdřených buněk
GMD se přidají ke 25 ml studeného LI5 a směs se ekvilibruje při 4 °C v T75 baňce a inkubuje se 10 minut při 4 °C. 6μ1 kontrolního IgG (lidský IgG Chromepure) se zředí v 0,8 ml LI 5. Ke každé kontrole se přidá 0,4 ml tohoto zředěného kontrolního IgG a tento roztok se inkubuje na rotátoru
15 až 30 minut při teplotě místnosti. Na konci těchto inkubací se všechny vzorky dvakrát promyjí studeným PBS/2% plodovým hovězím sérem (FBS) (Odstřeďují se 5 minut při 400 x g.).
-4CZ 299627 B6
Sekreční vzorek se resuspenduje ve 2 ml a kontroly v 1 ml, ve všech případech studeného L15 + 5%FBS.
D. Vybarvování detekční protilátkou
40 μΐ 0,5 mg/ml kozí protilidské detekční protilátky IgG-Anti-f(ab')2-R-Phytoerythrin (R-PE) se zředí ve 2 ml studeného L15 + 5% FBS na vzorek a 4 μΐ ve 2 ml pro kontroly. 40 μΐ přípravku se přidá ke GMD a 1 ml ze 4μ1 přípravku se přidá ke každé z kontrol. Tato směs se otáčí 15 minut za teploty místnosti (ve tmě). Promyje se 2x10 ml studeného PBS/2% FBS. (Odstřeďuje se 5 minut při 400 x g) a každý vzorek se resuspenduje ve 2,0 ml PBS pro ío průtokovou cytometrií.
E. Průtoková cytometrie zapouzdřených buněk
Používaným zařízením je sortovač buněk Coulter EPICS EL1TE se 488nm argonovým iontovým laserem s předřazenou průtokovou kontrolou fluoreskujících kuliček. Prázdné a naplněné GMD se detekují pomocí rozptylových vlastností na grafu lineárního předního rozptylu (FSc) a logaritmického postranního rozptylu (SSc). Jako první se provede negativní kontrola (bez zachycujícího činidla) a FSc a SSc se upraví tak, aby se naplněná populace objevila přibližně ve středu grafu FSC/SSc. Prahový diskriminátor se upraví tak, aby se snížilo objevení prázdných GMD. Jednoduše okupovaná sub-populace se ohraničí a analyzuje se na fluorescenci použitím logaritmického nastavení na detekci PMT (trubice fotonásobiče) příslušného pro fluorochrom. Fluorescenční detekce PMT se upraví tak, aby populace ležela v první logaritmické dekádě fluorescenčního histogramu. Provede se analýza positivních a testovaných vzorků, obvykle se provede 10 000 případů na vzorek.
Příklad 2
Srovnání zachycení produktu chimerního IgG použitím proteinu A, respektive protilátky jako zachycujícího činidla
Různá ředění produktu chimerního IgG byla vystaveny působení prázdných GMD buď se zachy30 cujícím činidlem biotinylovaného proteinu A, nebo zachycujícím činidlem biotinylovaného kozího protilidského IgG Fc gama fragmentu specifické protilátky. GMD inkorporující protein A vykazovaly mnohem vyšší fluorescenci při srovnání s protilátkou jako zachycujícím činidlem ve všech koncentracích produktu (viz obrázek 2).
Příklad 3
Stanovení pracovních koncentrací proteinu A
Jako zapouzdřené testované buňky, které produkují IgG produkt, byla použité buněčná linie GSNSO. Jako negativní kontrola byly použity zapouzdřené buňky bez biotinylovaného proteinu A.
Jako Fc positivní kontrola byly zapouzdřené buňky, které produkují IgG, napojeny s lidským IgG. Byl používán zásobní roztok 1 mg proteinu A na ml PBS (viz obrázek 3).

Claims (8)

  1. 45 PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob rozlišení buněk, které produkují IgG, od buněk, které neprodukují IgG, přičemž
    a) buňky, které produkují IgG, a buňky, které neprodukují IgG, jsou zapouzdřeny v matrici, která 50 obsahuje činidlo zachycující produkovaný IgG,
    b) uvedená matrice se inkubuje po takovou dobu, během níž se může produkovat IgG,
    -5CZ 299627 B6
    c) uvedený produkovaný IgG se fluorescentně označí a
    d) buňky, které produkují fluorescentně označený zapouzdřený IgG, a buňky, které neprodukují IgG, se rozliší průtokovou cytometrií, vyznačující se tím, že zachycujícím činidlem je protein A a/nebo protein G.
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že buňky, které neprodukují IgG, a buňky, které produkují IgG, znamenají savčí buňky.
  3. 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že savčí buňky znamenají myší io myelomové buňky.
  4. 4. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že produkovaný IgG znamená lidský IgG.
    15
  5. 5. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že protein A a/nebo protein G je biotinylovaný.
  6. 6. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že doba, po kterou se může produkovat IgG, je mezi 1 a 15 minutami.
  7. 7. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že inkubace se provádí za teploty mezi 2 a 15 °C.
  8. 8. Zařízení pro provedení způsobu podle některého z nároků laž7, vyznačující se 25 t í m , že obsahuje biotinylovanou agarosovou matrici obsahující biotinylovaný protein A a/nebo protein G jako činidlo zachycující protilátky, přičemž biotinylovaný protein A a/nebo protein G je navázán avidinovým linkerem na matrici.
CZ20022510A 2000-02-03 2001-02-02 Zpusob rozlišení bunek, které produkují IgG, od bunek, které neprodukují IgG a zarízení k provádenízpusobu CZ299627B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0002539.5A GB0002539D0 (en) 2000-02-03 2000-02-03 Process for the discrimination of immunoglobulin G-producing cells from non-immunoglobulin G-producing cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20022510A3 CZ20022510A3 (cs) 2003-01-15
CZ299627B6 true CZ299627B6 (cs) 2008-09-24

Family

ID=9884933

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20022510A CZ299627B6 (cs) 2000-02-03 2001-02-02 Zpusob rozlišení bunek, které produkují IgG, od bunek, které neprodukují IgG a zarízení k provádenízpusobu

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20030013141A1 (cs)
EP (1) EP1252521B1 (cs)
JP (1) JP3577040B2 (cs)
KR (1) KR100523198B1 (cs)
CN (1) CN1181347C (cs)
AT (1) ATE286254T1 (cs)
AU (1) AU2001240576A1 (cs)
CA (1) CA2396017C (cs)
CZ (1) CZ299627B6 (cs)
DE (1) DE60108074T2 (cs)
ES (1) ES2234817T3 (cs)
GB (1) GB0002539D0 (cs)
WO (1) WO2001057527A2 (cs)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0118337D0 (en) * 2001-07-27 2001-09-19 Lonza Biologics Plc Method for selecting antibody expressing cells
US10285901B2 (en) * 2008-11-06 2019-05-14 Health E Vibrations, Llc Vibrating massage roller
JP5660035B2 (ja) * 2009-04-28 2015-01-28 コニカミノルタ株式会社 融合タンパク質含有集合体、その製造方法及び該集合体を用いたアッセイ法
CN104508122A (zh) * 2012-06-20 2015-04-08 赛璐拉有限公司 用于处理细胞群体的材料和方法
JP6422075B2 (ja) * 2014-09-24 2018-11-14 太陽誘電株式会社 組成物及び組成物を利用したモーター蛋白デバイス
CN105504042A (zh) * 2016-02-04 2016-04-20 北京艺妙神州医疗科技有限公司 检测car-t细胞的捕获探针、该细胞含量的检测方法及应用
EP3571509B1 (en) * 2017-01-18 2023-05-10 Sartorius BioAnalytical Instruments, Inc. Methods and reagents for determining immunoglobulin gamma (igg) antibody isotype concentration from biological samples

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989010566A1 (en) * 1988-04-22 1989-11-02 Massachusetts Institute Of Technology Process for forming and using microdroplets

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2322552C2 (de) * 1972-11-06 1986-08-28 Pharmacia AB, Uppsala Verfahren zum Abtrennen von Protein A aus Staphylococcus aureus aus einer Flüssigkeit
US4522918A (en) * 1981-12-15 1985-06-11 Jeffery Schlom Process for producing monoclonal antibodies reactive with human breast cancer
WO1990004609A1 (en) * 1988-10-17 1990-05-03 Sepracor, Inc. Process for the covalent surface modification of hydrophobic polymers and articles made therefrom
US5780029A (en) * 1989-11-14 1998-07-14 New York Medical College Antidiotypic monoclonal antibodies for treatment of melanoma
US5217872A (en) * 1990-02-27 1993-06-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method for detection of borrelia burgdorferi antigens
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989010566A1 (en) * 1988-04-22 1989-11-02 Massachusetts Institute Of Technology Process for forming and using microdroplets

Also Published As

Publication number Publication date
US20030013141A1 (en) 2003-01-16
CN1181347C (zh) 2004-12-22
JP2003524160A (ja) 2003-08-12
EP1252521A2 (en) 2002-10-30
DE60108074T2 (de) 2005-12-01
EP1252521B1 (en) 2004-12-29
AU2001240576A1 (en) 2001-08-14
DE60108074D1 (de) 2005-02-03
JP3577040B2 (ja) 2004-10-13
WO2001057527A2 (en) 2001-08-09
CA2396017A1 (en) 2001-08-09
WO2001057527A3 (en) 2002-04-18
CN1401079A (zh) 2003-03-05
ATE286254T1 (de) 2005-01-15
ES2234817T3 (es) 2005-07-01
KR100523198B1 (ko) 2005-10-24
CZ20022510A3 (cs) 2003-01-15
GB0002539D0 (en) 2000-03-29
CA2396017C (en) 2006-04-11
KR20020086891A (ko) 2002-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1415158B1 (en) Method for selecting antibody expressing cells
US9534246B2 (en) Method for selecting high producing cell lines
EP3571509B1 (en) Methods and reagents for determining immunoglobulin gamma (igg) antibody isotype concentration from biological samples
CZ299627B6 (cs) Zpusob rozlišení bunek, které produkují IgG, od bunek, které neprodukují IgG a zarízení k provádenízpusobu
CA2486578A1 (en) Detection of secreted polypeptides
EP1477808B1 (en) Method for cell selection
EP2452196B1 (en) Purification of monoclonal antibodies
WO2007011615A2 (en) Quantitative stabilized cell reference control products and methods
Kenney et al. A NEW CYTOFLUOROMETRIC TECHNIQUE FOR ANALYZING AND ISOLATING ANTIBODY-SECRETING CELLS: THE SECRETION CAPTURE REPORT WEB.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20110202