CN1350546A - 结核诊断测验 - Google Patents

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Abstract

一种诊断被表达ESAT－6的分枝杆菌感染或暴露在其下的宿主的诊断方法,包括(i)使来自宿主的T细胞群和一种或多种肽或类似物接触,这些肽或类似物选自SEQ IDNO:1－11所代表的肽及其类似物,其可与识别任何所述肽的T细胞受体结合;(ii)确定所述T细胞群的T细胞是否识别这(些)肽和/或这(些)类似物。可在体内实施此方法。提供了能使该方法得以进行的肽和试剂盒。

Description

结核诊断测验
本发明涉及一种诊断分枝杆菌感染的方法，特别是诊断结核分枝杆菌感染的方法。本发明还涉及可被用于实施此诊断方法的肽和试剂盒。
目前诊断结核病的化验或者慢或者不可靠。依赖于对引起结核的分枝杆菌识别的化验很慢，这是因为分枝杆菌的培养可耗时8周。在一些情况下有证据表明培养该细菌是不可能的。另外，获得样品去检测分枝杆菌是否存在经常需要创伤性步骤。
另一化验是结核菌素皮试(TST)或Mantoux化验，Mantoux化验基于对延迟型超敏(DTH)反应的检测，该DTH反应是对皮内给药分枝杆菌的纯化蛋白衍生物所产生的反应。尽管此化验比依赖分枝杆菌识别的化验耗时少，但是，因为BCG被广泛用作抗结核病的疫苗，所以此化验较不可靠。BCG与结核分枝杆菌紧密相关，因此经BCG免疫的个体可对TST产生阳性反应。另外，由于皮肤免疫无反应，TST不能检测出一大部分患活动性结核的人。因此，TST具有低特异性和低灵敏性。
利用检测从T细胞释放的IFN-γ的化验，发明者从结核分枝杆菌的ESAT-6蛋白中发现八个肽，这些肽被大部分结核患者的T细胞识别，特别发现57％的受测患者和68％的受测的健康接触者识别SEQ IDNO：1所代表的肽，这些接触者接触开放性肺结核。发明者将这些肽组合成一个肽系列，当一起用于诊断化验时，它们使诊断化验具有91.5％的特异性和96％的灵敏性。发明者还从ESAT-6蛋白发现其他的三个肽，它们被结核患者的T细胞所识别，并可用于提高上述诊断化验的灵敏性。
有利的是，BCG不具有ESAT-6基因。因此，该诊断化验不同于包括TST在内的以前的那些化验，它可区分结核患者和接种了BCG的患者。
在文章(Brandt et al.(1996)，Journal of Immunology，157，3527-33)中公开ESAT-6的抗原决定簇，其可被小鼠识别。然而，不可能基于在小鼠中被识别的抗原决定簇来预测出在人中被识别的抗原决定簇。小鼠具有与人不同的MHC分子，并因此识别与人不同的抗原决定簇，此外，在抗原决定簇的加工、呈递和识别过程中二者还存在其它差异。这由以下事实证明，即本发明人发现，在人中不能识别Brandt等人发现的在小鼠中识别的抗原决定簇。
发明概述
一种对被表达ESAT-6的分枝杆菌感染或暴露在表达ESAT-6的分枝杆菌下的宿主的诊断方法，包括(i)使来自宿主的T细胞群和一种或多种肽或类似物接触，这些肽或类似物选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所代表的肽及其类似物，并可与识别任何所述肽的T细胞受体结合，但不单独为(a)SEQ ID NO：3或5或其类似物，也不为(b)选自SEQ ID NO：3和5和其类似物的肽和/或类似物的组合；(ii)确定所述T细胞群中的T细胞是否识别这(些)肽和/或这(些)类似物。优选至少使用SEQ ID NO：1所代表的肽及其类似物。在其他优选实施方案中，至少使用SEQ ID NO：1、5、6和8所代表的肽的全部，或至少使用SEQ ID NO：1至8所代表的肽的全部。
本发明还提供用于实施此方法的试剂盒，其包含一种或多种所述肽或类似物，及可视情况选择的用于检测T细胞对所述肽的识别的工具。
另外，本发明提供具有SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11序列的肽或其类似物，及能表达这些肽或其类似物的多核苷酸。发明详述
SEQ ID NO：1至11的序列如下：
SEQ ID NO：1：  MTEQQWNFAGIEAAA    (ES1)
SEQ ID NO：2：  SAIQGNVTSIHSLLD    (ES4)
SEQ ID NO：3：  QKWDATATELNNALQ    (ES12)
SEQ ID NO：4：  NNALQNLARTISEAG    (ES14)
SEQ ID NO：5：  NLARTISEAGQAMAS    (ES15)
SEQ ID NO：6：  WNFAGIEAAASAIQG    (ES2)
SEQ ID NO：7：  EGKQSLTKLAAAWGG    (ES7)
SEQ ID NO：8：  YQGVQQKWDATATEL    (ES11)
SEQ ID NO：9：  NVTSIHSLLDEGKQS    (ES5)
SEQ ID NO：10： IEAAASAIQGNVTSI    (ES3)
SEQ ID NO：11： TATELNNALQNLART    (ES13)
所述宿主通常是人，但也可是动物，典型的宿主是可被分枝杆菌天然或人工感染的。宿主可以是哺乳动物，例如灵长类动物、牛、绵羊、猪、獾、和如小鼠或大鼠等的啮齿动物。具有代表性的是，宿主患有活动性或潜伏性分枝杆菌感染，或在近期受到这样的感染。在Mantoux化验中所述宿主可呈阳性或阴性。宿主可以是处在受到通常由社会经济学原因造成的分枝杆菌感染的危险中，或者是具有遗传的或后天获得的感染分枝杆菌的倾向。
所述宿主可以是健康的接触者，其已被暴露于分枝杆菌中。具有代表性的是，暴露于肺结核中，例如“开放性”肺结核，其为痰液抗酸杆菌(a.f.b.)涂片阳性。因此，此方法可用于跟踪与受结核感染的个体相接触的健康者。此方法也可用于进行群体调查，以检查患有分枝杆菌感染的群体的个体数或健康接触群体中的个体数。
所述分枝杆菌表达ESAT-6。通常，ESAT-6的序列包含一个或更多由SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所代表的肽序列、或这些序列的一个或更多同源序列。这样的同源序列可与识别SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11代表的等同肽的T细胞受体结合，和/或能抑制与所述等同肽的T细胞受体结合。
所述分枝杆菌通常是结核分枝杆菌。分枝杆菌可以是海分枝杆菌或堪萨斯分枝杆菌。临床症状模式可被用于在这两种生物和结核分枝杆菌间进行区分。分枝杆菌可以是牛型结核分枝杆菌。它能感染人。
识别此方法中所述肽的T细胞通常在体内被来自分枝杆菌的抗原预先致敏。这些被抗原致敏的T细胞通常存在于宿主的外周血液中，该宿主被以1/106外周血单核细胞至1/103外周血单核细胞(PBMC)的频率暴露于结核杆菌中。此T细胞可以是CD4和/或CD8 T细胞。
在此使用的术语“肽”也包括该肽的类似物(其可以不是如该术语普通应用所规定的肽)，除非本文的上下文说明的是另外的意义。
在所述方法中，可使T细胞在体外或在体内与肽接触，并可在体外或在体内确定T细胞是否识别肽。因此，本发明提供一种实施于人体或动物体的诊断方法。本发明也提供一种或多种肽或类似物，它们选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所代表的肽及类似物，其可与识别任何所述肽的T细胞受体结合，但不单独为(a)SEQ ID NO：3或5或其类似物，也不为(b)选自SEQ ID NO：3和5和其类似物的肽和/或类似物的组合；这些肽或类似物用于诊断被表达ESAT-6的分枝杆菌感染或暴露在表达ESAT-6的分枝杆菌下的宿主，所述的方法包括确定所述T细胞群中的T细胞是否识别这(些)肽和/或这(些)类似物。
通常，通过测定T细胞在肽的存在下的状态变化或测定T细胞是否与肽结合，来确定T细胞是否识别该肽。状态变化通常由T细胞的抗原特异性的功能活性在T细胞受体结合肽之后引起。通常，当与T细胞受体结合时，肽结合至MHC II类分子上，该分子一般存在于抗原呈递细胞(APC)的表面。
T细胞状态的变化可以是T细胞开始分泌物质或分泌增加，所述物质例如有细胞因子，特别是IFN-γ、IL-2或TNF-α。特别优选测定IFN-γ的分泌。通常可通过使这些物质与特异性的结合作用物结合及随后检查该特异的结合作用物/物质的复合物的存在，来检测所述的物质。特异结合作用物一般是抗体，例如多克隆或单克隆抗体。细胞因子的抗体可从市面购得，或使用标准技术制得。
具有代表性的是，特异的结合作用物被固定在固相载体上。当使所述物质结合后，可视情况洗涤固相载体，以除去未与结合作用物特异结合的材料。可使用第二结合作用物检测所述结合作用物/物质的复合物，该第二作用物将与复合物结合。具有代表性的是，第二作用物在所述物质上的结合位点与第一作用物在所述物质上的结合位点不同。第二作用物优选是抗体，并用可检测的标记物直接或间接标记。
因此，可使用被可检测的标记物直接或间接标记的第三作用物检测第二作用物。例如，第二作用物可包含可被第三作用物检测的生物素部分，而第三作用物包含抗生物素蛋白链菌素部分和(一般情况下)以碱性磷酸酶作为可检测的标记。
在一个实施方案中，使用的检测系统是体外ELISPOT分析，其被述于WO98/23960。在此分析中，T细胞分泌的IFN-γ结合到被固定于固相载体上的第一IFN-γ特异抗体上。然后使用第二IFN-γ特异性抗体检测结合的IFN-γ，该第二抗体用可测的标记物标记。这样的标记抗体可从MABTECH(Stockholm，Sweden)获得。也可使用其他标记，这将在下面进行讨论。
可检测的T细胞状态变化可以是T细胞摄入物质的增加，例如摄入胸苷。该状态变化也可以是T细胞尺寸的增大、T细胞的增殖或T细胞的细胞表面标志的改变。
通常，在本发明方法中接触的T细胞取自宿主的血液样品，尽管也可使用含有T细胞的其他类型样品。可直接将样品加入实验中或首先经过加工再将样品加入实验中。加工一般可包括样品的稀释，例如用水或缓冲液稀释。一般将样品稀释成1.5-100倍，例如2-50倍或5-10倍。
所述加工可包括样品成分的分离。一般将单核细胞(MC)从样品中分离。MC将包括T细胞和APC。因此，在本发明方法中，在分离出的MC中存在的APC可将肽呈递到T细胞。在另一实施方案中，可只将T细胞(例如只将CD4或只将CD8)从样品中纯化。可使用本领域已知的技术从样品中分离PBMC、MC和T细胞，例如那些述于(Lalvani et al(1997)J.Exp.Med.186，p859-865)的技术。
优选实验中使用的T细胞是以未加工的或稀释的样品的形式、或新分离的T细胞(例如新分离的MC或PBMC)，其可在体外直接使用，即在本发明方法中它们在使用前无需培养。但是，可以在使用前培养T细胞，例如在一种或多种肽及(通常使用的)外源生长促进细胞因子的存在下培养。在培养过程中，肽一般存在于APC的表面，例如本发明方法中使用的APC的表面。T细胞的预培养可导致本发明方法灵敏性的增加。因此，可将T细胞转变成细胞系，例如短期细胞系(例如述于Ota et al(1990)Nature 346，p183-187中的那些)。
典型存在于本发明方法中的APC可以与T细胞来自相同或不同的宿主。所述APC可以是天然生成的APC或人工APC。APC是一种能够将肽呈递到T细胞的细胞。具有代表性的是，其为B细胞、树突细胞或巨噬细胞。具有代表性的是，它与T细胞分离自相同的样品，或与T细胞共纯化。因此，APC可以存在于MC或PBMC中。典型的APC是在体外新分离的细胞或经培养的细胞。它可以是以细胞系的形式，例如短期的或无限增殖的细胞系。APC可以在其表面表达空的MHC II类分子。
具有代表性的是，在本发明方法中，将衍生自样品的T细胞置于一个包括欲测试的所有肽(即，一个肽库)(相关的肽系列)的实验中，或者，可将T细胞分开并置于分开的实验中，每个实验包含一种或多种肽。优选在本发明方法的体外或体内形式中至少使用SEQ IDNO：1所代表的肽或其类似物。一般在本发明方法中使用SEQ IDNO：2、3、4、5和6所代表的肽中的一种、多种或全部，优选SEQ ID NO7和/或8也包括在内，并且，一个实施方案中，在本发明方法中还使用SEQ ID NO 9和/或10和/或11，这导致该实验灵敏性提高。在另一实施方案中，在本发明方法中仅使用SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、8和9。
本发明还提供肽用于同步分开使用或连续使用(如用于在体内使用)，例如提供在此描述的任何肽中的两种或多种(例如在此描述的任何组合)的同步分开使用或连续使用。
在一个实施方案中，将肽本身直接加入包含了T细胞和APC的实验中。如上所述，在这样的实验中的T细胞和APC可以是MC的形式。当使用可被T细胞识别而无需由APC呈递的肽时，APC不是必需的。这样的肽的例子有肽的类似物，其模拟结合至MHC分子上的原始肽。
在一个实施方案中，在不存在T细胞的情况下将肽提供给APC。然后，具有代表性的是，在使肽存在于APC表面之后，将APC提供给T细胞。肽可以被吸收到APC中并呈递，或被简单地吸收在表面而不进入APC中。
肽与T细胞接触的时间长短可以根据被用于测定肽识别的方法而变化。具有代表性的是，在各实验中加入105-107的PBMC，优选5×105-106。当将肽直接加入实验中时，其浓度是10-1-103μg/ml，优选0.5-50μg/ml或1-10μg/ml。
T细胞与肽一起温育的典型时间是4-24小时，优选6-16小时。当在体外使用PBMC时，发现可以将0.3×106 PBMC与10μg/ml肽在37℃一起温育12小时。
通过检测肽与T细胞的结合，可以对T细胞对肽的识别进行测定。具有代表性的是，可在此结合基础上对结合肽的T细胞进行分选，例如通过使用FACS仪器。如果使用肽被分选的细胞的出现频率高于“对照”值，则可认为存在识别该肽的T细胞。已接触了抗原的T细胞的出现频率通常是1/106-1/103，因此，无论是分选出的细胞是否是已接触了抗原的T细胞，其均可被确定。
可在体内检查以确定T细胞对肽的识别。具有代表性的是，把肽施给宿主，接着检查指示肽的识别的反应。在一个实施方案中，将肽通过皮下施给，一般采用与Mantoux化验相似的方式。该肽也可通过表皮施给。具有代表性的是，利用针施给肽，例如通过注射施给肽，但也可利用其他方法施给肽，例如弹道学(如用于运送核酸的弹道学技术)。EP-A-0693119描述可用于施给肽的代表性技术。具有代表性的是，给予0.001-1000μg的肽，例如0.01-100μg或0.1-10μg的肽。
也可施给可在体内提供肽的另一种试剂。因此，可施给能表达该肽的多核苷酸，代表性地采用上述用于施给肽的任何方法。具有代表性的是，多核苷酸具有本发明提供的多核苷酸的特性，这将在下面进行讨论。在体内自多核苷酸表达肽，并测定肽在体内的识别。具有代表性的是，施给0.001-1000μg多核苷酸，例如施给0.01-100μg或0.1-10μg多核苷酸。
具有代表性的是，通过DTH反应的出现来指示肽在体内的识别。通常通过目测肽施给部位以确定炎症的存在，例如检查硬化、红斑或水肿，来对此进行检查。
可用于本发明方法中的类似物可与T细胞受体结合，该受体识别SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所代表的等同肽。因此，当将类似物在等同所述肽的存在下、一般也有APC的存在下加入T细胞时，类似物通常抑制等同肽的识别。可利用标准技术测定类似物与所述T细胞受体的结合。例如可从显示识别所述肽的T细胞中(例如使用本发明的方法)分离T细胞受体。然后，通过确定T细胞受体是否抑制类似物结合到能与该类似物结合的物质(例如类似物的抗体)上，可证明类似物与T细胞受体的结合。在这样的结合的抑制实验中，具有代表性的是，类似物受MHC分子的限制。
具有代表性的是，类似物抑制肽结合到T细胞受体上。在此情形中，在类似物的存在下能结合T细胞受体的肽的量有所减少。这是因为类似物能结合T细胞受体，并因此与肽竞争结合到T细胞受体上。
可从患分枝杆菌感染的患者中分离用于以上结合实验中的T细胞，例如采用本发明的方法。由于整个ESAT-6不能结合识别所述肽的T细胞受体，因此它不包括在术语“类似物”中。
所述类似物的其他结合特性也与所述肽相同，因此，类似物代表性地与肽结合到相同的MHC II类分子上。SEQ ID NO：1所代表的肽的类似物代表性地结合HLA-DR1和/或HLA-DR7。类似物通常结合到对肽特异的抗体上，并因此抑制肽结合到这样的抗体上。
典型的类似物是肽。它可与SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11中的一个所代表的原始等同肽同源。与另一肽同源的肽通常与那个肽具有至少70％的同源性，优选至少80％或90％，更优选至少95％、97％或99％同源，例如，同源出现在至少15个连续氨基酸的区域，优选至少30个连续氨基酸的区域，例如至少40、60、100或更多个连续氨基酸的区域。检查蛋白同源性的方法为本领域所熟悉，并且，本领域的技术人员可以理解本文中的同源性是在氨基酸等同的基础上计算得到的(有时也称作“硬同源”)。例如，UWGCG Package提供了BESTFIT程序，其可用于计算同源性(例如在其默认的设置上使用)(Devereux et al(1984)Nucleic Acid Research 12，p387-395)。
一般，同源肽的不同源自替换、插入或缺失，例如1、2、3、4、5、6、7、8或更多的替换、插入或缺失，其可发生在序列的N端、C端或其他任何位置上。替换优选是“保守的”。这些如下表定义。在第二列的同一格和优选在第三列的同一行中的氨基酸可互相替换；
脂肪族的 非极性的 GAP
ILV
极性-不带电荷的 CSTM
NQ
极性-带电荷的 DE
KR
芳香族的 HFWY
所述类似物典型长度为8-80个氨基酸，例如10-60或12-50个氨基酸，优选15-30或20-25。具有代表性的是，对于原始肽中有助于结合MHC分子或是造成其被T细胞受体识别的氨基酸，类似物中与原始肽中处于等价位置上的氨基酸与原始肽中的那些是相同的或保守的。
所述类似物肽一般包括一种或更多的修饰，其可以是天然的转录后修饰或人工修饰。修饰可提供化学部分(具有代表性的是，通过H的取代，例如C-H键的取代)，例如氨基、乙酰基、羟基、卤素(如氟)基团或碳水化合物基团。具有代表性的是，修饰位于N端或C端。
类似物可包含一个或多个非天然氨基酸，例如其侧链与天然氨基酸不同的氨基酸。通常，非天然氨基酸将具有N末端和/或C末端。非天然氨基酸可以是L-氨基酸。
具有代表性的是，所述类似物具有的形状、尺寸、柔韧性或电子排布在实质上与原始肽的相同。具有代表性的是，它是原始肽的衍生物。
在一个实施方案中，类似物是与MHC II类分子结合的原始肽，或模拟此原始肽。类似物可以是或可以模拟原始肽，该原始肽与彼此有关或相互结合的2、3、4或更多个MHC II类分子结合。通过使用生物素/抗生物素蛋白链菌素基系统可以使这些MHC分子结合在一起，在所述系统中2、3或4个生物素标记的MHC分子与抗生物素蛋白链菌素部分结合。此类似物典型地抑制肽/MHC II类复合物与T细胞受体或对此复合物特异的抗体的结合。典型的类似物是抗体或抗体的片段，例如Fab或(Fab)2片段。
所述类似物可以固定在固相载体上，特别是模拟结合到MHC分子上的肽的类似物。
所述类似物一般由计算方法设计，然后使用本领域已知的方法合成。另外，类似物也可选自化合物文库。文库可以是组合文库或展示文库，例如噬菌体展示文库。化合物文库可以在展示文库中以与MHCII类分子结合的形式得以表达，该MHC分子例如是与原始肽结合的MHC分子。所述类似物通常选自这样的文库，该文库基于它们对原始肽结合特性的模拟能力。因此，可基于与T细胞受体或识别原始肽的抗体的结合能力进行选择。
本发明还提供用于实施此方法的试剂盒，其包括一种或多种肽或类似物、及可视情况选择用以检测T细胞对肽的识别的一种工具。具有代表性的是，提供所述的肽用于同步的、分开的或连续的使用。所述用以检测识别的工具一般允许或辅助在上述技术基础上进行检测。
因此，本发明方法可使T细胞在识别后分泌的物质得以检测。试剂盒因此可另外包括对所述物质特异的结合作用物，例如抗体。典型的作用物特异于IFN-γ。具有代表性的是，所述作用物被固定在固相载体上。在与作用物结合后，所述物质将留在分泌此物质的T细胞附近。因此，在载体上形成物质/作用物复合物的“斑点”，每个斑点代表一种分泌所述物质的T细胞。确定斑点的数量，并代表性地与对照组比较，这可使肽的识别得以测定。
试剂盒也可包括一种手段以检测物质/作用物复合物。在结合物质之后，在作用物中可发生可测的变化，例如颜色变化。另外，可以使直接或间接标记的第二作用物与物质/作用物复合物结合，以使斑点能得以检测。如上面所讨论，第二作用物可以是对所述物质特异的，但其在物质上的结合位点不同于第一作用物。
固定化的载体可以是具有孔的平板，例如微滴定板。因此，每个实验可在所述板的单独的孔中进行。
试剂盒可另外包括T细胞的培养基、检测试剂或用于该检测步骤的洗涤缓冲液。试剂盒可另外包括适合从样品中进行分离的试剂，例如适合从样品中分离PBMC或T细胞的试剂。可设计试剂盒，以直接在样品中检测T细胞，而无需对样品中的成分进行任何分离。
试剂盒可包括一种器械，其用于肽的施给，例如经皮下或表皮施给。具有代表性的是，这样的器械包括一个或更多的针。该器械可用于进行肽的弹道式运送。在试剂盒中的肽可以是药物组合物的形式。
试剂盒还可包括对照，例如阳性或阴性对照。阳性对照使检测系统能得以使用。因此，阳性对照代表性地模拟在任何上述方法中的肽的识别。在被设计用于在体外测定肽识别的试剂盒中，所述阳性对照是细胞因子。在被设计用于在体内测定肽识别的试剂盒中，阳性对照可以是抗原，大多数个体可对其产生应答。
试剂盒还可以包括一种工具，用以从宿主中取出含T细胞的样品，例如血液样品。试剂盒还可包括一种工具，用以从来自宿主的样品中分离单核细胞或T细胞。
本发明还提供具有SEQ ID NO：1、2、4、6、7、8、9、10或11序列的肽或其类似物。本发明提供一种诊断产品或肽的系列，该系列包括一种或多种肽，这些肽通常为上文所讨论的肽组合。代表性的产品是组合物，例如药物组合物。
本发明还提供多核苷酸，其能表达具有SEQ ID NO：1、2、4、6、7、8、9、10或11序列的肽或其类似物。代表性的多核苷酸是DNA或RNA，并为单链或双链。因此，多核苷酸包含SEQ ID NO：1、2、4、6、7、8、9、10或11序列的编码序列。本发明的多核苷酸在此编码序列的5’和3’具有的序列或密码子不同于在ESAT-6基因中的这些序列的5’和3’的序列或密码子。因此，本发明的多核苷酸不包括编码整个ESAT-6或ESAT-6片段的序列，而是含SEQ ID NO：1、2、4、6、7、8、9、10或11所代表的片段的编码序列。
在所述肽编码序列的5’和/或3’，本发明的多核苷酸具有编码或非编码序列。编码序列的5’和/或3’的序列可以包含这样的序列，其帮助肽编码序列的表达，例如转录和/或翻译。多核苷酸可在原核或真核细胞中表达肽。在一个实施方案中，多核苷酸能在哺乳动物细胞中表达肽，例如在人、灵长类动物或啮齿动物的细胞中表达肽。
可以将多核苷酸导入可复制的载体中。这样的载体可在合适的细胞中复制。载体可以是表达载体。在此载体中，本发明的多核苷酸可被操作地连接到调控序列上，该序列能使多核苷酸进行表达。所述载体可含有可选择标志，例如氨苄青霉素抗性基因。
本发明的多核苷酸、肽、抗体(见下)或在本发明方法中(例如在对由T细胞分泌的物质进行检测中)使用的作用物可以带有可检测的标记。优选可检测的标记使分泌的物质能通过目测进行检测，并视情况可辅以光学放大手段来进行该检测。这样的系统一般是基于酶标记，该标记可引起底物中的颜色变化，例如在底物中引起颜色变化的碱性磷酸酶。可购买到这样的底物，例如购自BioRad。其他合适的标记包括其他酶，例如过氧化物酶；或蛋白标记，例如生物素；或放射性同位素，例如32P或35S。可使用已知技术检测以上标记。
本发明的多核苷酸、肽或抗体(见下)可以是基本上纯化形式的。它们可以是基本上得到分离的，在这种情形下，它们在制备物中通常包含(例如大约或至少)多核苷酸、肽或抗体的90％，例如包含(例如大约或至少)多核苷酸、肽或抗体的95％、97％或99％。基本上得到分离的肽(其不是“肽”这个词正常意义所定义的肽)在制备物中通常包含(例如大约或至少)制备物干质量的90％，例如包含(例如大约或至少)制备物干质量的95％、97％或99％。所述多核苷酸或肽一般基本上不含其他细胞成分或基本上不含其他分枝杆菌细胞成分。多核苷酸或肽可以这样的基本上得到分离、纯化或不含其他细胞成分的形式用于本发明方法中，或以这样的形式存在于试剂盒中。
提供肽或多个肽的组合(例如，如此处所描述)用于在人或动物体上实施的诊断方法。提供肽的组合用于在这样的方法中同步、分开使用或连续使用。
所述肽或多核苷酸的存在形式可以是药物组合物，其包括肽或多核苷酸、及可药用载体或稀释剂。合适的载体和稀释剂包括等渗盐溶液，例如磷酸盐缓冲溶液。一般将组合物配制成用于皮下或表皮给药、或通过弹道学技术使用。因此，所述肽或多核苷酸可与载体粒子结合，以用于弹道式运送。
可使用标准合成化学技术制备本发明的肽，例如使用自动合成仪。
具有代表性的是，由较长的多肽(例如融合蛋白)制备所述肽，此多肽代表性地包含所述肽。所述肽可由多肽衍生，例如(例如使用蛋白酶)通过水解多肽产生；或通过物理裂解多肽产生。典型的多肽是ESAT-6，其可经重组表达。
也可以包括多核苷酸的表达，例如本发明的多核苷酸的表达的方法来制备所述的肽。表达出的多肽可以被进一步加工，以产生本发明的肽。因此，肽的制备过程包括如上述培养用表达载体转化或转染的细胞，培养的条件可以使肽或多肽得以表达，所述肽可从所述多肽制备而得。可以使用标准技术制备本发明的多核苷酸，例如使用合成仪。
本发明还提供本发明的肽或类似物的应用，用以产生对所述肽特异的抗体。此抗体或在此描述的任何抗体可通过对宿主动物进行免疫使之产生抗体来制备。这样的抗体将对该肽具有特异性，或对上述结合抗体的物质具有特异性。该肽或物质在下面被称作“免疫原”。产生单克隆或多克隆抗体的方法是公知的。产生多克隆抗体的方法包括，用免疫原免疫合适的宿主动物(例如实验动物)和从血清分离免疫球蛋白。因此，可对动物用免疫原接种，随后从动物中取出血液并纯化IgG部分。产生单克隆抗体的方法包括无限增殖产生目的抗体的细胞。通过将来自被接种实验动物的脾细胞与肿瘤细胞融合，来产生杂交瘤细胞(Kohler and Milstein(1975)Nature 256，495-497)。
可利用常规途径选择无限增殖的产生目的抗体的细胞。可培养杂交瘤使其生长，或将其腹膜内注射以形成腹水，或注射进同种异体宿主或无免疫应答的宿主的血流中。通过在体外进行人淋巴细胞的免疫接种及随后用EB病毒转化淋巴细胞，可以制备人抗体。
适用于产生单克隆和多克隆抗体的实验动物是山羊、兔、大鼠或小鼠。如果需要，可以使用偶联物形式的免疫原，在其中免疫原被偶联到合适的载体上，例如免疫原通过一个氨基酸侧链与载体相连。典型的载体分子是生理可接受的载体。得到的抗体可以经过分离，如果需要，也可经过纯化。
本发明用以下实施例进行说明：
实施例1研究的对象
患者和对照者是在从1997年10月起的16个月中在NorthwickPark、伦敦的St Mark’s NHS Trust和牛津的Oxford Radcliffe NHS Trust的医院中招募的。肝素处理的单一血液样品是从各受测者抽取的。
将其一个或多个临床样品的结核分枝杆菌培养物以细菌学方法证实的阳性且临床检查与X射线检查的结果相符的患者作为结核病例。29/47的患者(62％)或未经静脉切开放血术的治疗、或接受的治疗少于一个月；剩下的患者的治疗时程较长。
对照患者按种族、年龄(在4年内)和性别接受分类比较，并包括患有传染病、发炎、肉芽肿、自身免疫病和肿瘤的大范围病症的个体们(表4)。其包括在临床上很难与结核区分的疾病，及可作为不明原因的发热的其他病症，这与结核类似。排除那些具有结核病史的患者和据称近期与已知的结核病例接触过的患者。结核和对照患者中无一人具有任何能暗示感染HIV的临床特征。
实施例2ELISPOT实验的结果
ELISPOT实验被用于在体外检测已接触过抗原的对ESAT-6特异的CD4 T细胞。横跨ESAT-6分子长度的17个肽使用固相甲酰基化学来合成(Research Genetics，Alabama，USA and Zinsser AnalyticalFrankfurt，Germany)。每个肽都为15个氨基酸的长度，并与与邻近的肽有10个残基重叠。用质谱确认肽，并用高效液相色谱证实其纯度。8个肽是经常被识别的抗原决定簇；每个对17个由ESAT-6衍生的肽中的任何一个产生应答的受测者，也对SEQ ID NO：1-8所代表的8肽系列中的至少一个产生应答。SwissProt的序列同源性研究和经过翻译的所有已知蛋白序列的Gen-BanK数据库证实，这些肽的序列被独特地限制至结核分枝杆菌复合物的ESAT-6蛋白。对所述系列中的一个或多个肽的应答被分别测试并评分，以表示结核分枝杆菌感染。
还发现患者对SEQ ID NO：9-11所代表的肽产生应答。对单一细胞IFN-γ释放进行的体外ELISPOT实验：计数来自外周血液的对ESAT-6肽特异的T细胞的循环
基于夹心捕捉ELISA的原理，ELISPOT实验捕捉并测定IFN-γ分子，这些分子紧邻分泌它们的T细胞，并仍以相对较高的浓度存在。在显像后，每个产生的斑点代表各个抗原特异性的IFN-γ分泌T细胞或斑点形成细胞(SFC)的“足迹”。IFN-γ的体外ELISPOT实验有足够的灵敏性去直接从外周血液中检测对抗原特异的T细胞，而无需预先的体外刺激步骤(Lalvani et al(1997)J.Exp.Med.186 p859-865)。而且，由于体外ELISPOT实验计数的是具有快速效应器功能的对抗原特异的T细胞，所以只需要进行较短的温育。
使用Lalvani等人所述的标准方法(见上)将外周血单核细胞(PBMC)从12ml血中分离，并使之悬浮在补加有2mM L-谷氨酰胺、100iu/ml青霉素、10％热灭活的胎牛血清(Sigma，St.Louis，MO，USA)(R10)的RPMI中。
96孔以聚乙二烯二氟化物(PVDF)为衬底的板(Millipore)用15μg/ml的抗IFN-γmAB 1-D1K(MABTECH，Stockholm)预包被，用RPMI培养基1640对其洗涤，并用R10在室温封闭1小时。
将3×103 PBMC以100μl R10/孔加到预包被的板上，并分别将肽加入每个孔中，直到终浓度为10μg/ml。将PPD(Batch RT49，StaatensSeruminstitut，Copenhagen，Denmark)以20μg/ml加入。将5μg/ml植物血球凝集素(ICN Biomedicals，Aurora，OH，USA)加入阳性对照孔，并不将任何肽加入阴性对照孔中。另外，加入10μg/ml整个重组ESAT-6，用于17个结核患者和所有对照。
实验在37℃、5％CO2下温育6-12小时，并通过用含0.05％吐温-20(Sigma，St.Louis，MO，USA)的PBS洗涤6次来停止。接着，加入100μl的1μg/ml生物素化的抗IFN-γmAB 7-B6-生物素(Mabtech，Stockholm，Sweden)。在室温温育2小时后，将板洗涤6次，并在每孔中加入稀释1000倍的抗生物素蛋白链菌素-碱性磷酸酶偶联物(Mabtech，Stockholm，Sweden)，将板进一步温育1小时。接着，再次洗板6次，加入100μl用去离子水稀释25倍的生色的碱性磷酸酶底物(Biorad，Hercules，CA，USA)。30分钟后，通过用自来水洗涤来终止比色反应，并干燥板。
只有当受测孔比阴性对照孔多含有至少5个IFN-γSFC且此数字至少是阴性对照孔的二倍时，应答被评为阳性。此截止点(5个IFN-γSFC/3×105 PBMC)即为17个对肽特异的T细胞/106 PBMC或1/59000 PBMC的检测低限。尽管实验人员能看到患者的结核状况，但是，由于SFC的读出是定量的、我们判断阳性应答的标准是严格的且阴性对照孔中的背景SFC数通常低于3，因此阳性应答是客观且明确的。在所有情况下，在用放大镜进行精确计数之前，通过对板的直接观察可立刻识别阳性应答和阴性应答。
计算用于活动性结核诊断的ESAT-6肽基化验的准确性，并将其表达为灵敏性、特异性(置信区间由标准二项式算出)和可能性比率。接着，将后者用于代表性的临床方案，其中结核被认为是可诊断的，预测的可能性为20％。
也可将肽库用在上面的实验中，发现肽库在应答的测定中与相同的分别在分开实验中测试的肽一样有效。
实施例3患者及对照的人口统计学特征和临床特征
结核患者显示了在英国结核的广泛种族混合特性，且此疾病在印度次大陆(ISC)人和黑人中高度普遍(表2)。对照患者密切地与种族来源、年龄和性别比率相配合(表2)，对他们的诊断列于表4。所测结核患者代表了由结核分枝杆菌引起的疾病的各类临床症状，且22/47患有肺外结核(表3)。在患有肺结核的患者中，6/25痰液涂片对酸性fact杆菌呈阴性。因此，由痰液的显微镜观察立刻进行的假定诊断在28/47(60％)患者中是不可能的。通过测定血液中的对ESAT-6特异的T细胞，迅速诊断结核分枝杆菌感染
在对IFN-γ的体外ELISPOT实验中，45/47(96％)结核患者对表1所示的8肽系列中的一个或多个产生应答(表5)。非常高比例的患者对ES1产生应答。本发明人发现，此肽与HLA DR1和DR7结合。
对ESAT-6肽特异的IFN-γ分泌T细胞的出现频率通常很高，平均为200个对ESAT-6肽特异的T细胞/106 PBMC(四分位数的间距为105-596)。对表1的8个肽中的每一个特异的IFN-γSFC主要是CD4T细胞，这是因为已在体外产生了针对这些肽中的每一个的T细胞系，并且CD4细胞的特异免疫磁性消耗废除了对肽特异的应答。也可用系列中含有CD8抗原决定簇的肽(例如ES14)测定对ESAT-6肽特异的CD8 T细胞。
仅有4/47(8.5％)患除结核外的其他疾病的对照者对ESAT-6衍生的8个肽的系列中的一个或多个产生应答；在这4个应答者中，对肽特异的IFN-γ分泌T细胞的出现频率类似于从结核患者观察到的结果。在所有剩下的对照者中，对所有肽的应答完全没有。使用横跨ESAT-6全部长度的17个肽的扩展组的结果，与用8个宽免疫原性的抗原决定簇系列观察到的结果相同。
2个未应答者是患晚期疾病的肺结核患者，二者均在治疗前进行测试。在讨论中回顾了他们的临床细节。在产生应答的4个对照者中，2个患有急性肺炎，1个患有急性支气管炎，4个患有蜂窝组织炎。在测试IFN-γ的ELISPOT实验中，所有4个患者还对PPD产生强的体外应答，这指示出他们被结核菌素致敏。比较对ESAT-6肽特异的T细胞反应与对PPD的反应
利用皮下接种1 TU的PPD(NHS供应)，使26个结核患者接受结核菌素皮试。用尺测定在72小时时的皮肤硬化。如常规，把直径为5mm或更长的硬化作为阳性。在这些患者中，只有18名(69％)产生阳性的TST结果。作为比较，24/26(92％)在对测试IFN-γ的体外ELISPOT实验中呈阳性，其超过三分之一，总共45/47(96％)在体外ELISPOT实验中产生阳性应答(p＝0.002，Fisher氏确切实验)。尽管对照患者未接受结核菌素皮试，但仍有26/47(55％)在对测试IFN-γ的体外ELISPOT实验中对PPD产生阳性应答，这指示了以前他们的CD4 T细胞在体内被PPD中的抗原致敏过。用于测试IFN-γ的基于ESAT-6肽的ELISPOT实验的临床应用
在本研究中，此实验的操作特性示于表5。这些可能比率从实验前的概率到实验后的概率产生很大的变化。例如，如果用于结核被认为有20％的实验前诊断可能性的假定的患者时，则阳性化验结果将给出74％的阳性预言值，而阴性化验结果将给出1％的阴性预言值。讨论
我们开发出了一种高度准确的血液化验，用于快速测定结核分枝杆菌的感染。此体外实验的成功是基于对抗原特异的T细胞的灵敏测定，其中使用高免疫原性的对结核分枝杆菌高度特异的抗原。当作为诊断实验而被用于经细菌学证实的活动性结核时，在患者群体研究中，此实验产生96％的灵敏性和91.5％的特异性(表5)。结核患者代表一个宽的种族混合，其反映了结核在英国内的流行病学，并且，在种族上匹配的对照患者中，存在一些常见的疾病，其难以与结核相区分。因此，此实验的操作特性(表5)有可能用于英国的一般临床实践。本发明的化验需要单一的静脉血液样品，化验简单、快速、不需要专业实验室设施并在第二天得到结果；因此，它有可能非常适合日常医院实验室并可以自动化。
针对AFB的TST和痰液的显微镜检查是唯一普遍使用的用于即刻假定诊断结核的化验。在用此方法测试的26名结核患者中的TST灵敏性只有69％，大大低于基于ESAT-6的体外ELISPOT实验的96％灵敏性(p＝0.002)。如果给定多重主要限制或TST，体外ELISPOT实验表现为快速检测结核分枝杆菌感染的优良方法。在我们的一系列患者中，痰液的显微镜检查只测出病例的40％，与之相比，体外ELISPOT实验测出病例的96％，其还测出痰液涂片对肺结核呈阴性的全部6个病例。而且，痰液的显微镜检查不能区分结核分枝杆菌和非、典型的分枝杆菌。由于ESAT-6基因局限于结核分枝杆菌复合物、堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌和肖尔介分枝杆菌(其中只有堪萨斯分枝杆菌可引起在临床上类似结核的疾病)，我们的基于ESAT-6的化验可以被证明比痰液的显微镜检查更为特异。
在过去发展了多种以诊断结核为目标的血液化验，但无一被证明具有充足的灵敏性、特异性和便利性，以进入常规应用。血清学实验缺少与ESAT-6一样具有种属特异性的目标抗原，并且这些实验的灵敏性通常很令人失望，尤其是在结核的急性形式(肺结核、粟粒结核和胸膜结核)中。在PBMC中循环结核分枝杆菌复合物DNA的PCR被研究作为诊断结核的方法。对于肺结核，灵敏性对于不同的调查者在33％-95％的范围内变化；在最大的系列中，该系列为76名经细菌学证实为HIV阴性的患者，灵敏性为41％-27％。对于肺外结核，血液基PCR只具有4-27％的灵敏性。
在体外ELISPOT实验中，2/47结核患者不发生应答。二者均为患有晚期疾病的肺结核患者，并在诊断之前有严重的症状长达数月，且二者均为恶病质的。其中之一为20岁亚洲男性，其患胸膜部位的大范围的痰液涂片阳性腔肠虫疾病，并在TST上无反应性；另一个为22岁非洲女性，其痰液涂片阴性，经X射线照相为支气管肺炎，并在TST上呈阳性。有趣的是，虽然两名患者均有淋巴细胞的减少，但是二者均为HIV阴性并很好地对治疗产生响应。慢性晚期的结核引起非特异的免疫抑制，其可清楚地解释在这些患者中可测的对ESAT-6特异的IFN-γ分泌T细胞的缺乏。但是，对于所有四名患粟粒状疾病的患者，虽然其常常伴随有皮肤的无反应，其仍然在体外ELISPOT实验中产生应答。目前仍不清楚为何这两名患者不能应答，以及他们为何是真假阴性。
虽然33/47(70％)患有除结核以外的疾病的对照患者经BCG接种(如疤痕的存在所示)，但是只有4/47在体外ELISPOT实验中应答，且其中的3名未经BCG接种。因此，此实验是成功区别经BCG接种的患者和被结核分枝杆菌感染的患者的第一步。4名应答的对照患者中无人具有暗示结核的临床特征或X射线照相特征；2名患有急性肺炎，1名患有急性支气管炎，1名患有蜂窝组织炎；所有的四人均对首要的抗生素产生响应。在用于测试IFN-γ的ELISPOT实验中，所有4名患者还在体外对PPD产生应答，这指示了他们被结核菌素致敏。重要的是，所有4名患者都来自结核高度流行的国家；三个是从肯尼亚到英国的亚洲移民(且全部定期返回肯尼亚)，第4个为来自埃塞俄比亚的游客。因此，4人全部带有接触结核分枝杆菌的重要危险因素。作为对比，22名生于英国的对照患者中无一人产生阳性反应。看起来，4名应答者确实感染过结核分枝杆菌，但无疑未患有活动性疾病。因此，虽然当此实验被用作活动性结核的诊断化验时这些应答者是假阳性，但是，我们相信在生物学术语中他们是真阳性，因为所做的化验正确地检测到了结核分枝杆菌的感染。不幸的是，不能正式证实此结论，因为没有权威性的方法用于证实在无症状的被暴露的接触者中的亚临床的结核分枝杆菌感染。与ESAT-6肽对比，体外ELISPOT对PPD的响应在对照组中是常见的(26/47)，这指示了之前他们的CD4 T细胞在体内被PPD中的抗原致敏，其可能是BCG接种或接触在环境中的分枝杆菌中的结果。
将需要进一步的研究以回答基于ESAT-6的体外ELISPOT在其他的环境中是否保持其高灵敏性和特异性。在结核流行的国家中，大比例的健康个体潜在地受到结核分枝杆菌的感染，在这样的国家中，基于对结核分枝杆菌敏化的细胞免疫系统进行检测的实验的特异性可能低于本研究。但是，体外ELISPOT的高灵敏性意味着它仍可被用于结核的诊断。此实验还需要在儿童中确证，在儿童中的结核常常是初级感染并急性发作；对ESAT-6特异的细胞免疫应答在动物中的研究指示，ESAT-6可在初级感染的早期被特别强地识别，这暗示我们在儿童中的实验应被证明与在成人中的实验一样具有有效性。最后，需要在对受HIV感染的结核患者的单独研究中评价体外ELISPOT。
实施例4在健康接触者中检测CD4 T细胞的应答
将由SEQ ID NO：1-8所示肽组成的系列用于在26名健康的家庭接触者中检测应答，该健康接触者与患有痰液涂片阳性肺结核的标志病例接触。在22名接触者中测到应答，这指示所述系列有足够的灵敏性用以检测无症状的结核分枝杆菌感染。
还测试了26名健康志愿者(其中22名经BCG接种)，无人对任何肽产生应答。因此，所述系列可成功用于区分无症状的被感染的接触者和健康的接受BCG接种者。
实施例5使用另一系列在健康接触者中检测CD4 T细胞的应答
利用ELISPOT实验，将另一肽系列用于测定在健康接触者中的应答，该肽系列与上述实施例中使用的肽系列不同。其由SEQ IDNO：1-6、8和9所示肽组成。
所有接触者长时期与一个患有涂片阳性的开放性肺结核的标志病例接触，且他们的Heaf化验阳性等级为3或4。一个接触者与标志患者在工厂的同一屋子中(且在同一班次)工作。一个接触者与所述标志患者处于同一医院病房中若干天。所有其他接触者均来自与标志相同的家庭。
在22名接触者中有20名用所述肽系列测试呈阳性，有15名用ES1测试呈阳性。
实施例6与使用整个ESAT-6相比，肽系列的灵敏性
发现一些患有结核的患者仅产生对ESAT-6特异的CD8 T细胞应答，而没有针对此抗原的CD4 T细胞应答。由于在诊断化验中，整个ESAT-6将只从CD4 T细胞引发应答，而不从CD8 T细胞引发应答，因此不能使用基于整个ESAT-6的诊断化验来检测这些患者(仅对CD8T细胞产生应答)。然而，肽既能从CD4又能从CD8引发应答，因此可使用本发明的肽检测这些患者。因此，这样的肽的使用导致诊断化验具有较高的灵敏性。表1
肽 单一肽引起的TB患者的百分数
ES1  57
ES2  40
ES4  23
ES7  15
ES11  34
ES12  25
ES14  28
ES15  34
表2：结核患者和患除TB以外的疾病的对照者的人口统计特性结核患者           患除TB以外的疾病(％)               的对照者(％)种族划分：    ISC*     24(51)     24(48)
            黑人      14(30)     14(28)
            白人      8(17)      9(19)
           东方人     1(2)       0(0)
总数：                 47          47性别(男/女)：             30/17       27/20年龄：平均(范围)        35(18-74)    39(17-75)ISC*＝印度次大陆表3：结核患者的临床特征(证实所有结核分枝杆菌培养都呈阳性)患者数(％)肺结核(PTB)                            25痰液涂片阴性                           6(13)痰液涂片阳性                           19(40)阳性TST/受测PTB患者总数                9/14肺外结核(EPTB)                         22淋巴腺炎                               6(13)肌骨骼结核                             6(13)粟粒性结核                             3(6)胃肠结核                               3(6)胸膜结核                               3(6)脑膜结核和粟粒性结核                   1(2)阳性TST/受测EPTB患者总数               9/12全部阳性TST/所有受测PTB和EPTB患者总数  18/26(69％)
       表4：诊断患除TB以外的疾病的对照者诊断                        患者数肺炎                        6类肉瘤病                    3传染性心内膜炎              3淋巴瘤                      2肺癌                        2慢性骨髓炎                  2溃疡性结肠炎                2节段性回肠炎                2传染性小肠结肠炎            2疟疾(P.falciparum，P.vivax) 2慢性肝病                    2蜂窝组织炎                  2血红蛋白病(SS，HbH)         2肺部的A.lumbridoides感染    1急性胰腺炎                  1登革热                      1囊血吸虫病                  1全身性红斑狼疮              1急性支气管炎                1脑膜炎球菌血症              1扁桃腺炎                    1Sickle cell crisis          1胃溃疡                      1疱疹样皮炎                  1血栓静脉炎                  1肾病综合症                  1充血性心力衰竭              1表5：使用ESAT-6肽的体外ELISPOT的突出的临床有效性，用于其
在本研究中的操作特性的基础上诊断活动性结核响应率TB患者                              45/47患除TB以外的疾病的对照者            4/47灵敏性(95％Cl*)                    96％(92％-100％)特异性(95％Cl*)                    91.5％(86％-97％)可能性比率(LR)阳性LR                              11.25阴性LR                              0.05
C1*＝置信区间

Claims (22)

1.一种对被表达ESAT-6的分枝杆菌感染或暴露在表达ESAT-6的分枝杆菌下的宿主的诊断方法，包括(i)使来自宿主的T细胞群和一种或多种肽或类似物接触，这些肽或类似物选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所代表的肽及其类似物，它们可与识别任何所述肽的T细胞受体结合，但所述肽或类似物不单独为(a)SEQID NO：3或5或其类似物，也不为(b)选自SEQ ID NO：3和5和其类似物的肽和/或类似物的组合；(ii)在体外确定所述T细胞群中的T细胞是否识别这(些)肽和/或这(些)类似物。
2.一种或多种肽或类似物用于制备诊断手段的应用，这些肽或类似物选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所代表的肽及其类似物，它们可与识别任何所述肽的T细胞受体结合，但所述肽或类似物不单独为(a)SEQ ID NO：3或5或其类似物，也不为(b)选自SEQ ID NO：3和5和其类似物的肽和/或类似物的组合；所述诊断手段用在对被表达ESAT-6的分枝杆菌感染或暴露在表达ESAT-6的分枝杆菌下的宿主的诊断中，所述方法包括确定宿主的T细胞是否识别这(些)肽和/或这(些)类似物。
3.权利要求1或2的方法或应用，其中至少使用SEQ ID NO：1所代表的肽及其类似物。
4.权利要求1或2的方法或应用，其中至少将SEQ ID NO：1、2、3、4、5和6所代表的肽与T细胞接触，或用其类似物代替任何这些肽与T细胞接触。
5.前面权利要求中任一项所述的方法或应用，其中至少使用SEQID NO：7和/或8所代表的肽或其类似物。
6.前面权利要求中任一项所述的方法或应用，其中至少使用SEQID NO：9和/或10和/或11所代表的肽或其类似物。
7.前面权利要求中任一项所述的方法或应用，其中通过检测所述T细胞分泌的细胞因子来确定T细胞对肽的识别。
8.权利要求7的方法或应用，其中细胞因子是IFN-γ。
9.权利要求7或8的方法或应用，其中，通过使细胞因子结合到固定化的对该细胞因子特异的抗体上及随后检测该抗体/细胞因子复合物的存在，来检测细胞因子。
10.前面权利要求中任一项所述的方法或应用，其中T细胞是在体外新分离的细胞。
11.权利要求1-9中任一项所述的方法或应用，其中将T细胞在体外与肽一起预培养。
12.前面权利要求中任一项所述的方法或应用，其中所述分枝杆菌是结核分枝杆菌或牛型结核分枝杆菌。
13.用于实施前面权利要求中任一项所述的方法或应用的试剂盒，其包括如权利要求1所定义的一种或多种肽或类似物、及可视情况选择用以检测T细胞对所述肽的识别的一种工具。
14.权利要求13的试剂盒，其至少具有SEQ ID NO：1所代表的肽或其类似物。
15.权利要求13或14的试剂盒，其中所述检测识别的工具包含IFN-γ的抗体。
16.权利要求15的试剂盒，其中所述抗体被固定在固相载体上并且是视情况选择的检测抗体/IFN-γ复合物的工具。
17.具有SEQ ID NO：1、2、4、6、7、8、9、10或11序列的肽或其类似物。
18.诊断产品或肽系列，其包括一种或多种肽或类似物，这些肽或类似物选自SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11所代表的肽及其类似物，它们可与识别任何所述肽的T细胞受体结合，但所述肽或其类似物不单独为(a)SEQ ID NO：3或5或其类似物，也不为(b)选自SEQ ID NO：3和5的肽和其类似物的组合。
19.多核苷酸，其能表达如权利要求1、3、4、5、6或17中定义的一种或多种肽或类似物，以用于对被表达ESAT-6的分枝杆菌感染或暴露在表达ESAT-6的分枝杆菌下的宿主进行体内诊断。
20.多核苷酸，其能够表达以提供权利要求17中定义的肽或类似物。
21.药物组合物，其包含如权利要求17-19中任一项定义的肽、产品或肽系列、或多核苷酸；和可药用载体或稀释剂。
22.在权利要求17中定义的肽或类似物的应用，用以产生对该肽特异的抗体。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1305900C (zh) * 2004-03-16 2007-03-21 中国药品生物制品检定所 Esat－6蛋白在诊断结核病中的用途
CN101985473A (zh) * 2010-10-12 2011-03-16 浙江大学 抗结核杆菌esat-6单克隆抗体tbef3及应用
CN101987872A (zh) * 2010-10-12 2011-03-23 浙江大学 抗结核杆菌esat-6单克隆抗体tbea8及应用
CN102297968A (zh) * 2010-06-28 2011-12-28 程小星 辅助诊断结核病的试剂盒
CN102305855A (zh) * 2011-05-19 2012-01-04 中山大学 体外检测结核分枝杆菌感染的试剂和方法
CN101294964B (zh) * 2007-11-27 2012-06-27 复旦大学附属华山医院 一种检测活动性结核病和结核潜伏感染的试剂和方法

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9624456D0 (en) * 1996-11-25 1997-01-15 Isis Innovation Assay method
EP1144447B1 (en) * 1998-11-04 2009-10-14 Isis Innovation Limited Tuberculosis diagnostic test
JP3840596B2 (ja) 2001-01-08 2006-11-01 アイシス・イノベーション・リミテッド ミコバクテリア感染のための治療の効力を決定するためのアッセイ法
GB0215710D0 (en) * 2002-07-05 2002-08-14 Isis Innovation Diagnostic method
WO2005080987A1 (en) * 2004-02-19 2005-09-01 Department Of Biotechnology A diagnostic kit for detecting pulmonary and extra pulmonary
ITRM20040091A1 (it) 2004-02-19 2004-05-19 Istituto Naz Per Le Malattie Test immunologico rapido per la diagnosi ed il monitoraggio dell'infezione tubercolare.
GB0406271D0 (en) * 2004-03-19 2004-04-21 Isis Innovation Diagnostic test
FR2872579B1 (fr) * 2004-06-30 2006-11-24 Pasteur Institut Detection de la tuberculose et de l'infection par mycobacterium tuberculosis a l'aide de hbha
CA2616766A1 (en) * 2005-07-26 2007-02-01 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Antibody profiles characteristic of tuberculosis state
ITRM20100411A1 (it) * 2010-07-23 2012-01-24 Massimo Amicosante Uso di sequenze amminoacidiche da mycobacterium tuberculosis o dei loro corrispondenti acidi nucleici per la diagnosi e la prevenzione di infezione tubercolare, relativo kit diagnostico e vaccino.
IT1403092B1 (it) 2010-12-01 2013-10-04 Univ Degli Studi Modena E Reggio Emilia Metodo per la diagnosi e/o il monitoraggio della mucormicosi.
MX347154B (es) 2012-02-24 2017-02-21 Centro De Investigación Científica Y De Educación Superior De Ensenada Baja California (Cicese) Prueba de diagnóstico para enfermedades infecciosas en ganado bovino.
RU2571713C2 (ru) * 2014-05-12 2015-12-20 Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение "Новосибирский научно-исследовательский институт туберкулеза" Минздрава России (ФГБУ "ННИИТ" Минздрава России) Способ диагностики латентного туберкулеза внелегочных локализаций
CN105954521B (zh) * 2016-07-08 2017-04-12 广州华弘生物科技有限公司 一种结核分枝杆菌感染诊断试剂盒
US10245320B2 (en) 2016-09-30 2019-04-02 Enzo Biochem, Inc. Immunomodulatory pharmaceutical compositions and methods of use thereof
WO2018111536A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Becton, Dickinson And Company Methods and compositions for obtaining a tuberculosis assessment in a subject
US20200191771A1 (en) * 2017-05-05 2020-06-18 bioMérieux Method for detecting an immune cellular response
EP3399312A1 (fr) * 2017-05-05 2018-11-07 Biomérieux Procédé de détection d'une réponse cellulaire immune
WO2019018607A1 (en) 2017-07-20 2019-01-24 Enzo Biochem, Inc. IMMUNOMODULATORY COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
BR112023006262A2 (pt) 2020-10-06 2023-05-09 Cepheid Métodos de diagnóstico de tuberculose e de diferenciação entre tuberculose ativa e latente

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5955077A (en) * 1993-07-02 1999-09-21 Statens Seruminstitut Tuberculosis vaccine
US6641814B1 (en) * 1997-04-02 2003-11-04 Statens Serum Institut Nucleic acids fragments and polypeptide fragments derived from M. tuberculosis
DK79893D0 (da) * 1993-07-02 1993-07-02 Statens Seruminstitut New vaccine
US6991797B2 (en) * 1993-07-02 2006-01-31 Statens Serum Institut M. tuberculosis antigens
US5736524A (en) * 1994-11-14 1998-04-07 Merck & Co.,. Inc. Polynucleotide tuberculosis vaccine
US5775870A (en) * 1995-08-03 1998-07-07 Hogan; Sherman David Vehicle side tilting apparatus
US6592877B1 (en) * 1995-09-01 2003-07-15 Corixa Corporation Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
US6290969B1 (en) 1995-09-01 2001-09-18 Corixa Corporation Compounds and methods for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
EP0851927B1 (en) * 1995-09-01 2003-10-22 Corixa Corporation Compounds for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis
US6338852B1 (en) * 1995-09-01 2002-01-15 Corixa Corporation Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis
US6458366B1 (en) * 1995-09-01 2002-10-01 Corixa Corporation Compounds and methods for diagnosis of tuberculosis
US6087163A (en) * 1997-02-06 2000-07-11 The Public Health Research Institute Of The City Of New York, Inc. Mycobacterium tuberculosis specific proteins and genes, mixtures of anitgens and uses thereof
GB9624456D0 (en) * 1996-11-25 1997-01-15 Isis Innovation Assay method
US6245331B1 (en) * 1997-01-02 2001-06-12 New York Univ. Medical Center Early detection of mycobacterial disease
US6350456B1 (en) * 1997-03-13 2002-02-26 Corixa Corporation Compositions and methods for the prevention and treatment of M. tuberculosis infection
US6982085B2 (en) * 1997-04-02 2006-01-03 Statens Serum Institut TB diagnostic based on antigens from M. tuberculosis
US7037510B2 (en) * 1997-04-18 2006-05-02 Statens Serum Institut Hybrids of M. tuberculosis antigens
US6613881B1 (en) * 1997-05-20 2003-09-02 Corixa Corporation Compounds for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis and methods of their use
US7087713B2 (en) * 2000-02-25 2006-08-08 Corixa Corporation Compounds and methods for diagnosis and immunotherapy of tuberculosis
EP0902086A1 (en) * 1997-08-22 1999-03-17 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Tuberculosis vaccine
AU749672B2 (en) * 1998-03-06 2002-07-04 Statens Serum Institut Production of mycobacterial polypeptides by lactic acid bacteria
BR9909472A (pt) * 1998-04-07 2001-09-11 Corixa Corp Polipeptìdeo purificado, processo para prevenir tuberculose, e, composição farmacêutica
US20030044431A1 (en) * 1998-06-19 2003-03-06 Gerhardt Schurig Over-expressing homologous antigen vaccine and a method of making the same
EP1144447B1 (en) * 1998-11-04 2009-10-14 Isis Innovation Limited Tuberculosis diagnostic test
US20020131976A1 (en) * 1998-12-23 2002-09-19 Ajit Lalvani Tuberculosis vaccine
US6649170B1 (en) * 1999-05-12 2003-11-18 Statens Serum Institut Adjuvant combinations for immunization composition and vaccines
EP1200466A2 (en) * 1999-07-13 2002-05-02 Statens Serum Institut Tuberculosis vaccine and diagnostics based on the mycobacterium tuberculosisesat-6 gene family
US6537552B1 (en) * 1999-10-19 2003-03-25 Iowa State University Research Foundation Vaccine adjuvant
US6776993B2 (en) * 2000-02-22 2004-08-17 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Tuberculosis vaccine
ES2258103T3 (es) 2000-08-11 2006-08-16 Koninklijke Philips Electronics N.V. Metodo y disposicion para sincronizar un modulador sigmadelta.
JP3840596B2 (ja) * 2001-01-08 2006-11-01 アイシス・イノベーション・リミテッド ミコバクテリア感染のための治療の効力を決定するためのアッセイ法
CA2451026C (en) * 2001-06-22 2013-12-10 Health Protection Agency Mycobacterial antigens expressed under low oxygen tension
FR2828934B1 (fr) * 2001-08-27 2004-08-13 Inst Nat Sante Rech Med Test de l'immunite cellulaire par des peptides fixes sur support solide
GB0125535D0 (en) * 2001-10-24 2001-12-12 Microbiological Res Authority Mycobacterial genes down-regulated during latency
GB0215710D0 (en) * 2002-07-05 2002-08-14 Isis Innovation Diagnostic method
WO2004099771A1 (en) * 2003-05-08 2004-11-18 Statens Serum Institut A new specific epitope based immunological diagnosis of tuberculosis
WO2005054851A1 (en) * 2003-11-21 2005-06-16 Institut Pasteur Recombinant adenylate cyclase of bordetella sp. for diagnostic and immunomonitoring uses, method of diagnosing or immunomonitoring using said recombinant adenylate cyclase, and kit for diagnosing or immunomonitoring comprising said recombinant adenylate cyclase
ITRM20040091A1 (it) * 2004-02-19 2004-05-19 Istituto Naz Per Le Malattie Test immunologico rapido per la diagnosi ed il monitoraggio dell'infezione tubercolare.
GB0406271D0 (en) * 2004-03-19 2004-04-21 Isis Innovation Diagnostic test
US7820142B2 (en) * 2004-09-30 2010-10-26 Institut Pasteur Immunogenic glycopeptides, screening, preparation and uses
GB0500102D0 (en) * 2005-01-05 2005-02-09 Isis Innovation Method for generating a memory t cell response
US20080124738A1 (en) * 2005-03-01 2008-05-29 Pritest, Inc Compositions and methods of testing for tuberculosis and mycobacterium infection
EP1868640A1 (en) * 2005-03-31 2007-12-26 Leiden University Medical Center Methods and means for diagnostics, prevention and treatment of mycobacterium infections and tuberculosis disease
WO2007005627A2 (en) * 2005-07-01 2007-01-11 Forsyth Dental Infirmary For Children Tuberculosis antigen detection assays and vaccines
CA2616766A1 (en) * 2005-07-26 2007-02-01 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Antibody profiles characteristic of tuberculosis state
GB0605474D0 (en) * 2006-03-17 2006-04-26 Isis Innovation Clinical correlates
RU2490024C2 (ru) * 2006-06-28 2013-08-20 Статенс Серум Инститьют Расширение спектра т клеток для включения субдоминантных эпитопов путем вакцинации с антигенами, доставленными как белковые фрагменты или пептидные коктейли
GB0618127D0 (en) * 2006-09-14 2006-10-25 Isis Innovation Biomarker
US8304372B2 (en) * 2007-01-31 2012-11-06 Council Of Scientific And Industrial Research Process for joining oxide superconducting tubes with a superconducting joint
GB0708874D0 (en) * 2007-05-08 2007-06-13 Univ The Of Birmingham Assay for detecting mycrobacterial infection
WO2009022236A2 (en) * 2007-08-16 2009-02-19 Tripep Ab Immunogen platform
US10611818B2 (en) * 2007-09-27 2020-04-07 Agilent Technologies, Inc. MHC multimers in tuberculosis diagnostics, vaccine and therapeutics
GB0722105D0 (en) * 2007-11-10 2007-12-19 Sec Dep For Environment Food A Antigens
US7670609B2 (en) * 2007-11-27 2010-03-02 Aeras Global Tb Vaccine Foundation Recombinant BCG tuberculosis vaccine designed to elicit immune responses to Mycobacterium tuberculosis in all physiological stages of infection and disease
PL2315773T3 (pl) * 2008-07-25 2017-07-31 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Polipeptydy, polinukleotydy i kompozycje do stosowania w leczeniu utajonej gruźlicy
AU2009294850B2 (en) * 2008-09-22 2015-07-02 Oregon Health & Science University Methods for detecting a Mycobacterium tuberculosis infection
US20100159485A1 (en) * 2008-12-19 2010-06-24 Centre For Dna Fingerprinting And Diagnostics Detection of mycobacterium tuberculosis
GB0906215D0 (en) * 2009-04-09 2009-05-20 Lalvani Ajit Diagnostic test
CN102713629B (zh) * 2009-11-20 2016-02-24 俄勒冈健康科学大学 用于检测结核分枝杆菌感染的方法

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1305900C (zh) * 2004-03-16 2007-03-21 中国药品生物制品检定所 Esat－6蛋白在诊断结核病中的用途
CN101294964B (zh) * 2007-11-27 2012-06-27 复旦大学附属华山医院 一种检测活动性结核病和结核潜伏感染的试剂和方法
CN102297968A (zh) * 2010-06-28 2011-12-28 程小星 辅助诊断结核病的试剂盒
CN102297968B (zh) * 2010-06-28 2013-10-30 程小星 辅助诊断结核病的试剂盒
CN101985473A (zh) * 2010-10-12 2011-03-16 浙江大学 抗结核杆菌esat-6单克隆抗体tbef3及应用
CN101987872A (zh) * 2010-10-12 2011-03-23 浙江大学 抗结核杆菌esat-6单克隆抗体tbea8及应用
CN102305855A (zh) * 2011-05-19 2012-01-04 中山大学 体外检测结核分枝杆菌感染的试剂和方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20110201044A1 (en) 2011-08-18
MXPA01004469A (es) 2002-08-30
DK1144447T3 (da) 2010-02-08
US9005902B2 (en) 2015-04-14
US20120264141A1 (en) 2012-10-18
US8216795B2 (en) 2012-07-10
ES2333073T3 (es) 2010-02-16
US7632646B1 (en) 2009-12-15
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US20100041075A1 (en) 2010-02-18
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US7901898B2 (en) 2011-03-08
EP1144447A2 (en) 2001-10-17

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