CN1281983A - 血清总胆汁酸测定试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于血清总胆汁酸测定的组合试剂,包括由含有硝基四唑兰、氧化型辅酶Ⅰ、黄递酶、丙酮酸钠、磷酸缓冲液的溶液构成的试剂Ⅰ;和由含有3α－羟类固醇脱氢酶、人血清白蛋白、EDTA、磷酸缓冲液的溶液构成的试剂Ⅱ,具有不易氧化,稳定性好,能制成冻干品,便于保存、运输,能对TBA进行有效检测,为临床提供多发病肝炎(A、B和C)的诊断、治疗及愈后观察的早期指标。
Description
本发明涉及生化技术及生化检验技术，特别是用于体外定量测定血清中血清总胆汁酸(Total bile acid，TBA)含量的检测技术。用于对肝病的早期诊断指标，亦可作为肝病治疗，愈后观察评价指标。
TBA是肝病早期灵敏的诊断指标，现行肝病检查由不特异试验组成，灵敏度较低，TBA可以提高肝病诊断率，但目前尚无有效的检测方法对TBA进行临床检测。
本发明的目的是提供一种用于检测血清总胆汁酸(TBA)的组合试剂及使用该检测试剂检测血清总胆汁酸的方法，使其能对TBA进行有效检测，使该检测试剂具有不易氧化，稳定性好，能制成冻干品，便于保存、运输，稳定性强，复溶后的试剂于4℃保存半月性能稳定，性能可靠、普通保存条件即可保存，适于临床中应用。
本发明检测试剂的技术原理是：利用3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)，黄递酶将胆汁酸分子脱下的氢传递到受体分子硝基四唑蓝(NBT)，后者还原后生成兰色化合物，供比色分析法检测。 
按比色分析法即可测定出TBA。
本发明提供的用于血清总胆汁酸测定的组合试剂，包括由含有硝基四唑兰、氧化型辅酶Ⅰ、黄递酶、丙酮酸钠、磷酸缓冲液的溶液构成的试剂Ⅰ；和由含有3α-羟类固醇脱氢酶、人血清白蛋白、EDTA、磷酸缓冲液的溶液构成的试剂Ⅱ。试剂Ⅰ、试剂Ⅰ各组分的含量为：
试剂Ⅰ(每升试剂中各组分的含量)：
硝基四唑兰 0．1-1．0g
氧化型辅酶Ⅰ 0．5-5．0mmol
黄递酶 1000-5000u
丙酮酸钠 10-20mmol
磷酸缓冲液 50-100mmol
试剂Ⅱ(每升试剂中各组分的含量)：
3α-羟类固醇脱氢酶 600-2000u
人血清白蛋白 1-10g
EDTA 0．1-2．0mmol
磷酸缓冲液 50-100mmol
TBA是肝病早期灵敏的指标，本发明检测试剂能对TBA进行有效检测，为临床提供多发病肝炎(A、B和C)的诊断、治疗及愈后观察的早期指标。由于本发明提供的检测试剂及检测方法采用酶偶联的原理，调整辅助酶与指示酶活性的比例和显色剂的用量，使反应速度达到零级反应，试剂的成份及用量少，污染低；由于采用了合适保存酶及保护试剂组分，使得本发明试剂具有不易氧化，稳定性好，能制成冻干品，便于保存、运输，稳定性强，复溶后的试剂于4℃保存半月性能稳定，性能可靠、普通保存条件即可保存，适于临床中应用。
附图1是本发明实施例的标准曲线。
实施例
1．制备检测试剂
(1)取：硝基四唑兰 0．2g
氧化型辅酶Ⅰ 1．0mmol
黄递酶 3000u
丙酮酸钠 12mmol
磷酸缓冲液 65mmol
配置成1升溶液制成试剂Ⅰ；
(2)取：3-α-羟类固醇脱氢酶 1000u
人血清白蛋白 5g
EDTA 0．77mmol
磷酸缓冲液 65mmol
配制成1升溶液制成试剂Ⅱ。
2．制备TBA标准品：将甘氨胆酸钠溶于含有1．2g％的含有激活因子的牛血清(购于美国朗道公司)制成50μmol／L标准品，每安瓿2．0ml，制成冻干品，使用前加纯水2．0ml复溶放置30分钟后使用。
3．检测操作
| 样品空白 样品 标准空白 标准 |
| 血清 200ul 200ul |
| 标准 200ul 200ul |
| 试剂I 1600ul 1600ul 1600ul 1600ul |
| 混匀37℃保温5分钟，加入 |
| 试剂Ⅱ 400ul 400ul |
| 蒸馏水400ul 400ul |
4．计算及正常值血清总胆汁酸
正常值 0-10umol／l
5．标准曲线
本发明实施例标准曲线载于说明书附图，该标准曲线是在法国Falcor全自动生化分析仪中测定制作的。
根据本实验室条件，可选用手工测定或全自动生化分析仪，修改实验参数使试剂Ⅰ∶试剂Ⅱ∶样本=8∶2∶1。
Claims (4)
1．一种用于血清总胆汁酸测定的组合试剂，其特征在于它包括由含有硝基四唑兰、氧化型辅酶Ⅰ、黄递酶、丙酮酸钠、磷酸缓冲液的溶液构成的试剂Ⅰ；和由含有3α-羟类固醇脱氢酶、人血清白蛋白、EDTA、磷酸缓冲液的溶液构成的试剂Ⅱ。
2．根据权利要求1所述的血清总胆汁酸测定试剂，其特征在于所述的试剂Ⅰ、试剂Ⅱ中各组分的含量为：
(1)每升试剂Ⅰ中各组分的含量：
硝基四唑兰 0．1-1．0g
氧化型辅酶Ⅰ 0．5-5．0mmol
黄递酶 1000-5000u
丙酮酸钠 10-20mmol
磷酸缓冲液 50-100mmol
(2)每升试剂Ⅱ中各组分的含量：
3α-羟类固醇脱氢酶 600-2000u
人血清白蛋白 1-10g
EDTA 0．1-2．0mmol
磷酸缓冲液 50-100mmol
3．根据权利要求1或2所述的血清总胆汁酸测定试剂，其特征在于所述的试剂Ⅰ、试剂Ⅱ中各组分的含量为：
(1)每升试剂Ⅰ中各组分的含量：
硝基四唑兰 0．2g
氧化型辅酶Ⅰ 1．0mmol
黄递酶 3000u
丙酮酸钠 12mmol
磷酸缓冲液 65mmol
(2)每升试剂Ⅱ中各组分的含量：
3α-羟类固醇脱氢酶 1000u
人血清白蛋白 5g
EDTA 0．77mmol
磷酸缓冲液 65mmol
4．一种血清总胆汁酸的测定方法，其特征在于使用了权利要求1至3中任一项所述的血清总胆汁酸测定试剂。
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| CN 99116566 CN1281983A (zh) | 1999-07-26 | 1999-07-26 | 血清总胆汁酸测定试剂 |
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| CN1281983A true CN1281983A (zh) | 2001-01-31 |
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