CN1274837C - 化合物α－硫甲基－二酮哌嗪A4及其制备方法 - Google Patents
化合物α－硫甲基－二酮哌嗪A4及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1274837C CN1274837C CN 200410055358 CN200410055358A CN1274837C CN 1274837 C CN1274837 C CN 1274837C CN 200410055358 CN200410055358 CN 200410055358 CN 200410055358 A CN200410055358 A CN 200410055358A CN 1274837 C CN1274837 C CN 1274837C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- thiomethyl
- diketopiperazine
- solid
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4及其制备方法，涉及一种真菌代谢产物，尤其是一种利用新分离获得的阜孢霉A4-Z-1代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4(Mycodiketopiperazine)。其步骤为菌种接种于培养基中至发酵，发酵液经过滤去菌，收集上清分装后萃取，收集有机相浓缩；取硅胶用石油醚拌匀装柱洗脱平衡至硅胶的沉降不再变动，用洗脱溶剂系统洗脱，浓缩，洗涤，离心，收集固体；固体用甲醇加热溶解，重结晶，得化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4。可作为抗肿瘤药物或其他生物活性的先导物。
Description
技术领域
本发明涉及一种真菌代谢产物，尤其是一种利用新分离获得的阜孢霉A4-Z-1代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4(Mycodiketopiperazine)。
背景技术
阜孢霉(Papularia sp.)分离于土壤，腐生，为一般土壤真菌。文献([美]H.L.巴尼特，B.B.亨特著(沈崇尧译)：《半知菌属图解》，北京：科学出版社，1977)上报道该属真菌为植物兼性寄生菌。该菌株在PDA(马铃薯琼脂培养基)培养基上生长良好，菌丝灰褐色絮状，分生孢子梗明显，但较短，无色或成熟时淡褐色，直立少分支。分生孢子暗色，单孢，卵圆形，少数近球形，在分生孢子梗顶端单生或簇生。
发明内容
本发明的目的在于提供一种结构新颖，前未发现的利用新分离获得的阜孢霉A4-Z-1代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4及其制备方法。
本发明的另一目的在于将化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4作为抗肿瘤药物或其他生物活性的先导物。
本发明所采用的真菌为本申请发明人从福建沙溪河附近的黄磷口(地名)的土壤中分离得到的菌株A4-Z-1，经鉴定为阜孢霉(Papularia sp.)。该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，登记入册的保藏编号为CCTCC NO：M 204036，保藏的培养物名称及注明的鉴别特征为阜孢霉Papularia sp.，保藏日为2004年5月25日。
本发明所说的真菌代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的结构式为
本发明所说的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的制备方法为
1)液体培养及发酵液处理：取斜面上菌种接种于液体培养基中培养至发酵，发酵液经过滤，除去菌体，收集发酵液，分装后加入乙酸乙酯萃取，收集萃取所得的有机相浓缩；
2)化合物的分离：取质量为上样量30～50倍的硅胶，用石油醚拌匀后装柱洗脱平衡至硅胶的沉降不再变动，用洗脱溶剂系统，按极性从小到大的顺序进行洗脱，收集浓缩。发现有固体析出的收集管中，用乙酸乙酯洗涤，离心，收集固体；
3)固体用甲醇加热至溶解，重结晶，得到方形薄片无色透明晶体，制得的真菌代谢产物即为化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4。
在步骤2)中所说的洗脱溶剂系统可选择石油醚/7酸乙酯。
化合物的分析可进行晶体X-Ray测试，其余部分进行NMR，IR，MS，生物活性等测试。
根据NMR数据、晶体数据、ESI和HREI质谱数据及IR数据，对化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4进行结构鉴定，可确定化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的结构。根据对化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的生物活性测定，利用细胞毒MTT法2测定化合物的抗肿瘤活性，发现其对人口腔皮样癌KB细胞IC50＝120微克/毫升，研发为抗肿瘤药物或其他生物活性的先导物，由此证明，化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4具有抗肿瘤活性。
附图说明
图1为本发明的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的分子结构图。
具体实施方式
实施例1
取斜面上菌种接种子PDA液体培养基中28℃，160rpm培养7d至发酵，发酵液经8层纱布过滤，除去菌体，收集上清，将收集到的上清分装于5L三角瓶中(2L/瓶)，加入等体积乙酸乙酯萃取12h；收集有机相，合并两次萃取所得的有机相，用旋转蒸发仪40℃减压浓缩。取质量为上样量的40倍的硅胶，用石油醚拌匀后装柱，柱内径选为5cm，柱长为50～70cm，用石油醚洗脱平衡至硅胶的沉降不再变动；用硅胶拌样后上柱，用石油醚/乙酸乙酯洗脱溶剂系统，按极性从小到大的顺序，选择不同的梯度进行洗脱，每个梯度为2～3倍柱床体积，洗脱液每150mL收集1管。浓缩第17管，发现有固体产生(约50mg)，用乙酸乙酯洗涤，离心，收集固体。固体用甲醇加热至溶解，重结晶，得到方形薄片无色透明晶体(都是小晶体)。小晶体进行X-Ray测试，其余部分进行NMR，IR，MS，生物活性等测试，保存。
化合物的结构鉴定可采用以下办法：基于各种NMR谱图分析可知，13C NMR谱图中的10个信号分别为1个甲基，1个次甲基，5个含单质子的C，一个羰基C，一个二取代的烯碳；1H NMR和1H-13C COSY谱显示9个信号，包括1个甲基，1个亚甲基(裂分成两个信号)，1个烯烃H，一个OH，2个环氧碳H，一个季碳H，1个连OH的季碳H；进一步由1H-13H COSY谱确证，甲基单峰，由化学位移推测为硫甲基。亚甲基(3A，3B)裂分的信号自己相互偶合，旁边相连碳无质子(C2，C4)。连OH的季碳(C6)和单取代烯烃碳(C5)，环氧碳相连(C7)。由ESI质谱(473.0[M+Na]+)和HREI高分辨质谱推测该分子为对称结构。另外红外光谱也同时确证了环氧(1257cm-1，837cm-1)，OH(3409cm-1)，烯烃(814cm-1)，酰胺键(1663cm-1，3268cm-1)，硫甲基(1311cm-1)的存在。
化合物1H和13C NMR数据见表1。
表1化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A41H和13C NMR数据
| Assignment | δC | δH(multiplicity，JH/H HZ) | 1H-1H COSY |
| 1 | 165.82(q) | ||
| 2 | 71.20(q) | ||
| 3 | 39.50(s) | 2.81(HA d)14 | 3B |
| 3.01(HB d)14 | 3A | ||
| 4 | 133.61(q) | ||
| 5 | 124.17(t) | 5.80(1H d)5 | 6 |
| 6 | 61.79(t) | 4.45(1H dd)5，4，8 | 5，7(OH) |
| 7 | 53.12(t) | 3.38(1H m)4，4 | 6，8 |
| 8 | 57.50(t) | 3.62(1H d)4 | 7 |
| 9 | 55.52(t) | 4.23(1H s) | |
| 10 | 13.87(p) | 2.08(3H s) | |
| OH | 5.0(1H d)8 | 6 |
a.化合物溶于DMSO氘代试剂中，氢谱由TMS做内标；
b.字母p，s，t，q分别代表伯，仲，叔，季碳，由DEPT图确定。
化合物的绝对构型：化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的绝对构型通过1H-1H偶合常数和单晶衍射2，3确定。在1H-1H COSY谱中，H-8与H-9没有偶合，表明他们分别在环的两侧；H-8与H-7有偶合(JH-8/H-7＝4Hz)，而H-9和H-7不存在偶合，则可确定H-8与H-7在同侧，而H-9与环氧键同侧；H-6和H-7(JH-6/H-7＝4Hz)，H-5(JH-6/H-5＝5Hz)，OH(JH-6/OH＝8Hz)都存在偶合，推测H-6与H-7同侧。该化合物的立体构型进一步由单晶衍射确证，如图1所示。晶体数据参见表2。
表2化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的晶体学参数
| CCDC number | 240904 |
| Empirical formula | C20H22N2O6S2·C2H5OH |
| Formula weight | 450.53 |
| Temperature(K) | 273(2)K |
| Crystal size | 0.32×0.30×0.05mm |
| Crvstal system | Tetragonal |
| space group | P212121 |
| Unit cell dimensions | |
| a/ | 9.469(3) |
| b/ | 9.469(3) |
| c/ | 23.915(6) |
| α/° | 90 |
| β/° | 90 |
| γ/° | 90 |
| Volume，3 | 2144.1(8) |
| Z | 4 |
| d，Mg/m3 | 1.538 |
| F(000) | 1048 |
| Diffractometor | Bruker APEX area-detector |
| θrange，deg | 1.70to28.27 |
| Limiting indices | -12＜＝h＜＝10， |
| Reflections collections | 12979/4957[R(int)＝0.0405] |
| Independent reflections | 4957 |
| Data/restraints/parameters | 4957/2/298 |
| Goodness-of-fit on F2 | 1.190 |
| R indices[I＞2σ(I)] | R1＝0.0612，wR2＝0.1523 |
| R indices(all data) | R1＝0.0650，wR2＝0.1545 |
| Refinement methods | Full-matrix least-squares on F＾2 |
| Largest diff.Peak/hole(e -3) | 0.474and-0.647 |
根据NMR数据、晶体数据、ESI和HREI质谱数据及IR数据，可确定上述化合物的结构。
利用细胞毒MTT法4测定上述化合物的生物活性，发现其对人口腔皮样癌KB细胞IC50＝120微克/毫升，可研发为抗肿瘤药物或其他生物活性的先导物。
实施例2
与实施例1类似，其不同在于取斜面上菌种接种于PDA液体培养基中26℃，180rpm培养8d至发酵，加入的乙酸乙酯萃取液为发酵液的1.2倍，萃取3次。在分离化合物时，硅胶的质量为上样量30倍。
实施例3
与实施例1类似，其不同在于取斜面上菌种接种于PDA液体培养基中30℃，150rpm培养6d至发酵，加入的乙酸乙酯萃取液为发酵液的0.8倍。在分离化合物时，硅胶的质量为上样量50倍。
Claims (3)
1、一种用真菌代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4，所说的真菌为阜孢霉(Papulariasp.)A4-Z-1，登记入册的保藏编号为CCTCC NO：M 204036，株号为A4-Z-1，其特征在于所说的真菌代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的结构式为
2、如权利要求1所述的一种用真菌代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的制备方法，其特征在于其步骤为
1)液体培养及发酵液处理：取斜面上菌种阜孢霉A4-Z-1接种于液体培养基中培养至发酵，发酵液经过滤，除去菌体，收集上清，分装后加入乙酸乙酯萃取，收集萃取所得的有机相浓缩；
2)化合物的分离：取质量为上样量30～50倍的硅胶，用石油醚拌匀后装柱洗脱平衡至硅胶的沉降不再变动，用洗脱溶剂系统，按极性从小到大的顺序进行洗脱，浓缩，发现有固体产生时，用乙酸乙酯洗涤，离心，收集固体；
3)固体用甲醇加热至溶解，重结晶，得到方形薄片无色透明晶体，制得的真菌代谢产物即为化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4。
3、如权利要求2所述的一种用真菌代谢产生的化合物α-硫甲基-二酮哌嗪A4的制备方法，其特征在于在步骤2)中所说的洗脱溶剂系统为石油醚/乙酸乙酯。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410055358 CN1274837C (zh) | 2004-08-31 | 2004-08-31 | 化合物α－硫甲基－二酮哌嗪A4及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410055358 CN1274837C (zh) | 2004-08-31 | 2004-08-31 | 化合物α－硫甲基－二酮哌嗪A4及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1667126A CN1667126A (zh) | 2005-09-14 |
| CN1274837C true CN1274837C (zh) | 2006-09-13 |
Family
ID=35038406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200410055358 Expired - Fee Related CN1274837C (zh) | 2004-08-31 | 2004-08-31 | 化合物α－硫甲基－二酮哌嗪A4及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1274837C (zh) |
-
2004
- 2004-08-31 CN CN 200410055358 patent/CN1274837C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1667126A (zh) | 2005-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110452247B (zh) | 一种杂萜化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109336873B (zh) | 化合物lithocarolsA-F及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN109232513B (zh) | 化合物lithocarpinols及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN112592350A (zh) | 聚酮类化合物lithocarpin E-G及其制备方法和应用 | |
| CN104694401A (zh) | 纯绿青霉菌株及用其生产麦角甾醇过氧化物的方法 | |
| WO2022247618A2 (zh) | 具有抗新冠病毒活性的聚酮类化合物的制备及其应用 | |
| CN112300243B (zh) | 一种环肽化合物及其制备方法和应用 | |
| CN100422190C (zh) | 抗肿瘤化合物去乙酰真菌环氧乙酯及其制备方法 | |
| CN1274837C (zh) | 化合物α－硫甲基－二酮哌嗪A4及其制备方法 | |
| CN105441504B (zh) | 一种环二肽类化合物的制备方法 | |
| CN109985044B (zh) | 白桦醇及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN101481379B (zh) | 银杏内生真菌菌株发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离的化合物 | |
| CN114213428B (zh) | 一种吲哚生物碱化合物及其制备方法和应用 | |
| CN114409627B (zh) | 一种抗炎化合物Dalditone A及其制备方法和应用 | |
| CN102757443B (zh) | 硫取代鬼臼类衍生物及其生物转化和分离纯化方法 | |
| CN102234669B (zh) | 4-(2，3，5，6-四甲基吡嗪-1-基)-4′-去甲表鬼臼毒素的生物转化及分离纯化方法 | |
| CN111808088B (zh) | 化合物tersaphilone B和E及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN102051394A (zh) | 一种硫代二酮哌嗪类化合物制备方法及其应用 | |
| CN110527631B (zh) | 海洋真菌hk1-22来源的不饱和脂肪酸类化合物、制备方法及其应用 | |
| CN110452940A (zh) | 一种链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法 | |
| CN100478344C (zh) | 一种用菜豆间座壳菌真菌代谢的化合物的应用 | |
| CN115894519B (zh) | 一种三肽生物碱化合物及其制备方法和应用 | |
| CN105837590A (zh) | 具有抗白色念珠菌活性的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN110092794A (zh) | 球毛壳菌qy-1分离提取球毛壳菌素a的方法及应用 | |
| CN1291029C (zh) | 一种用菜豆间座壳菌真菌代谢的化合物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20060913 Termination date: 20100831 |