CN1309296A - 一种检测化学药物在体内抗癌功效的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属血清学检测技术领域,具体涉及癌症患者经化学药物治疗过程中血清内滞留药物对体外培养癌细胞杀伤效应的检测技术。本发明为通过抗癌化学药物在患者体内不同滞留时间的血清药物对体外培养的癌细胞株的攻击及杀伤作用,以期鉴定各类化疗药物在体内抗癌的功效。本检测技术具有简易、灵敏、特异性强及具有直接临床应用价值的特点,并能为测定体内各类化学合成药物的代谢动力学及其杀伤上皮性癌细胞的效应提供直接证据。

Description

一种检测化学药物在体内抗癌功效的方法

本发明属血清学检测技术领域，涉及一种检测化学药物在体内抗癌功效的方法，具体涉及癌患者经化学药物治疗过程中血清内药物对体外培养的癌细胞的杀伤效应的检测技术。

近二十年来，癌症患者的生存率出现了明显的提高，诸影响因素中包括癌症的早期诊断技术及方法学有了很大的进展。血清肿瘤标志的检测、显像学及纤维胃肠镜的创建，可使肝、肺、胃、肠、乳腺等癌症患者能在早期时发现并得到及时的手术治疗，致使癌症患者的复发及转移减少。另一个重要的因素是随着肿瘤细胞生物学及分子生物学的迅猛发展，使人们对肿瘤细胞生长周期有了充分的认识并在此基础上国内外各大药厂大量生产及构建抑制癌细胞生长各个周期的化学药物，从而使化学药物不再局限于原恶性血液肿瘤患者的治疗而进一步推广在恶性实体瘤患者。近年来肿瘤学家又进一步发展了术前化疗，使原来不可手术的患者成为可能，另外，还开展多种药物联合化疗方案使药物作用于癌细胞不同分裂周期的多个位点，从而使各种异质性癌细胞能及时被不同类型的药物所攻击和杀伤。目前国际上常规的抗癌药物的确立主要是通过观察药物对体外培养癌细胞株及荷瘤动物模型的癌细胞抑制作用，尽管如此，人们可从宏观水平来理介化疗对癌症患者治疗的重要性，但却无法证实各类不同功能的化学药物在癌症患者体内直接杀伤癌细胞的功效以及抑制或功击癌细胞的主要作用点及机理。

本发明的目的是提供一种检测化学药物在体内抗癌功效的方法，企图通过检测经用化疗药物的患者而滞留在血清中药物对体外培养的癌细胞株杀伤的作用，来证实人体内化学药物对癌细胞的直接杀伤功效。同时也可以反映那些药物存在抗癌的作用、杀伤的功效以及在体内抗癌的具体作用时间，以最终确认为化学药物的有效性。

本发明的目的是通过下述技术方案和方法而实现：

(1)制备药物血清：对各种抗癌化疗药物通过静脉注射入癌症患者，分别在给药后半小时、一小时、二小时、四小时及二十四小时等不同的时间内抽取患者全血，经血液凝固后离心而获血清。鉴于所抽取的患者血清内已含有不同浓度的药物或经体内代谢后各类药物的代谢衍生物，将血清置于56°摄氏温度水浴箱内灭活并立即将血清存放于摄氏-80℃深低温冰箱冰冻保存。

(2)检测药物血清抗癌功效：肺癌、肝癌、乳腺癌及肠癌等多种上皮性癌细胞株，在保持37°条件下二氧化碳培养箱内培养一定时间，以癌细胞全部长满于24孔培养盘或培养瓶瓶底。然后，分别将癌症患者给药后不同时间的药物血清与细胞培养液(RPMI-1640)均匀混合，使培液内药物血清浓度保持在10％-20％浓度之间并在该细胞培养液内加入已贴壁的癌细胞进行培养。经培养24小时后，采用倒置显微镜观察细胞生长情况并将细胞取出作细胞流式仪检测通过检测细胞凋亡指数来证实药物血清对癌细胞的攻击作用，本结果可为化学药物在肿瘤患者体内抗癌功效提供有力的实验室依据。

经采用本发明对化疗癌症患者药物血清对体外癌细胞的攻击作用检测，在一定程度上可准确地观察到癌症患者所使用的抗癌药物在体内杀伤癌细胞的功效。更为重要的是通过该方法的检测为临床医生设计各种类型癌症患者所采用不同药物的治疗方案提供极有价值的实验证据。也可为广大制药单位提供一种抗癌药物在体内的药物抗癌功效以及为构建新药的药物动力学及药理学的研究提供一种极有价值的方法学。

实施例1，

对5例不同分期的妇科癌症患者(卵巢癌及宫颈癌)应用化学药物，其中以泰素帝(Taxotere)为主，在静脉给药半小时、一小时、四小时、二十四小时后分别抽取静脉全血5毫升。待血液凝固后离心获血清，取上述药物血清以10％-20％的比例与培养液(RPMI-1640)均匀混合并加入到已长满的SPCA-1肺腺癌细胞株或7721肝癌细胞株的96培养孔或培养瓶内，在二氧化碳培养箱内培养二十四小时并观察癌症患者在不同时间给药的药物血清对体外癌细胞的杀伤作用。经倒置显微镜观察发现以给药一小时的药物血清攻击癌细胞的作用最为明显，可导致原贴壁的培养细胞全部处于悬浮在培液状态并经活体染色发现游离细胞全部死亡。结果证实抗癌药物在进入体内后，约在一小时时药物还能维持其对癌症患者体内癌细胞的杀伤功效，而在四小时或二十四小时之后因体内代谢或排泄而失去其抗癌作用。

实施例2，

采用上述方法先后对30人次进行药物血清检测，实验结果表明给化学药物(泰素帝，Taxotere)一小时的患者药物血清能对体外培养的癌细胞起到杀伤的作用，从而也表明给药一小时之体内所滞留的药物浓度同样存在对体内癌细胞的攻击作用。在次基础上进一步对药物血清作用的体外培养癌细胞采用电镜超微结构观察及细胞流式仪的分析，倒置显微镜显示细胞形态为：细胞培液中未加药物血清的，细胞生长良好，细胞培液中加入药物血清的，细胞大部分脱落。细胞流式仪分析结果为不同时间的药物血清对癌细胞的凋亡作用，其中一小时的血清可引起71.8％体外培养细胞凋亡而四小时的血清已无攻击癌细胞的作用。实验结果证实该药不但在体外能起到对癌细胞株的杀伤作用而引起细胞凋亡作用，体内的药物血清同样也具有引起体外培养的50％-80％癌细胞凋亡功效。

附图说明：

图1为药物血清对体外培养的SPCA-1肺腺癌细胞的攻击作用

其中1为细胞培液中未加药物血清的，细胞生长良好

2为细胞培液中加入药物血清的，细胞大部分脱落

图2为流式细胞仪分析不同时间的药物血清对癌细胞的凋亡作用。

图3为RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2基因m-RNA水平表达。

Claims (4)

1、一种检测化学药物在体内抗癌功效的方法，其特征为通过抗癌化学药物在患者体内不同滞留时间的血清药物对体外培养的癌细胞株的攻击及杀伤作用，鉴定各类化疗药物在体内抗癌的功效。

2、在于按下述步骤进行，(1)制备药物血清：分别在给药后一小时、二小时及四小时等不同的时间内抽取静脉注射各种抗肿瘤化疗药物的患者全血，凝固后离心获血清，置56℃水浴箱灭活，存放于-80℃低温冰箱冰冻保存。(2)药物血清抗癌功效检测：保持37℃在二氧化碳培养箱内培养多种上皮性癌细胞株，长满24孔培养盘，加入含有药物血清的培液24小时培养，观察细胞生长情况及细胞流式仪检测细胞凋亡指数。

3、按权利要求1所述的检测化学药物在体内抗癌功效的方法其特征在于所述的离心后获血清内含有不同浓度的药物或经体内代谢后各类药物的代谢衍生物。

4、按权利要求1或2所述的检测化学药物在体内抗癌功效的方法，其特征在于所述的含药物血清的浓度为10％-20％。

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