CN1346366A - 作为活性物质载体的多瘤病毒蛋白2或3片段 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种合成的生物活性分子,用于将一种活性成分固定到多瘤病毒的病毒蛋白1(VP1)。根据本发明,衍生自多瘤病毒的病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)的氨基酸序列A1被结合至活性成分的一个末端。

Description

作为活性物质载体的多瘤病毒蛋白2或3片段
本发明涉及合成的生物活性分子及其制备方法。
Chen，X.S.，Stehle，T.和Harrison，S.C.(1998)：多瘤病毒内部蛋白VP2与主要衣壳蛋白VP1的相互作用和VP2参与病毒进入的含义，EMBO J.Vol.17，No.12，pp3233-3240描述了负责锚定多瘤病毒的病毒蛋白VP2和VP3至病毒蛋白1的相互作用。根据该文献，锚定发生在VP2或VP3的C末端区。
US4,950,599公开了多瘤病毒适合将活性物质转运进细胞中。此外，DE 196 18 797 A1公开了来自多瘤病毒的壳粒适合将分子材料转运进细胞。
EP 0 259 149 A2公开了使用轮状病毒内部衣壳蛋白VP6作为免疫载体分子和疫苗，以刺激针对轮状病毒感染的免疫应答。为此，免疫原性肽通过肽-肽相互作用与VP6结合，该相互作用的细节未披露。VP6在此并不形成结构壳粒，相反显示独特的结构多态性。VP6以单体或寡聚体形式存在。尽管寡聚体VP6可以形成颗粒，但这些颗粒不是衣壳或壳粒，而是非结构载体蛋白。
Redmond，M.J.等(1991)：轮状病毒颗粒作为免疫载体，传递来自感染物质和内源蛋白的肽，Mol.Immuno.28,269-278介绍了使用轮状病毒内部衣壳蛋白VP6作为转运颗粒。为此，VP6通过来自于轮状病毒蛋白VP4的肽序列的结合蛋白与免疫原性肽或蛋白结合。与来自VP4的肽序列偶联的抗原定位于转运颗粒之外，因此不能受到保护免于降解。
GB 22 57 431 A描述了来自噬菌体MS-2膜蛋白的嵌合蛋白的用途。改蛋白可以形成衣壳。抗原肽或偶联于其上的肽与衣壳外部结合。在大肠杆菌中表达时嵌合蛋白的自发组装导致被细菌DNA或蛋白污染的高风险。
DE 43 35 025 A1公开了一种内体溶解活性病毒样颗粒，其已用膜活性肽在其外表面上修饰过。所述颗粒的制备复杂。
本发明的目的是克服现有技术的缺陷。具体说，本发明意在方便地提供一种与多瘤病毒VP1特异性结合的活性物质。
该目的通过权利要求1、9和19的特征达到。合适的实施方案可由权利要求2到8、10到18和20到24的特征产生。
本说明书使用以下定义：
衍生氨基酸序列：与其来源氨基酸序列相比没有改变或有氨基酸交换、插入或缺失的氨基酸序列。
C末端：在C末端的区域。
合成分子：人工制备分子。
偶联或附着：共价或非共价结合。非共价结合可以通过例如螯合结合实现。
遗传工程：包括将限定核酸导入细胞中的方法的技术。
本发明提供一种合成的生物活性分子，其中衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列与活性物质连接。
设想的合成生物活性分子使其可以以简单方式将活性物质与多瘤病毒VP1特异性缔合。这导致结构壳粒的形成。使用该壳粒可以以简单方式制备作为活性物质通用载体的衣壳。
有利地是，氨基酸序列(A1)包括10到55，优选28到38个氨基酸。限定到相对较短的氨基酸序列降低了制备合成生物活性分子的费用并简化了其制备过程。
有利地是，该氨基酸序列至少在某些区段相应于以下VP2序列：氨基酸250到319，优选氨基酸260到300，特别优选氨基酸287到297。所述氨基酸序列确保了对VP1的锚定。
在合成生物活性分子中，优选氨基酸序列(A1)具有以下序列：
Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly
1                5                  10
优选活性物质与氨基酸序列(A1)通过接头结合。该接头可以由至少一个氨基酸，一种肽、蛋白、脂质等组成。活性物质可以选自以下：核酸、寡核苷酸、蛋白、肽、肽类物质、PNA、所述物质的修饰形式和低分子量药物活性物质。特别合适的是通过以下所述反应基团之一与氨基酸序列偶联的活性物质。
合成生物活性分子可以是偶联于多瘤病毒VP1衍生氨基酸序列和/或是一种药物的成分。
本发明另一方面提供一种制备本发明的合成生物活性分子的方法，该方法具有以下步骤：
a)提供衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列(A1)，该氨基酸序列(A1)具有偶联剂，并且
b)将活性物质与氨基酸序列(A1)通过偶联剂结合。
偶联剂可以具有氨基酸甘氨酸、半胱氨酸或通过赖氨酸结合的甘氨酸。偶联剂优选是与氨基酸序列(A1)N或C末端结合的另一种合成氨基酸序列(A2)。
合成生物活性分子可以至少部分通过遗传工程制备。为此，氨基酸序列(A1)、另一种氨基酸序列(A2)和活性物质可以完全或部分通过遗传工程制备。另一种氨基酸序列(A2)具有甘氨酸和/或具有功能侧链基团的氨基酸较为便利，功能侧链基团可以选自氨基、巯基、羧基、羟基、胍、苯基、吲哚和咪唑基。
偶联剂可以是通过氨基酸优选甘氨酸与氨基酸序列(A1)C或N末端结合的反应基团。可以是下列成分之一：具有单溴乙酰基的氨基酸，具有单氯乙酰基的氨基酸，具有3-硝基-2-吡啶次磺基(pyridinesulfenyl)(Npys)的氨基酸。设想的反应活性基团可以通用。它们适于偶联多个活性物质。
已经证实，通过硫醚或二硫键将活性物质结合到氨基酸序列(A1)或另一种氨基酸序列(A2)特别有利。实践中，这类键可以方便地制备。当然，使用其他反应活性基团也是可行的。合适的基团包括N-琥珀酰亚胺基溴乙酸酯(succinimidyl bromoacetate)或N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基硫代)丙酸酯(SPDP)。
活性物质可以通过接头与氨基酸序列(A1)或另一种氨基酸序列(A2)结合。接头可以由至少一个氨基酸、一种肽、蛋白、脂质等组成。
本发明还提供一种制备本发明的合成生物活性分子的方法，该方法具有以下步骤：
aa)合成衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列(A1)，和
bb)合成活性物质即一种肽并偶联至氨基酸序列(A1)，
其中步骤aa和bb通过肽合成或遗传工程方法进行。
在步骤bb)中，氨基酸序列(A1)通过活性物质延伸。活性物质的延长和附着通过重复附着氨基酸残基进行。该方法可以特别方便地进行。
上述两种方法的其他优选实施方案可参见下文。
实施例：
A.肽的合成和纯化：
通过同时多个肽合成在肽合成仪(PSSM-8型，SHIMADZU，Japan)上合成肽(Schnorrenberg，G.和Gerhardt，H.(1989)Tetrahedron 45，7759)，使用Shepppard的9-芴甲氧羰基(Fmoc)/tert.丁基(But)策略(Atherton，E.和Sheppard，R.C.(1989)《固相肽合成实用方法》IRLPress，Oxford)。偶联反应使用6当量Fmoc保护的氨基酸/1-羟基苯并三唑(HOBt)/12当量正甲基吗啉，在聚合物载体树脂(Tentagel S Trityl树脂，RAPP聚合物，Tubingen，Germany)上使用2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)，装载量为2mmol/克树脂。肽含有C末端COOH基团。
在合成中使用以下保护基团：Cys(Trt)，Arg(Pbf)，Ser(But)，Thr(But)，Asp(OBut)，Glu(OBut)，Asn(Trt)，Gln(Trt)，Lys(Boc)，His(Trt)，Trp(Boc)，其中Trt为三苯甲基，But为叔丁基，OBut为叔丁基酯，Boc为叔丁氧羰基，Pbf为2，2，4，6，7-五甲基二羟基苯并呋喃-5-磺酰基。
所有保护基团通过以下方法除去：使用三氟乙酸(TFA)/苯甲硫醚/硫甲酚(95∶2.5∶2.5)室温下作用3小时以上，加入3％三异丙基硅烷并随后加入10％三甲基氯硅烷作用1小时。冻干后，肽以其三氟乙酸盐形式存在。
肽通过制备性HPLC在BischoffPolyencap 300分离柱(10μm，250×16mm)纯化，使用自水中的0.05％三氟乙酸(洗脱液A)到80％乙腈中的0.05％三氟乙酸(洗脱液B)的梯度。
或者，使用Vydac分离柱218型TP 101522(10-15μm，250×22mm)，43-73％洗脱液B的梯度，30分钟，流速为15毫升/分钟。
通过肽合成，合成了下列氨基酸序列：
Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly
1                5                   10
在该序列中，反应基团通过一种氨基酸优选通过甘氨酸结合到氨基酸序列的N末端。反应基团可以由单氯乙酰基甘氨酸组成。或者，也可以附着一个单溴乙基。
在固相合成中偶联单氯乙酰基甘氨酸：
等当量单氯乙酰基甘氨酸和1-羟基苯并三唑(HOBt)溶解在二甲基甲酰胺(DMF)中，与等当量N，N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)混合，并加入到肽树脂中。相对于加载的肽树脂，单氯乙酰基甘氨酸以过量存在。不时搅动使反应进行，持续至少1小时。
反应基团促进这样制备的生物活性分子共价结合于具有有利SH基团的活性物质如肽。SH基团与单氯乙酰基的氯原子反应按照下面的等式形成稳定的硫醚化合物：
蛋白-SH+Cl-CH2-CO-Gly肽→蛋白-S-CH2-CO-Gly肽
单氯乙酰基修饰的锚定肽与具有末端半胱氨酸的肽的辍合物的形成
单氯乙酰基修饰的锚定肽较待辍合的肽过量使用。反应在0.1M碳酸氢钠pH7-8时在室温下进行。若肽或锚定物在水溶液中的溶解性差，辍合物形成在4M盐酸胍，pH8.0中进行(Lindner，W.和Robey，F.A.(1987)Int J.Pept.Protein Res.30，794-800)。或者，增加反应混合物中有机溶剂如DMSO的比例。为了避免不需要的副产物，可以加入水溶性膦作为还原剂。
或者可以在下列条件下进行辍合反应。单氯乙酰基化锚定肽和具有末端SH基团的肽在室温下于1-甲基-2-吡咯烷酮中温育，其中存在有约10倍过量的二异丙基乙基胺和约5倍过量的三丁基膦。反应后加入水，产物通过加入醚沉淀，通过凝胶过滤纯化(Defoort，J.P.，Nardelli，B.，Huang，W.和Tam，J.P.(1992)Int.J.Protein Res.40，214-221)。
或者辍合反应也可以如下进行。含有SH基团的肽溶解在0.2M磷酸缓冲液，10mM EDTA，pH7.4中。向该混合物中加入溶解在二甲基甲酰胺中的单氯乙酰基修饰的锚定肽。反应后，通过凝胶过滤或RP-HPLC进行纯化(Zhang，L.和Tam，J.P.(1997)J.Am.Chem.Soc.119，2363-2370)。
分离的VP1五聚体通过在大肠杆菌中表达具有N末端6×组氨酸亲和标志(His标志)的VP1重组蛋白制备。该蛋白通过Ni-NTA亲和层析纯化。His标志通过用因子Xa处理除去。蛋白在SDS-PAGE凝胶中分析然后进行考马斯染色。
该起始材料(在20mM Hepes，pH7.3，1mM EDTA，200mM NaCl，5％甘油中的VP1蛋白)在centricon 100(Amincon，原文如此)中浓缩，通过FPLC凝胶过滤(Superdex 200，洗脱缓冲液为50mM Tris，0.15MNaCl，5mM EDTA，pH8.5)分离成高分子量衣壳级分和五聚体亚单位(分子量约225kD)。以10倍摩尔过量向含五聚体的溶液中加入碘乙酰胺(SIGMA)，以封闭可能的反应性SH基团。反应在室温下进行2小时。修饰的五聚体级分通过凝胶过滤同过量碘乙酰胺分离。VP1特异性单克隆抗体借助于VP1特异性抗体和亲和基质(蛋白A支持物，BIORAD)吸附。抗体包被的基质用来沉淀纯化的五聚体级分。在进一步的温育步骤中，锚定序列加入至五聚体基质中。样品在SDS聚丙烯酰胺凝胶(12.5％)中分析。
Npys修饰的锚定肽和具有末端半胱氨酸的肽的辍合物形成：
除了单氯或单溴乙酰基锚定肽和具有末端半胱氨酸的肽之间的反应形成硫醚之外，锚定肽和肽序列之间的辍合物也可以通过3-硝基-2-吡啶次磺基(Npys)在锚定肽的末端半胱氨酸和待偶联的肽的SH基团之间形成。为此，Npys修饰的半胱氨酸代替单氯乙酰基甘氨酸N末端偶联于锚定序列。所述Npys修饰的半胱氨酸是活化的二硫键，它能够与半胱氨酸等硫醇反应，形成不对称二硫键。这便除去了3-硝基-2-硫代吡啶酮，其329纳米的最大紫外吸收允许通过光谱测定法研究两个化合物之间的反应动力学。
基-2-吡啶次磺基(Npys)在锚定肽的末端半胱氨酸和待偶联的肽的SH基团之间形成。为此，Npys修饰的半胱氨酸代替单氯乙酰基甘氨酸N末端偶联于锚定序列。所述Npys修饰的半胱氨酸是活化的二硫键，它能够与半胱氨酸等硫醇反应，形成不对称二硫键。这便除去了3-硝基-2-硫代吡啶酮，其329纳米的最大紫外吸收允许通过光谱测定法研究两个化合物之间的反应动力学。
选择下列条件进行反应(Albericio，F.，Andreu，D.，Giralt，E.，Navalpotro，C.，Pedroso，E.，Ponsati，B.and Ruiz-Gayo，M.(1989)Int.J.Peptide Res.34，124-128)。Npys修饰肽被加入到具有末端SH基团、溶解于0.1M乙酸钠、0.1M氯化钠，pH4.5的待偶联肽中，将pH调整到5，然后搅动下温育至少12小时。通过加入1N氢氧化钠调整pH到7.0，再温育3小时。反应后，混合物对10mN碳酸氢钠透析。
反应的最适pH范围是4.5到7.0。这些条件保证不希望的副反应最小化，所述副反应如在待偶联的肽分子之间形成对称二硫键或除去了Npys基团。Npys修饰肽应当以相对于待辍合肽过量的量存在于反应中(Albericio，F.，Andreu，D.，Giralt，E.，Navalpotro，C.，Pedroso，E.，Ponsati，B.and Ruiz-Gayo，M.(1989)Int.J.Peptide Res.34，124-128)。
本发明的实例在以下序列中说明。
序列1显示衍生自多瘤病毒VP2的氨基酸序列，位置287-297。在合成生物活性分子时其作为锚定活性物质至VP1的锚定物。
序列2显示合成的生物活性分子的第一个示例性实施方案。HIV-1衍生的肽序列相应于位置1-21；附着的氨基酸序列作为锚定物占有位置22-33。其衍生自多瘤病毒VP2。
序列3显示适合作为锚定物的氨基酸序列的另一个实例。
序列4显示多瘤病毒VP2序列。显示了作为锚定物的250到300位的序列。
序列5显示另一个合成的生物活性分子。它们可以与多瘤病毒VP1偶联，然后为了处理HIV感染，被导入感染细胞。
序列1<110>    november AG<120>    合成氨基酸分子<130>    VP2基本序列<140><141><160>    1<170>    PatentIn Ver.2.1<210>    1<211>    11<212>    PRT<213>    多瘤病毒<300><302>    源自VP2的序列位置282-297<303>    EMBO J.<304>    1998<305>    17/12<306>    3233-3240<308>    J02288/EMBL<309>    1995-08-22<400>    1Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly1               5                  10序列2<110>    november AG<120>    合成氨基酸分子<130>    VP2锚定物和活性物质肽实例<140><141><160>    1<170>    PatentIn Ver.2.1<210>    1<211>    33<212>    PRT<213>    人工序列<220><223>    人工序列说明：HIV-1 RT位置1-21；多瘤病毒VP2序列位置22-33<400>    1Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr1               5                  10                  15Tyr Asp Pro Ser Lys Pro Asp Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu
         20                  25                  30Tyr序列3<110>    november AG<120>    合成氨基酸分子<130>    VP2锚定物位置263-296<140><141><160>    1<170>    PatentIn Ver.2.1<210>    1<211>    34<212>    PRT<213>    多瘤病毒<300><302>    VP2锚定物VP2序列位置263-296<303>    EMBO J.<304>    1998<305>    17/12<306>    3233-3240<308>    J02288/EMBL<309>    1995-08-22<400>    1Gln Asp Glu Ser Gly Glu Val Ile Lys Phe Tyr Gln Ala Gln Val Val1               5                  10                  15Ser His Gln Arg Val Thr Pro Asp Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly
         20                  25                  30Leu Tyr序列4<110>    november AG<120>    合成氨基酸分子<130>    多瘤病毒VP2蛋白序列<140><141><160>    1<170>    PatentIn Ver.2.1<210>    1<21l>    319<212>    PRT<213>    多瘤病毒<300><302>    VP2(衣壳蛋白)，基因座PLY2CG，多瘤病毒株a2和a3全基因组，欧
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     Bioinform.Inst.)<303>    EMBO J.<304>    1998<305>    17/12<306>    3233-3240<308>    J02288/EMBL<309>    1995-08-22<400>    1Met Gly Ala Ala Leu Thr Ile Leu Val Asp Leu Ile Glu Gly Leu Ala1               5                  10                  15Glu Val Ser Thr Leu Thr Gly Leu Ser Ala Glu Ala Ile Leu Ser Gly
         20                  25                  30Glu Ala Leu Ala Ala Leu Asp Gly Glu Ile Thr Ala Leu Thr Leu Glu
     35                  40                  45Gly Val Met Ser Ser Glu Thr Ala Leu Ala Thr Met Gly Ile Ser Glu
 50                  55                  60Glu Val Tyr Gly Phe Val Ser Thr Val Pro Val Phe Val Ser Arg Thr65                  70                  75                  80Ala Gly Ala Ile Trp Leu Met Gln Thr Val Gln Gly Ala Ser Thr Ile
             85                  90                  95Ser Leu Gly Ile Gln Arg Tyr Leu His Asn Glu Glu Val Pro Thr Val
        100                 105                 110Asn Arg Asn Met Ala Leu Ile Pro Trp Arg Asp Pro Ala Leu Leu Asp
    115                 120                 125Ile Tyr Phe Pro Gly Val Asn Gln Phe Ala His Ala Leu Asn Val Val
130                 135                 140His Asp Trp Gly His Gly Leu Leu His Ser Val Gly Arg Tyr Val Trp145                 150                 155                 160Gln Met Val Val Gln Glu Thr Gln His Arg Leu Glu Gly Ala Val Arg
            165                 170                 175Glu Leu Thr Val Arg Gln Thr His Thr Phe Leu Asp Gly Leu Ala Arg
        180                 185                 190Leu Leu Glu Asn Thr Arg Trp Val Val Ser Asn Ala Pro Gln Ser Ala
    195                 200                 205Ile Asp Ala Ile Asn Arg Gly Ala Ser Ser Ala Ser Ser Gly Tyr Ser
210                 215                 220Ser Leu Ser Asp Tyr Tyr Arg Gln Leu Gly Leu Asn Pro Pro Gln Arg225                 230                 235                 240Arg Ala Leu Phe Asn Arg Ile Glu Gly Ser Met Gly Asn Gly Gly Pro
            245                 250                 255Thr Pro Ala Ala His Ile Gln Asp Glu Ser Gly Glu Val Ile Lys Phe
        260                 265                 270Tyr Gln Ala Gln Val Val Ser His Gln Arg Val Thr Pro Asp Trp Met
    275                 280                 285Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly Asp Ile Thr Pro Thr Trp Ala
290                 295                 300Thr Val Ile Glu Glu Asp Gly Pro Gln Lys Lys Lys Arg Arg Leu305                 310                 315序列5<110>    november AG<120>    合成氨基酸分子<130>    活性物质1 RT/HIV部分序列<140><141><160>    1<170>    PatentIn Ver.2.1<210>    1<211>    21<212>    PRT<213>    人工序列<220><223>    人工序列说明：HIV-1 RT位置1-20(入藏号AJ006287)和附加C-
     末端Cys<400>    1Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr1               5                  10                  15Tyr Asp Pro Ser Cys
         20序列6<110>    november AG<120>    合成氨基酸分子<130>    活性物质2 GAG/HIV部分序列<140><141><160>    1<170>    PatentIn Ver.2.1<210>    1<211>    17<212>    PRT<213>    人免疫缺损病毒1型<220><223>    HIV-1 GAG部分序列(入藏号AJ006287)<400>    1Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr1               5                  10                  15Cys

Claims (24)

1.一种合成的生物活性分子，其中衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列(A1)与一种活性物质连接。
2.权利要求1的合成生物活性分子，其中氨基酸序列(A1)包括10到55个，优选28到38个氨基酸。
3.前述任一权利要求的合成生物活性分子，其中氨基酸序列(A1)至少在某些区段相应于以下VP2序列：氨基酸250到319，优选氨基酸260到300，特别优选氨基酸287到297。
4.前述任一权利要求的合成生物活性分子，其中氨基酸序列(A1)具有以下氨基酸序列：
Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly
1                5                  10
5.前述任一权利要求的合成生物活性分子，其中活性物质通过接头与氨基酸序列(A1)结合。
6.前述任一权利要求的合成生物活性分子，其中活性物质选自核酸、寡核苷酸、蛋白、肽、肽类物质、PNA、所述物质的修饰形式和低分子量药物活性物质。
7.前述任一权利要求的合成生物活性分子，偶联于衍生自多瘤病毒VP1的一种氨基酸序列。
8.具有前述任一权利要求的合成生物活性分子的药物。
9.制备前述任一权利要求的合成生物活性分子的方法，具有以下步骤：
a)提供衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列(A1)，该氨基酸序列(A1)具有偶联剂，并且
b)将活性物质与氨基酸序列(A1)通过偶联剂结合。
10.权利要求9的方法，其中偶联工具中的氨基酸是甘氨酸、半胱氨酸或通过赖氨酸结合的甘氨酸。
11.权利要求9或10的方法，其中偶联工具是另一种，优选结合于氨基酸序列(A1)N或C末端的合成氨基酸序列(A2)。
12.权利要求9到11任一项的方法，其中合成的生物活性分子至少部分是通过遗传工程制备的。
13.权利要求9到12任一项的方法，其中另一种氨基酸序列(A2)具有甘氨酸和/或具有功能侧链基团的氨基酸。
14.权利要求13的方法，其中功能侧链基团选自氨基、巯基、羧基、羟基、胍、苯基、吲哚和咪唑基。
15.权利要求9到14任一项的方法，其中偶联工具是通过一种氨基酸优选甘氨酸、半胱氨酸或通过赖氨酸结合的甘氨酸结合到氨基酸序列(A1)C或N-末端的活性基团。
16.权利要求15的方法，其中活性基团具有以下成分之一：具有单溴乙酰基的氨基酸，具有单氯乙酰基的氨基酸，具有3-硝基-2-吡啶次磺基(Npys)的氨基酸。
17.权利要求9到16任一项的方法，其中活性物质通过硫醚或二硫键与氨基酸序列(A1)或另一种氨基酸序列(A2)结合。
18.权利要求9到17任一项的方法，其中活性物质通过接头与氨基酸序列(A1)或另一种氨基酸序列(A2)结合。
19.制备权利要求1的合成生物活性分子的方法，具有以下步骤：
aa)合成衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列(A1)，和
bb)合成活性物质即一种肽并偶联至氨基酸序列(A1)，
其中步骤aa和bb通过肽合成或遗传工程方法进行。
20.权利要求9到19任一项的方法，其中氨基酸序列包括10到55，优选28到38个氨基酸。
21.权利要求9到20任一项的方法，其中氨基酸序列(A1)至少某些区段相应于以下VP2序列：氨基酸250到319，优选氨基酸260到300，特别优选氨基酸287到297。
22.权利要求9到21任一项的方法，其中氨基酸序列(A1)具有以下氨基酸序列：
Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly
1                5                  10
23.权利要求9到18和20到22任一项的方法，其中活性物质选自核酸、寡核苷酸、蛋白、肽、PNA、肽类物质、所述物质的修饰形式。
24.权利要求9到23任一项的方法，其中合成的生物活性分子偶联于衍生自多瘤病毒VP1的一种氨基酸序列。
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