CN1377417B - 来自棉花的纤维特异性肌动蛋白启动子的分离和鉴定 - Google Patents

来自棉花的纤维特异性肌动蛋白启动子的分离和鉴定 Download PDF

Info

Publication number
CN1377417B
CN1377417B CN00813722.6A CN00813722A CN1377417B CN 1377417 B CN1377417 B CN 1377417B CN 00813722 A CN00813722 A CN 00813722A CN 1377417 B CN1377417 B CN 1377417B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cotton
gene
fiber
cfact1
promotor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN00813722.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1377417A (zh
Inventor
李学宝
蔡林
程宁辉
刘建伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Temasek Life Sciences Laboratory Ltd
Original Assignee
Temasek Life Sciences Laboratory Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Temasek Life Sciences Laboratory Ltd filed Critical Temasek Life Sciences Laboratory Ltd
Publication of CN1377417A publication Critical patent/CN1377417A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1377417B publication Critical patent/CN1377417B/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
    • C12N15/823—Reproductive tissue-specific promoters
    • C12N15/8233—Female-specific, e.g. pistil, ovule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Chemical Or Physical Treatment Of Fibers (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Artificial Filaments (AREA)

Abstract

本发明涉及棉花肌动蛋白基因CFACT1，及其纤维特异性启动子。这些启动子显示强烈的纤维特异性活性。

Description

来自棉花的纤维特异性肌动蛋白启动子的分离和鉴定
技术领域
本发明涉及植物分子学领域，尤其涉及转基因植物和用于产生转基因植物的启动子，特别是纤维特异性启动子。
发明背景
棉花是纺织工业最广泛使用的天然纤维，全世界棉花年产量为1亿包，总值450亿美元。在过去的几十年间虽然已通过经典育种明显改进了纤维的品质和产量，但是通过经典育种进一步改善纤维性质的潜力已被限制，因为需要物种相容性和可利用的性状。基因工程提供了进一步改良棉花的新途径，其是通过导入基因以产生具有高度所需特征的新种质而进行。
棉花纤维(种毛)是经历快速同步延伸的单细胞毛状体。皮层(cortical)微管提供了规范和调控细胞延伸的纤维素微原纤维排列所需的空间信息(Giddings和Staehelin，1991；Cyr和Palevitz，1995；Fisher和Cyr，1995)。纤维发育由4个重叠阶段组成(即起始、初级细胞壁形成、次生细胞壁形成和成熟)(Basra和Malik，1984)。微管蛋白和肌动蛋白可能在发育纤维细胞中起重要功能作用。成熟纤维是纤维素、水、少量蛋白质、果胶、半纤维素、矿物质、蜡、少量有机酸、糖和色素的生物学组合物，其提供优异的穿着性能和审美性能(Arthur，1990；Basra和Malik，1984；Ryser，1985)。纤维分化和发育需要许多基因，这些基因在纤维发育的不同阶段差异表达，目前仅鉴别了参与大量纤维特异性结构蛋白、酶、多糖、蜡或木质素的生物合成的一些基因(John和Crow，1992；John，1996a；Song和Allen，1997；Ma等，1997；Kawai等，1998；Whittaker和Triplett，1999)。这些分离的基因由于其纤维特异性表达可被认为具有改良棉花纤维的潜在应用。例如，John已使用纤维特异性基因启动子产生基因工程棉花以收获改变的纤维(John，1996b，1997a，1997b)。
启动子是确定植物和动物发育过程中基因表达的时空特异性的DNA片段。在过去十年间已从各种植物和动物中鉴别和分离了许多组织特异性基因及其启动子，包括一些棉花组织特异性基因和启动子(Loguerico等，1999；Kawai等，1998；Song和Allen，1997；Ma等，1997；John，1996a；Rinehart等，1996；Hasenfratz等，1995；John和Peterson，1994；John和Crow，1992)。有几种启动子以显示在棉花中以纤维特异性方式控制基因表达(Rinehart等，1996；John，1996a；John和Crow，1992)。一些植物组织特异性启动子可被用于在特异组织中以发育调控模式表达外源蛋白质(John，1996b，1997a，1997b)。
发明概述
从棉花中分离了一种编码肌动蛋白的纤维特异性基因(称为CFACT1).分离的完整CFACT1基因长度为3.040kb，包括一个0.816kb的启动子.将CFACT1启动子片段(0.8kb)与GUS基因融合，构建基因表达载体以分析启动子的功能.用CFACT1启动子/GUS融合基因转基因的棉花和烟草植物，通过Southern印迹杂交方法鉴别.在所有研究的转基因棉花植物中，GUS活性仅在新生纤维中检测到，而在花器官如花药，花瓣和萼片，或叶和根中未检测到.此结果结合Northern印迹分析结果表明，CFACT1启动子在棉花中是纤维特异性的.此启动子在转录水平控制特异性基因在棉花纤维中的表达.分离的启动子可用于改良棉花纤维，通过操纵基因产生具有高纤维品质和产量的新棉花变种.
附图简述
图1示出棉花CFACT1基因cDNA的核苷酸序列(686bp；SEQID NO：1)。
图2示出棉花CFACT1基因的核苷酸序列(3040bp；SEQ IDNO：2)。
图3示出分离的CFACT1基因的结构图。
图4示出在表达载体中的与GUS基因融合的CFACT1启动子的构建体。
发明详述
CFACT1启动子是一种在棉花中有活性的纤维特异性启动子。对取自各种棉花组织的cDNA进行的Northern印迹分析结果示出，一个包含CFACT1基因的cDNA克隆在开花后(DPA)8和14天的新生纤维中强烈表达，也在开花后4，8和14天的幼胚珠中表达，但在其它组织中很少或根本不表达。对此cDNA克隆进行测序表明其长度为686bp(图1)。发现分离自基因组DNA文库的全长序列长度为3040bp，包括一个0.8kb的启动子片段，其1-818位碱基代表启动子(图2)。将棉花CFACT1的核苷酸序列和推定的多肽序列与数据库中序列相对比，表明此基因在氨基酸水平和核苷酸水平均与来自一些植物，如Malva pusilla(AF112538)，大豆(U60499)，和Brassica napus(AF11812)等的已知肌动蛋白基因呈现高度同源。CFACT1基因与已知棉花肌动蛋白基因(AF059484)在氨基酸水平只呈现71-93％同源性，在核苷酸水平呈现80-82％相同性。另外，其启动子不同于已知棉花和非棉花肌动蛋白基因的启动子，因此它是分离自棉花的一种新肌动蛋白基因。分析CFACT1基因序列表明，在其开放读框中含有4个外显子和3个内含子(图3)。此基因结构在分析的所有完整肌动蛋白基因中是典型的〔Shah等，1983；Baird和Meagher，1987；Nairn等，1988；Stranathan等，1989；McElroy等，1990；Cox等，1995；An等，1996〕。
CFACT1基因的转录物在开花后8天的棉花新生纤维中呈最高累积(通过Northern印迹分析表明的)，然后随着纤维的进一步发育基因产物(mRNA)的累积明显降低。对比不同发育阶段的棉花胚珠中的基因表达，也示出基因转录物在开花后8天比在开花后4天和14天累积多，从开花后8天至28天的纤维发育中，基因产物的累积逐渐及明显降低至不可检测的水平。这提示此基因是在棉花纤维和胚珠发育期间在转录水平被严格调节而特异表达的，与其它棉花纤维特异性基因一样〔Whittaker和Triplett，1999；Shin和Brown，1999，Kawai等，1998；John，1996a；Song和Allen，1997；Ma等，1997；Rinehart等，1996；John和Crow，1992〕。
CFACT1基因的启动子长度为0.8kb，是有活性的纤维特异性启动子。通过农杆菌介导的基因转移，将CFACT1启动子/GUS融合基因构建体用于转化烟草和棉花，使用含有CaMV35s启动子/GUS融合体的pBI121载体作阳性对照。与Northern印迹分析结果相一致，在研究的所有转基因棉花植物中，由CFACT1启动子驱动的GUS基因在新生纤维中特异表达，但在其它组织中不表达，而在阳性对照棉花植物(35S：GUS)的所有组织中均检测到GUS活性。获得共230株转化的棉花植物，移植入土壤中生长至成熟。相似地，发现在CFACT1启动子驱动下的所研究的20多株转基因烟草植物中，GUS基因活性只在种子和果肉中检测到，这提示CFACT1启动子活性在烟草中也是组织特异性的(棉花纤维是种皮的延伸毛，发现其与烟草种皮组织学相应)。此结果结合Northern印迹分析表明，CFACT1启动子在转录水平控制基因在棉花纤维中的特异表达。
因此，本发明的一个实施方案是一种棉花纤维特异性启动子，得自棉花纤维肌动蛋白基因CFACT1。
本发明的另一个实施方案是一种棉花纤维特异性启动子，其包含棉花纤维CFACT1基因的0.8kb启动子片段，具有SEQ ID NO：2的1-816位核苷酸的序列。
本发明的另一实施方案是一种棉花纤维特异性启动子，其包含CFACT1启动子(SEQ ID NO：2的1-816位核苷酸)的一个活性片段。活性片段是序列长度比SEQ ID NO：2的1-816位核酸序列短但仍保留在棉花中与纤维特异性启动子同样的活性的序列。片段可包含SEQ ID NO：2的1-816位核苷酸序列的切除，缺失，截短或取代，或这些变化的组合。
CFACT1在棉花纤维中强烈表达，表明其在纤维形成和发育中的起直接作用。已经熟知肌动蛋白在许多植物中参与细胞骨架形成和细胞扩展。这是基于这样一种概念，即我们在目前研究工作中探求与细胞骨架形成和细胞扩展相关的基因。在测序后，由于其是一种肌动蛋白基因而将其命名为CFACT1。尽管还没有进行任何通过过表达或低表达证明CFACT1在转基因棉花中的功能的研究工作，但可以推测CFACT1参与棉花纤维发育，因为其具有一个纤维特异性强启动子〔Delmer等，1995〕。
本发明的启动子用于产生纤维特性改变的转基因棉花。使用本发明的纤维特异性强启动子使转基因在棉花纤维中选择性表达，使应用的转基因的类型范围更大。选择性表达避免了如系统表达转基因强加于转基因植物的代谢负担，或转基因在非纤维组织中表达的不利影响。在棉花纤维中表达而在棉花植物的其它部分中不表达的所需基因例如包括：(1)染色棉花的花色素苷基因，(2)来自蚕或蜘蛛的丝蛋白基因，提高棉花纤维的强度，(3)棉花纤维中聚羟基丁酸酯的生物合成，以改良导热性能和绝缘性能〔John等，1996〕。在本领域有许多增强纤维的基因可与本发明的启动子便利地连接，并用于通过熟知方法转化棉花〔见例如Umbeck，1992〕，以达到转基因在转基因棉花纤维中表达。见例如John，1996b，1997a，1997b；John等，1996。
实施例1：分离编码CFACT1序列的纤维特异性cDNA
将棉花种子表面用70％乙醇消毒30-60秒，及用10％ H2O2消毒30-60分钟，随后用无菌水冲洗。将种子在1/2 MS培养基上在培养室中在28℃光照萌发，并将从无菌幼苗切下的子叶和下胚轴用作转化外植体。将棉花植物在罐中生长以提取DNA和RNA。
用硫氰酸胍方法或SV总RNA分离系统(Promega)，从棉花的新生纤维，胚珠，花药，花瓣，萼片，叶和根中提取总RNA。聚(A)+RNA是通过用mRNA纯化试剂盒(Pharmacia Biotech)中的寡(dT)纤维素旋转层析柱纯化的。棉花cDNA用cDNA合成试剂盒(Pharmacia Biotech)合成。棉花cDNA文库通过将cDNA片段插入ZAP表达载体(Stratagene)中构建。
将分别来自开花后大约8和14天的新生棉花纤维的聚(A)+RNAs转为cDNA，将其用于构建棉花cDNA文库。从此纤维cDNA文库中，随机挑取大约200个cDNA克隆，及随后进行测序。根据序列数据选择具有参与细胞扩展潜力的一些克隆。
为发现转录物在棉花纤维中特异表达的cDNA克隆，分析所选择的cDNA克隆的表达模式，通过用分离自棉花纤维，胚珠，花药，花瓣，萼片，叶和根的总RNAs，使用来自克隆的探针进行Northern印迹杂交进行分析。将来自不同棉花组织的RNA样品在琼脂糖-甲醛凝胶上分离，并通过毛细印迹移至Hybond-N尼龙膜上。将RNANorthern印迹在ExpressHyb溶液(Clontech)中，在68℃与通过随机标记(Promega Prime-a-Gene标记系统)制备的32P cDNA探针杂交。在杂交后，将印迹在68℃在0.1×SSC，0.5％SDS中冲洗30-60分钟。实验结果示出一个cDNA克隆在开花后8和14天的新生纤维中强烈表达，并也在开花后4，8和14天的幼胚珠中表达，但在其它组织中较低表达或不表达。
将PCR片段和cDNA片段亚克隆入载体中，并将用Qiagen质粒试剂盒制备的质粒DNA在PCR反应中用作模板。通过自动测序仪对PCR产物进行测序。发现一个克隆是编码肌动蛋白多肽一部分的一个686bp CFACT1 cDNA片段(图1)。Northern印迹杂交证明CFACT1 cDNA转录物在开花后8和14天的新生纤维中大量积累，并也在开花后4，8，14和21天的幼胚珠中或多或较少积累。但这些转录物在来自开花后28天的胚珠的RNA中检测不到，在来自花药，花瓣，萼片，叶片和根的RNA中也检测不到(图4)。此结果提示CFACT1 cDNA表达在棉花中是纤维特异性的。将CFACT1cDNA序列与来自数据库的已知棉花肌动蛋白cDNA(D88414)相对比，所述已知肌动蛋白cDNA长度只有1.079kb且不是一个完整肌动蛋白cDNA，对比结果示出这两个cDNA呈现高水平的同源性(在氨基酸水平呈97％相同性，在核酸水平呈96％相同性)。
将来自棉花不同组织的总RNA用于逆转录第一链cDNA，其在差别展示PCR反应中用作模板。通过使用差别展示试剂盒(Clontech)进行差别展示分析。第一链cDNA是用2pg总RNA作为逆转录的起始物，寡(dT)作引物，在42℃反应1小时合成的。差别展示PCR是开始进行一次94℃5分钟，40℃5分钟和68℃5分钟循环，随后进行94℃2分钟和40℃5分钟及68℃5分钟的两次循环，然后进行94℃1分钟，60℃1分钟和68℃2分钟的25次循环，最后在68℃延伸7分钟。切除目标差别展示条带并再扩增以进一步分析。取可重复的纤维特异性差别展示产物进行进一步分析。收集在每个目标条带中的cDNA，并通过PCR扩增再生。随后将分离的cDNA亚克隆入载体中并测序。
Northern印迹分析示出CFACT1基因的转录物在开花后8天新生棉花纤维中呈现最高积累，然后随着纤维的进一步发育，基因产物(mRNA)的积累明显降低。对比棉花胚珠的不同发育阶段中的基因表达也示出，基因转录物在开花后8天的胚珠中比在开花后4和14天的胚珠中积累的多，随着纤维从开花后8天至28天的发育，基因产物的累积逐渐及明显降低至不可检测水平。这提示基因在棉花纤维和胚珠发育期间是在转录水平被严格调节而特异表达的，如其它棉花纤维特异性基因一样〔Whittaker和Triplett，1999；Shin和Brown，1999；Kawai等，1998；John，1996a；Song和Allen，1997；Ma等，1997；Rinehart等，1996；John和Crow，1992〕。
实施例2：CFACT1基因的分离和结构分析
使用以下方法从棉花植物中提取并纯化总DNA。将液氮加入4g叶组织中，并将叶彻底均质。将20ml冰冻的提取缓冲液(63g/L葡萄糖，0.1M Tris.HCl(pH8.0)，5mM EDTA，20g/L PVP-40，1g/lDIECA，1g/L抗坏血酸，2ml/L β-巯基乙醇)加入在50ml试管中的均质组织中，并在2500rpm离心15分钟。在除去上清后，将10ml裂解缓冲液加入每个试管中。将再悬浮的沉淀在65℃温育30分钟。在每个试管中加入10ml氯仿，与样品混合并在3500rpm离心10分钟。将上清移至清洁的试管中，再进行一次氯仿提取。将上清移至清洁的试管中，在每个试管中加入0.6体积的异丙醇以沉淀DNA。在3500rpm离心30分钟后，将DNA用70％乙醇冲洗。然后将分离的基因组DNA溶解于无菌水或TE(10mM Tris.HCl，1mM EDTA)中使用。
棉花基因组DNA文库是从棉花植物的叶中构建的。将DNA用BamHI部分消化，并将DNA片段克隆入ZAP表达载体(Stratagene)的BamHI位点中。
基因组步行(Walker)文库是使用通用基因组步行试剂盒(Clontech)构建的。将来自棉花植物叶的基因组DNA分别用5种限制酶消化，然后通过酚/氯仿纯化，及通过乙醇沉淀。将消化的DNA与基因组步行衔接子连接。接连进行两次基因组步行PCR反应。在初始PCR中将1μl每个基因组步行DNA文库用作模板，在二级PCR中将初始PCR产物用作模板。PCR在95℃1分钟起始，随后进行35次95℃15秒，和68℃4分钟循环，最后在68℃扩展6分钟。切下目标PCR条带并通过Geneclean试剂盒纯化(Bio 101)。
覆盖全长CFACT1基因的两个重叠片段通过基因组步行方法分离，并对其进行完全测序。完整的CFACT1基因长度为3040bp，包括一个0.8kb的启动子(图2)。将棉花CFACT1基因的核苷酸序列和推定的多肽序列与数据库所示序列相对比，发现此基因在氨基酸水平和核苷酸水平均与已知肌动蛋白基因呈高度同源，所述已知肌动蛋白基因例如来自Malva pusilla(AF112538)，大豆(U60499)，Brassica napus(AF11812)等植物。CFACT1基因与已知棉花肌动蛋白基因(AF059484)在氨基酸水平只呈71％-93％同源性，在核苷酸水平呈80-82％相同性。另外，其启动子不同于已知棉花和非棉花肌动蛋白基因的启动子，因此它是分离自棉花的一种新的肌动蛋白基因。对CFACT1基因的序列进行分析表明在其开放读框中含有4个外显子和3个内含子(图3)。此基因结构在迄今为止所有分析的完整肌动蛋白基因中是典型的〔Shan等，1983；Baird和Meagher，1987；Nairn等，1988；Stranathan等，1989；McElroy等，1990；Cox等，1995；An等，1996〕。
实施例3：CFACT1启动子的功能分析
为对CFACT1启动子的功能进行定性，将0.8kb CFACT1启动子在pBI101中与GUS基因连接，以构建基因表达载体(图4)。将棉花和烟草用含有CFACT1启动子/GUS融合基因的根瘤农杆菌转化，使用含有CaMV35S启动子/GUS融合体的pBI121载体作为阳性对照。CaMV35S启动子在棉花和其它植物的所有组织中均是活性的，并且是一种组成型启动子〔Odelldeng，1985；Ow等，1987；McCabe和Martinell，1993〕。将一个含有CFACT1启动子/GUS融合基因或CaMV35S启动子/GUS融合体对照物的二元载体，转移至根瘤农杆菌菌株LBA4404中。进行转化的棉花外植体得自实施例1中生长的棉花幼苗。烟草外植体得自烟草幼苗。将烟草种子表面用70％乙醇灭菌30-60秒，并用0.1％HgCl2灭菌15分钟，随后用无菌水冲洗。将种子在培养室中在28℃在1/2MS培养基上光照萌发，并从无菌幼苗上切下叶用作转化外植体。将棉花子叶和下胚轴外植体和烟草叶外植体通过携带载体的农杆菌转化，并将转化的植物移植入温室土壤中生长至成熟。
将烟草叶切成大约2×2cm的薄片，并浸渍在农杆菌悬浮液中5分钟。将感染的烟草外植体在MS培养基上用1mg/L 6-BA在28℃培养48小时，然后移至含有100mg/L卡那霉素和1mg/L 6-BA的MS选择培养基上20-30天，以选择转化的茎(卡那霉素抗性茎)。将转化的茎从愈伤组织中切下并在具有50-100mg/L卡那霉素的MS培养基上生根。将转化的烟草外植体移植至温室土壤中，生长至成熟。
将子叶和下胚轴用作外植体以转化棉花。将棉花种子表面用70％乙醇灭菌30秒，及用10％ H2O2灭菌60分钟，随后用无菌水冲洗。将这些种子在28℃在无菌水中温育。将种子萌发过夜。取出胚并置于IM培养基上(1/2(MS(常量营养物，微量营养物，EDTA-Fe)+VB1 10mg/L+VB6 1mg/L+VPP 1mg/L+肌醇100mg/L)+phytogel 2g/L pH＝6.4)，在28℃培养7天。将棉花的子叶和下胚轴用作转化外植体。在切成5mm2(mm)的块后，将外植体在根瘤农杆菌菌株LBA4404悬浮液(OD600＝0.2-0.4)中浸渍15分钟。然后将外植体在24℃置于CM培养基上(MS(常量营养物，微量营养物，EDTA-Fe)+VB1 10mg/L+VB6 1mg/L+VPP 1mg/L+肌醇100mg/L+2，4-D 0.1mg/L+KT 0.1mg/L+葡萄糖30g/L+MgCl20.7mg/L+phytogel 2g/L pH＝6.4)中培养2天。在用液体MS培养基冲洗后，将外植体置于SM培养基上(MS(常量营养物，微量营养物，EDTA-Fe)+VB1 10mg/L+VB6 1mg/L+VPP 1mg/L+肌醇100mg/L+2，4-D 0.1mg/L+KT 0.1mg/L+葡萄糖30g/L+MgCl20.7mg/L+phytogel 2g/L+卡那霉素50mg/L+Cefutoxime 200mg/L，pH＝6.4)，在28℃在培养室中光照培养以进行选择，每月进行传代培养。在SM上传代培养2-3个月后，在外植体中诱导愈伤组织。将愈伤组织移至DM培养基上(MS(常量营养物，微量营养物，EDTA-Fe)+VB1 10mg/L+VB6 1mg/L+VPP 1mg/L+肌醇100mg/L+KNO3 19g/L+MgCl2 0.7mg/L+葡萄糖30g/L+phytogel 3g/L，pH＝6.4)，并每月进行传代培养。在大约5个月后，开始形成体细胞胚。将幼胚在DM培养基上持续培养直至它们发育成熟。将成熟胚移至在盒子中的GM培养基上(1/2(MS(常量营养物，微量营养物，EDTA-Fe)+VB1 10mg/L+VB6 1mg/L+VPP 1mg/L+肌醇100mg/L)+NAA 0.01mg/L+葡萄糖30g/L+phytogel 3.5g/L，pH＝6.4)，发育成小植物。然后将此小植物移植至土壤中，生长植物并收集转基因种子。
将具有嵌合的CFACT1启动子/GUS基因(或35S：GUS基因)的转基因烟草和棉花植物，和作为阴性对照的未转化的植物，通过DNA Southern印迹杂交和通过GUS组织学测定进行分析。将来自棉花和烟草叶的总基因组DNA用限制酶消化，在琼脂糖凝胶上分离，并通过毛细印迹移至Hybond-N尼龙膜上。将DNA Southern印迹在ExpressHyb溶液(Clontech)中，在68℃与通过随机标记(Promega Prime-a-Gene标记系统)制备的32P-DNA探针杂交。在杂交后，将印迹在68℃在0.1×SSC，0.5％SDS中冲洗30-60分钟。将32P标记的尼龙膜在-70℃曝光到X光胶片上以放射自显影。Southern印迹分析表明CFACT1启动子/GUS融合体基因整合入棉花和烟草基因组中。
对先前Jefferson等(1987)所述方法加以修改，在转基因的烟草和棉花植物中对GUS活性进行组织化学分析。将植物的新鲜组织在X-gluc(5-溴-4-氯-3-吲哚葡糖苷酸)溶液中温育过夜，所述X-gluc溶液由0.1M磷酸钠(pH7.0)，10mM乙二胺四乙酸(EDTA)，0.5mM亚铁氰化钾，和0.1％ X-gluc(Clontech Chemical)组成。然后通过相继用100％和70％乙醇漂洗洗清并固定染色的植物，并直接或在显微镜下检测样品并照像。获得属于21个转化品系的共230个转化的棉花植物，并移植至土壤中生长至成熟。在研究的所有转基因棉花植物中，只在新生纤维中检测到GUS活性，但在花器官如花药，花瓣和萼片中，或在叶和根中未检测到。对比之下，当在X-gluc溶液中在与转基因植物组织相同条件下染色时，用阳性对照pBI121(35S：GUS)转化的植物在所有组织中均呈现强GUS活性，未转化的植物示出在纤维以及其它组织中无GUS活性。在研究的20多个转基因烟草植物中，通过CFACT1启动子驱动的GUS基因只在种子和果肉中表达，提示CFACT1启动子在烟草中也是组织特异性的。这些结果表明CFACT1启动子在转录水平指导基因在棉花纤维中特异表达。
参考文献
An YQ，Huang S，McDowell JM，1996.拟南芥属ACT1和ACT3肌动蛋白亚类在器官原基和成熟花粉中的保守表达.Plant Cell，8(1)：15-30.
Arthur JC，1990.见《聚合物》：纤维和纺织纲要，编辑Kroschwitz，JI.(Wiley，New York)，pp.118-141.
Baird WV and Meagher RB，1987.一复杂基因超家族编码矮牵牛属中的肌动蛋白EMBO J.，6(11)：3223-31.
Basra AS and Malik CP，1984.棉花纤维发育Int.Rev.Cytol.89：65-113.
Chu B，Wilson TJ，McCune-Zierath C，Snustad DP，Carter JV.，1998.拟南芥属两个β-微管蛋白基因TUB1和TUB8显示相当大的不重叠表达模式Plant Mol.Biol.，37(5)：785-90.
Cox GM，Rude TH，Dykstra CC，1995.来自Cryptococcusneoformans的肌动蛋白基因：结构和系统发育分析，J.Med.Vet.Mycol.，33(4)：261-6.
Cyr RJ and Palevitz BA，1995.植物细胞中皮质微管的组织结构.Curr.Opin.Cell Biol.，7：65-71.
Delmer DP，Pear JR，Andrawis A.，Stalker DM，1995，与哺乳动物rac类似的编码小GTP结合蛋白的基因在发育的棉花纤维中优先表达，Mol.Gen Genet 248(1)：43-51.
Fisher DD and Cyr RJ，1998.延伸微管/微原纤维范例.PlantPhysiol.，116：1043-51.
Giddings TH and Staehelin LA，1991.微原纤维沉积的微管介导的控制：假设的再检验，见CW Lloyd编辑的《植物生长和形式的细胞骨架基础》，学术出版社，伦敦pp.85-99.
Hasenfratz MP，Tsou CL，Wilkins TA，1995.两个相关液泡H(+)-ATPase 16kD蛋白脂质基因的表达以组织特异性方式差异调控PlantPhysiol.，108(4)：1395-404.
Jefferson RA，1987.分析植物中的嵌合基因：GUS基因融合系统.Plant Mol.Biol.Rep.，5：387-405.
Jefferson RA，Kavanagh TA，Bevan MW，1987.GUS融合：作为高等植物敏感通用基因融合标记的p-葡糖醛酸糖苷酶.EMBO J.，6：3901
John ME and Crow LJ，1992.棉花纤维中的基因表达：mRNA的克隆Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89(13)：5769-73.
John ME and Peterson MW，1994.棉花花粉特异性聚半乳糖醛酸酶mRNA：其启动子在转基因烟草中的组织和时间特异性.Plant Mol.Biol.，26(6)：1989-93.
John ME，1996a.相应于棉花纤维mRNA的基因E6的结构鉴定：反义基因导致的转基因植物中E6蛋白的降低.Plant Mol.Biol.，30(2)：297-306.
John，ME，1996b.用于改变的纤维的基因工程棉花植物，美国专利5,495,070
John，ME，and Keller，G.1996.棉花中的代谢途径工程：纤维细胞中的聚羟基丁酸酯的生物合成.Proc.Natl.Aced.Sci.USA.93：12768-12773.
John，ME，1997a.产生异源聚羟基丁酸酯生物塑料的转基因棉花植物，美国专利5,602,321.
John，ME，1997b.用于改变的纤维的基因工程棉花植物，美国专利5,620,882(1997).
Kang MS，Choi YJ，Kim MC，Lim CO，Hwang I，Cho MJ.，1994.来自水稻的两个β-微管蛋白cDNA克隆的分离和鉴定.Plant Mol.Biol.，26(6)：1975-9.
Kawai M，Aotsuka S，Uchimiya H，1998.棉花CAP基因的分离：在纤维延伸过程中高表达的腺苷酰环化酶相关蛋白的同系物.Plant Cell Physiol.，39(12)：1380-3.
Liaud MF，Brinkmann H，CerffR.，1992.豌豆的β-微管蛋白基因家族：基因的一级结构、基因组结构和内含子依赖性进化.Plant Mol.Biol.，18(4)：639-51.
Loguerico LL，Zhang JQ，Wilkins TA，1999. 6个新MYB结构域基因的差异调控：异源四倍体棉花中两种不同的表达模式.Mol.Gen.Genet.，261(4/5)：660-71.
Ma DP，Liu HC，Tan H，Creech RG，Jenkins JN，Chang YF，1997.在纤维细胞中特异表达的棉花脂质转移蛋白基因的克隆和鉴定.Biochim.Biophys.Acta，1344(2)：111-4.
McCabe DE and Martinell BJ，1993.经粒子轰击分生组织转化精华棉花栽培品种.Biotechnology，11：596-8.
McElroy D，Rothenberg M，Reece KS，Wu R，1990.水稻肌动蛋白基因家族的鉴定.Plant Mol.Biol.，15(2)：257-68.
Nairn CJ，Winesett L，Ferl RJ，1988.拟南芥肌动蛋白基因的核苷酸序列.Gene，65(2)：247-57.
Odell JT，Nagy F，Chua N-H，1985.花椰菜花叶病毒35S启动子活性所需的DNA序列的鉴别.Nature，313：810-2.
Okamura S，Naito K，Sonehara S，Ohkawa H，Kuramori S，TatsutaM，Minamizono M，Kataoka T.，1997.编码一趋异同种型的胡萝卜β-微管蛋白基因β-2的鉴定.Cell Struct.Funct.，22(2)：291-8.
Okamura S，Okahara K，Iida T，Ozaki M，Asano S，Morita M，Imanaka T，1999.在同步烟草BY2细胞中β-微管蛋白RNA量的同种型特异性变化.Cell Struct.Funct.，24(3)：117-22.
Ow DW，Jacobs JD，Howell SH，1987.用萤火虫荧光酶基因作为启动子活性的报道基因确定的花椰菜花叶病毒35S RNA启动子的功能区.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84：4870-4.
Rinehart JA，Peterson MW，John ME，1996.棉花基因FbL2A的组织特异性调控和发育调控：转基因植物中启动子活性的证实.PlantPhysiol.，112(3)：1331-41.
Ryser U，1985.分化棉花纤维中的细胞壁生物合成.Eur.J.CellBiol.，39：236-56.
Shah DM，Highrower RC，Meagher RB，1983.高等植物中编码肌动蛋白的基因：内含子位置高度保守但编码序列不保守.J.Mol.Appl.Genet.，2(1)：111-26.
Shin H and Brown RM jr，1999.重组棉花纤维膜联蛋白的GTPase活性和生物化学鉴定.Plant Physiol.，119(3)：925-34.
Song P and Allen RD，1997.经示差展示鉴别棉花纤维特异性酰基载体蛋白cDNA.Biochim.Biophys.Acta，1351(1)：305-12.
Snustad DP，Haas NA，Kopczak SD，Silflow CD.，1992.拟南芥属小基因组含有至少9个表达的β-微管蛋白基因.Plant Cell，4(5)：549-56.
Stranathan M，Hastings C，Trinh H，1989.胡萝卜的两个肌动蛋白基因的分子进化.Plant Mol.Biol.，13(4)：375-83.
Taylor MA，Wright F，Davies HV.，1994.两个β-微管蛋白基因的cDNA克隆的鉴定及其在马铃薯植物(Solanum tuberosum L.)中的表达.Plant Mol.Biol.，26(3)：1013-18.
Tonoike H，Han IS，Jongewaard I，Doyle M，Guiltinan M，FosketDE，1994.大豆微管蛋白基因tubB1的下胚轴表达和光负调节.PlantJ.，5(3)：343-51.
Umbeck，Paul，1992.棉花植物和品系的基因工程，美国专利5,159,135
Villemur R，Haas NA，Joyce CM，Snustad DP，Silflow CD，1994.4个新β-微管蛋白基因的鉴定及其在玉米(Zea mays L.)雄花发育过程中的表达.Plant Mol.Biol.，24(2)：295-315.
Whittaker DJ and Triplett BA，1999.发育棉花纤维中α-微管蛋白转录物积累的基因特异性改变.Plant Physiol.，121(1)：181-8.
序列表
<110>李学宝
蔡林
程宁辉
刘建伟
<120>来自棉花的纤维特异性肌动蛋白启动子的分离和鉴定
<130>2577-139
<140>
<141>
<160>2
<170>PatentIn Ver.2.1
<210>1
<211>685
<212>DNA
<213>Arabidopsis sp.
<400>1
ctggagctcg cgcgcctgca ggtcgacact agtggatcca aagtaattcg gcacgagggg 60
tttctcacac cgtgccaatc tatgaaggat atgcccttcc acatgccatc ctccgtcttg 120
accttgcagg tcgtgatcta accgatgcct tgatgaaaat tcttaccgag agaggttaca 180
tgttcaccac cactgctgaa cgggaaattg tccgtgacat gaaggagaag cttgcttatg 240
ttgccctgga ctatgagcag gaactggaga ctgcgaagag cagctcatct gttgagaaaa 300
actatgagtt gcctgacgga caagtcatta ctattggagc tgagagattc cgttgcccgg 360
aagtcctctt ccagccatct ttcatcggga tggaagctgc tggaatccat gaaactacct 420
acaactctat catgaagtgt gatgtggata tcaggaagga tctctacggt aacattgtgc 480
tcagtggggg ttcaaccatg ttccctggta ttgcagaccg catgagcaag gagatcactg 540
cacttgctcc aagcagcatg aagattaaag tcgttgcccc accagaaaaa aaaatacagt 600
gtctggattg gaaggatcta tcttggcatc actccacacc ttccaacaaa tgtggatttc 660
ccagggtgaa tttgatgaat ccggc                                       685
<210>2
<211>3041
<212>DNA
<213>Arabidopsis sp.
<400>2
actatagggc acgcgtggtc gacggcccgg gctggtcctc taaagaacaa ttgtgtcaag   60
tcgttcttgc cgagcaaatc cgaataggag cttagagtaa catctaacag acggactgct   120
ccagcattaa ctgtttggtg aaaatgttaa tggtagtgct atgtcgaagt attttcatgg   180
aaggtgttaa gaattaatgt tattgggatt actaatttct agtattaatt gtggtttgga   240
agttaatata taattattca atccttgttt tttatttttt ttttataaca caattacaaa   300
taatttattt aactttggtt gttttcaatt tatgacggtt aatattttag tttaataatt   360
gagcattatt atatattaaa taaataaatc attgtaatat atgtaaaaat aatttaaaat   420
ataaatttat taatatatat aataaactca atcaaacaat aaaaagataa taaattctta   480
aatatataaa ttttttaaaa tagcttttca gtaaatctgt caaacaatag aaaatatttt   540
ttgcaggttc atccaaacac cagaaaagta aatcattttc agaaaagtaa atcatttttc   600
agaaattatt tttcggaaat tattttactg gcaaacaaat ggagtctaag tgtttctgtt   660
tttatttttt atttttctat ttagagaaac tagaaattga tttgtcaaat gtctttaatc   720
tagcttgttt agattagttg aagggcacag aacccgcgtt gtcaagtgat tttgctgtac   780
tcactaccta gattcttatt ttcagtattg taaaagatgg ccgacggtga ggctattcaa   840
cccctcgtct gtgataatgg aactggaatg gtgaaggtta gttatttttt agaccaaagc   900
aaacctgaca cctagctttt agacttggac aaggataaaa tctgtttaag tgggcttagc   960
tcaggcttct acattcaaag cctgaatgca gctcagctca tttacattat ataatttata   1020
gatataatag atacatatat aatactataa tttaaacatt aattttctaa atcaatggta   1080
aggcatattg cactcaagag aggagacata gatttagacc ttggaaacga cattgttggg   1140
aaaggtatct ataatccatg aacaaggacc ataaacatgg acatgaagaa tacccaaaaa   1200
aaatatattt taagaaatag aaaatactat tggtagattt gggtaaaata tgagatcata   1260
ttatggacta agccgagctt gggcacataa gaattatgat gatatcatac acaaacctgg   1320
ccggtctatg aacacttcta gacctgagtc ataatctcgg ttattgttta tttctttatg   1380
aaaagtaact tatggttaag ctaattttgt ctgtaatgta ggccggtttt gctggtgatg   1440
atgctccaag ggcagttttt cccagtatcg ttggtcgtcc ccggcacact ggtgttatgg   1500
ttgggatggg tcagaaggat gcctatgtag gagatgaagc acaatctaaa ggaggtatcc   1560
ttactttgaa atatcctatt gagcatggta ttgtgagcaa ttgggatgat atggaaaaga   1620
tctggcatca tacattctac aacgaactcc gtgttgttcc tgaggagctc cctgtgctac   1680
tcacggaagc acctctcaac cccaaggcca atagagaaaa gaagactcag atcatgtttg   1740
agaccttcaa tgtacctgct atgtatgttg ccatccaggc cgttctctct ctgtatgcca   1800
gtggtcgtac aacaggtttg ttagacttga aacttctatg agcttttctc attttaatga   1860
tattttcgaa tcatgttgac actggattat ccctctattg gaacaggtat tgtgctggat   1920
tccggtgatg gtgtttctca catcgtgcca atctatgaag gatatgccct tccacatgcc   1980
atcctccgtc ttgaccttgc aggtcgtgat ctaaccgatg ccttgatgaa gattcttacc   2040
gagagaggtt acatgttcac caccactgct gaacgggaaa ttgtccgtca catgaaagag   2100
aagcttgctt atgttgccct ggactatgag caggagctgg agactgccaa gagcagctca   2160
tctgttgaga agaactatga gttgcctgac ggacaagtta ttactattga agctgagaga   2220
ttccgttgcc cggaagtcct cttccagcca tctttcatcg ggatggaagc tgctggaatc   2280
catgaaacta cctacaactc tatcatgaag tgtgatgtgg atatcaggaa ggatctctac   2340
ggtaacattg tgctcagtgg gggttcaacc catgttcccc ggtattgcag accgcatgag   2400
caaggagatc actgcacttg ctccaagcag catgaagatt aaggtcgttg cgccaccaga   2460
gagaaagtac agtgtctgga ttggaggatc tatcttggca tcactcagca ccttccagca   2520
ggtaaatata tatttttata tttggctcta cttcttttgt ttgatggttg tccgacactg   2580
acgttcttgc tttacagatg tggatttcca agggtgagta tgatgaatcc ggtccatcca   2640
ttgtccacag gaagtgcttc taagttttgt aattgctttt gatggtgatc tacattttgc   2700
atttagttgg ctcttttttg gcgtgccgtg tcaagtgaac tcaaaagtct ggtttatgtg   2760
cgggaagtta gggatcattg taggatggtg tacctgatat tgacgtatta ttattttagc   2820
ctttcaccgt atcaccacca ttaagctgat gggccctaag gagatggcgg tggacggaca   2880
attggtgctt aattccttcc ctacaatcca tctttgaacc atgctgctta aaaggatgtt   2940
tggagcggga gactggattg tggtgctttt atttttttat ttatttaata ttcaagggtt   3000
ttgagaacat taatgttaat agctattatt gtacgagatt t                       3041

Claims (1)

1.一种棉花纤维特异性启动子，由具有SEQ ID NO：2的1-816位核苷酸序列的棉花肌动蛋白基因CFACT1启动子的0.8kb片段组成。
CN00813722.6A 2000-08-01 2000-08-01 来自棉花的纤维特异性肌动蛋白启动子的分离和鉴定 Expired - Fee Related CN1377417B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/SG2000/000112 WO2002010413A1 (en) 2000-08-01 2000-08-01 Isolation and characterization of a fiber-specific actin promoter from cotton

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1377417A CN1377417A (zh) 2002-10-30
CN1377417B true CN1377417B (zh) 2010-05-12

Family

ID=20428844

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN00813722.6A Expired - Fee Related CN1377417B (zh) 2000-08-01 2000-08-01 来自棉花的纤维特异性肌动蛋白启动子的分离和鉴定

Country Status (9)

Country Link
US (1) US6995256B1 (zh)
EP (1) EP1226259B1 (zh)
CN (1) CN1377417B (zh)
AR (1) AR029731A1 (zh)
AT (1) ATE280237T1 (zh)
AU (1) AU782244B2 (zh)
DE (1) DE60015170D1 (zh)
TR (2) TR200200852T1 (zh)
WO (1) WO2002010413A1 (zh)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100285985A1 (en) * 2003-04-15 2010-11-11 Applied Dna Sciences, Inc. Methods and Systems for the Generation of Plurality of Security Markers and the Detection Therof
US20090286250A1 (en) * 2006-05-19 2009-11-19 James Arthur Hayward Incorporating soluble security markers into cyanoacrylate solutions
US8372648B2 (en) 2003-04-16 2013-02-12 APDN (B.V.I.), Inc. Optical reporter compositions
US8426216B2 (en) * 2003-04-16 2013-04-23 APDN (B.V.I.), Inc. Methods for authenticating articles with optical reporters
US8420400B2 (en) * 2003-04-16 2013-04-16 APDN (B.V.I.), Inc. System and method for authenticating tablets
US8124333B2 (en) 2003-04-16 2012-02-28 APDN, Inc. Methods for covalent linking of optical reporters
US8415164B2 (en) 2003-04-16 2013-04-09 Apdn (B.V.I.) Inc. System and method for secure document printing and detection
US8415165B2 (en) 2003-04-16 2013-04-09 APDN (B.V.I.), Inc. System and method for authenticating sports identification goods
ES2373329T3 (es) 2005-06-24 2012-02-02 Bayer Bioscience N.V. Métodos para alterar la reactividad de paredes celulares de plantas.
US9790538B2 (en) 2013-03-07 2017-10-17 Apdn (B.V.I.) Inc. Alkaline activation for immobilization of DNA taggants
US10741034B2 (en) 2006-05-19 2020-08-11 Apdn (B.V.I.) Inc. Security system and method of marking an inventory item and/or person in the vicinity
CN101583719B (zh) 2006-12-20 2015-03-25 孟山都巴西有限公司 用于改变纤维长度和/或植物高度的核酸构建体和方法
US9057073B2 (en) 2007-01-11 2015-06-16 Bayer Cropscience N.V. Differential expression of subgenome specific alleles in cotton and uses thereof
CN104969864A (zh) 2008-05-26 2015-10-14 拜尔作物科学公司 改变产纤维植物中纤维强度的方法和手段
US8940485B2 (en) * 2008-11-12 2015-01-27 Apdn (B.V.I.) Inc. Methods for genotyping mature cotton fibers and textiles
US8669079B2 (en) 2008-11-12 2014-03-11 Cara Therapeutics, Inc. Methods for genetic analysis of textiles made of Gossypium barbadense and Gossypium hirsutum cotton
MX2012008600A (es) 2010-01-25 2012-11-30 Bayer Cropscience Nv Metodos para la manufactura de paredes celulares vegetales que comprenden quitina.
EP2627771B1 (en) 2010-10-15 2015-08-12 Bayer CropScience NV Methods for altering the reactivity of plant cell walls
CN102485894B (zh) * 2010-12-06 2013-10-23 华中农业大学 两个棉花纤维伸长期优势表达的启动子及应用
CN102643800B (zh) * 2012-04-25 2014-02-05 中国科学院植物研究所 一种提取植物dna的方法及其专用试剂盒
US9266370B2 (en) 2012-10-10 2016-02-23 Apdn (B.V.I) Inc. DNA marking of previously undistinguished items for traceability
US9297032B2 (en) 2012-10-10 2016-03-29 Apdn (B.V.I.) Inc. Use of perturbants to facilitate incorporation and recovery of taggants from polymerized coatings
US9963740B2 (en) 2013-03-07 2018-05-08 APDN (B.V.I.), Inc. Method and device for marking articles
ES2703169T3 (es) 2013-05-14 2019-03-07 Bayer Cropscience Nv Expresión selectiva mejorada de transgenes en plantas productoras de fibra
WO2014198885A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 Bayer Cropscience Nv Plant fibers with improved dyeing properties
CA2925033A1 (en) 2013-09-24 2015-04-02 Bayer Cropscience Nv Hetero-transglycosylase and uses thereof
US9904734B2 (en) 2013-10-07 2018-02-27 Apdn (B.V.I.) Inc. Multimode image and spectral reader
CA2940655C (en) 2014-03-18 2020-07-07 Apdn (B.V.I.) Inc. Encrypted optical markers for security applications
US10745825B2 (en) 2014-03-18 2020-08-18 Apdn (B.V.I.) Inc. Encrypted optical markers for security applications
ES2702207T3 (es) 2014-03-21 2019-02-27 Bayer Cropscience Nv Fibras de algodón con contenido de glucosamina incrementado
US10760182B2 (en) 2014-12-16 2020-09-01 Apdn (B.V.I.) Inc. Method and device for marking fibrous materials
WO2017180302A1 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Apdn (B.V.I.) Inc. Method of marking cellulosic products
US10995371B2 (en) 2016-10-13 2021-05-04 Apdn (B.V.I.) Inc. Composition and method of DNA marking elastomeric material
US10920274B2 (en) 2017-02-21 2021-02-16 Apdn (B.V.I.) Inc. Nucleic acid coated submicron particles for authentication
CN109536511A (zh) * 2018-12-13 2019-03-29 浙江农林大学 一个棉花肌动蛋白基因突变体及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5620882A (en) * 1988-10-04 1997-04-15 Agracetus, Inc. Genetically engineering cotton plants for altered fiber
CN1189852A (zh) * 1995-06-07 1998-08-05 卡尔金公司 棉花纤维转录因子

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5620882A (en) * 1988-10-04 1997-04-15 Agracetus, Inc. Genetically engineering cotton plants for altered fiber
CN1189852A (zh) * 1995-06-07 1998-08-05 卡尔金公司 棉花纤维转录因子

Also Published As

Publication number Publication date
AU782244B2 (en) 2005-07-14
EP1226259A1 (en) 2002-07-31
CN1377417A (zh) 2002-10-30
WO2002010413A1 (en) 2002-02-07
US6995256B1 (en) 2006-02-07
EP1226259B1 (en) 2004-10-20
ATE280237T1 (de) 2004-11-15
TR200200852T1 (tr) 2003-06-23
DE60015170D1 (de) 2004-11-25
AR029731A1 (es) 2003-07-10
AU6745200A (en) 2002-02-13
TR200200850T1 (tr) 2002-10-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1377417B (zh) 来自棉花的纤维特异性肌动蛋白启动子的分离和鉴定
CN101578371B (zh) 亚基因组特异性等位基因在棉花中的差异表达及其用途
CN103328635B (zh) 纤维选择性启动子
CN110628808B (zh) 拟南芥AtTCP5基因及其在调控株高上的应用
CN109652423B (zh) 一种水稻开花期调控蛋白及其在育种中的应用
US6998478B1 (en) Isolation and characterization of a fiber-specific β-tubulin promoter from cotton
CN102675441B (zh) OsMADS57蛋白或其编码基因在抑制水稻分蘖中的应用
CN104611348A (zh) 一种棉花纤维优势表达基因、表达载体和应用及含有该基因的转基因棉花的制备方法
CN102690341A (zh) 一种与植物分蘖相关蛋白及其编码基因
CN102094021A (zh) 玉米愈伤组织特异性启动子及其克隆方法与应用
CN103772495B (zh) 一个棉花长纤维高表达基因（GhLFHE1）及其应用
JP3538428B2 (ja) 植物プロモーターおよび該プロモーターを用いた遺伝子発現方法
WO1999043818A1 (fr) Nouveaux fragments d&#39;adn regissant l&#39;expression genique predominante dans les organes des fleurs
US5723757A (en) Plant promoters specific for sink organ expression of genes
CN115772212A (zh) 紫花苜蓿叶绿体MsSAP22基因及在提高植物抗旱性中的应用
CN110358774B (zh) 控制水稻开花时间的基因、蛋白质、基因表达盒、表达载体、宿主细胞、方法及应用
CN111218454B (zh) GhRFP1基因、及其重组载体
Tan et al. Cloning and expression analysis of two cotton (Gossypium hirsutum L.) genes encoding cell wall proline-rich proteins
CN104894114B (zh) 一种花生种子中优势表达启动子的克隆和应用
CN112646015B (zh) 改变玉米开花期的基因及方法
CN112724215B (zh) 改变玉米开花期的基因及方法
JP4118385B2 (ja) 植物プロモーター
CN113416747A (zh) 一种创建温度敏感型雄性不育植物的方法
CN104560906A (zh) 纤维细胞中特异表达的蛋白质CYP734A1 like-1及其应用
CN113584029A (zh) 一种水稻根特异表达基因OsHyPRP06/R3L1的启动子及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: TEMASEK LIFE SCIENCES LAB LTD

Free format text: FORMER OWNER: INST. OF MOLECULAR AGROBIOLOGY

Effective date: 20070112

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20070112

Address after: Singapore City

Applicant after: Temasek Life Sciences LAB

Address before: Singapore Singapore

Applicant before: Institute of Molecular Agrobiology

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20100512

Termination date: 20100801