CN1352685A - 单核细胞来源的核酸和相关的组合物及方法 - Google Patents
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Abstract
描述了编码多种单核细胞来源蛋白质的核酸以及有关的组合物,包括纯化的蛋白质和特异性抗体。还提供了应用这种组合物的方法。
Description
发明领域
本发明是针对与在免疫系统中具有功能作用的单核细胞内发现的某些基因有关的组合物。这些基因在控制哺乳动物免疫系统的发育、分化和/或生理作用中发挥功能。特别是本发明提供了几种核酸、蛋白质、抗体，以及应用它们的方法。发明背景
单核细胞是吞噬细胞，属于单核吞噬细胞系统，存在于循环系统中。这些细胞在骨髓中发生，它们一旦开始分化就只能在骨髓腔隙内停留短时间。然后它们进入循环系统，在这里可以保持相对长的一段时间，例如几天。通过被称为血细胞渗出的过程单核细胞可进入组织和体腔，在此它们分化成巨噬细胞，并可能分化成树状细胞。在炎症反应中，循环系统中单核细胞的数量可能倍增，增加数量的单核细胞许多都渗出进入炎症部位。关于单核细胞及其功能的评述见例如Gallin等(编著)1988，炎症：基本原理和临床相关性，Raven出版，NY；vanFurth(编著)1985，单核吞噬细胞：特征，生理学和功能，MartinusNijhoff，Dordrecht，Netherlands。
抗原呈递(Antigen Presentation)指的是蛋白质抗原被抗原呈递细胞(APC)吸收、加工，然后被识别而启动免疫应答的细胞过程。最具活性的抗原呈递细胞已被鉴定是巨噬细胞，巨噬细胞是从单核细胞，树状细胞和某些B细胞直接发育而成。
在大多数组织中都发现有巨噬细胞，此细胞具有内在化广泛多种蛋白质抗原和微生物的高度活性。它们具有高度发展的内吞活性，并分泌许多对启动免疫应答具有重要作用的产物。因此认为，许多由单核细胞表达或由单核细胞激活而诱导的基因对抗原的摄取、加工、呈递，或对所导致免疫应答的调节是重要的。
尽管单核细胞对免疫系统的功能具有意义，但对这些细胞的特征，不论是对于它们所表达的蛋白质还是对于它们的许多功能方面都仍然了解甚少，特别是对于与免疫应答启动有关的过程和机制，包括抗原的加工和呈递。因此本领域需要有一种作用剂，用于诊断和治疗由例如抗原呈递细胞的不适当调节、发育或生理作用所引起的疾病状态。发明概述
本发明通过提供几种组合物和方法实现了这种需要，用于确定某些基因产物的存在，含量、分布和正常状态，并用于促进发现治疗某些疾病状态的作用剂。
本发明是基于发现了从激活的单核细胞中分离的新型基因和基因产物。
本发明提供了分离的核酸序列，包括完整的蛋白质编码序列，以及它的互补序列，此分离的核酸序列显示在序列SEQ ID NO：1、3、5、7或9中，含有至少约12个连续的核苷酸，优选地至少约18个、更优选地至少约20～35个、而最优选地是含有35～55或更多的连续的核苷酸；或者它们编码显示在序列SEQ ID NO：2、4、6、8或10中的氨基酸序列。本发明包括这些序列的序列-保守性变异体的功能-保守性变异体。这种核酸可能是DNA、RNA、DNA/RNA双螺旋、蛋白质-核酸(PNA)、或者它们的衍生物。本发明还包括：含有这些序列的重组DNA载体(包括DNA表达载体)；含有这种载体的细胞，包括细菌、真菌、植物、昆虫和哺乳动物细胞；以及几种方法，用于产生包括由这些序列编码的RNA和多肽的表达产物。
本发明的多肽序列包含来源于SEQ ID NO：2、4、6、8或10的至少8个连续的氨基酸残基，优选地至少约10个，而更优选地至少约12个或更多。功能-保守性变异体和同系物包括在本发明的范围内。
本发明进一步提供了结合性组合物，特别是抗体，最特别地是单克隆抗体，它们可特异性地结合具有显示在SEQ ID NO：2、4、6、8或10中的氨基酸序列的多肽，或者它们的功能保守性变异体或同系物。还提供了几种方法，用于在宿主动物中产生具有所需结合特异性的抗体。发明详述
在此评述中所引用的所有专利申请，专利和参考文献在此均被完整地引入作为参考。
在实施本发明的过程中，应用了分子生物学、微生物学和重组DNA中的许多常规技术。这些技术是已被熟知的，在下列文献中有详细的说明：例如Sambrook等1989，分子克隆：实验室手册，第二版，冷泉港实验室出版，冷泉港，纽约；DNA克隆：实用技术，I和II卷，1985(D.N.Glover编著)；寡核苷酸合成，1984，(M.L.Gait编著)；核酸杂交，1985，(Hames和Higgins)；转录和翻译，1984(Hames和Higgins编著)；动物细胞培养，1986(R.I.Freshney编著)；固相化细胞和酶，1986，(IRL出版)：Perbal，1984，分子克隆实用指南；酶学方法丛书(Academic出版公司)；用于哺乳动物细胞的基因转移载体，1987(J.H.Miller和M.P.Calos编著，冷泉港实验室)；以及酶学方法，154和155卷(分别由Wn和Grossman以及Wu编著)。定义
1.“单核细胞来源的”核酸或多肽指的是最初从其中分离出此序列的来源。
2.“核酸”或“多核苷酸”指的是任何长度的含嘌呤和嘧啶的聚合体，包括聚核糖核苷酸或聚脱氧核糖核苷酸，或者混合的聚核糖-聚脱氧核糖核苷酸。包括单链和双链分子，即DNA-DNA，DNA-RNA和RNA-RNA杂交体，以及由碱基结合于氨基酸主链形成的“蛋白质核酸”(PNA)。还包括含有修饰碱基的核酸。
3.“编码序列”或“蛋白质编码序列”是能够被转录成mRNA和/或能够被翻译成多肽的多核苷酸序列。编码序列的界限一般由5′-末端的翻译起始密码子和3′-末端的翻译终止密码子来确定。
4.核酸序列的“互补序列”指的是参与同初始序列作Watson-Crick碱基配对的“反义”序列。
5.“分离的”核酸或多肽指的是从它原来的环境(例如，如果是天然存在的指其天然环境)中取出的成分。分离的核酸或多肽优选地含有少于大约50％的原来与其相结合的细胞成分，更优选地是少于大约75％，而最优选地是少于大约90％。
6.来源于指定序列的核酸或多肽序列指的是与该指定序列的某区域相对应的序列。对于核酸序列这包括与该序列相应的或互补的序列，以及“序列-保守性变异体”和“功能-保守性变异体”。对于多肽序列这包括“功能-保守性变异体”。序列-保守性变异体是其中在给定的密码子位置一个或几个核苷酸的改变不导致在此位置所编码的氨基酸发生改变的变异体。功能-保守性变异体是其中在一个多肽中某一给定的氨基酸残基已改变，而基本上不改变该天然多肽的整体构象和功能的变异体，包括但不局限于用另一具有相似生理-化学特性(例如酸性、碱性和疏水性等)的氨基酸取代某一氨基酸。“功能-保守性”变异体还包括具有诱发对所指定多肽产生特异性抗体能力的任何多肽。
7.“探针”指的是能与目标区域内的序列形成杂交结构的核酸或寡核苷酸，是由于此探针内至少一个序列与此目标区域内的序列具有互补性。
8.当在限定的严格条件下核酸的至少一条链可对另一核酸的链退火时，此核酸是相互“可杂交的”。由下列因素决定杂交的严格性：例如a)进行杂交和/或漂洗的温度；及b)杂交液和漂洗液的离子强度和极性(例如甲酰胺)，以及其它的参数。杂交要求二个核酸含有基本互补的序列，但是取决于杂交的严格性可能容许有错配。适合于使核酸杂交的严格性取决于此核酸的长度和互补性程度，以及本领域熟知的一些可变因素。
9.“致免疫性成分”是能够在宿主动物体内诱发体液性和/或细胞性免疫应答的结构部分。
10.“抗原成分”是能以足够强的亲和性结合于它的特异性抗体而形成可检测抗原-抗体复合物的结构部分。
11.“样品”指的是生物样品，例如从个体或者从体外细胞培养组分中分离出的组织或液体，以及从实验室程序中获得的样品。
本发明提供了编码在单核细胞上表达的哺乳动物蛋白质的核酸序列。尽管在此描述了特异性的人单核细胞来源的基因和基因产物，但是本发明包括来自其它来源或哺乳动物种类的结构(例如序列)相关性实施方案，包括多形性变异体或个体变异性。这些将包括例如显示相对较少序列改变的蛋白质，例如少于大约5％的序列改变，并且改变的数量例如少于20个残基取代，一般是少于15个，优选地是少于10个，而更优选地是少于5个残基取代。这些还将包括由全长度截短的型式和含有这些序列基本区段的融合蛋白。
对于从人单核细胞文库中分离出并被称为FDF03的基因/基因产物，以前在公布的国际专利申请WO 98/24906中已有描述，在此将其公开内容完整地引入作为参考。此FDF03基因编码I型跨膜蛋白，此蛋白含有以Ig样功能区为特征的细胞外部分，表明此基因编码Ig超家族的受体成员。
SEQ ID NO：1显示出编码人FDF03蛋白的核酸序列。SEQ IDNO：2显示了FDF03蛋白的氨基酸序列。推定的编码区从大约核苷酸154延伸至核苷酸1062。相当于推定信号序列的N-末端疏水序列从大约氨基酸残基-19(Met)延伸至氨基酸残基-1(Leu)。相当于推定跨膜区段的内部疏水序列从大约残基177(Ale)延伸至残基199(Leu)。此细胞外区是大约170个氨基酸，带有潜在性Ig样功能区结构。细胞内区是大约80个残基。序列分析表明与来自人的基因库克隆H26010和R50327有相似性。
现在已公开了四个人FDF03同源物(homologs)。FDF03-ΔTM
第二个被称为FDF03-deltaTM(FDF03-ΔTM)的人克隆被认为是由可变剪接方式产生的人FDF03和可溶性形式。编码FDF03-ΔTM的核酸序列被显示在SEQ ID NO：3中。FDF03-ΔTM蛋白的氨基酸序列被显示在SEQ ID NO：4中。
在分析人FDF03的表达过程中，借助了RT-PCR对FDF03-ΔTM分子的cDNA与FDF03的cDNA一道进行了扩增。使用按FDF03基因的5′-UTR和3′-UTR设计的引物(FDF03-U25：5′-ACAGCCCTCTTCGGAGCCTCA(SEQ ID NO：11)和FDF03-L1166：5′-AAGCTGGCCCTGAACTCCTGG(SEQ ID NO：12))，借助了RT-PCR从PMA/伊屋诺霉素激活的PBL cDNA扩增了大约200个碱基对的短带，然后进行凝胶纯化、克隆和测序。不同的克隆都包含943个碱基对的相同插入片段，带有编码230个氨基酸的I型蛋白质的开放读框。推导出的FDF03-ΔTM氨基酸序列与FDF03的氨基酸序列极好地相一致，但是包含了一个73个氨基酸的缺口，缺失了FDF03的细胞外富含苏氨酸的区域和跨膜功能区。这导致形成了一个蛋白质，带有一个潜在的疏水信号肽，随后是连接于FDF03胞质内功能区的细胞外Ig-样功能区。对带有FDF03序列的cDNA序列对比鉴定出在FDF03-ΔTM序列内有219个核苷酸的缺失(FDF03核苷酸608-827)，未导入未成熟终止密码子，暗示此分子是可变剪接方式的产物。认为此分子是FDF03的可溶性分泌形式，并认为此分子结合于与FDF03相同的配体。
下面显示出FDF03(SEQ ID NO：2)和FDF03-ΔTM(SEQ IDNO：4)的蛋白质序列对比：1 MGRPLLLPLLPLLLPPAFLQPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF031 MGRPLLLPLLPLLLPPAFLQPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF03-ΔTM61 LATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGFLRISNLQKQDQ FDF0361 LATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGFLRISNLQKQDQ FDF03-ΔTM121 SVYFCRVELDTRSSGRQQWQSIEGTKLSITQAVTTTTQRPSSMTTTWRLSSTTTTTGLRV FDF03121 SVYFCRVELDTRSSGRQQWQSIEGTKLSITQ----------------------------- FDF03-ΔTM181 TQGKRRSDSWHISLETAVGVAVAVTVLGIMILGLICLLRWRRRKGQQRTKATTPAREPFQ FDF03152 --------------------------------------------GQQRTKATTPAREPFQ FDF03-ΔTM241 NTEEPYENIRNEGQNTDPKLNPKDDGIVYASLALSSSTSPRAPPSHRPLKSPQNETLYSV FDF03168 NTEEPYENIRNEGQNTDPKLNPKDDGIVYASLALSSSTSPRAPPSHRPLKSPQNETLYSV FDF03-ΔTM303 LKA FDF03230 LKA FDF03-ΔTM
(-：缺失)FDF03-S1
被称为FDF03-短1(FDF03-S1)的第三个克隆是与FDF03同源的Ig样分子，但带有细胞质内的短功能区和跨膜功能区内的带电荷残基。比较性DNA和蛋白质分析表明FDF03和FDF03S1存在不同的基因，而不是可变剪接产物。编码FDF03-S1的核酸序列被显示在SEQID NO：5中。FDF03-S1蛋白的氨基酸序列被显示在SEQ ID NO：6中。
FDF03-S1是属于Ig超家族的I型跨膜蛋白。FDF03-S1含有一个疏水性先导序列，随后是细胞外区(～170个残基)，带有与FDF03同源的V-型Ig功能区结构(在氨基酸水平有88％同源性)。不像FDF03，FDF03-S1具有一个带有带电荷氨基酸(K)的跨膜区和一个不带有ITIM或内在化基元序列的细胞内小尾巴(15个残基)。据认为FDF03-S1代表FDF03的一种活化异构形式，并且可能与ITIM一负载分子如DAP12结合。下面显示了此氨基酸序列，其中下面加线的是信号肽和跨膜功能区。跨膜功能区内的带电荷氨基酸赖氨酸(K)残基(箭头所指)可允许与另一链如DAP12连接。
MGRPLLLPLLLLLQPPAFLQPGGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWEL
AIVPNVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQESGFLRISNLRKEDQSV
YFCRVELDTRRSGRQQLQSIKGTKLTITQAVTTTTTWRPSSTTTIAGLRVTESKGHSESWH
LSLDTAIR
VALAVAVLKTVILGLLCLLLLWWRRRKGSRAPSSDF(SEQ ID NO：6)
↑
FDF03(SEQ ID NO：2)和FDF03-S1(SEQ ID NO：6)的蛋白质序列对比被显示如下：1 MGRPLLLPLLPLLLPPAFLQPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF031 MGRPLLLPLLLLLQPPAFLQPGGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF03-S1
+ + +61 LATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGFLRISNLQKQDQ FDF0361 LAIVPNVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQESGFLRISNLRKEDQ FDF03-S1
++ + + + +121 SVYFCRVELDTRSSGRQQWQSIEGTKLSITQAVTTTTQRPSSMTTTWRLSSTTTTTGLRV FDF03121 SVYFCRVELDTRRSGRQQLQSIKGTKLTITQAVTTTT........TWRPSSTTTIAGLRV FDF03-S1
+ + + + ++++++++ + ++181 TQGKRRSDSWHISLETAVGVAVAVTVLGIMILGLICLL..RWRRRKGQQRTKATTPAREP FDF03173 TESKGHSESWHLSLDTAIRVALAVAVLKTVILGLLCLLLLWWRRRKGSRAPSSDF FDF03-S1
++ ++ + + + ++ + + +++ + +++ ++++++++239 FQNTEEPYENIRNEGQNTDPKLNPKDDGIVYASLALSSSTSPRAPPSHRPLKSPQNETLY FDF03299 SVLKA FDF03
+：不同的残基或缺口
分布研究(RT-PCR)表明，在B细胞(+激活的静止集合体)、T细胞和PBL中有强表达。在单核细胞、树状细胞和粒细胞中观察到较低的表达。FDF03-M14
被命名为FDF03-M14的第四个克隆是由可变剪接方式产生的人FDF03的潜在性可溶形式。编码FDF03-M14的核酸序列被显示在SEQID NO：7中。FDF03-M14蛋白的氨基酸序列被显示在SEQ ID NO：8中。在分析人FDF03的表达过程中，借助于RT-PCR对此分子的cDNA与FDF03的cDNA一道进行了扩增。使用按FDF03基因的5′-UTR和3′-UTR设计的引物(FDF03-U25：5′-ACAGCCCTCTTCGGAGCCTCA(SEQ ID NO：11)和FDF03-L1166：5′-AGCTGGCCCTGAACTCCTGG(SEQ ID NO：12))，借助于RT-PCR从激活的PBL cDNA扩增了大约200个碱基对的短带，然后进行凝胶纯化、克隆和测序。一个克隆(M14)含有908个碱基对的插入片段、带有编码175个氨基酸的I型蛋白的ORF。与FDF03序列的cDNA序列对比鉴定出在FDF03-M14序列内有253个核苷酸的缺失(FDF03核苷酸608-861)，缺失了编码FDF03的细胞外富含苏氨酸的区域，跨膜功能区和胞质内功能区起始部分的序列，并在FDF03-M14的位置655导入了未成熟的终止密码子。推导FDF03-M14的氨基酸序列，导致了一个蛋白质，带有一个潜在的疏水信号肽，随后是与FDF03非常一致的细胞外Ig样功能区，但是此功能区连接于与FDF03不同的一个COOH末端24个氨基酸的序列。此分子可能是FDF03 mRNA可变剪接方式的产物。
像FDF03-ΔTM一样，此分子可能代表FDF03的一种可溶性分泌形式，并可能结合于与FDF03相同的配体。此氨基酸序列显示在下面，其中下面加线的是信号序列。MGRPLLLPLLPLLLPPAFLQPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWELATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGFLRISNLQKQDQSVYPCRVELDTRSSGRQQWQSIEGTKLSITQGNPSKTQRSHMRISGMRDKIQIPS (SEQ IDNO：8)
FDF03(SEQ ID NO：2)和FDF03-M14(SEQ ID NO：8)的蛋白质序列对比被显示如下：1 MGRPLLLPLLPLLLPPAFLQPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF031 MGRPLLLPLLPLLLPPAFLQPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF03-1461 LATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGFLRISNLQKQDQ FDF0361 LATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGFLRISNLQKQDQ FDF03-M14121 SVYFCRVELDTRSSGRQQWQSIEGTKLSITQAVTTTTQRPSSMTTTWRLSSTTTTTGLRV FDF03121 SVYFCRVELDTRSSGRQQWQSIEGTKLSITQGNPSKTQRSHMRISGMRDKIQIPS FDF03-M14
***** ******** *******181 TQGKRRSDSWHISLETAVGVAVAVTVLGIMILGLICLLRWRRRKGQQRTKATTPAREPFQ FDF03241 NTEEPYENIRNEGQNTDPKLNPKDDGIVYASLALSSSTSPRAPPSHRPLKSPQNETLYSVLKA FDF03*：不同的残基FDF03-S2
被命名为FDF03-S2的第五个克隆是与FDF03同源的Ig样分子，但带有短的胞质内功能区和跨膜功能区内带电荷的残基。此分子与FDF03-S1有高度同源性，并且是潜在性DAP12结合的蛋白质。编码FDF-3-S2的核酸序列被显示在SEQ ID NO：9中。FDF03-S2蛋白的氨基酸序列被显示在SEQ ID NO：10中。
使用对FDF03-S2特异性的引物扩增了此分子的cDNA。以按FDF03-S2的5′-UTR设计的正向引物可实现特异性扩增。FDF03-S2正向引物：5′-CAAGG-GATAAAAAGGCAC(SEQ ID NO：13)(不扩增FDF03、FDF03-ΔTM或FDF03-S1)。FDF03-S2-反向引物：5′-AACTCTCCTCCAGTCGGT(SEQ ID NO：14)(可扩增FDF03-S1但不扩增FDF03或FDF03-ΔTM)。
FDF03-S2是属于Ig超家族的I型跨膜蛋白。FDF03-S2包含一个疏水先导序列，随后是细胞外区(～170个残基)，此区带有一个与FDF03同源的V-型Ig功能区结构(在氨基酸水平有～85％同源性)。不同于FDF03，FDF03-S2具有一个携带带电荷氨基酸(K)的跨膜功能区和一个不带有ITIM或内在化基元序列的细胞内小尾巴(15个残基)。FDF03-S2与FDF03-S1高度同源(在细胞外功能
区内有3个氨基酸不同，在跨膜功能区内缺少一个氨基酸)。
与FDF03-S1相同，FDF03-S2可能代表FDF03的一种活化异构形式并且可能与ITAM一负载分子如DAP12结合。
在读框内有二个推测的起始密码子(位置117和309)。第一个密码子不包含在典型的Kozak序列内。由第二个起始密码子(核苷酸309)可推导出下面显示的序列，因为在读框内第一个密码子开始，此序列不编码随后有另一Ig功能区的疏水序列。在下面显示的序列中，信号肽和跨膜功能区下面加线标示跨膜功能区内的带电荷氨基酸，赖氨酸(K)残基(箭头所指)允许与另一条链如DAP12连接。
MGRPLLPLLLLLLQPPAFLQPGGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE
LATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQESGFLRISNLRKEDQ
SVYFCRVELDTRRSGRQQLQSIKGTKLTITQAVTTTTTWRPSSTTTIAGLRVTESKGHSE
SWHLSLDTAIR
VALAVAVLKTVILGLLCLLLWWRRRKGSRAPSSDF
↑
下面是FDF03、FDF03-S1和FDF03-S2的蛋白质序列对比。1 MGRPLLLPLLPLLLPPAFLQPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF031 MGRPLLLPLLLLLQPPAFLQPGGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF03-S11 MGRPLLLPLLLLLQPPAFLQPGGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWE FDF03-S2
+ + +61 LATAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGFLRISNLQKQDQ FDF0361 LAIVPNVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQESGFLRISNLRKEDQ FDF03-S161 LTTAPDVRISWRRGHFHGQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQESGFLRISNLRKEDQ FDF03-S2** * + + +121 SVYFCRVELDTRSSGRQQWQSIEGTKLSITQAVTTTTQRPSSMTTTWRLSSTTTTTGLRV FDF03121 SVYFCRVELDTRRSGRQQLQSIKGTKLTITQAVTTTT........TWRPSSTTTIAGLRV FDF03-S1121 SVYFCRVELDTRRSGRQQLQSIKGTKLTITQAVTTTT........TWRPSSTTTIAGLRV FDF03-S2
+ + + + ++++++++ + ++181 TQGKRRSDSWHISLETAVGVAVAVTVLGIMILGLICLL..RWRRRKGQQRTKATTPAREP FDF03173 TESKGHSESWHLSLDTAIRVALAVAVLKTVILGLLCLLLLWWRRRKGSRAPSSDF FDF03-S1173 TESKGHSESWHLSLDTAIRVALAVAVLKTVILGLLCLLL.WWRRRKGSRAPSSDF FDF03-S2
++ ++ + + + ++ + + +++ + +*+ ++++++++239 FQNTEEPYENIRNEGQNTDPKLNPKDDGIVYASLALSSSTSPRAPPSHRPLKSPQNETLY FDF03299 SVLKA FDF03+：FDF03-S2/FDF03-S1与FDF03之间不同的残基或缺口*：FDF03-S2/FDF03与FDF03-S1之间不同的残基或缺口
分布研究(RT-PCR)表明在激活的树状细胞(CD34来源的)、PBMC、单核细胞和扁桃体B细胞中有表达。
下面给出的是人Ig V功能区和TCR V功能区的序列对比，此序列对比显示出FDF03的保守性VDJ结构。Ig V区 QVQ.LQESGPG.LVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGSYYWSW.IRQAPGKGLEWIG人TCR区 QVQ.LQESGPG.LVKPSETLSLTCTVSGYSISSG.YYWGW.IRQPPGKGLEWIGFDF03 QPSGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWELATAPDVRISWRRFDF03-S1 QPGGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWELAIVPNVRISWRRFDF03-S2 QPGGSTGSGPSYLYGVTQPKHLSASMGGSVEIPFSFYYPWELATAPDVRISWRR
+ +++ + + + + + + +Ig V区 YIYYSGSTNY.......NRSHKSRVNIS.VDTAKNQFSLKLSSVSTADTAVYYCARIT人TCR区 SIYHSGSTYY.......NPSLKSRVTIS.VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRFDF03 GHFH.GQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQKSGF.LRISNLQKQDQSVYFC.RVEFDF03-S1 GHFH.GQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQESGF.LRISNLRKEDQSVYFC.RVEFDF03-S2 GHFH.GQSFYSTRPPSIHKDYVNRLFLNWTEGQESGF.LRISNLRKEDQSVYFC.RVE
+ + + + + + + ++ + +Ig V区 TTVPSSWYYYYMDVWDKGTTVTVSS人TCR区 RRYSSSAS...KIIFGSGTRLSIR.FDF03 LDTRSSGRQQWQS..IEGTKLSITQFDF03-S1 LDTRRSGRQQLQS..IKGTKLTITQFDF03-S2 LDTRRSGRQQLQS..IKGTKTITQ
+ ++
对人基因组DNA克隆的研究表明，染色体7含有FDF03-S1和FDF03二种特异性序列，证明这二种分子是由二种不同的基因编码的。这些研究还表明，FDF03-S1基因和FDF03-S2基因是相同基因的二种不同的等位基因。此外，对来自不同供体的，环绕基因组DNA上S1和S2之间不同区域的内含子序列作PCR分析表明，在此基因座存在纯合体和S1/S2杂合体。因此很可能这二种cDNA是来自不同的等位基因。
FDF03基因的基因组构成方式可证实FDF03-ATM是通过可变剪接方式产生的(缺失编码铰链区和TM功能区的外显子3)。FDF03-M14也是这种情况(缺失外显子3和4)。
FDF03-S1/2的二种形式可便利地用作群体标记。此蛋白质的二种形式或者是不能结合相同的配体(例如NK受体家族的情况)，或者是以不同的亲和性相结合，因此可能使个体对受体/配体的相互作用给出不同的应答。
编码FDF03(包括其ATM和M14形式)和FDF03-S1的基因在人染色体7q22上的定位是令人关注的，因为在骨髓营养障碍综合症如急性髓样白血病(AML)时常常缺失此区域。在增生性疾病中可能缺失髓样抑制性受体的可能性导致其在基因治疗中的可能用途。核酸、载体和宿主细胞
本发明提供了一些核酸序列，特别是显示在SEQ ID NO：1、5、7或9中的核酸序列，或者编码显示在SEQ ID NO：2、4、6、8或10中氨基酸序列的核酸序列。本发明包括含有在此所公开单个核酸序列的全部或部分的分离核酸片段。本发明的核酸序列含有至少大约12个连续的核苷酸，优选地是至少大约18个，更优选地是至少大约20～35个，而最优选的至少大约35～55或更多些，包括完整的蛋白质编码序列或者其互补序列。本发明还包括这些序列的序列保守性变异体和功能保守性变异体。
使用在SEQ ID NO：1、3、5、7和9中所提供的核酸序列信息，借助于标准的方法可以制备包含在此所公开的任何序列或其子序列的核酸，例如可应用Matteucci等1981，美国化学学会杂志103：3185的亚磷酰胺固相载体法、Yoo等1989，生物化学杂志764：17078的方法或者其它已知的方法化学合成核酸。可通过连续地连接一系列包含合成寡核苷酸对的寡核苷酸盒来实现这种合成。此核酸可从细胞中直接分离出。按另一种方法，可使用化学合成链或基因组材料作模板，应用聚合酶链式反应(PCR)法产生本发明的核酸。利用在此提供的序列信息可合成用于PCR的引物。并且如果需要可进一步设计导入适当的新限制性位点，以便促进掺入某一给定的载体进行重组表达。当然，由于遗传密码的简并性，许多不同的核苷酸序列都可以编码具有由SEQ ID NO：2、4、6、8或10所限定的氨基酸序列或者其子序列的多肽。可选择密码子在原核或真核生物系统中进行最佳的表达。这些简并的变异体也包括在本发明的范围内。
通过使用许多已知的载体如pUC质粒、pET质粒(Novagen公司，Madison，WI)，或者pRSET或pREP(Invitrogen，圣地亚哥，CA)，以及许多适合的宿主细胞如大肠杆菌、酿酒酶母、昆虫和哺乳动物细胞系，借助于本领域技术人员已知的方法可表达所编码的多肽。载体/宿主的特定选择对于实施本发明不是决定性的。
本发明的核酸存在多种用途，例如作为模板用于重组产生肽或多肽，作为探针和引物用于检测在此所述的人类基因，用于绘制染色体图，以及作为探针或者设计PCR引物以便鉴定其它哺乳动物种类中的同源基因。可通过实验测定同源性(Homology)。另外还可以借助于计算机进行同源性分析。在实施本发明的过程中，一个基因在其核苷酸水平与另一哺乳动物种类的基因组具有至少大约70％的DNA序列同源性时，可认为此基因存在于这种动物中。应用本领域已知的任何适合的技术都可以达到确定一个基因存在于另一种哺乳动物的目的。适合的技术包括但不局限于：对基因组DNA杂交，对基因组文库或cDNA文库进行集落杂交，使用简并的引物或基因特异性引物以及使用基因组DNA作模板进行聚合酶链式反应(PCR)，基因互补法，抗体交叉反应性，或者体外生物化学互补法。
在应用这些技术时，确定了辨别探针与模板之间同源性差异水平的条件。例如，为了使探针对固相化DNA杂交(不论是DNA印迹法、斑点印迹法或集落杂交方式)，改变缓冲液中SSC的浓度使之可能检测具有不同同源性水平的杂交法(1×SSC是0.15M NaCl-0.015M柠檬酸钠)。在含有6M尿素和0.4％十二烷基硫酸钠的漂洗液中存在2×SSC，0.5×SSC，0.1×SSC和0.05×SSC，分别允许形成具有至少55％+5％，65％+5％，75％+5％和＞85％阈值同源性的杂交体。优选的情况是，一旦借助于杂交或PCR鉴定了另一生物体中的某一基因，则可直接确定此基因的DNA序列。
应该认识到，某些检测同源序列的方法可能导致仅对特定基因全部蛋白质编码序列的一部分进行鉴定或分离。例如，通过使用编码此序列已知部分的分离核酸或其片段，可分离和鉴定此全部蛋白质编码序列，以便启动以cDNA作模板的测序反应，随之对扩增的产物进行测序。还可使编码所公开序列的分离核酸或其片段对适当的cDNA文库杂交，以便鉴定含有蛋白质编码序列其他完整区段的克隆，此短序列形成该蛋白质编码序列的一部分。然后，可将该完整的蛋白质编码序列或其片段，或者编码此序列全部或部分的核酸，或者其序列保守性或功能保守性变异体用于实施本发明。
以类似的方式可分离来源于编码此蛋白质的序列5′和3′侧翼区的其他序列，包括调节序列，并可确定其核苷酸序列。多肽
在此所述多肽的天然存在形式和重组形式，包括糖基化和非糖基化形式均包含在本发明的范围之内。可从人单核细胞中，或者从已将某一蛋白质编码序列导入并在其中表达的杂合生物体或细胞(例如细菌，真菌，昆虫，植物和哺乳动物的细胞)中分离本发明的多肽，包括功能保守性变异体。在此所述的蛋白质或其部分还可被表达为与其它蛋白质的融合体。可化学合成该多肽，借助于可购得的自动化程序，包括而不局限于完全的固相合成法，部分固相合成法，片段凝结法或经典的液相合成法。还可以借助于体外翻译法便利地制备这种多肽。
用于多肽纯化的方法是本领域熟知的，包括但不局限于制备性盘状-凝胶电泳、等电聚焦，蔗糖密度梯度离心，HPLC，反向HPLC，凝胶过滤，离子交换和分配层析，以及反流分布。为了某些目的，优选地是在重组系统中产生该多肽，在此重组系统中该蛋白质含有一个有助于纯化的附加标记序列，例如但不限于多组氨酸序列。然后可在适当的固相基质上通过层析从宿主细胞粗制裂解液中纯化这种肽。另外，针对某一蛋白质或针对从其中得到的肽而产生的抗体可被用作纯化试剂。还可能应用其它的纯化方法。
本发明还包括在此特别公开的多肽的衍生物和同源物。为了某些目的，可通过取代、增加或缺失改变编码该蛋白质的核酸序列，提供功能等价的分子，即功能保守性变异体。例如，序列中的一个或几个氨基酸残基可以被另一个类似特性的氨基酸取代，如带正电荷的氨基酸(精氨酸，赖氨酸和组氨酸)，带负电荷的氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)，极性中性的氨基酸，以及非极性氨基酸。
也可能通过例如磷酸化、硫酸化、酰基化或其它的蛋白质修饰法修饰这种分离的多肽。还可以用能够提供可检测信号的标记物修饰它们，直接或间接地检测标记物，包括但不局限于放射性同位素和荧光化合物。
发现本发明的多肽有如下用途：用于结合研究，用于被修饰分子的构建和表达，用于结构/功能研究以及用于制备多克隆和单克隆抗体。为制备抗体用作致免疫成分的多肽，或者是为结合作用剂研究用的靶标的多肽至少有5个或更多残基的长度。优选地该多肽含有至少大约12个残基，更优选地是至少大约20个、而最优选地是至少大约30个或更多残基。获得这些多肽的方法是充分已知的，并被说明在如下文献中：细胞和分子生物学中的免疫化学方法，1987(Mayer和Waler编著，学院出版社，伦敦)；Scopes，1987，蛋白质纯化：原理和实践，第二版(Springer-Verlag，N.Y.)；以及实验免疫学手册，1986，卷I-IV(Weir和Blackwell编著)。
在分离出某一特异性相互作用结合配偶体的一个组成部分之后，则存在分离其相对配偶体的方法，见例如Gearing等1989，EMBO杂志8：3667-3676。本领域技术人员已知的许多筛选结合活性的方法可用于实施本发明。例如可筛选某一表达文库对该蛋白质的特异性结合，如通过细胞分选或其它的筛选法以便检测表达这一结合成分的亚群。见例如Ho等1993，美国国家科学院学报90：11267-11271。另外还可以使用淘筛法(Panning method)。见例如Seed和Aruffo 1987，美国国家科学院学报84：3365-3369。一种双杂交体选择系统也可被用于制备携带有效蛋白质序列的适合结构。见例如Fields和Song1989，自然340：245-246。近年来已发展了几种自动化检测法，以致有可能在短时间内筛选数万个化合物。物理变异体
本发明还包括与SEQ ID NO：2、4、6、8或10的氨基酸序列具有相当氨基酸序列类似性的蛋白质或肽。包括表现有取代的变异体，例如20个或更少的取代，优选地是10个或更少些，较优选的是5个或更少些。当这些取代是保守性取代时，这些变异体将与对应的天然蛋白质具有相同的致免疫相似性或抗原相似性，或者交叉反应性。天然变异体包括个体变异体、等位变异体、多形性变异体、品系变异体或种变异体。
如果有必要可通过最佳化的残基匹配测定氨基酸序列的相似性或序列的同一性，需要时还可通过导入空缺。当考虑以保守性取代作为配对物时这种情况发生改变。保守性取代通常包括在如下残基组内的取代：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。同源氨基酸序列包括在各自的蛋白质序列中天然等位变异体和种间变异体。典型的同源蛋白质或肽与其有关蛋白质的氨基酸序列具有从50-100％的相似性(如果可导入空缺)至75-100％的相似性(如果包括保守性取代)。同一性测定将至少是大约50％，一般是至少60％，更一般地是至少65％，通常是至少70％、更通常是至少75％，优选地是至少80％，更优选地是至少80％，而在特别优选的实施方案中至少是85％或更多。也见Needleham等1970，分子生物学杂志48：443-453；Sankoff等1983，时间偏离、串列编辑和大分子：序列比较的理论和实践，第1章，Addison-Wesley，Reading，MA；以及来自Intelli Genetics的软件包，Mountain View，CA；和Wisconsin大学基因计算机组(GCG)，Madison，WI。
编码相应蛋白质的核酸在严格条件下通常将与SEQ ID NO：1、3、5、7或9杂交。例如，编码各自蛋白质的核酸在严格的杂交条件下一般将与SEQ ID NO：1、3、5、7或9的核酸杂交，同时提供很少的假阳性杂交信号。为了在限定的离子强度和pH按此序列杂交，一般选择的严格条件是比热熔点(Tm)低10℃的温度。Tm是50％的靶标序列与完全匹配的探针杂交的温度(在限定的离子强度和pH下)。严格的条件通常是其中漂洗液的盐浓度在pH7是大约0.02M，温度是至少大约50℃的条件。其它一些因素也可能显著地影响杂交的严格性，尤其包括碱基的组成和互补链的大小，有机溶剂如甲酰胺的存在，以及碱基错配的程度。优选的实施方案包括在42℃，在50％甲酰胺和20-50mM NaCl中将结合于所公开序列的核酸。
借助于核苷酸取代，核苷酸缺失，核苷酸插入和核苷酸片段的倒位可容易地修饰分离的核酸。这些修饰导致形成了新型的DNA序列，它们可编码这些抗原、它们的衍生物或者具有高度相似生物活性、致免疫活性、或抗原活性的蛋白质。
被修饰的序列可用于产生突变抗原或用于增强表达。增强的表达可能包括基因扩增、增加转录、增加翻译和其它一些机制。这种突变蛋白质衍生物包含各个蛋白质或其片段的预定突变或位点特异性突变。“突变蛋白质”包括在其它方面适合于上述蛋白质同源性定义的多肽，但是此多肽具有不同于天然发现的该蛋白质的氨基酸序列，不论是通过缺失、取代，或者是通过插入的突变。特别是，“位点特异性突变蛋白”一般包括与具有SEQ ID NO：2、4、6、8或10序列的蛋白质具有显著相似性的蛋白质。一般地说，该变异体与所公开的序列(在优选的实施方案中包含它的大部分或全部)具有许多相同的生理化学和生物学活性，例如抗原活性或致免疫活性。
还包括例如在其合成的加工过程中或者在进一步的处理步骤，通过修饰多肽的糖基化方式形成的糖基化改变。实现此目的的特别优选的方法是通过将此多肽暴露于糖基化酶，例如哺乳动物糖基化酶，这种酶是来源于正常提供这种加工过程的细胞。预期还可使用脱糖基化酶。还包括具有其它较小修饰的相同一级氨基酸序列的型式，包括磷酸化的氨基酸残基，例如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸，或者其它部分，包括核糖基或交联剂。还包括含有取代基的蛋白质，它应该保持基本的免疫原性，以便产生可识别SEQ ID NO：2、4、6、8或10蛋白质的抗体。通常是这些蛋白质含有对所公开的序列少于20个残基的取代，更通常是少于10个取代，优选地是少于5个，而更优选地是少于3个。另一方面，在结构功能区开始和终止的蛋白质通常仍然保持抗原性和交叉免疫原性。
主要的衍生物是在此所述蛋白质或其片段与其它蛋白质或多肽的共价偶联物。可以在重组培养中合成这些衍生物，例如N-或C-末端融合体，或者通过使用本领域已知的作用剂，将它们用于通过反应性侧基交联蛋白质，带有交联作用剂的优选的蛋白质衍生位点是游离的氨基、碳水化合物部分和半胱氨酸残基。
还提供了这些蛋白质与其它同源或异源性蛋白质之间的融合多肽。异源性多肽可以是不同表面标记物间的融合体，导致形成了例如杂合蛋白质。同样地，可以构建将表现出衍生蛋白质的组合特性或活性的异源性融合体。典型的实例是一种报告多肽如虫荧光酶与一种蛋白质区段或功能区如受体结合区段的融合体，以致可以容易地测定此融合蛋白质的存在或定位。见例如美国专利No.4,859,609。其它的基因融合配偶体包括细菌β-半乳糖苷酶、trpE、蛋白A、β-内酰胺酶、α-淀粉酶、醇脱氢酶、和酵母α-接合因子。见例如Godowski等1988，科学241：812-816。
这种多肽还可能具有已被化学修饰的氨基酸残基，可通过磷酸化、硫酸化、生物素化、或者通过加入或除去其它部分，特别是具有类似于磷酸基分子形状的部分来修饰这些氨基酸残基。在某些实施方案，这些修饰将是有用的标记剂，或者用作纯化的靶标例如亲和性配体。
本发明还打算使用这些蛋白质的衍生物而不是氨基酸序列或糖基化的变异体。这类衍生物可包含与化学成分的共价的或聚集的结合。这些衍生物通常分成三类：(1)盐，(2)侧链的末端残基的共价修饰物，以及(3)例如与细胞膜的吸附复合体。这种共价的或聚集的衍生物可用作免疫原，用作免疫检测剂，或者在例如用于亲和性纯化配体或其它结合配体的纯化方法中用作试剂。例如借助于本领域熟知的方法通过共价结合于固体载体如溴化氰活化的琼脂糖可使蛋白质抗原固相化，或者使用或不使用戊二醛交联使它吸附在聚烯烃表面，用于抗体的检测或纯化。为了用于诊断性检测还可以用可检测的基因标记该蛋白质，例如通过氯胺T法放射性碘化的基因，共价结合了稀土螯合剂的基团，或偶联了另一荧光物质的基团。借助于固相化抗体可实现纯化这些蛋白质的目的。抗体
如上面所述，本发明的致免疫性成分可用作抗原，用于通过标准的方法制备抗体。这种致免疫成分可以通过蛋白水解断开较大的多肽来产生，或者通过化学合成重组技术产生，因此不受蛋白水解断开位点的限制。优选地是，首先使较小的致免疫性成分变成具有较强的致免疫性，为此可通过交联或偶联于一种致免疫性载体分子(即一种具有对宿主动物独立诱发免疫应答特性的大分子，本发明的致免疫性成分可共价连接于这种大分子)。因为小多肽片段有时是起半抗原的作用，所以可能需要交联或偶联于载体分子(半抗原是能够特异性结合于抗体但不能够诱发抗体产生的分子，即它们没有致免疫性)。将这种片段偶联于致免疫性载体分子，通过通常所谓的“载体效应”使它们具有致免疫性。
本发明的抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体。这种抗体可通过用本发明的致免疫成分在动物宿主体内被诱导产生，或者可以通过体外免疫接种(致敏)免疫细胞来形成。用于诱导抗体产生的致免疫成分可从人类细胞(例如人单核细胞)中分离出，或者被化学合成。该抗体还可以在以适当的抗体编码DNA编程的重组系统中产生。另外，可以通过对纯化重链和轻链的生物化学重建来构建这种抗体。
本发明的抗体可借助于标准的方法纯化，包括但不局限于制备盘状凝胶电泳、等离子聚焦、HPLC、反相HPLC、凝胶过滤、离子交换和分配层析、以及反流分布法。如下文献中指示了对抗体的纯化方法：例如“抗体纯化技术”1989，Amicon Division，W.R.Grace & Co。一般蛋白质的纯化法被指示在“蛋白质纯化：原理和实践”，R.K.Scopes编著，1987，Springer-Verlag，New York，NY。
用于免疫接种动物的适当佐剂包括但不局限于佐剂65(包含花生油、二缩甘醇、油酸和一硬脂酸铝)；福氏完全佐剂或不完全佐剂；矿物凝胶如氢氧化铝、磷酸铝和矾；表面活性剂如十六烷基胺、十八烷基胺、溶血卵磷脂、二甲基双十八烷基溴化铵、N，N-双十八烷基N′，N′-双(2-羟甲基)丙烷二胺、甲氧基十六烷基甘油和Pluronic多羟基化合物；聚阴离子如吡喃、硫酸葡聚糖、聚IC、聚丙烯酸和Carbopol；肽如胞壁酰二肽、二甲基甘氨酸和tuftsin；以及油乳剂。还可以在将它掺入脂质体或其它微载体后给予此致免疫成分。在如下文献中揭示了有关佐剂和免疫检测不同方面的信息：例如P.Tijssen的丛书，1987，酶免疫测定法的实践和理论，第三版，Elsevier，New York。
从如此免疫的动物产生的血清可以被直接使用。或者可以应用标准的方法，例如血浆电泳或用IgG特异性吸附剂如固相化蛋白A的吸附层析法从此血清中分离IgG组分。
借助于熟知的技术产生了本发明的杂交瘤，用于制备针对本发明致免疫成分的单克隆抗体。此方法通常包括使一个永生化的细胞系与产生所需抗体的B-淋巴细胞融合。按另一种方式，非融合技术用于形成永生化的抗体产生细胞系也是可能的，并且此技术包括在本发明的范围内，例如病毒诱导和转化，Casali等，1986，科学234：476。永生化的细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿动物、牛和人来源的骨髓瘤。为了方便和易获得起见，最常使用的是大鼠或小鼠的骨髓瘤细胞系。
用于从注射该致免疫性成分的哺乳动物获得适当淋巴细胞的技术是熟知的。一般是，如果要求人来源的细胞则用外周血淋巴细胞(PBLs)，或者如果要求非人类哺乳动物来源的细胞则用脾细胞或淋巴结细胞。以重复剂量的优选纯化的致免疫性成分注射宿主动物，使此动物产生所需的抗体生成细胞之后，收获这些细胞用于与此永生化的细胞系融合。融合技术对本领域也是熟知的，通常包括使该细胞与融合剂如聚乙二醇混合。
用标准的程序如HAT(次黄嘌呤-氨基喋呤-胸苷)选择法选择杂交瘤。借助于标准的免疫测定法如蛋白质印迹法、ELISA(酶-联免疫吸附试验)或RIA(放射免疫测定法)等，通过测定它们的培养基从这些杂交瘤中挑选出分泌所需抗体的杂交瘤。应用标准的蛋白质纯化技术从此培养基中回收抗体，见Tijssen 1985，酶免疫测定法的实践和理论，Elsevier，Amsterdam。
如下许多参考文献可用于指导上述技术的应用：Kohler等1980，杂交瘤技术，冷泉港实验室，纽约；Tijssen，1985，酶免疫测定法的实践和理论，Elsevier，Amsterdam；Campbell，1984，单克隆抗体技术，Elsevier，Amsterdam；Hurrell，1982，单克隆杂交瘤抗体：技术及应用，CRC出版社，Boca Raton，FL。还可以使用熟知的噬菌体文库系统产生单克隆抗体。
抗体片段的用途和产生方法也是已知的，例如Fab片段：Fijssen1985，酶免疫测定法的实践和理论，Elsevier，Amsterdam；Fv片段：Hochman等1973，生物化学12：1130；Sharon等1976，生物化学15：1591；Ehrlich等，美国专利No.4,355,023；以及半抗体分子：Auditore-Hargreaves，美国专利No.4,470,925。它们还可用于免疫测定法。
可以通过已知的方法使这些抗体，不论是多克隆或单克隆抗体，例如以连接于固体载体的固相化形式，被用于通过免疫亲和层析法分离和纯化该致免疫成分。此抗体可用作探针区分组织和细胞类型分布状态。此抗体还可被用于对特定的表达产物筛选表达文库。用于这种程序的抗体通常被标记，可用能够方便地通过抗体结合检测抗原存在的标记物作标记。针对蛋白质的抗体可被用于对表达各自蛋白质的特异性细胞群成分进行分析或鉴定。通过测定表达在此所述蛋白质的细胞表达产物，有可能诊断如下疾病状态：例如免疫受损害的状态、单核细胞被耗尽的状态、或单核细胞过度产生的状态。针对此蛋白质产生的抗体还可用于产生抗-独特型抗体。这种抗体可用于检测或诊断与各自抗原表达有关的多种免疫疾病。本发明包括了特异性识别单核细胞来源的致免疫性成分的抗体。可以常规地应用这种抗体，例如作为纯化单核细胞成分的试剂，或者作为诊断试剂。诊断应用
本发明包括用于临床状态质或量诊断的组合物、方法和试剂盒，即用于检测生物样品中的特异性成分。这些应用利用核酸、肽/多肽，或对在此所述成分特异性的抗体。包括基于抗体的和基于核酸的诊断方法，以及基于PCR的诊断方法。对于诊断某些异常的疾病状态，检验存在于样品中的单核细胞水平是重要的。例如，组织或淋巴系统中单核细胞的数量增加可以指示存在单核细胞增生、组织或移植排斥，或者炎症。低单核细胞群可以指示对例如细菌或病毒感染的异常反应，为了使单核细胞应答正常化可能需要进行适当的治疗。
在能够筛选对本发明蛋白质具结合活性的化合物的试剂盒和检测法中，本发明蛋白质的天然存在形式和重组形式都特别有用。
在核酸型诊断法中，可使待分析样品直接与核酸探针接触。探针包含长度至少12个核苷酸和寡核苷酸，优选地是至少18个、最优选地是20-35个或更多。另外，可处理样品以便提取包含在其中的核酸。应理解的是，用于提取DNA的特定方法取决于生物样品的性质。从样品中得到的核酸可能经受凝胶电泳或其它的大小分离技术，或者将此核酸样品不经大小分离而固相化在适当的固体基质上或用于PCR。
适合于基于抗体诊断应用的试剂盒通常包括一种或几种如下成分：
(i)抗体：此抗体可以是预先标记的，或者该抗体可以未被标记而用于标记的成分装在试剂盒的另一容器内，或者提供了标记的第二抗体，以及
(ii)反应成分：此试剂盒还可装有特定免疫检测方案需要的被适当包装的其它试剂和材料，如果适合包括固相基质以及标准品。
适合于基于核酸诊断应用的试剂盒通常包括如下成分：
(i)DNA探针：此DNA探针可以是预先标记的，或者此DNA探针可以未被标记而用于标记的成分装在试剂盒的另一容器内，以及
(ii)杂交试剂：此试剂盒还可装在特定杂交方案需要的被适当包装的其它试剂和材料，如果适合包括固相基质和标准品。
还计划应用基于PCR的诊断试剂盒，这种试剂盒也包括在本发明的范围内。
上述的试剂盒还可包含指导测试的说明书。而且，在优选的实施方案中这种诊断试剂盒能适应高产出和/或自动化操作。治疗应用
本发明还提供了可表现出显著治疗价值的几种药剂。该蛋白质(天然的或重组的)及其片段、以及针对它的抗体，随同被鉴定对此蛋白质具有结合亲和性的化合物可用于治疗与异常生理功能或异常发育有关的状态。例如，与作为抗原呈递细胞的单核细胞异常表达或异常信号有关的疾病或障碍是该蛋白质激动剂或拮抗剂的靶标。该蛋白质很可能在生血细胞如淋巴样细胞的调节或发育中起作用，从而影响免疫应答如抗原呈递以及所引起效应功能。
通过RNA印迹分析已知在显示具有单核细胞蛋白质mRNA的细胞类型中存在其它的异常发育状态。见Barkow(编著)，Merck氏诊断和治疗手册，Merck & Co.，Rahway，NJ；和Thorn等，Harrison氏内科原理，McGraw-Hill，NY。例如，免疫系统的发育或功能异常性可引起明显的病理异常和病理状态，这些异常状态对使用在此所提供组合物的预防或治疗可能是敏感的。
可以先纯化本发明单核细胞来源的重组蛋白质或抗体，然后对病人给药。为了用于治疗，可使这些药剂与补充的活性或惰性成分组合，例如在常规的药剂学允许的载体或稀释剂如致免疫佐剂中同生理学无害的稳定剂和赋形剂一起进行组合，特别是从疫苗的角度这些可能是有用的，在此抗原是与这些治疗形式的激动剂或拮抗剂中的一种组合。可将这些组合物过滤除菌，通过冷冻干燥在制剂小瓶内配制成剂量形式，或者贮存在稳定化的水性制剂中。本发明还打算使用抗体或其结合片段，包括非补体结合的形式。
应用抗体或受体或者其片段的药物筛选可以鉴别对这些单核细胞来源的蛋白质具有结合亲和性的化合物，包括分离被结合的成分。随后的生物测定法可用于确定此化合物是否阻断或拮抗该蛋白质的活性。同样地，具有内在刺激活性的化合物可能通过此蛋白质激活细胞，因此该化合物是激动剂。本发明还进一步计划以针对此蛋白质的抗体作为拮抗剂用于治疗。
为有效治疗所必需的药剂量取决于许多不同的因素，包括给药方法，目标部位，病人的生理状态，以及给予的其它药物。因此，应该对治疗剂量进行滴定，使之最安全和最有效。用于体外试验的剂量通常可对这种药剂用于原位给药的剂量提供有用的指导。用于治疗特定障碍的有效剂量的动物试验对人用剂量将提供进一步的预测性指导。在例如下面的文献中论述了多种考虑因素：Gilman等(编著)(1990)Goodman和Gilman氏：治疗的药理学基础(第八版)，Pergamon出版；和(1990)Remington氏药剂科学(第17版)，Mack出版公司，Easton，PA。在此论述了给药方法，例如口服、静脉内、腹膜内或肌内给药，透皮扩散及其它给药方法。药剂学允许的载体包括例如在Merck指南，Merck & Co.Rahway，NJ中所述的水、生理盐水、缓冲液和其它一些化合物。预期剂量范围一般在低于1mM浓度的量，典型地是小于大约10μM浓度，通常是小于大约100nM，优选地是小于大约10pM(微微克分子浓度)，而最优选地是小于大约1fM(毫微微克分子浓度)，还有一种适当的载体。缓释制剂或缓释装置常常被用于持续地给药。
这种蛋白质、拮抗剂和激动剂可直接对待治疗的宿主给药，或者取决于此化合物的大小理想的是在给药之前使它们与载体蛋白质如卵清蛋白或血清白蛋白偶联。治疗制剂可能以多种常规的剂量制剂给药。对于活性成分尽管有可能被单独给药，但是优选地是作为一种药物制剂提供给药。药物制剂典型地包含至少一种上面规定的活性成分，同一种或几种其允许的载体一起配制而成。各种载体应该是药剂学和生理学允许的，意味着是与其它成分相容的，并且对病人无害。制剂包括适合于口服、直肠、鼻内或非经肠道(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)给药的剂量。可方便地以单位剂量的形式提供这种制剂，借助于药剂学领域已知的方法可以制备这种剂型。见例如Gilman等(编著)(1990)Goodman和Gilman氏：治疗的药理学基础(第八版)Pergamon出版；和(1990)Remington氏制药科学(第17版)，Mack出版公司，Easton，PA；Avis等(编著)(1993)药剂配制形式：非经肠道的药剂，Dekker，NY；Lieberman等(编著)(1990)药剂配制形式：片剂，Dekker，NY；以及Lieberman等(编著)(1990)药剂配制形式：分散系统，Dekker，NY。可以将本发明的治疗剂同其它的化学治疗剂或化学预防剂组合在一起，或者与它们一起配合使用。
很显然，对于本领域的技术人员，按照本发明的精髓和内容可以形成本发明的许多修改形式和变异形式。在此所述的特定实施方案仅被提供作为例子，本发明仅受所附的权利要求以及这些权利要求等价物的全部范围所限制。
序列表<110>Bates，Elizabeth
Pournier，Nathalie
Chalus，Lionel
Garrone，Pierre<120>单核细胞来源的核酸和相关的组合物及方法<130>SF0977X<140>09/223,919<141>1998-12-31<140>09/224,604<141>1998-12-31<160>14<170>IBM PC兼容机<210>1<211>1249<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(154)..(1062)<220><221>sig_肽<222>(154)..(210)<220><221>mat_肽<222>(211)..(1062)<400>1gtttggggaa ggctcctggc ccccacagcc ctcttcggag cctgagcccg gctctcctca 60ctcacctcaa cccccaggcg gcccctccac agggcccctc tcctgcctgg acggctctgc 120tggtctcccc gtcccctgga gaagaacaag gcc atg ggt cgg ccc ctg ctg ctg 174
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255 260 265Leu Lys Ser Pro Gln Asn Glu Thr Leu Tyr Ser Val Leu Lys Ala270 275 280<210>3<211>943<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(130)..(819)<220><221>sig_肽<222>(130)..(180)<220><221>mat_肽<222>(181)..(819)<400>3acagccctct tcggagcctc agcccggctc tcctcactca cctcaacccc caggcggccc 60ctccacaggg cccctctcct gcctggacgg ctctgctggt ctccccgtcc cctggagaag 120aacaaggcc atg ggt cgg ccc ctg ctg ctg ccc cta ctg ccc ctg ctg 168
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu
-17 -15 -10 -5ctg ccg cca gca ttt ctg cag cct agt ggc tcc aca gga tct ggt cca 216Leu Pro Pro Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro
1 5 10agc tac ctt tat ggg gtc act caa cca aaa cac ctc tca gcc tcc atg 264Ser Tyr Leu Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met
15 20 25ggt ggc tct gtg gaa atc ccc ttc tcc ttc tat tac ccc tgg gag tta 312Gly Gly Ser Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu
30 35 40gcc aca gct ccc gac gtg aga ata tcc tgg aga cgg ggc cac ttc cac 360Ala Thr Ala Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His45 50 55 60ggg cag tcc ttc tac agc aca agg ccg cct tcc att cac aag gat tat 408Gly Gln Ser Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr
65 70 75gtg aac cgg ctc ttt ctg aac tgg aca gag ggt cag aag agc ggc ttc 456Val Asn Arg Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe
80 85 90ctc agg atc tcc aac ctg cag aag cag gac cag tct gtg tat ttc tgc 504Leu Arg Ile Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys
95 100 105cga gtt gag ctg gac aca cgg agc tca ggg agg cag cag tgg cag tcc 552Arg Val Glu Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser
110 115 120atc gag ggg acc aaa ctc tcc atc acc cag ggt cag cag cgg act aaa 600Ile Glu Gly Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln Gly Gln Gln Arg Thr Lys125 130 135 140gcc aca acc cca gcc agg gaa ccc ttc caa aac aca gag gag cca tat 648Ala Thr Thr Pro Ala Arg Glu Pro Phe Gln Asn Thr Glu Glu Pro Tyr
145 150 155gag aat atc agg aat gaa gga caa aat aca gat ccc aag cta aat ccc 696Glu Asn Ile Arg Asn Glu Gly Gln Asn Thr Asp Pro Lys Leu Asn Pro
160 165 170aag gat gac ggc atc gtc tat gct tcc ctt gcc ctc tcc agc tcc acc 744Lys Asp Asp Gly Ile Val Tyr Ala Ser Leu Ala Leu Ser Ser Ser Thr
175 180 185tca ccc aga gca cct ccc agc cac cgt ccc ctc aag agc ccc cag aac 792Ser Pro Arg Ala Pro Pro Ser His Arg Pro Leu Lys Ser Pro Gln Asn
190 195 200gag acc ctg tac tct gtc tta aag gcc taaccaatgg acagccctct 839Glu Thr Leu Tyr Ser Val Leu Lys Ala205 210caagactgaa tggtgaggcc aggtacagtg gcgcacacct gtaatcccag ctactctgaa 899gcctgaggca gaatcaagtg agcccaggag ttcagggcca gctt 943<210>4<211>230<212>PRT<213>人类<400>4Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Pro-17 -15 -10 -5Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu
1 5 10 15Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser
20 25 30Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Thr Ala
35 40 45Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser
50 55 60Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg
65 70 75Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu Arg Ile80 85 90 95Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu
100 105 110Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile Glu Gly
115 120 125Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln Gly Gln Gln Arg Thr Lys Ala Thr Thr
130 135 140Pro Ala Arg Glu Pro Phe Gln Asn Thr Glu Glu Pro Tyr Glu Asn Ile
145 150 155Arg Asn Glu Gly Gln Asn Thr Asp Pro Lys Leu Asn Pro Lys Asp Asp160 165 170 175Gly Ile Val Tyr Ala Ser Leu Ala Leu Ser Ser Ser Thr Ser Pro Arg
180 185 190Ala Pro Pro Ser His Arg Pro Leu Lys Ser Pro Gln Asn Glu Thr Leu
195 200 205Tyr Ser Val Leu Lys Ala
210<210>5<211>1450<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(386)..(1066)<220><221>sig_肽<222>(386)..(436)<220><221>mat_肽<222>(437)..(1066)<400)5ccacgcgtcc ggcttctttg ggggtgaaga gattggggag gaatctccac ccctgggagg 60cagaagccag gcatagcgcg ctggctagga ctccagtacc gtgaagggag gcagtgagag 120cagacatctg tgcctcattc ctgatctcaa ggggaaagca agaacaaggg aggcttcctc 180aggatctcga acctgcggaa ggaggaccag tctgtgtact tctgccaagt ccagctggac 240atacagatca gggaggctgt cgtggcagtc catcaagggg acccacctca ccatcaccca 300ggccctcagg cagcccctcc acagggcccc tctcctgcct ggacagctct gctggtctcc 360ccgtcccctg gagaagaaca aggcc atg ggt cgg ccc ctg ctg ctg ccc ctg 412
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu
-17 -15 -10ctg ctc ctg ctg cag ccg cca gca ttt ctg cag cct ggt ggc tcc aca 460Leu Leu Leu Leu Gln Pro Pro Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Thr
-5 1 5gga tct ggt cca agc tac ctt tat ggg gtc act caa cca aaa cac ctc 508Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu
10 15 20tca gcc tcc atg ggt ggc tct gtg gaa atc ccc ttc tcc ttc tat tac 556Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr25 30 35 40ccc tgg gag tta gcc ata gtt ccc aac gtg aga ata tcc tgg aga cgg 604Pro Trp Glu Leu Ala Ile Val Pro Asn Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg
45 50 55ggc cac ttc cac ggg cag tcc ttc tac agc aca agg ccg cct tcc att 652Gly His Phe His Gly Gln Ser Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile
60 65 70cac aag gat tat gtg aac cgg ctc ttt ctg aac tgg aca gag ggt cag 700His Lys Asp Tyr Val Asn Arg Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln
75 80 85gag agc ggc ttc ctc agg atc tca aac ctg cgg aag gag gac cag tct 748Glu Ser Gly Phe Leu Arg Ile Ser Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser
90 95 100gtg tat ttc tgc cga gtc gag ctg gac acc cgg aga tca ggg agg cag 796Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln105 110 115 120cag ttg cag tcc atc aag ggg acc aaa ctc acc atc acc cag gct gtc 844Gln Leu Gln Ser Ile Lys Gly Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln Ala Val
125 130 135aca acc acc acc acc tgg agg ccc agc agc aca acc acc ata gcc ggc 892Thr Thr Thr Thr Thr Trp Arg Pro Ser Ser Thr Thr Thr Ile Ala Gly
140 145 150ctc agg gtc aca gaa agc aaa ggg cac tca gaa tca tgg cac cta agt 940Leu Arg Val Thr Glu Ser Lys Gly His Ser Glu Ser Trp His Leu Ser
155 160 165ctg gac act gcc atc agg gtt gca ttg gct gtc gct gtg ctc aaa act 988Leu Asp Thr Ala Ile Arg Val Ala Leu Ala Val Ala Val Leu Lys Thr
170 175 180gtc att ttg gga ctg ctg tgc ctc ctc ctc ctg tgg tgg agg aga agg 1036Val Ile Leu Gly Leu Leu Cys Leu Leu Leu Leu Trp Trp Arg Arg Arg185 190 195 200aaa ggt agc agg gcg cca agc agt gac ttc tgaccaacag agtgtgggga 1086Lys Gly Ser Arg Ala Pro Ser Ser Asp Phe
205 210gaagggatgt gtattagccc cggaggacgt gatgtgagac ccgcttgtga gtcctccaca 1146ctcgttcccc attggcaaga tacatggaga gcaccctgag gacctttaaa aggcaaagcc 1206gcaaggcaga aggaggctgg gtccctgaat caccgactgg aggagagtta cctacaagag 1266ccttcatcca ggagcatcca cactgcaatg atataggaat gaggtctgaa ctccactgaa 1326ttaaaccact ggcatttggg ggctgtttat tatagcagtg caaagagttc ctttatcctc 1386cccaaggatg gaaaaataca atttattttg cttaccataa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1446aaaa 1450<210>6<211>227<212>PRT<213>人类<400>6Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Gln Pro Pro-17 -15 -10 -5Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser Tyr Leu
1 5 10 15Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly Gly Ser
20 25 30Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala Ile Val
35 40 45Pro Asn Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly Gln Ser
50 55 60Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val Asn Arg
65 70 75Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu Arg Ile80 85 90 95Ser Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg Val Glu
100 105 110Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile Lys Gly
115 120 125Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Thr Trp Arg
130 135 140Pro Ser Ser Thr Thr Thr Ile Ala Gly Leu Arg Val Thr Glu Ser Lys
145 150 155Gly His Ser Glu Ser Trp His Leu Ser Leu Asp Thr Ala Ile Arg Val160 165 170 175Ala Leu Ala Val Ala Val Leu Lys Thr Val Ile Leu Gly Leu Leu Cys
180 185 190Leu Leu Leu Leu Trp Trp Arg Arg Arg Lys Gly Ser Arg Ala Pro Ser
195 200 205Ser Asp Phe
210<210>7<211>909<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(130)..(657)<220><221>sig_肽<222>(130)..(180)<220><221>mat_肽<222>(181)..(654)<400>7acagccctct tcggagcctc agcccggctc tcctcactca cctcaacccc caggcggccc 60ctccacaggg cccctctcct gcctggacgg ctctgctggt ctccccgtcc cctggagaag 120aacaaggcc atg ggt cgg ccc ctg ctg ctg ccc cta ctg ccc ctg ctg ctg 171
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu
-15 -10 -5ccg cca gca ttt ctg cag cct agt ggc tcc aca gga tct ggt cca agc 219Pro Pro Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser
-1 1 5 10tac ctt tat ggg gtc act caa cca aaa cac ctc tca gcc tcc atg ggt 267Tyr Leu Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly
15 20 25ggc tct gtg gaa atc ccc ttc tcc ttc tat tac ccc tgg gag tta gcc 315Gly Ser Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala30 35 40 45aca gct ccc gac gtg aga ata tcc tgg aga cgg ggc cac ttc cac ggg 363Thr Ala Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly
50 55 60cag tcc ttc tac agc aca agg ctg cct tcc att cac aag gat tat gtg 411Gln Ser Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val
65 70 75aac cgg ctc ttt ctg aac tgg aca gag ggt cag aag agc ggc ttc ctc 459Asn Arg Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu
80 85 90agg atc tcc aac ctg cag aag cag gac cag tct gtg tat ttc tgc cga 507Arg Ile Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg
95 100 105gtt gag ctg gac aca cgg agc tca ggg agg cag cag tgg cag tcc atc 555Val Glu Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile110 115 120 125gag ggg acc aaa ctc tcc atc acc cag ggg aac cct tcc aaa aca cag 603Glu Gly Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln Gly Asn Pro Ser Lys Thr Gln
130 135 140agg agc cat atg aga ata tca gga atg aag gac aaa ata cag atc cca 651Arg Ser His Met Arg Ile Ser Gly Met Lys Asp Lys Ile Gln Ile Pro
145 150 155agc taa atcccaagga tgacggcatc gtctatgctt cccttgccct ctccagctcc 707Seracctcaccca gagcacctcc cagccaccgt cccctcaaga gcccccagaa cgagaccctg 767tactctgtct taaaggccta accaatggac agccctctca agactgaatg gtgaggccag 827gtacagtggc gcacacctgt aatcccagct actctgaagc ctgaggcaga atcaagtgag 887cccaggagtt cagggccagc tt 909<210>8<211>175<212>PRT<213>人类<400>8Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Leu Leu
-15 -10 -5Pro Pro Ala Phe Leu Gln Pro Ser Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser
-1 1 5 10Tyr Leu Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly
15 20 25Gly Ser Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala30 35 40 45Thr Ala Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly
50 55 60Gln Ser Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val
65 70 75Asn Arg Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Lys Ser Gly Phe Leu
80 85 90Arg Ile Ser Asn Leu Gln Lys Gln Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg
95 100 105Val Glu Leu Asp Thr Arg Ser Ser Gly Arg Gln Gln Trp Gln Ser Ile110 115 120 125Glu Gly Thr Lys Leu Ser Ile Thr Gln Gly Asn Pro Ser Lys Thr Gln
130 135 140Arg Ser His Met Arg Ile Ser Gly Met Lys Asp Lys Ile Gln Ile Pro
145 150 155Ser<210>9<211>1459<212>DNA<213>人类<220><221>CDS<222>(309)..(989)<220><221>sig_肽<222>(309)..(359)<220><221>mat_肽<222>(360)..(986)<400>9ggcacgacgc cccatctcta ctaataaaaa aaaaaaaaaa ggatttgaag tcctggccgg 60agcaattagg caagggataa aaaggcacct aaggcccttt tgcaataaga agccagatgg 120ataaaggaag tgctggtcac cctggaggtg tactggtttg gggaaggtcc ccggccccca 180cagccctctg gggagcctca ccctggctct ccccactcac ctcagccctc aggcagcccc 240tccacaggac ccctctcctg cctggacagc tctgctggtc tccccgtccc ctggagaaga 300acaaggcc atg ggt cgg ccc ctg ctg ctg ccc ctg ctg ctc ctg ctg cag 350
Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Gln
-15 -10 -5ccg cca gca ttt ctg cag cct ggt ggc tcc aca gga tct ggt cca agc 398Pro Pro Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser
-1 1 5 10tac ctt tat ggg gtc act caa cca aaa cac ctc tca gcc tcc atg ggt 446Tyr Leu Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met Gly
15 20 25ggc tct gtg gaa atc ccc ttc tcc ttc tat tac ccc tgg gag tta gcc 494Gly Ser Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala30 35 40 45aca gct ccc gac gtg aga ata tcc tgg aga cgg ggc cac ttc cac ggg 542Thr Ala Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly
50 55 60cag tcc ttc tac agc aca agg ccg cct tcc att cac aag gat tat gtg 590Gln Ser Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val
65 70 75aac cgg ctc ttt ctg aac tgg aca gag ggt cag gag agc ggc ttc ctc 638Asn Arg Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu
80 85 90agg atc tca aac ctg cgg aag gag gac cag tct gtg tat ttc tgc cga 686Arg Ile Ser Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg
95 100 105gtc gag ctg gac acc cgg aga tca ggg agg cag cag ttg cag tcc atc 734Val Glu Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile110 115 120 125aag ggg acc aaa ctc acc atc acc cag gct gtc aca acc acc acc acc 782Lys Gly Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Thr
130 135 140tgg agg ccc agc agc aca acc acc ata gcc ggc ctc agg gtc aca gaa 830Trp Arg Pro Ser Ser Thr Thr Thr Ile Ala Gly Leu Arg Val Thr Glu
145 150 155agc aaa ggg cac tca gaa tca tgg cac cta agt ctg gac act gcc atc 878Ser Lys Gly His Ser Glu Ser Trp His Leu Ser Leu Asp Thr Ala Ile
160 165 170agg gtt gca ttg gct gtc gct gtg ctc aaa act gtc att ttg gga ctg 926Arg Val Ala Leu Ala Val Ala Val Leu Lys Thr Val Ile Leu Gly Leu
175 180 185ctg tgc ctc ctc ctg tgg tgg agg aga agg aaa ggt agc agg gcg cca 974Leu Cys Leu Leu Leu Trp Trp Arg Arg Arg Lys Gly Ser Arg Ala Pro190 195 200 205agc agt gac ttc tga ccaacagagt gtggggagaa gggatgtgta ttagccccgg 1029Ser Ser Asp Pheaggacgtgat gtgagacccg cttgtgagtc ctccacactc gttccccatt ggcaagatac 1089atggagagca ccctgaggac ctttaaaagg caaagccgca aggcagaagg aggctgggtc 1149cctgaatcac cgactggagg agagttacct acaagagcct tcatccagga gcatccacac 1209tgcaatgata taggaatgag gtctgaactc cactgaatta aaccactggc atttgggggc 1269tgttcattat agcagtgcaa agagttcctt tatcctcccc aaggatggaa aatacaattt 1329attttgctta ccatacaccc cttttctcct cgtccacatt ttccaatctg tatggtggct 1389gtcttctatg gcagaaggtt ttggggaata aatagcgtga aatgctgctg aaaaaaaaaa 1449aaaaaaaaaa 1459<210>10<211>226<212>PRT<213>人类<400>10Met Gly Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Leu Leu Gln
-15 -10 -5Pro Pro Ala Phe Leu Gln Pro Gly Gly Ser Thr Gly Ser Gly Pro Ser
-1 1 5 10Tyr Leu Tyr Gly Val Thr Gln Pro Lys His Leu Ser Ala Ser Met GlyGly Ser Val Glu Ile Pro Phe Ser Phe Tyr Tyr Pro Trp Glu Leu Ala30 35 40 45Thr Ala Pro Asp Val Arg Ile Ser Trp Arg Arg Gly His Phe His Gly
50 55 60Gln Ser Phe Tyr Ser Thr Arg Pro Pro Ser Ile His Lys Asp Tyr Val
65 70 75Asn Arg Leu Phe Leu Asn Trp Thr Glu Gly Gln Glu Ser Gly Phe Leu
80 85 90Arg Ile Ser Asn Leu Arg Lys Glu Asp Gln Ser Val Tyr Phe Cys Arg
95 100 105Val Glu Leu Asp Thr Arg Arg Ser Gly Arg Gln Gln Leu Gln Ser Ile110 115 120 125Lys Gly Thr Lys Leu Thr Ile Thr Gln Ala Val Thr Thr Thr Thr Thr
130 135 140Trp Arg Pro Ser Ser Thr Thr Thr Ile Ala Gly Leu Arg Val Thr Glu
145 150 155Ser Lys Gly His Ser Glu Ser Trp His Leu Ser Leu Asp Thr Ala Ile
160 165 170Arg Val Ala Leu Ala Val Ala Val Leu Lys Thr Val Ile Leu Gly Leu
175 180 185Leu Cys Leu Leu Leu Trp Trp Arg Arg Arg Lys Gly Ser Arg Ala Pro190 195 200 205Ser Ser Asp Phe<210>11<211>21<212>DNA<213>人类<400>11ACAGCCCTCT TCGGAGCCTC A 21<210>12<211>21<212>DNA<213>人类<400>12AAGCTGGCCC TGAACTCCTG G 21<210>13<211>18<212>DNA<213>人类<400>13CAAGGGATAA AAAGGCAC 18<210>14<211>18<212>DNA<213>人类<400>14AACTCTCCTC CAGTCGGT 18
Claims (16)
1.一种分离的多肽，包含来自SEQ ID NO：2、4、6、8或10的氨基酸序列。
2.权利要求1的多肽，包含成熟蛋白质的氨基酸序列。
3.一种分离的核酸，包含编码来自SEQ ID NO：2、4、6、8或10的氨基酸序列的核苷酸序列。
4.权利要求3的核酸，其中该核苷酸序列编码成熟蛋白质。
5.权利要求4的核酸，包含显示在SEQ ID NO：1、3、5、7或9中的核苷酸序列。
6.一种融合蛋白质，包含权利要求1的多肽。
7.一种结合性化合物，它可特异性地结合于权利要求1的多肽。
8.权利要求7的结合性化合物，是一种抗体或抗体片段。
9.权利要求8的结合性化合物，其中该抗体是单克隆抗体。
10.一种表达载体，包含权利要求3的核酸。
11.一种宿主细胞，包含权利要求10的载体。
12.一种重组产生多肽的方法，包括在该多肽能在其中被表达的条件下培养权利要求11的宿主细胞。
13.一种检测样品中特异性核酸序列的方法，该方法包括如下步骤：
(i)使怀疑含有特异性核酸序列的样品与一种探针，在该探针同此样品中特异性核酸可形成杂交体的条件下相接触，此探针含有包括选自SEQ ID NO：1、3、5、7或9的至少8个连续核苷酸的核酸序列；以及
(ii)检测在步骤(i)中形成的任何杂交体，
其中对该杂交体的检测可指示样品中该特异性核酸序列的存在。
14.权利要求13的方法，进一步包括在所述的检测步骤之前扩增该样品中的所述特异性序列。
15.一种检测样品中特异性抗原成分的方法，该方法包括如下步骤：
(i)使怀疑含有特异性抗原成分的样品与对该成分特异性的抗体，在该抗体和样品中该抗原成分可形成稳定抗原-抗体复合物的条件下相接触，此特异性抗原成分是由来自SEQ ID NO：2、4、6、8或10的氨基酸序列编码的；以及
(ii)检测步骤(i)中形成的任何抗原-抗体复合物，
其中对抗原-抗体复合物的检测可指示样品中该抗原成分的存在。
16.一种筛选候选的治疗剂的方法，包括：
选择一种具有来自SEQ ID NO：2、4、6、8或10的氨基酸序列的多肽作为靶标序列；
使待测化合物与该靶标序列相接触；以及
选择那些结合于此靶标序列的待测化合物作为候选的治疗剂。
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