CN1352138A - 精子生成相关蛋白、其编码序列及用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种新的精子生成相关蛋白－Sgrg蛋白,编码Sgrg蛋白的多核苷酸和经重组技术产生Sgrg蛋白的方法。本发明还公开了编码Sgrg蛋白的多核苷酸的用途。本发明还公开了此Sgrg蛋白用于治疗多种疾病的方法,如用于不育症等疾病。本发明还提供了含Sgrg蛋白的药物组合物。

Description

精子生成相关蛋白、其编码序列及用途

本发明属于生物技术和医学领域，具体地说，本发明涉及新的编码人精子生成相关蛋白-Sgrg的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。具体地说，本发明的多肽是一种与精子生成和发育相关的蛋白。

男性生殖环节很多，主要的有男性生殖系统的神经内分泌调节，睾丸的精子发生，精子在附睾中的成熟，精子排出过程中与精囊，前列腺分泌的精浆混合而成精液，精子从男性生殖道排出体外并输入到女性生殖道内，精子在女性输卵管内与卵子受精等环节，在这些环节中受到干扰和影响，都可发生生育障碍。

据世界卫生组织统计，世界发达国家5％-8％的育龄夫妇可能有不育问题，而发展中国家的某些地区可高达30％。按WHO推荐的标准，夫妇婚后同居一年以上，未用任何避孕措施，由于男性方面的原因造成女方不孕者，称为男性不育症。男性不育的病因在临床上分为：性功能障碍，免疫不育，精浆异常，先天性疾病，生殖道感染，精索静脉曲张，内分泌异常，输精管阻塞，精子异常，睾丸功能障碍及环境因素等等。

近年来，随着医疗水平的不断进步，一部分男性不育症在临床上找到了较为有效的治疗手段。但是由于对于男性生殖机理了解尚十分不够，男性不育，特别是精子发生异常所引起的不育，还停留在经验性治疗的阶段。与精子发生相关的基因的克隆也报道不多。因此，在分子水平上了解精子发生中的生化事件具有十分重要的实际应用意义。

因此，本领域迫切需要开发新的新的与精子生成和/或生成有关的蛋白。

本发明的目的是提供一种新的人精子生成相关蛋白-Sgrg蛋白以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的Sgrg多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID NO：2或3氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2或3氨基酸序列的多肽。

在本发明的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性：(a)编码上述人Sgrg多肽的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中561-1364位的序列(Sgrg蛋白的编码区)；(b)具有SEQ ID NO：1中781-1364位的序列(成熟的Sgrg蛋白的编码区)：(c)具有SEQ ID NO：1中1-1640位的序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有人Sgrg蛋白活性的多肽的方法，该方法包含：(a)在适合表达人Sgrg蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有人Sgrg蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的人Sgrg多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-1640个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗人Sgrg多肽活性的化合物，以及抑制人Sgrg多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是人Sgrg多肽的编码序列或其片段的反义序列。

在本发明的第七方面，提供了检测样品中是否存在Sgrg蛋白的方法，它包括：将样品与Sgrg蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在Sgrg蛋白。

在本发明的第八方面，提供了一种检测与人Sgrg多肽异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，该方法包括：检测编码所述多肽的核酸序列中是否存在突变。

在本发明的第九方面，提供了本发明多肽和编码序列的用途。例如本发明多肽可被用于筛选促进人Sgrg多肽活性的激动剂，或者筛选抑制人Sgrg多肽活性的拮抗剂、或者被用于肽指纹图谱鉴定。本发明的人Sgrg蛋白的编码序列或其片段，可被作为引物用于PCR扩增反应，或者作为探针用于杂交反应，或者用于制造基因芯片或微阵列。

在本发明的第十方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的人Sgrg多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗少精症，畸形精子等病症。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

下列附图用于说明本发明的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本发明范围。

图1是本发明的人Sgrg蛋白与人类红血球增多症相关基因PRV-1(GI9857661)的氨基酸序列同源性比较图。上方序列是人Sgrg，下方序列是人PRV-1蛋白。相同的氨基酸在两个序列之间用氨基酸字母标出，相似的氨基酸用“+”。

图2是本发明的人Sgrg蛋白表达产物的电泳图。

在本发明中，术语“Sgrg蛋白”、“Sgrg多肽”或“精子生成相关蛋白Sgrg”可互换使用，都指具有人精子生成相关蛋白Sgrg氨基酸序列(SEQ ID NO：2或3)的蛋白或多肽。它们包括含有或不含起始甲硫氨酸的Sgrg蛋白，也包括含信号肽或不含信号肽的Sgrg蛋白。

如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。

如本文所用，“分离的Sgrg蛋白或多肽”是指Sgrg多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化Sgrg蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。Sgrg多肽的纯度能用氨基酸序列分析。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。

本发明还包括人Sgrg蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然人Sgrg蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与抗原IgG片段的形成的融合蛋白)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。

在本发明中，术语“人Sgrg多肽”指具有人Sgrg蛋白活性的SEQ ID NO.2或3序列的多肽。该术语还包括具有与人Sgrg蛋白相同功能的、SEQ ID NO.2或3序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：若干个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括人Sgrg蛋白的活性片段和活性衍生物。

该多肽的变异形式包括：同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与人Sgrg DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗人Sgrg多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。本发明还提供了其他多肽，如包含人Sgrg多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本发明还包括了人Sgrg多肽的可溶性片段。通常，该片段具有人Sgrg多肽序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。

发明还提供人Sgrg蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然人Sgrg多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。

修饰(通常不改变一级结构)形式包括：体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。

在本发明中，“人Sgrg蛋白保守性变异多肽”指与SEQ ID NO：2或3的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表1进行氨基酸替换而产生。

表1

最初的残基	代表性的取代	优选的取代
			Ala(A)	Val；Leu；I1e	Val
Arg(R)	Lys；Gln；Asn	Lys
			Asn(N)	Gln；His；Lys；Arg	Gln
Asp(D)	Glu	Glu
			Cys(C)	Ser	Ser
Gln(Q)	Asn	Asn
			Glu(E)	Asp	Asp
Gly(G)	Pro；Ala	Ala
			His(H)	Asn；Gln；Lys；Arg	Arg
Ile(I)	Leu；Val；Met；Ala；Phe	Leu
			Leu(L)	Ile；Val；Met；Ala；Phe	Ile
Lys(K)	Arg；Gln；Asn	Arg
			Met(M)	Leu；Phe；I1e	Leu
Phe(F)	Leu；Val；Ile；Ala；Tyr	Leu
			Pro(P)	Ala	Ala
Ser(S)	Thr	Thr
			Thr(T)	Ser	Ser
Trp(W)	Tyr；Phe	Tyr
			Tyr(Y)	Trp；Phe；Thr；Ser	Phe
Val(V)	Ile；Leu；Met；Phe；Ala	Leu

本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO：1所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO：2或3所示氨基酸序列的蛋白质，但与SEQ ID NO：1所示的编码区序列有差别的核酸序列。

编码成熟多肽的多核苷酸包括：只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。

术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。

本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在90％以上，更好是95％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ ID NO：2所示的成熟多肽有相同的生物学功能和活性。

本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码Sgrg蛋白的多聚核苷酸。

本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。

本发明的人Sgrg核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；230：1350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或Sgrg蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。

通过常规的重组DNA技术(Science，1984；224：1431)，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的Sgrg多肽。一般来说有以下步骤：

(1).用本发明的编码人Sgrg多肽的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，人Sgrg多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于：在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56：125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.263：3521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含人Sgrg编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，coldSpring Harbor Laboratory.New York，1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有：大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体P_L启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS、293细胞、或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。

本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。

本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

重组的人Sgrg蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)：直接做为药物治疗Sgrg蛋白功能低下或丧失所致的疾病(如无精子，或精子活力低下等疾病)，和用于筛选促进或对抗Sgrg蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。用表达的重组人Sgrg蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激人Sgrg蛋白功能的多肽分子。

另一方面，本发明还包括对人Sgrg DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人Sgrg基因产物或片段。较佳地，指那些能与人Sgrg基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人Sgrg蛋白的分子，也包括那些并不影响人Sgrg蛋白功能的抗体。本发明还包括那些能与修饰或未经修饰形式的人Sgrg基因产物结合的抗体。

本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab′或(Fab)₂片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子(Ladner等人，美国专利No.4,946,778)；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。

本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人Sgrg基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人Sgrg蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人，Nature 256；495，1975；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6：511，1976；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6：292，1976；Hammerling等人，In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier，N.Y.，1981)。本发明的抗体包括能阻断人Sgrg蛋白功能的抗体以及不影响人Sgrg蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人Sgrg基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人Sgrg基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。

抗人Sgrg蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的人Sgrg蛋白。此外，与人Sgrg蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。

本发明中的抗体可用于治疗或预防与人Sgrg蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断人Sgrg蛋白的产生或活性。

抗体也可用于设计成针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如人Sgrg蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭人Sgrg蛋白阳性的细胞(例如淋巴结细胞等)。

多克隆抗体的生产可用人Sgrg蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。

利用本发明蛋白，通过各种常规筛选方法，可筛选出与Sgrg蛋白发生相互作用的物质，如受体、抑制剂、激动剂或拮抗剂等。

本发明蛋白及其抗体、抑制剂、激动剂、拮抗剂或受体等，当在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。

本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，用于睾丸生精功能障碍方面的治疗。在使用本发明Sgrg蛋白时，还可同时使用其他用于同一病症的治疗剂，如睾丸素等。

本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明Sgrg多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使用。

使用药物组合物时，是将安全有效量的Sgrg蛋白或其拮抗剂、激动剂施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

人Sgrg蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于Sgrg蛋白的无表达或异常/无活性的Sgrg蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的Sgrg蛋白，以抑制内源性的Sgrg蛋白活性。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将Sgrg基因转移至细胞内。构建携带Sgrg基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组人Sgrg基因可包装到脂质体中，然后再转移至细胞内。

抑制人Sgrg mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。

多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括：将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。

能与人Sgrg蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对人Sgrg蛋白分子进行标记。

本发明还涉及定量和定位检测人Sgrg蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的人Sgrg蛋白水平，可以用作解释人Sgrg蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断Sgrg蛋白起作用的疾病。

一种检测检测样品中是否存在Sgrg蛋白的方法是利用Sgrg蛋白的特异性抗体进行检测，它包括：将样品与Sgrg蛋白特异性抗体接触；观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在Sgrg蛋白。

Sgrg蛋白的多聚核苷酸可用于Sgrg蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，Sgrg蛋白的多聚核苷酸可用于检测Sgrg蛋白的表达与否或在疾病状态下Sgrg蛋白的异常表达。如Sgrg DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断Sgrg蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用Sgrg蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测Sgrg蛋白的转录产物。

检测Sgrg基因的突变也可用于诊断Sgrg蛋白相关的疾病。Sgrg蛋白突变的形式包括与正常野生型Sgrg DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。

本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。简而言之，根据本发明Sgrg蛋白的cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。

一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance inMan(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。

在本发明的一个实例中，提供了一种分离的多核苷酸，它编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。本发明的多核苷酸是从人外周淋巴血细胞cDNA文库中分离出的。其序列如SEQ ID NO：1所示，它包含的多核苷酸序列全长为1640个碱基，其开放读框位于561-1364位，编码全长为267个氨基酸的人Sgrg蛋白(SEQ IDNO：2)。可为治疗无精子，或精子活力低下等疾病提供新的治疗途径，因而具有巨大的应用前景。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1：EST的获得

以不同分裂时相的小鼠艾氏腹水癌细胞及小鼠L929细胞为材料，用硬皮病病人抗血清与其作用，利用间接免疫荧光检测抗原在胞内的分布情况，得到了一例抗血清。它可以特异性地围绕在分裂中后期细胞的染色体周围。为了寻找这些抗原蛋白，本发明人用该血清筛选人睾丸λ噬菌体表达文库。得到若干克隆，按常规方法抽取DNA，纯化。用λgt11引物测序，发现其中一个为新的EST，将该EST命名为为YN11。

实施例2：全长序列的获得

(1)引物合成

为了得到包含YN11 EST的全长cDNA，参照该EST的序列设计和合成了如下引物：

YN11 XF：5′-TGG ATC TGC TTC CAC AGT CAT GGA CA-3′(SEQ ID NO：6)

YN11 NF：5′-TAC AGC TCT AGG CCC GAG GTC AGG A-3′(SEQ ID NO：7)

YN11 NR：5′-AGA AGC CAT GGG AAC CCT CGT ATC C-3′(SEQ ID NO：8)

YN11 R2：5′-ATT GGC TGC AGG CTG ATG TCT GGA AT-3′(SEQ ID NO：9)

(2)5′-端cDNA序列的获得：

以Marathon-Ready-cDNA Human Leukocyte(Clontech-7406-1)为模板，用引物YN11 XF和AP1(AP1是试剂盒中提供的引物)参照厂商建议的条件，进行RACE-PCR。第一轮PCR产物稀释10倍后，作为模板用巢式引物YN11NF和AP2(AP2是试剂盒中提供的引物)再次扩增。扩增得到的PCR产物，割胶，纯化，克隆到T-A载体(Sangon)，用M13正向和反向引物测序。

(3)3′-端cDNA序列的获得

采用与5′-端采用完全相同的策略，不同点仅在于：引物为YN11NR.+AP1然后YN11R2+AP2。

(4)全长序列的获得

将3′-端，5′-端序列拼接得到完整的全长cDNA(GENE BANK登录号：AF241268)(因申请专利，故在本申请提交之前处于保密状态)。Sgrg cDNA为1640bp(SEQ ID NO：1)，含有完整的开放性读框801bp，编码含267氨基酸残基的多肽(SEQ ID NO：2)。

经SignaIP分析预测，SEQ ID NO：2中第1-40位氨基酸为指向内质网的信号肽。成熟的多肽分子由227个氨基酸残基组成(SEQ ID NO：3)，其中与人类红血球增多症相关基因PRV-1的同源比较见图1。PRV-1由两个高度相似的结构域组成，形成一个重复结构。所以BLAST结果显示SGRG与PRV-1的两个片段都有同源性。相同性为32％，相似性为49％。

实施例5：Sgrg的染色体定位

按厂商建议的条件，利用RH panel Assay(Research Genetics)进行Sgrg的染色体定位。将该基因在染色体上定位于19q13.2。

PCR条件：95℃ 10分钟→94℃ 30秒；64℃ 30秒；72℃ 23秒，共30个循环→72℃ 3分30秒。

引物：YN11 XF和NR(该PCR条件是进行RH panel Assay的一部分条件)

扩增产物经rhserver@shgc.standford.edu分析，结果表明，与其最紧密连锁的遗传标记是SHGC 3096.

实施例6：Sgrg的组织表达谱

以Sgrg包含ORF的一段cDNA(SEQ ID NO：1中615-1364)为探针，与MTE膜(Clontech-7775-1)杂交，结果显示该Sgrg在睾丸组织中十分特异地表达，而在其他组织(如肝，心等)中只有非常低的表达。

实施例7：Sgrg的基因结构和蛋白结构

(1)基因结构

将Sgrg cDNA全长序列在http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/的DATABASE-htgs做BLAST，结果发现人BAC：染色体19，CIT978SKB-61I7包含了Sgrg基因，整个基因的跨度约为23kb。基因结构如下：

                  表2  Sgrg的基因结构

	CDNA序列	基因组序列	剪接位点
				外显子1	1-119	20106-20634
外显子2	118-185	33407-33474	/gtggg……tttac/
				外显子3	184-280	34677-34773	/gtgcgt……ttttt/
外显子4	277-575	38133-38432	/tatgag……ctgtg/
				外显子5	573-678	47791-47896	/gtacag……aattca/
外显子6	679-823	48012-48156	/gtgcgt……cctcag/
				外显子7	820-1005	48283-48468	/tgaaa……cataa/
外显子8	1003-1136	49788-49921	/gtacc……ccctc/
				外显子9	1133-1563	50079-50509	/aacct……tctat/

(2)蛋白结构

用ORF Finder程序(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html)预测Sgrg蛋白序列，得到一个267氨基酸的开放阅读框。经分析它可能含有以下结构特点：

(A)基序：

1.氨基酸63-66；177-180：  N-糖基化位点

2.氨基酸21-23；179-181：  PKC-磷酸化位点

3.氨基酸13-16；40-43；65-68；196-199：酪蛋白激酶2磷酸化位点

(B)基因家族性分析：在http：∥fps.sdsc.edu上进行基因家族性分析。结果表明，Sgrg蛋白有包括uPAR签名序列(CXDXXCN)在内的uPAR结构域(C富含结构域)，属于尿激酶受体超家族。

(C)同源性分析：BLAST(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)：

如图1所示，Sgrg蛋白与人类红血球增多症相关基因PRV-1(GI9857661)有比较高的同源性，尤其是在uPAR超家族保守区域内的同源性更强。

PRV-1属于uPAR超家族的一个成员，它的过高表达与红细胞过分增殖相对应。PRV-1基因也定位于19q13.2的位置，与Sgrg的位置仅仅相隔9kb左右。

实施例8：Sgrg的原位杂交

由于Sgrg基因在睾丸组织中特异地表达，所以为了进一步了解它在雄性生殖系统中的作用，以恒河猴睾丸为材料，按常规方法进行原位杂交。结果发现它较为单一地曲精细管的生精细胞中表达。这表明，Sgrg的功能与精子的发育和/或成熟有十分密切的联系。

实施例9：Sgrg片段在原核细胞中的表达

用引物YN11E-C-F(5′-CGC GGA TCC TTG GGG ACC TGT TTC AGT G-3′)(SEQ ID NO：10)和YN11E-R(5′-ATAAAGCTTAAATGATGGC AGCAGCAATGG-3′)(SEQ ID NO：5)，以人外周血cDNA为模板扩增编码Sgrg蛋白的167-267a.a的DNA。

利用EcoRI和Hind III位点将PCR扩增产物克隆到PET32(a)(Novagen)中，然后转化宿主E.Coli：BL21(DE3)。转化的宿主细胞在IPTG的诱导下表达。结果如图2所示，表达产物在SDS-PAGE胶中分子量大约为33Kda(含融合蛋白硫氧还原蛋白(Thioredoxin))。

实施例10：抗体的制备

用Ni-NTA Agarose(Clontech)纯化实施例中表达的融合蛋白，将该融合蛋白用作抗原，在兔中制备多克隆抗体。具体程序如下：第一次免疫纯种新西兰兔，蛋白用量为240ug/只，用弗氏完全佐剂。4周后，第二次免疫，蛋白用量为140ug/只，用不完全佐剂。之后2周，第三次免疫，蛋白用量为120ug/只，用不完全佐剂。

实施例11：Sgrg对细胞增殖的促进作用

为了解Sgrg在细胞动力学方面可能具有的意义，在本实施例中进行了的集落形成实验。

用引物YN11E-F-2(5′-TCT AAG CTT ATG GGG GCG AGG CAG ATC CAGATC CAG ACC AGC TCC TCC CAG AC-3′)(SEQ ID NO：11)和YN11E-R-2(5′-CGTCTA GAT TAG GAA AAG TGA ATA AAT GAT GGC AGC AGC A-3′)(SEQ ID NO：12)，以人外周淋巴血cDNA为模板，通过RT-PCR扩增得到Sgrg的编码区(SEQ IDNO：1中561-1364位)。

然后利用引物上的酶切位点(Xba I和Hind III)，将扩增产物克隆到真核表达载体pRC/CMV(Invitrogen)，形成质粒pRC/CMV-Sgrg。用Gibco公司的Lipofectamine(18324-020)脂质体转染技术将构建好的质粒pRC/CMV-Sgrg转染小鼠成纤维细胞3T3系和人肝癌细胞系7721。稳定转化的细胞株以低密度接种后，并以空载体pRC/CMV作为阴性对照，以JCL/L(一种已知的促细胞增殖因子)作为阳性对照。结果如表3所示：

                       表3  Sgrg对细胞增殖的促进作用

	3T3细胞(克隆数)	7721细胞(克隆数)
			Sgrg(过表达)	42	17
空载体	3	2
			JCL/L(阳性对照)	38	无

可以看出，在真核细胞中过量表达Sgrg基因会影响细胞的增殖。这与uPAR家族的特征也比较吻合。

实施例12：RT-PCR法获得Sgrg编码序列

用RNeasy(Qiagen)从人外周血中分离总RNA。然后用SupertScript II RNaseH-Reverse Transcriptase(Gibco)，逆转录得到cDNA(按厂商提供条件反应)。以cDNA为模板，用引物YN11 RT-F和YN11 RT-R：

YN11RT-F：5’AGA TCC AGA CCA GCT CCT CCC-3’(SEQ ID NO：14)

YN11RT-R：5′-AAATGATGGC AGCAGCAATG G-3′(SEQ ID NO：5)

按以下条件PCR：：95℃10分钟→94℃ 30秒；60℃30秒；72℃90秒，共45个循环→72℃3分30秒。

扩增得到的PCR产物经测序，结果表明与SEQ ID NO：1中所示的Sgrg的编码区序列相符。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表(1)一般信息：(ii)发明名称：新的精子生成相关蛋白、其编码序列及用途(iii)序列数目：14(2)SEQ ID NO：1的信息：(i)序列特征：

(A)长度：1640bp

(B)类型：核酸

(C)链性：双链

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：cDNA(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：ATTTAGGATG AACTATGTGT GACAAATGGT GCCGTTGAGT CCTCTCAACT GGGAACGAGT  60CACCGTGTAT CTGGAGACCA TGTGTGTAAC GGGTTGCACC TGCTTGGCTG GATACAAAGA  120ACCATCCATC CCATCAGGGA AATATGCAAC ATGCTTCAAA GAATAAGAAG AGAACTTTGG  180GCCAGTAGAG ACGGGGTTTC ACCGTGTTAG CCAGGATGGT CTCGATCTCC TGACCTCGTG  240ATCCGCCTGC CTTGGCCTCC CAAAGTGCTG GGATTACAGG GCACTGAATG TCAAAGTGAA  300GGAATTCAAT GAAGCCCGGA TCAAGGGCAG GAGCAACCGT GACCCTCTTA AAAGAGCCAA  360TGCCCCATGT AATTAGTGAC GCGCGCGAAT GGATAGACGC TATTCCCACC GTCCCTACAT  420AGCATCCAGC GACACCACAG CCAAGGGACA GGCTTGGCGG AACTGCGGGA GAGAAGAACC  480CTCTGAGCCT GATTGAAAGG CGGTGAAGAG ACAGGAGAGG GGGATCGGTG GGCGGTCCCG  540CCTCCATCTT CAGTTCCCGC ATGGGGGCGA GGCAGATCCA GACCAGCTCC TCCCAGACCT  600CTCCAGAAGA AGCCATGGGA ACCCCTCGTA TCCAGCATTT GCTGATCCTC CTGGTCCTAG  660GAGCCTCCCT CCTGACCTCG GGCCTAGAGC TGTATTGTCA AAAGGGTCTG TCCATGACTG  720TGGAAGCAGA TCCAGCCAAT ATGTTTAACT GGACCACAGA GGAAGTGGAG ACTTGTGACA  780AAGGGGCACT TTGCCAGGAA ACCATACTAA TAATTAAAGC AGGGACTGAG ACAGCCATTT  840TGGCCACGAA GGGCTGCATC CCGGAAGGGG AGGAGGCCAT AACAATTGTC CAGCACTCTT  900CACCTCCCGG CCTGATCGTG ACCTCCTACA GTAACTACTG TGAGGATTCC TTCTGTAATG  960ACAAAGACAG CCTGTCTCAG TTTTGGGAGT TCAGTGAGAC CACAGCTTCC ACTGTGTCAA  1020CAACCCTCCA TTGTCCAACC TGTGTGGCTT TGGGGACCTG TTTCAGTGCT CCTTCTCTTC  1080CCTGTCCCAA TGGTACAACT CGATGCTATC AAGGAAAACT TGAGATCACT GGAGGTGGCA  1140TTGAGTCGTC TGTGGAGGTC AAAGGCTGTA CAGCCATGAT TGGCTGCAGG CTGATGTCTG  1200GAATCTTAGC AGTAGGACCC ATGTTTGTGA GGGAAGCGTG CCCACATCAG CTGCTCACTC  1260AACCTCGAAA GACTGAAAAT GGGGCCACCT GTCTTCCCAT TCCTGTTTGG GGGTTACAGC  1320TACTGCTGCC ATTGCTGCTG CCATCATTTA TTCACTTTTC CTAAGAAGGC ACTTCTGGGC  1380CTGGGTCTGA GGACATCTTT TTTGACTGGG AGCCTTCTTA CTGTTGAGGT TCAACAAGCT  1440GAGGAGTAGA TGGGAATTTG AGGGAGAATA CAGAGATACT ATGAACGTAT TTGACATTTT  1500TAATACAATT TCTGCTATAA TTTTTGTATG CAGTAGGCGT TACTAATAAA CATTTCTGCT  1560GTGAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA  1620AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA                                              1640(2)SEQ ID NO：2的信息：(i)序列特征：

(A)长度：267个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：多肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：MGARQIQTSS SQTSPEEAMG TPRIQHLLIL LVLGASLLTS XLELYCQKGL   50SMTVEADPAN MFNWTTEEVE TCDKGALCQE TILIIKAGTE TAILATKGCI   100PEGEEAITIV QHSSPPGLIV TSYSNYCEDS FCNDKDSLSQ FWEFSETTAS   150TVSTTLHCPT CVAXGTCFSA PSLPYPNGTT RCYQGKLEIT GGXIESSVEV   200KGCTAMIGCR LMSGILAVGP MFVREACPHQ LLTQPRKTEN GATCLPIPVW   250GLQLLLPLLL PSFIHFS                                       267(2)SEQ ID NO：3的信息：(i)序列特征：

(A)长度：227个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：多肽(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：XLELYCQKGL SMTVEADPAN MFNWTTEEVE TCDKGALCQE TILIIKAGTE   50TAILATKGCI PEGEEAITIV QHSSPPGLIV TSYSNYCEDS FCNDKDSLSQ   100FWEFSETTAS TVSTTLHCPT CVAXGTCFSA PSLPYPNGTT RCYQGKLEIT   150GGXIESSVEV KGCTAMIGCR LMSGILAVGP MFVREACPHQ LLTQPRKTEN  200GATCLPIPVW GLQLLLPLLL PSFIHFS                           227()SEQ ID NO：4的信息

(i)序列特征

  (A)长度：21碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQIDNO：4：AGATCCAGAC CAGCTCCTCC C                                             21(2)SEQ ID NO：5的信息

(i)序列特征

  (A)长度：21碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：AAATGATGGC AGCAGCAATG G                                             21(2)SEQ ID NO：6的信息

(i)序列特征

  (A)长度：26碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：TGGATCTGCT TCCACAGTCA TGGACA                                        26  (2)SEQ ID NO：7的信息

(i)序列特征

  (A)长度：25碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQIDNO：7：TACAGCTCTA GGCCCGAGGT CAGGA                               25(2)SEQ ID NO：8的信息

(i)序列特征

  (A)长度：25碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：AGAAGCCATG GGAACCCTCG TATCC                               25(2)SEQ ID NO：9的信息(i)序列特征

 (A)长度：26碱基

 (B)类型：核酸

 (C)链性：单链

 (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：寡核苷酸(xi)序列描述：SEQIDNO：9：ATTGGCTGCA GGCTGATGTC TGGAAT                              26(2)SEQ ID NO：10的信息(i)序列特征

 (A)长度：28碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：CGCGGATCCT TGGGGACCTG TTTCAGTG                            28(2)SEQ ID NO：11的信息

 (i)序列特征

  (A)长度：53碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQ ID NO：11：TCTAAGCTTA TGGGGGCGAG GCAGATCCAG ATCCAGACCA GCTCCTCCCA    50GAC                                                       53(2)SEQ ID NO：12的信息

(i)序列特征

  (A)长度：40碱基

  (B)类型：核酸

  (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：CGTCTAGATT AGGAAAAGTG AATAAATGAT GGCAGCAGCA               40(2)SEQ ID NO：13的信息(i)序列特征

 (A)长度：30碱基

 (B)类型：核酸

 (C)链性：单链

  (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：寡核苷酸

(xi)序列描述：SEQ ID NO：13：ATAAAGCTTA AATGATGGCA GCAGCAATGG                         30(2)SEQ ID NO：14的信息(i)序列特征

 (A)长度：21碱基

 (B)类型：核酸

 (C)链性：单链

 (D)拓扑结构：线性(ii)分子类型：寡核苷酸(xi)序列描述：SEQ ID NO：14：AGATCCAGAC CAGCTCCTCC C                                  21

Claims (11)

1.一种分离的人Sgrg多肽，其特征在于，它包含：具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽是具有SEQ ID NO：2或3氨基酸序列的多肽。

3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性：

(a)编码如权利要求1和2所述多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。

5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组的一种：

(a)具有SEQ ID NO：1中561-1364位的序列；

(b)具有SEQ ID NO：1中781-1364位的序列；

(c)具有SEQ ID NO：1中1-1640位的序列。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求6所述的载体。

8.一种具有人Sgrg蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(a)在适合表达人Sgrg蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；

(b)从培养物中分离出具有人Sgrg蛋白活性的多肽。

9.一种能与权利要求1所述的人Sgrg蛋白特异性结合的抗体。

10.一种核酸分子，它含有权利要求3所述的多核苷酸中连续的10-1640个核苷酸。

11.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。

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