CN1273113A - 土贝母苷乙用于制备预防和治疗肿瘤的药物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及土贝母苷乙及含土贝母苷乙的土贝母皂苷用于制备预防和治疗肿瘤的药物。苷乙是从土贝母中提取出来的一种化学成分,是土贝母苷甲的天然衍生物;土贝母皂苷是不含土贝母苷丙的土贝母中的皂苷组分。苷乙和皂苷表现了特别的抗炎症作用,能显著抑制人恶性肿瘤细胞和小鼠移植性肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠生存期,对HL－60细胞有诱导分化效果,能对抗促癌剂对小鼠皮肤肿瘤发生的促进作用。苷乙和皂苷可用于预防和治疗哺乳动物,特别是人的各种肿瘤。

Description

土贝母苷乙用于制备预防和治疗肿瘤的药物

本发明涉及用土贝母苷乙及含土贝母苷乙的土贝母皂苷制备预防和治疗肿瘤的药物。

众所周知，恶性肿瘤是一种严重危害健康的常见病、多发病。统计结果表明，恶性肿瘤是仅次于心脑血管疾患的人类第二大死因。对于恶性肿瘤，常规方法有外科手术治疗、放射治疗、化学药物治疗和生物调节剂治疗等。目前常用化疗药物多有较强的副作用，而天然有效抗肿瘤药物不仅价昂，临床使用中病人难以承受，且有些原料多属稀有保护物种。

在中国专利说明书94104124.7，95113751.4中描述了土贝母苷乙的天然衍生物土贝母苷甲主治阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂、宫颈息肉、直肠炎、直肠癌等。土贝母苷甲还能杀伤白血病细胞并对白血病细胞有诱导分化作用。上述专利申请在此作为参考。

土贝母苷乙是从中药土贝母中分离出来的一种单体有效成分，分子式为C₆₃H₉₈O₃₀，分子量为1334，化学结构见图1。它与土贝母苷甲的区别是：土贝母苷甲苷元16位碳上是氢，而土贝母苷乙苷元16位碳上是羟基。土贝母苷乙与土贝母苷甲一样，水溶性好、稳定性强，唯得率较苷甲低(苷乙约0.5％，苷甲约1.8％)。土贝母皂苷系指不含土贝母苷丙的土贝母中的皂苷组分，它的制备工艺简单易行，得率也较高，约2.2％。

土贝母苷乙或土贝母皂苷的提取方法参见文献(王永清、于立坚等：陕西新医药，10：55，1981；Kasai，Ret al.，Phytochemistry，27：1439-1446，1988)

本发明涉及土贝母苷乙或土贝母皂苷作为预防和治疗各种肿瘤的药物组合物，该药物组合物包括土贝母苷乙或土贝母皂苷及可药用的载体。

本发明涉及如权利要求1所定义的药物组合物的制备方法，该方法包括土贝母苷乙或土贝母皂苷单独与可药用的载体混合或溶解。

本发明涉及土贝母苷乙或土贝母皂苷作为预防和治疗各种恶性肿瘤药物在需要进行这种预防或治疗的哺乳动物中的应用。

土贝母苷乙或土贝母皂苷可与任何可药用的载体混合或溶解，如经皮肤、粘膜、胃肠内和胃肠外给药的可药用载体。该药物组合物以常规药用制剂的形式使用，如固体形式的片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、扁囊剂、拴剂等，或半固体形式的油膏、软膏等，或液体形式的针剂、悬浮剂、糖浆剂、乳剂、搽剂等。该药物组合物中使用可药用的赋形剂和添加剂，这些可药用的赋形剂和添加剂包括无毒的可相容的填料、粘合剂、崩解剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、矫味剂、增稠剂、着色剂、乳化剂、稳定剂等。如乳糖、柠檬酸、硬脂酸、硬脂酸镁石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、花生油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因、抗坏血酸等。该药物组合物可按各种制剂的常规工艺制备。

本发明涉及土贝母苷乙或土贝母皂苷作为预防恶性肿瘤的药物，可作为食品添加剂、化妆品添加剂加入到食品或化妆品中，亦可作为药物组合物治疗各种癌前病变，如食道增生、外阴白斑、萎缩性胃炎、慢性宫颈炎、宫颈息肉、直肠息肉等。

本发明涉及土贝母苷乙或土贝母皂苷作为治疗恶性肿瘤的药物组合物，可用于白血病，亦可用于各种实体形肿瘤，如食道癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、鼻烟癌、口腔癌、唇癌、皮肤癌、膀胱癌、绒毛膜上皮癌、腮腺瘤、淋巴瘤、骨瘤、黑色素瘤和各种颅内肿瘤等。所制成的各种口服药物组合物中土贝母苷乙或土贝母皂苷的含量为每日每kg体重大约0.001-100mg，优选约0.01-50mg，更优约0.05-30mg，最佳约0.1-10mg。每日分2-4次服用，10-30天为一疗程，一般用药3-6个疗程，每个疗程间隔10-30天。所制成的注射用药物组合物，可供肌肉注射或静脉点滴，其中土贝母苷乙或土贝母皂苷的含量为每日每kg体重0.001-50mg，优选约0.01-25mg/kg，更优约0.05-15mg，最佳约0.1-3mg。每日分1-3次使用，10-30天为一疗程，一般用药3-6个疗程，每个疗程间隔10-30天。然而，精确的剂量应由医生确定，主要取决于病人的年龄、体重、病情、反应等。

我们在实验中发现，土贝母苷乙或土贝母皂苷表现出特别的抗炎症作用，能显著抑制人恶性肿瘤细胞和小鼠移植性肿瘤的生长，延长荷瘤小鼠生存期，对人早幼粒白血病细胞(HL-60细胞)有诱导分化效果，能对抗促癌剂对小鼠皮肤肿瘤发生的促进作用。

下面列举实验内容及其结果，作为土贝母苷乙或土贝母皂苷可用于制备各种预防和治疗恶性肿瘤药物的证据。一.药效试验

1.抗炎性水肿试验

在7周龄雌性ICR小鼠耳廓两面涂布12-O-十四酰佛波-13-乙酸酯(以下简称TPA，2μg溶于20μl丙酮)诱发水肿。涂布TPA之前30分钟局部应用不同浓度的土贝母苷乙溶液。试剂对照组仅涂布同体积的溶剂(丙酮)。在TPA处理5小时后用游标卡尺测量鼠耳厚度，精确到0.01，耳水肿用耳的厚度增加来表示。上述实验条件下TPA处理5小时后鼠耳厚度增加达到最大值。土贝母苷乙的用量分为4个剂量组：7.5×10^-3μmol/耳、3.7×10^-2μmol/耳、7.5×10^-2μmol/耳、1.1×10^-1μmol/耳。结果表明，土贝母苷乙对TPA诱发的鼠耳水肿有明显的抑制效果(见表1)，而且量效依赖关系显著。土贝母皂苷的抗炎性水肿效果略逊于土贝母苷乙，但优于土贝母苷甲(资料未显示)。土贝母苷乙对鼠耳炎性水肿的抑制率按下式计算：

表1土贝母苷乙局部应用对TPA诱发的鼠耳炎性水肿的抑制作用实验条件              鼠耳厚度的增加     抑制率       P值^b       P值^c

                   (×10^-2mm)^a      (％)对照(TPA 2μg/耳)      10.6±0.76土贝母苷甲7.5×10-3μmol/耳       7.8±0.51         24.8      ＜0.053.7×10-2μmol/耳       6.8±0.48         35.2      ＜0.017.5×10-2μmol/耳       5.6±0.55         46.7      ＜0.0011.1×10-1μmol/耳       1.8±0.22         83.8      ＜0.001土贝母苷乙7.5×10-3μmol/耳       6.8±0.48         38.1      ＜0.01      ＞0.053.7×10-2μmol/耳       4.6±0.43         59.0      ＜0.001     ＜0.017.5×10-2μmol/耳       1.6±0.34         86.3      ＜0.001     ＜0.0011.1×10-1μmol/耳       0.0±0.23         100.0     ＜0.001     ＜0.05a、平均值±标准误。b、P值(t检验)，与对照组比较。c、P值(t检验)，与相同剂量土贝母苷甲组比较。

2.对人恶性肿瘤细胞生长的抑制作用

试验药物：土贝母苷乙

试验瘤株：人早幼粒白血病细胞(HL-60)。

试验方法：将HL-60细胞接种于直径为35mm的塑料小碟内，培养基为含有10％胎牛血清的1640，置于37℃、湿度饱和、95％空气、5％二氧化碳的孵育箱中培养。把不同浓度的土贝母苷乙溶液加入培养基内，分别观察对瘤细胞生长的抑制效果。与此同时，加入相同体积的无菌生理盐水于同样的培养物中作对照实验。加入土贝母苷乙后1-3天内，每天用台盼蓝法计数活细胞数。

试验结果：图2表示土贝母苷乙对HL-60细胞株生长的抑制效果。土贝母苷乙对HL-60细胞生长的抑制作用优于土贝母苷甲(参见专利CN 1146895A)。土贝母皂苷对HL-60细胞株生长的抑制作用略逊于土贝母苷乙，但优于土贝母苷甲(资料未显示)。

3.对小鼠可移植性肿瘤生长及动物生存期的影响

试验药物：土贝母苷乙

试验动物：BALB/c小鼠

试验肿瘤：小鼠可移植性肉瘤180(S₁₈₀)、艾氏腹水癌(Ehrlich ascitescarcinoma)。

试验方法：随机分组。各组小鼠于实验开始日称体重并在左鼠蹊皮下或腹腔内注射10⁷个肿瘤细胞。接种后第二天开始肌肉或腹腔注射不同浓度的土贝母苷乙溶液。阴性对照组和阳性对照组接种相同数目瘤细胞，同时肌肉或腹腔注射相同体积的无菌生理盐水或5-氟尿嘧啶溶液或土贝母苷甲溶液。皮下接种肿瘤细胞后5-6日可扪及瘤块。皮下接种肿瘤细胞后13日，称体重后引颈处死小鼠、完整剥离肿瘤称重。计算各组平均瘤重及其标准误。抑瘤率按下式计算：抑瘤率(％)＝(1-A/B)×100

其中A代表试验组的平均瘤重，B代表对照组的平均瘤重。

腹腔接种瘤细胞者，记录荷瘤动物的死亡情况，直至肿瘤接种后35天。

试验结果：表2显示土贝母苷乙对动物肿瘤生长的影响。表3显示土贝母苷乙对荷瘤动物生存期的延长。土贝母皂苷对动物肿瘤生长的抑制作用和对荷瘤动物生存期的延长效果略逊于土贝母苷乙，但优于土贝母苷甲(资料未显示)。表2：土贝母苷乙对小鼠移植性肿瘤肉瘤180(S₁₈₀)生长的抑制作用

       动剂量(mg/组别       物  Kg/日            体重^b(g)         瘤重^b(g)    抑瘤率^c   P^d

       数  ×日数)^a   处理前      处理后                   (％)对    照   10            18.5±0.31  19.6±0.54  2.68±0.285-氟尿嘧啶 10  3×12     18.6±0.28  18.6±0.95  1.95±0.24     27.2    ＜0.05土贝母苷甲 10  1×12     18.5±0.24  20.0±0.61  2.06±0.25     23.3    ＜0.05土贝母苷甲 10  2×12     18.5±0.24  19.3±0.57  1.85±0.13     31.3    ＜0.05土贝母苷甲 10  3×12     18.7±0.36  18.1±0.55  1.26±0.31     52.9    ＜0.01土贝母苷乙 10  1×12     18.4±0.19  20.2±0.43  1.52±0.21     43.3    ＜0.01土贝母苷乙 10  2×12     18.5±0.24  19.2±0.52  1.35±0.17     49.8    ＜0.01土贝母苷乙 10  3×12     18.5±0.27  18.0±0.47  1.07±0.13     60.1    ＜0.001a、腹腔用药。b、平均值±标准误。c、抑瘤率(％)＝(1-A/B)×100，A代表实验组的平均瘤重，B代表对照组的平均瘤重。d、P值(t检验)，与对照组比较。表3  土贝母苷乙对荷瘤BALB/c小鼠生存期的影响

                       剂量^a(mg/Kg/

                                        小鼠数              平均生存日数瘤    种      组      别

                                                                          T/C^b

                         日×日数

                                         (只)                (均值±SD)艾氏腹水癌    对      照         0            20                 18.13±3.24

          土贝母苷乙     2.5×10          20                 32.52±4.16  1.79

          土贝母苷甲     2.5×10          20                 27.20±3.11  1.50S180          对      照         0            20                 14.40±1.88

          土贝母苷乙     2.5×10          20                 27.60±3.64  1.92

          土贝母苷甲     2.5×10          20                 20.30±1.95  1.41a.腹腔接种瘤细胞后隔日肌肉注射药液。b.T/C：其中T代表实验组的平均生存日数，C代表对照组的平均生存日数。

4.对HL-60细胞的诱导分化作用

试验药物：土贝母苷乙

试验方法：在HL-60细胞培养液中加入2.4μmol/L的土贝母苷乙水溶液，按2所述的条件培养5天，观察形态变化，并对HL-60细胞进行氮蓝四唑(NBT)还原试验，酵母多糖吞噬试验，以及非特异性酯酶染色试验。对照组分为阳性对照和阴性对照组。在HL-60细胞培养液中加入1mmol/L维甲酸或2.4μmol/L的土贝母苷甲水溶液，并按实验组的方法进行实验，即为阳性对照。

试验结果：与土贝母苷乙共同孵育的HL-60细胞分化后的细胞形态类似正常晚幼粒细胞，非特异性酯酶染色阴性，而阴性对照组被诱导分化的细胞不超过6％。试验结果(见表4)表明，土贝母苷乙对HL-60细胞有诱导分化效果。土贝母皂苷对HL-60细胞的诱导分化效果略逊于土贝母苷乙，但优于土贝母苷甲(资料未显示)。表4  土贝母苷乙对HL-60细胞的诱导分化作用^a组别      培养        晚幼粒细胞或中性       氮蓝四唑还原         酵母多糖吞噬率

         天数          粒细胞(％)^b            (％)^b                 (％)^b对照        3            4.44±0.41           5.77±0.50            2.97±0.21

           5            4.74±0.35           6.21±0.42            3.75±0.34维甲酸       3           68.27±8.11          65.57±6.60           63.56±6.14(1mmol/L)      5           65.26±5.08          52.06±4.55           61.54±4.68土贝母苷乙     3           33.40±2.98          27.35±2.56           32.46±3.86(2.4μmol/L)   5           65.56±5.21          57.89±6.86           44.86±3.76土贝母苷甲     3           28.60±3.35          22.84±2.64           28.96±4.49(2.4μmol/L)   5           60.84±3.64          53.16±6.33           40.58±3.76a.三份平行试验的平均结果。b.平均值±标准误。二.毒理试验

1.急性毒性试验

选用ICR小鼠用肌肉和腹腔注射给药法进行试验。

试验结果：肌肉注射土贝母苷乙的LD₅₀为45.66mg/Kg，土贝母苷甲的LD₅₀为40.28mg/Kg，土贝母皂苷的LD₅₀为42.36mg/Kg。腹腔给药的土贝母苷乙的LD₅₀为20.9mg/Kg，土贝母苷甲的LD₅₀为18.7mg/Kg。，土贝母皂苷的LD₅₀为19.6mg/Kg。

2.对正常培养细胞的毒性作用

采用比色法测试了土贝母苷乙对体外培养的T-淋巴母细胞样细胞株(MT-2细胞)的毒性作用，试验结果(见表5)表明，当土贝母苷乙的浓度由80μg/ml降至40μg/ml时，细胞毒性显著下降，浓度低于40μg/ml时，毒性很低。土贝母乙细胞毒的CD₅₀为68μg/ml，土贝母苷甲细胞毒的CD₅₀为59μg/ml。土贝母皂苷细胞毒的CD₅₀为64μg/ml。表5土贝母苷乙对MT-2细胞的毒性作用

                        浓度(μg/ml)                细胞中毒百分率(％)土贝母苷乙                       10                             1.5

                             20                             2.0

                             40                            10.0

                             80                            84.6土贝母苷甲                       10                             2.2

                             20                             6.5

                             40                            13.0

                             80                            96.4

3.防癌试验

采用经典的诱发小鼠二阶段皮肤乳头状瘤的实验模型，用二甲基苯并蒽激癌，TPA促癌。实验组在促癌的同时每鼠每次用0.5mg土贝母苷乙溶液涂抹背部皮肤，实验持续18周。

试验结果：背部皮肤涂抹土贝母苷乙完全抑制小鼠皮肤上出现肿瘤(与每鼠每次用1mg土贝母苷甲的效果相同，参见专利CN 1146895A)，而对照组的带瘤率为80％，每鼠平均肿瘤数为11.36个(图3)。土贝母苷乙的应用并不妨碍小鼠体重的增加。土贝母皂苷的防癌效果略逊于土贝母苷乙，但优于土贝母苷甲(资料未显示)。三、防治恶性肿瘤作用机理试验

1、对肿瘤细胞脱氧核糖核酸(DNA)合成的影响

用³H-胸苷掺入法测定土贝母苷乙及土贝母苷甲对人胰癌和胃癌细胞DNA合成的影响。将胰癌或胃癌细胞培养24小时，加入土贝母苷乙作为实验组或加入其溶媒作为对照组。胰癌或胃癌细胞培养24、48、72小时后，然后以³H-胸苷标记1小时，并测定其掺入酸不溶性物质的放射活性。试验结果表明土贝母苷乙抑制³H-胸苷掺入DNA组分(见表6)，提示这些肿瘤细胞DNA的正常合成和成熟受到了土贝母苷乙的抑制。试验结果还表明，不同癌细胞DNA合成的抑制发生在不同时期。土贝母皂苷对肿瘤细胞DNA合成的抑制作用略逊于土贝母苷乙，但优于土贝母苷甲(资料未显示)。表6土贝母苷乙对人胰癌和胃癌细胞DNA合成的影响^*

                                  3H-胸苷掺入DNA合成

                                     培养日期(日)细胞      条件

                      1                    2               3胰癌      对照         3.96±0.17         4.03±0.13       6.54±0.71

                     (100)               (100)            (100)

   土贝母苷乙      3.32±0.46         3.16±0.38       2.48±0.42

   (3μg/ml)        (93.3)              (87.1)      (50.7，P＜0.001)

   土贝母苷甲      3.85±0.41         3.77±0.31       3.92±0.42

   (3μg/ml)        (97.1)              (93.3)           (59.9)胃癌     对照          9.18±0.51        11.35±0.35       8.33±0.21

                     (100)               (100)            (100)

   土贝母苷乙      5.96±0.68         5.88±0.76       4.98±0.65

   (10μg/ml)       (69.7)              (58.5)           (66.4)

   土贝母苷甲      6.51±0.38         7.57±0.66       6.26±0.45

   (10μg/ml)       (70.9)              (66.7)           (75.2)*表中给出的值代表三份平行试验的平均值，括号中的值是以对照作为100％的百分数

2、³H掺入培养细胞C3H10T1/2克隆8磷脂试验

将C3H10T1/2克隆8细胞接种于培养瓶中，用含有10％胎牛血清的DMEM培养基，置于37℃、湿度饱和、95％空气、5％二氧化碳的孵育箱中培养。细胞经胰酶处理后转移到直径为35mm的塑料小碟内，使其密度为2×10⁵细胞/ml。培养48小时后，土贝母苷乙以水溶液的形式加入，使其在培养基中的终浓度分别为5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml。与此同时，对照组加入相同体积的无菌蒸溜水，在相同条件下培养。细胞经1小时培养后，试验组和对照组同时加入TPA(5×10^-8mol/L)和³H胆碱(4μci/碟)，继续培养4小时。

与³H胆碱一起孵育过的细胞经胰酶处理后收集，并以磷酸盐缓冲液涮洗后悬浮在150μl的磷酸盐缓冲液中。细胞中的脂质以改进的Bligh和Dyer法提取。即将细胞冻融一次后，加入300μl的氯仿/甲醇(1/2，v/v)，其中甲醇含2％乙酸。细胞悬液以冰浴型超声波发生器处理，再加入100μl氯仿，振荡混匀，混合液经离心机离心后分为氯仿相和液相。用液体闪烁计数器测定氯仿相的放射性。蛋白质含量用改良的Lowry氏法测定。

试验结果：如图4所示，土贝母苷乙具有抑制TPA增强³H掺入细胞磷脂的作用，当土贝母苷乙的浓度低于5μg/ml时仍可测出这一效果，而且表现出量效依赖关系。土贝母苷乙抑制TPA增强³H掺入细胞磷脂的作用比土贝母苷甲强(参见专利CN 1146895A)。土贝母皂苷抑制TPA增强³H掺入细胞磷脂的作用略逊于土贝母苷乙，但优于土贝母苷甲(资料未显示)。

3.土贝母苷甲与TPA竞争HL-60细胞内的受体实验

HL-60细胞用含有10％胎牛血清的1640培养基培养。

试验方法：离心收集培养的HL-60细胞，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后，悬浮在含50mM Tris-HCl的缓冲液中，用超声细胞破碎仪处理，收集上清液，得细胞提取物，在细胞提取中加入Tris-HCl缓冲液调整蛋白浓度至200μg/ml，再加入不同浓度的土贝母苷乙及³H标记的TPA，放入温箱，39℃孵育20分钟，立即加入滤膜抽滤，用丙酮冲洗滤膜后，把滤膜放入闪烁瓶，用液体闪烁计数仪测定其放射性。

试验结果：土贝母苷乙竞争性抑制TPA在HL-60细胞内的受体。四、土贝母苷乙的药代动力学试验

1.土贝母苷乙的吸收试验

取NIH小鼠14只，用土贝母苷乙溶液灌胃(100mg/kg)给药，给药后不同时间各处死2只小鼠，取出全部胃肠道和内容物，制成匀浆，用同法作空白对照，对照组给药后即处死小鼠，测定残存于消化道及内容物中的药物含量。

试验结果：给药后即刻处死者胃肠中土贝母苷乙的回收率为99.0％，给药后0.5、1、2、4、8、12小时的回收率分别为88.8％、79.3％、56.7％、38.0％、16.6％和0。

2.组织分布试验

取NIH小鼠20只，大鼠4只，每鼠肌肉注射土贝母苷乙60mg/kg，1小时后，取心、肝、脾、肺、肾、和脑组织1克，加生理盐水3ml匀浆，测定各组织中土贝母苷乙的含量。

试验结果：土贝母苷乙在肝和脾内含量最高，在血液、肺、和心脏内含量次之，在肾和脑内含量最低。

3.土贝母苷乙与血浆蛋白、组织蛋白的结合试验

采用平衡透析法测定土贝母苷乙与血浆、肝、肾组织蛋白的结合率。

试验结果：土贝母苷乙与血浆蛋白及肝、肾组织蛋白的结合率分别为

16.3％、26.0％、18.1％。

4.排泄试验

取NIH小鼠10只，肌肉注射60mg/kg土贝母苷乙，收集24小时尿液并取胆汁，测定其中土贝母苷乙含量。

试验结果：在胆汁和尿液中无土贝母苷乙，推测土贝母苷乙可能以代谢产物的形式从尿液或胆汁中排出。

五、临床初试结果

1.发明人采用本发明第实施例4制备的含土贝母苷乙的土贝母皂苷栓剂进行了临床试验观察。

病例选择

宫颈炎病人36例，宫颈息肉病人10例，宫颈间变病人3例，宫颈癌病人8例。

使用方法

慢性宫颈炎、宫颈息肉、宫颈间变、宫颈癌病人：先用无菌棉棒擦净分泌物，然后将栓剂置入宫颈处。隔日一次，十次为一疗程。治疗1-5个疗程，视病情而定。

试验结果

本发明对慢性宫颈炎的疗效十分显著，有效率达99％。对慢性宫颈炎的合并症，如宫颈息肉、宫颈糜烂、宫颈肥厚等有显著疗效。本发明可使宫颈间变发生逆转，对早期宫颈癌有明显的疗效。无局部刺激性，不引起过敏反应。

2.发明人采用本发明第实施例1制备的含土贝母苷乙的土贝母皂苷片剂进行了临床试验观察。

病例选择

晚期食道癌病人8例，食道癌手术后病人12例，晚期胃癌病人7例，胃癌手术后病人9例。

使用方法

每日服用3次，每次1片(含土贝母皂苷50mg)，20天为一疗程，用药4个疗程，每个疗程间隔10天。

试验结果

晚期食道癌病人生存期平均延长126天，食道癌手术后病人生存期平均延长626天。晚期胃癌病人生存期平均延长183天，胃癌手术后病人生存期平均延长742天。

图1：土贝母苷甲、苷乙和苷丙的化学结构式

图2：局部应用土贝母苷乙对小鼠促癌过程的抑制作用。

     图中横坐标为促癌周数，A图中纵坐标表示带瘤鼠数(％)，B图中纵坐

     标代表肿瘤个数/鼠。○--○，代表对照组，●--●，代表实验组。

图3：土贝母苷乙对TPA增强3H掺入培养细胞磷脂的抑制效果。

     图中横坐标代表土贝母苷乙的浓度(μg/ml)，纵坐标为抑制率(％)。

图4：土贝母苷乙对HL-60细胞生长的抑制作用。

     图中横坐标为培养天数，纵坐标为活细胞数(活细胞数/ml)。○-○代

     表对照(培养液中同时加同体积溶剂)，●--●代表土贝母苷乙

用量1.9μmol/L，×-×代表土贝母苷乙用量3.8μmol/L，△--△代表

土贝母苷乙用量7.6μmol/L，■--■代表土贝母苷乙用量15.2μmol/L。

六、实施例

下面的配方举例说明了本发明的剂型。

                   实施例1：片剂，NO                组分                            用量

                                          mg/片        mg/片1        土贝母苷乙(或土贝母皂苷)             50           1002        乳糖USP                            122           1233        玉米淀粉，食品级，呈                 30            40

       10％的纯水浆状物4        玉米淀粉，食品级                    95           1305        硬脂酸镁                             3             7

                                合计      300           400

制造方法

在适当的混合机中混合第1项和第2项组分15分钟，第3组分与混合物粒化。如果需要，通过一个初筛研磨潮湿的颗粒，并使之干燥。如果需要，将干燥的颗粒过筛，并与第4项混合10-15分钟。加入第5项混合1-3分钟。在适当的压片机中将混合物压成适当的尺寸和重量。

                      实施例2：胶囊剂

NO                  组分                       用量

                                         mg/粒        mg/粒

1         土贝母苷乙(或土贝母皂苷)         50          100

2         乳糖USP                        106          120

3         玉米淀粉，食品级                 40           73

4         硬脂酸镁NF                       4            7

                              合计       200          300

制造方法

将第1、2和第3项在适当的混合机中混合10-15分钟，加入第4项混合1-3分钟。在适当的包囊机上将该混合物装入适当的胶囊中。

                                 实施例3：注射液

土贝母苷乙(或土贝母皂苷)                   10g或50g

葡萄糖                                    490g或450g

注射用水                                  加至10000ml

                                 实施例4：栓剂以生产发明产品10000粒为例所用的原料及其配比为：土贝母苷乙(或土贝母皂苷)               300g    或    600g吐温80                                800g    或    800g可可豆酯(或半合成脂肪酸甘油)          加至10000g制造方法混合：按本实施例的配比称取土贝母苷乙(或土贝母皂苷)、吐温80和可可豆酯(或半合成脂肪酸甘油)，将可可豆酯(或半合成脂肪酸甘油)放入不锈钢锅水浴加热至大部分溶化，停止加热，然后分别加入吐温80和土贝母苷乙(或土贝母皂苷)，用不锈钢搅拌机搅拌至混合均匀，便得到本发明的混合药物。润滑剂的配制：用软肥皂和甘油各一份与5倍的80％医用酒精充分混合搅拌均匀，制成润滑剂。成型：在栓模上涂上已配制的润滑剂。将本发明的混合药物倒入栓模中至溢出模口，让其自然冷却。待完全凝固后，用刀切去溢出部分。然后开启模具，将栓剂从模具中取出。无菌包装：将所制备的拴剂进行质量检查，每粒重量应为1g，含土贝母苷乙(或土贝母皂苷)30mg或60mg。检查合格后包装，钴⁶⁰灭菌。

Claims (3)

1.预防和治疗各种肿瘤的药物组合物，该药物组合物包括土贝母苷乙或土贝母皂苷及可药用的载体。

2.如权利要求1所定义的药物组合物的制备方法，该方法包括土贝母苷乙或土贝母皂苷单独与可药用的载体混合或溶解。

3.土贝母苷乙或土贝母皂苷在制造用于预防和治疗各种肿瘤的药物中的用途。

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