CN1299834A - 银杏外种皮多糖及其制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种银杏外种皮多糖及其制剂的制备方法,其特征是将银杏外种皮置于煮提锅中常规加水煎煮2—3次并分别过滤,将滤液合并减压浓缩至比重在1.05—1.20,将浓缩液加入乙醇中,使乙醇终浓度在50—85%,边加边搅动,静置后将沉淀物再用高浓度乙醇洗涤数次后真空干燥或冷冻干燥,此即银杏外种皮多糖粗制品。将银杏外种皮多糖粉碎后加入赋形剂,可制成片剂或胶囊剂等固体剂型。
Description
本发明涉及从银杏外种皮中提取多糖并以此多糖为原料加工成抗肿瘤制剂的工艺。属生化技术领域。
多糖类是生物分布最广的一类化合物。由于其毒副作用小,能提高机体的免疫功能,并抑制肿瘤的生长,故深受各国学者的重视(见《抗肿瘤植物药及其有效成分》,中国中医药出版社,1995年12月第17页)。目前国内研究较多的真菌多糖有香菇多糖、云芝多糖、茯苓多糖及猪苓多糖等;植物多糖有人参多糖、刺五加多糖及枸杞子多糖等。然而,真正用于临床的多糖类药物却很少。这与上述多糖得率较低、中药材消耗较多以及成本相对较高有一定的关系。因此,如何从廉价的、资源丰富的植物中寻找活性多糖应该受到重视。已有人从稻秆和麦秆中提取得到了对动物肿瘤具有抑制作用的半纤维素多糖,这对开发植物多糖的资源具有一定的积极意义。
银杏,又名白果,是我国的特产,盛产于江苏省。《本草纲目》记载,银杏具有“熟食温肺益气,定喘嗽,缩小便,止白浊;生食降痰,清毒杀虫”等功效,是举世闻名的药食同源珍品。我国的白果每年大量出口能创可观的外汇。银杏叶中含有黄铜类化合物等活性成分,已被开发应用于治疗心脑血管疾病。
银杏外种皮,俗称白果衣。多年来人们对其总有些“偏见”,认为会“腐蚀皮肤”,有“臭味”等,故一直被视为嫌弃之物或废弃之物。我们在对银杏外种皮进行综合研究的过程中首先发现了银杏外种皮多糖。研究表明,该多糖是一种α-苷键的肽多糖,对多种肿瘤具有抑制作用,可促进机体的免疫功能,还具有抗衰老活性(见《中药药理与临床》杂志,1996年第5期第24-26页;《中药新药与临床药理》杂志,1996年第3期第21-24页;《中药材》杂志,1996年第9期第466-468页)。动物试验及临床试用过程中均未见任何毒副反应。
本发明的目的在于提供一种从银杏外种皮中提取多糖并加工成抗肿瘤制剂的工艺方法,使银杏资源充分利用,变废为宝,从而得到一种成本低于其它多糖类并对多种肿瘤有效的银杏外种皮多糖制剂。
本发明的目的是这样实现的:
将银杏外种皮置于煮提锅中常规加水煎煮2-3次并分别过滤,将滤液合并减压浓缩至比重在1.05-1.20,将浓缩液加入乙醇中,使乙醇终浓度在50-85%,边加边搅动,静置后将沉淀物再用高浓度乙醇洗涤数次后真空干燥或冷冻干燥,此即银杏外种皮多糖粗制品。
将银杏外种皮多糖粉碎后加入赋形剂,可制成片剂或胶囊剂等固体剂型。
本发明与现有技术相比具有如下优点:
所需原料资源丰富,变废为宝,可增加银杏果农的收入;提取工艺简单可行,多糖的得率及含量皆较高;可降低药物的成本,减轻患者的经济负担;对多种肿瘤的治疗效果较好;毒副作用小。详见以下说明。1.银杏外种皮资源丰富
扬子晚报2000年2月20日A1版陈家根题为“我省银杏的面积占全球一半”的报道中指出:“据省农林厅有关部门最新统计:目前,我省几乎所有市县都有银杏种植,银杏的种植面积已经达到20万公顷,占到全世界的一半,银杏的年产量达到4200吨。”2.各种外种皮多糖的得率及含量皆较高
为了便于表达,现将成熟的银杏剥出白果后的外种皮称“鲜外种皮”,鲜外种皮冷冻贮藏的称“冻外种皮”,鲜外种皮晒干的称“干外种皮”,干外种皮经乙醇浸泡除去醇溶性成分的称“醇外种皮”。上述各种外种皮多糖的得率及含量见表1。
表1比较各种银杏外种皮的多糖得率及含量
外种皮种类 | 多糖得率(%) | 多糖含量(%) |
鲜外种皮 | 6.58 | 84.6 |
冻外种皮 | 6.38 | 82.2 |
干外种皮 | 4.40 | 80.2 |
醇外种皮 | 4.69 | 84.6 |
注:1.因5千克鲜外种皮晒干后约为1千克干外种皮,故表中鲜外种皮
及冻外种皮的多糖得率在原来的基础上扩大了5倍。
2.多糖含量=总糖含量(蒽酮法测定)-还原糖含量(吴宪法测定)
表1结果显示,鲜外种皮与冻外种皮以及干外种皮与醇外种皮的多糖得率相近;而鲜外种皮及冻外种皮的多糖得率明显高于干外种皮及醇外种皮的多糖得率,可能与鲜外种皮在晒干的过程中会流失一部分多糖有关。但上述各种外种皮的多糖得率皆较高。多糖含量也较高,皆在80%以上。3.可降低药物的成本,减轻患者的经济负担
若将该多糖加工成胶囊制剂,每粒含多糖100毫克,现按每次2粒,每天2次口服连续用药1个月计算,需多糖原料为100×2×2×30=12000.(毫克)=12(克)
若按多糖得率为5%计算,需鲜外种皮为12÷5×100×5=1200(克)=1.2(千克),需95%的乙醇为1200×200÷100+500+500=3400(毫升)=3.4(升)
若将煎煮提取所用煤或电气及空心胶囊等费用暂不计算,银杏外种皮按每千克3元,95%的乙醇按每千克8元计算,则上述30天所需药物的成本价为1.2×3+3.4×8=30.8(元),每天约需1元钱,即使加上其它各种费用,每天的药费也应该在2-3元以内,大大减轻了患者的经济负担,一般百姓皆能承受,与现在一般的抗肿瘤中成药每粒2-3元相比较,具有显著性差异。4.对多种肿瘤的临床疗效较好,并能减轻或对抗放疗副反应4.1对上消化道肿瘤的临床疗效观察
选择未经手术及化疗或放疗,自愿单独服用该制剂的食道癌及胃癌患者16例,用药前进行胃镜检查并经病理确诊,用药后一个月、二个月和/或三个月再分别行胃镜检查,测量瘤块大小。结果16例患者用药后,食欲、精神等皆明显改善,疼痛及吞咽梗阻感显著缓解,体重增加。胃镜下测量显示,病灶面积显著缩小,平均抑瘤率为47.5%,其中2例完全缓解。有关统计结果见表2。
表2对上消化道肿瘤患者的抑瘤率及体重的影响
4.2 对上消化道肿瘤瘤细胞的超微结构观察
瘤体(cm2,x±s) | 瘤体抑制率(%) | 体重(kg,x±s) | 体重增长率(%) | |
用药前 | 44.92±42.37 | / | 65.73±6.31 | / |
用药后 | 23.57±27.70 | 47.5 | 67.90±6.76 | 3.3 |
对上述4.1中肿瘤患者服药前后用胃镜取材,固定,超薄切片,进行超微结构观察。电镜观察显示,大多数服用该制剂的患者,瘤细胞细胞核异形性减小,核/质比减小,异染色质增多,并堆积在核膜下,同时出现核固缩、内质网扩张及线粒体空泡化现象。显示该制剂对瘤细胞具有直接杀伤和诱导凋亡作用。4.3对放疗副反应的对抗作用
60Co连续照射,在一定的剂量下会引起食欲减退,甚至恶心、呕吐等消化道反应及白细胞、红细胞、血色素和血小板减少等造血功能抑制反应。我们对32例食道癌患者在进行放射治疗的同时给予该制剂口服,2粒,Bid。结果,患者的消化道反应显著减轻,其中大部分放疗患者用药后比放疗后不用药食欲显著增加。该药对放疗引起的造血功能抑制和体重下降也有对抗作用,有关统计结果见表3。
表3对食道癌患者60Co放疗所致造血功能抑制反应及体重的影响
4.4对恶性肿瘤转移的中医疗效观察
白细胞(109/L) | 红细胞(1012/L) | 血色素(g/L) | 血小板(109/L) | 体重(kg) | |
用药前 | 6.39±2.31 | 4.09±0.63 | 118.9±20.3 | 162.4±71.5 | 54.0±6.7 |
用药后 | 5.49±2.84 | 4.05±0.35 | 118.8±16.0 | 163.3±78.0 | 54.1±8.2 |
选择不适合手术、化疗或放疗以及术后包括已有转移病灶的食道癌、胃癌、结肠癌、肺癌及肝癌等各种肿瘤患者36例,用药前按中医辩证分型,单独服用该制剂,用法同上,一个月为一疗程,连续服用2~3个疗程,需要时可继续服用。结果表明,对气滞血瘀型和痰湿中阻型疗效较好。可使患者症状减轻,精神好转,纳差改善,促进造血及免疫功能,生活质量提高(卡氏评分,治疗前60.56±5.83,治疗后76.67±6.76)。经B超、X线等检查,部分患者瘤体缩小,还能延缓肿瘤转移时间,对已有转移的患者,也能使原发灶和转移灶瘤体缩小,生存期延长。有关癌肿患者用药前后症状和体征变化情况见表4。
表4有关癌肿患者用药前后症状和体征变化情况
4.5抗肿瘤作用机制
治疗前例 数 | 治疗后 | ||||
症状消失 | 明显好转 | 改善 | 无效 | ||
吞咽困难 | 12 | 7 | 3 | 2 | |
癌性疼痛 | 21 | 12 | 5 | 3 | 1 |
腹胀腹泻 | 13 | 9 | 3 | 1 | |
咳吐痰涎 | 8 | 5 | 2 | 1 | |
乏 力 | 19 | 13 | 4 | 2 | |
失 眠 | 9 | 6 | 2 | 1 | |
食 欲 | 36 | 增加26例 | 基本无变化7例 | 减退3例 | |
体 重 | 36 | 增加28例 | 基本无变化6例 | 减轻2例 |
根据临床资料,结合动物试验结果,提示该多糖的抗肿瘤机制可能与促进机体的免疫功能而扶正以及对瘤细胞的直接杀伤作用而祛邪有关。超微结构观察认为,该制剂可诱导瘤细胞凋亡。5毒副反应小5.1急性毒性试验
取ICR小鼠40只,平均分为2组,每组20只,雌雄各半。其中一组给予生理盐水,另一组给予10%的银杏外种皮多糖灌胃,皆为0.4ml/10g(最大容积),给药后观察一周,未发现有小鼠死亡及其它异常表现。体重及进食量见表5
表5银杏外种皮多糖对小鼠体重及进食量的影响
组别 | 剂量 | 动物数 | 体重(g) | 进食量(g) | ||||
(g/kg) | (只) | 用药前 | 用药后 | 第1天 | 第3天 | 第5天 | 第7天 | |
对照组 | / | 20 | 19.8±1.0 | 24.3±1.0 | 42.5 | 49.5 | 48.5 | 56.0 |
多糖组 | 4.0 | 20 | 19.7±1.1 | 24.7±1.2 | 34.5 | 41.0 | 50.5 | 57.8 |
从表5结果看出,给药前两组小鼠体重没有显著性差异,给药后体重皆有所增长。随着体重的增长,进食量也不断增加,虽然给药第一天多糖组小鼠进食量比对照组少,但可能与给小鼠灌喂了大量高浓度的银杏外种皮多糖有关,给药后第5天开始,给药组小鼠的进食量皆多于对照组小鼠。
该制剂临床用量为每天400mg,按60千克体重计算,每天为6.7mg/kg,而动物最大耐受量为4.0g,即4000mg,约是人用量的600倍。5.2临床毒副反应观察
整个用药过程中,病人未反映有任何因该药物引起的不适。经检查,亦未见患者心、肝、肾等重要脏器功能或形态方面的损害。
下面叙述本发明的4个实施例。
实施例1
取新鲜的银杏外种皮100千克,置于煮提锅中加水500千克煎煮,煮开后继续煎煮1小时,用滤筛过出滤液后继续加水重复上述煎煮方法1次并过滤,将2次的滤液合并,于70℃减压浓缩至比重为1.05,将浓缩液加入95%的乙醇中,使乙醇终浓度在60%,边加边搅动,静置4小时后将沉淀物离心甩干,再用80%的乙醇洗涤2次后真空干燥或冷冻干燥,此即银杏外种皮多糖。将银杏外种皮多糖用微粒粉碎机粉碎成干粉,取此干粉1千克,加入糊精1.5千克,拌匀,按每粒250mg装入空心胶囊内,此即银杏外种皮多糖胶囊制剂。
实施例2
取冷冻的银杏外种皮200千克,置于煮提锅中加水1000千克煎煮,煮开后继续煎煮1小时,用滤筛过出滤液后继续加水重复上述煎煮方法1次并过滤,将2次的滤液合并,于70℃减压浓缩至比重为1.10,将浓缩液加入90%的乙醇中,使乙醇终浓度在65%,边加边搅动,静置6小时后将沉淀物离心甩干,再用85%的乙醇洗涤3次后真空干燥或冷冻干燥,此即银杏外种皮多糖。将银杏外种皮多糖用微粒粉碎机粉碎成干粉,取此干粉2千克,加入糊精3千克,拌匀,按每粒125mg装入空心胶囊内,此即银杏外种皮多糖胶囊制剂。
实施例3
取晒干的银杏外种皮50千克,置于煮提锅中加水800千克煎煮,煮开后继续煎煮1.5小时,用滤筛过出滤液后继续加水重复上述煎煮方法1次并过滤,将2次的滤液合并,于70℃减压浓缩至比重为1.15,将浓缩液加入95%的乙醇中,使乙醇终浓度在70%,边加边搅动,静置8小时后将沉淀物离心甩干,再用85%的乙醇洗涤2次后真空干燥或冷冻干燥,此即银杏外种皮多糖。将银杏外种皮多糖用微粒粉碎机粉碎成干粉,取此干粉3千克,加入赋型剂4.5千克,拌匀,按每片250mg制成片剂,此即银杏外种皮多糖片剂。
实施例4
取经高浓度乙醇浸泡过的银杏外种皮100千克,置于煮提锅中加水2000千克煎煮,煮开后继续煎煮1小时,用滤筛过出滤液后继续加水重复上述煎煮方法1次并过滤,将2次的滤液合并,于70℃减压浓缩至比重为1.20,将浓缩液加入95%的乙醇中,使乙醇终浓度在70%,边加边搅动,静置12小时后将沉淀物再用95%的乙醇洗涤2次后真空干燥或冷冻干燥,此即银杏外种皮多糖。将银杏外种皮多糖用微粒粉碎机粉碎成干粉,取此干粉4千克,加入赋型剂6千克,拌匀,按每片125mg制成片剂,此即银杏外种皮多糖片剂。
Claims (2)
1、一种银杏外种皮多糖及其制剂的制备方法,其特征是将银杏外种皮置于煮提锅中常规加水煎煮2-3次并分别过滤,将滤液合并减压浓缩至比重在1.05-1.20,将浓缩液加入乙醇中,使乙醇终浓度在50-85%,边加边搅动,静置后将沉淀物再用高浓度乙醇洗涤数次后真空干燥或冷冻干燥,此即银杏外种皮多糖粗制品。
2、根据权利要求1所述的银杏外种皮多糖及其制剂的制备方法,其特征是将银杏外种皮多糖粉碎后加入赋形剂,可制成片剂或胶囊剂。
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