CN1375500A

CN1375500A - 新的干扰素－胸腺肽融合蛋白及其制法和用途

Info

Publication number: CN1375500A
Application number: CN01105705A
Authority: CN
Inventors: 吴祥甫; 杨冠珍; 何志勇; 吴峻
Original assignee: Shanghai Institute of Biochemistry
Current assignee: Shanghai Institutes for Biological Sciences SIBS of CAS
Priority date: 2001-03-21
Filing date: 2001-03-21
Publication date: 2002-10-23
Anticipated expiration: 2021-03-21
Also published as: CN1191271C; EP1440982A2; WO2002081519A9; JP2004537286A; AU2002307848A1; WO2002081519A2; WO2002081519A3

Abstract

本发明提供了干扰素与胸腺肽的融合蛋白(IFN－THY融合蛋白),编码该融合蛋白的DNA序列,含该DNA序列的载体,含该载体的宿主细胞,用基因工程制备该融合蛋白的方法,以及含该融合蛋白的药物组合物。本发明的IFN－THY融合蛋白既具有IFN的活性,又具有THY的免疫刺激活性,可以用于如病毒性感染等疾病的治疗和机体免疫机能增强。

Description

新的干扰素-胸腺肽融合蛋白及其制法和用途

本发明涉及DNA重组技术和药物领域。更具体地，本发明涉及人α干扰素2b(HuIFNα2b，以下简称IFN)与人胸腺肽(Thymosin，以下简称THY)的融合蛋白，编码该融合蛋白的DNA序列，含该DNA序列的载体，含该载体的宿主细胞，用基因工程制备该融合蛋白的方法，以及该融合蛋白在如病毒性感染等疾病治疗和机体免疫增强中的应用。

干扰素首先发现于1957年，即Isaaca和Lindenmann称之为能够诱导对同源或异源病毒性感染产生抗性的细胞产物。经过40多年的研究，干扰素的两个大类(IFN-α/β或称为I型IFN和IFN-γ或称为II型IFN)的基因、蛋白质结构及其受体基因、蛋白质结构均有了较为深入的研究。在此期间发现了许多IFN的生物活性，如诱导抗病毒状态、抑制细胞生长、刺激细胞生长、激活自然杀伤细胞等等。然而其中抗病毒活性最为公认。IFN-α是由白细胞产生，具有较强的抑制病毒繁殖、抑制肿瘤细胞增殖，以及免疫调节等作用。目前IFN-α已被批准用于病毒性感染等多种疾病的治疗。

Capon D.J.等人报道，HuIFNα2b可提高免疫能力，从而起到抗病毒治疗效果(Capon D.J.，Shepard，H.M.and Goeddel D.V.，Mol.Cell.Biol.5(4)，768-779，1985)。

胸腺肽(Thymosin)，也称胸腺素，是Abraham等于1965年首先从胸腺中分离得到的。胸腺肽是一种具有促进T-淋巴细胞分化、成熟和增强细胞免设功能的由28个氨基酸组成的多肽。该活性多肽目前已广泛应用于治疗免疫缺陷、肿瘤、病毒性感染和自身免疫病等等疾病。

因此IFN-α和THY具有相似和相辅相成的生物活性，如兔调节、病毒性感染和肿瘤等疾病的治疗等。然而，目前IFN-α和THY制剂都是单独生产，临床上IFN-α和THY也都是单独给药，这样导致了药物成本高。此外，IFN-α和THY的制备(尤其是分离纯化)也较繁琐。

因此，本领域迫切需要开发新的具有IFN-α和THY两者生物活性的药物。此外，本领域还迫切需要开发成本低廉和或步骤简便的生产工艺。

本发明的一个目的就是提供一种新的具有IFN-α和THY两者生物活性的药物，它是IFN-α和THY的融合蛋白。

本发明的另一目的是提供编码所述融合蛋白的DNA、含该DNA序列的载体，含该载体的宿主细胞。

本发明的另一目的是提供一种成本低廉和或步骤简便的生产所述IFN-THY融合蛋白的方法。

在本发明的第一方面，提供了一种融合蛋白，它包括：人α干扰素2b的氨基酸序列、人胸腺肽的氨基酸序列、以及位于人α干扰素2b氨基酸序列和人胸腺肽氨基酸序列之间的1-20个氨基酸的连接肽序列。

较佳地，所述的接头序列含4-10个氨基酸。更佳地，所述的融合蛋白包括SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的DNA分子，它编码本发明上述的融合蛋白。较佳地，所述的DNA分子编码包括SEQ ID NO：2中所示的氨基酸序列的融合蛋白。更佳地，所述的DNA分子包括SEQ ID NO：1中所示的核苷酸序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述DNA分子的载体。较佳地，所述的载体包括重组家蚕核型多角体病毒(Bobyx Mori Nuclear polyhedrosis virus)BacITCGMCC No.0504。还提供了含有上述载体的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了一种产生本发明融合蛋白的方法，它包括步骤：

在适合表达所述融合蛋白的条件下，培养上述的宿主细胞，或者培养含上述宿主细胞的动物，从而表达出所述的融合蛋白；和

分离所述的融合蛋白。

在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，它包括药学上可接受的载体或赋形剂或稀释剂，以及有效量的本发明的融合蛋白。

本发明人经过广泛而深入的研究，将IFN基因和THY基因融合在一起，并在家蚕幼虫中进行高效表达，产生IFN-THY的融合蛋白，这样既保留了IFN的各种生物活性，又使其带上了THY的刺激机体增强免疫的活性，使其成为一种新型的病毒性感染治疗、抑制病毒复制和增强机体免疫力的药物。

定义

如本文所用，术语“干扰素和胸腺肽的融合蛋白”、“IFN-THY融合蛋白”等可互换使用，都指由干扰素氨基酸序列和胸腺肽氨基酸序列融合而成的蛋白，其中在两者之间可以有或者没有连接肽序列。

如本文所用，术语融合蛋白中“干扰素氨基酸序列”指在所述融合蛋白中的一部分氨基酸序列，该序列与天然的或变异的干扰素具有基本上相同的氨基酸序列，并且具有与天然干扰素基本上相同的生物活性。优选的干扰素氨基酸序列包括：α干扰素，更佳地α干扰素2b，最佳地天然的人α干扰素2b的氨基酸序列。

如本文所用，术语融合蛋白中“胸腺肽氨基酸序列”指在所述融合蛋白中的一部分氨基酸序列，该序列与天然的或变异的胸腺肽具有基本上相同的氨基酸序列，并且具有与天然胸腺肽基本上相同的生物活性。优选的胸腺肽氨基酸序列是人的天然胸腺肽序列。

干扰素和胸腺肽的序列可以源自人，也可以源自非人的动物。然而，优选的是人的天然序列。

如本文所用，术语“连接肽”指位于干扰素氨基酸序列和胸腺肽氨基酸序列之间的、起连接作用的短肽。连接肽的长度通常为1-20个氨基酸，较佳地为3-10个氨基酸，最佳地为4-6个氨基酸。技术人员可安装本领域常规方法设计连接肽。通常，连接肽不影响或严重影响干扰素氨基酸序列和胸腺肽氨基酸序列形成正确的折叠和空间构象。

编码本发明融合蛋白的DNA序列，可以全部人工合成。也可用PCR扩增或合成的方法获得干扰素和或胸腺肽的编码DNA序列，然后将其拼接在一起，形成编码本发明融合蛋白的DNA序列。

在获得了编码本发明新融合蛋白的DNA序列之后，将其连入合适的表达载体，再转入合适的宿主细胞。最后，培养转化后的宿主细胞，通过分离纯化得到本发明的新的融合蛋白。

如本文所用，术语“载体”包括质粒、粘粒、表达载体、克隆载体、病毒载体等。

在本发明中，可选用本领域已知的各种载体如市售的载体。比如，选用市售的载体，然后将编码本发明新融合蛋白的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，可以形成蛋白表达载体。

如本文所用，“可操作地连于”指这样一种状况，即线性DNA序列的某些部分能够影响同一线性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信号肽DNA作为前体表达并参与多肽的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)DNA就是可操作地连于多肽DNA；如果启动子控制序列的转录，那么它是可操作地连于编码序列；如果核糖体结合位点被置于能使其翻译的位置时，那么它是可操作地连于编码序列。一般，“可操作地连于”意味着相邻近，而对于分泌前导序列则意味着在阅读框中相邻。

在本发明中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞，昆虫细胞、和哺乳动物细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，更佳地是家蚕细胞。

在获得转化的宿主细胞后，可在适合表达本发明融合蛋白的条件下培养该细胞，从而表达出融合蛋白。然后再分离出表达的融合蛋白。

然而，更佳地的表达系统是家蚕表达系统。目前已经证明，由于有家蚕淋巴血本身的大量蛋白的保护作用，和一些未知机理的作用，家蚕表达生产的药物，可以直接经过口服给药进入血液循环。因此，家蚕表达生产药物不仅可以免除病人的注射的痛苦和被感染的危险，而且可以免除药物的分离和纯化过程，大大降低药物的生产成本。

在本发明的一个实施例中，将IFN-THY融合基因克隆入杆状病毒转移质粒，并提供了含IFN-THY融合基因的重组昆虫杆状病毒。用所述重组昆虫杆状病毒感染家蚕，可使家蚕产生本发明的融合蛋白。

本发明的IFN-THY融合蛋白具有IFN活性和THY活性。在一个实施例中，将家蚕淋巴血经5000rpm 5分钟离心后取上清，直接用于IFN活性测定。结果表明，96小时表达样品IFN活力为3.72×10⁴IU/ml，110小时表达样品为3.10×10⁵IU/ml。同时还将淋巴血上清进行了胸腺肽玫瑰花结法活性测定。结果表明，24-110小时表达样品的玫瑰花结形成率均在10％以上(见图6)，即表明均有明显的胸腺肽活性。

在本发明的另一方面，提供了含有外源IFN-THY融合基因的家蚕。在所述家蚕的部分或全部细胞中，含有外源的外源IFN-THY融合基因。

在本发明的另一方面，还提供了一种药物组合物。本发明的药物组合物包括有效量的本发明的新型IFN-THY融合蛋白，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在制备这些组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，或用赋形剂稀释，或包在可以胶囊或药囊形式存在的载体中。当赋形剂起稀释剂作用时，它可以是固体、半固体或液体材料作为赋形剂、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、、溶液剂、糖浆剂、灭菌注射溶液等。合适的赋形剂的例子包括：乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、等。制剂还可包括：湿润剂、乳化剂、防腐剂(如羟基苯甲酸甲酯和丙酯)、甜味剂等。

组合物可制成单元或多元剂型。各剂型包含为了产生所期望的治疗效应而计算出预定量的活性物质，以及合适的药剂学赋形剂。

该药物组合物可根据待治疗的疾病并以对病人有益的剂量(取决于体重和其他考虑因素)进行施用，这可以由医务人员确定。此外，本发明的融合蛋白还可与其他治疗药物联用。

综上所述，本发明的优点如下：

(1)以基因工程的方法制备了IFN和THY的融合蛋白，避免了化学交联法存在的操作繁琐、交联效率低、产物不均一、蛋白质容易失活以及成本较高等缺点；

(2)在一种载体上同时生产IFN和THY，避免了重复劳动；

(3)家蚕表达的蛋白类药物可以直接口服，避免了蛋白质分离纯化的高成本操作，以及为病人解除了注射的痛苦的被感染的威胁；

(4)家蚕幼虫只需用桑叶喂养，成本很低。

家蚕幼虫表达的IFN-THY融合蛋白，既具有IFN的生物活性，又具有THY的生物活性，是一种如病毒性感染等疾病治疗和增强机体免疫的新型药物。

附图说明：

图1是IFN基因PCR扩增产物电泳图谱。

图2显示了含IFN-THY融合基因的大肠杆菌表达质pET-IT。

图3显示了含IFN-THY融合基因的昆虫杆状病毒转移质粒pBacPAK-IT。

图4显示了第二轮噬斑筛选的Southern点杂交结果。

图5是家蚕表达产物的SDS-PAGE分析图谱，其中泳道1-6分别是重组病毒感染后不同时间的样品，泳道7为分子量标准物。

图6是家蚕表达产物的THY活性的条形示意图，其中对照为生理盐水和BmPAK感染的家蚕血淋巴。

图7是本发明IFNα2b/THY融合蛋白的氨基酸序列及其编码DNA序列。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：ColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1

IFN-THY融合基因的合成以及大肠杆菌表达质粒的构建

为了使IFN-THY融合蛋白具有正确的空间构象，以GGGGS为连接肽使IFN和THY连接在一起。根据IFN基因序列以及连接肽的核苷酸序列，设计并合成了一对引物IFNPRI1和IFNPRI2，其核苷酸序列分别为：

IFNPRI1：5’GCCATATGTG CGATCTGCCT CAAACC 3’(SEQ ID NO：3)

IFNPRI2：5’ATGGATCCAC CACCGCCTTC CTTACTTCTT AAACTTTC 3’(SEQ ID NO：4)

其中，IFNPRI1为IFN成熟蛋白N端的编码序列；IFNPRI2为IFN C端以及连接肽编码序的互补序列。

以IFNPRI1和IFNPRI2为引物，含IFN基因的pSK-IFN质粒为模板，PCR扩增带有连接肽核苷酸序列的IFN基因序列，在其5’端和3’端分别引入NdeI和BamHI酶切位点。PCR条件为：94℃ 1min，50℃ 1min，72℃ 1min，共35个循环，第一个循环94℃变性5min，最后一个循环72℃延伸10min，结果获得了约500bp的扩增产物(图1)。

PCR产物经低熔点琼脂糖纯化后，克隆到pSK(+)的EcoRV位点中，构建质粒pSK-IFNL。经测序分析证明IFN基因和连接肽核苷酸序列完全正确。

用NdeI和BamHI双酶切，分离pSK-IFNL质粒上的IFN及连接肽核苷酸序列，并与事先经NdeI和BamHI双酶切的pET-28a(+)相连接，构建形成质粒pET-IFNL。

根据THY的氨基酸序列，并按真核生物偏爱的密码子设计合成了THY1和THY2两个片段，其核苷酸序列分别为：

THY1：5’GGCGGATCCG GCTCTGACGC TGCTGTGGAC ACCTCTTCTG AAATCACCACCAAGGACCTG AAGGAAAAGA AGG 3’(SEQ ID NO：5)

THY2：5’CCAAGGACCT GAAGGAAAAG AAGGAAGTGG TGGAAGAAGC TGAAAACGGCTGAAGCTT 3’(SEQ ID NO：6)

其中，THY1为THY N端的编码序列，引入BamHI酶切位点；THY2为THY C端编码序列的互补序列，引入XhoI酶切位点。

将THY1和THY2两个片段1∶1混合，加入dNTP和Klenow酶进行补平，克隆到pSK(+)的EcoRV位点中，构建质粒pSK-THY。经测序分析证明合成的THY基因序列正确。

用BamHI和XhoI双酶切，分离pSK-THY质粒上的THY基因，并与事先经BamHI和XhoI双酶切的pET-IFNL质粒相连接，构建含IFN-THY融合基因的大肠杆菌表达质粒pET-IT(图2)。该质粒在从5’至3’方向依次含有IFN基因，GGGGS连接肽编码序列，以及THY基因。

IFN-THY融合基因的DNA序列如SEQ ID NO：1所示，其中编码区为第1-594位。所编码的IFN-THY融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，共198个氨基酸，分子量为22kDa。

实施例2

含IFN-THY融合基因的昆虫杆状病毒转移质粒pBacPAK-IT的构建

将含IFN-THY融合基因的大肠杆菌表达质粒pET-IT先用NdeI酶切，然后用Klenow酶补平，再用XhoI酶切，用低熔点琼脂糖分离IFN和THY的融合基因片段，并与事先经BamHI酶切并用Klenow酶补平后再用XhoI酶切的pBacPAK8相连接，构建含IFN-THY融合基因的昆虫杆状病毒转移质粒pBacPAK-IT(图3)。该质粒在从5’至3’方向依次含有IFN基因，GGGGS连接肽编码序列，以及THY基因。

实施例3

含IFN-THY融合基因的重组昆虫杆状病毒的获得

取5微升含IFN-THY融合基因的昆虫杆状病毒转移质粒pBacPAK-IT和6微升经Bsu36I酶切线性化的修饰病毒BmBacPAK6，加入100微升无血清的TC-100培养基混均。取6微升Lipofectin加入100微升无血清的TC-100培养基混均。将两者混匀，室温放置15分钟，加入800微升无血清的TC-100培养基混匀。将事先培养在35mm培养皿中的Bm N细胞用无血清的TC-100培养基洗涤两次，并逐滴加入转移质粒和Lipofectin混合物，27℃培养4-5天，收取上清进行第一轮噬斑筛选。取5微升上清感染35mm培养皿中的Bm N细胞，1小时后弃去上清并加入等量混合的TC-100培养基和低熔点琼脂糖。4-5天后挑取噬斑，感染Bm N细胞3-4天，保存上清，细胞用NaOH裂解用于Southern印迹斑点杂交。取阳性克隆的上清进行第二轮噬斑筛选(见图4，箭头所指的噬斑)。取阳性克隆的上清感染Bm N细胞扩增，即可得到大量的含IFN-THY融合基因的重组杆状病毒。

该重组杆状病毒被命名为重组家蚕核型多角体病毒(Bobyx Mori Nuclearpolyhedrosis virus)BacIT，并于2000年11月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国，北京)，保藏号为CGMCC No.0504。

实施例4、IFN-THY融合基因在家蚕五龄幼虫中的表达

取实施例3中扩增的含IFN-THY融合基因的重组杆状病毒，注射到五龄家蚕幼虫体内，每头注射10微升左右。分别取24、48、72、96和110小时表达的家蚕淋巴血，5000rpm 5min离心后取上清，用PBS pH 7.4稀释10倍后，加入等体积的2×蛋白质上样缓冲液，取20微升进行SDS-PAGE分析。结果表明，从24小时开始就有IFN-THY融合蛋白表达(见图5)，IFN-THY融合蛋白的分子量为约22kDa。

实施例5

IFN-THY融合蛋白的IFN活性测定

采用L929细胞(小鼠成纤维细胞系)病变抑制法测定IFN活性。在96孔板中倍比稀释待测家蚕淋巴血上清(每孔50微升，设三个重复)，随后各孔加入50微升L929细胞悬液(4×10⁴细胞)，设细胞和病毒对照，37℃培养24小时，弃去孔中液体，各孔加入100微升滤泡口炎病毒(VSV)悬液(250 TCID50/ml)(TCID：tissue culture infectious dose)，细胞对照孔中加入100微升培养基，培养36小时，当病毒对照孔中L929细胞几乎全部发生病变时终止培养。弃去孔中液体，每孔加入0.5％的结晶紫液(结晶紫0.5克，NaCl 0.85克，溶于50ml无水乙醇，3ml甲醇，47ml蒸馏水中)200微升，置37℃15min，用自来水洗去残余的染料，每孔加入200微升脱色液(50ml乙二醇单甲醛与50ml蒸馏水混均)，用震荡器震荡，待染料完全从细胞内脱出，用分光光度计在540nm波长处比色。以下列公式计算IFN效价：

结果表明，96小时表达样品IFN活力为3.72×10⁴IU/ml，110小时表达样品为3.10×10⁵IU/ml。

实施例6

IFN-THY融合蛋白的THY活性测定

采用玫瑰花结法测定THY活性。胸腺肽能与T淋巴系统作用，调节和增强机体的免疫功能。通过胸腺肽源激活新鲜的猪胸腺中的脱E胸腺细胞，使它与绵羊红细胞形成玫瑰花结。取出经过与家蚕幼虫表达后的含IFN-THY融合蛋白的淋巴血反应的胸腺细胞用油镜观察进行计数：以视野中央淡蓝色较大的细胞为淋巴细胞(即胸腺细胞)，每次数100个胸腺细胞，共数200个，统计其中的E玫瑰花结形成细胞数(结合4个以上绵羊红细胞的胸腺细胞)，取其平均数，即为样品或对照的读数。按下列公式计算THY活力：

测定结果如表1所示：

表1 IFN-THY融合蛋白的THY活性

	玫瑰花结形成平均读数(％)	活性(％)
	玫瑰花结形成平均读数(％)	活性(％)	Hank’s液	8
无IFN-THY融合蛋白淋巴血对照	7		Hank’s液	8
无IFN-THY融合蛋白淋巴血对照	7		48小时表达样品2倍稀释	21	13
48小时表达样品5倍稀释	17	9	48小时表达样品2倍稀释	21	13
48小时表达样品5倍稀释	17	9	72小时表达样品2倍稀释	15	7
72小时表达样品5倍稀释	23	15	72小时表达样品2倍稀释	15	7
72小时表达样品5倍稀释	23	15	96小时表达样品2倍稀释	18	10

96小时表达样品5倍稀释	20	12
96小时表达样品5倍稀释	20	12	110小时表达样品2倍稀释	17	9
110小时表达样品5倍稀释	18	10	110小时表达样品2倍稀释	17	9

以上结果表明，从48-110小时表达样品均有明显的THY活性。其活性条形示意图见图6。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表(1)一般信息：(ii)发明名称：新的干扰素-胸腺肽融合蛋白及其制法和用途(iii)序列数目：6(2)SEQ ID NO：1的信息：(i)序列特征：

(A)长度：604bp

(B)类型：核酸

(C)链性：双链

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：DNA(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：TGTGATCTGC CTCAAACCCA CAGCCTGGGT AGCAGGAGGA CCTTGATGCT CCTGGCACAG 60ATGCGTAGAA TCTCTCTTTT CTCTTGCTTG AAGGACAGAC ATGACTTTGG ATTTCCCCAG 120GAGGAGTTTG GCAACCAGTT CCAAAAGGCT CAAACCATCC CTGTCCTCCA TGAGATGATC 180CAGCAGATCT TCAATCTCTT CAGCACAAAG GACTCATCTG CTGCTTGGGA TGAGACCCTC 240CTAGACAAAT TCTACACTGA ACTCTACCAG CAGCTGAATG ACCTGGAAGC CTGTGTGATA 300CAGGGGGTGG GGGTGACAGA GACTCCCCTG ATGAAGGAGG ACTCCATTCT GGCTGTGAGG 360AAATACTTCC AAAGAATCAC TCTCTATCTG AAAGAGAAGA AATACAGCCC TTGTGCCTGG 420GAGGTTGTCA GAGCAGAAAT CATGAGATCT TTTTCTTTGT CAACAAACTT GCAAGAAAGT 480TTAAGAAGTA AGGAAGGCGG CGGATCCTCT GACGCTGCTG TGGACACCTC TTCTGAAATC 540ACCACCAAGG ACCTGAAGGA AAAGAAGGAA GTGGTGGAAG AAGCTGAAAA CGGCTGAAGC 600TTGC 604(2)SEQ ID NO：2的信息：(i)序列特征：

(A)长度：198个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性 (ii)分子类型：多肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：CDLPQTHSLG SRRTLMLLAQ MRRISLFSCL KDRHDFGFPQ EEFGNQFQKA 50QTIPVLHEMI QQIFNLFSTK DSSAAWDETL LDKFYTELYQ QLNDLEACVI 100QGVGVTETPL MKEDSILAVR KYFQRITLYL KEKKYSPCAW EVVRAEIMRS 150FSLSTNLQES LRSKEGGGSS DAAVDTSSEI TTKDLKEKKE VVEEAENG 198(2)SEQ ID NO：3的信息(i)序列特征

(A)长度：26碱基

(B)类型：核酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：寡核苷酸(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：GCCATATGTG CGATCTGCCT CAAACC 26(2)SEQ ID NO：4的信息(i)序列特征

(A)长度：38碱基

(B)类型：核酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：寡核苷酸(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：ATGGATCCAC CACCGCCTTC CTTACTTCTT AAACTTTC 38(2)SEQ ID NO：5的信息(i)序列特征

(A)长度：73碱基

(B)类型：核酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：寡核苷酸(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：GGCGGATCCG GCTCTGACGC TGCTGTGGAC ACCTCTTCTG AAATCACCAC 50CAAGGACCTG AAGGAAAAGA AGG 73(2)SEQ ID NO：6的信息(i)序列特征

(A)长度：58碱基

(B)类型：核酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：寡核苷酸(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：CCAAGGACCT GAAGGAAAAG AAGGAAGTGG TGGAAGAAGC TGAAAACGGC 50TGAAGCTT 58

Claims

1.一种融合蛋白，其特征在于，它包括：人α干扰素2b的氨基酸序列、人胸腺肽的氨基酸序列、以及位于人α干扰素2b氨基酸序列和人胸腺肽氨基酸序列之间的1-20个氨基酸的连接肽序列。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的接头序列含4-10个氨基酸。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白包括SEQ IDNO：2中所示的氨基酸序列。

4.一种分离的DNA分子，其特征在于，它编码权利要求1所述的融合蛋白。

5.如权利要求4所述的DNA分子，其特征在于，它包括SEQ ID NO：1中所示的核苷酸序列。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求4所述的DNA分子。

7.如权利要求6所述的载体，其特征在于，它包括重组家蚕核型多角体病毒(Bobyx Mori Nuclear polyhedrosis virus)BacIT CGMCC No.0504。

8.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求6所述的载体。

9.一种产生权利要求1所述的融合蛋白的方法，其特征在于，它包括步骤：

在适合表达所述融合蛋白的条件下，培养权利要求8所述的宿主细胞，或者培养含权利要求8所述宿主细胞的动物，从而表达出所述的融合蛋白；和

分离所述的融合蛋白。

10.一种药物组合物，其特征在于，包括药学上可接受的载体或赋形剂或稀释剂，以及有效量的权利要求1所述的融合蛋白。