CN1309702C

CN1309702C - 犬尿氨酸酶的特异性抑制剂l－邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸的合成方法

Info

Publication number: CN1309702C
Application number: CNB2005100308352A
Authority: CN
Inventors: 姚祝军; 马向东
Original assignee: Shanghai Institute of Organic Chemistry of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Organic Chemistry of CAS
Priority date: 2005-10-28
Filing date: 2005-10-28
Publication date: 2007-04-11
Anticipated expiration: 2025-10-28
Also published as: CN1752068A

Abstract

本发明涉及一种犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸新的合成方法，是从叔丁氧羰基-保护氨基的天冬氨酸苄酯出发，通过5步反应合成了目标化合物尿氨酸酶的特异性抑制剂。是一种方法简便、合成路线短、经济的合成方法。

Description

犬尿氨酸酶的特异性抑制剂 L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸的合成方法

技术领域

本专利涉及一种犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸(o-MBA)新的合成方法。

背景技术

人体内的必须氨基酸色氨酸代谢生成犬尿氨酸7后，有三条代谢途径：

1)通过犬尿氨酸羟化酶催化生成3-羟基犬尿氨酸，再由犬尿氨酸酶KYNU催化水解成3-羟基邻氨基苯甲酸。

2)通过犬尿氨酸氨基转移酶KAT-1生成犬尿酸KA(犬尿喹啉酸)。

3)通过犬尿氨酸酶KYNU的作用生成邻氨基苯甲酸。

其中，第一条犬尿氨酸途径是主要的代谢途径。这条途径在很多基础的生理过程中扮演了重要的角色，例如：神经元兴奋性，抗氧化状态，细胞生长及分裂等。对犬尿氨酸途径的详细研究，以及在此基础上对一系列相关疾病的治疗方法的研究，使人们对犬尿氨酸7及其一系列相关的芳酰基丙氨酸化合物(如下图)的合成产生了浓厚的兴趣。

近年来，人们又发现一些芳酰基丙氨酸化合物是犬尿氨酸途径中的酶的选择性抑制剂。如本专利涉及的化合物6(o-MBA)选择性的抑制犬尿氨酸羟化酶，而化合物8则是犬尿氨酸酶的抑制剂。这些发现更促使人们

希望能够通过简短高效的合成这类化合物，以便应用于生理方面的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种合成犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸(o-MBA)的全新方法，也是迄今为止最短的合成路线。

本发明涉及的尿氨酸酶的特异性抑制剂o-MBA的结构如下：

本发明的方法是从Boc-保护氨基的天冬氨酸苄酯1出发，通过5步反应合成了目标化合物6尿氨酸酶的特异性抑制剂o-MBA，所述的Boc是叔丁氧羰基。典型的反应式如下：

其中试剂1的合成反应式为；

本发明的方法具体地说从叔丁氧羰基(Boc)-保护氨基的天冬氨酸苄酯1出发，通过下述5步反应合成了目标化合物6：

1)，在醇溶剂中和0℃～室温下，化合物1、2-二甲氨基吡啶(DMAP)和叔丁基碳酸酐((Boc)₂O)反应13～12小时获得化合物2；其中，化合物1、DMAP和叔丁基碳酸酐(Boc)₂O的摩尔比为1∶0.1～0.2∶1.0～1.5。建议反应在惰性气体保护下进行，如氮气保护下。

2)，在有机溶剂中、过量氢气存在和0℃～35℃下，化合物2、氢气和催化剂Pd/C(10％)，在400～600MPa压力下氢化1～8小时获得化合物3。其中化合物2和催化剂Pd/C(10％)的重量比为1∶0.008～0.002。推荐在500Mpa压力下反应。

3)，在有机溶剂中和室温，化合物3、1，1’-羰基二咪唑(CDI)、NHCH₃(OCH₃).HCl和Et₃N反应2～8小时获得化合物4。其中，化合物3、1，1’-羰基二咪唑(CDI)、NHCH₃(OCH₃).HCl和Et₃N的摩尔比为1∶1～1.5∶1～1.5∶1～5。

4)，在有机溶剂中和-30～-20℃，化合物4和试剂1反应1～2小时获得化合物5。所述的化合物4和试剂1的摩尔比是1∶1～1∶2。建议该反应在惰性气体保护下进行，如氮气保护下。

所述的试剂1是由如下方法合成获得：在有机溶剂中、-5℃～室温和氮气保护下，邻溴苯甲醚和正丁基锂(n-BuLi)反应2～5小时获得试剂1。然后可以经过溶液提取和洗涤纯化。

5)，将化合物5和三氟醋酸(TFA)在室温反应1～5小时获得化合物6。其中化合物5和三氟醋酸的摩尔比可以是1∶1～1∶100。反应获得化合物6粗产物，可以进一步用有机溶剂提取和离子交换柱进行提纯。

上述的有机溶剂可以是甲醇、乙醇、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、石油醚、正戊烷或乙醚等。

本发明的方法是一种方法简便、合成路线短、经济的合成方法。

具体实施方式

通过下述实施例将有助于理接解本发明，但并不能限制本发明的内容。

本发明从购得的Boc-保护氨基的天冬氨酸苄酯1出发，通过5步反应合成了目标化合物6o-MBA。

实施实例1

室温搅拌，氮气保护下，化合物1(3.233g，10mmol)，DMAP(122mg，1mmol)溶于叔丁醇(20mL)中配成溶液，然后向其中滴入(Boc)₂O(2.728g，12.5mmol，2.5M)的叔丁醇溶液。滴加完毕后室温搅拌过夜。反应结束后，先将反应液旋干，得到的粘稠液体溶于250mL乙醚中，用饱和氯化铵溶液(200mL)，饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，饱和食盐水(200mL)各洗涤1遍，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析，用石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1淋洗，得到产物1.976g，产率52％。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.34(m，5H)，5.46(d，1H)，5.12(dd，2H，)，4.44(t，1H)，3.00(AB，1H)，2.82(AB，1H)，1.43(s，9H)，1.40(s，9H)ppm。

实施实例2

化合物2(3.952g)溶于20mL乙醇中，加入400mg Pd/C(10％)，在5atm H₂，30℃条件下氢化6h。停止反应，过滤，旋干，得到3.307g白色固体产物3，定量反应。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ5.50(d，1H)，4.46(t，1H)，3.02(AB，1H，)，2.82(AB，1H)，1.45(S，18H)ppm。

实施实例3

室温搅拌下，化合物3(3.307g，11.4mmol)溶于22mL CH₂Cl₂中，依次向其中加入CDI(2.039g，12.5mmol)，NHCH₃(OCH₃).HCl(1.227g，12.5mmol)，Et₃N(1.7mL，12.5mmol)，室温搅拌5h。停止反应，依次用饱和氯化铵溶液，饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到油状产物2.028g，收率54％。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ5.66(d，1H)，4.44(t，1H)，3.67(s，3H)，3.17(s，3H)，3.12(AB，1H，)，2.86(AB，1H)，1.44(S，9H)，1.42(S，9H)ppm。

实施实例4

在冰盐浴冷却，氮气保护下，向邻溴苯甲醚(50mmol，5.8mL)的无水正戊烷(n-Pentane 50mL)溶液中缓慢滴加n-BuLi(1.6M，hexane)(50mmol，31mL)。滴加完毕后，自然升至室温，搅拌3h。然后向反应溶液中加入50mL无水正戊烷，搅拌5min，静置沉淀。用针筒移走上层溶液，留下白色沉淀。反复洗涤3次。洗涤结束后，加入60mL无水乙醚(ether)，得到深黄色溶液试剂(Angent)1(溶液浓度约为0.5M)，用于下一步反应。

实施实例5

在-30℃，氮气保护下，向化合物4(1.742g，5.24mmol)的脱水脱氧乙醚(16mL)溶液中，缓慢滴入Angent 1(33mL)。滴加完毕后，维持-30℃，反应1小时。反应结束后，向体系中加入40mL乙醚，一次用饱和氯化铵溶液(40mL)，饱和碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，得到无色油状产物5(1.240g，)收率62％。

¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ7.79(d，1H)，7.50(m，1H)，7.00(dd，2H)，5.59(d，1H)，4.51(t，1H)，3.93(s，3H)，3.69(AB，1H)，3.50(AB，1H)，1.47(s，18H)ppm。

实施实例6

将379mg(1mmol)化合物5置于25mL蛋形瓶中，加入5mL三氟醋酸(TFA)，室温搅拌4小时。旋干溶剂，加入10mL甲醇溶解粗产物，旋干，如此重复3次。然后加入10mL乙醚，产生沉淀，旋干，得到黄色产物422mg。将得到的粗产物用离子交换柱进行提纯。选用Dowex 50X8-400型离子交换树脂，先将树脂用蒸馏水浸泡一晚，倒掉，用蒸馏水洗涤3次，然后将树脂倒入分离柱中，保持树脂上方有蒸馏水。填好的柱子用1N盐酸洗涤至酸性，用蒸馏水洗涤至中性，用1N氨水洗涤至碱性，重复这一过程。最后用蒸馏水洗涤至中性。用蒸馏水溶解粗产物，上样，先用200mL蒸馏水淋洗，再用1N的氨水淋洗，旋掉氨水，得到208mg产物6，收率93％。

¹H NMR(300MHz，D₂O)：δ7.55(m，2H)，6.98(m，2H)，4.22(t，1H)，3.77(s，3H)，3.67(m，2H)ppm。

Claims

1，一种犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸的合成方法，其特征是通过下述5步合成：

1)，在醇溶剂中和0℃～室温下，化合物1、2-二甲氨基吡啶和叔丁基碳酸酐反应13～12小时获得化合物2；其中，化合物1、2-二甲氨基吡啶和叔丁基碳酸酐的摩尔比为1∶0.1～0.2∶1.0～1.5；

2)，在有机溶剂中、过量氢气存在和0℃～35℃下，化合物2、氢气和催化剂Pd/C(10％)，在400～600MPa压力下氢化1～8小时获得化合物3；其中化合物2和催化剂Pd/C(10％)的重量比为1∶0.008～0.002；

3)，在有机溶剂中和室温，化合物3、1，1′-羰基二咪唑、NHCH₃(OCH₃).HCl和Et₃N反应2～8小时获得化合物4；其中，化合物3、1，1′-羰基二咪唑、NHCH₃(OCH₃).HCl和Et₃N的摩尔比为1∶1～1.5∶1～1.5∶1～5；

4)，在有机溶剂中和-30～-20℃，化合物4和试剂1反应1～2小时获得化合物5；所述的化合物4和试剂1的摩尔比是1∶1～2；所述的试剂1是具有

结构式的化合物；

5)，将化合物5和三氟醋酸在室温反应1～5小时获得化合物6；其中化合物5和三氟醋酸的摩尔比是1∶1～100；

其中化合物1-5的结构式如下；

所述的Boc是叔丁氧羰基。

2，如权利要求1所述的一种犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸的合成方法，其特征是所述的方法1)和2)是在惰性气体保护下进行。

3，如权利要求1所述的一种犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸的合成方法，其特征是所述的有机溶剂是乙醇、叔丁醇、二氯甲烷、二氯乙烷、石油醚、正戊烷或乙醚。

4，如权利要求1所述的一种犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸的合成方法，其特征是所述的方法5)的产物用有机溶剂提取和离子交换柱进行提纯。

5，如权利要求1所述的一种犬尿氨酸酶的特异性抑制剂L-邻甲氧基苯甲酰基丙氨酸的合成方法，其特征是所述的试剂1是由如下方法合成获得：在有机溶剂中、-5℃～室温和氮气保护下，邻溴苯甲醚和正丁基锂反应2～5小时。