CN1337257A - 复方丹参滴丸在制备抗氧化药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属医药领域,具体涉及复方丹参滴丸在制药领域中的新用途。本发明经体外抗氧化活性实验,结果证实复方丹参滴丸在一定的浓度条件下,具有较强的抗氧化活性,而且其抗氧化活性分别是已知抗氧化剂VitC的4至12.倍,是Trolox的3至9倍。本发明复方丹参滴丸抗氧化新用途可用于冠心病、心绞痛的治疗,其不但能“治标”如增加冠脉流量、缓解心肌缺血等,而且能“治本”即通过抗氧化作用减轻自由基对血管内皮细胞和心肌细胞的损伤等。

Description

复方丹参滴丸在制备抗氧化药物中的应用

技术领域

本发明属医药领域，具体涉及复方丹参滴丸在抗氧化药物中的应用。

背景技术

冠心病、心绞痛是我国的常见病。氧化压力和高血压是引起冠状动脉损害，从而导致冠心病、心绞痛甚至心肌梗塞的重要原因。冠心病、心绞痛的临床表现属于中医学“胸痹”、“真心痛”等范畴，中医认为其发病机制有数种，有为“心虚邪干而痛者”；有为“阳气郁伏而痛者”；有为“血因邪泣在络不行而痛者”；有为“血虚而痛者，有为痰湿阻抑而痛者”；总之，都属于“血行不畅”所致。根据这一特点，前人研制了由丹参、三七、冰片等三味中药组成的复方丹参片。

丹参属于活血化淤类中药。其主要成分为丹参酮I、IIA、IIB(Tanshinone I、IIA、IIB)、异丹参酮I、II(Isotanshinone I、II)、丹参酸甲酯(Methyl  tanshinanate)羟基丹参酮IIA(Hydroxytanshinone IIA)丹参新酮(Miltrirone)、隐丹参酮(Cryptotanshinone)、异隐丹参酮(Isocryptotanshinone)、左旋二氢丹参酮I、丹参酚(Salviol)以及维生素E(Vitamine E)等。现代药理研究证明丹参具有扩张冠状动脉、抗心肌缺血、抗凝、抗血栓形成、镇静止痛以及降血脂和抗动脉粥样硬化等作用。

三七属于止血类中药。中医学认为其具有散淤止血，消肿定痛的功能，既止血又活血。其有效成分主要为皂甙类，包括人参皂甙Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rc、Rd、F2，丝石竹甙IX、XVII，三七人参皂甙Fa、Fe、F₁、F₄，人参皂甙Re、Rg₂、Rh₁，三七人参皂甙R₁、R₂、R₃、R₄、R₆、F₈，竹节人参皂甙V、IV和阿托伯脱呋喃糖竹节人参皂甙IV等。倍半萜类化合物主要有2，8-二甲基-5-乙酸基-双环〔5、3、0〕癸二烯，1，8-δ-愈创烯和δ杜松烯。还含有三七素(化学名为β-N-乙二酸酰基-L-α-β-二氨基丙酸)、黄酮甙类、三七多糖A、β-谷甾醇、β-谷甾醇-D-葡萄糖甙等。现代药理研究证明三七既有止血作用又有抗凝血作用。止血作用包括缩短出凝血时间、增加血小板数量并使其出现伸展伪足、聚集、脱颗粒等现象，还能降低毛细血管通透性。显示抗凝血作用的是三七中的部分成分：三七根总皂甙、三七人参二醇型皂甙和三醇型皂甙，它们均能抑制人和兔血小板的聚集。三七总皂甙可促进血管内皮细胞分泌组织型纤溶酶原(t-PA)，阻止血栓的形成。

冰片为龙脑香科植物龙脑香树脂的加工结晶品。菊科艾纳香属植物大风艾的叶经水蒸汽蒸馏提取加工而得的结晶称为艾片。由樟脑、松节油等用化学方法合成的加工制成品称为机制冰片。冰片辛散苦泄，芳香走串，能通诸窍，散郁火，有类似麝香的开窍醒神之功。

龙脑冰片主要含右旋龙脑；艾片主要含左旋龙脑。现代药理研究证明冰片具有抗心肌缺血的作用，能使冠脉流量明显增加；此外，冰片还能增加血脑屏障的通透性，加强药物跨屏障能力。

由上述三味中药组成的复方丹参片具有活血化淤、理气止痛的功能；其临床适应症为冠心病、心绞痛。复方丹参滴丸是在此基础上研制而成的滴丸剂，疗效优于复方丹参片。其特点为起效迅速(舌下含服)，尤其适用于心绞痛的急性发作，此外口服也同样有效。复方丹参滴丸批准文号为(95)卫药准字Z-01号，其获准的“功能与主治”为活血化淤、理气止痛，用于胸中憋闷、心绞痛。因其疗效显著，目前在临床上得到广泛应用。

复方丹参片和复方丹参滴丸之所以疗效显著，是因为其配方中的三味中药配伍合理。该方虽然是由三味药组合而成，但其作用却不能简单地用其组成药物的作用解释清楚，其作用大小也不光是几种药物之和。该方是在中医活血祛瘀理论与经验基础上，按组方原则配方，充分发挥药物配合组方之长处，既能使其中的单味药失去某种生物活性，减轻毒副作用，又能加强原有药物的疗效，或衍化产生新的功用。正如清代徐灵胎《医学源流论·方药离合论》所云：“此方之既成，能使药各全其性，亦能使药各失其性。操纵之法，有大权焉，此方之妙也。”

经过近年来的临床与实验研究，复方丹参滴丸的应用范围得到了进一步的拓展，目前已证实其具有抗心绞痛、改善心肌缺血、降低血黏度、降低血小板聚集等作用。近年来的研究工作又发现复方丹参滴丸还具有抗动脉粥样硬化、降血脂、及抗慢性肝病纤维化等作用，但至今未见有关复方丹参滴丸抗氧化作用的确切报导。

技术内容

本发明的目的是提供复方丹参滴丸在制备抗氧化药物中的新用途。

大量实验研究已证明氧化压力能导致心血管系统的损伤。对心脏而言，主要表现为损害冠状动脉内皮细胞，导致其功能障碍，并促进冠状动脉粥样硬化的发生，使冠状动脉管腔狭窄，引起心绞痛甚至心肌梗塞；氧化压力还可直接引起心肌细胞损伤，其主要机制是通过加强心肌细胞膜两侧的Na+/Ca²⁺交换，引起胞内Ca²⁺超载和心肌细胞过度挛缩。

体内氧化压力主要来源于超氧阴离子的生成。在生理情况下，血管内皮细胞、平滑肌细胞以及单核细胞均可产生一定量的超氧阴离子以及羟基(OH·)、过氧化氢等自由基。在高血压及内皮细胞功能障碍时，体内自由基生成增多，与其他致病因素共同作用于冠状动脉及心肌，引起冠心病。

本发明经体外抗氧化活性实验，证实复方丹参滴丸在冠心病、心绞痛的治疗中不但能“治标”，如增加冠脉流量、缓解心肌缺血等，而且能“治本”，即通过抗氧化作用减轻自由基对血管内皮细胞和心肌细胞的损伤等。

为了更好地理解本发明，下面用复方丹参滴丸抗氧化活性测定的试验结果，说明其在制药领域中的新用途。

一、邻苯三酚红(pyrogallol red，PR)试验

1.实验材料

药物及试剂：复方丹参滴丸，天津天士力制药集团有限公司生产，批号20000306；邻苯三酚红：Sigma公司；次氯酸钠：Sigma公司

2)实验仪器：紫外分光光度计，Beckman  DU6408型。

2、实验方法

精确称取4mg PR溶于100mM PH7.4的磷酸缓冲液(K₂HPO₄-KH₂PO₄)中即成1mM PR溶液，再用上述磷酸缓冲液按1∶10的比例稀释1mM的PR溶液，即得100μM PR溶液。在试管中按下列方案分别加入各种试剂及待测药物：

空白管：1ml磷酸缓冲液

PR溶液管：1ml 100μM PR溶液

样品对照管：100μl 1mM PR溶液+900μl磷酸缓冲液

样品管：100μl 1mM PR溶液+800μl磷酸缓冲液+100μl待测药物溶液(样品管备同样的2管，分别加入待测药物)

在室温下放置10分钟后，在样品对照管c和样品管d中分别加入125μM次氯酸钠混匀(a、b管中分别加入等体积的磷酸缓冲液)，然后从所有试管(a，b，c，d)中各取250μl溶液分别加入750μl磷酸缓冲液，混匀后测定在542nm波长处的紫外吸收值(Abs ₅₄₂)。

待测药物为浓度为2mg/ml或10mg/ml的复方丹参滴丸水溶液。

3.计算

PR试验值＝(样品管Abs ₅₄₂－样品对照管Abs 5₄₂)/(PR溶液管Abs ₅₄₂－样品对照管Abs ₅₄₂)×100％

(PR试验值代表抗氧化活性强弱，其确切含义为某待测药物在某浓度时可使PR分子免于被氧化的百分比。例如：某药物的PR值为30％，则表示该药物在某浓度时具有使30％的PR分子免于被氧化的抗氧化活性。)

4.实验结果：

复方丹参滴丸在浓度为0.2mg/ml及1mg/ml时其PR值分别为38％和64％，

呈现较强的抗氧化活性。

表1为复方丹参滴丸PR试验数据

		0.2mg/ml复方丹参滴丸					0.2mg/ml复方丹参滴丸
												Abs542	Abs542		PR试验值			Abs542		PR试验值
		1	2	1	2	均值	1	2	1	2	均值
												空白管	0.045
PR溶液管	0.716
												样品管		0.301	0.301	0.38	0.38	38％	0.475	0.472	0.64	0.64	64％

二、ABTS试验

1.实验材料

药物及试剂：复方丹参滴丸：天津天士力制药集团有限公司生产，批号20000306；ABTS(2，2’-azinobis[3-ethylbenzothiazoline6-sulphonate])、Trolox、K₂SO₇：Sigma公司

实验仪器：紫外分光光度计，Beckman  DU6408型。

2、实验方法

称取5mg Trolox溶于10ml三蒸水中得2mM Trolox标准溶液(或取0.0176g维生素C(Vit C)溶于100ml三蒸水中得1mM VitC标准溶液)；取0.03841g ABTS溶于10ml三蒸水中得7mM ABTS溶液；取0.03311g K₂SO₇溶于5ml水中得2.45mM K₂SO₇。取0.2ml 2.45mM K₂SO₇加入9.8ml 7mM ABTS中，混匀后避光置室温中12小时，取上述混合液1ml加入79ml PH7.4的磷酸缓冲液中，即为ABTS⁺溶液。按以下方案在733nm波长处测定紫外吸收值(Abs ₇₃₃)：

空白管：2ml磷酸缓冲液

基础吸收管：在1960μl或1980μl或1990μl ABTS⁺溶液中分别加入40μl或20μl或10μl磷酸缓冲液

标准管：在1960μl或1980μl或1990μl ABTS⁺溶液中分别加入40μl或20μl或10μl 1mM Trolox(或1mM VitC)

样品管：在1960μl或1980μl或1990μl ABTS⁺溶液中分别加入40μl或20μl或10μl 1mg/ml的复方丹参滴丸溶液

各管均在管内溶液总量达2ml后的3分钟时测定Abs₇₃₃。样品管备同样的二管，分别测定Abs₇₃₃。

待测药物的清除自由基能力以“与Trolox相当的抗氧化活性(Trolox equivalent antioxidant capacity，TEAC)”表示。

3.计算

I＝1－[(样品管Abs₇₃₃－空白管Abs₇₃₃)/基础吸收管Abs₇₃₃]

II＝1－[(标准管Abs₇₃₃－空白管Abs₇₃₃)/基础吸收管Abs₇₃₃]

TEAC＝(I/II)×药物的稀释系数，本实验的药物稀释系数为5。

4.实验结果

在上述实验条件下，当复方丹参滴丸的终浓度为0.05mg/ml、0.1mg/ml和0.2mg/ml时，其抗氧化活性分别是已知抗氧化剂VitC的4.10倍、6.97倍和12.08倍，是Trolox的2.94倍、5倍和8.66倍，呈一定的量效关系。

表2为复方丹参滴丸ABTS试验结果表2

		Abs733		样品值			标准品值	TEAC
										1	2	1	2	平均值		Vit C	Trolox
		基础吸收管		0.8027
标准管(Vit C)	40ul									0.2883					0.647
		标准管(Trolox)	40ul	0.2902					0.645
空白管	40ul									0.005
		样品管	40ul	0.5194	0.5066	0.359	0.375	0.367										12.08	8.66
标准管(Vit C)	20ul									0.5402					0.332
		标准管(Trolox)	20ul	0.5467					0.324
空白管	20ul									0.0043
		样品管	20ul	0.6324	0.6416	0.218	0.206	0.212										6.97	5.00
标准管(Vit C)	10ul									0.6846					0.152
		标准管(Trolox)	10ul	0.6365					0.212
空白管	10ul									0.0039
		样品管	10ul	0.7018	0.7112	0.131	0.119	0.125										4.10	2.94

上述体外抗氧化活性实验结果证实，复方丹参滴丸在一定的浓度条件下，具有较强的抗氧化活性，而且其抗氧化活性分别是已知抗氧化剂VitC的4至12.倍，是Trolox的3至9倍。本发明复方丹参滴丸抗氧化新用途可用于冠心病、心绞痛的治疗，其不但能“治标”如增加冠脉流量、缓解心肌缺血等，而且能“治本”即通过抗氧化作用减轻自由基对血管内皮细胞和心肌细胞的损伤等。

附图说明

图1为复方丹参滴丸PR试验结果柱形图。

图2为复方丹参滴丸与VitC相比的抗氧化活性。

Claims (3)

1.复方丹参滴丸在制备抗氧化药物中的应用

2.复方丹参滴丸在制备减轻自由基对血管内皮细胞损伤药物中的应用。

3.复方丹参滴丸在制备减轻自由基对心肌细胞损伤药物中的应用。

Images